UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE FARMACIA
CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA

Prof. Carlos Ciangherotti

EG PhD
 Inhibidor
Efector que hace disminuir la actividad enzimática, por
interacciones con el centro activo u otros centros específicos
(alostéricos)
 Fármacos Inhibidores Enzimáticos
Ej.:

Antiinflamatorio
Analgésico y
Antipirético
Ácido acetilsalicílico
Ciclooxigenasa 1 (COX-1)
(Aspirina®)

Antihipertensivo

Captopril (Capoten®) Enzima convertidora de angiotensina (ECA)

Disfunción eréctil

Sildenafil (Viagra®) Fosfodiesterasa de GMPC

 Tóxicos Inhibidores Enzimáticos
Ej.:

Paratión (organofosforado)
Acetilcolinesterasa
Insecticida y pesticida

Propoxur (carbamato)

Baygon® (insecticida)

Ácido cianhídrico cianuro

Citocromo c oxidasa
 Inhibición Reversible

1. Inhibición Competitiva
El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre e
impide la fijación del substrato.

2. Inhibición No Competitiva
El inhibidor se fija a la enzima independientemente de
que lo haga o no el substrato. No impide la fijación del
substrato a la enzima pero sí impide la acción catalítica.

3. Inhibición Acompetitiva
El inhibidor se fija únicamente al complejo enzima-
substrato, una vez formado, impidiendo la acción
catalítica.
Inhibición Competitiva

Vmx s
v
 i 
Km  1    s
 Ki 
 S Inhibición Competitiva
E ES E+P
I Se define una constante de equilibrio de disociación
del inhibidor:
[E] [I]
EI Ki =
[EI]
Características:
• Compiten con el sustrato por el sitio activo de la enzima.
• Se une solo a la enzima libre.
• A muy altas concentraciones de substrato desaparece la inhibición.
• El inhibidor es tan específico como el substrato.
• Por lo general, es un análogo químico del substrato.

Vmáx no se altera y Km cambia

Inhibición Competitiva en Gráfico de Michaelis-Menten

Sin inhibidor

Con inhibidor

El inhibidor competitivo
aumenta la Km

Km Km
Sin con
inhibidor inhibidor
Inhibición Competitiva en Gráfico de Lineweaver-Burk
 Calculo Gráfico del KI
Se gráfica los KM aparentes vs la concentración del inhibidor
 Inhibición Competitiva

Información Importante

El efecto cinético del inhibidor es el aumento aparente de

la Km, que aparece multiplicada por el factor (1 + i/Ki).

La Vmax no aparece modificada; para concentraciones muy

altas del substrato, v = Vmax, igual que en ausencia de
inhibidor.

Cuanto más pequeño sea el valor de Ki mayor será la

potencia del inhibidor competitivo.
 Ejemplo de Inhibidor Competitivo

Enzima:Succinato deshidrogenasa
Sustrato:Succinato
Producto: fumarato
Inhibidor: Malonato

OBSERVEN que
su estructura es
similar a la del
sustrato

No se forma
producto
Inhibición No Competitiva
 Inhibición No Competitiva

• Se une a un lugar diferente del sitio activo la

enzima.

• Se une a la enzima libre y también al complejo

enzima-sustrato.

• Por acción del inhibidor disminuye la Vm pero el

valor de Km no se altera.
 Inhibición No Competitiva
S
E ES E+P
I I Inhibición
S No Competitiva

EI ESI

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre (E) y al complejo

enzima-substrato (ES); ni el complejo EI ni el complejo ESI son
productivos.
Inhibición No Competitiva
 Inhibición
No
Competitiva
Inhibidor Acompetitivo (incompetitivo)
 Inhibidor Acompetitivo
• El inhibidor se enlaza al centro activo solo después de
que el sustrato lo haya hecho. Inhibidor y sustrato no
compiten.

• Aunque todo el sustrato esté saturando la enzima y toda

la enzima esté como complejo ES, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo ESI.

• Como I solo se une a ES estimula la formación de ES y

aumenta la unión del sustrato a la enzima, disminuyendo
Km.

• El complejo ESI no conduce a productos y Vmax

disminuye.
 Inhibidor Acompetitivo

• Se une a un lugar diferente del sitio activo de la

enzima.

• Se une sólo al complejo enzima-sustrato.

• Los efectos que tiene: disminuye el valor de

Km y también el de Vmáx
Inhibición Acompetitiva

S
E ES E+P
I

ESI

• El inhibidor sólo puede fijarse al

complejo ES.

• El complejo ESI no es productivo.

