UNIDAD 3: Inmunidad activa y pasiva

Un ser humano puede adquirir inmunidad de diferentes maneras:

Protección del • Inmunidad activa natural ocurre cuando el individuo adquiere la infección y a partir de
sistema inmune
allí desarrolla inmunidad. Ej: varicela
permanente!
• Inmunidad activa artificial: cuando se administran al individuo inyecciones de un Ag, lo
que induce la producción de Ac.
Protección por • Inmunidad pasiva natural ocurre cuando el individuo adquiere los Ac a través de la
transferencia de leche materna durante los primeros meses de vida (IgG).
Ac humanos o
• Inmunidad pasiva artificial: cuando se administran inyecciones de un antisuero
animales.
Protección obtenido de otro individuo que previamente fabricó Ac contra un Ag específico (suero
momentanea antiofídico)

-Características:

INMUNIDAD ACTIVA INMUNIDAD PASIVA

(el organismo genera Ac, trabaja en el sistema inmune) (el organismo recibe Ac, no trabaja el sistema inmune,
corta duración)
Existe exposición frente al Ag. No hay exposición al Ag, los Ac se forman
por otro individuo
Presenta memoria inmunológica No existe memoria inmunológica
Respuesta a largo plazo (desventaja) Respuesta a corto plazo (ventaja)

-Proceso de producción de Ac: (unidad 2, inmunidad humoral)

1. El linfocito T colaborador virgen reconoce un péptido procesado (por CPA), dando como
resultado la activación y proliferación clonal de los linfocitos T helper cevado

2. Paralelamente, la célula B reconoce al Ag nativo (lo incorpora por endocitosis), lo procesa en

un endosoma y lo presenta asociado al CMH-T

3. El linfocito Th activado (cevado) interacciona con el linfocito B que presenta el epitope (Ag
procesado).

4. Se produce la activación, proliferación clonal y diferenciación de las células B en:

- Células plasmáticas: son células secretoras de Ac, que carecen de Ig en sus membranas
y mueren rápidamente, al cabo de 2 semanas.
- Células cebadas de memoria: son células en reposo (Go) pero no son iguales que las B
virgen, expresan varias Ig en sus membranas (M,G,A y E) y además son de mayor
afinidad que la Ig de membrana original, lo que implica que ante una segunda entrada
del Ag, se van a activar a dosis menores y la respuesta será más rápida. Poseen una
gran esperanza de vida

-Respuesta primaria y secundaria:

➢ Respuesta primaria después del contacto inicial con un Ag, no hay producción de Ac
durante varios días. Luego comienzan a producirse de forma lenta, primero la IgM y

1 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 luego la IgG, seguido de una disminución gradual. Rta. Débil o ausente y declina con
rapidez (10dias)
➢ Respuesta secundaria: frente a un segundo contacto con el mismo Ag, se activan las
células de memoria y actúan de manera rápida e intensa. Se genera nuevamente la
producción de Ac, cuya cantidad es mayor que en la primera respuesta, sobre todo de
IgG. (1 a 3 dias)

-Fases de la respuesta primaria:

1. Fase de retardo (lag, latencia): es el tiempo que se tarda en la selección de un clon

específico de Th clonado que genera la diferenciación de la celula B en célula plasmática y la
celula de memoria. En la producción de células plasmáticas secretoras de Ac y de células B de
memoria. Es el tiempo entre la exposición al antígeno y la detección de anticuerpo en el suero.
Desde la entrada del antígeno hasta la activación de LT y LB

2. Aumento exponencial: incrementa el número de Ac, se forma IgM (infección aguda) y luego
IgG (infección crónica)

3. Meseta: se alcanza la concentración máxima de Ac y permanece constante.

4. Declive: comienza a disminuir gradualmente la concentración de Ac porque la infección ya

está controlada. (10 dias)

Los anticuerpos en esta respuesta son de tipo IgM, al cabo de varias semanas estas IgM son
casi imperceptibles en la sangre

-Fases de la respuesta secundaria

1. Fase de retardo: es más corta, rápida e intensa que en la respuesta primaria, debido a la
presencia de células B de memoria.

2. Aumento exponencial: el número de Ac formados es mayor debido a que el sistema inmune

ya está "entrenado". Se produce mayor cantidad de IgG, porque es una enfermedad crónica

3. Meseta: resulta más duradera.

2 GIMENEZ, Maria de los Milagros

4. Declive: la concentración de Ac disminuye lentamente

En la segunda exposición no hay síntomas porque no se produce la enfermedad.

