Transcripcion en eucariotes:
La transcripción es como el DNA sirve de molde para la síntesis del RNA. La transcripción es
la síntesis de moléculas de RNA a partir de 1 molécula de DNA
TRANSCRIPCIÓN BACTERIANA
Los promotores no se transcriben ni se traducen pero hay secuencias consenso como la caja
TATA o caja -10. La caja -10 es reconocido por la RNA polimerasa gracias a la subunidad
sigma que reconoce e identi ca el nucleotidos +1
-35 le provee estabilidad a la unión enzima-DNA y esta corriente arriba, corriente abajo esta
la porción estructural del gen y el nucleotido +1, que es la parte que sirve como molde para
la síntesis de RNA. Siempre al nal del gen esta la secuencia terminada
Solo se transcribe el 3% del DNA, solo se transcribe el 3% de todo el material genético
La RNA polimerasa llega por la acción de la subunidad sigma, se reconoce la caja TATA, la
polimerasa tiene inserta una helicasa que forma una burbuja de constricción e identi ca el
nucleotido +1 y a partir de él comienza la síntesis del RNA. El crecimiento del RNA
sintetizado será de 5´ a 3´, se forman RNAs ribosomales, mensajeros y de transferencia
hasta llegar a la secuencia de terminación de secuencias invertidas que forman un bucle que
genera tensión que hace que el RNA se desprenda de la enzima. Esto desensambla la
enzima y termina la transcripción
FLUJO DE LA INFO GENÉTICA
En eucariotes la transcripción ocurre en el
núcleo y este proceso a partir de la cadena
de ADN se forma una cadena de RNA
Ejemplo:
5’ GCTAGCTTA 5’ —> Codi cante
3’ CGATCGAAT 5’ —> Molde
5’ GCUAGCUUA 3’ —> RNA
fi
fi
fi
El RNA tiene la misma dirección que el DNA y tiene la misma secuencia de nucleotidos que
el DNA solo cambia la presencia de uracilo en vez de timina
● Codi cante: tiene la misma dirección y secuencia de nucleotidos que el RNA
● Molde: es la cadena en la que ocurre la transcripción
El proceso de transcripción del DNA en eucariotes emplea 3 RNA polimerasas nucleares
diferentes que son:
1. RNA polimerasa I: se encarga de sintetizar RNAs ribosomales
2. RNA polimerasa II: se encarga de sintetizar las RNAs mensajeras y unos cuantos RNAs
nucleares y nucleunares
3. RNA polimerasa III: se encarga de sintetizar los RNAs de transferencia y pequeños RNAs
ribosomales y nucleares
La RNA polimerasa II y la III aparte de su función principal también sintetizan pequeños
RNAs
Como las mitocondrias y los cloroplastos tienen su propio material genético que debe
transcribirse existe una RNA polimerasa mitocondrial y una RNA polimerasa cloroplastica
PROMOTOR DE LA RNA POLIMERASA II
fi
Los genes eucarioticos tienen una región reguladora o promotor que no se transcribe ni se
traduce, tenemos la caja TATA o región -25 (esta en los genes que son transcriptos por la
RNA polimerasa II que es quien lleva a la síntesis de proteinas que van a actuar como
hormonas, enzimas, inmonoglobulinas, etc) esta la región -35 que se encarga de proveer
estabilidad a la unión de proteinas con el gen y esta la región estructural con el nucleotido +1
En los eucariotes, ninguna
Polimerasa tiene la capacidad
de reconocer a la caja TATA,
es decir, al promotor por lo que
existen los factores de
transcripción y funcionan como
coayudantes
FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN (TF)
Es el inicio de la transcripción las polimerasas no identi can el promotor y a las secuencias
consenso por lo que activan factores de transcripción
● TFII .. : el número indica a que polimerasa ayuda
El primer factor de transcripción que llega es el TFIID, que tiene a la TBP (proteína de unión
a la caja TATA) acoplada, el TBP le permite al TFIID reconocer la caja TATA en -25
TFIID es un RNA mensajero
fi
La caja TATA nos indica cual gen hay que expresar
TBP: TATA binding protein
● Es un modelo de transcripción escalonado debido a que van llegando más factores
Luego llega el segundo factor de la transcripción que es el TFIIB que se encarga del
reconocimiento de la secuencia -35 y le brinda estabilidad a la unión de TFIID, DNA y los
demás factores de transcripción que llegan
El tercer factor de transcripción que llega es el TFIIF que se encarga de regular a la RNA
polimerasa II y llevarla al sitio donde se da el proceso transcripcional
Luego llega el cuarto facto de transcricion que es el TFIIE que se encarga de brindar
estabilidad al complejo de inicio transcripcional incluyendo a la RNA polimerasa I
