INSTITUTO GÓMEZ PALACIO
LABORATORIO DE CIENCIAS DE LA SALUD
Especialidad de Ciencias
Titular: Biol. Eduardo A. Santana Garcia
Reporte de Practica 4
“Osmosis”
Elaborado por:
Científico 1
Científico 2
Científico 3
Científico 4
Gómez Palacio, Durango a 03 de octubre del 2024
Objetivos
Observar el transporte de sustancias (disolventes) a través de la membrana
para comprender el concepto de la osmosis aplicado a un sistema vivo.
Marco Teórico
Se sabe que el físico francés Jean-Antoine Nollet fue el primero en observar
el fenómeno de transporte de agua a través de una membrana permeable en 1748,
pero no fue hasta 1827 que el biólogo Henry Dutrochet acuñó el término "ósmosis"
y realizó investigaciones más detalladas sobre el proceso, Dutrochet experimentó
con membranas biológicas y demostró que el movimiento del agua a través de estas
membranas era fundamental en muchos procesos fisiológicos, como el transporte
de nutrientes en las plantas (Porter, 2003). Ahora bien, la ósmosis es un fenómeno
físico fundamental, ocurre cuando el agua se desplaza a través de una membrana
semipermeable desde una solución con menor concentración de solutos hacia una
con mayor concentración. Esta migración de moléculas de agua es impulsada por
la diferencia de presión osmótica entre dos soluciones, la membrana
semipermeable permite el paso del agua, pero no de los solutos, generando un flujo
hacia el lado con mayor concentración para equilibrar las concentraciones de soluto
a ambos lados de la membrana (Marbach & Bocquet, 2019). Además, tiene
aplicaciones industriales, como la desalinización de agua mediante ósmosis
inversa, en este proceso, las membranas semipermeables separan la sal del agua
de mar, proporcionando agua potable (Manning & Kay, 2023).
En el contexto biológico, la ósmosis es esencial para mantener la turgencia
y el funcionamiento adecuado de las células (Marbach & Bocquet, 2019), lo cual
depende de; la presión osmótica que es la presión generada por la diferencia de
concentración de solutos a ambos lados de una membrana (Cheng & Pinsky, 2015)
y de la permeabilidad de membrana ya que esta juega un papel crucial en el
transporte selectivo de sustancias hacia dentro y fuera de la célula, facilitando así
los procesos biológicos, incluso estas membrana pueden ser semipermeables,
permitiendo la difusión de nutrientes y detritos específicos al mismo tiempo que
mantiene la integridad celular (Banfalvi, 2016).
Ahora, hablando específicamente de células humanas los hematíes o
glóbulos rojos son de las células más estrechamente relacionadas con los procesos
osmóticos ya que estas tienen dos funciones principales, recoger el oxígeno de los
pulmones y recoger el dióxido de carbono de los tejidos para luego descargarlo en
los pulmones por lo que su participación con la homeostasis del cuerpo es clara, ya
que si su cantidad en la sangre cae se puede entrar en hipoxemia (deficiencia de
oxígeno en la sangre) (Saladin , 2013). Así mismo esta células son conocidas por
su capacidad para reaccionar a los cambios ambientales en el ambiente
modificando su volumen y forma (Mazeron, et al, 2000). En condiciones fisiológicas,
el volumen de glóbulos rojos es de aproximadamente 90 μm3, pero el volumen
puede variar desde unos 72 μm3 en condiciones hipertónicas hasta
aproximadamente 150 μm3 en condiciones hipotónicas. Estos cambios en el
volumen de eritrocitos también conllevan a un cambio en el volumen de
hemoglobina generando una modificación en el índice de refracción de la luz que
tienen los glóbulos rojos y en la intensidad de la luz dispersada (Gao, et al, 2024).