VACUNAS: suspensión de microorganismos, parte o productos (atoxina) de ellos que se

inoculan en una persona para producir una respuesta(introducir en el org. Artificialmete el
virus o la bacteria de una enfermedad). Estos microorganismos perdieron la virulencia pero no
la inmunogenicidad, Inducen en el huésped la producción de anticuerpos. Confieren
inmunidad específica y activa.

Virulencia: significa "lleno de veneno" y designa el carácter patogénico y nocivo de un

microorganismo, como una bacteria, hongo, protozoo, microalga o virus. Es la capacidad de un
microbio de causar enfermedad. En esta catedra se denomina patogenicidad a la capacidad de
un microorganismo de producir enfermedad y se denomina puntualmente virulencia cuando
el microorganismo tiene la capacidad de incrementar la severidad de la enfermedad.
Inmunogenicidad: capacidad que tiene el sistema inmunitario de reaccionar frente a un
antigeno,

-Características de una vacuna ideal:

1. Reproducir una respuesta Inmunológica similar a la de la infección natural.

2. Efectiva (más del 90% de protección).

3. Minimos efectos secundarios.

4. Completamente segura.

5. Inmunidad persistente a largo plazo.

6. Dosis única y compatible con otras vacunas.

7. Administración no invasiva. (VO preferentemente) no recomendable en niños

3 GIMENEZ, Maria de los Milagros

8. Administración precoz en los primeros meses de vida

9. Estable a temperatura ambiente:

10, Fácil de producir y económicamente accesible.

-Tipos:

1. VACUNAS ATENUADAS:

➢ Constituidas por microorganismos vivos y enteros a los que se le ha atenuado la

virulencia. (infecta células y se replican dentro del org. De esta manera el SI esta
preparado para proteger frente a la reinfección de la misma cepa)
➢ Se administran dosis pequeñas de virus o bacterias que deben crecer y multiplicarse en
el hospedador para estimular el sistema inmunológico.
➢ La atenuación se produce por ADN recombinante para obtener mutaciones estables o
bien por pares sucesivos en medios de cultivos
➢ Generan inmunidad celular-humoral, produce memoria
➢ VENTAJA: Generalmente se administra una sola dosis que genera inmunidad para toda
la vida. Capacidad de reproducirse en el organismo y de inmunogenecidad
➢ DESVENTAJA: El principal problema de esta vacuna es que la atenuación no sea estable
y pueda revertirse a formas virulentas. Además, necesitan mantenerse en cadena de
frio permanentemente para que evitar que el microorganismo muera. Pueden causar
lesiones graves y hasta mortales en personas con inmunodeficiencias (VIH, leucemia) y
embarazadas.
➢ Las vacunas vivas atenuadas son relativamente fáciles de crear para algunos virus.
Ejemplos de vacunas hechas de virus → Sabin oral (poliomilitis), Triple viral
(sarampión, rubeola y paperas) Fiebre amarrila, varicela, Vaccinia (viruela)
Los virus son microbios simples que contienen una pequeña cantidad de genes, por lo
tanto, los científicos pueden controlar más rápidamente sus caracteristicas. Los virus
suelen atenuarse mediante un método que desarrolla generaciones de ellos en células
donde no se reproducen adecuadamente. Este entorno hostil debilita a los virus, a
medida que evolucionan para adaptarse al nuevo entorno, se hacen más débiles con
respecto a su entorno natural, los seres humanos.
➢ Las vacunas vivas atenuadas son más difíciles de crear para las bacterias. Las bacterias
tienen miles de genes y por lo tanto son más dificiles de controlar
Ejemplos de vacunas hechas de bacterias→BCG (antituberculosica) y anticolérica oral.

2. VACUNAS INACTIVADAS

➢ Están formadas por microorganismos completos pero inactivados (microorganismos

muertos) por algún método físico (calor) o químico como el formaldehido o algún
agente quelante como el óxido de etileno, siempre y cuando no se modifiquen las
proteínas que despiertan el sistema inmune. Al estar muertos no pueden reproducirse,
por lo tanto no causan enfermedades en el huésped, ni siquiera en
inmunocomprometidos

4 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 ➢ VENTAJAS: son su estabilidad, seguridad y conservación (no necesitan cadena de frio).
No vuelve a generar patogenia
➢ DESVENTAJAS: suelen inducir una respuesta inmune menor que las vacunas
atenuadas, por eso requieren varias dosis (mas altas o de refuerzo) (debido a la alta
concentración de MO muertos). NO consiguen inmunidad de por vida. La inmunidad
solo es humoral (Th2) sin participación del componente celular. No provoca respuesta
local de IgA
➢ Ejemplos de vacunas virales: influenza, polio (Salk) no esta en el calendario, rabia,
hepatitis A
➢ Ejemplos de vacunas virales Bacterianas: tos ferina, cólera, fiebre tifoidea.

