Medios de cultivo
QFB CLAUDIA IVETH REYES C.
OBJETIVOS
•Definir qué es un medio de cultivo y explicar su importancia en
microbiología.
•Clasificar los tipos de medios de cultivo según su:
•Estado físico (sólido, líquido, semisólido)
•Composición (sintéticos, complejos)
•Uso específico (selectivos, diferenciales, enriquecidos, etc.)
•Describir los componentes básicos de un medio de
cultivo y su función (fuente de carbono, nitrógeno,
minerales, etc.).
Medios de cultivo
Los medios de cultivo son sustancias o combinaciones de
sustancias que proporcionan los nutrientes necesarios para que los
microorganismos crezcan y se reproduzcan. En la microbiología
industrial, la selección y preparación de estos medios es esencial
para el éxito de los procesos de fermentación y producción de
productos comerciales, como antibióticos, enzimas y
biocombustibles.
Cultivos de bacterias:
Debido al pequeño tamaño, las bacterias no pueden
estudiarse como individuos aislados, sino como
poblaciones. Estas poblaciones deben cumplir con el
requisito de provenir de una sola célula.
APLICACIÓN
Control de calidad microbiológico
Aislamiento de microorganismos productivos
Desarrollo de productos nuevos
Evaluación de eficacia de conservantes y
antimicrobianos
Investigación y desarrollo
Estabilidad del producto
Preparación de medios de
Cultivo :
Pasos generales para preparar un medio de
cultivo:
Selección de los ingredientes
Mezcla de los ingredientes
Ajuste de pH
Esterilización
Enfriamiento y almacenamiento:
Necesidades nutricias y condiciones
de crecimiento:
MACRONUTRIENTES
Nutriente Función principal
Carbono (C) Fuente de energía y estructura celular
Nitrógeno (N) Síntesis de proteínas, ácidos nucleicos
Fósforo (P) Ácidos nucleicos (ADN, ARN), ATP
Azufre (S) Aminoácidos (cisteína, metionina)
Potasio, magnesio, calcio Cofactores enzimáticos y equilibrio iónico
Necesidades nutricias y condiciones
de crecimiento:
B) Micronutrientes (oligoelementos)
• Hierro, zinc, manganeso, cobre, etc.
• Necesarios en pequeñas cantidades como cofactores
enzimáticos.
Necesidades nutricias y condiciones
de crecimiento:
Cationes: Vitaminas:
Na+, K+, Ca++, Extracto de levadura.
Mg++, Mn++, Las bacterias presentan aquí
etc. en trazas. un amplio espectro, desde los
Fe++. extractos de levadura que
Micro elementos: sintetizan todas las vitaminas
Co++, Cu++. hasta los que hay que
suministrárselas en el medio
de cultivo.
Condiciones físicas de crecimiento
bacteriano
Las bacterias también necesitan condiciones ambientales adecuadas para
crecer. Estas incluyen:
A) Temperatura
Tipo de bacteria Rango óptimo de crecimiento
Psicrófilas 0–15 °C
Mesófilas 20–45 °C (muchas patógenas)
Termófilas 50–80 °C
Condiciones físicas de crecimiento
bacteriano
B) pH
• La mayoría crece en un pH neutro (~6.5–7.5).
• Algunas son acidófilas (pH bajo) o alcalinófilas
(pH alto).
Condiciones físicas de crecimiento
bacteriano
C) Oxígeno
Tipo Necesidad de oxígeno
Aerobias estrictas Necesitan oxígeno para crecer
Anaerobias estrictas El oxígeno las mata
Anaerobias facultativas Pueden crecer con o sin oxígeno
Microaerófilas Requieren poco oxígeno
Necesidades nutricias y condiciones
de crecimiento:
Agua:
Los microorganismos tienen diferentes
adaptaciones a la humedad, la forma
de comparar es mediante la actividad
acuosa.
Factores de crecimiento
Cualquier compuesto orgánico que un organismo
requiere como precursor o como constituyente de su
material orgánico celular, pero que no pueden
sintetizar a partir de fuentes de carbono más sencillas,
debe ser suministrado como nutriente.
Factores de crecimiento
a) Aminoácidos.
b) Purinas y pirimidinas.
c) Vitaminas.
MEDIOS DE CULTIVO
Se denomina medio de cultivo a una mezcla de
compuestos orgánicos e inorgánicos disueltos en agua
que sirven para el crecimiento bacteriano.
Como toda célula las bacterias requieren de nutrientes
básicos y factores ambientales para mantener su vida,
estas necesidades varían según los microorganismos que
se estudien
Clasificación
Según su consistencia:
Sólidos (contienen del 1 al 2% de agar).
Semisólidos (contienen del 0,3 al 0,7% de agar).
Líquidos (sin agregado de agar)
Medios líquidos (caldos)
Medios líquidos (caldos)
✅ Características:
• No contienen agar.
• Son totalmente líquidos.
• Ejemplos: Caldo nutritivo, Caldo tripticasa soya
(TSB), Caldo lactosado.
Medios sólidos
✅ Características:
• Contienen agar (1.5–2% aprox.), que
solidifica el medio.
• Se presentan en placas Petri, o
tubos inclinados
¿Para que se utilizan?
•Aislamiento y diferenciación de colonias (forma, color,
borde, elevación).
•Conteo de unidades formadoras de colonias (UFC).
•Pruebas bioquímicas en placas diferenciales.