Existen diversas condiciones patológicas que provocan alteraciones en el tamaño y
la forma de los glóbulos rojos, algunas de estas condiciones se deben a cambios
anómalos en la presión osmótica del plasma sanguíneo. Podemos clasificarlas en
dos grupos: las hiperosmolares, como el síndrome hiperglucémico hiperosmolar
(Verbalis, 2003), y las hipoosmolares (como el síndrome de secreción inadecuada
de hormona antidiurética. En situaciones relacionadas con la deshidratación del
cuerpo, la transfusión de líquidos y medicamentos, o la inyección de agentes de
contraste para obtener imágenes, las células sanguíneas también pueden
encontrarse en condiciones no isotónicas similares. Además, existen numerosas
anemias hereditarias asociadas a trastornos en el volumen de los glóbulos rojos,
que resultan de cambios en la hidratación celular debido a anomalías en la
permeabilidad de los iones de membrana (Gallagher, 2017).
Aunque se ha investigado ampliamente la influencia del volumen, el tamaño
y la forma de los glóbulos rojos durante los cambios osmóticos, el estado de
oxigenación de la hemoglobina en estos procesos no ha recibido suficiente atención
(Morabito, et al, 2020), aunque hay algunos estudios que se centran en las
variaciones en la presión parcial de oxígeno (Abramczyk, et al, 2023) o la presencia
de ciertas moléculas orgánicas. Sin embargo, al aumentar la concentración de
hemoglobina en las células durante la contracción osmótica, la accesibilidad del sitio
de unión para el oxígeno podría disminuir, lo que podría ocasionar cambios en los
mecanismo de oxigenación de los tejidos (Lavrik, 2022).
Metodología
Materiales
Material de Laboratorio Reactivos Material Biológico
3 tubos de ensaye de 13x100 Cloruro de sodio (NaCl) Muestra de sangre
1 jeringas de 5 ml Alcohol al 70%
Torniquete Agua destilada
Sistema vacutainer Torundas con alcohol
Agujas para vacutainer Aceite de inmersión
Tubo para muestra sanguínea lila
2 vasos de precipitado de 250ml
4 portaobjetos
4 cubreobjetos
3 pipetas de 5 ml
Propipeta
4 pipetas Pasteur con bulbo
1 gradilla para tubos de 13x100
1 microscopio óptico
Algodón
Frasco para residuos biológicos
Balanza gramera
Matras de aforación de 250ml
Vidrio de reloj
Guantes de látex
3 vasos de precipitado
1 cuchara o abatelenguas
Tabla 1 Materiales necesarios para la realización de la práctica de laboratorio
Métodos
Etapa I. Extracción de muestra de sangre con sistema Vacutainer
1. Reúna todo el equipo necesario y colóquelo sobre su mesa de trabajo
2. Asegúrese que quien done la muestra tenga su brazo descubierto y sin
presiones extras a las que vaya a genera el torniquete
3. Preséntese al donador y explique el procedimiento
4. Desinfecte sus manos con alcohol al 70% deje secar y luego coloque los
guantes de látex o nitrilo de ser el caso
5. Acomode al donador con la extremidad a punzar sobre una superficie
adecuada y cómoda, la punción de preferencia se debe de hacer en el brazo
no dominante en la zona “M” y más preciso sobre la vena media cefálica o
media basílica y se debe asegurar que la piel del sitio a punzar este indemne
6. Coloque el torniquete aproximadamente a 4 dedos del pliegue del codo para
que la vena sea visible y/o palpable con mayor facilidad
7. Arme el sistema vacutainer
8. Desinfecte el área a puncionar de lo proximal a lo distal sin pasar dos veces
por la misma zona
9. Destape la aguja y puncione a 45° aproximadamente siguiendo la dirección
de la vena con el bisel siempre hacia arriba
10. Fije el vacutainer para evitar ponchar la vena y coloque los tubos de muestra
sanguínea que sean necesarios, una vez tomada la muestra mezclar por
inversión al menos tres veces
11. Antes de terminar la ultima muestra retirar el torniquete
12. Al retirar el ultimo tubo de muestra tomar una pequeña torunda con alcohol
al 70% y hacer una pequeña presión sobre la zona de punción y retirar el
sistema vacutainer a la vez que se presiona con la torunda
