Rapport de Stage

Stage en Biologie Médicale

Hôpital Hbib Thameur

Année Universitaire 2025-2026

Présenté par: [Votre nom]

Encadré par: [Nom de l'encadrant]
Période: [Dates du stage]

Sommaire
I) Introduction
II) Présentation du lieu
1. Présentation de l'établissement
2. Organisation des locaux
3. Organisation du personnel

III) Matériels et méthodes

1. Activités de transfusion
2. Activités de laboratoire
2-1) Activités de cytologie
2-1-1) Hémogramme ou NFS
2-1-2) Le frottis sanguin
2-1-3) Taux réticulocytes
2-1-4) Numération manuelle des plaquettes
2-1-5) La détermination de la vitesse de sédimentation
3) Activité d'immuno-hématologie
3-1) Le groupage ABO
3-2) La recherche du faible
3-3) Phénotypage érythrocytaire
 3-4) Le teste de coombs direct
3-5) La recherche d'AC anti érythrocytaire (RAI)
3-6) Cross matche au laboratoire
4) Activités d'hémostase
4-1) Temps de saignement (TS)
4-2) Temps de Quick
4-3) Temps de céphaline (TCA)
4-4) Dosage de fibrinogène
4-5) Dosage des facteurs de la coagulation
4-6) Bilan de thrombophilie

Conclusion
I) Introduction
Le stage en biologie médicale représente une étape fondamentale dans la
formation des étudiants en sciences de la santé. Il permet de confronter les
connaissances théoriques acquises durant le cursus universitaire à la réalité
pratique du terrain hospitalier.

L'hôpital Hbib Thameur, établissement de référence en Tunisie, offre un cadre

privilégié pour découvrir et comprendre le fonctionnement d'un laboratoire de
biologie médicale moderne. Ce stage constitue une opportunité unique
d'observer et de participer aux différentes activités diagnostiques qui jouent un
rôle crucial dans la prise en charge des patients.

L'objectif principal de ce stage est de:

• Découvrir l'organisation et le fonctionnement d'un laboratoire hospitalier

• Maîtriser les techniques de base en hématologie et immuno-hématologie
• Comprendre les procédures de contrôle qualité et de validation des
résultats
• Développer des compétences pratiques en manipulation des automates et
techniques manuelles
• Appréhender l'importance de la rigueur et de la précision dans les
analyses biologiques
Ce rapport présente de manière détaillée les différentes activités réalisées
durant ce stage, notamment dans les domaines de la transfusion sanguine, de la
cytologie, de l'immuno-hématologie et de l'hémostase.
II) Présentation du lieu
1) Présentation de l'établissement
L'hôpital Hbib Thameur est un établissement hospitalier universitaire situé à
Tunis. Fondé en [année], il constitue l'un des centres hospitaliers de référence
en Tunisie, offrant des soins de qualité dans diverses spécialités médicales et
chirurgicales.

Le laboratoire de biologie médicale de l'hôpital Hbib Thameur assure

quotidiennement des milliers d'analyses pour les patients hospitalisés et
externes. Il est équipé de technologies modernes permettant de réaliser des
examens de routine ainsi que des analyses spécialisées.

Missions principales du laboratoire:

• Analyses hématologiques complètes

• Examens d'hémostase
• Immuno-hématologie et compatibilité transfusionnelle
• Contrôle qualité des produits sanguins
• Formation des étudiants et internes
• Recherche clinique et biologique
Le laboratoire fonctionne 24h/24 pour assurer la continuité des soins,
notamment pour les urgences transfusionnelles et les bilans d'hémostase en
situation critique.

2) Organisation des locaux

Le laboratoire de biologie médicale est organisé en plusieurs secteurs
spécialisés, chacun dédié à un type d'analyse spécifique. Cette organisation
permet d'optimiser le flux de travail et de garantir la qualité des résultats.

Architecture du laboratoire:

• Zone de réception des prélèvements: Accueil des échantillons,

vérification de leur conformité, enregistrement informatique et
distribution vers les différents secteurs.
• Secteur de cytologie: Équipé d'automates d'hématologie pour la
réalisation des NFS (Numération Formule Sanguine), microscopes pour
l'observation des frottis sanguins, et matériel pour les techniques
manuelles.
• Secteur d'immuno-hématologie: Dédié au groupage sanguin,
recherche d'anticorps irréguliers (RAI), phénotypage érythrocytaire et
tests de compatibilité transfusionnelle.
 • Secteur d'hémostase: Réalisation des bilans de coagulation (TP, TCA,
fibrinogène), dosage des facteurs de coagulation et bilans de
thrombophilie.
• Banque de sang: Conservation des produits sanguins labiles (concentrés
érythrocytaires, plasma frais congelé, concentrés plaquettaires) dans des
conditions strictement contrôlées.
• Zone de validation: Espace réservé aux biologistes pour la validation
technique et médicale des résultats avant leur transmission.
Chaque secteur est équipé selon les normes de sécurité et d'hygiène en vigueur,
avec des flux séparés pour éviter les contaminations croisées.

3) Organisation du personnel
Le laboratoire de biologie médicale de l'hôpital Hbib Thameur dispose d'une
équipe pluridisciplinaire qualifiée et complémentaire:

Fonction Rôle

Responsables de la validation des

Biologistes médicaux
résultats et de la supervision
technique du laboratoire

Réalisation des analyses,

Techniciens supérieurs
manipulation des automates,
contrôle qualité

Préparation des échantillons,

Techniciens de laboratoire
techniques manuelles,
maintenance de premier niveau

Prélèvements sanguins, accueil des

Infirmiers
patients externes

Gestion des dossiers, saisie

Personnel administratif
informatique, archivage

Agents d'entretien Nettoyage et désinfection des locaux

Table 1: Organisation du personnel du laboratoire

Le travail est organisé en équipes pour assurer une permanence 24h/24. Chaque
technicien est affecté à un secteur spécifique, ce qui permet de développer une
expertise particulière tout en maintenant une polyvalence nécessaire en cas de
besoin.

