Cultivo Microbiano y Biorreactores
Cultivo Microbiano y Biorreactores
Bioquímica
Código
2025 –
3006814
S2
DUVÁN DUEÑAS LÓPEZ
Ingeniero Biológico – M.
Sc.
deduenasl@[Link]
Ingeniería Bioquímica - 3006814
Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c ro b i a n o y
b a l a n c e s e n b i o rre a c t o re s
• Objetivo: Comprender y aplicar los principios fundamentales
del diseño y análisis de sistemas de cultivo microbiano,
mediante el estudio de balances de materia en biorreactores
de tanque agitado operados en modo discontinuo, continuo y
semicontinuo, con el fin de evaluar el desempeño y optimizar
procesos biotecnológicos.
• Contenido:
1. El biorreactor.
2. Balance de materia en un biorreactor de tanque agitado.
3. Sistema de cultivo discontinuo y consumo de oxígeno.
4. Sistema de cultivo continuo, productividad volumétrica de
biomasa y variantes del cultivo continuo.
5. Sistema de cultivo semi-continuo.
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
El biorreactor
(a)
acción de
biocatalizadores.
• Sistema que mantiene un
ambiente biológicamente
activo
(a) Minifors 2: el paquete completo de biorreactores para principiantes | INFORS HT ([Link])
(b) (b) R.T.L Representaciones técnicas Ltda. - BioFlo Pro ([Link])
(c) Applikon BioBench: biorreactor de sobremesa de acero inoxidable para bioprocesamiento ascendente ([Link])
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Tipos de biorreactores
Monoséptico – mixto
• Segun el número de sistemas biológicos presentes
Aerobio - anaerobio
• Según la presencia o ausencia de O2
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Biorreactores de tanque agitado
(1) Vaso de reactor
(2) Chaqueta
(3) Aislamiento
(b) (4) Cubierta protectora
(5) Conexión de inóculo
(a) (6) Puertos para sensores de pH,
temperatura, y oxígeno disuelto
(7) Agitador
Ventajas:
(8) Difusor de gas • Control preciso
(9) Sellos mecánicos
(10) Caja de engranajes • Escalabilidad
(11) Motor
(12) Descarga
• Distribución uniforme de
(13) Conexiones de la chaqueta células y nutrientes
(14) Válvula de muestra con conexión de
vapor • Versátil
(15) Visor de vidrio
(16) Conexiones para ácidos,
álcalis y agentes Desventajas:
antiespumantes
(17) Entrada de aire • Cizalladura elevada
(18) Tapa removible
(19) Boquilla de alimentación del medio
• Alto costo de Energía
(20) Boquilla de escape de aire
(21) Puertos de instrumentación
para sensor de espuma,
manómetro y otros
dispositivos
(22) Rompedor de espuma
centrífugo
(23) Visor con luz (no mostrado) y
conexión de vapor
(a) File:Agitated [Link] - Wikimedia Commons (24) Boquilla de disco de ruptura
(b) Chisti, Y., Moo-Young, M. (1994), Clean-in-place systems for industrial bioreactors: Design, validation and operation, Journal of Industrial Microbiology, Volume 13, Issue 4, Pages 201–207,
[Link]
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Columnas de burbujeo
Usos:
• Producción de microorganismos aerobios
• Cultivo de raíces pilosas
Ventajas:
• Baja cizalladura
• Bajo costo de capital
• Requiere menos energía
• Eficientes en la aireación y transferencia
de oxígeno
Desventajas:
• Menor control del mezclado
• Formación de espuma
(a) Diseño básico, (b) con placas deflectoras • Sedimentación de sólidos
perforadas, (c) con deflectores verticales y (d) con
mezcladores estáticos de lámina corrugada
(a), (b), (c), (d) Chisti, Y. (2010). Fermentation technology. In: Industrial Biotechnology: Sustainable Growth and Economic Success, Soetaert, W., Vandamme, E.J., eds, Wiley-VCH, New York, pp. 149 -171.
