PRÁCTICA 3.
DETERMINACIÓN DEL
COEFICIENTE DE PARTICIÓN
EN FUNCIÓN
DEL pH
Equipo 1:
Luis Antonio Lomes Delgado
Rosa Isela Figueroa Soto
Kenia Maranaibi Jaimes Nava.
Rubí Esmeralda Linares Medina.
Profesora: Dra. Adriana Valladares Méndez
Objetivos .
•Identificar la importancia que tiene la determinación de
parámetros biofarmacéuticos (coeficiente de partición) de un
fármaco.
•
Interpretar el significado de la lipofilicidad de un compuesto
entre dos fases inmiscibles entre sí.
Introducción
El coeficiente de reparto o coeficiente de partición (P) es un parámetro fisicoquímico que
permite determinar de modo cuantitativo, el grado de lipofilia (también denominada
hidrofobicidad) de una molécula, permitiendo inferir cómo se comportará en el entorno de los
fluidos biológicos del organismo y cómo será su paso mediante difusión pasiva a través de
membranas biológicas.
La capacidad de una sustancia para atravesar membranas biológicas es uno de los
aspectos fundamentales dentro de las características farmacocinéticas de un fármaco, ya
que le permite acceder al sitio de acción y así, generar el efecto biológico (terapéutico o
tóxico).
Existen numerosas propiedades fisicoquímicas que entre estas pueden ser la lipofilicidad. Esta
es la de mayor interés para el desarrollo de fármaco, debido a la relación directa que presenta
con la habilidad para atravesar membranas biológicas por difusión pasiva, como así también, por
contribuir en forma entrópica a la unión entre ligando y receptor.
La lipofilicidad suele expresarse como coeficiente de partición (P) de un compuesto entre dos
fases inmiscibles entre sí, una fase polar (acuosa) y una no polar (orgánica) en equilibrio, cuyo valor
es comúnmente expresado en su forma logarítmica (log P) .
Metodología.
Preparación de la curva de cuantificación.
Pesar 10 mg de
Naproxeno transferir a aforar con NaOH 0.01 N
un matraz volumétrico disolver en 10 mL con (Solución Stock,
de metanol
100 μg/mL).
100 mL
Preparar una serie de
diluciones de las
siguientes Tomar una alícuota de
y aforando con NaOH
concentraciones: 5, 10, 1 mL y llevar a 100 mL
0.01 N.
15, 20, 25 y 30 μg/mL con NaOH 0.01 N.
con volumen final de 10
mL
• Leer en el
espectrofotómetro a
254 nm.
Preparación de las muestras.
En un tubo de ensaye agregar:
Disolver con
INICIO Pesar 100 mg
metanol con 0.5 mL de solución.
de Naproxeno
10ml de Etanol stock
4 mL de Hexano
3.5mL de buffer
(pH 2,4.5,7,o 10)
Adicionar lo mismo para
Centrifugar a Mesclar con
Dejar reposar los otros tubos
4000 rpm por vortex (5min)
15 min por 30 min
(combinando el bufer)
Separar las fases y Agregar Titular cada una de REGISTRAR
colocarlos en las fases con NaOH TODOS LOS
0.5 mL de HCl
tubos diferentes y 0.01N DATOS
0.1N
etiquetarlos
FIN
Curva de Cuantificación.
Resultados. 0.8
0.7 0.67
f(x) = 0.02 x + 0.02
0.6 R² = 1 0.57
0.5 0.45
ABS.
0.4
0.34
0.3
0.23
0.2
0.14
0.1
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Concentraciones (μg / mL)
Figura 1. Resultado grafica de curva de calibración a diferentes
concentraciones. ( 10 mg Naproxeno disuelto en 10 mL de metanol y aforado
con 90mL NaOH para muestra estándar)
Resultados.
Resultados.
Tabla 1. Valoración de la fase orgánica con NaOH.
Fase orgánica
pH # de tubo Vol de NaOH(mL
7.0 1 1.6
7.0 2 1.3
7.0 3 1.7
4.5 1 0.7
4.5 2 0.7
4.5 3 0.5
Tabla 2. Valoración de la fase acuosa con NaOH.
