ADN

Naturaleza Química del

Material Hereditario
 La Lógica Química de la Vida

• Todas las propiedades de los organismos vivos resultan

de las propiedades de las proteínas que contienen.
• Las propiedades que posee una proteína dada, resulta de
la secuencia de sus aminoácidos.
• La secuencia de aminoácidos de una proteína, está
determinada por la secuencia de nucleótidos de los ácidos
nucleicos.
• Los ácidos nucleicos constituyen el material hereditario
que cada organismo pasa a la siguiente generación y es el
mismo en todos los organismos.
 Historia del ADN

Puede dividirse en 3 períodos:

1) 1869 – 1943 :
Cuando Weismann emitió teoría plasma germinal
No sólo

Promulgó que se sino Debía tener una composición

transmitía intacto a la química y estructura
siguiente generación molecular definida

Miescher: 1871 nucleína en núcleo leucocitos de

pus y de esperma de salmón
Se demostró que esta sustancia constaba de
ADN y CHON Cuatro nucleótidos
 En 1884, Hertwig, estudió evolución de los cromosomas
en la fecundación.
En 1887, Weissmann propone que en la meiosis hay una
división que reduce el ADN.
En 1914, Feulgen: descubrió una técnica para teñir ADN.
Zacharías descubrió que los cromosomas eran teñidos por
la misma sustancia que teñía la nucleína.
En 1889, Alttman acuñó el término ácido nucleico.
En 1902, Sutton, (USA), y Boveri, en (RDA), observaron
un paralelismo entre la herencia de los factores
hereditarios y el comportamiento de los cromosomas
durante la meiosis y la fecundación, deduciendo que los
factores hereditarios residían en los cromosomas.
 Los trabajos de Morgan a principios del
siglo XX: Teoría Cromosómica de la
Herencia, según la cual son los
cromosomas (y los genes contenidos en
ellos) los que se heredan.

el núcleo y más concretamente los

cromosomas son la sede físico química
de la herencia

En 1909, Johannsen designó “el factor hereditario”

de Mendel con el término gen.
 Wilson asoció a Weismann y Miescher: la nucleína es
el material genético de la cromatina: No creíble por
inestabilidad del ADN.
En 1920, Phoebus Levene:
- Descubrió que estaba presente 2’ desoxirribosa
- Hizo pensar que el ADN era un polímero repetitivo
de 4 nucleótidos en secuencia fijada: teoría del
tetranucleótido
ATCGATCGATCGATCGATCGATCG...
TACGTACGTACGTACGTACGTACG... 44 = 256
CGTA CGTA CGTA CGTA CGTA CGTA…
¿Cómo podría ser entonces expresada la
complejidad de los genes usando una capacidad de
información tan limitada?

Chargaff la proporción de cada base en el DNA

debería estar cerca del 25%.
A través de cromatografía esperó encontrar en todas
las muestras de ADN, cantidades similares de A,T,C,G
A-G bacilo Koch: 0,4 A = T
A-G humano: 1,54 C = G
2) 1944 – 1960:

Avery: ADN es la sustancia genética y se aceptó que

era algo más que la repetición de un tetranucleótido.
Bouvin & Vendrely, Mirsky & Ríos: en 1948 demostraron
que su concentración era igual en todas las células de un
individuo y en todos los individuos de la misma sp.
Hershey & Chase: Se inyecta ADN y no CHON
ADN dirige su propia replicación y la síntesis de las
CHON.
Watson & Crick: estructura secundaria del ADN. R, T, T.
 Cantidad de ADN (ugx10-6)
Eritrocito Hepatocito Espermatozoide
Sábalo 1,97 2,01 0,91
Carpa 3,49 3,33 1,64
Trucha 5,79 -.- 2,67
Rana 15,00 15,70 -.-
Sapo 7,33 -.- 3,70

La Teoría cromosómica descendió a nivel molecular:

ADN componente más característico de los
cromosomas, constituye el soporte molecular de
los factores hereditarios
• ADN cumple con dos funciones:
a) Transportar: ADN ARN CHON
b) Dirigir su propia replicación
Dogma Central de la Biología Molecular
 Fue sorpresivo encontrar ADN en el pneumococco,
aunque ya había sido reconocido como material genético
de los eucariotes

Proporcionaron una idea unificadora de la base

de la herencia entre eucariotas y procariotas

“ Si estamos en lo cierto, significa que los

AN son importantes no sólo a nivel
estructural, sino que son sustancias
Avery dijo
fundamentalmente activas en la
determinación de las actividades
bioquímicas y de las características
específicas de la célula. Por medio de ella
es posible inducir de manera predecible
cambios heredables en las células.”
3) 1960 a adelante :

 Conceptos afirmados
 ADN se modifica, analiza y sintetiza
 Se vislumbra su dinamismo metabólico
 Se transporta de un organismo a otro: OGM
 Es transcripto en reverso: ADNc
 Ejerce función en mitocondrias y cloroplastos:
ADNm
 Evidencias
Directas
Fenómeno de la transformación: Griffith in vivo,
Dawson in vitro. Alloway trabajó con extractos
crudos de células.
Avery, Mc Leod, Mc Carty. Taylor (ER)
Exp. Bacteriófago marcado
Exp. Virus mosaico tabaco
Estudios ADN recombinante
Indirectas

Distribución del ADN: ADN abunda en núcleo

Relación entre cantidad de ADN y dosis génica
ADN metabólicamente estable
Relación entre espectro de absorción de ADN y
actividad mutagénica de los UV mx acción
mutagénica: 260 nm
 Experiencia de Griffith

S. pneumoniae: 3 tipos I, II, II

L: S R:R

Normalmente en un ratón nunca se presentaban las

tres cepas juntas, es más un ratón sólo era
vulnerable a uno de los 3 tipos
Experiencia del bacteriófago marcado: Hershey & Chase
(1952)
Requisitos que debe de cumplir una molécula hereditaria

Las moléculas hereditarias deben poseer una estructura tal

que permita los siguientes hechos:
 Contener información biológica útil y que se transmita en
forma estable.
 Que su replicación permita el paso sin variación de la
información de célula a célula y de generación en generación.
 Que sea capaz de expresarse en la forma biológicamente
más ahorrativa en la síntesis de CHON. Es decir, que la
traducción de su mensaje se haga por mecanismos sencillos.
Deben de ser capaces de variación ocasional, lo que
obedece a la necesidad biológica de la evolución, con la
producción de nuevos genotipos, sobre los cuales pueda
actuar la SN. Es decir permite la mutación y la
recombinación.
Desde que consideraron al ADN como material
genético consideraron las siguientes funciones
principales
Almacén de la información: Debe contener
registro grabado de instrucciones que determinan
todas las características heredables
Secuencias AA
Replicación y herencia: Información para síntesis
de nuevas cadenas ADN transmite a nuevas
células.
Expresión material genético: Director de la
actividad celular. La información debe usarse par
dirigir el orden por medio del cual los AA se
incorporan dentro de una cadena peptídica.
Los Acidos Nucleicos

 Son moléculas formadas

por la unión de un
azúcar, una pentosa, una
Glucosídic
base nitrogenada y un
grupo fosfato.
 Los Ácidos Nucléicos
(DNA y RNA) son
formados por varias
cadenas de nucleótidos
(polinucleótidos).
 Bases Nitrogenadas
pirimidina imidazol
NH2 O

H
NH2
 O NH2 O

CH3

O O O
 Azúcar

5’

4’ 1’

2’
3’
Radical Fosfato
 Base nitrogenada Azúcar

Nucleósido

Nucleósido Radical fosfato

Nucleótido

Nucleótido Nucleótido Nucleótido Nucleótido ... = AN

 Desoxirribosa
ADN
Adenina, guanina, citosina, timina
Radical fosfato

Ribosa
ARN
Adenina, guanina, citosina, uracilo
Radical fosfato

• En el ARNt ya se confirma la existencia de

ribotimilato
• En el DNA fagos hay uracilo
 ¿ Por qué T en ADN y U en ARN ?