13. Dejar la torunda aproximadamente 3 min con el brazo doblado para evitar un
hematoma
14. Colocar la ajuga del vacutainer en el contenedor para desechos biológicos y
punzocortantes con extremo cuidado de no pincharse
15. Retirar el algodón y colocar un curita de animalitos
16. Etiquetar todas las muestras con el nombre del paciente y la fecha
Etapa I. Extracción de muestra de sangre con jeringa
Repita los pasos del 1 al 6 del procedimiento anterior
1. Rompa la presión de la jeringa jalando el embolo para separar el pistón
2. Desinfecte el área a puncionar de los proximal a lo distal sin pasar dos veces
por la misma zona
3. Destape la aguja y coloque el tapón en una zona cercana para su posterior
manejo, después puncione a 45° aproximadamente siguiendo la dirección de
la vena con el bisel siempre hacia arriba
4. Coloque en una posición adecuada la jeringa para evitar ponchar la vena y
tome la muestra necesaria
5. Terminado la toma de muestra retirar el torniquete sin retirar la aguja,
posterior a eso tomar una pequeña torunda con alcohol al 70% y hacer una
pequeña presión sobre la zona de punción y retirar la jeringa a la vez que se
presiona con la torunda
6. Dejar la torunda aproximadamente 3 min con el brazo doblado para evitar un
hematoma
7. Vaciar el contenido de la jeringa en un tubo de muestra con EDTA y mezclar
por inversión min tres veces
8. Colocar el tapón a la ajuga de la jeringa, esto se debe de hacer sin mover el
tapón de la superficie donde se colocó e introduciendo la aguja en el,
después tomar con la mano y ajustarlo, finalmente retirar la aguja y dejar
junto con la jeringa en el contenedor para desechos biológicos y
punzocortantes con extremo cuidado de no pincharse
9. Retirar el algodón y colocar un curita de animalitos
10. Etiquetar todas las muestras con el nombre del paciente y la fecha
Etapa II. Preparación de soluciones Hipotónicas, Isotónicas e Hipertónicas
Prepara las siguientes soluciones
NaCl al 3.0% (hipertónica)
NaCl al 0.9% (isotónica) *Suero fisiológico*
NaCl al 0.5% (hipotónica)
1. Vamos a preparar 100 ml de suero fisiológico
2. Calcula los gramos que se necesitan de NaCl, partiendo del fundamento que
un 0,9% de soluto significa que por cada 100 ml de disolución (suero) hay
0,9 g de NaCl
3. Pesa en la balanza la cantidad necesaria de NaCl
4. Disuélvelos en el vaso de precipitados con un poco de agua destilada,
bastarán 25 ml y agita bien con una varilla de vidrio, cuchara o abatelenguas
5. Con ayuda de un embudo, vierte la disolución preparada en el matraz aforado
6. Enjuaga el vaso de precipitados con un poco más de agua, al menos un par
de veces, para arrastrar los restos de NaCl que pudieran quedar en él
7. Añade agua al matraz hasta acercarnos a la marca de enrase
8. El agua que falte para llegar exactamente al enrase, lo añadiremos con un
gotero para no pasarnos
Tapa el matraz y agita bien el contenido
Etapa III. Evaluación del proceso de osmosis en células sanguíneas
1. Numerar y etiquetar los tubos de ensaye en una gradilla con el tipo de
disolución a verter y agregue 2 ml de la solución que se indica: 1 NaCl al 3%,
2 NaCl al 0.9%, 3 NaCl al 0.5% y 4 Agua destilada
2. Agrega 4 gotas de sangre en cada tubo y mezcla suavemente hasta tener
una suspensión uniforme
3. Deja reposar entre 15 a 20 minutos
Resultados
Ilustración 1 Células sanguíneas en suspensión isotónica de NaCl. Observación,
ampliación y comparación (con micrografía de una célula isotónica obtenida del libro de Fisiología y
Anatomía de Saladin) de células sanguínea al microscopio con objetivo 100x y aceite de inmersión
embebidas en una solución isotónica de NaCl al 0.9% (gr/L). Nótese como las células 1,2 y 3
presentan la forma clásica de los hematíes “de dona” efecto posible debido a la nula refracción de la
luz por parte de la célula en la zona dentro de la misma, y dadas las condiciones isotónicas antes
mencionadas el intercambio de agua es constante por lo que la forma y el volumen no se ven
modificados.