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Biorreactores de tiro o corriente de aire (Air-lyft reactors)
Usos:
𝜌 ↑↓ Ideales para cultivos sensibles a la
cizalladura.
Ventajas:
• Mezclado suave
• Mejor transferencia de masa
• Diseño simple
• Escalable y adaptable
d e
Desventajas:
a b c (d) Longitud extendida de la
trayectoria del flujo en la
• Dificultades para trabajar con
zona de cabecera, (e) medios de alta viscosidad
sección transversal de
(a) Configuración de bucle, (b) entrada ampliada de la zona
• Formación de espuma
dispositivo de cilindro dividido y (c) de bajante.
sistema de bucle externo.
(d), (e) Chisti, Y. (2010). Fermentation technology. In: Industrial Biotechnology: Sustainable Growth and Economic Success, Soetaert, W., Vandamme, E.J., eds, Wiley-VCH, New York, pp. 149 -171.
(a), (b), (c) Doran, P. M. (2013). Bioprocess Engineering Principles. Elsevier. [Link] 8
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Lecho fluidizado
Usos:
• Cultivo de células o enzimas Inmovilizadas
• Tratamiento de aguas residuales
Ventajas:
• Alta eficiencia en la transferencia de masa
• Operación continua
• Uso eficiente del espacio
Desventajas:
• Requerimientos de filtración
• Limitaciones por el manejo de sólidos
Usos:
• Enzimas o células inmovilizadas
• Tratamiento de aguas residuales
Ventajas:
• Alta densidad celular
• Operación continua
• Bajo esfuerzo cortante
Desventajas:
• Gradientes de concentración
• Dificultad para controlar y escalar
a. Reactor de lecho empacado b. Reactor de lecho empacado
con reciclado de medio
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Fotobiorreactores abiertos Fotobiorreactores cerrados
(c)
(a)
(b)
(a) ΥΠΕΚΑ: «Πράσινο φως» σε δύο καινοτόμες πρωτοεμφανιζόμενες βιώσιμες δραστηριότητες | Η ΚΑΘΗΜΕΡΙΝΗ ([Link])
(b) Microalgas para crear superalimentos | Ciencia | EL PAÍS ([Link])
(c) Conoce el Hábitat de un Fotobiorreactor | Bibo Park ([Link]) 11
Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Otras configuraciones de biorreactores para cultivos sumergidos
(b)
(a)
(a)
a: Orellano et al. (2017). Sistema de Inmersión Temporal: Automatización de Propagación IN VITRO de Plantas Utilizando Herramientas Libres.
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores para cultivos sumergidos
Otras configuraciones de biorreactores para cultivos sumergidos
(a)
b: Production Processes for Monoclonal Antibodies - Scientific Figure on ResearchGate. Available from: [Link]
components-in_fig5_313542678
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores de estado sólido
Biopilas
Usos:
• Biorremediación de suelos
• Gestión de residuos agrícolas
Ventajas:
• Bajo costo
• Contención de contaminantes
Desventajas:
• Limitaciones en la profundidad
• Dependencia de condiciones climáticas
• Tiempo de tratamiento prolongado
Roldán, A. & Iturbe, R. (2002). Saneamiento de suelos contaminados mediante biopilas, UNAM.
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores de estado sólido
Fermentadores rotativos, fermentadores de bandejas
(c)
(a) (b)
Fermentador de bandejas
Tambor rotativo
(a)
Sake Miso
(d)
Salsa de soya
(a) Aspergillus oryzae (麹) - Aspergillus oryzae
(b) Nigori sake
(c) Miso 001 - Miso
(d) Kikkoman Soy Sauce, Front-view jp-type , - Salsa de soya
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Biorreactores de estado sólido
Fermentador de lecho estático Fermentador de túnel
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Tipos de biorreactores
Ingeniería Bioquímica - 3006814
Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Comparación SSF Vs. SmF
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Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Comparación SSF Vs. SmF
Ashok, A., Doriya, K., Rao, D. R. M., & Kumar, D. S. (2017). Design of solid state bioreactor for industrial applications: An overview to conventional bioreactors. Biocatalysis and Agricultural Biotechnology, 9, 11–18.
