Ingeniería

Bioquímica
Código
2025 –
3006814
S2
DUVÁN DUEÑAS LÓPEZ
Ingeniero Biológico – M.
Sc.
deduenasl@[Link]
 Ingeniería Bioquímica - 3006814
Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Balances de materia
Definiciones clave

• Sistemas • Estado estacionario

Frontera

Propiedad
Sistema

Alrededores

a, b, c - Paulová, L. (2013). Advanced Fermentation Processes, DOI:10.1201/b15426-6 3

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biorreactores
Balances de materia

¿Balances de materia?

Entendimiento del proceso Control y optimización

• Reacciones y conversiones • Ajuste de condiciones operativas
• Distribución de flujos • Maximización de rendimientos

Diseño y escalamiento Monitoreo y diagnóstico

• Dimensionamiento y escalamiento • Seguimiento del proceso
• Identificación de problemas

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biorreactores
Balances de materia

¿Balances de materia?

Evaluación del impacto

ambiental y económico
Tipo de balances
• Gestión de residuos
• Eficiencia de recursos Diferenciales [M/t]
Cumplimiento normativo Velocidad

• Reportes y regulaciones Integrales [M]

Cantidad

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biorreactores
Balances de materia
Ecuación general de balance de materia

𝑑𝑀 ^ ^ 𝑜𝑢𝑡 + 𝑅 𝐺+ 𝑅𝐶
𝑀 𝑖𝑛 𝑀 𝑀 𝑜𝑢𝑡 =𝑀 − 𝑀
Sistema 𝑑𝑡 𝑖𝑛
𝑅𝐺 ,𝑅𝐶 [¿]
𝑀 𝑔 𝑘𝑔 𝑙𝑏
, , ,
𝑡 𝑠 h 𝑚𝑖𝑛

= Flujo de masa de A ingresa al sistema a través de la frontera Aplicables a:

• Masa total

= Tasa de consumo de A dentro del sistema

• Masa de especies atómicas o moleculares
• Masa de combinaciones específicas de
Tasa de cambio de A en un instante particular componentes (células, biomasa, etc.)

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biorreactores
Balances de materia
Definiciones

, =Volumen del cultivo

(L/h)
= Concentración de Ci en la alimentación
(g/L)
𝐶 𝑖,𝜌 = Concentración de Ci en el caudal de salida
= Concentración de Ci dentro del
fermentador
= Densidad del liquido que entra
= Densidad del liquido que sale
= Densidad del liquido dentro del
fermentador
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biorreactores
Balances de materia
Definiciones
En biorreactor de tanque agitado, perfectamente mezclado, y medio
de cultivo líquido:
𝐶𝑖 𝑜𝑢𝑡 =𝐶𝑖 , 𝜌 𝑜𝑢𝑡 = 𝜌
,

Balance de masa para el componente i

𝑑 (𝑉 𝐶 𝑖)
= 𝐹 𝑖𝑛 𝐶𝑖 𝑖𝑛 − 𝐹 𝑜𝑢𝑡 𝐶 𝑖 +𝑟 𝑓𝑖 𝑉 − 𝑟 𝑐𝑖 𝑉
𝐶 𝑖,𝜌 𝑑𝑡
𝑀
[ ¿ ]
𝑡

Formación metabólica del componente i

Consumo metabólico del componente i
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biorreactores
Balances de materia
Definiciones
En biorreactor de tanque agitado, perfectamente mezclado, y medio
de cultivo líquido:
Balance de masa total dentro del biorreactor
,
𝑑𝑀 ^ ^ 𝑜𝑢𝑡 + 𝑅 𝐺+ 𝑅𝐶
=𝑀 − 𝑀
𝑑𝑡 𝑖𝑛

𝑑𝑉
𝐶 𝑖,𝜌 𝜌 = 𝜌 𝑖𝑛 𝐹 𝑖𝑛 − 𝜌 𝑜𝑢𝑡 𝐹 𝑜𝑢𝑡
𝑑𝑡
En medio líquido con densidad baja: :

𝑑𝑉
= 𝐹 𝑖𝑛 − 𝐹 𝑜𝑢𝑡
𝑑𝑡
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Modos de operación

• Discontinuo • Semicontinuo • Continuo

(lote - batch) (feed batch)

𝐹 𝑖𝑛= 𝐹 𝑜𝑢𝑡 = 0

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Sistema discontinuo
 Forma más ampliamente utilizada a escala industrial.
 El medio de fermentación y el inóculo se introducen en el sistema al
comienzo de la operación.
 Bioprocesos con entrada y/o salida de corrientes gaseosas, pero no
de corrientes líquidas.
 Facilidad de alcanzar y mantener condiciones asépticas.
 Reducción de la productividad global del proceso por los tiempos de
limpieza, carga y descarga del biorreactor.
 Equipos de mayor volumen y mayor intensidad en el uso de mano
de obra.
 Falta de homogeneidad del producto entre corridas.
 Concentración inicial alta de sustrato, pero baja concentración
inicial de biomasa.
 Máxima concentración de sustrato inicial limitada por problemas de
inhibición por el sustrato.
Medio uniforme espacialmente (sistema homogéneo), pero de
composición . variable en el tiempo (estado no estacionario).

