PRÁCTICA #1
“Manejo, cuidado y uso del
microscopio”.
ELABORADO POR:
LABORATORIO DE BIOLOGÍA,
EDIFICIO G. ALLISON JIMENA JANTES JARAMILLO.
DIVISIÓN DE CIENCIAS E
INGENIERÍAS DE LA UNIVERSIDAD ESTRELLA ITZEL OLIVA ROMERO.
DE GUANAJUATO, LEÓN.
VANIA ELIZABETH RAMIREZ MARTINEZ.
A LUNES 24 DE NOVIEMBRE DEL 2025.
PROFESORA. LAURA EDITH EQUIPO #2, MESA 1
CASTELLANO TORRES.
Marco teórico
El desarrollo del microscopio transformó por completo
el estudio de los organismos invisibles al ojo humano.
Aunque desde épocas antiguas se sabía que las esferas de
vidrio con agua podían aumentar imágenes, fue en el
siglo XVII cuando se aplicaron de manera sistemática
los principios ópticos para observar estructuras
pequeñas¹. El telescopio, utilizado por Galileo en 1609,
demostró que las lentes podían ampliar lo imperceptible
e inspiró la creación del microscopio¹. Imagen 3. Microscopio propuesto por
Uno de los primeros avances fue el microscopio Leeuwenhoek.
compuesto, atribuido a Zacharias Jansen, quien combinó
Con el paso del tiempo, la microscopia evolucionó
dos lentes para lograr mayor aumento¹ como se muestra
conforme mejoraron las lentes, los sistemas de
en la Imagen 1.
iluminación y la estructura mecánica de los
instrumentos². El microscopio simple dio lugar al
microscopio compuesto acromático en el siglo XIX².
Imagen 4.
Imagen 1. Primer microscopio atribuido a
Jansen.
A pesar de ello, los primeros microscopios tenían
limitaciones importantes: aberraciones cromáticas,
deformaciones y baja resolución¹. Aun así, Robert
Hooke realizó un gran aporte al observar corcho y
describir cavidades que llamó “células” Imagen 2. En su
obra Micrographia de 1665¹.
Imagen 4. Microscopio acromático, diseñado por
Lister.
Más tarde, en la década de 1930, el microscopio
electrónico revolucionó la observación al permitir ver
virus, organelos y estructuras subcelulares². Estos
avances tecnológicos también se apoyaron en el
Imagen 2. Microscopio utilizado por Hooke. desarrollo de técnicas ópticas y modelos analíticos
precisos descritos en la óptica instrumental moderna³.
Paralelamente, Anton van Leeuwenhoek perfeccionó El desarrollo de los microscopios electrónicos de
lentes simples que alcanzaron aumentos aproximados de transmisión (MET) y de barrido (MEB) se inicia gracias
270×, permitiéndole observar bacterias, protozoos y al descubrimiento de las potenciales aplicaciones que
glóbulos rojos¹ con el microscopio de la Imagen 3. ofrece la longitud de onda de los electrones, la cual es
mucho más pequeña en comparación con la longitud de
onda de la luz utilizada en los microscopios ópticos, y el
trabajo en el desarrollo de los microscopios electrónicos
por parte de Knoll y Ruska.⁴ La mayor ventaja de los
microscopios electrónicos frente a los microscopios
ópticos se encuentra la resolución que pueden alcanzar,
esto se debe a que el valor de resolución depende de la
longitud de onda de la radiación utilizada para iluminar
la muestra.⁴ En los trabajos de Knoll y Ruska se puede
observar que utilizando el criterio de Rayleigh para
longitudes de onda de un electrón acelerado con un
voltaje de 75kV se encuentra un límite de resolución
aproximado de 022nm, mientras que un buen
microscopio óptico en el cual se utilice por ejemplo una
luz verde para iluminar la muestra cuya longitud de onda
es de = 500 nm se alcanza un valor de resolución de
aproximadamente 300nm; con estos resultados teóricos y
el desarrollo posterior de los microscopios electrónicos, Imagen 6. Productos de la colisión del haz de electrones
se pudo comprobar que la utilización de estos con la muestra en un microscopio electrónico de barrido.
instrumentos para la caracterización de materiales
constituye una poderosa herramienta para el avance en El funcionamiento del microscopio óptico se basa en
las diferentes ramas del conocimiento científico, como lo fenómenos como transmisión, refracción, difracción y
muestra la Imagen 5. ⁴ absorción de la luz². Al atravesar la muestra, la luz
cambia de dirección, se dispersa o es absorbida
parcialmente, generando el contraste necesario para
formar la imagen. En los modelos actuales de
microscopía compuesta también se controla con
precisión la iluminación y el trayecto óptico³. En
respuesta, cada uno de los tipos de microscopios, ya sea
óptico o electrónico tienen distintas capacidades de
visualización, según el tamaño del objeto a observar,
como lo muestra la Imagen 7.