Des réunions hebdomadaires sont organisées pour discuter des cas complexes,
des dysfonctionnements éventuels et des mises à jour des protocoles
analytiques.
III) Matériels et méthodes
1) Activités de transfusion
Le service de transfusion sanguine joue un rôle crucial dans la prise en charge
des patients nécessitant une transfusion de produits sanguins. Les principales
activités comprennent:

Gestion des demandes transfusionnelles:

• Réception et analyse des prescriptions médicales de transfusion

• Vérification de la concordance entre l'identité du patient et les tubes de
prélèvement
• Contrôle ultime au lit du malade avant transfusion
Types de produits sanguins labiles:

• Concentrés érythrocytaires (CE): Conservation à +4°C pendant 42

jours maximum
• Concentrés plaquettaires (CP): Conservation à +22°C sous agitation
pendant 5 jours
• Plasma frais congelé (PFC): Conservation à -25°C pendant 1 an
• Concentrés de granulocytes: Utilisation immédiate après préparation
Procédures de sécurité transfusionnelle:

La sécurité transfusionnelle repose sur plusieurs contrôles successifs et

obligatoires avant toute délivrance de produits sanguins. Ces contrôles visent à
prévenir les accidents transfusionnels, notamment les incompatibilités ABO qui
peuvent être fatales.
2) Activités de laboratoire
2-1) Activités de cytologie
La cytologie hématologique étudie les éléments figurés du sang: globules
rouges, globules blancs et plaquettes. Elle constitue souvent le premier examen
demandé en hématologie.

2-1-1) Hémogramme ou NFS (Numération Formule

Sanguine)
Principe:

L'hémogramme est réalisé sur automate d'hématologie qui utilise plusieurs

technologies complémentaires:

• Impédancemétrie: mesure de la résistance électrique pour compter et

dimensionner les cellules
• Cytométrie en flux: analyse des caractéristiques physiques des cellules
• Cytochimie: coloration spécifique de certains types cellulaires
Matériel:

• Automate d'hématologie (type Sysmex, ABX, ou Coulter)

• Tubes EDTA (bouchon violet)
• Contrôles de qualité (niveaux normal, bas et haut)
• Diluants et réactifs spécifiques
Technique:

1. Homogénéisation du tube par retournements lents (8 à 10 fois)

2. Placement du tube sur l'automate
3. Aspiration automatique de l'échantillon
4. Analyse et impression des résultats
5. Vérification de la cohérence des résultats
Paramètres analysés:

Paramètre Abréviation Valeurs normales

4,5-5,5 T/L (H), 4-5 T/L

Globules rouges GR ou RBC
(F)
13-17 g/dL (H), 12-16
Hémoglobine Hb
g/dL (F)
Hématocrite Ht 40-54% (H), 37-47% (F)
 Volume globulaire
VGM 80-100 fL
moyen
Teneur corp. moy. en
TCMH 27-32 pg
Hb
Conc. corp. moy. en Hb CCMH 32-36 g/dL
Globules blancs GB ou WBC 4-10 G/L
Plaquettes PLT 150-400 G/L

Table 2: Paramètres de l'hémogramme et valeurs de référence

Formule leucocytaire:

• Polynucléaires neutrophiles: 40-75%

• Polynucléaires éosinophiles: 1-6%
• Polynucléaires basophiles: 0-1%
• Lymphocytes: 20-45%
• Monocytes: 2-10%
Interprétation:

Les anomalies quantitatives orientent vers différentes pathologies:

• Anémie: Hb ¿ 13 g/dL (homme) ou ¿ 12 g/dL (femme)

• Polyglobulie: Hb ¿ 17 g/dL (homme) ou ¿ 16 g/dL (femme)
• Leucopénie: GB ¿ 4 G/L
• Hyperleucocytose: GB ¿ 10 G/L
• Thrombopénie: PLT ¿ 150 G/L
• Thrombocytose: PLT ¿ 400 G/L

2-1-2) Le frottis sanguin

Principe:

Le frottis sanguin permet l'examen morphologique des cellules sanguines au

microscope. Il est réalisé systématiquement en cas d'anomalie détectée à
l'automate ou sur prescription médicale spécifique.

Matériel:

• Lames de verre propres et dégraissées

• Lamelle ou lame étaleuse
• Colorant May-Grünwald-Giemsa (MGG) ou Wright
• Microscope optique avec objectifs 10×, 40× et 100× (à immersion)
• Huile à immersion
Technique de réalisation:

1. Confection du frottis:
• Déposer une petite goutte de sang à 1 cm du bord d'une lame
• Placer la lamelle à 45° en avant de la goutte
• Reculer jusqu'au contact de la goutte (diffusion par capillarité)
• Pousser d'un mouvement rapide et régulier vers l'avant
• Laisser sécher à l'air libre
2. Coloration MGG:
• Fixation au May-Grünwald pur: 3 minutes
• Dilution avec eau tamponnée (pH 7,2): 3 minutes
• Coloration au Giemsa dilué: 10-15 minutes
• Rinçage à l'eau du robinet
• Séchage à l'air libre
3. Examen microscopique:
• Objectif 10×: appréciation globale de la qualité du frottis
• Objectif 40×: étude de la répartition cellulaire
• Objectif 100× (immersion): examen morphologique détaillé
Éléments à observer:

Globules rouges:

• Taille: normocytes, microcytes, macrocytes

• Coloration: normochromes, hypochromes
• Forme: anisocytose, poïkilocytose (drépanocytes, sphérocytes,
elliptocytes)
• Inclusions: ponctuations basophiles, corps de Jolly
Globules blancs:

• Formule leucocytaire (comptage de 100 cellules minimum)

• Anomalies morphologiques des polynucléaires
• Présence de cellules anormales: blastes, lymphocytes atypiques
• Anomalies cytoplasmiques ou nucléaires
Plaquettes:

• Répartition et nombre approximatif

• Taille: normales, géantes, micro-plaquettes
• Présence d'amas plaquettaires

2-1-3) Taux de réticulocytes

Principe:

Les réticulocytes sont de jeunes globules rouges contenant encore des résidus
d'ARN ribosomal. Leur numération reflète l'activité érythropoïétique de la
moelle osseuse.

