PRÁCTICA 2.
TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN EN MATERIALES
DEL LABORATORIO Y MEDIOS DE CULTIVO
TÉCNICO DE LABORATORIO
FACILITADORA:
MV. GAMBOA SORMARY
INTRODUCCIÓN
La esterilidad indica la ausencia de formas viables de
microorganismos, incluyendo las esporas. El término es absoluto,
debido a que un objeto nunca puede estar parcialmente estéril. La
esterilización son los procedimientos que conducen a la destrucción o
separación de toda forma de vida; macro, micro y sub microscópica.
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA
ESTERILIZACIÓN DE EL MATERIAL DE LABORATORIO Y
MEDIOS DE CULTIVO QUE REQUIERAN SER UTILIZADOS EN
PRÁCTICAS FUTURAS.
MANEJO ADECUADO DEL AUTOCLAVE.
MATERIAL A UTILIZAR EN PRÁCTICA
Cajas de Petri.
Gasa.
Algodón.
Papel estraza.
Autoclave.
Cinta testigo.
Asepsia
Significa sin sepsis y consiste en evitar la sepsis mediante
procedimientos que intentan:
Impedir la introducción de microorganismos
Reducir el número de los que están presentes
Se aplica al tejido vivo para prevenir la multiplicación de formas
vegetativas de gérmenes y evitar la sepsis.
Desinfección
Es la destrucción de organismos patógenos en estado vegetativo
sobre elementos inertes.
Control del crecimiento bacteriano
Se realiza mediante:
1. Agentes bactericidas: Matan microorganismos
2. Agentes estáticos (bacteriostáticos): Inhiben su crecimiento
Métodos de esterilización
Para material de laboratorio, se emplean:
Calor
Filtración
Radiaciones (CUADRO 1)
CUADRO 1. MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN.
1. Calor como método de esterilización
El calor es uno de los agentes físicos más utilizados para lograr la
esterilidad absoluta (ausencia total de microorganismos viables,
incluyendo esporos). Se divide en dos tipos principales:
a) Calor húmedo (Autoclave)
Temperatura clave: 121°c, a 15 psi de presión.
Mecanismo:
o Destruye microorganismos por coagulación de proteínas y
desnaturalización enzimática.
o Eficaz contra bacterias, virus, hongos y esporos bacterianos.
Aplicaciones:
o Materiales quirúrgicos
o Medios de cultivo líquidos
o Guantes de látex
b) Calor seco (Horno Pasteur)
Temperatura clave: 160−180°C, durante 2-4 horas
Mecanismo:
o Oxidación de componentes celulares.
o Menos eficiente que el calor húmedo (requiere más tiempo y
temperatura).
Aplicaciones:
o Vidriería de laboratorio.
o Polvos y sustancias oleosas.
o Instrumentos metálicos.
2. Puntos críticos de temperatura
Estos son los umbrales mínimos para garantizar la esterilización
efectiva:
Método Temperatura Tiempo Efecto sobre
microorganismos
Autoclave 121 ºC 15-30 min Elimina esporas de
Bacillus
stearothermophi
lus
Horno seco 160 ºC 2 horas Destruye formas
vegetativas y
esporos de pirólisis
3. Factores que afectan la eficacia
Tiempo de exposición:
o Relación inversa con la temperatura (↑ temperatura → ↓ tiempo
requerido).
Naturaleza del material:
o Materiales porosos requieren más tiempo.
o Líquidos necesitan ciclos de enfriamiento lento para evitar
ebullición explosiva.
Carga microbiana inicial:
o Mayor contaminación → Mayor tiempo de esterilización.
4. Limitaciones del calor
No apto para:
o Termolábiles (plásticos, ciertos fármacos).
o Materiales electrónicos sensibles.
Alternativas:
o Filtración (para soluciones termolábiles).
o Radiación gamma (materiales pre-envasados).
5. Validación de procesos
Se utilizan indicadores biológicos (esporos bacterianos) y
químicos (cintas sensibles al calor) para confirmar que se alcanzaron
los puntos críticos de temperatura.
ACTIVIDAD PRÁCTICA:
1. Preparación previa
a) Limpieza inicial
Lavar con detergente neutro y agua caliente (70-80°C) para eliminar
residuos biológicos.
Enjuagar con agua destilada para evitar depósitos minerales.
b) Empaquetado
MATERIAL Método de empaque
recomendado
Cajas de Petri Apilar máximo 10 unidades,
envolver en papel Kraft
autoclave o bolsas de
polipropileno poroso
Tubos de Ensayo Colocar en gradillas metálicas
con tapones de algodón/rosca
(semiabiertos para permitir
entrada de vapor)
2. Configuración del autoclave
Parámetros clave (ajustar según carga):
Temperatura: 121°C (estándar para medios de cultivo)
Presión: 15psi (1.05 kg/cm²)
Tiempo:
20 minutos para material vacío
30-40 minutos si contienen medios de cultivo
líquidos
Ciclo recomendado:
1. Desplazamiento de aire: 5-10 min
2. Exposición esterilizante: 15-30 min
3. Secado al vacío: 10 min (para evitar condensación)
3. Carga del autoclave
Distribuir uniformemente sin sobrepasar el 75% de capacidad
Orientación:
Cajas de Petri → posición horizontal
Tubos de ensayo → verticales con 2 cm de separación
Separar materiales metálicos de vidrio para evitar roturas por
dilatación diferencial
4. Proceso de esterilización
Etapas críticas:
1. Generación de vapor saturado: Verificar que la pureza del vapor
sea >97%
2. Penetración térmica: Usar indicadores químicos (ej. cintas de
Bowie-Dick)
3. Enfriamiento controlado:
Reducir presión gradualmente (0.5 psi/min)
Mantener puerta cerrada hasta <80°C
5. Post-esterilización
a) Almacenamiento:
Conservar en estanterías cerradas (máximo 30 días)
Ambiente: 18-25°C, humedad <60%
b) Validación:
Biológica: Esporas de Geobacillus stearothermophilus (ATCC 7953)
Física: Registro de gráficos tiempo-temperatura-presión
Errores comunes a evitar
❌ Usar papel aluminio para empaquetar (bloquea el vapor)
❌ Esterilizar cajas de plástico a >130°C (deformación)
❌ Abrir prematuramente el autoclave (riesgo de implosión)
Seguridad
Usar guantes térmicos y protección ocular
Nunca autoclavar sustancias volátiles (alcoholes, fenoles)
QUESTIONARIO: (REPORTE)
1) ¿Cuáles son las ventajas del uso del autoclave?
2) Considera necesario conocer el uso adecuado del
autoclave?
3) ¿A qué temperatura se esteriliza el material de
laboratorio?
4) ¿Por qué es importante esterilizar el material antes
de realizar un cultivo?
Seguir las pautas indicadas para la realización del reporte
práctico: Portada
1. Introducción (breve contexto teórico).
2. Materiales y métodos (listado conciso).
3. Resultados (tablas/gráficos esenciales).
4. Discusión (2-3 párrafos).
5. Conclusión (puntos clave).