3. VACUNAS FRACCIONARIAS:

➢ Está compuesta de pequeños fragmentos antigénicos de organismos causantes de

enfermedades (proteinas, péptidos, carbohidratos, toxinas, etc.) que estimulan una
respuesta mejor respuesta inmunitaria
➢ Ejemplos: hepatitis B (antigeno de superficie), influenza (proteina de superficie),
antigeno Vi de fiebre tifoidea, etc. Están compuestas por una fracción de la cubierta
proteica viral producida por una levadura genéticamente modificada, culebrill.
➢ VENTAJAS: Son intrínsecamente mas seguras porque no pueden reproducirse en el
receptor. Contienen una cantidad escasa o nula de material extraño y por consiguiente
tienden a producir menos efectos adversos
➢ DESVENTAJAS: la identificación de la subunidad o del inmunogeno peptídico
adecuados que proporcionan la respuesta de anticuerpos protectores y la respuesta
deseada de linfocitos T
➢ Se clasifican en:
✓ Vacunas toxoides: (pcto de un MO) obtenidas a partir de toxinas de bacterias
toxinogénicas que fueron inactivadas de forma segura y reproducible
mediante su tratamiento con formaldehído. Pierden su toxicidad pero
mantienen su antigenicidad (capacidad de producir una respuesta inmune
especifica).
VENTAJA: respuesta inmune elevada y duradera.
DESVENTAJA: difíciles de fabricar porque el MO debe generar las toxinas si o si.
Para lograr una inmunidad completa se requiere de una serie de refuerzos
cada 10 años.
Ejemplos: vacuna antidiftérica de 3 dosis subcutáneas, tétanos ([Link]) y DTP
(difteria, tétanos y tos ferina)
✓ Vacunas polisacáridas (parte del MO) obtenidas a partir de polisacáridos
presentes en las capsulas de las bacterias. Son poco inmunogénicas (por
debajo de los 18 meses de vida). Esta inmunidad decrece con el tiempo porque
los polisacáridos inducen una respuesta timo-dependiente, o sea, son
incapaces de inactivar linfocitos T. Además, proporcionan poca memoria
inmunológica. Producen tolerancia
Ejemplos: vacuna antineumococcica(Estreptococcus pneumonae),
antimeningococcica(Neisseria menengitidis), salmonella (fiebre tifoidea), H.
influenzae tipo B. Estan en el calendario
5 GIMENEZ, Maria de los Milagros
 ✓ Vacunas conjugadas: (parte del MO) estas unen un polisacárido capsular con
una proteina transportadora con lo que se consigue estimular los linfocitos T y
por ende, mejorar la inmunidad en niños pequeños (desde los 2 meses, donde
el sistema inmune no está totalmente maduro), o en inmunocomprometidos)
y conseguir una memoria inmunológica, mediada por células B. Además, no
produce inmunotolerancia. Previenen un mayor numero de enfermedades con
un solo preparado.
DESVENTAJAS: interferencia antigénica entre algunos de sus componentes,
que genera una disminución de la respuesta serológica, pero que no siempre
equivale a una menor eficacia o peor efectividad clinica
La primera vacuna de este tipo fue frente al Haemophilus influenzae tipo B
(bacteria gramnegativa que causa meningitis e infecciones respiratorias
agudas, principalmente en los niños), con un éxito extraordinario (vacuna
pentavalente). Luego surgieron las vacunas frente al Streptococcus neumoniae
y Nisseria meningitidis. Estan en el calendario

