ELISA
Ensayo inmunoabsorbente ligado a
enzimas
¿Qué es?
Es una técnica de laboratorio que usa anticuerpos con enzimas para detectar y
medir sustancias en una solución. Se realiza en una superficie sólida donde se
adhieren los anticuerpos, y en la etapa final, una reacción enzimática genera un
cambio de color medido con un lector especializado.
Fundament
o
• Se basa en la unión específica entre
anticuerpos y antígenos para la
inmunodetección.
• LA unión cataliza una reacción con
un sustrato, generando un cambio
de color, fluorescencia o
luminiscencia.
• La intensidad de la señal es
proporcional a la cantidad de
analito.
Antigen
o
• Cualquier sustancia que haga que
el cuerpo produzca una respuesta
inmunitaria contra ella.
• Incluyen toxinas, sustancias
químicas, bacterias, virus u otras
sustancias de fuera del cuerpo.
Anticuerp
Grandes estructuras proteicas, que o
forman partedel sistema
inmune y se encuentran en la sangre, saliva, lágrimas, leche
materna y mucosas.
consiste de cuatro cadenas
polipeptídicas:
• dos cadenas pesadas idénticas de
55-70 kDa H (heavy)
• Un par idéntico de cadenas livianas
no glicosiladas de 24 kDa L (del
inglés light).
Tipos de
anticuerpos
Reacción antigeno-
anticuerpo
Es la especificidad en la que un antígeno solo puede combinarse con
el anticuerpo que lo induce a una estrecha relación. La unión entre
éstos se lleva a cabo en la formación de un enlace entre la región
fijadora del antígeno de la inmunoglobulina y el determinante
antigénico.
Expresión de la unión antigenos-
anticuerpo
[Link]ón de neutralización: Bloquean la actividad de los
antígenos.
[Link]ón de precipitación: Formación de complejos ag-ac
insolubles que precipitan, facilitando su destrucción por
fagocitos
[Link]ón de aglutinación: provoca la formación de agregados
visibles
[Link]ón: Marcado de antígenos para su destrucción por
células inmunitarias
TIPOS DE
• Directo ELISA
• Indirecto
• Sandwich
• Competitivo
ELISA
Directo
•Más simple y rápido de todas.
•Se fija un antígeno al soporte, se añade un
anticuerpo acoplado con la enzima y una
vez que se agrega el sustrato, éste cambia
de color.
ELISA
Indirecto
•Parecido al directo pero este se
realiza en dos pasos, lo que permite
amplificar la señal obtenida.
•Se utiliza un anticuerpo primario que
reconoce al antígeno y después un
anticuerpo secundario acoplado con la
enzima.
ELISA Sandwich
•Un anticuerpo está sobre una
superficie sólida, se le añade el
antígeno y luego, otro anticuerpo
que también se une al antígeno y
está acoplado a la enzima.
ELISA
competitivo
En el ELISA competitivo, un antígeno de referencia se une al fondo del pocillo. Si
la muestra contiene antígeno, compite con el de referencia por la unión al
anticuerpo. Tras los lavados, menos anticuerpo se une al fondo cuando hay más
antígeno en la muestra, lo que reduce la señal final.
¿Qué utilidad tiene?
• Diagnóstico de enfermedades: VIH,
hepatitis, COVID-19, tuberculosis.
• Detección de alergias: Identificación de
anticuerpos contra alérgenos.
• Investigación biomédica: Estudio de
proteínas y respuesta inmune.
• Control de calidad en alimentos y
fármacos: Detección de toxinas,
hormonas o contaminantes.
Ensayos Enzimaticos
Continuos
• Espectrofométricos
• Fluorométricos
• Calorimétricos
• Quimioluminiscencia
Discontinuos
• Radiométricos
• Cromatográficos
Bibliografías
Molecular Devices. (2025). Kit de ensayo de ELISA, lector de placas y lavador de placas de
ELISA. Recuperado de Molecular Devices, URL:
[Link]
elisa
DISMED. (2024). Técnicas de ELISA explicadas: principios y aplicaciones en Investigación.
Recuperado de DISMED, URL: [Link]
principios-y-aplicaciones-en-
investigacion/#:~:text=Las%20t%C3%A9cnicas%20de%20ELISA%2C%20o,anticuerpos%2
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Condori López Paola E. Reacción antígeno anticuerpo. Rev. Act. Clin. Med [periódico na
Internet]. [citado 2025 Fev 11]. Disponível em:
[Link]
37682011001000009&lng=pt