Seminario biologia celular 5
Núcleo interfásico, cromatina y cromosomas
Núcleo:
¿Qué es?
• Organela membranosa que se encuentra en el centro de eucariontes
• Contiene la mayor parte del material genético
• Está organizado en varias moléculas de ADN muy largas y lineales conformando lo
que llamamos “cromosomas”
¿Qué hace?
• Mantiene la integridad de los genes contenidos en el ADN
• Controlar actividades celulares regulando la expresión génica
Estructura del núcleo en interfase:
Se evidencian sus componentes:
• Envoltura nuclear: rodea al núcleo
• Cromatina: ADN unido a proteínas
• Nucleolo: estructura densa y evidente
• Nucleoplasma
• REG
Cromosomas
Los cromosomas se vuelven evidentes a medida de que la célula se
prepara para la división.
El ADN nuclear tiene una fluoresencia brillante por el colorante dapi.
Los cromosomas aparecen agrupados y condensados en la célula de la
izq. Porque la célula se encuentra en mitosis.
El núcleo de la célula de la der. Contiene los mismos cromosomas, pero
se encuentran más extendidos porque la célula está en interfase.
Envoltura nuclear o carioteca
Comprende:
• Membrana nuclear externa: se continúa con la membrana del RE.
Es funcionalmente similar a la membrana del RE y posee ribosomas adheridos a su
superficie citoplasmática.
• Espacio perinuclear: posee conexión directa con el lumen del RE gracias a su
continuidad con le membrana nuclear externa
• Membrana nuclear interna: tiene proteínas únicas específicas del núcleo
encargadas de unirse a la matriz nuclear y a las proteínas de la lámina nuclear
Lámina nuclear
¿En dónde está?
Se encuentra por dentro de la membrana nuclear interna
¿Qué es?
Es una red fibrosa que proporciona soporte estructural al núcleo
Está formada por proteínas denominadas “lámina”, pertenecientes a la familia de los
filamentos intermedios. Estas proteínas son el único tipo de filamento intermedio que se
encuentra dentro del núcleo.
Hay 3 genes que codifican para las proteínas lámina, se denominan: A, B y C. Las proteínas
también se llaman así.
Las láminas interactúan con receptores de la membrana nuclear interna como la emerina
y el receptor de lámina B interaccionan con la cromatina mediante unión a las histonas y
también tienen capacidad de unirse directamente al ADN.
Poros nucleares
La membrana nuclear está perforada por los poros nucleares
Forman compuertas por donde entran/abandonan el núcleo todas las moléculas
Cada poro nuclear está formado por unas 100 proteínas diferentes y contiene un canal lleno
de agua por el que pasan de manera libre y no selectiva las sustancias hidrosolubles de
pequeño tamaño.
Las moléculas más grandes, como las proteínas que deben ir al núcleo o las subunidades
ribosomales que deben ir al citosol, pueden presentar una señal de distribución apropiada
para pasar a través del poro nuclear.
La secuencia señal que dirige a las proteínas para ingresar al núcleo, se llama “señales de
localización nuclear” y consisten en una o dos secuencias cortas que contienen aminoácidos
con carga positiva.
Nucleolo
Es la estructura más prominente en el núcleo en interfase
Es el sitio donde se sintetiza el ARNr y se ensamblan las subunidades ribosomales
En la imagen se ve un ovocito con su núcleo de cromatina muy laxa y nucleolo intensamente
teñido. Con HyE, el nucleolo une ambos colorantes, ya que es rico en ARN y proteínas.
En el nucleolo se encuentran las regiones de los cromosomas que tienen las múltiples copias
del gen para el ARNr del 45S.
Función:
• Participa en la formación de los ribosomas: lugar de síntesis y procesamiento del
ARN 45s
Zona fibrilar: Es en donde está el ADN y los ARN transcriptos primarios. Contiene 200
copias del gen del ARN 45S, moléculas de ARN 45S, los factores de transcripción, la ARN
polimerasa I
Zona granular: Tiene aspecto granulado porque es el sitio donde se ensamblan las
unidades ribosomales. Subunidades ribosomales en diferentes estadíos de procesamiento
Centro fibrilar: lugar donde se encuentra el ADN de los genes nucleolares
Componente fibrilar denso: contiene las copias de ARN de 45S que se transcriben a partir
de dichos genes
Componente granular: donde se encuentran las unidades ribosomales en formación
La modificación de algunos ARN especiales, como el ARN de la partícula de reconocimiento
de la señal, también se produce en el nucleolo
ARN ribosomales que se sintetizan en el núcleo
De los 4 ARN presentes en las subunidades ribosomales, 3 se sintetizan en el nucleolo, pero
no son sintetizados por separado, sino que surgen del corte de un ARN transcripto primari0
común que es el pre ARN ribosomal de 45S.