Intérêt clinique:

• Différencier les anémies régénératives (réticulocytes augmentés) des

anémies arégénératives (réticulocytes normaux ou diminués)
• Surveillance du traitement des anémies
• Évaluation de la récupération médullaire après chimiothérapie
• Diagnostic des hémolyses
Matériel:

• Colorant vital: bleu de crésyl brillant ou nouveau bleu de méthylène

• Tubes à hémolyse
• Lames et lamelles
• Microscope optique
Technique manuelle:

1. Mélanger à volumes égaux le sang EDTA et le colorant vital

2. Incuber 15-20 minutes à température ambiante
3. Réaliser un frottis classique
4. Observer au microscope (objectif 100×)
5. Compter les réticulocytes sur 1000 globules rouges
Technique automatisée:

Les automates modernes permettent une numération précise des réticulocytes

par cytométrie en flux, avec détection des ARN résiduels par fluorescence.

Résultats:

• Valeurs normales: 25 000 - 100 000/mm³ (0,5 - 2% des GR)

• Réticulocytose: ¿ 150 000/mm³ (anémie régénérative, hémolyse)
• Réticulopénie: ¿ 25 000/mm³ (insuffisance médullaire)
Calcul de l'index réticulocytaire:

Réticulocytes (\%) × Hématocrite du patient

Index réticulocytaire=
Hématocrite normal (45\%)
Un index ¿ 2 indique une bonne réponse médullaire.

2-1-4) Numération manuelle des plaquettes

Principe:
La numération manuelle des plaquettes est réalisée en cas de discordance ou de
résultat aberrant à l'automate, notamment en présence d'amas plaquettaires ou
de plaquettes géantes.

Matériel:

• Cellule de Malassez ou hémocytomètre de Neubauer

• Liquide de dilution: oxalate d'ammonium à 1%
• Micropipettes
• Microscope optique (objectif 40×)
Technique:

1. Diluer le sang au 1/200 dans le liquide d'oxalate d'ammonium (lyse les

GBC, préserve les plaquettes)
2. Homogénéiser pendant 5 minutes
3. Remplir la cellule de Malassez avec la dilution
4. Laisser reposer 2-3 minutes (sédimentation des plaquettes)
5. Compter les plaquettes dans 5 rectangles de la cellule
6. Calculer le nombre de plaquettes
Calcul:

Nombre de plaquettes comptées× Dilution × 10

Plaquettes (/mm³)=
5
Pour une dilution au 1/200:

Plaquettes (/mm³)=Nombre compté × 400

Valeurs de référence: 150 000 - 400 000 plaquettes/mm³

2-1-5) La détermination de la vitesse de sédimentation

(VS)
Principe:

La vitesse de sédimentation mesure la vitesse de chute des globules rouges dans

un tube vertical. C'est un marqueur non spécifique d'inflammation.

Matériel:

• Pipettes de Westergren (tube gradué de 300 mm)

• Support vertical
• Chronomètre
• Sang prélevé sur citrate de sodium 3,8%
Technique (méthode de Westergren):
 1. Homogénéiser le tube de sang citraté
2. Remplir la pipette de Westergren jusqu'au repère 0
3. Placer verticalement sur le support
4. Laisser sédimenter pendant exactement 1 heure et 2 heures
5. Lire la hauteur de plasma au-dessus de la colonne érythrocytaire
Résultats:

Population VS à 1h VS à 2h

Homme ¿ 10 mm ¿ 20 mm
Femme ¿ 20 mm ¿ 30 mm
Enfant ¿ 10 mm ¿ 20 mm
Femme enceinte jusqu'à 40 mm jusqu'à 60 mm

Table 3: Valeurs normales de la VS

Facteurs d'augmentation:

• Syndrome inflammatoire (infections, maladies auto-immunes)

• Anémie
• Grossesse
• Hypergammaglobulinémie
• Hyperfibrinogénémie
• Pathologies tumorales
Facteurs de diminution:

• Polyglobulie
• Anomalies morphologiques des GR (drépanocytose, sphérocytose)
• Hypofibrinogénémie
• Insuffisance cardiaque
3) Activité d'immuno-hématologie
L'immuno-hématologie étudie les antigènes présents à la surface des globules
rouges et les anticorps correspondants. Elle est essentielle pour garantir la
sécurité transfusionnelle.

3-1) Le groupage ABO

Principe:

Le système ABO est le plus important en transfusion sanguine. Il comprend

quatre groupes sanguins principaux: A, B, AB et O. Le groupage repose sur deux
épreuves complémentaires:

• Épreuve de Beth-Vincent (épreuve globulaire): recherche des

antigènes A et B sur les hématies du patient
• Épreuve de Simonin (épreuve sérique): recherche des anticorps anti-A
et anti-B dans le sérum du patient
Base immunologique:

Fréquence
Groupe Antigènes Anticorps
(Europe)

A A Anti-B 45%
B B Anti-A 9%
AB A et B Aucun 3%
O Aucun Anti-A et Anti-B 43%

Table 4: Caractéristiques du système ABO

Matériel:

• Réactifs pour Beth-Vincent: anticorps monoclonaux anti-A, anti-B, anti-AB

• Réactifs pour Simonin: hématies-tests A₁, B, O
• Plaques de groupage ou tubes à hémolyse
• Centrifugeuse
• Sang prélevé sur tube sec ou EDTA
Technique:

Épreuve de Beth-Vincent:

1. Préparer une suspension d'hématies à 5% dans du sérum physiologique

2. Déposer sur une plaque:
• 1 goutte d'anti-A + 1 goutte de suspension d'hématies
• 1 goutte d'anti-B + 1 goutte de suspension d'hématies
 • 1 goutte d'anti-AB + 1 goutte de suspension d'hématies (contrôle)
3. Mélanger et observer l'agglutination après centrifugation
Épreuve de Simonin:

1. Préparer le sérum du patient

2. Déposer dans trois tubes:
• Tube 1: sérum patient + hématies-tests A₁
• Tube 2: sérum patient + hématies-tests B
• Tube 3: sérum patient + hématies-tests O (témoin négatif)
3. Centrifuger et observer l'agglutination
Interprétation:

Groupe Anti-A Anti-B Hém. A₁ Hém. B Hém. O

A + - - + -
B - + + - -
AB + + - - -
O - - + + -

Table 5: Interprétation du groupage ABO (+ = agglutination, - = absence)

Règles de sécurité:

• Le groupage ABO doit être réalisé deux fois sur deux prélèvements
différents
• Les deux épreuves (Beth-Vincent et Simonin) doivent être concordantes
• En cas de discordance, refaire le groupage et rechercher une cause

3-2) La recherche du faible (Antigène D faible)

Principe:

Certains individus possèdent l'antigène D (Rhésus) en quantité réduite (D faible

ou D variant). Cette recherche est importante pour:

• Les femmes en âge de procréer (risque d'allo-immunisation)

• Les donneurs de sang (considérés comme Rhésus positif)
• Les receveurs (considérés comme Rhésus négatif par sécurité)
Matériel:

• Sérum anti-D incomplet

• Sérum anti-globulines humaines (Coombs)
• Suspension d'hématies du patient à 5%
 • Tubes à hémolyse
• Centrifugeuse
Technique:

1. Mélanger 2 gouttes d'anti-D incomplet + 1 goutte de suspension

d'hématies
2. Incuber 15 minutes à 37°C
3. Laver 3 fois au sérum physiologique
4. Ajouter 2 gouttes de sérum anti-globulines (Coombs)
5. Centrifuger et observer
Interprétation:

• Agglutination positive: D faible (patient considéré Rhésus positif si

donneur, négatif si receveur)
• Absence d'agglutination: Rhésus négatif confirmé

3-3) Phénotypage érythrocytaire

Principe:

Le phénotypage consiste à déterminer la présence ou l'absence des principaux

antigènes érythrocytaires au-delà du système ABO et Rhésus standard. Les
systèmes étudiés sont:

• Système Rhésus étendu: D, C, c, E, e

• Système Kell: K, k
• Système Duffy: Fya, Fyb
• Système Kidd: Jka, Jkb
• Système MNS: M, N, S, s
Intérêt clinique:

• Patients polytransfusés (prévention de l'allo-immunisation)

• Femmes enceintes immunisées
• Patients en attente de greffe d'organe
• Enquêtes familiales
Matériel:

• Sérums spécifiques pour chaque antigène

• Suspension d'hématies du patient à 3-5%
• Plaques de microtitration ou tubes
• Centrifugeuse
Technique:
 1. Préparer une suspension d'hématies lavées
2. Pour chaque antigène à tester:
• Mélanger sérum spécifique + suspension d'hématies
• Incuber selon la technique (température ambiante ou 37°C)
• Centrifuger et lire l'agglutination
3. Noter le phénotype complet
Expression des résultats:

Exemple de phénotype: A Rhésus positif, CCDee, K-, Fy(a+b-), Jk(a+b+),

M+N+S-s+

Applications:

• Sélection de concentrés érythrocytaires compatibles

• Prévention de la maladie hémolytique du nouveau-né
• Identification d'anticorps irréguliers

3-4) Le test de Coombs direct

Principe:

Le test de Coombs direct (ou test à l'antiglobuline direct, TAD) détecte la

présence d'anticorps ou de fractions du complément fixés sur les hématies du
patient in vivo. Il est positif en cas d'anémie hémolytique auto-immune ou de
maladie hémolytique du nouveau-né.

Indications:

• Suspicion d'anémie hémolytique auto-immune (AHAI)

• Maladie hémolytique du nouveau-né
• Réactions transfusionnelles hémolytiques
• Hémolyse d'origine médicamenteuse
Matériel:

• Sérum anti-globulines humaines (Coombs) polyvalent

• Sérums spécifiques anti-IgG et anti-C3d
• Hématies du patient lavées
• Tubes à hémolyse
• Centrifugeuse
Technique:

1. Prélever le sang du patient sur tube EDTA

2. Laver 3 fois les hématies au sérum physiologique (éliminer les anticorps
libres)
 3. Préparer une suspension d'hématies à 3-5%
4. Mélanger 2 gouttes de sérum de Coombs + 1 goutte de suspension
d'hématies
5. Centrifuger 15 secondes
6. Lire l'agglutination
Interprétation:

• Coombs direct négatif: Absence d'anticorps fixés sur les hématies

(normal)
• Coombs direct positif: Présence d'anticorps fixés
– Anti-IgG positif: anticorps de type IgG (AHAI à anticorps chauds)
– Anti-C3d positif: activation du complément (AHAI à anticorps
froids, hémolyse aiguë)
Causes de Coombs direct positif:

• Anémies hémolytiques auto-immunes

• Maladie hémolytique du nouveau-né
• Réactions transfusionnelles
• Certains médicaments (pénicilline, méthyldopa, quinidine)
• Maladies auto-immunes systémiques (lupus)

3-5) La recherche d'anticorps anti-érythrocytaires

irréguliers (RAI)
Principe:

La RAI détecte les anticorps dirigés contre les antigènes des systèmes autres
que ABO, acquis suite à une transfusion ou une grossesse. Ces anticorps peuvent
provoquer des accidents transfusionnels hémolytiques retardés ou une maladie
hémolytique du nouveau-né.

