Techniques chromatographiques
Yosser Zina ABDELKRIM
2ème année Génie des Procédés Chimiques
ISET Bizerte
2020-2021 1
Chapitre I :
Aspects généraux relatifs aux techniques chromatographiques
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1-DEFINITION
• Ensemble de méthodes qui assurent la séparation des constituants d’un mélange (les
solutés) par entraînement d'une manière différentielle grâce à une phase mobile
(liquide ou gaz) le long d'une phase stationnaire (solide ou liquide fixé), grâce à la
(ré)partition sélective des solutés entre ces deux phases.
• Chaque soluté est donc soumis à une force de rétention (exercée par la phase
stationnaire) et une force de mobilité (due à la phase mobile).
Remarques:
• Il existe trois états physiques d’une phase : liquide, gazeux et solide.
• Une phase stationnaire, par définition immobile, est choisie pour sa grande affinité pour les
divers solutés;
• Une phase mobile entraîne les divers solutés
• Les solutés se partagent entre la phase stationnaire et la phase mobile.
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2-HISTORIQUE
La première chromatographie a été réalisée en 1906 par le botaniste russe Mikhaïl
Tswett et consistait à séparer les pigments (en grec : "chromato") d'une feuille
d'épinard (Tswett M. Ber. Dtsch. Chem. Ges., (1906) 24, 316).
Tswett avait observé la séparation des colorants végétaux, dont les chlorophylles, lorsqu'il filtrait leur
solution dans l'éther de pétrole, sur une colonne de carbonate de calcium. Dans ces conditions, en
effet, des zones colorées vertes et jaunes se forment.
Tswett constatait : "Tout comme les rayons lumineux d'un spectre, les différentes composantes d'un
mélange de colorants se déploient sur la colonne de carbonate de calcium selon une loi et peuvent
être analysées qualitativement et quantitativement".
Cette invention de la chromatographie d'adsorption par Tswett resta ignorée
jusqu'en 1931; où Kuhn, Winterstein et Lederer l'exploitèrent de nouveau avec
succès.
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3- PRINCIPE
• La chromatographie est une méthode de séparation des constituants présents dans
des mélanges variés. Elle sert en analyse pour identifier et quantifier des composés
au sein d’échantillons divers.
• Le principe de base repose sur les équilibres de concentration qui apparaissent
lorsqu’un composé est mis en présence de deux phases non miscibles. En
chromatographie, l’une, dite stationnaire, est emprisonnée dans une colonne ou fixée
sur un support et l’autre, dite mobile, se déplace au contact de la première. Si
plusieurs composés sont présents, ils se trouvent entraînés à des vitesses différentes,
provoquant leur séparation.
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• La séparation des composants entraînés par la phase mobile, résulte soit de leur
adsorption et de leur désorption successive sur la phase stationnaire, soit de leur
solubilité différente dans chaque phase.
• L'échantillon contenant une ou plusieurs espèces est entraîné par un courant de
phase mobile (liquide, gaz ou fluide supercritique) le long d'une phase stationnaire
(papier, gélatine, silice, polymère, silice greffée etc) ; chaque espèce se déplace à
une vitesse propre dépendant de ses caractéristiques et de celles des deux phases.
• Cette technique d'analyse chimique peut être couplée à un détecteur en vue d'une
analyse qualitative ou quantitative du milieu.
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• Phase stationnaire : Phase fixe soit sur la surface intérieure d'une colonne soit sur
une surface plane.
• Phase mobile : Phase qui se déplace à travers la phase stationnaire, en entraînant les
analytes. La phase mobile ne doit pas interagir avec la phase stationnaire mais
uniquement avec les analytes.
• Chromatogramme : Le chromatogramme est une courbe qui traduit la variation au
cours du temps d’un paramètre relié à la concentration instantanée du soluté en
sortie de colonne. Le temps (ou très rarement le volume d’élution) est porté en
abscisse et l’intensité du signal de détection en ordonnée. La ligne de base
correspond au tracé obtenu en l’absence de composé élué. La séparation est
complète quand le chromatogramme présente autant de pics chromatographiques
revenant à la ligne de base qu’il y a de composés dans le mélange à analyser.
