“…La sangre humana es un tejido conectivo líquido,

que cumple dos funciones principales: transporte y defensa.

El papel de la sangre en transportar oxígeno a las células y
dióxido de carbono a los pulmones, para la eliminación a
través de la respiración, es probablemente la función más
conocida. La sangre es también responsable del transporte
de alimentos en forma de glucosa, lípidos y aminoácidos
desde el canal alimentario a las células…”
¡ Para diferenciar la procedencia de la sangre
humana se tiene que observar su coloración
ya que la sangre arterial es de color rojo
claro, debido a que es la sangre oxigenada
que corre por el cuerpo, mientras que la
sangre venosa, es de color rojo oscuro
debido a que contiene CO2 y las toxinas de
nuestro organismo.
 • Suspensión Celular
ARISTA BIOLÓGICA • Plasma
• Entre 4,5 y 5,7 litros
• 8 a 9 % masa corporal

• Viscosidad
LA SANGRE ARISTA FÍSICA • Tensión Superficial
• Densidad Relativa

• Orientación
• Certeza
ARISTA QUÍMICA • Especie
• Grupo y Factor
• ADN
¡ Son reacciones que pueden realizarse
inclusive en el lugar del hecho.
¡ Utilizan poca cantidad de muestra, son
rápidas y económicas.
¡ Carecen de especificidad por lo que su valor
analítico es de orientación.
¡ Sirven para descartar muestras cuando las
reacciones, arrojan resultados negativos
¡ Son un grupo de reacciones químicas
colorimétricas, que buscan detectar las
peroxidadas de la sangre.
¡ Estas mismas enzimas se encuentran presentes
en los jugos de ciertas frutas y otras secreciones
biológicas como pus; en agentes fuertemente
oxidantes como el cobre y sus sales, los que
pueden arrojar resultados falsos positivos.
¡ Es por ello que los resultados positivos deban ser
corroborados por las reacciones de certeza.
¡ Muestra + 1 gota agua Oxigenada al 3 % + 1
gota de reactivo específico formado por 2 gr.
de fenolftaleína + 30 gr de potasa anhidra + 100
cc de agua destilada + 20 gr de polvo de zinc.

¡ Se considera resultado positivo si aparece una

coloración FUCSIA
¡ Muestra + 1 gota de reactivo preparado con 1
gr. de leucoverde de malaquita, disuelto en
100 cc de ácido acético + 150 cc de agua
destilada + peroxido de hidrograno al 3%.

¡ Se considera reacción positiva con la

aparición de una coloración VERDE
AZULADA
¡ 1 cc de macerado de la muestra + 1 cc de
tintura de guayaco + 2 o 3 gotas de esencia
de trementina.

¡ La reacción es positiva cuando aparece una

coloración verde pálido que vira al AZUL
¡ Si se agrega agua oxigenada de 20 volúmenes
a la muestra macerada, aparecen burbujas.

¡ Por la acción de gotas de amoníaco

agregadas a la muestra macerada, la solución
sanguínea no se altera, pero si en cambio no
existe la presencia de sangre, aparecen
coloraciones diversas.
¡ Están basadas en métodos físicos, químicos y/o
instrumentales, que tienen por objeto confirmar
la existencia de sangre, al evidenciar
componentes específicos y exclusivos de la
misma.
¡ Aquí la labor de perito requiere de conocimientos
específicos para lograr un buen manejo de
reactivos y equipos de laboratorio.
¡ Consiste en la observación microscópica
directa de los macerados de las manchas, en
la búsqueda de los elementos celulares de la
sangre.

¡ Los preparados pueden teñirse o no, con los

reactivos clásicos de tinciones (Giemsa o May
Grünwald – Giemsa).
¡ Preparar un macerado de la muestra (liquida,
coagulada o porciones de 1 cm2 de prendas u
otros soportes) con solución salina, evitando
diluir la muestra en exceso.

