Universidad Autónoma de Ciudad Juárez
Instituto de Ciencias Biomédicas
Microbiología Básica
Práctica 3. Preparación de medios de cultivo.
Dayna Coral Ravelo Monreal 235373
Martin Daniel Sánchez Sánchez 230603
Jennifer Denisse Cardenas Mendez 224105
Ángel Jafeth Medina Valdez 237332
Resumen
Se realizo una serie de tinciones en las que se utilizaron dintintos colorantes los cuales
fueron carbon-fushina, verde de malaquita, azul de metileno, yodo-lugol, safranina, cristal
violeta, tambien se utilizo alcohol-cetona, alcohol-ácido y tinta china (Tinción de
Capsula); las tinciones realizadas fueron tinción simple con la bacteria P. mirabilis,
preparación en fresco con la bacteria P. mirabilis, tinción de Gramcon la bacteria E. coli,
tincion de Ziel-Neelsen (BAAR) con la bacteria P. aureginosa, tinción de capsula con la
bacteria K. pneumoniae y la tinción de endoespora con la bacteria [Link]; para la
realizacion de las tinciones exepto la tincion de capsula y la preparcion en fresco, el resto
de tinciones se fijo primero la bacteria en el portaobjetos con solucion salina y el mechero
de Bunsen.
Introducción Existen dos tipos de tinciones:
Las bacterias son organismos unicelulares Tinción simple consiste en la aplicación
y procariotas que están en casi todo el de un único colorante sobre la muestra, lo
planeta. Son fundamentales para los que facilita la visualización de la
ecosistemas y algunas pueden sobrevivir morfología y características generales de
en condiciones extremas. Tienen las células. Este método resalta
diferentes formas, como esféricas, estructuras como la membrana celular y el
alargadas o en espiral. En el cuerpo citoplasma.
humano, especialmente en el intestino,
Tinción negativa emplea colorantes
hay bacterias que son clave para la
ácidos que no penetran en la célula,
digestión y absorción de nutrientes.
tiñendo en su lugar el fondo de la
(national geographic, 5 junio 2024)
preparación. Esto crea un contraste en el
Preparación en fresco: es un que las células, al no teñirse, se destacan
procedimiento en el que se observa un claramente contra el fondo coloreado.
espécimen biológico en su estado natural,
sin someterlo a procesos de fijación o Objetivos
conservación. Generalmente, se utiliza en Conocer y desarrollar las técnicas
microbiología o biología celular para microoscopicas comunes para observar,
estudiar la morfología y comportamiento teñir y medir a las bacterias y sus
de organismos vivos, como bacterias, estructuras.
tejidos o células, en condiciones que
simulan su ambiente natural. Esta técnica
permite analizar los detalles dinámicos y
Metodología
las características estructurales del
organismo, aunque su duración es 1. Al iniciar la clase se desinfectó la
limitada debido a la falta de conservación. mesa de laboratorio con hipoclorito de
(Refugia Perez 2022) sodio, luego se dio una breve
explicación sobre el procedimiento de metileno durante 1 minuto. Y
cada una de las tinciones a realizar. finalmente enjuagar de nuevo.
2. Luego se comenzó con la tinción 13. Para la tinción de cápsula, se añadió
simple, en la cual, se colocó una gota una gota de tinta china en un extremo
de solución salina sobre un del portaobjetos, después se colocó
portaobjetos. una muestra de K. pneumoniae con
Figura 2.
3. Después se esterilizó el asa al rojo el asa y se depositó en la gota, luego
vivo, para tomar una muestra de un con otro portaobjetos se extendió la
cultivo de bacterias y extenderla sobre tinta y se dejó secar.
la gota de solución salina. 14. Después de que secó completamente,
4. Luego se dejó secar y se pasó por el se le añadió safranina durante 1
mechero 3 veces. minuto y se enjuagó.
5. Se utilizó este procedimiento para 15. Para la tinción de endospora, se le
cada una de las tinciones realizadas. agregó verde de malaquita durante 5
6. Después, para la tinción simple se minutos, mientras se calienta el
colocó cristal violeta sobre el portaobjetos con una torunda de
portaobjetos ya fijado y se dejó algodón encendida; luego se enjuagó
reposar durante 1 minuto. y se añadió safranina durante 1
7. Por último, se enjuagó por arrastre y minuto, para después enjuagar y dejar
se dejó secar cerca del mechero. secar.