•Evaluación de contaminantes específicos en productos
farmacéuticos, alimentarios, cosméticos.
•Conservación de cepas en tubos de agar inclinado o
picado.
Medios semisólidos
Medios semisólidos
✅ Características:
• Tienen menor concentración de
agar (~0.3–0.5%).
• Textura gelatinosa pero no
completamente sólida.
Clasificación
Según su composición química:
Sintéticos o químicamente definidos: Son los que
provienen de mezclas de productos naturales y que su
composición es perfectamente conocida.
Naturales o semisintéticos: Son los que contienen
extractos o infusiones de productos naturales y que su
composición química no está perfectamente conocida.
Clasificación
Según su utilidad:
Medios Nutritivos: Son medios simples que contienen los
nutrientes básicos para permitir el crecimiento de muchas
bacterias heterótrofas.
Medios enriquecidos: La adición de componentes como sangre,
suero, vitaminas, aminoácidos u otros componentes ricos en
compuestos orgánicos provenientes de animales o plantas, al
caldo o agar nutritivo, les proporciona sustancias nutritivas
complementarias que permiten el cultivo de organismos
heterótrofos exigentes.
Clasificación
Según su utilidad:
Medios selectivos: Añadiendo al agar nutritivo ciertos
productos especiales, puede impedirse el desarrollo de
algunos grupos bacterianos sin inhibir otros.
Medios diferenciales: La adición de ciertas sustancias
químicas a los medios de cultivo trae como resultado
determinado tipo de crecimiento bacteriano o cambios,
permitiendo diferenciar distintos tipos de bacterias.
Clasificación
Medios y test de identificación:
Para caracterizar microorganismos se utilizan, de
manera convencional, una amplia variedad de medios y
pruebas en los que se producen cambios bioquímicos
específicos.
AGAR McConkey es Selectivo y
diferencial
Agar Chocolate
Agar Sabouraud
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
REGISTRO PREPARACIÓN DEL MEDIO
DATOS:
FECHA
MEDIO
PREPARÓ
VOLUMEN
LOTE
pH
CADUCIDAD
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
1 atm de presión
PREPARACIÓN MEDIO DE CULTIVO
1 atm de presión
Preparación de medios de cultivo
En placas:
Se vierte entre 15 y 25 ml de medio de
cultivo en placas de Petri. Se deja
solidificar a temperatura ambiente.
En tubos:
Columna, pico y columna, y pico de flauta.
Preparación de medios de cultivo
En autoclave, el tiempo
óptimo es de 15 minutos
a 121ºC (1 atm o 15
lbs/pulg)
Inhibidores utilizados
Inhibidores utilizados
Inhibidores utilizados
Los más usados con este fin son:
Verde brillante: Medio para enterobacterias.
Verde malaquita: Inhibe Gram -.
Cristal violeta: Afecta a los Gram + pero poco a los
Streptococos
AGAR AGAR
Extracto seco obtenido de varias algas marinas, una
solución al 1 a 2 %, tiene la propiedad de gelificar a
temperaturas inferiores a 45ºC.
BILIS DE BUEY DESECADA
Es bilis de buey natural desecada y purificada; inhibe la
flora Gram positiva no entérica. Se utiliza para el
aislamiento de bacterias entéricas. Un gramo de bilis
desecada equivale a 10-12 g de bilis fresca y se utiliza
en concentraciones de 10 a 20 g por litro
SALES BILIARES
Se usan en medios de cultivo para:
• Inhibir bacterias no entéricas (que no resisten
compuestos biliares).
• Seleccionar bacterias entéricas (como E. coli,
Salmonella), que sí toleran estos compuestos.
CASEINA
Es un polvo granuloso blanco, una lactoproteína,
excenta de vitaminas. Se utiliza para la determinación
de actividad caseolítica de microorganismos.
GELATINA
Es una proteína. Se utiliza para demostrar proteólisis
(30 g por litro). Cuando se utiliza como soporte se
agrega al 12%. Punto de gelificación de 28ºC. Los
medios de cultivo que contienen gelatina deben
incubarse a 22ºC.
EXTRACTO DE CARNE
Se obtiene a partir de carne libre de tendones y grasas
pre digeridas. No contiene carbohidratos. Es rica en
albumosa. Se utiliza alrededor de 0,5%.
EXTRACTO DE LEVADURA
Es un polvo fino amarillo pardusco de olor
característico. Se obtiene por extracción acuosa de
lizado de levadura, es rica en vitamina B, soluble en
agua y no posee carbohidratos. Se agrega al 0,3%.
EXTRACTO DE MALTA
Se obtiene a partir de cebada malteada. Tiene un alto
contenido en maltosa. Se usa en cultivo de hongos y
levaduras en una proporción de 0,1 a 1%.
PEPTONA HIDROLIZADA
La peptona se obtiene por hidrolizado enzimático de
diversas proteínas, su composición varía según la
fuente de origen y la enzima o método de hidrólisis
utilizado.
Hidrolizado: se obtiene por hidrólisis química, es una
mezcla irregular de péptidos y aminoácidos.
BIBLIOGRAFÍA
•Cappuccino, J. G. & Welsh, C. (2020).Técnicas de laboratorio en
microbiología: Una introducción (11.ª ed.). Pearson.
•Tortora, G. J., Funke, B. R. & Case, C. L. (2020). Microbiología (12.ª ed.).
Pearson Educación.