4. VACUNAS DE ADN RECOMBINANTE:

➢ Proteínas víricas + transportador plasmático.
➢ Constituidas por Ag obtenidos mediante ingeniería genética. Estas vacunas
surgen debido a que no todos los MO se pueden cultivar, pero muchas veces
se pueden aislar, clonar y expresar los genes que codifican para las proteínas
que provocan la respuesta inmune en un huésped alternativo, como bacterias
(E. coli), levaduras (Saccharomyces cerevisiae) u otras células.
➢ Preparación:
1. Se extrae el ADN del virus y se lo pone en contacto con las enzimas de
restricción (endonucleasas), las cuales van a cortar los lugares específicos
para obtener el gen de interés que codifica la proteína de superficie (es la
que produce la respuesta inmune)
2. Este gen se liga a un plásmido por acción de la ADN ligasa, obteniéndose
así el plásmido recombinante.
3. Se introduce el plásmido recombinante en una levadura ([Link]) o (S.
cerevisiae) y ésta comienza a sintetizar toda la información genética del
plásmido. De esta manera se obtiene la proteína de superficie del virus de
la Hepatitis B (gen. S) o del (HPV)
4. Finalmente estas proteinas se aíslan, se purifican y se preformulan en una
vacuna con algún ayudante (albúmina o sal de Al). Se comercializan
liofilizadas o como suspensión inyectable.
➢ VENTAJAS: se pueden eliminar los genes de virulencia (ya que lo único que se
utiliza es el gen que codifica la proteína de interés), se pueden crear sistemas
vivos no patógenos que transportan determinantes antigénicos, no producen
infección, generan memoria y producen una respuesta específica.
➢ DESVENTAJA: alto costo de producción.
➢ Ejemplos: Vacuna contra la hepatitis B, HPV, Vacuna viva de Salmonella typhi
(bacterias vivas modificadas genéticamente

6 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 5. NUEVAS VACUNAS
➢ Vacunas atenuadas mediante modificación genética (mutación de genes patogénicos)
➢ Vacuna de péptidos sintéticos:
* Consiste en la copia de la secuencia genotípica que codifica para las proteínas
antigénicas de los patógenos y su síntesis por medios químicos.
*Las proteínas de superficie presentan múltiples epitopes pero sólo algunos pueden
generar una respuesta inmune eficaz.
* Mediante ingeniería genética y MAB se identifican los fragmentos con capacidad
inmunogénica y se sintetizan (síntesis química) haciendo que adopten la conformación
espacial adecuada (mimotopos) para ser reconocidos como extraños por el sistema
inmune.
*Los péptidos obtenidos por síntesis pueden incluso aumentar la inmunogenicidad de
las proteínas antigénicas naturales.
➢ Vacunas anti-idiotipo:
*Contiene anticuerpos que reproducen la morfología del antígeno.
*Se obtienen anticuerpos contra un determinado antígeno (Ac idiotípico)
* Ese Ac se inyecta en un animal que produce anticuerpos contra él (Ac anti-idiotípico).
* Ac anti-idiotípico es un determinante antigénico similar al original
*Son ideales para agentes que mutan demasiado Inmunoterapia pasiva. Dosis
frecuentes
➢ Vacunas de proteínas y péptidos recombinantes: inserción de ADN en sistemas de
expresión (bacterias y plantas) para producir grandes cantidades de las proteínas
antigénicas.
➢ Vacunas génicas: ADN desnudo o en vectores víricos y bacterianos vivos.
* Se administra el gen en el huésped a vacunar. Se usan vectores (vehículos biológicos)
para expresar un gen bacteriano en humanos.
* El gen de interés, dentro de las células del huésped expresa las proteínas antigénicas
*El antígeno proteico sintetizado desencadena una repuesta inmune
*Ventajas y desventajas:
x Permite administrar genes para varios antígenos
× Respuestas humorales moderadas, no tan intensas
× Pueden producir respuesta inmunitaria al ADN
× Pueden producir autoinmunidad
➢ Vacunas comestibles: producción de proteínas antigénicas en plantas comestibles.
* Especies vegetales (OGM) que producen proteínas antigénicas.
* El vegetal debe tener gran cantidad de antígeno soluble para que la protección sea
efectiva.

7 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 * Debe ingerirse una gran cantidad del alimento en su forma fresca
* Se administran de forma oral
* Respuesta inmunitaria de mucosas
* Riesgo de degradación de los antígenos en el estómago e intestino antes de inducir
la RI
* Desafío: mejorar la expresión de antígenos en la planta y protección de antígenos de
la degradación gastrointestinal

FORMULACIÓN DE NUEVAS VACUNAS

* MICROENCAPSULACIÓN

* NUEVOS ADYUVANTES E INMUNOMODULADORES

* VACUNAS COMBINADAS Y MIXTAS

* INMUNIZACIÓN MUCOSA

* VACUNAS TERAPÉUTICAS

ETAPAS EN EL DESARROLLO DE NUEVAS VACUNAS

2 a 4 años para el desarrollo PRE-CLÍNICO: ensayos de laboratorio y en animales. Valorar la

seguridad y actividad biológica y formulación. 5000 muestras

5 a 7 años para los ensayos CLÍNICO: seguridad y dosificación. Efectividad y efectos colaterales.
Reacciones adversas a largo plazo. 5000 voluntarios sanos y enfermos humanos. 5 candidatos

2 a 3 años para su REGISTRO: revisión y aprobación. Pruebas adicionales y seguimiento de la

comercialización. 1 aprobado

TOTAL: 12 a 15 años

-Ventajas de las nuevas vacunas

Se pueden eliminar los genes de virulencia.

