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Tipos y Técnicas de Microscopía

Este documento describe diferentes técnicas de microscopía. La microscopía óptica utiliza luz y lentes para obtener imágenes aumentadas, mientras que la microscopía electrónica usa electrones. La microscopía de fluorescencia ilumina muestras marcadas con fluoróforos. La microscopía confocal permite observar detalles de un corte del tejido.

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Tipos y Técnicas de Microscopía

Este documento describe diferentes técnicas de microscopía. La microscopía óptica utiliza luz y lentes para obtener imágenes aumentadas, mientras que la microscopía electrónica usa electrones. La microscopía de fluorescencia ilumina muestras marcadas con fluoróforos. La microscopía confocal permite observar detalles de un corte del tejido.

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MICROSCOPA

Tcnica utilizada para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos.

MICROSCOPA PTICA Utiliza luz (fotones) y lentes de aumento para observar especmenes

MICROSCOPA DE FLUORESCENCIA Utiliza luz de longitudes de onda (colores) definidas y tb lentes.

MICROSCOPA ELECTRNICA Utiliza electrones

Campo Claro

Campo oscuro

Contraste de Fases Tradicional Confocal

Transmisin TEM (2D)

Barrido SEM (3D)

Poder de Resolucin de Tcnicas Microscpicas


Capacidad de separar claramente dos puntos o detalles situados muy prximos en el especimen

microscopio electrnico microscopio ptico ojo desnudo

MICROSCOPA PTICA
Resolucin de hasta 0,2 m 2 lentes para aumentar la imagen: Ocular (2,5X, 4X, 10X) Objetivo (2,5X, 4X, 10X, 20X, 40X, 60X, 100X) Aumento total = ocular x objetivo 2 lentes

4 Tipos de Microscopa ptica


Se diferencian por la manera en la que incide la luz sobre la muestra

Campo claro

Contraste de fases

Contraste de fases de interferencia diferencial (DIC) (Nomarski)

Campo oscuro

Cortes Finos:
Muchos tejidos son muy gruesos para examinar al microscopio. Estos son fijados qumicamente, cortados en secciones delgadas, montadas en portaobjetos y teidas para revelar detalles

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

El Fenmeno de la Fluorescencia eeNiveles Energticos Ms Altos

Prdida de energa

Luz Absorbida

Fotn emitido

e-

e-

Nivel Energtico Basal

Filtro de excitacin

Filtro de emisin

Microscopio de Fluorescencia
Utiliza muestras marcadas con compuestos fluorescentes (fluorforos) 2 Filtro: deja pasar slo luz verde ( 520-560 nm)

Espejo dicroico: refleja luz bajo 510 nm pero deja pasar luz sobre 510 nm 1er Filtro: deja pasar slo luz azul ( 450-490 nm)

Microscopa de Fluorescencia Confocal

La muestra fluorescente es iluminada con un punto de luz enfocado desde una pequea apertura (pinhole)

La fluorescencia emitida La fluorescencia que se encuentra fuera de emitida que se foco queda excluida de encuentra en foco pasar por la segunda pasa por otra apertura apertura y llega al detector

Microscopa de fluorescencia convencional En la imagen se mezclan todos los planos focales, no logrndose la observacin de detalles

Microscopa de fluorescencia confocal Se observan los detalles de un corte del tejido

La muestra se recubre de una capa de metal pesado es barrida en su superficie por el haz de electrones, los que son rebotados hacia un detector. Se crean imgenes tridimensionales. Resolucin de 320 nm

Contraste de fases

Microscopa electrnica de transmisin

Micrografa electrnica de barrido de los estereocilios del odo interno.

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