CTTTGGAATTCC CTTTGGAATTCC
GAAACCTTAAGG GAAACCUTAAGG
desaminación
Reconvierten la U en C
U
Reconocido por
T es considerado como un maquinaria de
estandarte: es T y no U en el ADN reparación

C U U U G G A A T T C C
El ARN no se beneficia
con la maquinaria de
C U U U G G A A T T C U reparación
 Propiedades de las bases nitrogenadas

a) Tautomería: Reacciones intramoleculares que

determinan un equilibrio entre isómeros con
diferencias en sus enlaces. Los tautómeros
preferentes determinan el apareamiento de bases
que se observa en el DNA.
Son dos las formas: lactama y lactima. Bajo las
condiciones de pH y temperatura el equilibrio está
casi totalmente desplazado a lactama, amino,
amida interna o forma ceto, en lugar de lactima,
imino, imida interna o forma enol.
 C4 de la C
NH2 y no NH
Los átomos de N
C6 de la A amino imino

C6 de la G
Los átomos de O C=O y no C-OH

ceto enol
C4 de la T
b) Rotación en torno al
enlace glucosídico
En nucleótidos las dos
conformaciones se
interconvierten. La rotación
en torno al enlace glucosídico
(entre la pentosa y la base)
determina 2 conformaciones:
- Sin: la base sobre la
pentosa. Lo puede tener G
- Anti: La base hacia fuera.
Predomina en nucleótidos de
pirimidina y en los ácidos
nucleicos.
Estructura del ADN: Primaria

En un monucleótido, el grupo
fosfato es un éster fosfórico
primario, lo que quiere decir que
posee un solo enlace éster. En el
dinucleótido se forma el enlace
fosfodiéster, es decir el fosfato
está unido a dos grupos.
 El dinucleótido
formado es 3’ – 5’
secuencia fosfodiéster. Se
pueden seguir
añadiendo más
nucleótidos,
estableciéndose un
esqueleto: azúcar –
fosfato – azúcar,
con una base unida
a cada azúcar en su
posición 1’.
esqueleto
La información
codificada radica
en la secuencia de
las BN
 Fosfonucleótido 5’

Fosfonucleótido 3’
• El grupo fosfato
es vulnerable a la
ruptura química o
enzimática
¿Por qué desoxirribosa y no ribosa?
La presencia de un grupo
OH en posición 2’ de la
ribosa, hace que el
polinucleótido sea menos
estable: el OH se
encuentra adecuadamente
situado para atacar el P en
presencia de iones OH - ,
causando la rotura de la
unión fosfodiéster y
formar un enlace cíclico 2’,
3’.
ARN es 100 veces más
inestable
 Estructura Secundaria

Modelo propuesto por Watson y Crick en 1953.

Son dos hebras antiparalelas, en forma de hélice, que se
mantienen unidas por el apareamiento complementario de
las bases:
A –T y C- G