Inhibición Acompetitiva
 Resumen de las inhibiciones

Acompetitiva No competitiva Competitiva

With inhibitor

Normal
Inhibición Irreversible
 Inhibición Irreversible
- Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo
químico de la enzima, modificándola covalentemente

- Su acción no se describe por una constante de equilibrio Ki,

sino por una constante de velocidad ki:

E+I E’
- A diferencia de la inhibición reversible, el efecto de los
inhibidores irreversibles depende del tiempo de actuación
del inhibidor.

- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente

tóxicos.
Algunos tipos de inhibidores irreversibles

Reactivos de grupos -SH

Organofosfóricos

Ligandos de metales

Metales pesados
 Organofosforados
Insecticidas y pesticidas

Ej.: diisopropilfluorofosfato

Modifica covalentemente el residuo

de serina involucrado en la catálisis
de la acetilcolinesterasa ( una serin
proteasa)
 Otros Inhibidores

Análogos del Sustratos suicidas

estado de
transición
 Análogo del Estado de Transición (AET)
El inhibidor no es estrictamente análogo del substrato, sino del Estado
de Transición de la reacción

La afinidad de las enzimas por los AET es enorme, del orden nM o pM,
con lo que la fijación es tan fuerte que puede considerarse irreversible

O H3C -
O O- H3C
C N+ CH3 C N+ CH3
O2N O O O2N O O
CH3 CH3
Sustrato Sustrato en estado de transición

O H3C
O2N OH C N+ CH3
HO O
CH3
Productos
 Ej.: el captopril, inhibidor de la enzima convertidora de
angiotensina (ECA)

R
CH COO-
HN
C O + CH COO-
N
R' C H C O +
NH H 3C C H
HO C H C
-
O C H
-
S
Zn2+
Zn2+
Estado de transición Captopril
de la ECA
 Substratos suicidas

• Se trata de moléculas que se unen al centro activo de manera

específica, igual que el substrato o los inhibidores competitivos

• Una vez unidos al centro activo, la enzima transforma la molécula en

una especie química muy reactiva que modifica covalentemente a la
enzima, inactivándola.

• Tienen por tanto (a) la especificidad del inhibidor competitivo

y (b) la potencia de los inhibidores irreversibles

1 2 3
E+I EI EI* E’ + I*
 Ej.: el ácido clavulánico, un inhibidor de las β-
lactamasas bacterianas

β-lactamasa S
S R CO NH CH3
R CO NH CH3
O C HN CH3
N CH3
O O-
- COO-
COO
Penicilina (sustrato) Ác. Penicilóico (penicilina inactiva)

O CH2OH O
O CH2OH
C β-lactamasa C
N C
H O- HN H
O
-
COO
COO-
Á[Link]ánico
O Esta moléculareacciona con la
O CH2OH
C serina activa de la b-lactamasa,
C
CH CH2 O HN produciendo suinactivación
H
Ser
COO-
Enzimas alostéricas y
regulación de la
actividad enzimática
Prof. Carlos Ciangherotti
EG PhD
 Regulación enzimática

Enzimas alostéricas Modulación covalente

Alosterismo positivo Fosforilación

Alosterismo negativo Adenilacion
Uridinilación
ADP-ribosilación
Metilación
Características de la regulación alostérica

• Son enzimas cuya estructura proteica está formada

de varias subunidades

• No se rigen por la cinética de Michaeliana

• Además del sitio o centro activo tienen sitios

alostéricos o de regulación

• Son reguladas por unión no-covalente de

moduladores

• La relación entre la velocidad de reacción y la

concentración de sustrato sigue cinética sigmoídea
 Enzimas alostéricas
• Las enzimas alostéricas
presentan estructura
cuaternaria.

• Tienen diferentes sitios

activos, unen mas de una
molécula de sustrato

• La unión del sustrato es

cooperativa

• la curva de velocidad presenta

una forma sigmoidal
Regulación covalente
 Fosforilación/desfosforilación
Ej.: las fosforilasas
 Aplicaciones
clínicas de las enzimas

• La presencia o modificación de los niveles de actividad

de algunas enzimas en líquidos orgánicos:

– Indicador de enfermedad

– Predisposición genética a estado patológico

– Respuesta del paciente a tratamiento

 Enzimas relacionadas a patologías

ENZIMA ORGANO O ENFERMEDAD DE INTERÉS

Fosfatasa ácida Carcinoma prostático

Fosfatasa alacalina Hígado, enfermedad ósea
Amilasa Enfermedad pancreatica
Glutamato aminotransferasa Hígado, enfermedad cardíaca
Aspartato aminotransferasa Hígado, enfermedad cardíaca
Lactato deshidrogenasa Hígado, corazón, hematíes
Creatina quinasa Corazón , músculo, cerebro
Glucosa 6 fosfato DH Hematíes (defecto genético)
Tripsina Páncreas, Intestino
Elastasa Enfermedad del colágeno
Plasmina Trastornos de la coagulación sanguinea