Transcripto primario común: ARNr 45s
T ARN transcripto primario de 45S contiene los ARN de 18 S, 5,8 S y 28 S, además de
regiones espaciadoras transcriptas representadas en gris en el esquema.
Estas regiones espaciadoras son eliminadas por ribonucleoproteínas pequeñas nucleolares.
Estas ribonucleoproteínas se unen al pre ARN ribosomal para formar un complejo de
procesamiento de manera similar a como se forman los espliceosomas en el pre ARNm.
Cromatina
Es la sustancia que forma los cromosomas de los eucariontes y corresponde a la asociación
del ADN con proteínas histónicas y no histónicas.
Proteínas histonas clásicas:
• Son las más abundantes
• H1, H2A, H2B, H3 y H4
Proteínas no histónicas:
• Comprenden proteínas que forman parte de la matriz nuclear
• Las que están relacionadas con actividades llevadas a cabo en el núcleo como la
transcripción y la replicación.
Características importantes del ADN
Cada ADN consiste en 2 cadenas de nucleótidos complementarios
Cada cadena está compuesta por 4 tipos de subunidades, (los nucleótidos), y ambas cadenas
se mantienen unidas por la acción de enlaces de hidrógeno entre las bases de esos
nucleótidos.
Los nucleótidos están compuestos por una pentosa (la desoxirribosa), a la cual se une un
grupo fosfato y una base nitrogenada, (la base puede ser guanina, citocina, timina,
adenina).
Los nucleótidos están unidos entre sí de manera covalente formando una cadena a través
de las pentosas y los fosfatos que establecen un esqueleto de azúcar-fosfato alternante.
La forma en la que están unidos los nucleótidos entre sí, le dan a la cadena de ADN una
polaridad química. Esta polaridad se indica denominando el extremo 3´ a uno de los
extremos y 5´al otro.
Los nucleótidos en la doble cadena de ADN, se mantienen unidos por enlaces de hidrógeno
entre las bases de cadenas diferentes.
Las bases no se aparean al azar:
• Adenina-Timina
• Guanina-Citocina
• A y G: purinas
• T y C: pirimidinas
En cada caso, una purina se aparea con una pirimidina
Cada par purina-pirimidina se denomina “par de bases”
Los miembros de cada par de bases, pueden encajar en el diámetro de la doble hélice porque
las 2 cadenas de la hélice corren antiparalelas una con respecto de la otra, (están orientadas
con polaridades opuestas)
Las 2 cadenas del ADN, se enrollan una alrededor de la otra formando una hélice con 10
bases por vuelta.
En la imagen se ve una vuelta y media de la hélice, y el enrollamiento forma un surco mayor
y un surco menor
Cada célula humana contiene unos 2 mts de ADN, pero un núcleo celular mide entre 5-8
micras de diámetro. Comprimir o compactar el ADN dentro del núcleo requiere proteínas
que pliegan y enrollan el ADN en niveles de organización cada vez mayor.
Las proteínas que se unen al ADN formando los cromosomas, se dividen en dos clases
generales: las histonas y las no histonas.
Proteínas histonas: responsables del primer nivel de compactación de la fibra cromatinica,
que es el nucleosoma.
Proteínas no histonas
Si se fragmenta un núcleo celular y se observa su contenido, se ve que la mayor parte de la
cromatina se ve en forma de fibras que tiene unos 30 nm de diámetro (fig. A)
Si se somete a la cromatina a tratamientos que la hacen desenrollar paricialmente, se ve
como un collar de cuentas enhebradas en un hilo. El hilo es un ADN y las cuentas son una
partícula central del nucleosoma que consiste en ADN enrollado alrededor de un centro de
histonas.
La estructura de la partícula central del nucleosoma se determinó mediante la digestión de
la cromatina con nucleasas que degradan el ADN por la realización de cortes entre el ADN.
Después de una digestión breve, solamente se degrada el ADN que se encuentra entre las
partículas centrales de los nucleosomas. Este ADN, se denomina “ADN ligador/espaciador”.
Cada partícula central esta formada por un complejo de 8 histonas con 2 moléculas de las
histonas: H2A, H2B, 2H3 y H4, más el ADN bicatenario que tiene una longitud de unos 147
pares de nucleótidos y que se enrolla alrededor de ese octámero de histonas.
La longitud del ADN espaciador entre dos partículas centrales varía desde unos pocos
nucleótidos hasta cerca de 80.