2 3
 Espectro de difracción de
Rosalin Franklin rayos X: Wilkins y Franklin

• L. Pauling (Caltech)
• [Link] y [Link] (Londres)
• [Link] y [Link] (Cambridge)
 Dos largas cadenas polinucleotídicas enrolladas en un eje
central, formando una doble hélice dextrógira.
cadenas antiparalelas
Las bases yacen formando estructuras planas, apiladas,
perpendiculares al eje, separadas 3,4Aº
Bases apareadas
º
Cada vuelta 34A
En cualquier segmento se distingue surco mayor y menor
º
Mide 20 A de diámetro.
Primer reporte: El emparejamiento sugiere por sí mismo un
posible mecanismo de copia.
Segundo reporte: Sugieren el modelo semiconservativo,
almacenaje de información en la secuencia, mutación por
alteración de bases.
James Watson y Francis Crick
 Para determinar la estructura tridimensional o disposición
espacial de las moléculas de ADN, se hace incidir un haz de rayos
X sobre fibras de ADN y se recoge la difracción de los rayos
sobre una película fotográfica. La película se impresiona en
aquellos puntos donde inciden los rayos X, produciendo al
revelarse, manchas. El ángulo de difracción presentado por cada
una de las manchas en la película suministra información sobre la
posición en la molécula de ADN de cada átomo o grupo de átomos.
Mediante esta técnica de difracción de rayos X se obtuvieron los
siguientes resultados:
 Las bases púricas y pirimidínicas se encuentran unas sobre
otras, apiladas a lo largo del eje del polinucleótido a una distancia
de 3,4 Las bases son estructuras planas orientadas de forma
perpendicular al eje (Astbury, 1947).
 El diámetro del polinucleótido es de 20 A y está enrollado
helicoidalmente alrededor de su eje. Cada 34 A se produce una
vuelta completa de la hélice.
 Existe más de una cadena polinucleotídica enrollada
helicoidalmente (Wilkins et al. 1953, Frankling y Gosling, 1953).
Regla de la Equivalencia
El modelo secundario descrito requiere cantidades
equivalentes de A y T y de C y G.
Demostrado por Chargaff por cromatografía antes
que Watson y Crick propusieran el modelo:

A/T y C/G = 1 A/G y C/T = 1

A+G = C+ T

En contraste con la universalidad de la

equivalencia y complementariedad, la
proporción A + T/ G+C varía
enormemente de una especie a otra:
1,5 hombre; 0,9 E. coli
Erwin Chargaff
A–T T–A
A–T 4/4 = 1 2/2 = 1 G–C 1/1 = 1 5/5 = 1
6=6 6=6
C–G G–C
T–A 4/2 = 2 2/4 = 0,5 C- G 1/5 = 0,2 5/1 = 5

A–T C–G
G-C 33,3 % G-C 83,3 %

Con el mismo significado se usa la proporción

G+C/total de bases o %G-C, característico de cada
especie
Procedencia del ADN A G C T
Timo de Bovino 28,2 21,5 21,2 27,8
Esperma de bovino 28,7 22,2 20,7 27,3
Germen de trigo 27,3 22,7 16,8 27,1
Saccharomyces 31,3 18,7 17,1 32,9
Escherichia coli 26,0 24,9 25,2 23,9
Mycobacterium tuberculosis 15,1 34,9 35,4 14,6
ØX174 24,3 24,5 18,2 32,3
T3 23,7 26,2 27,7 23,5
T5 30,3 19,5 19,5 30,8
T7 32,4 18,3 32,4
Virus ARN A G C U
Mosaico del tabaco (TMV) 29,8 25,4 18,5 26,3
Mosaico amarillo nabo 22,6 17,2 38,0 22,2
Poliomielitis 28,6 24,0 22,0 25,4
 A+T/G+C
Organismo Tejido

Escherichia coli - 1,00

Diplococcus pneumoniae - 1,59
Mycobacterium tuberculosis - 0,42
Levadura - 1,79
Paracentrolus lividus (erizo
Esperma 1,85
mar)
Arenque Esperma 1,23

Rata Médula ósea 1,33

Hombre Timo 1,52

Hombre Hígado 1,53
Hombre Esperma 1,52
Orientación de 5 ’ 3’

las hebras

Una hebra se
orienta en
sentido 5’ – 3’
y la otra en
sentido 3’ – 5’, Diapositiva 69
es decir son
antiparalelas