Se pueden crear sistemas vivos no patógenos que trasportan determinantes
antigénicos.
La técnica es muy útil en el caso de agentes infecciosos que no se pueden mantener en
cultivo.

-Enfermedades sin vacunas:

1. Virus: HIV (problemas: variación antigénica →virus muta) , herpes (riesgo de activación) ,
adenovirus y rinovirus (demasiado serotipos)

2. Bacterias: sífilis (ignorancia de la inmunidad efectiva), clamidia, estafilococos y

estreptococos A (primeros intentos fallidos)

3. Hongos: candida, pneumocistis

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4. Protozos: chagas (autoinmunidad), paludismo, malaria, enfermedad del suero (variación
antigénica externa)

SUEROS

Preparados biológicos que contienen Ac y cuya administración por via parenteral produce
inmunidad pasiva artificial frente a determinadas enfermedades infecciosas. Son producidos a
partir de animales o humanos inmunizados. Se aplican especialmente en situaciones de
emergencia, cuando no hay tiempo suficiente para producir una inmunización activa.

Serovacunación: cuando los sueros se asocian con vacunas, por ejemplo, Tetanol

VACUNAS SUEROS
Inmunidad activa Inmunidad pasiva
Se administran Ag Se administran Ac
Se utilizan para prevenir Se utilizan como tratamiento
Inmunidad a largo plazo Inmunidad a corto plazo
Respuesta lenta Respuesta rápida

-Caracteristicas

VENTAJAS: → Especificos contra un Ag.

→Rápida acción y eficacia

DESVENTAJA: → Confieren inmunidad a corto plazo.

→Riesgo de reacciones adversas.

→No producen memoria

-Clasificación:

1. Homologos (de la misma especie) se obtienen a partir de personas cuyo suero contiene Ac
por inmunización o por haber sufrido la infección clínica. Dan una respuesta más larga que los
heterólogos. No producen hipersensibilidad porque se administran proteinas de la misma
especie. Via IM. Se aconseja que se administre por vía intramuscular porque la mayoría de los
preparados forman agregados o polímeros que pueden dar lugar a reacciones febriles y
cardiovasculares graves si se administraran por vía intravenosa. Estos sueros contienen IgG, un
2% de IgA y no contiene IgM

Pueden ser:

➢ Ig normal o no especifica: (varios Ag) mezcla de sueros no seleccionados de adultos

normales que contiene Ac de donantes. Están indicados en personas que carecen de
Ac (agammaglobulinemia e hipogammaglobulinemia) y para evitar o atenuar varias
enfermedades infecciosas (como sarampión y hepatitis B en niños) y para personas
inmunodeprimidas

9 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 ➢ I especifica: (un Ag) suero de donantes hiperinmunizados por vía activa que contienen
un elevado número de Ac. Son específicos para una enfermedad infecciosa (Ig
antitetánica y antirrábica), aunque también existen Ig no infecciosas como la Ig anti-Rh
que se emplea para prevenir la enfermedad hemolítica del recién nacido.

La inyección de inmunoglobulina anti-D se administra a mujeres Rh negativas cuando:

• Cursan las 28 y 34 semanas de embarazo y es efectiva para detener la formación de anticuerpos RhD
después del nacimiento
• Luego de una amniocentesis
• En casos de abortos, para prevenir la sensibilización
• En hemorragias feto-maternas

Las mujeres que son Rh negativo pueden formar anticuerpos Rh en el embarazo. Los anticuerpos, con mayor
frecuencia, se forman después de las 28 semanas de embarazo. Si los anticuerpos están presentes en un embarazo
posterior, pueden causar recién nacidos anémicos. Si el cuadro es severo y no tiene tratamiento, el recién nacido
puede morir. Los objetivos de la inyección con anti-D son disminuir las posibilidades de que una mujer forme
anticuerpos. Esta revisión encontró que una inyección de 100 ug (500 UI) de Anti-D administrada a las mujeres que
son Rh negativo a las 28 y 34 semanas en su primer embarazo disminuyó las posibilidades de formación de
anticuerpos Rh después del nacimiento. Una dosis menor fue ineficaz. Los costes de este tratamiento necesitan
considerarse como también los costes del tratamiento para las mujeres que forman anticuerpos Rh y sus recién
nacidos, y los suministros locales de anti-D disponible. Se necesita investigación adicional para encontrar el mejor
momento y dosificación para las inyecciones.