Fase acuosa
pH # de tubo Vol de NaOH(mL
7.0 1 3
7.0 2 3
7.0 3 1.8
4.5 1 41
4.5 2 42
4.5 3 38
Tabla 3. Coeficiente de partición y Log P del pH de 4.5.
Resultados. pH 4.5 NaOH 0.01 N
Muestra Fase orgánica Fase acuosa
Volumen [C] Volumen [C] P Log P
gastado Naproxeno gastado(mL Naproxeno
(mL) )
1 0.7 0.86 41.5 0.014 61.42 1.78
2 0.7 0.86 42 0.014 61.42 1.78
3 1.7 0.35 38.7 0.015 23.33 1.36
Tabla 4. Coeficiente de partición y Log P del pH de 7
pH 7 NaOH 0.01 N
Muestra Fase orgánica Fase acuosa
Volumen [C] Volumen [C ] P Log P
gastado Naproxeno gastado(mL Naproxeno
(mL) )
1 1.6 0.38 3 0.20 1.9 0.27
2 1.3 0.46 3 0.20 2.3 0.36
3 0.5 1.21 2.6 0.23 5.26 0.72
Tabla 5. Coeficiente de partición y Log P del pH de 2
Resultados. pH 2 NaOH 0.01 N
Muestra Fase orgánica Fase acuosa
Volumen C Volumen C P Log P
gastado Naproxeno gastado(mL) Naproxeno
(mL)
1 1.2 0.50 110.5 0.0055 90.90 1.95
2 1.7 0.35 78 0.0077 45.45 1.65
3 1.5 0.40 139.5 0.0043 93.02 1.96
Tabla 6. Coeficiente de partición y Log P del pH de 9
pH 9 NaOH 0.01 N
Muestra Fase orgánica Fase acuosa
Volumen C Volumen C P Log P
gastado(mL Naproxeno gastado(mL) Naproxeno
)
1 2.5 0.24 2.8 0.21 1.14 0.05
2 2.2 0.27 3.1 0.19 1.42 0.15
3 2.5 0.24 3 0.20 1.2 0.07
Fosfatos pH 7
Fosfato Di básico de Sodio –Fosfato monobásico de Potasio.
Cálculos
Fosfatos pH 9.5
X 𝑥=125 𝑚𝑔
Fosfato Monobásico de Potasio
X 𝑥=0.85
𝑔
Fosfatos pH 2
Fosfato Di básico-Fosfato de Sodio
Fosfatos pH 4.5
X 𝑥=2.23
𝑔 Fosfato Monobásico de Potasio
X 𝑥=3.40
𝑔
Cálculos para registrar los datos de Log P y el coeficiente de partición de las tablas (3 ,4 ,5 ,6).
Cálculos
1. Equivalentes de Naproxeno: 14 Eq.
Peso molecular del Naproxeno: 230.259 g/mol
2.-P eq Naproxeno: 𝑥=16.44 P eq g / mol
3.-. N equivalentes = 0.01g = 6.08272 x10-4 eq
16.44 eq g
Los 10 (mg) se
convirtieron en (g)
4. Calculamos la normalidad en base a los valores que tenemos de los diferentes pH con respecto al volumen que se gastó en cada
uno de ellos.
N
N=0.3578 N org
el volumen gastado (mL) se convirtieron a
(L)
Cálculos 5. Coeficiente de partición =
P==
61.42
Para un pH
de 4.5
6. Log p = Log [61.42] = 1.78
Desarrollo de Cálculos.
Para un pH de 4.5
2 3 P==23.33
P==
61.42
Log p = Log [61.42] = 1.78 Log p = Log [1.36] = 1.36
Desarrollo de Cálculos.
Cálculos Para un pH de 2.0
1 2 3
P==90.90
P==
45.45 P==
93.02
Log p = Log [90.90] = 1.95 Log p = Log [45.45] =1.65 Log p = Log [93.02] = 1.96
Para un pH de 7.0
1 2 3
P==1.9
P==
2.3 P==
5.26
Log p = Log [1.9] =0.27 Log p = Log [2.3] =0.36 Log p = Log [5.26] = 0.72
Para un pH de 9.0
Cálculos
1 2 3
P==1.14
P==
1.42 P==
93.02
Log p = Log [1.14] = 0.05 Log p = Log [1.42] =0.15 Log p = Log [1.2] = 0.07