3’ 5 ’
 Resumen de las características del modelo

• Las dos hebras son helicoidales

• La doble hélice tiene un diámetro de 20 A
• La doble hélice da un giro completo cada 34 A hacia la
derecha: dextrógira
• La distancia entre dos nucleótidos sucesivos es de 3,4 A,
es decir en una vuelta hay 10 nucleótidos.
• Las dos hebras son antiparalelas
• Las dos hebras giran en hélice, una alrededor de la otra,
enlazándose mediante puentes H en la parte central
• Hay un apilamiento de bases que estabilizan la estructura
helicoidal, que puede ser mucho más fuerte que la que
establece los puentes H entre las dos cadenas.
 Consecuencias de la doble
hélice

 Estructura de doble hélice: estabilidad

 Inexistencia de restricciones respecto a la secuencia de
bases de su estructura primaria: útil como molécula informativa
Un gen = 1000 pb promedio 41000 número
de combinaciones
 Estructura doble: replicación exacta
 Complementariedad: replicación, transcripción y traducción.
 Los cambios ocasionales de unas bases por otras: mutaciones
 Intercambio de segmentos entre cromátidas hermanas:
recombinación
 Tipos de ADN
nº de nucleotidos
TIPO DE ADN GIRO DE HELICE nm por Vuelta Plano entre bases
por vuelta
A Dextrógiro 2.8 inclinado 11
B Dextrógiro 3.4 perpendicular 10
Z Levógiro 4.5 zig-zag 12
 Estructura Terciaria
Se refiere a como se almacena el
ADN en un volumen reducido.
Varía según se trate de
organismos procariotes o
eucariotes:
a) En procariontes se pliega como una
super-hélice en forma,
generalmente, circular y asociada
a una pequeña cantidad de
proteínas, no histonas. Lo mismo
ocurre en las mitocondrias y en los
plastos.
b) En los eucariotas está unido a
proteínas del tipo histonas,
constituyendo la cromatina
 Propiedades del ADN
1. Tamaño y peso molecular: Se utilizan unidades
moleculares: nanómetros y amstrong
Para el PM se utiliza el dalton:
1 d = masa de 1 átomo de H = 1,66 x 10 –24 g

1 vuelta 34 A 10 pb
10000 X
X = 2491 pb = 3000 = 2 x 106d

Así, si se determina el PM se puede calcular indirectamente

la longitud y su contenido genético
Genoma más pequeño: 1,7 ( 5 a 10 genes)
Hombre: 1,6 a 8,2 cm: 48 a 240 megabases
2. Propiedades Físicas y Químicas
a) Absorbancia: Mide la concentración del ADN en
función de la cantidad de luz de una determinada
longitud de onda que es absorbida por las moléculas
en la solución. La molécula duplexa presenta menor
absorbancia. Se puede calcular la pureza de la
solución con la proporción 260/280. La absorbancia
de un mol de ADN es de un 35 a 40% al valor
calculado de la absorbancia de las bases que la
componen: efecto hipocrómico
Bases nitrogenadas Absorción máxima 260 nm
Proteínas Absorción máxima 280 nm

A260 A260
DNA = 1,8 RNA = 2,0
A280 A280
b) Interacciones Iónicas: Debido a la presencia del gran
número de fosfatos hacia su superficie, el ADN se comporta
como un fuerte polianión: permite reaccionar con moléculas
positivas
c) Viscosidad: Es directamente proporcional a la resistencia de
sus componentes a flotar:
- ADN duplexo: fuertemente viscoso
d) Sedimentación en centrifugación: Se usa para separar ácidos
nucleicos. Hay dos técnicas:
• Por equilibrio de sedimentación o en gradiente de densidad
preformada: La posición del ADN en el tubo depende del
tiempo de exposición y del tamaño de la molécula
• Por velocidad de
sedimentación: Cuando la
concentración de ClCs es la
misma en todo el tubo, las
moléculas de ADN se separan
en la base de su propia
densidad relativa, que no
depende sólo de su tamaño
sino de su conformación.
Importante para obtener
riqueza en pares GC.
El ADN duplexo con mayor GC
se va más al fondo que el que
tiene más AT en igualdad de
tamaño
e) Desnaturalización – renaturalización: Marmur y
Dotty demostraron que incrementando lentamente
la Tº, el ADN pierde su naturaleza duplexa: fusión.
La dinámica de la desnaturación se midió a través de
la absorbancia: efecto hipercrómico
Existe un Tm: Tº fusión: largo y secuencia
Tm de desnaturalización
Relación entre el Tm y la cantidad de
pares GC
 El Tm del DNA
Tm es usado en PCR.
4 (G+C) + 2 (A+T) Si bien no es un
diagnóstico en la
TTCGAACGCCAGCAGTACGCAG prueba, sirve
para calcular Tº
4 (13) + 2 (9) = 70 apropiadas del
CCAACGTAGCTCTTGTGCGCATG protocolo.