Finalmente llega al quinto factor de transcripción que se encarga de romper los puentes de
hidrogeno en la doble hélice del DNA para que la RNA polimerasa II identi que al nucleotido
+1 para saber desde donde inicia el proceso transcripcional
Quedan cadenas sencillas
Los factores de transcripción son importantes únicamente durante el inicio de la transcripción
ya que luego se liberan para que la polimerasa actúe por si sola
El proceso transcripcional se da solo con la RNA polimerasa II que actúa por si sola
La polimerasa II actúa en un modelo escalonado a partir de la llegada de factores de
transcripción que la reclutan, reconocen al promotor, la ubican en el nucleotido +1, comienza
la transcripción y los factores se liberan — modelo escalonado de la transcripción
PROCESAMIENTO DEL RNAm
Los RNA necesitan mejoramientos post-transcripcionales para salir al citoplasma para que
puedan sintetizar proteínas y a su vez protegerse de la acción de la nucleasas. A este
mejoramiento se le llama procesamiento y se da a nivel nuclear.
Las modi caciones son 3:
1. Modi cación del extremo 5´: es la adición de una guanina metilada (CAP) al extremo 5´
teniendo una dirección 5´- 5´. Este enlace 5´- 5´no es reconocido por ninguna enzima,
ademas al metilarlo (poner grupos metilo) evita que la nucleasas reconozca y llegue al
extremo 5´ y también permite que se de el reconocimiento del punto inicial para los
ribosomas.
fi
fi
2. Adición de una cola Poli - A: es la adición de 50 a 200 nucleotidos de adenina en el
extremo 3´ por la acción de la poli-a (poliadenilacion). La RNA polimerasa A hace la
poliadenilacion, es decir, pega muchas adeninas en el extremo 3´ que son degradadas por
nucleasas sin llegar al mensaje genético. Determina la vida media del RNAm, en promedio
es decir 30 min.
3. Eliminación de intrones y empalme de exones (splicing): es el corte de intrones (los
intrones son secciones no codi cantes para la síntesis de proteína, no tienen info útil) y el
empalme de exones (son secciones codi cantes para la síntesis de proteinas, si tiene info
útil), este proceso esta mediado por los RNAs ya que tienen la capacidad de actuar como
ribosinas, esto hace que los RNAs largos que se encuentran en el núcleo, salgan al
citoplasma como RNAs pequeños.
Procesamiento del RNAm:
Hay 20.000 genes (actualmente), y estos no sintetizan las 100.000 proteinas (es una relación
de producción 1 a 1). El resto de las proteínas salen de los intrones durante la eliminacion de
intrones
fi
fi
Función de la tropomiosina: la contracción muscular requiere de miosina, actina,
tropomiosina y troponina también que el calcio se libere del retículo sacro plásmico y se una
a la tropomiosina para que la troponina se desplace lo que conlleva a que las cabezas de
miosina con función ATPasa transductores conviertan la energía química en energía cinética
y muevan los lamentos de actina.
— Hay diferentes formas de tropomiosina como la tropomiosina que se sintetiza a partir
del exon 1, 2 y 4 para el movimiento involuntario embrionario o la tropomiosina que se
sintetiza a partir de todos los exones (1, 2, 3 y 4). Estas son isoformas diferentes
SPLICING ALTERNATIVO DEL RNAm:
Permite entender la presencia de diferentes isoformas de una misma proteína. Nos permite
hacer diferentes combinaciones de los exones que permiten formar diferentes isoformas
proteicas
Un mal splicing puede generar la aparición de enfermedades
fi
MIOTONIA EN BÚFALOS MURRAH DE AGUA:
Esta enfermedad consiste en que cuando el mm se contrae luego no se puede relajar, por lo
que el mm está permanentemente contraído implicando un alto desgaste energético del
animal. El músculo para contraerse requiere de la liberación de calcio del retículo
sarcoplasmico, el calcio se une a la troponina se desplaza la tropomiosina y se da la
contracción muscular y para que el músculo se relaje se requiere que el calcio vuelva al
retículo sarcoplasmico o que salga de la célula a través de un transporte sin portador que
permite la salida de calcio y la entrada de calcio
Esto es uña enfermedad que es producto de una mutación en el gen del canal de cloro
dependiente de voltaje del músculo esquelético (CLCN1). Esta mutación es un producto de
un splicing aberrante que impide la salida del calcio o el regreso del calcio al retículo
sarcoplasmico, por lo que permanece unido a la troponina generando la contracción
permanente en el animal.