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Sistema discontinuo
Balance de masa total dentro del biorreactor

𝑑𝑉
𝐹 𝑖𝑛= 𝐹 𝑜𝑢𝑡 = 0 → =0
𝑑𝑡
Balance de masa para el componente i

𝑑𝑋 𝑑𝑆 𝑑𝑃
≠0 , ≠0, ≠0
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡
𝑑 𝐶𝑖
=𝑋𝑟 𝑓𝑖 − 𝑋𝑟 𝐶
𝑑𝑡 𝑖

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Sistema discontinuo
Balance para biomasa en sistema continuo
𝑑 ( 𝑋𝑉 ) 𝑑𝑋
=𝜇 𝑋𝑉 → =𝜇 𝑋
𝑑𝑡 𝑑𝑡
En fase de crecimiento exponencial:

𝑑𝑋 𝜇 𝑡
= 𝜇 𝑑𝑡 → 𝑋 = 𝑋 0 𝑒 𝑚

𝑋
Tiempo de cultivo batch:

1 𝑋 𝑓
𝑡 𝑏= ln ⁡( )
𝜇𝑚 𝑥0

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biorreactores
Sistema discontinuo
Balance de sustrato en sistema continuo
𝑆𝑉 = 𝑅𝐶
𝜇 𝑞𝑃
𝑅 𝐶 =− 𝑟 𝑆 𝑉 =− ( + + 𝑚𝑠 ) 𝑋 𝑉
𝑦 𝑋𝑆 𝑦 𝑃𝑆
𝑑𝑆 𝜇 𝑞𝑃
=− ( + +𝑚 𝑠) 𝑋
𝑑𝑡 𝑦 𝑋𝑆 𝑦 𝑃𝑆
En fase de crecimiento exponencial:
𝑑𝑆
𝑑𝑡
=−
( 𝜇𝑚
𝑦 𝑋𝑆 ) 𝑋 0 𝑒𝜇 𝑚 𝑡

Si en t=0, S=S0, entonces:

𝑋0
𝑆 = 𝑆0 − (𝑒 ¿ ¿ 𝜇𝑚 𝑡 − 1 ) ¿
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𝑦 𝑋𝑆

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biorreactores
Sistema semicontinuo (lote alimentado)
Proceso donde se adicionan uno o varios nutrientes mientras los
productos permanecen en el fermentador hasta el final de la
fermentación.

 Permite controlar la concentración de uno o varios nutrientes a

través de su tasa de alimentación.
 Es una poderosa herramienta para determinación de parámetros
cinéticos y energéticos, así como de tasas específicas de
crecimiento celular.
 Es altamente ventajoso cuando existe inhibición por sustrato
(metanol, etanol, ácido acético, etc.).
 Permite reducir el efecto de la inhibición por producto.
 Permite reducir la viscosidad del caldo o medio de cultivo durante
la producción de biopolímeros (goma xantana, gelana, dextrana,
pululana, etc.).
 Permite reducir el consumo de potencia de agitación y mejorar los
procesos de transferencia de masa en procesos de producción de
biopolímeros.
 Permite reponer la pérdida de agua por evaporación en procesos
prolongados (producción de antibióticos).
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biorreactores
Sistema semicontinuo (lote alimentado)
Balance de masa total dentro del biorreactor

𝑑𝑉
𝐹 𝑖𝑛= 𝐹 , 𝐹 𝑜𝑢𝑡 = 0 → =𝐹
𝑑𝑡

Balance de masa para el componente i

𝑑𝑋 𝑑𝑆 𝑑𝑃
≠0 , ≠0, ≠0
𝑑𝑡 𝑑𝑡 𝑑𝑡
𝑑 𝐶𝑖
=𝑋𝑟 𝑓𝑖 − 𝑋𝑟 𝐶
𝑑𝑡 𝑖

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biorreactores
Balances de materia en estado no estacionario

M: Masa de A en el sistema [=] M

^ M ^ Ṁe: Masa de A que entra al sistema [=] Mt-1
𝑀 𝑒 𝑀 𝑠
RG Ṁs: Masa de A que sale del sistema [=] Mt-1
RC RG: Tasa de generación de A en el sistema [=] Mt-1
RC: Tasa de consumo de A en el sistema [=] Mt-1

Para un pequeño intervalo de tiempo Δt, podemos asumir que las tasas de flujo de masa y las tasas de
reacción son constantes
^ ∆t− ^
( 1) ∆ 𝑀 = 𝑀 𝑀 𝑠 ∆ t + 𝑅 𝐺 ∆ t − 𝑅 𝐶 ∆𝑡 [ ¿ ] M
𝑒

