UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
INFORME DE LABORATORIO N° 01
Autor(es):
ALIPIO GONZALES ROSA NAGHELY
ARZOLA ARAUJO ABI NICOLE MANUELA
BEDON ALVA NOELIA CELESTE
FERNANDEZ AZABACHE CLAUDIA SOFIA
FERNANDEZ SANCHEZ JEFERSON JASON
IGLESIAS PÉREZ NICOL ZARAÍ
PÉREZ LÓPEZ BETHSABÉ LISET
RODRIGUEZ SIFUENTES KIARA MARIFE
VALVERDE SOLANO BREYSI GIANELLA
Experiencia curricular:
MICROBIOLOGÍA
Ciclo:
VII - B
Docente:
LLENQUE DÍAZ LUIS ALBERTO
Coordinador:
GUTIERREZ ARAUJO MAYRA
Trujillo, 2025
I. INTRODUCCIÓN
La observación microscópica de microorganismos es esencial en microbiología para
comprender su morfología, estructura y comportamiento. Existen dos métodos
principales para su estudio: la observación en fresco y las técnicas de coloración.
En cuanto a la observación en fresco, consistirá en colocar una gota de la suspensión de
microorganismos entre un portaobjetos y un cubreobjetos para observar directamente.
Otra opción sería fijar la muestra previamente, lo cual implica depositar una suspensión
uniforme de microorganismos sobre el portaobjetos y luego fijarla aplicando calor o
agentes químicos. En ambos métodos, será habitual emplear técnicas de coloración para
mejorar el contraste y facilitar la identificación de estructuras celulares, utilizando
objetivos de inmersión para obtener una mejor resolución (Moreno & Albarracín, 2012).
Por otro lado, las técnicas de coloración permitirán diferenciar microorganismos según su
capacidad de retener determinados colorantes, lo cual dependerá de la interacción entre
la carga del colorante y la composición química de la célula. Estas coloraciones podrán
clasificarse en simples y diferenciales. Las simples utilizarán un único colorante para
revelar la presencia celular, mientras que las diferenciales permitirán distinguir grupos
microbianos basados en diferencias estructurales. En la práctica, solo se empleará la
tinción de Gram, la cual clasificará a las bacterias en Gram positivas y Gram negativas
según la cantidad de peptidoglucano presente en su pared celular. Las Gram positivas
retendrán el color violeta tras la decoloración, mientras que las Gram negativas
requerirán un colorante de contraste para visualizarse, apareciendo rosadas. Aunque
otras técnicas como la tinción de Ziehl-Neelsen identificarán microorganismos
ácido-alcohol resistentes como Mycobacterium tuberculosis, estas no serán aplicadas en
la presente práctica (Moreno & Albarracín, 2012).
El estudio de las bacterias en el laboratorio requiere el uso de medios de cultivo
adecuados que permitan su crecimiento, aislamiento e identificación. Los medios de
cultivo son preparados específicos que proporcionan los nutrientes necesarios para el
desarrollo de los microorganismos. Estos pueden ser líquidos (caldos) o sólidos
(generalmente con agar) y se clasifican según su composición, finalidad o estado físico.
La preparación adecuada de los medios de cultivo es fundamental para asegurar
resultados confiables. Esto implica la selección del medio apropiado, su correcta
esterilización, y el vertido en condiciones asépticas. Posteriormente, se utilizan diversas
técnicas de siembra, como la siembra por estría, por agotamiento, por vertido o por
inclusión, dependiendo del objetivo: ya sea para aislar colonias puras, cuantificar
bacterias o evaluar su comportamiento en condiciones específicas.
Una vez sembradas, las placas o tubos deben ser colocados en condiciones de
incubación controladas, como la temperatura, el tiempo y la atmósfera (aerobia o
anaerobia), que favorecen el crecimiento del microorganismo de interés. Estos
parámetros varían según la especie bacteriana que se estudie (Gómez & Batista, 2006).
II. OBJETIVOS
Objetivo general
● Desarrollar competencias prácticas en la observación de microorganismos mediante
técnicas de coloración en fresco, preparación de medios de cultivo, aplicación de
técnicas de siembra y control de condiciones de incubación, con el fin de
comprender los principios básicos del crecimiento microbiano.
Objetivo específico
● Usar correctamente el microscopio óptico para observar muestras microbiológicas,
ajustando el enfoque, iluminación y manteniendo los lentes limpios para obtener
imágenes claras y proteger el equipo
● Analizar los resultados obtenidos en función del tipo de medio, técnica de siembra y
condiciones de incubación aplicadas, interpretando el desarrollo microbiano
observado.
● Observar microorganismos vivos mediante preparaciones en fresco y aplicar
coloraciones simples para reconocer su forma y estructuras básicas.
● Interpretar los resultados obtenidos al comparar el crecimiento bacteriano en función
del tipo de medio, técnica de siembra y condiciones de incubación utilizadas.
III. MATERIALES
Material biológico:
- Muestras de aguas estancadas
Material de vidrio:
- Lámina portaobjetos
- Lámina cubreobjetos
- Gotero
Equipos:
- Microscopio óptico
- Balanza
Reactivo:
- Cristal violeta
- Lugol
- Solución decolorante (alcohol acetona)
- Safranina
Otros:
- Asa Bacteriológica
- Mechero
- Encendedor
- Porta Láminas
- Plumón tinta indeleble
- Aceite de inmersión
IV. PROCEDIMIENTO
A) Observación de Poblaciones Microbianas
1. Observación en fresco
- Encender el mechero para mantener condiciones de asepsia
- Colocar 2 gotas de la muestra de agua estancada sobre una lámina
portaobjetos limpia y seca, utilizando un gotero.
