Métodos de Estudio

de la Célula
DR. RAMIRO CALLE
 Introducción
 El avance en el conocimiento de la ultraestructura y función de la célula,
ha sido posible gracias al perfeccionamiento de equipos, tecnología y
métodos citológicos y citoquímicos.

 La célula es la unidad básica de la vida, y entender su estructura y función

es fundamental para comprender la biología, y la medicina. A largo de los
años , se han desarrollado varios métodos para estudiar las células,
Observación celular

 La observación de las células vivas al microscopio, conlleva

dificultades, que se las puede superar con las preparaciones
permanentes en la cual se fijan y colorean para su estudio.

 Con la fijación, se logra evitar la destrucción enzimática de las

células por autolisis.

 Se impide la proliferación bacteriana.

 Se logra endurecerlas estructuras celulares.

 Se aumenta la afinidad hacia los colorantes.

MICROSCOPIO OPTICO

 Descripción:
Es el microscopio más común.
 Utiliza luz visible y un sistema de dos o más lentes para ampliar
muestras pequeñas.
 Permite observar células, tejidos y microorganismos.
Microscopio
Partes del Microscopio
 Elementos de un microscopio convencional, también llamado compuesto,
permite la observación de cuerpos mediante transparencia (el haz
luminoso debe atravesar la muestra).

 En este sistema óptico se combinan dos lentes: el objetivo, lente más

próxima a la muestra estudio, y el ocular, lente más cercana al ojo del
observador.

 Esta última lente puede ser simple, hablándose de cabezal monocular, o

doble, si se dispone de dos lentes o binocular, que permite la visión más
prolongada en el tiempo sin provocar una fatiga visual temprana.

 El microscopio se compone de dos elementos básicos: el elemento

mecánico y el elemento óptico.
Componentes del elemento
mecánico
 El soporte del microscopio, formado por el pie sobre el que reposa
el aparataje y que sostiene al brazo o columna que fija todo el
equipamiento óptico y de visión. En la parte superior del brazo se
halla el tubo (provisto de la lente ocular) y el revólver que porta los
objetivos en su extremo inferior. En la parte media del brazo se halla
la platina (provista de un orificio central para el paso de la luz),
lugar donde se colocarán las preparaciones montadas en el
portaobjetos-cubreobjetos. Este sistema se fijará a la platina
mediante unas pinzas.
 Los tornillos de enfoque: macrométrico, que permite una
aproximación general a la muestra, y micrométrico, que afina y
precisa una correcta visualización.
Elemento óptico

 Entre sus componentes generales, destacan:

 Objetivo. Consta de un sistema de lentes que proporciona una
imagen mayor e invertida del objeto. En el mismo se consideran tres
elementos fundamentales: el aumento (o cantidad de veces que
se incrementa un objeto), el campo de visión (o zona visible que se
observa a través del ocular del microscopio) y el poder de
resolución.
 En el microscopio óptico convencional encontramos tres lentes
principales: 4x, 10x y 40x, 100x, proporcionando unos aumentos
reales de 4 veces, 10 veces y 40 veces, 100 veces,
respectivamente. Este ultimo permite la observación nítida y clara
de bacterias, objeto de estudio de este trabajo. Para ello es
necesario la adquisición de aceite de inmersión.
 Ocular. Esta lente, colocada al final del tubo, hace que la imagen formada en
el objetivo se incremente aún más su tamaño. Es decir, si utilizamos un lente
objetivo de 40x y la lente ocular proporciona 10 veces más (10x), los aumentos
finales serán 400 (muy alejados del desafío de la observación nítida del mundo
bacteriano).

 El sistema de iluminación generado a través de lámparas incorporadas al pie

del microscopio.

 El diafragma iris que permite regular la entrada de luz al condensador.

 El condensador o sistema de lente doble, localizado debajo de la platina, y

que permite la concentración de los rayos de luz procedentes de la fuente de
iluminación y su incidencia en la preparación.
Tipos de microscopio

Microscopio de campo oscuro

 Descripción:
Ilumina la muestra desde los lados para que solo la luz dispersada
por la muestra llegue al objetivo. Permite ver detalles invisibles en
campo claro.
 Partes principales:
 Condensador de campo oscuro.
 Fuente de luz lateral.
 Oculares y objetivos estándar.
Microscópio de contraste de fases
 Es un tipo de microscopio óptico diseñado para observar células y
organismos vivos sin necesidad de teñirlos.
 Convierte las diferencias de fase (variaciones en la densidad y el grosor
de las estructuras) en diferencias de brillo, haciendo visibles detalles
que en un microscopio común se verían transparentes.
 Es muy usado en biología celular, microbiología y análisis de cultivos
vivos.
Cómo funciona:
 La muestra no absorbe luz, solo la desvía (cambia su fase).
 En un microscopio normal esos cambios no se ven.
 El microscopio de contraste de fases usa:
 Un anillo de luz en el condensador
 Una placa de fase en el objetivo
 Estas dos piezas transforman los cambios de fase en diferencias de
intensidad, creando una imagen brillante y contrastada.
Microscopio de contraste de fases

 Es un tipo de microscopio óptico diseñado para observar células y

organismos vivos sin necesidad de teñirlos.
 Convierte las diferencias de fase (variaciones en la densidad y el
grosor de las estructuras) en diferencias de brillo, haciendo visibles
detalles que en un microscopio común se verían transparentes.
 Es muy usado en biología celular, microbiología y análisis de cultivos
vivos.
Microscopio de fluorescencia

 Es un tipo de microscopio óptico que usa luz UV o luz azul intensa

para excitar moléculas fluorescentes (fluorocromos).
Estas moléculas absorben luz de alta energía y emiten luz de menor
energía (fluorescencia), lo que produce imágenes brillantes sobre
un fondo oscuro.
Microscopio de inmuno
fluorescencia
 Es una técnica de laboratorio que utiliza anticuerpos
marcados con fluorocromos para localizar proteínas
específicas dentro de células y tejidos.
 Permite “iluminar” estructuras específicas, como actina,
ADN, membranas, patógenos, receptores, etc.
Tipos de inmunofluorescencia
 Inmunofluorescencia directa
 El anticuerpo primario está unido directamente al
fluorocromo.
 Técnica más rápida, pero menos sensible.
Inmunofluorescencia indirecta
 Un anticuerpo primario reconoce la proteína objetivo.
 Un anticuerpo secundario, unido al fluorocromo, reconoce al
primario.
 Mayor señal, más sensibilidad y más colores disponibles.
Cómo funciona la inmunofluorescencia:
 La muestra (células o tejido) se fija y permeabiliza.
 Se añaden anticuerpos (directos o secundarios).
 Los anticuerpos se unen específicamente a la molécula objetivo.
 Bajo el microscopio de fluorescencia, los fluorocromos se iluminan.
 La estructura buscada aparece brillante y bien definida.
Microscópio Electrónico de Barrido
 El SEM (Scanning Electron Microscope) es un tipo de microscopio que usa
electrones en lugar de luz para obtener imágenes tridimensionales (3D) muy
detalladas de la superficie de una muestra.
 Permite observar estructuras extremadamente pequeñas, desde células hasta
metales, insectos, cristales y materiales industriales.
Cómo funciona :
 El microscopio genera un haz de electrones mediante un cañón electrónico.
 Los electrones se enfocan y dirigen mediante lentes electromagnéticas.
 El haz “barre” la superficie de la muestra punto por punto (como un escáner).
 La muestra emite:
 Electrones secundarios
 Electrones retro dispersados
 Rayos X característicos
 Los detectores captan estas señales y una computadora forma la imagen 3D.
Microscopio de Barrido