∆𝑀 ^ ^ 𝑠 + 𝑅𝐺 − 𝑅 𝐶 [ ¿ ] Mt − 1
( 2) =𝑀𝑒− 𝑀
∆𝑡
𝑑𝑀 ^
(3 ) =𝑀𝑒 − ^
𝑀 𝑠 + 𝑅 𝐺 − 𝑅 𝐶 [ ¿ ] Mt −1
𝑑𝑡
[=]
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biorreactores
Modos de operación

Identificar los
Diagrama de Selección de Establecer base Declarar las
componentes
flujo de proceso unidades para el cálculo suposiciones
que reaccionan

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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o m i c ro b i a n o
Velocidad específica de
reacción
Tasa específica de crecimiento del microorganismo
¿A qué velocidad se genera la biomasa (X) por unidad de
biomasa?
1 𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎
𝑞 𝑋= ∗
𝑐𝑎𝑛𝑡𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑡 𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜
−1
1 𝑑𝑋 [ ] 1 𝑔𝑋 𝐿 −1
𝑞 𝑋= ¿ =h
𝑋 𝑑𝑡 𝑔𝑋 𝐿
−1
h

1 𝑑𝑋 Tasa específica
𝑞 𝑋= =𝝁
𝑋 𝑑𝑡 de crecimiento

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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o m i c ro b i a n o
Temperatura

Fluidización de
membranas

Desnaturalizació
n proteica

Enzimas -> T.
Opt. Rango de temperaturas óptimas de crecimiento para diferentes tipos de bacterias.
Imagen tomada de recurso web disponible en
[Link]

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C i n é t i c a d e l c re c i m i e n t o
m i c ro b i a n o
Distribución de sustrato Herbert-Pirt
Rendimiento de Rendimiento de Coeficiente de
sustrato a biomasa sustrato a producto mantenimiento

𝑞 𝑠=𝑌 𝑆/ 𝑋 ∗ 𝜇+𝑌 𝑆 / 𝑃 ∗𝑞 𝑝 +𝑚 𝑠
Velocidad específica Velocidad específica Velocidad específica de
de consumo de de crecimiento generación de producto
sustrato
Distribución de sustrato de Herbert-Pirt (Stockar et al 2013).

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 Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Tipos de biorreactores

Monoséptico – mixto
• Segun el número de sistemas biológicos presentes

Aerobio - anaerobio
• Según la presencia o ausencia de O2

Sumergido (SmF) – Estado sólido (SSF)

• Según la disponibilidad de agua

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 Tipos de biorreactores
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Comparación SSF Vs. SmF

Criterio Estado Sólido (SSF) Fermentación Sumergida (SmF)

Escalado de Desafíos en la producción a gran Más adecuado para la producción a

producción escala y la extracción de productos gran escala

Transferencia Problemas con la transferencia de

Mejor control de la transferencia
de masa y calor y masa, requiriendo diseños de
calor de masa y calor
biorreactor innovadores

Viabilidad Potencialmente más viable debido a Requiere más esfuerzos debido a

económica menores requerimientos de energía y mayores requerimientos de energía
agua y agua
Control de procesos más complejo
Control de Control de procesos más sencillo,
procesos debido a la naturaleza heterogénea
completo y homogéneo
del medio

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 El biorreactor
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biorreactores
Componentes de los biorreactores
Sistema de toma de muestra
(a) (b) (c)

Puerto de muestra Puerto de muestra Puerto de muestra

Biorreactor piloto con frasco tapa rosca con jeringa

(a) , (b) Fotografías tomadas para el curso Nacional de Cultivos en Biorreactores, 2023.
(c) Sistema de muestreo aséptico para biorreactores | INFORS HT ([Link] ) 27
 El biorreactor
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Té c n i c a s d e c u l t i v o m i c r o b i a n o y b a l a n c e s e n
biorreactores
Componentes de los biorreactores
Sistemas de control
Parámetros que se pueden medir o controlar en un biorreactor

Físicos Químicos Biológicos

Temperatura pH Concentración de biomasa
Presión Tensión de oxígeno disuelto Concentración de enzimas
Nivel de líquido Concentración de CO2 disuelto Composición de biomasa (ADN,
ARN, proteínas, lípidos,
carbohidratos, ATP/ADP/AMP,
Nivel de espuma Potencial redox niveles de NAD/NADH, etc.)

Velocidad del agitador Composición de gases de salida Viabilidad

Consumo de energía Conductividad Morfología
Tasa de flujo de gas Composición del caldo (sustrato,
producto, concentraciones de
Tasa de flujo del medio iones, etc.)
Viscosidad del cultivo

Doran, P. M. (2013). Bioprocess Engineering Principles. Elsevier. [Link]

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28
Gracias