Este splicing aberrante se da por un mal splicing entre el exon 3 y el 4 para eliminar el intron
3, en la secuencia de nucleotidos nales del exon 3 se genera una mutación donde hay un
cambio de citocina por timina que conlleva a que los RNA nucleares no reconozcan la
terminación del exon y el inicio del intron por lo que el splicing se dará de manera aberrante
generando una perdida de 43 nucleotidos del exon 3 por lo que en la traducción (síntesis de
proteinas) van a faltar 14 aminoácidos en la proteína que está implicada con el ingreso del
cloro y la salida del cloro
fi
VACUNAS:
Ya existen vacunas de tipo RNA que es mas segura y de fácil producción
Estas vacunas insertan RNAm viral que codi can de la cápsula viral para generar los
anticuerpos sin tener que lidiar con todo el virus
Pero este RNAm viral debe ser transformado por medio de las modi caciones post
transcripcionales
Se debe transformar el extremo 5´ por medio de la adición de 1 cap, una guanina metilada
para que sirva de sitio de reconocimiento para los ribosomas y se transforma el extremo 3´
agregándole la cola Poly-A para que el RNAm viral se convierta en eucariote (No requiere
splicing por ser viral)
Se inyecta en el organismo y durante los procesos transcripcionales la célula del organismo
comenzara a codi car para la proteína viral y generara anticuerpos en contra del virus
SPLICING ABERRANTE EN EL EXTREMO 5´A 3´:
Si hay un splicing aberrante en el extremo 5´ puede ocurrir que tras el proceso
transcripcional el RNAm no tendrá la guanina metilada por lo que al salir al citoplasma será
degradado fácilmente por las nucleasas lo que impide que el ribosoma identi que el extremo
5´afectando la traducción
● El hongo amanita phalloides es la causa más común de envenenamiento ya que produce
una sustancia (alpha amanita) que bloquea/inhibe a la RNA polimerasa II, lo que impide
la transcripción y traducción del RNA
fi
fi
RNA POLIMERASA I:
Se encarga de sintetizar un solo transcripto primario (el precursor grande de RNA
ribosomico). El transcripto primario del RNA ribosomal que ella sintetiza es muy grande (45s)
y en el núcleo se da un procesamiento, es decir, unas modi caciones post transcripcionales
para que a partir del transcripto primario 45s se sinteticen los 3 principales RNA ribosomales
sintetizados por la RNA polimerasa I que son 18s, 5,8s y 28s siendo el 28s el mas grande.
Estos RNAr no necesitan de las guaninas metiladas ni de las cadenas poli A ya que ellos en
el nucleolo se van a unir con proteinas para formar a los ribosomas
Al RNAr 18s que se encuentra haciendo parte de la
subunidad pequeña (40s) del ribosoma y el RNAr 28s
y el 5,8s se unen con proteínas para formar la subunidad
mayor (60s) del ribosoma
Cuando salen al citoplasma ya son parte de los
ribosomas, ya están unidas a proteinas por lo que quedan
protegidos contra la acción de las nucleasas
● 5s: es sintetizado por la RNA polimerasa III
La RNA polimerasa I no tiene la capacidad de identi car al promotor por lo que usa factores
de transcricpcion, el primer factor de transcripción que llega es el UBF o upstream binding
factor el cual se encarga de unirse a las secuencias promotoras basales, y el segundo factor
de transcripción que llega es el Sl1 o selecting factor (TBP) que se encarga de hacer que se
una la RNA polimerasa I y comience la transcripción
fi
