Tinción por la
Técnica
De Ziehl
Neelsen
TLC. ALEJANDRA GPE. CAMPA PEDRO
OBJETIVO
Dar a conocer a la Red Estatal de Microscopistas la
importancia de la Vigilancia de la Tuberculosis, de forma
clara y definida, los procesos estandarizados de
diagnóstico por laboratorio, control de calidad y
referencia de las muestras, para un diagnóstico oportuno
y de calidad, que garantice la confiabilidad diagnóstica de
la tuberculosis
UNA TINCIÓN ES UNA TÉCNICA
AUXILIAR UTILIZADA EN
MICROSCOPÍA PARA MEJORAR EL
CONTRASTE EN LA IMAGEN VISTA
AL MICROSCOPIO. LOS
COLORANTES Y TINTURAS SON
SUSTANCIAS QUE USUALMENTE SE
UTILIZAN EN BIOLOGÍA Y MEDICINA
PARA RESALTAR ESTRUCTURAS EN
TEJIDOS BIOLÓGICOS QUE VAN A
SER OBSERVADOS CON LA AYUDA
DEL MICROSCOPIO
Método diagnóstico para detectar la presencia de BAAR en
una muestra.
El procedimiento se basa en la capacidad que tienen las Mycobacterias,
debido al alto contenido de ácidos micólicos en su pared, para incorporar
y retener ciertos colorantes después de ser tratadas con ácidos y
alcohol, propiedad conocida como ácido-alcohol-resistencia
BIOSEGURIDAD
MATERIAL
FUCSINA FENICADA
ALCOHOL ACIDO
AZUL DE METILENO
COLORACIÓN
En cada lote de láminas a teñir, siempre deben incluirse dos láminas
(una positiva y una negativa previamente preparadas) para el control
del método.
Disponer los frotis de izquierda a derecha con una distancia mínima de
separación de 5mm una de otra, conservando el orden numérico sobre
las varillas de vidrio dispuestas en una tarja de coloración, con el
extendido hacia arriba y el tercio numerado hacia el operador, cubrir la
superficie del extendido con fucsina fenicada previamente filtrada.
CALENTAMIENTO
Con la llama de un hisopo o torunda de algodón humedecido en alcohol
calentar suavemente por debajo de las láminas cubiertas por la fucsina,
hasta que se produzca emisión de vapores blanquecinos visibles; dejar de
calentar y repetir la operación por dos veces más.
En ningún caso la fucsina debe hervir o secarse sobre la lámina, si ocurre
esto último debe reponerse el colorante.
Esta operación de calentar tres veces seguidas hasta la emisión de vapor
toma habitualmente alrededor de 5 minutos, que es el tiempo adecuado de
contacto entre el extendido y el colorante.
LAVADO
Eliminar la fucsina tomando el portaobjetos por los bordes
del extremo numerado, entre el pulgar y el índice o con
una pinza, inclinando hacia delante y lavándolo con agua
destilada a baja presión.
Por Declive.
Girar la lámina para lavar la cara inferior, eliminando la
fucsina que ha escurrido hacia ella
DECOLORACION
Cubrir el extendido con una solución de alcohol ácido
durante un minuto. Cuando la solución decolorante
adquiere una coloración roja se lava con agua destilada y
si es necesario se decolora nuevamente durante un
minuto.
Eliminar el alcohol-ácido lavando la lámina con agua
destilada a baja presión.
Se considera decolorado el extendido cuando sus partes
más gruesas conservan sólo un ligero tinte rosado.
COLORACION DE CONTRASTE
Cubrir la superficie del extendido con azul de metileno
durante 1 minuto.
Eliminar el azul de metileno y lavar el portaobjetos con agua
destilada a baja presión, tanto por la superficie del extendido
como por la cara inferior.
Limpiar el resto del colorante de la cara inferior con un
algodón empapado en solución de alcohol-ácido.
Dejar secar las láminas ya teñidas a temperatura ambiente.
OBSERVACION MICROSCOPICA
Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el extremo más
cercano a la numeración del extendido, con un cuentagotas y sin
tocar la superficie del portaobjetos. Enfocar el microscopio acercando
el objetivo de 10x o 40x antes de usar el objetivo de inmersión (100x)
para encontrar el área adecuada. Después de ubicar el área, enfocar
con la lente de 100x ayudándose con el tornillo micrométrico.
Seguir una pauta uniforme de observación, leyendo de izquierda a
derecha del extendido (tratando de recorrer toda la superficie del
frotis) un mínimo de 100 campos útiles y emitir el informe
CONCLUSIONES
La baciloscopía es la técnica fundamental en la investigación bacteriológica de la
tuberculosis y es la herramienta básica para el control de esta enfermedad en la
comunidad.
En casos particulares deben utilizarse otros métodos diagnósticos confirmatorios,
de acuerdo a su disponibilidad y cuando se consideren necesarios, por ejemplo el
cultivo, identificación de especie y pruebas de farmacosensibilidad para los
medicamentos antituberculosos de primera y segunda elección.
La definición bacteriológica de un caso de tuberculosis conduce a la certidumbre
diagnóstica.
El laboratorio es responsable de la confirmación oportuna, confiable y accesible
del diagnóstico
Efectuar los exámenes que le han sido asignados de acuerdo con los medios de
que dispone, según el tipo de laboratorio.