¡ Colocar una a dos gotas del macerado sobre

un portaobjeto, tapar con cubreobjeto y
observar al microscopio.
¡ Son técnicas microcristalográficas basadas en la
formación de cristales, derivados de la
hemoglobina que reacciona con reactivos
químicos específicos.
¡ Por ejemplo los cristales de clorhidrato de
hematina o de TEICHMAN, que se obtienen por
reacción en caliente del macerado el agregado de
ácido acético glacial, en presencia de una sal
halogenada (cloro).
¡ Si se utiliza una sal de bromo, o yodo, se formarán
los correspondientes cristales de bromhidrato o
yodhidrato de HEMATINA.
¡ Macerar la mancha en agua destilada hasta obtener
una solución visiblemente coloreada
¡ Concentrar el macerado gota a gota sobre un
portaobjetos colocado sobre plancha caliente a 60
ºC, evitando el calentamiento excesivo.
¡ Cubrir con cubreobjeto y añadir por capilaridad unas
gotas de ácido acético glacial.
¡ Calentar el preparado a la llama hasta que se inicie
la formación de burbujas, retirar dejar enfriar y
añadir de nuevo gotas de ácido acético glacial.
¡ Repetir la maniobra por lo menos tres veces.
¡ Observar al microscopio los cristales en forma de
prismas alargados aislados o agrupados de color
AMARILLO o PARDO
¡ Para obtener cristales de yodhidrato de
hematina se usa la misma técnica pero en vez
de ácido acético utilizar el reactivo formado
por 2 o 3 gotas de ácido yohídrico, 1 cc de
ácido acético glacial, 1 cc de alcohol de 96º y
1 cc de agua destilada.
¡ Se observará en caso positivo cristales
romboédricos de color CASTAÑO, que al
poco tiempo van tendiendo al NEGRO.
¡ Si deseo obtener cristales de bromhidrato de
hematina realizo un procedimiento es similar a
los anteriores, introduciendo una solución
bromurada entre el porta y cubre objeto y se
calienta sin llegar a la ebullición y agregar una
solución en partes iguales de alcohol, ácido
acético, glacial y se deja evaporar.
¡ En caso positivo se observará cristales similares
a los de Teichman pero de mayor tamaño y color
ROJO más oscuro, tendiendo al VIOLETA.
¡ Si deseo obtener cristales de Hemocromógeno
debo utilizar parte del macerado de la muestra y
ponerlo en contacto con el reactivo de
TAKAYAMA (3 ml de hidróxido de sodio al 10 % ,
+ 3ml de solución saturada de glucosa + 3 ml de
piridina y 10 ml de agua destilada.
¡ La técnica es similar a la descrita anteriormente
y los cristales obtenidos en caso positivo son
romboidales, a veces fusiformes o en forma de
hojas de helecho, pero todos de un color ROSA
INTENSO o ROJO ANARAJANDO
característico.
¡ Se pueden utilizar técnicas cromatográficas,
procediéndose a la identificación de la
hemoglobina por corrida en placa delgada,
contra patrones conocidos.
¡ Se realiza la corrida cromatográfica en sobre capa
delgada de silicagel, sembrando un macerado de
sangre hemolizada como testigo, como solvente
una mezcla de metanol, ácido acético y agua
dest. (90:3:7) y como revelador en primer término,
una solución acética de bencidina. No debe
aparecer coloración alguna. Luego de unos minutos
pulverizar con una solución al 3 % de agua
oxigenada, de reciente preparación. La
hemoglobina testigo aparecerá de color AZUL.
¡ Comparar con la coloración de la mancha en
estudio y constatar que la relación de frente sea la
misma.
¡ Utilizando espectroscopia se puede también
identificar la sangre por medio del espectro de
absorción de la hemoglobina y de alguno de sus
derivados, pues como es sabido, la longitud de
onda y la intensidad de las bandas de absorción
de los espectros respectivos caracterizan las
sustancias.
¡ Los principales espectros a investigar son los de
la oxihemoglobina, la hemoglobina, la
hematina alcalina, la carboxihemoglobina y el
hemocromógeno.
 Este método esta basado en la típica reacción
“antígeno-anticuerpo”.
¡ Antígeno: es toda sustancia que introducida en
un organismo vivo origina anticuerpos.
¡ Anticuerpo: es la sustancia producida por el
organismo vivo, en respuesta al antígeno y que
reacciona exclusivamente con él.
Por lo que basta conocer uno de ellos para
identificar al otro.
 Son ensayos rápidos, cualitativos para la
detección de sangre.
Emplea una combinación de anticuerpo
monoclonal conjugado marcado (oro coloidal) y
un anticuerpo policlonal en fase sólida para
identificar selectivamente a la hemoglobina
humana, mediante reacción antigeno-anticuerpo.
Los dispositivos suelen además proporcionar una
solución buffer, a efectos de solubilizar la muestra
y mantener su pH estable.
¡ Una vez confirmada la naturaleza sanguínea de la
mancha, se realizarán estudios específicos para
establecer si la sangre es humana o no lo es.

¡ Existen varios métodos y técnicas que pueden ser

aplicadas para responder esta interrogante
pericial.
¡ Técnica de inhibición de la antiglobulina
humana

¡ Se aplica la reacción de Coombs, sobre las

manchas para demostrar la presencia de
anticuerpos bloqueantes.

¡ La no aglutinación indica sangre humana.

¡ I) Técnica para Sensibilización de Hematíes “O” Rh
Positivos (anticuerpos bloqueantes)
¡ II) Técnica de Inhibición de la Antiglobulina
Humana.
¡ Glóbulos Rojos AGLUTINADOS= Test de Coombs
Positivo, indica que la muestra carece de Globulina
Humana
¡ Glóbulos Rojos NO AGLUTINADOS= Test de
Coombs Negativo, se interpreta como presencia
de Globulina Humana, lo que indica que la
muestra corresponde a sangre humana.
¡ Una vez confirmado el origen humano de la
muestra sanguínea, la etapa final de un
análisis forense de sangre, consiste en
individualizar su grupo sanguíneo.