Indications obligatoires:

• Avant toute transfusion sanguine (validité: 3 jours)

• Suivi des femmes enceintes (chaque trimestre)
• Avant une intervention chirurgicale programmée
• Bilan d'une anémie hémolytique
• Après une réaction transfusionnelle
Matériel:

• Panel d'hématies-tests de phénotypes connus (minimum 3 hématies)

• Sérum ou plasma du patient
• Sérum de Coombs (anti-globulines humaines)
 • Tubes à hémolyse
• Bain-marie à 37°C
• Centrifugeuse
Technique (méthode en tube):

1. Phase directe (température ambiante):

• Mélanger sérum patient + chaque hématie-test
• Centrifuger immédiatement
• Lire l'agglutination
2. Phase d'incubation (37°C):
• Incuber 30 minutes à 37°C
• Centrifuger et lire
3. Test à l'antiglobuline (Coombs indirect):
• Laver 3 fois les hématies au sérum physiologique
• Ajouter 2 gouttes de sérum de Coombs
• Centrifuger et lire l'agglutination
Interprétation:

• RAI négative: Absence d'anticorps irréguliers (pas d'agglutination avec

les 3 hématies-tests)
• RAI positive: Présence d'anticorps irréguliers (agglutination avec une ou
plusieurs hématies-tests)
En cas de RAI positive:

1. Identifier l'anticorps (panel étendu d'hématies-tests)

2. Déterminer sa spécificité (anti-D, anti-Kell, anti-E, etc.)
3. Titrer l'anticorps si nécessaire
4. Sélectionner des concentrés érythrocytaires phénotypés compatibles
Anticorps les plus fréquents:

• Système Rhésus: anti-D, anti-E, anti-c

• Système Kell: anti-K
• Système Duffy: anti-Fya
• Système Kidd: anti-Jka

3-6) Cross-match au laboratoire (épreuve de

compatibilité)
Principe:
Le cross-match ou test de compatibilité ultime est l'épreuve finale avant toute
transfusion. Il vérifie la compatibilité entre le sang du receveur et les concentrés
érythrocytaires sélectionnés.

Types de cross-match:

• Cross-match complet: Réalisé en laboratoire avec incubation et Coombs

indirect
• Cross-match simplifié: Uniquement épreuve directe (si RAI négative et
absence d'antécédents)
• Cross-match au lit du malade: Contrôle ultime avant transfusion par
double vérification
Matériel:

• Sérum ou plasma du receveur

• Hématies du concentré érythrocytaire à transfuser
• Sérum de Coombs
• Tubes à hémolyse
• Bain-marie à 37°C
Technique du cross-match complet:

1. Préparer une suspension d'hématies du concentré à 3-5%

2. Épreuve directe:
• Mélanger 2 gouttes de sérum du receveur + 1 goutte d'hématies
du donneur
• Centrifuger immédiatement
• Lire (doit être négatif)
3. Épreuve d'incubation:
• Incuber 30 minutes à 37°C
• Centrifuger et lire (doit être négatif)
4. Épreuve au Coombs indirect:
• Laver 3 fois les hématies
• Ajouter le sérum de Coombs
• Centrifuger et lire (doit être négatif)
Interprétation:

• Cross-match négatif (compatible): Absence d'agglutination à toutes

les étapes → Le concentré peut être transfusé
• Cross-match positif (incompatible): Présence d'agglutination → Le
concentré ne doit PAS être transfusé
Conduite en cas de cross-match positif:

• Vérifier l'identité du patient et du tube

 • Contrôler le groupe sanguin du receveur et du donneur
• Rechercher un anticorps irrégulier méconnu
• Sélectionner un autre concentré érythrocytaire
• Effectuer un nouveau cross-match
Situations d'urgence vitale:

En cas d'urgence transfusionnelle extrême:

• Transfusion O négatif sans cross-match (donneur universel)

• Cross-match incomplet possible si risque vital immédiat
• Surveillance clinique et biologique renforcée
4) Activités d'hémostase
L'hémostase est l'ensemble des mécanismes physiologiques qui assurent l'arrêt
du saignement et le maintien du sang à l'état fluide. Son exploration biologique
comprend l'étude de l'hémostase primaire et de la coagulation.

4-1) Temps de saignement (TS)

Principe:

Le temps de saignement explore l'hémostase primaire, c'est-à-dire l'interaction

entre les plaquettes et la paroi vasculaire. C'est un test fonctionnel in vivo qui
mesure le temps nécessaire à l'arrêt d'un saignement provoqué.

Indications:

• Bilan préopératoire en cas d'antécédents hémorragiques

• Suspicion de thrombopathie ou thrombopénie
• Surveillance de traitements antiplaquettaires
• Maladie de Willebrand
Matériel:

• Dispositif de scarification standardisé (lancette ou appareil automatique

type Simplate)
• Brassard de tensiomètre
• Papier buvard ou compresses
• Chronomètre
Technique (méthode de Duke modifiée ou Ivy):

1. Installer le patient confortablement, bras détendu

2. Poser un brassard au bras et gonfler à 40 mmHg (stase veineuse légère)
3. Désinfecter la face antérieure de l'avant-bras
4. Réaliser une incision standardisée (1 mm de profondeur, 5 mm de
longueur)
5. Déclencher le chronomètre
6. Absorber le sang toutes les 30 secondes avec le papier buvard (sans
toucher la plaie)
7. Arrêter le chronomètre quand le saignement cesse
Résultats:

• Valeur normale: 2 à 4 minutes (méthode de Duke), 3 à 8 minutes

(méthode d'Ivy)
• TS allongé: ¿ 8 minutes
Causes d'allongement du TS:
 • Anomalies quantitatives: Thrombopénie (¿ 50 000/mm³)
• Anomalies qualitatives: Thrombopathies constitutionnelles
(thrombasthénie de Glanzmann, maladie de Bernard-Soulier) ou acquises
(prise d'aspirine, anti-inflammatoires, urémie)
• Anomalies vasculaires: Maladie de Willebrand, purpuras vasculaires
Limites:

• Test peu reproductible

• Dépend de la technique de l'opérateur
• Contre-indiqué en cas de thrombopénie sévère
• Tend à être remplacé par des tests plus spécifiques (dosage du facteur
Willebrand, agrégométrie plaquettaire)

4-2) Temps de Quick (TQ) et Taux de Prothrombine

(TP)
Principe:

Le temps de Quick explore la voie extrinsèque et la voie commune de la

coagulation. Il mesure le temps de coagulation du plasma en présence de
thromboplastine tissulaire (facteur tissulaire) et de calcium.

Facteurs explorés:

• Facteur VII (voie extrinsèque)

• Facteurs X, V, II (prothrombine), fibrinogène (voie commune)
Indications:

• Surveillance des traitements par antivitamines K (AVK)

• Bilan préopératoire
• Exploration d'un syndrome hémorragique
• Dépistage d'une insuffisance hépatocellulaire
• Recherche d'un déficit congénital en facteurs vitamine K-dépendants
Matériel:

• Coagulomètre automatique
• Réactif thromboplastine calcique
• Plasma citraté du patient (prélèvement sur citrate de sodium 3,2%)
• Plasma témoin normal
Technique:

1. Centrifuger le sang citraté pour obtenir un plasma pauvre en plaquettes

2. Préchauffer le plasma à 37°C pendant 2-3 minutes
3. Ajouter la thromboplastine calcique préchauffée
 4. Déclencher le chronomètre
5. Mesurer le temps d'apparition du caillot (automatique sur coagulomètre)
Expression des résultats:

• Temps de Quick (TQ): exprimé en secondes (valeur normale: 12-14

secondes selon le réactif)
• Taux de Prothrombine (TP): exprimé en pourcentage par rapport à un
plasma témoin normal (valeur normale: 70-100%)
• INR (International Normalized Ratio): pour la surveillance des AVK
(valeur normale: 0,8-1,2)
Calcul de l'INR:

( )
ISI
TQ patient
INR=
TQ témoin
où ISI (International Sensitivity Index) caractérise la sensibilité du réactif utilisé.

Interprétation:

TP diminué (TQ allongé):

• Traitement par AVK (INR cible: 2-3 pour la plupart des indications)
• Déficit en facteurs vitamine K-dépendants (II, VII, IX, X)
• Insuffisance hépatocellulaire
• Coagulation intravasculaire disséminée (CIVD)
• Hypofibrinogénémie
Surveillance des AVK:

• INR cible: 2-3 (fibrillation auriculaire, thrombose veineuse)

• INR cible: 3-4,5 (prothèses valvulaires mécaniques)
• Contrôle initial: tous les 2-3 jours jusqu'à stabilisation
• Puis: contrôle mensuel une fois l'équilibre atteint

4-3) Temps de Céphaline + Activateur (TCA)

Principe:

Le TCA explore la voie intrinsèque et la voie commune de la coagulation. Il

mesure le temps de coagulation du plasma en présence de céphaline
(phospholipides), d'un activateur de contact (kaolin, acide ellagique) et de
calcium.

Facteurs explorés:

• Facteurs de la voie intrinsèque: XII, XI, IX, VIII (facteur antihémophilique)

• Facteurs de la voie commune: X, V, II, fibrinogène
Indications:

• Surveillance de l'héparinothérapie
• Bilan d'hémophilie A (déficit en facteur VIII) ou B (déficit en facteur IX)
• Recherche d'anticoagulant circulant (lupus anticoagulant)
• Bilan préopératoire
• Exploration d'un syndrome hémorragique
Matériel:

• Coagulomètre automatique
• Réactif céphaline + activateur
• Chlorure de calcium
• Plasma citraté du patient
• Plasma témoin normal
Technique:

1. Centrifuger le sang citraté pour obtenir un plasma pauvre en plaquettes

2. Mélanger plasma + céphaline + activateur
3. Incuber 2-3 minutes à 37°C (activation de la voie intrinsèque)
4. Ajouter le chlorure de calcium préchauffé
5. Déclencher le chronomètre
6. Mesurer le temps d'apparition du caillot
Résultats:

• Valeur normale: 25-40 secondes (selon le réactif utilisé)

• Ratio TCA: TCA patient / TCA témoin (normal ¿ 1,2)
Interprétation:

TCA allongé isolé (TP normal):

• Traitement par héparine:

– Héparine non fractionnée (HNF): ratio cible 1,5-2,5
– Héparine de bas poids moléculaire (HBPM): pas de surveillance
par TCA
• Hémophilie A: déficit en facteur VIII (lié à l'X, atteint les hommes)
• Hémophilie B: déficit en facteur IX (maladie de Christmas)
• Maladie de Willebrand: déficit en facteur Willebrand (qui transporte le
facteur VIII)
• Anticoagulant circulant: lupus anticoagulant (anticorps anti-
phospholipides)
• Déficits rares: facteurs XII, XI (généralement asymptomatiques)
TP et TCA allongés:

• Déficit en facteurs de la voie commune (X, V, II, fibrinogène)

• Insuffisance hépatocellulaire sévère
• CIVD
• Surdosage en AVK
Test de correction:

Pour différencier déficit en facteur d'un anticoagulant circulant:

• Mélanger 50/50 plasma patient + plasma témoin normal

• Refaire le TCA
• Correction complète: déficit en facteur
• Correction incomplète: présence d'anticoagulant circulant

4-4) Dosage de fibrinogène

Principe:

Le fibrinogène (facteur I) est une protéine plasmatique synthétisée par le foie.