Nucleosoma: partícula central más uno de sus ADN espaciador contiguos. La formación de
los nucleosomas convierte una cadena de ADN en una hebra de cromatina que tiene
alrededor de 1/3 de su longitud inicial y provee el primer nivel de condensación del ADN
A las partículas centrales del nucleosoma, se les une une una quinta histona, la H1,
formando una unidad de cromatina denominada “cromatosoma”, compuesta por 166 pares
de bases enrollados alrededor del centro de histonas y sujetos por la histona de enlace H1.
El empaquetamiento del ADN con histonas, produce una fibra de cromatina que mide
aprox. 10 nm. De diámetro, y está formado por cromatosomas separados por segmentos de
enlace o ADN ligador.
La sucesión de cromatosomas produce la imagen de collar de cuentas que se ve en el
microscopio electrónico.
La cromatina se condensa aun mas formando fibras de 30 nm. lo que resulta en una
condensación de unas 50 veces la longitud del ADN inicial.
La fibra de 30 nm. se forma porque los cromatosomas se enrollan sobre si mismos
adoptando una disposición llamada solenoide
Niveles de condensación de la cromatina
El grado de condensación de la cromatina varía durante el ciclo celular.
Cuando la célula entra en mitosis, los cromosomas se condensan para ser distribuidos a las
células hijas. Los lazos de cromatina de 30 nm. se pliegan sobre si mismos para formar los
cromosomas compactos que se observan en la metafase, en las que el ADN se encuentra
condensado alrededor de diez mil veces.
El ADN de los cromosomas en metafase, se organiza en grandes lazos unidas a un andamio
de proteínas no histónicas, pero todavía no se ha llegado a entender la estructura de la
cromatina condensada ni el mecanismo por el cual se condensa.
Estados de la cromatina durante la interfase
La mayor parte de la cromatina se encuentra en un estado menos condensado,
constituyendo la denomindada “eucromatina”.
La mayor parte de la eucromatina, se encuentra en forma de la fibra de 30 nm. y los genes
que se encuentran en ella se transcriben activamente.
Alrededor del 10% de la cromatina en interfase, constituye la heterocromatina, que al
contrario de la eucromatina, se encuentra en un estado muy condensado, es
transcripcionalmente inactiva y contiene secuencia de ADN altamente repetitivo.
La heterocromatina facultativa es un tipo especial porque en humanos está constituida por
uno de los dos cromosomas X inactivados en las células somáticas de la mujer. Este X
inactivo comprende el cuerpo de Barr o cromatina sexual, que se llama heterocromatina
facultativa porque se transcribe en algunos tipos celulares (como las ovogonias) o en ciertos
momentos del desarrollo.
Regulación del enrollamiento de la cromatina: complejos de
remodelación de la cromatina
Las células eucariontes disponen de distintos mecanismos para ajustar rápidamente la
estructura de la cromatina local, de manera que esté mas o menos condensada.
Uno de los mecanismos, es el uso de complejos de remodelación de la cromatina, que
utilizan la e° de hidrólisis del ATP para cambiar la posición del ADN enrollado en los
nucleosomas. Estos complejos producen ciclos repetidos de hidrólisis de ATP que permiten
que se afloje el ADN nucleosomico al empujarlo a lo largo del centro de histonas. Esto
provoca un desplazamiento del nucleosoma y expone el ADN a otras proteínas que se unen
al mismo.
En el ejemplo, el nucleosoma se ha deslizado levemente hacia la izquierda a lo largo del
ADN.
Cuando se producen varios ciclos de desplazamiento, la cromatina de descondensa y el ADN
se vuelve mas accesible a otras proteínas, (como los factores de transcripción).
Regulación del enrollamiento de la cromatina: modificación
química reversible de histonas
Una forma alternativa de alterar la estructura de la cromatina, consiste en la modificación
química reversible de histonas.
Los extremos amino y carboxilo de las 4 histonas centrales (denominadas genéricamente
“colas de las histonas”), sobresalen de la particula central y por lo tanto son accsesibles
para recibir modificaciones covalentes por parte de enzimas residentes en el núcleo.
A estas colas de histonas, pueden añadirse o quitar grupos qcos que afectan la confromacion
de la cromatina, haciendo que el ADN sea mas o menos aacesible a factores de transcripción
o replicación.
Estas modificaciones afectan de modo directo la estabilidad de la fibra cromatinica de 30
nm. aumentando o disminuyendo su enrollamiento.
Cromosomas
Una célula se reproduce a través de una serie ordenada de eventos en la que duplica su
contenido y se divide en 2.
Este ciclo de duplicación y división se conoce como ciclo celular.
La fase de división de la célula se denomina fase “M”, y es en este momento donde se pueden
observar los cromosomas como entidades individuales.
Para poder producir un cromosoma eucariótico que pueda duplicarse y luego dividirse entre
células hijas en la mitosis, se necesitan 3 elementos: orígenes de replicación, centrómero y
telómeros.