¡ La identificación del grupo de una mancha de

sangre, puede hacerse aplicando uno de los
siguientes métodos.
¡ Varios son los aglutinógenos de la sangre, que
permiten la clasificación de ellos en los
diferentes sistemas.

¡ El sistema ABO, universalmente conocido es el

de mayor utilidad a la hora de buscar estos
“aglutinógenos” en sangre fresca y en manchas
sanguíneas, dada su mayor estabilidad.
¡ Aglutinógenos: Son proteínas presentes en
las membranas de los hematíes y son los que
determinan el grupo sanguíneo de las
personas.

¡ Aglutininas: Son los anticuerpos que existen

en el plasma de las personas, distintos a los
aglutinógenos presentes en sus hematíes.
¡ Es el método mas habitual para la
determinación del grupo sanguíneo para
muestras de sangre líquidas, parcialmente
coaguladas y/o el coágulo fresco.
¡ El procedimiento analítico consiste en el
agregado de una gota de antisuero (A, B)
respectivamente a una gota de la muestra
problema; la interpretación del grupo “O” se
hará por descarte y la reacción a observar es la
aglutinación.
 Anti A Anti B Resultado

Aglutina No aglutina Grupo A

No aglutina Aglutina Grupo B
Aglutina Aglutina Grupo AB
No aglutina No aglutina Grupo O
A B Rh
NEGATIVO POSITIVO
¡ El factor Rh es una proteína existente en la
membrana de los glóbulos rojos.

¡ Los Rh positivos son aquellas muestras que

presentan dicha proteína en sus eritrocitos.

¡ Los Rh negativos son las muestras que no

presentan la proteína.
¡ Aproximadamente un 85 % de la población tiene
en esa proteína una estructura dominante, que
corresponde a una determinada secuencia de
aminoácidos que en lenguaje común son
denominados habitualmente Rh+.

¡ Alrededor de la sexta semana de gestación, el

antígeno Rh comienza a ser expresado en los
glóbulos rojos humanos.
¡ Consiste en la identificación de los
aglutinógenos presentes en la mancha, con los
respectivos antisueros (A, B, H*), empleando
hematíes testigos (portadores de aglutinógenos
conocidos), para la lectura final, tras la ruptura
del complejo realizada a 56º Celsius.
¡ Por cuestiones de disponibilidad, en la rutina del
trabajo, la interpretación del grupo “O” se hace
también por descarte y la interpretación igual
que en el método directo.
¡ Colocar en dos tubos marcados A y B respectivamente,
telas manchadas con el macerado de la muestra
sanguínea a analizar.
¡ Adicionar a cada tubo dos a tres gotas de solución salina
fisiológica fría (4ºC) y una gota de antisuero A y B
respectivamente a los tubos marcados.
¡ Dejar en reposo los tubos durante 10 a 12 horas en
heladera.
¡ Retirar la solución salina y el exceso de antisuero, lavar la
mancha de los tubos con solución salina fría por cinco a
seis veces, dejando reposar cada lavado por 20 minutos en
la heladera.
¡ Después del último lavado retirar toda la solución salina.
¡ Añadir nuevamente solución salina fría de dos a tres
gotas.
¡ Colocar los tubos a baño maría de 56 ºC, durante 15
minutos, agitando de tanto en tanto. En este paso se
rompe la unión antígeno-anticuerpo que pudiera
establecerse durante el paso 3ro.
¡ Sacar el soporte de la mancha de los tubos.
¡ Agregar a cada tubo, una gota de solución al 5 % de
glóbulos rojos A y B en solución salina, a cada tubo
respectivo y dejar en el refrigerador por espacio de 1 hora.
¡ Sacar los tubos de la heladera y centrifugar a 1500 r.p.m.
por espacio de tres minutos.
¡ Observar los resultados de aglutinación directamente y
al microscopio. La interpretación es la misma que en la
técnica directa.
¡ Son técnicas que se aplican para la búsqueda
de proteínas polimorfas específicas que
existen en una determinada especie, así
como de isoenzimas que son proteínas
enzimáticas que cumplen funciones de
regulación en los diferentes procesos
bioquímicos de los organismos. (LDH –
Lactato deshidrogenasa)
 SECA SANGRE FRESCA

SI ¿se puede NO SI
transportar el ¿Es poca la
objeto donde cantidad?
se encuentra?

Diluir con
Se remite
agua NO
todo al
laboratorio destilada
Recoger en
Recoger con tubo de
una gasa o
ensayo
hisopo

Secar Refrigerar

Embalar y
remitir
FIN
Muchas Gracias