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4- Notions fondamentales
4.1 Paramètres fondamentaux
a. Le temps de rétention (tR)
C'est le temps d'élution au maximum du pic mesuré à partir de l'injection. Un chromatogramme type
est schématisé, avec les paramètres principaux d’évaluation, sur la figure suivante :
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Représentation schématique d’une chromatographie
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b. Le volume de rétention (VR) et Porosité :
VR = tR . D = tR . v. s VM = to . D
Connaissant le débit D de la phase mobile, supposé maintenu constant, on définit le volume de
rétention v : vitesse linéaire de la phase mobile s : section réduite de la colonne. VR représente le
volume de phase mobile nécessaire pour éluer chaque composé. VM est le volume de phase mobile
dans la colonne.
c. Volume mort : Vo ou VM
Il correspond au volume occupé par la phase mobile dans la colonne, c’est à dire au volume interstitiel
de celle-ci. Si on suppose un débit D constant : VM = tM D, avec tM = temps mort (ou to)
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5- LES DIFFERENTS TYPES DE TECHNIQUES CHROMATOGRAPHIQUES
Les facteurs qui interviennent dans le partage des molécules à séparer entre les phases fixe et mobile
sont : la solubilité dans un solvant liquide, la taille (la forme), la polarité, la charge électrique, la
présence de groupements d'atomes formant des sites particuliers.
5.1 CHROMATOGRAPHIES EN PHASE LIQUIDE (CPL) :
La phase mobile est un liquide. Selon la nature de la phase stationnaire, on distingue :
5.1.1. Les chromatographies de PARTAGE :
• La chromatographie de partage :
C'est une chromatographie liquide-liquide.
La phase stationnaire est un liquide fixé sur un support inerte. Cette chromatographie est ainsi
dénommée car elle est basée sur le partage du soluté dans les deux phases liquides.
• La chromatographie d'exclusion :
elle est encore appelée chromatographie d'exclusion-diffusion, tamisage moléculaire, gel-filtration,
perméation de gel. La phase stationnaire est un solide poreux : les grosses particules sont exclues de
la phase fixe, en revanche les petites particules incluses diffusent dans les pores du gel.
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5.1.2. Les chromatographies d'ADSORPTION :
• La chromatographie d'adsorption :
C'est une chromatographie liquid-solide.
La phase stationnaire est un adsorbant solide polaire.
• La chromatographie d'adsorption en phase inverse :
C'est une chromatographie liquid-solide dans laquelle la phase stationnaire est apolaire.
• La chromatographie sur échangeurs d'ions :
La phase stationnaire est un échangeur d'ions constitué par une résine porteuse de groupements ionisés
négativement ou positivement, exerçant des interactions de type électrostatique avec les solutés ioniques
du milieu.
• La chromatographie d'affinité :
La phase stationnaire est un support macromoléculaire chimiquement inerte, sur lequel est greffé un
effecteur qui présente une affinité biologique (bioaffinité) pour un soluté de l'échantillon à analyser (affinité
enzyme/substrat,ligand/récepteur, antigène/anticorps).
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5.2 CHROMATOGRAPHIES EN PHASE GAZEUSE (CPG) :
La phase mobile est un gaz vecteur. On distingue dans ce cas :
5.2.1. La chromatographie gaz-liquid :
C'est une chromatographie de partage. La phase stationnaire est un liquide fixé par imbibition d'un
support inerte.
5.2.1. La chromatographie gaz-solide :
C'est une chromatographie d'adsorption. La phase stationnaire est un solide adsorbant.
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EN RÉSUMÉ :
Les différents principes de chromatographie résultent du fait que l'on a privilégié l'effet de
l'un des facteurs suivants, afin de séparer des composés constituant un mélange :
• La solubilité dans un solvant liquide : dans la chromatographie de partage
• La taille, la forme : dans la chromatographie d'exclusion
• La polarité : dans la chromatographie d'adsorption, et d'adsorption en phase inversées
• La charge électrique : dans la chromatographie par échange d'ions
• La présence de groupements d'atomes formant des sites particuliers : dans la
chromatographie d'affinité
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