RNA polimerasa III
Se encarga de sintetizar a RNA pequeños y a los genes que codi ca esta polimerasa se
denominan ICR, es decir, que son regiones internas de control, esto porque los promotores
están en la región estructural del gen, por lo que se encuentran corriente abajo
Hay 3 tipos de promotores transcriptos por la RNA polimerasa III y este proceso esta
mediado por 3 factores de transcripción que reconocen 3 regiones internos de control o
CAJAS
La primera CAJA es la CAJA B que es reconocida por el factor de transcripción TFIIIC y da
como resultado la síntesis de los transcriptos de RNA de transferencia. La segunda CAJA es
la CAJA C la cual es reconocida por el factor de transcripción TFIIIA para favorecer la
expresión del RNAr 5s. Y la ultima CAJA es la CAJA A que es reconocida por el factor
transcripcional TFIIIB para sintetizar pequeños RNA que pueden ser citoplasmáticos o
nucleares
● Las CAJA se encuentran dentro de la región estructural
Traduccion o sintesis de proteinas
proteinas:
En procariotas el DNA tiene una singularidad y es que la transcripción y la traducción son
simultáneas, implica que los RNA mensajeros no tengan que ser modi cados como en los
eucariotas. Esto me va protegiendo los extremos del RNA evitando que se degraden por las
nucleasas. No tiene núcleo entonces los procesos se dan simultáneamente
En los eucariotes la replicacion y los procesos de reparación se dan dentro del núcleo. La
traducción se da en el citoplasma en 2 sitios; a través de ribosomas libres o a través de
ribosomas adheridos al RER (acá se sintetizan un gran numero de proteinas)
Como el RNA viaja del núcleo al citoplasma si necesita modi caciones porque va ligero de
equipaje
Código genético: pautas que rigen la transferencia de la información contenida en el RNAm
para la síntesis de proteinas DNA
·
replicación
DNA
· V
>
RNAs
-
Traducción
<
proteinaS
ad
I
Transcripcion
Características del código genético
Para que la información pueda ser leída por el RNA esta va a ser organizada en tripletas, el
código genético los organiza en tripletas (cada 3 nucleotidos se llaman codones)
1. AUG va a ser el codon de inicio siempre, síntesis de proteinas empieza por AUG pauta
como Codon de inicio
2. 3 codones de terminación UAA, UAG y UGA, cuando se lleguen a estos termina la
síntesis de proteinas
3. El código genético es degenerado; tenemos 64 posibles codones (4 a la 3). 20 aa
proteicos. A esos 64 posibles codones le restamos 3 ya que los que son de parada no
me codi can para nucleotidos. 61 codones y 20 aa (relación 3:1)
siu
3
codon (3nt)
43 =
4x4x4 = 64 -
3 =
6161 nudeotidos
relación 61 : 20
3 : 1
fi
Leucina 4 parejas
La metionina solo 1 pareja (AUG)
Fenilalanina tiene solo 2
EJERCICIO 1:
5´ CTATGGCATCATAACG 3´ — CADENA CODIFICANTE
Resuelva: cual es
● molde
● RNAm
● proteina
Solución:
Molde: 3´ GATACCGTAGTATTGC 5´ ——— Acá es: C con G y T con A
< RNAm
RNAm: 5´ CUAUGGCAUCAUAACG 3´ ——— Acá es: G con C, A con U, T con A y C con G
Inicio Ala
Ser Stop > proteinas
>
No es un ad , es un codón de parada
El RNAm y codi cante son lo mismo excepto por la timina (T) que se cambia por el uracilo
(U)
● El código genético se lee siempre 5´ - 3´ y se busca el codon de inicio en el RNAm
EJERCICIO 2:
3´ GAATACTACGGTACG 5´ — CADENA CODIFICANTE
● Molde: 5´ CTTATGATGCCATGC 3´
● RNAm: 3´ GAAUACUACGGUACG 5´
Stop ser Ala Met
.