Imagen 5. Diferencias básicas entre el MET y el MEB.
El funcionamiento de cada tipo de microscopio
electrónico hace que se utilicen para distintos fines, en
las fases iniciales del desarrollo de estos instrumentos, el
microscopio electrónico de transmisión gozaba de mayor
popularidad en comparación con el microscopio
electrónico de barrido debido a que los valores de Imagen 7. Capacidad de visualización de los
resolución que se alcanzaban con el MET eran microscopios.
significativamente mayores para muestras delgadas
respecto del MEB; es debido a esa diferencia en Dentro del microscopio, todos sus componentes trabajan
resolución que actualmente el uso del microscopio en conjunto. Los objetivos forman la imagen real
electrónico de barrido se encuentra orientado a observar aumentada, el ocular amplía esa imagen, el condensador
características de super cie de la muestra (topógrafa de concentra la luz, el diafragma regula el contraste, el
superficie, cristalógrafa) y composición gracias a la revólver ajusta el aumento y los tornillos de enfoque
información que proveen los productos de la colisión determinan la nitidez². Esta configuración es esencial en
entre el haz de electrones y la muestra (electrones microscopia biológica e histológica, donde se requiere
secundarios, electrones retro dispersados, rayos X etc.) estabilidad y precisión⁵, como lo muestra la Imagen 8.
como muestra la Imagen 6.
1000× 𝑅𝐷𝐼
𝑅= (nm)
Lav ×P
Como lo muestra la siguiente gráfica: Imagen 9.
Imagen 9. Resolución de imagen.
La apertura numérica de un objetivo determina cuánta
luz puede captar. Un mayor índice de refracción permite
recolectar más luz, lo cual mejora la nitidez. Por ello, en
los objetivos de 100× se usa aceite de inmersión, que
Imagen 8. Partes de un microscopio. evita la pérdida de luz por refracción y aumenta la
resolución². Esta técnica es imprescindible en estudios
La claridad de la imagen depende del poder de histológicos avanzados⁵.
resolución, que corresponde a la capacidad de distinguir Para conseguir una iluminación uniforme se emplea la
puntos muy cercanos como separados. El límite de técnica de Köhler, que implica centrar el diafragma de
resolución depende de la longitud de onda de la luz y de campo, ajustar el condensador y regular el iris². Esto
la apertura numérica². Un aumento excesivo sin mejorar permite obtener iluminación homogénea, mayor
la resolución solo agranda la imagen sin aportar detalle, contraste y mejor resolución² y es indispensable en
como ocurre al ampliar una fotografía con pocos microscopía de precisión³.
pixeles². La óptica instrumental explica que este límite Finalmente, como muchas células son transparentes, se
está determinado tanto por la física de la luz como por la utilizan técnicas de tinción para mejorar el contraste².
calidad del objetivo³. La resolución de la imagen se Aunque algunas muestras pueden observarse sin teñir,
encuentra relacionada por la medida de la longitud del como células vegetales o bacterias vivas, la definición es
eje menor de la elipse encontrada (Lmin) y la medida de mejor cuando se aplican colorantes que diferencian
la longitud del eje mayor (Lmay), así como también del estructuras como núcleo, citoplasma o paredes
ancho en pixeles de la región de interés (RDI) desde la celulares². Estas técnicas se describen ampliamente en
cual la transformada de Fourier fue hallada, así: manuales de histología⁵
Objetivo
Aplicar los principios teóricos y lograr utilizar correctamente el microscopio para el análisis de las estructuras celulares que
participan en los procesos biológicos.
Con el tornillo del porta‑condensador se descendió el
Procedimiento condensador hasta lograr observar con nitidez el
diafragma de campo, el cual apareció como un polígono.
Durante la práctica se identificaron las partes del Dicho polígono se centró empleando los tornillos
microscopio y se verificó su correcto funcionamiento posteriores y, una vez que lo conseguimos, se abrió
conforme a la figura de referencia (Figura 1). totalmente el diafragma de campo. La imagen se contrastó
utilizando el diafragma de iris del condensador.
Para la observación de las muestras con los objetivos de
40X y 100X únicamente se afinó el enfoque mediante el
tornillo micrométrico. En el caso del objetivo de 100X, se
colocó sobre el cubreobjetos una pequeña gota de aceite
de inmersión, de manera que la lente del objetivo quedara
sumergida en el aceite para obtener una mejor resolución.
Al finalizar la observación, se retiró el aceite de la lente
con papel de seda y se limpiaron cuidadosamente las
lentes para garantizar su conservación en buenas
condiciones.