Ilustración 2 Células sanguíneas en suspensión hipotónica de NaCl. Observación,
ampliación y comparación (con micrografía de una célula hipotónica obtenida del libro de Fisiología
y Anatomía de Saladin) de células sanguíneas al microscopio con objetivo 100x y aceite de inmersión
embebidas en una solución hipotónica de NaCl al 0.5% (gr/L). Donde podemos observar como las
células de la ampliación presentan una forma completamente esférica efecto posible debido a las
condiciones hipotónicas de la solución donde el intercambio de agua no es constante ya que el
ingreso de agua es mayor al egreso por lo que la forma y el volumen se ven modificados, aun así no
se observó la citólisis celular.
Ilustración 3 Células sanguíneas en suspensión hipertónica de NaCl. Observación,
ampliación y comparación (con micrografía de una célula hipertónica obtenida del libro de Fisiología
y Anatomía de Saladin) de células sanguíneas al microscopio con objetivo 100x y aceite de inmersión
embebidas en una solución hipertónica de NaCl al 3% (gr/L). Donde podemos observar en las células
de la ampliación 1,2 y 3 el fenómeno de crenación al presentar celular irregulares “como con piquitos”
resultado de las condiciones hipertónicas de la solución donde el intercambio de agua no es
constante ya que el ingreso de agua es menor al egreso por lo que la forma y el volumen se ven
modificados, danto esta apariencia de “pasa”.
Discusión
Los resultados obtenidos demuestran la aplicación del fenómeno osmótico
en membranas biológicas, tal como lo describieron Nollet (1748) y Dutrochet (1827),
quienes sentaron las bases para el estudio del transporte de agua a través de
membranas semipermeables. La observación de los cambios en el volumen de los
eritrocitos bajo condiciones isotónicas, hipotónicas e hipertónicas permitió
corroborar la capacidad de estas células para modificar su tamaño y forma en
respuesta a las variaciones en la concentración de solutos extracelulares. Los
glóbulos rojos mostraron un comportamiento consistente con lo esperado según el
gradiente osmótico y las diferentes literaturas citadas.
En la Ilustración 1, se observó la morfología clásica de los eritrocitos en
condiciones isotónicas, donde la solución de NaCl al 0.9% permitió que el
intercambio de agua fuera constante, manteniendo la forma de "dona" característica
de los hematíes. Este resultado coincide con lo establecido por Saladin (2013),
donde la forma y el volumen celular se mantienen estables en medios isotónicos,
ya que no hay un desequilibrio osmótico que cause un flujo neto de agua hacia
dentro o fuera de las células.
En la Ilustración 2, las células en una solución hipotónica de NaCl al 0.5%
mostraron un aumento de volumen y adoptaron una forma esférica, un fenómeno
que concuerda con la teoría osmótica. El ingreso de agua en las células superó el
egreso, debido a la menor concentración de solutos en el medio externo. Este
fenómeno, sin embargo, no provocó citólisis, lo cual sugiere que la membrana
celular pudo soportar el incremento de presión interna sin romperse.
Por otro lado, en la Ilustración 3, las células expuestas a una solución
hipertónica de NaCl al 3% presentaron signos claros de crenación, donde las células
adoptaron una morfología irregular con bordes puntiagudos, similares a una "pasa".
Este fenómeno, causado por la pérdida de agua de las células hacia el medio más
concentrado, es una consecuencia esperada en estas condiciones, tal como lo
describe la literatura (Saladin, 2013).
El éxito en la replicación experimental de estos fenómenos destaca la
relevancia del equilibrio osmótico en la homeostasis corporal, particularmente en el
transporte de oxígeno y dióxido de carbono por los glóbulos rojos. La relación entre
la turgencia celular y la oxigenación tisular se refleja en las condiciones patológicas
asociadas a alteraciones osmóticas, como el síndrome hiperglucémico hiperosmolar
(Verbalis, 2003) y las anemias hereditarias (Gallagher, 2017). Aunque la presente
práctica no abordó la oxigenación de la hemoglobina en detalle, es necesario
señalar, como lo hace Morabito et al. (2020), que este es un tema que requiere
mayor investigación, dado que la contracción osmótica podría reducir la
accesibilidad al oxígeno en los eritrocitos, afectando la oxigenación de los tejidos
(Lavrik, 2022).