[Link] 21
El biorreactor
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Componentes de los biorreactores
Tanque (d)
(a)
(c)
(b)
(a) Applikon Bio: biorreactor de vidrio multiusos esterilizable en autoclave para bioprocesamiento ascendente ([Link])
(b) Applikon AppliSens: tecnología de análisis de procesos (PAT) ([Link])
(c) BioBLU® f Single-Use Bioreactors - Eppendorf España
(d) Microbial Culture Bioreactor Manufacturers, Suppliers and Exporters 22
El biorreactor
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biorreactores
Componentes de los biorreactores
(b)
Difusores (a)
Poroso de orificios
(a)
1. 2.
5. 6.
Propela marina
3. 4.
(a)
Deflectores
1. 2.
3.
Tubos para intercambio de calor
(c)
(a)
1. Chaqueta, 4. 5. externo
2-3-4 serpentines, 5. intercambiador
Manta de calentamiento
(a) 生物反应器放大,你应该考虑更细致一些 - 知乎 ([Link])
(b) Catálogo de productos ([Link])
(c) Manta de calefacción con regulador digital | ([Link]) 26
El biorreactor
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biorreactores
Componentes de los biorreactores
Control de evaporación (b)
(a)
Condensadores de escape
(a) , (b) Fotografías tomadas para el curso Nacional de Cultivos en Biorreactores, 2023.
(c) Sistema de muestreo aséptico para biorreactores | INFORS HT ([Link] ) 28
El biorreactor
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biorreactores
Componentes de los biorreactores
Sistemas de control
• Sensores • Controlador • Actuadores
(e) Controlador EZ
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El biorreactor
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biorreactores
Biorreactor de tanque agitado
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biorreactores
Balances de materia
Definiciones clave
• Sistemas • Procesos • Estado estacionario
Frontera
Propiedad
Sistema
Alrededores
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biorreactores
Balances de materia
¿Balances de materia?
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biorreactores
Balances de materia
¿Balances de materia?
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biorreactores
Balances de materia
Ecuación general de balance de materia
𝑀 𝑒 − 𝑀 𝑠 + 𝑀 𝐺 + 𝑀 𝐶 =𝑀
Aplicables a:
= Masa de A ingresa al sistema a través de la frontera
• Masa total
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biorreactores
Balances de materia
Definiciones
En biorreactor de tanque agitado, perfectamente mezclado, y medio de
cultivo líquido:
(L/h)
= Concentración de Ci en la
alimentación (g/L)
= Concentración de Ci en el caudal de
salida
= Concentración de Ci dentro del
fermentador
= Densidad del liquido que entra
= Densidad del liquido que sale 37
= Densidad del liquido dentro del
fermentador
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biorreactores
Balances de materia
Definiciones
En biorreactor de tanque agitado, perfectamente mezclado, y medio
de cultivo líquido:
𝐶𝑖 2= 𝐶𝑖 , ρ 2= ρ
Balance de materia para el componente i
𝑀 =𝑀 𝑒 − 𝑀 𝑠 + 𝑀 𝐺 + 𝑀 𝐶
𝑑 (𝑉 𝐶 𝑖)
= 𝐹 1 𝐶 𝑖 1 − 𝐹 2 𝐶 𝑖 +𝑉𝑋 𝑟 𝑖 − 𝑉 𝑋 𝑟 𝐶