C'est le substrat terminal de la coagulation, transformé en fibrine sous l'action
de la thrombine. Son dosage est essentiel dans l'exploration des troubles de la
coagulation.

Indications:

• TQ et/ou TCA allongés

• CIVD (coagulation intravasculaire disséminée)
• Syndrome hémorragique inexpliqué
• Bilan préopératoire à risque hémorragique
• Surveillance de la fibrinolyse
• Grossesse (fibrinogène augmente physiologiquement)
Matériel:

• Coagulomètre automatique
• Thrombine calcique titrée
• Plasma citraté du patient
• Plasma étalon de concentration connue
Technique (méthode de Clauss):

1. Diluer le plasma du patient (généralement au 1/10)

2. Ajouter un excès de thrombine calcique
3. Mesurer le temps de coagulation
4. Reporter le temps sur une courbe d'étalonnage
 5. Lire la concentration en fibrinogène
Principe: Plus le plasma est riche en fibrinogène, plus le temps de coagulation
est court.

Résultats:

• Valeur normale: 2 - 4 g/L (200 - 400 mg/dL)

• Fibrinogène critique: ¿ 1 g/L (risque hémorragique majeur)
Interprétation:

Hypofibrinogénémie (¿ 2 g/L):

• Afibrinogénémie congénitale: très rare, transmission autosomique

récessive
• CIVD: consommation du fibrinogène par coagulation diffuse
• Fibrinolyse primaire: dégradation excessive du fibrinogène
• Insuffisance hépatocellulaire sévère: défaut de synthèse
• Hémorragie massive: dilution et consommation
Hyperfibrinogénémie (¿ 4 g/L):

• Syndrome inflammatoire: le fibrinogène est une protéine de

l'inflammation
• Grossesse: augmentation physiologique (jusqu'à 6 g/L au 3e trimestre)
• Syndrome néphrotique: augmentation de la synthèse hépatique
• Cancers: en particulier cancers digestifs
Conduite pratique:

En cas d'hypofibrinogénémie sévère avec hémorragie:

• Transfusion de plasma frais congelé (PFC)

• Concentrés de fibrinogène si disponibles
• Traitement de la cause (CIVD, fibrinolyse)

4-5) Dosage des facteurs de la coagulation

Principe:

Le dosage individuel des facteurs de la coagulation permet de préciser la nature

d'un trouble de l'hémostase après orientation par les tests globaux (TP, TCA).
Chaque facteur est dosé spécifiquement.

Indications:

• Allongement isolé du TQ (exploration facteurs VII, X, V, II)

• Allongement isolé du TCA (exploration facteurs VIII, IX, XI, XII)
• Diagnostic d'hémophilie
 • Surveillance du traitement substitutif
• Bilan de maladie de Willebrand
Techniques:

Méthode chronométrique (la plus utilisée):

1. Principe: mesurer la correction d'un temps de coagulation par le plasma

du patient
2. Utiliser un plasma déficient en un facteur spécifique
3. Ajouter des dilutions du plasma du patient
4. Mesurer le temps de coagulation (TQ ou TCA selon le facteur)
5. Reporter sur courbe d'étalonnage
6. Lire l'activité du facteur en pourcentage
Méthode immunologique (pour certains facteurs):

• Dosage antigénique par méthode ELISA ou turbidimétrique

• Permet de différencier déficit quantitatif et qualitatif
Principaux facteurs dosés:

Facteur Test orientant Déficit Transmission

Récessive liée à
Facteur VIII TCA allongé Hémophilie A
l'X
Récessive liée à
Facteur IX TCA allongé Hémophilie B
l'X
Autosomique
Facteur XI TCA allongé Hémophilie C
récessive
Autosomique
Facteur VII TQ allongé Rare
récessive
TQ et TCA Autosomique
Facteur V Très rare
allongés récessive
TQ et TCA Autosomique
Facteur X Rare
allongés récessive
TQ et TCA Autosomique
Facteur II Très rare
allongés récessive

Table 6: Facteurs de la coagulation et modes de transmission

Résultats:

• Valeurs normales: 50 - 150% (activité par rapport à un plasma témoin

normal)
• Déficit sévère: ¿ 1% (hémophilie sévère)
 • Déficit modéré: 1-5% (hémophilie modérée)
• Déficit mineur: 5-40% (hémophilie mineure)
Classification de l'hémophilie A et B:

• Hémophilie sévère: Facteur ¿ 1% → hémorragies spontanées fréquentes

• Hémophilie modérée: Facteur 1-5% → hémorragies après traumatismes
mineurs
• Hémophilie mineure: Facteur 5-40% → hémorragies après
traumatismes importants ou chirurgie
Traitement substitutif:

• Concentrés de facteur VIII (hémophilie A)

• Concentrés de facteur IX (hémophilie B)
• Surveillance: dosage du facteur avant et après perfusion
• Prophylaxie régulière pour les formes sévères

4-6) Bilan de thrombophilie

Principe:

La thrombophilie est une prédisposition aux thromboses veineuses (phlébites,

embolies pulmonaires) ou artérielles. Elle peut être constitutionnelle (génétique)
ou acquise. Le bilan est indiqué après un épisode thrombotique, surtout si
survenu avant 50 ans, récidivant ou dans un contexte atypique.