2. Heterologos; (de distinta especie) se obtienen a partir de animales jóvenes de gran talla
(caballos) que han inmunizados. Producen hiperinmunización (elevado número de Ac). Dan
una respuesta más corta. Pueden provocar reacciones de hipersensibilidad (alergias) por
proceder de otras especies, que varian de síntomas locales leves a la anafilaxia sistémica grave.
Via IV, IM, SC. Pueden ser:

➢ Antimicrobianos: sueros de animales inmunizados frente a bacterias o virus por

administración de vacunas la atenuadas, inactivas o Ag purificados. Ej: suero
antirrábico (mordeduras graves).
➢ Antitóxicos: sueros de animales inmunizados frente a exotoxinas por inoculación del
toxoide. Ej: suero antitetánico(exotoxina neuronal), antiofídico (araña y serpiente),
antidiftérico (infecciones hipertóxicas)

AC MONOCLONALES (MAB)

Obtenidos por el argentino César Milstein y por el alemán Georges Kohler en 1975. Los MAB
son Ac idénticos producidos por una célula híbrida, producto de la fusión de un clon de
linfocitos B (descendientes de una sola célula madre) y una célula plasmática tumoral

Obtención de MAB murinos:

1. Inmunización: se inocula al ratón inyectando el Ag de interés. Al cabo de unas semanas, las

células se dividen y el ratón comienza a producir Ac. Luego se sacrifica al ratón y se toman las
células B productoras (plasmáticas) de Ac del bazo.

2. Fusion; las células B (con crecimiento limitado) son fusionadas a 37°C en presencia de
polietilenglicol (PEG: agente fusionante) con células de mieloma (células B tumorales) que

10 GIMENEZ, Maria de los Milagros

pueden crecer indefinidamente en cultivo celular. Como resultado se obtienen hibridomas que
pueden multiplicarse rápida e indefinidamente y pueden producir gran cantidad de Ac. Se
fusionan a nivel de membrana y se obtienen distintos tipos de combinación. También se
obtienen células B(sin fusionar o fusionadas e/si) y células de mieloma (sin fusionar o
fusionadas e/si)

Las células de mieloma perdieron la capacidad para sintetizar la enzima hipoxantina- guanina-
fosforribosil transferasa (que sintetiza ADN), por lo que se dice que son HGPRT negativas y a
raíz de ello se cultivan en un medio especial llamado HAT (que contiene
hipoxantina/aminopterina/timidina) porque la enzima de la que carecen estas células sintetiza
purinas utilizando como fuente precursora la hipoxantina. Sin embargo, la presencia de
aminopterina en el medio anula la posibilidad de vida de éstas células y hay una total
dependencia del compuesto (HGPRT). Al cabo de un tiempo mueren.

3. Selección: se seleccionan aquellos hibridomas que produzcan el Ac de interés. Para ello se

utiliza el medio de cultivo HAT, que solo permite el crecimiento de los hibridomas porque
tienen la enzima HGPRT heredada de las células B y la capacidad de crecimiento ilimitado
heredada de los mielomas. Las células de mieloma no fusionadas no pueden crecer porque
carecen de dicha enzima y las células B provenientes del bazo no se pueden multiplicar porque
tienen una vida corta en cultivo.

+info:

Para seleccionar el crecimiento exclusivo de los hibridomas linfocito-mieloma se emplea un

medio HAT el cual presenta la adición de hipoxantina 100 μmol/L, timidina 16 μmol/L y
aminopterina 0.5 μmol/L. La aminopterina es un inhibidor de la síntesis de ADN por la vía
endógena (novo), es decir que bloquea la ruta principal de la síntesis de purinas y pirimidinas
que son los bloques estructurales del ADN. Las céluas normales, que son HGPRT positivas
pueden utilizar la hipoxantina y la timidina que les provee el medio para fabricar purinas y
pirimidinas respectivamente.