[
Siempre leo en dirección 5'-3
Acá me ponen la cadena codi cante al revés, entonces hay que leer de derecha a izquierda
fi
fi
CLASE 10/03/25
Características del RNA de transferencia:
● Tiene una sola cadena de DNA que adquiere una estructura tridimensional en forma de
trébol que protege la degradación de las nucleasas en el citoplasma
● En esa estructura va a haber unas lupas que protegen aun mas de la degradación de
nucleasas, acá encontramos nucleotidos modi cados
● La lupa D contiene a la dihidrouridina (D), metilguanosina (mG) y guaninas metiladas
(m2G=2 grupos metilo), la lupa TYCG que contiene a la timina T y a la pseudouridina (Y)
y la lupa anticodon que contiene a la inocina (I), metilinosina (ml) y a la pseudourdina (Y),
todos estos nucleotidos modi cados con el n de evitar la degradación
● En el extremo 3 prima los aa van a transferir aminoácidos al ribosoma
RNA ribosomales en procariotas y eucariotas:
Son degradados por las nucleasas ya que se ensamblan directamente en el ribosoma
● Los ribosomas procariotas están formados por diferentes RNAr como el 165, 235 y el
5S mientras que los eucariotes están formados por diferentes RNAr como el 185, 285,
5,8s y el 5S
● Los ribosomas procariotas se conforman de la combinación del RNA 23s + 5S + 2l
proteínas diferentes para rmar la subunidad mayor (50s) y la subunidad menor (30) se
compone de RNA 16s + 21 proteinas diferentes y cuando se ensamblan se para el
proceso de traducción y el ribosoma completo es de 70s
fi
fi
fi
fi
● Los ribosomas eucariotes se conforman de la combinación del RNA 28s + 5,8s + 5s + S1
proteinas diferentes para formar la subunidad mayor (60s) y la subunidad menor (40s) se
compone de RNA 18s + 33 proteinas diferentes y cuando se ensamblan se para el
proceso de traducción. El ribosoma completo es de 80s
CARACTERÍSTICAS DE LA TRADUCCION:
ELEMENTOS DE LA TRADUCCIÓN
● RNAm con sus codones: donde están las instrucciones para la traducción
● Ribosoma con sus subunidades
● Factores proteicos de inicio, elongacion y terminación
Estados de la traducción:
Tiene un inicio, elongacion y traducción
Factores de traducción:
Ya que es uno de los procesos celulares que mas genera gasto de energía se tiene que
apoyar en unos factores durante su inicio, elongacion y terminación
INICIO DE LA TRADUCCION:
Un RNAm grande, muchos AUG pero el que me permite dar inicio tiene una secuencia de
nucleotidos llamado Shine-delgarno cerca al extremo 5 prima, hay complementariedad de
nucleotidos lo que hace que la cadena RNAr pueda reconocer el AUG de inicio
En procariotas hay una secuencia llamada kozak que también reconoce el AUG de inicio
En procariotas se inicia dirección 5´ - 3´ y el ribosoma reconoce a la región Shine delagarno
que es complementario al RNAr 16s
Pasos de la traducción en eucariotes:
1. En los eucariotes los ribosomas llegan por el Cap o por el reconocimiento de la
secuencia de kozak cuando no hay cap, esta secuencia está en el extremo 5 prima UTR
y es una secuencia complementaria con el RNAr 18s
2. El RNAt se une al codon inicial (AUG) por medio del anticodon (UAC) cargado de
metionina junto con la subunidad menor (40s)
3. Se ensambla la subunidad mayor (60s) formando el ribosoma funcional formando 3
regiones/sitios que son el sitio A, P y E :
Elongacion de la traducción:
1. Sitio A: es el sitio aminoacilo, que es el sitio de inicio de todos los RNAt menos el primero
que llega directamente al sitio P
2. Sitio P: es el sitio peptidilo que es el sitio donde se da la formación del enlace peptidico
entre cada aminoácido
3. Sitio E: es el sitio exit que es el sitio de salida de cada RNAt
Llega el RNAt por lo tanto el RNAt se trasloca y se suelta saliendo nuevamente hacia el
citoplasma y este proceso se repite varias veces
Terminación de la traduccion:
La terminación se da cuando llegamos a un codon stop o de parada, y como estos ya no
codi can para ningún aminoácido son reconocidos por un factor de terminación / liberación
que llega al sitio A y se liberan las proteinas y se desensambla el ribosoma
● Los factores de terminación son proteinas
La proteína titán que participa en la contracción muscular es la proteína mas grande de los
mamíferos en 25.000 aa, muchas hélices alpha de leucina
fi
Polisomas/poliribosomas:
Son estructuras que para ahorrar energía, son RNAm
que son leídos por varios ribosomas para obtener
muchas copias de 1 proteína
DIFERENCIAS ENTRE PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS:
En el proceso de la traduccion no hay muchas
diferencias, las principales son que en los
procariotas tienen la secuencia Shine-delgarno
y en eucariotes la secuencia kozak, que el
primer aa en procariotas es metionina
modi cada y en eucariotas es la metionina
normal y la gran diferencia va en que los
RNAm leídos por los procariotas son policistronicos
(varios codones de inicio y de parada) y los RNAm
en eucariotas son monocistonicos (1 codon de
inicio y 1 de parada)
fi