𝑑𝑡 𝑖
𝐿𝑔 𝐶 𝑖 𝐿 𝑔 𝐶𝑖 𝐿 𝑔 𝐶 𝑖 𝑔𝑋 𝑔 𝐶 𝑖 𝑔𝑋 𝑔 𝐶 𝑖
[¿] = − +𝐿 −𝐿
𝐿h h 𝐿 h 𝐿 𝐿 𝑔𝑋h 𝐿 𝑔𝑋h
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biorreactores
Balances de materia
Definiciones
En biorreactor de tanque agitado, perfectamente mezclado, y medio
de cultivo líquido:
𝐶𝑖 2= 𝐶𝑖 , ρ 2= ρ
Balance de masa total dentro del biorreactor
𝑀 =𝑀 𝑒 − 𝑀 𝑠 + 𝑀 𝐺 + 𝑀 𝐶
𝑑𝑉
𝜌 = 𝜌1 𝐹 1 − 𝜌 2 𝐹 2
𝑑𝑡
3 3 3
𝑔 𝑚 𝑔 𝑚 𝑔 𝑚
[ ¿] 3
= 3
− 3
𝑚 h 𝑚 h 𝑚 h
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Modos de operación
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biorreactores
Balances de materia en estado no estacionario
Para un pequeño intervalo de tiempo Δt, podemos asumir que las tasas de flujo de masa y las tasas de
reacción son constantes
^ ∆t− ^
( 1) ∆ 𝑀 = 𝑀 𝑀 𝑠 ∆ t + 𝑅 𝐺 ∆ t − 𝑅 𝐶 ∆𝑡 [ ¿ ] M
𝑒
∆𝑀 ^ ^ 𝑠 + 𝑅𝐺 − 𝑅 𝐶 [ ¿ ] Mt − 1
( 2) =𝑀𝑒− 𝑀
∆𝑡
𝑑𝑀 ^
(3 ) =𝑀𝑒 − ^
𝑀 𝑠 + 𝑅 𝐺 − 𝑅 𝐶 [ ¿ ] Mt −1
𝑑𝑡
[=]
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Modos de operación
Identificar los
Diagrama de Selección de Establecer base Declarar las
componentes
flujo de proceso unidades para el cálculo suposiciones
que reaccionan
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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o m i c ro b i a n o
Velocidad específica de
reacción
Tasa específica de crecimiento del microorganismo
¿A qué velocidad se genera la biomasa (X) por unidad de
biomasa?
1 𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎
𝑞 𝑋= ∗
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑡 𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜
−1
1 𝑑𝑋 [ ] 1 𝑔𝑋 𝐿 −1
𝑞 𝑋= ¿ =h
𝑋 𝑑𝑡 𝑔𝑋 𝐿
−1
h
1 𝑑𝑋 Tasa específica
𝑞 𝑋= =𝝁
𝑋 𝑑𝑡 de crecimiento
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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o m i c ro b i a n o
Tiempo de duplicación
Tiempo necesario para que una población celular duplique su número o masa.
𝑋 𝑡𝑑=2 𝑋 𝑖
ln ( 2 𝑋 𝑖 ) − ln ( 𝑋 𝑖 ) =𝜇 𝑚𝑎𝑥 ( 𝑡 𝑑 )
𝑙𝑛 2
𝑡 𝑑=
𝜇 𝑚𝑎𝑥
Número de generaciones n:
𝑡 𝑛 𝑋
𝑛= 2 = 𝑋
Distribución de los tiempos máximos de duplicación para microorganismos.
Quintero, R. (1990)
𝑡𝑑 0
Células animales: 18-48 h
Células vegetales: 24-96 h
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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o m i c ro b i a n o
Temperatura
Fluidización de
membranas
Desnaturalizació
n proteica
Enzimas -> T.
Opt. Rango de temperaturas óptimas de crecimiento para diferentes tipos de bacterias.
Imagen tomada de recurso web disponible en
[Link]
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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o
m i c ro b i a n o
Distribución de sustrato Herbert-Pirt
Rendimiento de Rendimiento de Coeficiente de
sustrato a biomasa sustrato a producto mantenimiento
𝑞 𝑠=𝑌 𝑆/ 𝑋 ∗ 𝜇+𝑌 𝑆 / 𝑃 ∗𝑞 𝑝 +𝑚 𝑠
Velocidad específica Velocidad específica Velocidad específica de
de consumo de de crecimiento generación de producto
sustrato
Distribución de sustrato de Herbert-Pirt (Stockar et al 2013).
47
Gracias