Puesto que la intervención de la enzima hipoxantinaguaninafosforribosiltransferasa (HGPRT)

es imprescindible en este proceso las células del mieloma que no la expresan por ser HGPRT
negativas, mueren. Sólo las células que puedan sintetizar ácidos nucleicos por la vía alternativa
(que sean HGPRT+) sobrevivirán, o sea los hibridomas (formados por la fusión entre un
linfocito y una célula de mieloma) y las células B normales sin fusionar o fusionadas entre si.
Los linfocitos normales procedentes del bazo de animales inmunizados no pueden crecer en
cultivos de tejidos más que unos cuantos días y mueren de forma natural luego de un número
limitado de divisiones lentas. Las células de mieloma (sin fusionar o fusionadas entre sí) no
crecen en un medio HAT que es HGPRT dependiente porque son HGPRT negativas y no pueden
sintetizar ADN a partir de hipoxantina y timidina por la vía alternativa.

11 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 De esta manera, luego de unos días de cultivo en medio HAT, quedarán sólo los hibridomas
como células viales en la mezcla de sobrenadante de cultivo celular.

4. Evaluación de los sobrenadantes de cultivo (para un Ag. Hay varios epitopes, y hay tantas Ig
como epitope tenga el Ag) los Ac de diferentes colonias son analizados para conocer su
capacidad de unirse a un Ag determinado, por ejemplo con un tipo de test llamado ELISA, y
para seleccionarse y aislarse de la manera más efectiva.

5. Clonación: una vez identificado el hibridoma más eficiente, se lo hace crecer y se clona para
obtener los MAB en alta producción. Los MAB producidos luego son purificados. Que un Ac sea
monoclonal significa que cada cultivo secreta una sola clase de molécula de Ac dirigida a un
solo determinante antigénico de un antígeno preseleccionado.

6. Escalamiento de la producción de MAB: a continuación se realiza un escalamiento (cultivo

mayor) de los hibridomas, que cultivados apropiadamente, se mantendrán para siempre ya
sea in vitro o in vivo en un ratón.

-Usos:

*Con fines diagnósticos, in vitro

- Para medir niveles de proteínas y drogas presentes en el suero

- Identificación de agentes infecciosos.

-Identificación de Ag tumorales.

12 GIMENEZ, Maria de los Milagros

-Identificación y cuantificación de hormonas.

- Tipificación de tejidos y de sangre.

-Tipificación de leucemias y linfomas.

-Detección de vitaminas, citocinas.

-Test de embarazo.

*Con fines terapéuticos:

- Tratamiento de diversas enfermedades autoinmunes como artritis reumatoide, lupus.

- Para tratar el cáncer, la metástasis del cáncer de mama.

-Para evitar el rechazo tras un trasplante.

-Ejemplos de MAB:

Palivizumab → para el virus sincitial respiratorio en niños (bronquiolitis).

Rituximab→ para el lupus y el linfoma no Hodgkin.

Trastuzumab → tratamiento del cáncer de mama metastásico.

-Limitaciones:

*No se usan para terapéutica "in vivo" porque pueden producir reacciones adversas

*Tampoco se usan para tratar enfermedades infecciosas, porque la enfermedad puede mutar
y los MAB no son capaces de adaptarse a dicho cambio.

Anticuerpos monoclonales:

Murinos: procede de ratón en un 100%. El sistema inmune reconoce a éstos como

extraños y genera sus propios anticuerpos frente a ellos.
Quiméricos: 70% origen humano y 30% origen murino. Las porciones constantes de las
cadenas pesadas y livianas provienen de inmunoglobulinas humanas y las regiones

13 GIMENEZ, Maria de los Milagros

 variables se obtienen de anticuerpos murinos. Igual presentan problemas de
inmunogenicidad.
Humanizados: 90% origen humano. Solo contiene del ratón el sitio de unión al
antígeno. No producen respuestas del sistema inmune generalmente

Clonación:

Monoclonales: significa que cada cultivo secreta una sola clase de molécula de
anticuerpo dirigida a un determinante antigénico (epitope) de un antígeno
preseleccionado.
Policlonales: son muchos tipos de anticuerpos para distintos epitopos del mismo
antigeno
MONOCLONALES POLICLONALES
Contienen un solo Ac que reconoce un solo Contienen muchos Ac que reconocen
Ag muchos Ag
Son específicos para un epitopo Se dirigen a varios epitopos
determinado
Se produce una sola clase de Ac porque Se producen varias clases de Ac porque
provienen del mismo clon de linfocitos B provienen de diferentes clones de linfocitos
B
Muy reproducible Reproducibilidad y estandarización
difíciles
Anticuerpos monoclonales usados para el diagnóstico

La gonadotropina corónica humana, en condiciones normales se produce solamente en las

células trofoblásticas de la placenta poco después de la implantación del embrión y puede
detectarse a partir de ese momento en el suero y en la orina de la mujer embarazada por lo
que se constituye en un elemento fundamental en el diagnóstico precoz del embarazo. Esta
hormona es fabricada por el embrión en desarrollo poco después de la concepción y más tarde
por el sinciciotrofoblasto (parte de la placenta).