4 (13) + 2 (10) = 72
Th
Menor – 4: 70 - 4 = 66ºC

Para secuencias mayores de 13 nuc

Tm= 64.9 +41*(yG+zC-16.4)/(wA+xT+yG+zC)

Cuando el ADN se enfría vuelve a recuperar su
estructura duplexa, si se lee a 260 nm baja la
absorbancia: efecto hipocrómico

La velocidad de renaturalización
del ADN de un organismo está
relacionada con su complejidad.
La complejidad se define como
la suma del número de
nucleótidos que tiene cada
tipo de secuencia sin tener en
cuenta el número de veces que
está repetida.
Tipo de Secuencia Nº de repeticiones Nº de nucleótidos

A (SU) 1 5.700

B (SU) 1 7.530

C (SBNC) 4 3.720

D (SBNC) 6 4.350

E (SR) 200 500

F (SAR) 10.000 300

G (SAR) 1.000.000 200

Complejidad 22.300
Hay que considerar sin embargo que la complejidad
está también relacionada con la homogeneidad del
ADN:
El ADN de los virus y las bacterias en su mayoría sólo
tiene secuencias que están una sola vez en el genoma
(secuencias únicas).
Los organismo más complejos, como los eucariontes,
presentan distintos tipos de secuencias en su genoma:
- Tienen secuencias únicas (SU cot ½ > 102),
secuencias de bajo número de copias (SBNC, 2-10
copias, valor Cot ½ entre 10-2 y 102), secuencias
repetidas (SR, alrededor de 102 copias) y altamente
repetidas (SAR, 103 a 106 copias, con valor cor ½ <
10-2).
Sin embargo la velocidad de renaturalización del ADN está
relacionada con el número de veces que està repetida una
determinada secuencia.
Supongamos que tenemos dos organismos hipotéticos

1.000.000 de pb 1 000 000

El organismo A posee 1.000 El organismo B tiene una secuencia
secuencias únicas diferentes, cada de 100 nucleótidos de longitud que
. una con una longitud media de está repetida 10.000 veces.
1.000 nucleótidos.

Si extraemos el ADN de estos dos organismos por separado,

se desnatura y las piezas de ADN desnaturalizado de c/u se
ponen en condiciones de renaturalizar es evidente que el
ADN del organismo B renaturalizará mucho antes, más
rápidamente, que el del organismo A, ya que es mucho más
probable que la secuencia que está repetida 10.000 veces
encuentre otra complementaria en el medio de reacción para
formar la doble hélice.
 La curva Cot
Método para estimar la heterogeneidad de secuencias de
una preparación de ADN, basado en la observación de que la
renaturalización de un ADN monocatenario acontecerá con
mayor facilidad (y por tanto más rápidamente) cuanto más
homogéneo sea el ADN.

Representa gráficamente la variación, a lo largo del tiempo,

del grado de renaturalización de una preparación que sólo
contiene hebras sencillas.