8. Para la tinción de Gram, se le colocó 16. Luego de que todas las tinciones
cristal violeta sobre el portaobjetos, se secaran, se guardaron.
dejó reposar durante 1 minuto y se 17. Finalmente, en la clase posterior, se
tiró el exceso de colorante. observaron todas las tinciones bajo el
9. Luego se le añadió Yodo–Lugol microscopio, con el objetivo de 100x.
durante 1 minuto y se enjuagó por
arrastre. Resultados y discusión
10. Después se agregó alcohol cetona En la preparacion en
durante 10 segundos y de nuevo se fresco se obervo la
enjuagó; por último, se le agregó bacteria P. mirabilis
safranina durante medio minuto y se (Figura 1) en el
enjuagó. microoscopio a pesar
11. Para la tinción de Ziehl-Neelsen, se de que fue dificil
añadió carbon-fuschina durante 5 observarse
Figura 1. Preparación en Fresco de P.
minutos, mientras se calentaba el mirabilis
debido a que
portaobjetos con una torunda de se secaba rapido la solución salina. Es de
algodón encendida. importancia para la observacion de
12. Luego se enjuagó y se agregó alcohol- bacterias debido a que se puden observar
ácido durante 30 segundos; se volvió
a enjuagar, para luego agregar azul de
su forma o estructura (Reynoso et al, que no son de este tipo no se teñiran, se le
2015). aplica calor para que la muestra quede
fijada (Berríos & Ilabaca,
La tincion de Gram la cual se puede
2018).
observar en la figura 2 fue realizada con
[Link], por lo que la tinción salio positiva Se realizo una tinción de
ya que se pueden observar los basilos capsula en la que se
gram negativos. Esta tincion de ayuda utilizo tinta china y
para el campo de la microbiología porque safranina, la bacteria que
diferencia a las bacterias gram positivas se tiño fue K. pneumoniae
Figura 5. Tinción de
que tienen una pared gruesa de esta se observa en la Capsula.
peptidoglucano y polimeros e Figura 5; la tinta china china fue utilizada
impermiable por lo cual se usa en la para poder diferenciar la capsula de la
tinción el alcohol-cetona, mientras tanto bacteria su tamaño, forma y estructura, la
las gram negativas tienen una capa cual se tiñio color rosita por la safranina;
delgada de peptidoglucanos mas una capa la capsula es de ayuda para la bacteria por
de lipoproteinas que mas facil penatrar ejemplo, en las bacterias patógenas la
con los colontes usados en la tinción cápsula permite la adhesión al hospedador
(Rodriguez & Arenas, 2018). o protege de la fagocitosis, en otros casos
incrementa las posibilidades de sobrevivir
La tinción simple se
en condiciones de desecación en bacterias
realizo con la bacteria
que colonizan ambientes naturales
P. mirabilis y se le
(López-Jácome et al, 2014).
añadio cristal violeta
como se observa en la La ultima
Figura 3. Es usada la tinción realizada
tinción para ver la fue la tinción de
Figura 3. Tinción Simple.
morfología y tamaño endospora en la
del microorganismos que se utilizo B.
(Vázquez Vargas, 2019). subtilis la cual
se muestra en la
Figura 5. Tinción de Endospora. figura 6, pero
La tinción de Ziehl- esta se tiño al
Neelsen (BAAR) se reves y no hubo ningun resultado. Esta
realizó con la tinción permite poner de manifiesto la
bacteria de P. endospora bacteriana, una forma de
aureginosa, fue resistencia producida por algunos géneros
positiva y puede ser de bacterias gram positivas. Las
observada en la endosporas aseguran la supervivencia de
Figura 4; es realizada Figura 4. Tinción de BAAR. estas bacterias en condiciones
para poder identificar a las bacterias ácido desfavorables (altas temperaturas,
alcohol resistentes ya que las bacterias desecación, radiaciones ultravioletas,
gamma y agentes químicos), durante eparacion-de-muestras/?
largos periodos de tiempo (Martín& utm_source-.com
Serrano, 2010). o Reynoso, M. M., Magnoli,
C. E., Barros, G. G., &
Demo, M. S. (2015).
Manual de microbiología
Conclusión general.
o Rodríguez, P. A., &
La serie de tinciones realizadas permitió Arenas, R. (2018). Hans
la identificación y diferenciación de Christian Gram y su
diversas bacterias mediante el uso de tinción. Dermatología
colorantes específicos y técnicas Cosmética, Médica y
adecuadas. Cada tinción tuvo un Quirúrgica, 16(2), 166-
167.
propósito particular, como la tinción de o Vásquez Vargas, D. A.
Gram para diferenciar bacterias en (2019). Evaluación de la
función de la composición de su pared disminución en la carga
celular, la tinción de Ziehl-Neelsen para contaminante de los
la identificación de bacterias ácido- colorantes asociados a la
alcohol resistentes, y la tinción de tinción de Gram mediante
carbón activado
endosporas para la detección de
encapsulado en alginato de
estructuras de resistencia. La correcta sodio.
fijación de las muestras, excepto en la o Berríos, C. S., & Ilabaca,
tinción de cápsula y la preparación en R. G. (2018). Manual de
fresco, aseguró la adecuada adhesión de microbiología. Ediciones
las bacterias al portaobjetos, facilitando UC.
o López-Jácome, L. E.,
su observación microscópica y
Hernández-Durán, M.,
asegurando resultados confiables. Colín-Castro, C. A.,
Ortega-Peña, S., Cerón-
González, G., & Franco-
Bibliografía Cendejas, R. (2014). Las
tinciones básicas en el
o Que es una bacteria (2024, 5 laboratorio de
junio). microbiología. Investigaci
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para microscopio óptico - Observación de bacterias.
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