Figura 1. Microscopio óptico y sus partes
fundamentales. Se muestran los componentes
Resultados
esenciales del sistema óptico y mecánico, incluyendo Durante la práctica de laboratorio se inició con la
ocular, objetivos, platina, condensador, fuente de
identificación detallada de los componentes del
iluminación y tornillos de enfoque, utilizados para la
microscopio óptico (Figura 1), con el propósito de
observación y análisis de muestras biológicas. reconocer su función y la manera correcta de manipular
cada parte del equipo. Este proceso se llevó a cabo
Posteriormente, se abrieron tanto el diafragma de iris
siguiendo las indicaciones incluidas en la guía de la sesión
como el diafragma de campo, y se elevó el condensador
y con el apoyo visual de un video proyectado por la
hasta el tope utilizando el tornillo del porta‑condensador.
profesora, el cual permitió reforzar la comprensión del
A continuación, se seleccionó el objetivo de 10X y se
manejo básico del instrumento.
ajustó la distancia interpupilar de los oculares. El enfoque
inicial de la preparación se realizó con el tornillo
macrométrico, mientras que el ajuste fino se efectuó con
el tornillo micrométrico. Para el ojo izquierdo se afinó el
enfoque mediante el diópter.
Seguidamente, se cerró por completo el diafragma de
campo, (figura 2) lo que produjo una luz difusa.
Figura 1. Microscopio óptico y sus partes
fundamentales. Se muestran los componentes
esenciales del sistema óptico y mecánico, incluyendo
ocular, objetivos, platina, condensador, fuente de
iluminación y tornillos de enfoque, utilizados para la
Figura 2. Diafragma de un microscopio óptico. observación y análisis de muestras biológicas.
Estructura encargada de regular la cantidad de luz que
atraviesa la muestra, permitiendo optimizar el contraste, El objetivo principal de la sesión consistió en establecer
la resolución y la calidad de la imagen durante la adecuadamente la iluminación mediante el método de
observación microscópica. Köhler, técnica fundamental para obtener imágenes
homogéneas y de alta calidad durante la observación
microscópica. Para su implementación, se procedió a la
apertura del diafragma de iris y del diafragma de campo,
a la elevación del condensador y a la selección del
objetivo de 10x. Asimismo, se ajustó la distancia
interpupilar para permitir una correcta alineación con el
sistema óptico. Posteriormente, se centró el haz luminoso
utilizando los tornillos laterales del condensador y se
cerró el diafragma de campo, lo que generó un contorno
luminoso que inicialmente se observó difuso y que
posteriormente fue reajustado hasta obtener una
iluminación uniforme. El enfoque final del polígono
luminoso se realizó mediante el tornillo micrométrico
(Figura 3), completando así el proceso de alineación
óptica.
Figura 4. Corte transversal de tallo de pino observado a
10x, donde se distinguen estructuras básicas del tejido
vegetal [1].
Figura 3. Microscopio óptico y sus partes
fundamentales, incluyendo el sistema mecánico, el
sistema óptico y los componentes de iluminación
utilizados para la observación microscópica.
Una vez obtenido el ajuste adecuado de iluminación, se
procedió a la observación de las muestras biológicas Figura 5. Corte transversal de tallo de pino observado a
proporcionadas por el laboratorio. La primera preparación 20x, con mayor definición de las estructuras tisulares
correspondió a un corte transversal de tallo de pino teñido, internas [1].
el cual se analizó empleando los objetivos de 10x (Figura
4), 20x (Figura 5) y 40x (Figura 6). En esta muestra se
identificó la disposición general de los tejidos vegetales,
destacándose la presencia de la epidermis y otras
estructuras internas propias del tallo[1], cuya morfología
se pudo distinguir con mayor claridad conforme
aumentaba el nivel de magnificación.
Figura 6. Corte transversal de tallo de pino observado a
40x, mostrando con mayor detalle la organización
interna de los tejidos [1].
La segunda muestra examinada consistió en un corte de
tallo de una planta de algodón, igualmente observado bajo
los objetivos de 10x (Figura 7), 20x (Figura 8) y 40x
(Figura 9). En esta preparación se reconoció la
organización de los tejidos en capas, incluyendo la
epidermis y la corteza [1], además de observarse diversas
estructuras cuyo origen no fue posible determinar durante
la sesión debido a la falta de experiencia y al poco tiempo
disponible para una revisión más exhaustiva.
Figura 9. Corte transversal de tallo de algodón
observado a 40x, mostrando con mayor detalle la
estructura de los tejidos, incluidos los elementos del
xilema y floema dentro de los haces vasculares [1].
Finalmente, se llevó a cabo la observación de una pata de
mosca, la cual únicamente se examinó con el objetivo de
10x (Figura 10). En esta preparación se apreciaron
elementos característicos como los pelos sensoriales y la
textura externa del exoesqueleto[2], permitiendo reconocer
la organización superficial típica de los insectos.