Indications du bilan:

• Thrombose veineuse profonde avant 50 ans

• Thrombose récidivante
• Thrombose de site inhabituel (thrombose cérébrale, mésentérique, porte)
• Antécédents familiaux de thrombose
• Thrombose sans facteur déclenchant évident
• Échec de traitement anticoagulant
• Complications obstétricales répétées (fausses couches, MFIU)
Thrombophilies constitutionnelles:

Anomalie Prévalence Risque relatif

Mutation facteur V
5% (Europe) × 5-10
Leiden
Mutation prothrombine
2% (Europe) × 3-5
G20210A
Déficit en protéine C 0,2-0,5% × 10
Déficit en protéine S 0,1-0,2% × 10
 Déficit en
0,02-0,2% × 20-50
antithrombine III

Table 7: Thrombophilies constitutionnelles et risque thrombotique

Thrombophilies acquises:

• Syndrome des antiphospholipides (SAPL): anticorps

antiphospholipides, anticoagulant lupique, anticorps anticardiolipine,
anti-β2-glycoprotéine I
• Hyperhomocystéinémie: déficit en vitamines B6, B9, B12
• Syndromes myéloprolifératifs: thrombocytémie essentielle,
polyglobulie de Vaquez
Bilan biologique de thrombophilie:

Dosages des inhibiteurs physiologiques:

1. Antithrombine III (AT III):

• Inhibiteur de la thrombine et des facteurs Xa, IXa, XIa
• Valeur normale: 80-120%
• Déficit: risque thrombotique très élevé
2. Protéine C:
• Inactive les facteurs Va et VIIIa (anticoagulant naturel)
• Valeur normale: 70-140%
• Déficit: thromboses veineuses récidivantes
3. Protéine S:
• Cofacteur de la protéine C
• Valeur normale: 60-140%
• Déficit: thromboses veineuses
Recherche de mutations génétiques:

• Mutation facteur V Leiden (résistance à la protéine C activée):

Recherche par biologie moléculaire (PCR)
• Mutation du gène de la prothrombine G20210A: Recherche par
biologie moléculaire
Recherche d'anticorps antiphospholipides:

• Anticoagulant circulant de type lupique (ACC/LA)

• Anticorps anticardiolipine (IgG et IgM)
• Anticorps anti-β2-glycoprotéine I (IgG et IgM)
• Contrôle à 12 semaines pour confirmer la persistance
Modalités pratiques du bilan:
 • Prélèvement à distance de l'épisode thrombotique (au moins 3 mois)
• À distance de l'arrêt des anticoagulants (selon le type d'analyse)
• Éviter le prélèvement pendant la phase aiguë (faux résultats)
• Confirmer toute anomalie sur un second prélèvement
• Enquête familiale si thrombophilie constitutionnelle identifiée
Interprétation et prise en charge:

En cas de thrombophilie identifiée:

• Traitement anticoagulant prolongé après premier épisode thrombotique

• Prophylaxie dans les situations à risque (chirurgie, grossesse, long
voyage)
• Conseil génétique si forme héréditaire
• Dépistage familial selon le type de thrombophilie
• Éviter les facteurs de risque acquis (tabac, contraception
œstroprogestative)
Conclusion
Ce stage au sein du laboratoire de biologie médicale de l'hôpital Hbib Thameur a
constitué une expérience formatrice exceptionnelle. Il m'a permis de découvrir
concrètement le fonctionnement d'un laboratoire hospitalier et de mettre en
pratique les connaissances théoriques acquises durant ma formation
universitaire.

Acquis du stage:

Les activités réalisées durant ce stage ont permis de développer de nombreuses

compétences techniques et transversales:

• Compétences techniques:
– Maîtrise des techniques de base en hématologie (NFS, frottis
sanguins, réticulocytes)
– Manipulation des automates d'hématologie et de coagulation
– Réalisation et interprétation des examens d'immuno-hématologie
– Exécution des tests d'hémostase avec rigueur et précision
– Respect des procédures de contrôle qualité
• Compétences organisationnelles:
– Compréhension du circuit des prélèvements et de la gestion des
urgences
– Apprentissage de l'organisation du travail en laboratoire
hospitalier
– Gestion des priorités et des délais de rendu des résultats
– Intégration dans une équipe pluridisciplinaire
• Compétences relationnelles:
– Communication efficace avec l'équipe technique et médicale
– Compréhension de l'importance de la transmission des
informations
– Développement du sens des responsabilités face aux résultats
d'analyses
Rôle crucial du biologiste médical:

Ce stage m'a également permis de prendre conscience du rôle fondamental du

biologiste médical dans la chaîne de soins. Les analyses biologiques constituent
un outil diagnostique indispensable pour:

• Orienter le diagnostic médical

• Adapter les traitements (surveillance des anticoagulants, compatibilité
transfusionnelle)
 • Suivre l'évolution des pathologies
• Garantir la sécurité des actes médicaux (transfusion, chirurgie)
Importance de la rigueur:

L'expérience acquise a souligné l'importance capitale de la rigueur et de la

précision dans l'exercice de la biologie médicale. Chaque résultat d'analyse peut
avoir des conséquences directes sur la prise en charge du patient. Cette
responsabilité impose:

• Un respect strict des protocoles analytiques

• Une validation critique des résultats
• Une traçabilité complète des examens
• Une veille constante sur les évolutions techniques et scientifiques
Perspectives professionnelles:

Ce stage a renforcé ma motivation pour poursuivre dans le domaine de la

biologie médicale. Il m'a permis de confirmer mon intérêt pour:

• L'hématologie et l'hémostase
• Le travail en équipe dans un environnement hospitalier
• La contribution au diagnostic et au suivi thérapeutique des patients
En conclusion, ce stage a été une opportunité unique d'apprentissage pratique
et de découverte du monde professionnel hospitalier. Les connaissances et
compétences acquises constituent une base solide pour la poursuite de mes
études et mon futur exercice professionnel en tant que technicien de laboratoire
de biologie médicale.

Je tiens à remercier chaleureusement toute l'équipe du laboratoire de biologie

médicale de l'hôpital Hbib Thameur pour leur encadrement, leur disponibilité et
leur patience tout au long de ce stage.