Cada cromosoma tiene múltiples sitios de inicio de la replicación del ADN. En un ciclo
celular típico, el ADN se duplica en interfase comenzando los orígenes de replicación y
avanza bidireccionalmente a lo largo de todo el cromosoma.
En la fase M, el centrómero une los cromosomas duplicados al huso mitótico, de modo que
se distribuya una copia a cada célula hija. El centrómero también contribuye a mantener
juntos los cromosomas duplicados hasta que estén juntos para separarse.
Los telómeros garantizan que los extremos de los cromosomas se dupliquen e impiden que
estos extremos se confundan con ADN dañado que necesita repararse.
Los cromosomas interfásicos están ordenados dentro del núcleo
Los cromosomas se observan como elementos individuales solo durante un momento de la
división celular, pero mantienen su individualidad durante todo el ciclo celular.
En un núcleo en interfase se puede observar que los cromosomas ocupan territorios
diferentes dentro del núcleo, es posible pintar los cromosomas de una célula humana en
interfase, utilizando una sonda de ADN acopladas a distintos marcadores fluorescentes. Con
un microscopio de fluorescencia se ve que cada cromosoma ocupa un territorio definido
dentro del núcleo en lugar de estar mezclado con los otros.
Se ve que los pares de cromosomas homólogos presentes en una célula diploide, por lo
general no se encuentran ubicados en la misma posición.
Cromosomas metafásicos
Como consecuencia de la duplicación cromosómica en interfase, cada cromosoma tiene 2
moléculas de ADN hijas idénticas.
Cada una de estas moléculas de ADN con sus proteínas asociadas, se denominan
“cromátide”, y ambas cromátides están unidas de forma estrecha a todo lo largo del
cromosoma.
La comisura que se forma en el centro es el centrómero.
Las porciones del cromosoma que se encuentran por arriba y por debajo del centrómero,
son “brazos cromosómicos”
Clasificación de cromosomas: según posición del centrómero
El centrómero divide al cromosoma en dos brazos que pueden tener longitudes iguales o
diferentes.
El brazo mas corto se llama “P” (por petite)
El brazo más largo se llama “q”
Los cromosomas humanos en metafase presentan 3 formas básicas y se clasifican de
acuerdo a la longitud relativa de los brazos corto y largo.
Cromosoma metacéntrico: posee brazos con la misma longitud, con el centrómero en el
medio
Cromosoma submetacéntrico: brazos desiguales con centrómero más próximo a uno de
los extremos
Cromosoma acrocéntrico: centrómero mucho más cerca de un extremo con un brazo corto
muy pequeño. Tienen constricciones secundarias en los brazos cortos, que conectan trozos
muy pequeños de cada cromátide, (llamados “tallos” y satélites” con el centrómero).
Los tallos tienen los organizadores nucleolares que corresponden a los genes que codifican
el ARNr de 45S
En el CARIOTIPO HUMANO, los cromosomas se ordenan en 7 grupos identificados con
letras, según su tamaño y posición del centrómero
En el cariotipo humano, los 23 pares de cromosomas se clasifican en 7 grupos que se
nombran con las letras A-G
Métodos de bandeado cromosómico: bandeado G
Cuando se realiza un cariotipo, se utiliza el bandeado G para identificar cada par
cromosómico por su patrón de bandas, además de por su tamaño y la posición de su
centrómero.
Este tipo de bandeo es el más frecuente y útil para detectar alteraciones cromosómicas.
Para lograr el bandeado, los cromosomas se someten a una digestión controlada de las
proteínas con la enzima tripsina, y luego se tiñen con el colorante gienza.
Las bandas mas oscuras son oscuras porque en ese sitio las proteínas son mas resistentes
a la digestión de la tripsina. Contienen ADN rico en Adenina Timina, que se replican mas
tardíamente en la fase S y contienen menor cantidad de genes que las bandas más claras.
Al contrario, las bandas más claras poseen proteínas que se ven mas afectadas por esta
digestión
Cariotipo espectral (SKY)
Los pares cromosómicos también pueden identificarse mediante SKY
Es una técnica que permite identificar los cromosomas pintando cada par de un color
fluorescente distinto.
Se utiliza una combinación de 5 fluorocromos, una mezcla de zona de ADN complementaria
a cada uno de los pares.
Cada sonda está marcada con una combinación de fluorocromos diferente, se necesita un
equipo de microscopia y software especiales para detectar y discriminar las diferentes
sondas de ADN que se hibridan simultáneamente
A diferencia del bandeado G, el SKY es un método laborioso y caro, además debe utilizarse
en conjunto con otras técnicas de análisis del cariotipo ya que no es útil cuando las
alteraciones cromosómicas son poco evidentes (como ser perdida de pequeños segmentos
cromosómicos)