El cot (producto de la concentración inicial [co] por el

tiempo [t]) al que se ha renaturalizado la mitad del ADN es
el semi-cot, parámetro indicativo del grado de
heterogeneidad en una mezcla compleja y de la
complementariedad en una mezcla de dos moléculas de
ADN de una hebra
• Permiten estudiar la complejidad de los genomas.
En procariotas:
a) Determinan un único componente
b) el valor de Cot ½ estima la longitud del genoma

En eucariotas:
a) Determinan varios componentes y permiten
calcular la proporción del genoma ocupada por cada uno
de ellos
b) El valor de Cot ½ de cada componente estima su
complejidad cinética
La tasa de
reasociación es
inversamente
proporcional a
la longitud del Màs
lento
DNA
reasociable.

El Cot½ es
directamente
proporcional a
la complejidad

Curvas Cot de renaturación

Las cinéticas de
Fracción reasociada
reasociación del (1-C/Co)
DNA eucariótico
muestran tres tipos
de componentes
(indicados por las
áreas sombreadas).
las flechas
identifican los
valores de Cot ½
para cada
componente
Componente
Componente Componente Componente
rápido
rápido intermedio lento
% genoma
% genoma
Cot½
Cot½
Complejidad, pb
Complejidad, pb
Frecuencia de de
Frecuencia
repetición
repetición
f) Energía libre:( G) Su relación señala el grado de
estabilidad de la doble hebra. Es una constante
termodinámica que indica la cantidad de energía
consumida (+) o liberada (-) en una reacción. Se mide
Kcal/mol
Globalmente cuando se va a formar una estructura de
bases emparejadas, se libera energía y su estabilidad
está en esa capacidad para liberarla.
Se libera energía en cada par de bases que se forman.
g) Hibridación: Las técnicas de des y renaturalización se
utilizan para la hibridación de AN: una vez separadas las
dos hebras del ADN, se vuelve a formar una doble
hélice con otra hebra complementaria (hibridación de
ADN con ADN) o formar una doble hélice con un
segmento de ARN que contenga la secuencia
complementaria (hibridación de ADN con ARN).
Se puede identificar el gen que ha dado lugar a un determinado
ARNm. Si se aísla un mensajero determinado en una célula, es
posible hibridar este ARN con el ADN de la célula previamente
fragmentado mediante el uso de endonucleasas de restricción.
Las endonucleasas de restricción de tipo II son enzimas que
reconocen secuencias cortas de ADN (de 4 a 6 pares de bases) de
tipo palindrómico y cortan por el interior de la secuencia diana a
la misma altura en las dos hélices de ADN (corte simétrico) o a
distinto nivel en cada hélice (corte asimétrico).
i) Fluorescencia: El ADN no presenta fluorescencia
pero puede intercalarse sustancia como Br-Et, que
emite fluorescencia al iluminarse con UV.
j) Comportamiento en electroforesis: Depende del
gel: agarosa o PAGE
 METODOS DE ESTUDIO
ELECTROFORESIS
Separación de moléculas de DNA y RNA de distinto tamaño por
migración en un campo eléctrico.
Objetivos:
• Elaborar cariotipos moleculares.
• Conocer la ubicación de genes en cromosomas.
• Elaborar mapas físicos y genéticos.
• Elaborar mapas de restricción.
• Caracterizar, amplificar y secuenciar moléculas de DNA.
• Elaborar perfiles de DNA que permitan identificar a
individuos,diferenciar poblaciones, razas o especies.
• Perfiles de DNA de utilidad en el diagnóstico de
enfermedades genéticas e infecciosas.
•Terapia con drogas y/o terapia genética.
 Muestra DNA Preparación gel agarosa Instalación equipo electroforesis

Colocación muestra DNA Migración DNA

Longitud de fragmentos de DNA

Coloración de bandas DNA

Fotografía

EtBr
 Marcador (Estándar)

Tinción con
Bromuro de Etidio

Observación en un
transiluminador de
luz UV.
La electroforesis de
ácidos nucleicos en geles
de agarosa, permite
separar fragmentos de
DNA y determinar su
tamaño.
Sin embargo, esta
información no es
suficiente para saber en
cuál de los fragmentos se
encuentra un gen o
secuencia de DNA en
particular.
FISH
GISH