Mientras el nivel de esta hormona en mujeres no embarazadas y hombres sanos está

normalmente bajo, de 1 a 2 mUI/ml, se eleva rápidamente después de la concepción pudiendo
alcanzar concentraciones de 10 a 30 mU/ml en la primera semana de embarazo, duplicándose
cada dos dias aproximadamente y alcanzando el nivel más elevado entre las semanas 8 a 12 de
embarazo. Luego el nivel va disminuyendo lentamente hasta una concentración que se
mantiene durante todo el embarazo. Luego del parto el nivel disminuye drásticamente al valor
normal. Es posible observar niveles elevados en pacientes con carcinomas gastrointestinales,

14 GIMENEZ, Maria de los Milagros

urogenitales, bronquiales y mamarios, en pacientes con cáncer testicular, ovárico, de cervix y
en los que padecen linfomas. Por lo que esta hormona es también un importante marcador
tumoral.

La técnica ELISA (Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas) se basa en la detección de un

antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o
indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser
medido espectrofotométricamente. Tiene muchas de las propiedades de un inmunoensayo
ideal, es versátil, robusto, simple en su realización, emplea reactivos económicos y consigue,
mediante el uso de la fase sólida, una separación fácil entre la fracción retenida y la fracción
libre. Los umbrales de detección van de 20 a 100 mUI/ml (mili unidades internacionales por
mililitro).

Tipos de ensayos ELISA

Se han desarrollado múltiples variantes de ensayos ELISA. A continuación se describen los más
comunes:

ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas): Las placas ELISA se preparan
recubriendo los pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el
antigeno. Se incuban con anticuerpos marcados (o con Ag espeificos x ej:VIH) que
indican la presencia de antigeno en la solución analizada. Es necesario incluir controles
negativos y positivos. Se usa para detección de antígeno
Detección de toxina del cólera, toxina de E. coli entero patógena, detección de virus:
rotavirus, virus de rubeola, sarampión
ELISA indirecto: Las placas ELISA se preparan de una forma idéntica a la anterior. Los
controles positivos: negativos son los mismos. El sistema de detección emplea dos
anticuerpos: uno primario contra el antígeno que se encuentra en la solución
sospechosa, uno secundario marcado contra el primario. La detección tiene mayor
sensibilidad por presentar una amplificación de señal debida a la unión de dos o más
anticuerpos secundarios por cada primario. Es el ensayo más popular, pues un mismo
anticuerpo secundario marcado y un mismo sistema enzimático permite cuantificar
una gran cantidad de antigenos. Se usa para detección de Ac en suero.
Ac frente a la samonella, cólera, Mycobacterium tuberculosis
ELISA sandwich (ensayo de captura de antígeno y detección mediante
inmunocomplejos). Se trata de un ensayo muy empleado en el que se recubre el
pocillo con un primer anticuerpo antiantigeno. Después de lavar el exceso de
anticuerpo se aplica la muestra problema en la que se encuentra el antigeno, que será
retenido en el pocillo al ser reconocido por el primer anticuerpo. Después de un
segundo lavado que elimina el material no retenido se aplica una solución con un
segundo anticuerpo anti-antigeno marcado. Así pues cada molécula de antígeno estará
unida a un anticuerpo en la base que lo retiene y un segundo anticuerpo, al menos,
que lo marca. Finalmente se revela la reacción con un complejo colorimétrico. Este
ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad. El pdto. Es colorando es
proporcional a la cantidad de Ag

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El método inmunoenzimático para detectar HCG es del tipo sandwich y utiliza muestras de
orina. En este ensayo, la HCG es capturada por un anticuerpo policlonal anti-HCG de alta
afinidad inmovilizado en la fase sólida (tira o placa de poliestireno). La reacción se
completa con la adición de un anticuerpo monoclonal (MAB) anti beta HCG y la
inmunorreacción se revela con un conjugado de anticuerpo antiglobulina de ratón
purificado por afinidad, con enzima peroxidasa y su correspondiente sustrato colorigénico
el cual desarrolla una coloración directamente proporcional a la concentración de la HCG
en la muestra

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