Figura 7. Corte transversal de tallo de algodón
observado a 10x, donde se aprecia la organización
general del tejido vegetal, incluyendo la epidermis, la
corteza y la disposición inicial de los haces vasculares
[1].
Figura 10. Pata de mosca observada a 10x, donde se
identifican los pelos sensoriales y la textura
característica de la superficie del exoesqueleto [2].
Observaciones generales
Figura 8. Corte transversal de tallo de algodón
observado a 20x, donde se distinguen con mayor
claridad la epidermis, la corteza y la disposición de los A lo largo de la práctica se logró analizar varias muestras;
haces vasculares [1]. sin embargo, el número total fue limitado por el tiempo
asignado y por la falta de experiencia en el manejo del
equipo, lo cual ralentizó algunos procedimientos.
Asimismo, se intentó emplear el objetivo de 100x, que
requiere el uso de aceite de inmersión para obtener una
mayor resolución. Debido a que, una vez aplicado el microscopio como herramienta fundamental para el
aceite, no es posible regresar a objetivos de menor estudio de la célula y los tejidos, así como la
aumento sin riesgo de dañar las lentes, se decidió dejar precisión necesaria para su correcto uso.
este procedimiento para la etapa final de la sesión. No
obstante, el tiempo restante no fue suficiente para registrar
evidencia fotográfica de las muestras observadas bajo este
aumento, por lo que no se cuenta con documentación
gráfica de dichas observaciones.
Referencias
Discusión de Resultados Marco Teórico
Durante la práctica de laboratorio se aplicó el ¹ Rodríguez, N. (2020). Historia de la microscopía.
procedimiento de ajuste y utilización del microscopio Recuperado de Historia_de_la_Microscopia-[Link]
óptico. Se identificaron sus partes principales y se verificó
su funcionamiento, lo que permitió comprender la ² García, M. (2019). Manual de microscopía: material para
mecánica de enfoque y la regulación de la iluminación laboratorio. Recuperado de manual_de_microscopia-
mediante la técnica de Köhler. A lo largo de la actividad [Link]
se observaron diferentes muestras utilizando los objetivos
de 10X, 40X y 100X, y se emplearon los tornillos ³ Zapata Rodríguez, C. (2016). Laboratorio virtual de óptica
macrométrico y micrométrico para realizar los ajustes instrumental: el microscopio compuesto. ResearchGate.
necesarios en cada caso. En el objetivo de inmersión se Recuperado de Area: Integration of basic Sciences in
Engineering
utilizó aceite para mejorar la resolución y posteriormente
se limpiaron las lentes con el fin de conservar el equipo
⁴ Vargas Padilla, F. (2017). Microscopía y fundamentos
en condiciones óptimas. ópticos. Recuperado de Estimación de la resolución en
microscopios electrónicos de barrido y transmisión
Durante el procedimiento se presentaron algunas
limitaciones derivadas de detalles técnicos del ⁵ Pérez, L. (2022). Instrumentos para el estudio de la
microscopio, como dificultades en el ajuste del histología. Recuperado de [Link]
condensador y en la nitidez de la imagen al cambiar de
objetivos. En términos generales, la experiencia permitió Discusión de resultados.
constatar la importancia de la correcta alineación óptica y
del manejo cuidadoso de los diafragmas para obtener [1] Britannica Editors. (2025, 24 de octubre). Stem
imágenes claras y contrastadas, además de reforzar la
(plant). Encyclopaedia Britannica.
necesidad de mantener una limpieza rigurosa de las lentes,
especialmente al trabajar con aceite de inmersión. A pesar
[Link]
de las dificultades técnicas, se logró completar la práctica
[2] Dessi, G. (2020). Notes on entomology: Flies.
y consolidar el aprendizaje sobre el funcionamiento del
microscopio óptico y su aplicación en la observación de Morphology and anatomy of adults: Legs. [Link].
muestras biológicas. [Link]
Procedimiento
Conclusión
Hernández, L. (2023). Principios básicos del uso
En la práctica uno de Biología Celular, se fortaleció del microscopio óptico.
nuestra comprensión del funcionamiento y las partes [Link]
del microscopio de luz, incluyendo su manejo
adecuado para la observación de muestras. La Ramírez, C. (2022). Técnicas de observación
realización de la luz de Köhler permitió optimizar la microscópica en biología celular.
iluminación, mejorando la resolución y nitidez de las [Link]
imágenes observadas. Asimismo, la observación de
muestras preparadas, como el tallo de un pino y la
epidermis de cebolla, nos permitió identificar
estructuras celulares y tejidos vegetales,
consolidando la relación entre la teoría y la práctica.
Esta experiencia destacó la importancia del