En términos generales, los resultados experimentales no solo confirmaron
las predicciones teóricas del proceso osmótico, sino que también demostraron su
relevancia en el contexto fisiológico, reforzando la importancia de este mecanismo
en la regulación celular y en el mantenimiento de la salud homeostática. Esto
subraya la necesidad de continuar explorando las interacciones entre la
osmolaridad, la oxigenación y otras variables fisiológicas para un entendimiento
más profundo de los mecanismos celulares que sostienen la vida
Conclusión
Se demostró con claridad la influencia del fenómeno osmótico en la
fisiología de los glóbulos rojos, los cambios observados bajo condiciones isotónicas,
hipotónicas e hipertónicas fueron consistentes con las predicciones teóricas,
resaltando la capacidad de los eritrocitos para responder a variaciones en la
concentración de solutos extracelulares. Estos hallazgos refuerzan la importancia
del equilibrio osmótico en la homeostasis celular y en procesos fisiológicos
esenciales como el transporte de oxígeno, subrayando la necesidad de seguir
investigando su impacto en la salud.
Referencias
Abramczyk, H., Surmacki, J., Kopeć, M., Jarczewska, K., & Romanowska-
Pietrasiak, B. (2023). Hemoglobin and cytochrome c. reinterpreting the
origins of oxygenation and oxidation in erythrocytes and in vivo cancer lung
cells. Nature, 13. doi:org/10.1038/s41598-023-41858-z
Banfalvi, G. (2016). Permeability of Membranes. En Permeability of Biological
Membranes. Springer, Cham. doi:org/10.1007/978-3-319-28098-1_2
Cheng , X., & Pinsky, P. (2015). The Balance of Fluid and Osmotic Pressures across
Active Biological Membranes with Application to the Corneal Endothelium.
PLOS ONE, 10(12). doi:org/10.1371/[Link].0145422
Gallagher, P. (2017). Disorders of erythrocyte hydration. Blood, 130(25), 2699 -
2708. doi:10.1182/blood-2017-04-590810
Gao, H., Wang, Z., Zhu, D., Zhao, L., & Xiao, W. (2024). Dioscin: Therapeutic
potential for diabetes and complications. Biomedicine & Pharmacotherapy,
174. doi:org/10.1016/[Link].2023.116051
Lavrik, N. (2022). On the Nature of the Spectral Shift of the Soret Band of Erythrocyte
Oxyhemoglobin when Organic Molecules Are Added to an Erythrocyte
Suspension. SpringerLink, 67, 72 - 77. doi:org/10.1134/S0006350922010079
Manning, G., & Kay, A. (2023). The Physical Basis of Osmosis. BioRxiv.
doi:10.1101/2023.01.02.522450
Marbach, S., & Bocquet, L. (2019). Osmosis, from molecular insights to large-scale
applications. Chemical Society Reviews, 48(11), 3102 - 3144.
doi:10.1039/C8CS00420J
Mazeron, P., Didelón, J., Müller, S., & Stoltz, J. (2000). A Theoretical Approach of the
Measurement of Osmotic Fragility of Erythrocytes by Optical Transmission.
Photochem. Photobiol, 72, 172 - 178. doi:org/10.1562/0031-
8655(2000)0720172ATAOTM2.0.CO2
Morabito , R., Remigante, A., Spinelli, S., Vitale , G., Trichilo , V., Loddo, S., & Marino,
A. (2020). High Glucose Concentrations Affect Band 3 Protein in Human
Erythrocytes. Antioxidants, 27(9), 365. doi:10.3390/antiox9050365
Porter, R. (2003). The Cambridge History of Science (Vol. 4). Cambridge: Cambridge
University Press.
Saladin , K. (2013). Anatomia y Fisiologia, la unidad entre forma y función. En El
aparato circulatorio: sangre (págs. 684 - 687). Mac Grow Hill.
Verbalis, J. (2003). Disorders of body water homeostasis. Best Pract Res Clin
Endocrinol Metab, 17(4), 471 - 503. doi:10.1016/s1521-690x(03)00049-6