- Cubrir la muestra con una lámina cubreobjetos.
- Llevar la preparación al microscopio.
- Posicionar la lámina en la platina y se sujeta con las pinzas.
- Realizar la observación, comenzando con el objetivo de menor
aumento hasta lograr un enfoque adecuado.
2. Observación mediante coloración de Gram
- Depositar 1 a 2 gotas de la muestra de agua estancada sobre una
lámina portaobjetos.
- Esterilizar el asa bacteriológica al rojo vivo en la llama del mechero y
dejar enfriar unos segundos.
- Esparcir la muestra sobre la lámina, formando un frotis delgado y
uniforme
- Dejar secar el frotis al aire.
- Fijar la muestra pasando la lámina por la llama del mechero mediante
movimientos suaves y rápidos.
- Aplicar cristal violeta sobre el frotis y dejar actuar durante un minuto.
- Enjuagar cuidadosamente con agua corriente.
- Añadir lugol hasta cubrir la muestra y mantener en contacto durante
un minuto.
- Lavar nuevamente con agua corriente.
- Aplicar el decolorante (alcohol o mezcla alcohol-acetona), se
homogeniza y se enjuaga. Se repite el lavado hasta que el líquido
salga sin color.
- Se añade safranina y se deja actuar por 30 segundos y se enjuaga
con agua.
- Dejar secar la lámina y se procede a la observación microscópica
utilizando los objetivos adecuados.
B) Preparación de agar nutritivo (bacterias)
1. Cálculos y pesaje: Determinar cantidad requerida del medio:
- Agua Destilada 50 ml
- Peptona 0.5 g
- Extracto de carne 0.15 g
- Cloruro de Sodio (NaCl) 0.25 g
- Agar agar 0.75 g
Pesar el medio comercial o componentes.
2. Disolución y homogeneización:
- Verter en matraz limpio y seco.
- Agregar menor volumen de agua destilada.
- Homogeneizar.
3. Calentamiento:
- Calentar hasta ebullición (si es necesario).
4. Ajuste de pH:
- Utilizar soluciones ácidas o alcalinas.
5. Esterilización:
- Autoclave a 121 °C, 15-20 min, con presión.
6. Vertido:
- Enfriar a 50-45 °C.
- Verter en placas petri o tubos.
7. Finalización:
- Dejar solidificar.
- Rotular.
- Refrigerar.
C) Siembra por estría y agotamiento en placa
1. Esterilización del asa:
- Al rojo vivo con flama.
- Esperar 4-5 s para enfriar.
2. Toma de muestra:
- Recoger colonia o muestra.
3. Siembra:
- Dividir la placa en 4 cuadrantes.
- Depositar muestra en 1er cuadrante.
- Estriar en zigzag.
- Girar placa en sentido horario.
- Sembrar 2º, 3º y 4º sin recargar asa.
4. Incubación:
- Cerrar e invertir placa.
- Envolver con papel kraft.
- Rotular.
- Incubar:
Mesófilas: 30-35 °C por 18-24 h.
Patógenas: 37 °C por 18-24 h.
V. RESULTADOS
1. Observación de poblaciones microbianas
1.1. Observación en fresco:
Figura 1. Observación de protozoarios en fresco
1.2. Observación mediante coloración simple y gram
Figura 2. Morfología de las bacterias y coloración simple (cultivo de Staphylococcus
aureus).
Figura 3. Morfología de las bacterias y coloración gram (cultivo de Escherichia coli).
Figura 4. Morfología de las bacterias y coloración gram (Staphylococcus aureus).
2. Preparación de agar nutritivo
Figura 5. Agar nutritivo preparado en laboratorio
VI. COMENTARIO
- Mediante el microscopio se observó que en el agua estancada había presencia de
bacterias cuya morfología eran de bacilos, esto fue a partir del uso del aumento de
100 pero sobretodo con el de 400, ya que con el objetivo 4X solo se pudo ver los
residuos de plantas presentes en el agua.
- Mediante la tinción gram se observó que la bacteria [Link] se tiñó de rojo lo que
desmostró que es una bacteria gramnegativa, además la agrupación formada fue de
estafilococos, debido a que la morfología coccus se agrupaban en forma de racimo.
Por otro lado la S. Aureus se tiñó de azul, demostrando que eran grampositivas
- Al momento de preparar el Agar nutritivo se calienta al rojo vivo la varilla para
desinfectarla, y es importante que esta vaya por las paredes del recipiente que
contiene a la colonia porque en caso contrario se terminaría quemando.
- Al momento de cultivar el uso de autoclave es importante, ya que este permite
eliminar cualquier otro medio de cultivo presente en nuestra muestra, a causa de sus
condiciones (presión de 1 ATM y temperatura de 121 ºC)
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Gómez, G., & Batista, C. (2006). Optimización de medios de cultivos para microorganismos,
una valiosa estrategia para la producción de biopreparados de interés agrícola.
Cultivos Tropicales, 27(3), 17–24.
[Link]
Moreno, J. R., & Albarracín, V. H. (2012). Aislamiento, cultivo e identificación de
microorganismos ambientales a partir de muestras naturales.
[Link]
ANEXOS
Anexo 1. Pasos para la observación de poblaciones microbianas en fresco
Anexo 2. Pasos para la observación de poblaciones microbianas color de Graham
Anexo 3. Pasos para la preparación de agar nutritivo.
Anexo 4. Pasos para la siembra por estria y agotamiento en placa.
Anexo 5. Muestra de agua estancada con objetivo 40X
Anexo 6. Materiales utilizados en la preparación de medios de cultivo.
Anexo 7. Preparación de agar nutritivo.
Anexo 8. Siembra por el método de estria en placa.
Anexo 9. Tinción de muestras bacteriana.