PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE SALUD Y BIENESTAR

CARRERA DE MEDICINA

CATEDRA MICROBIOLOGÍA

TEMA: IDENTIFICACIÓN DE COCOS

GRAMPOSITIVOS

Elaborado por: Karolan Acero, Mikaela Avila, Yhoalibeth Brito, Katerin

Cuyo, Julián Gavilima, Martín Filián, Mabelyn Ladino, Andrea López, David
Manzano, María Paula Merizalde, Karla Quilca, Lizbeth Sarzosa, Andres Tapia

Paralelo: 5

Docente: Dra. Patricia Herrera

5 de diciembre, 2025
1. Fotos de Agares describiendo el nombre, germen y/o tipo de hemólisis.

Primer Agar Alfa

1. Agar: Agar sangre

2. Tipo de hemólisis: ALFA (α-hemólisis)
3. Germen asociado: Streptococcus pneumoniae o Streptococcus viridans

Segundo Agar Gamma

1. Agar: Agar sangre

2. Tipo de hemólisis: Gamma (y-hemólisis) No presenta hemólisis ni cambio en
el color del agar . No hay halo verde (alfa) ni área transparente (beta)
3. Germen asociado: Enterococcus faecalis, Streptococcus del grupo D no
enterococos (S. bovis).
Tercer Agar Beta

1. Agar: Agar sangre

2. Tipo de hemólisis: beta (β-hemólisis) corresponde a la lisis completa de los
eritrocitos del agar, produciendo un halo transparente alrededor de las
colonias)
3. Germen asociado: Streptococcus pyogenes (Grupo A) y, en menor
intensidad, de Streptococcus agalactiae (Grupo B).

Cuarto Agar Optoquina

1. Agar: Agar sangre

2. Tipo de prueba: Prueba de sensibilidad a optoquina
3. Tipo de hemólisis: Hemólisis ALFA (α-hemólisis)
4. Germen asociado: Streptococcus pneumoniae (sensible a optoquina, con halo
de inhibición) de los estreptococos del grupo viridans (resistentes, sin halo).
Quinto Agar Prueba Bacitracina

1. Agar: Agar sangre

2. Tipo de hemólisis: Beta (β-hemólisis). Se observa zona transparente alrededor
del crecimiento bacteriano debido a la lisis completa de los eritrocitos.
3. Germen asociado: Streptococcus pyogenes. Característico por presentar β-
hemólisis y sensibilidad al disco de bacitracina (A).

Sexto Agar S. Pneumoniae

1. Agar: Agar sangre

2. Tipo de hemólisis: Alfa (α-hemólisis). Se observa halo verdoso alrededor de
las colonias debido a la oxidación parcial de la hemoglobina, sin destrucción
completa del eritrocito.
3. Germen asociado: Streptococcus pneumoniae. Bacteria típica de α-hemólisis,
con colonias hundidas o mucoides dependiendo de su cápsula.
Séptimo Agar S. aereus

1. Agar: Agar Sangre

2. Tipo de Hemólisis: Beta hemolisis (Hemólisis Completa)
3. Germen Asociado: Staphylococcus aureus. Una bacteria Coagulasa-positiva
que es un patógeno importante. Produce hemolisinas que resultan en la lisis
completa de los eritrocitos.

Octavo Agar S. epidermidis

1. Agar: Agar Sangre

2. Tipo de Hemólisis: Gamma hemolisis (No-Hemolítica)
3. Germen Asociado: Staphylococcus epidermidis. Una bacteria típica Coagulasa-
negativa (CoNS) que forma parte de la microbiota normal de la piel. Sus colonias
son generalmente pequeñas, blancas y son notablemente no-hemolíticas en el
Agar Sangre.
2. Procedimiento para realizar pruebas de identificación rápida secuencia: desde
qué agar, género, especie que realiza cada prueba de catalasa y coagulasa,
resultado correspondiente.

Medio de partida: Agar sangre (5% sangre de carnero/oveja), incubado 18–24 h a 35–
37 °C en aire (permite ver hemólisis y recuperar Staphylococcus y Streptococcus).

Seleccionar colonias: elegir colonias bien aisladas (observar hemólisis: β, α, γ).

Catalasa: distinguir Staphylococcus (catalasa +) de Streptococcus/Enterococcus

(catalasa −).

Coagulasa (solo si catalasa +): distinguir S. aureus (coagulasa +) de estafilococos

coagulasa negativos (SCN) como S. epidermidis, S. saprophyticus (coagulasa −).

• Medio de cultivo de partida

Agar sangre 5%: incubar 18–24 h a 35–37 °C en atmósfera aerobica, ya que así nos
permite observar hemólisis (β-hemólisis típica de S. pyogenes, α de algunos
streptococos, γ no hemolíticos) y proporciona crecimiento óptimo para cocos Gram
positivos clínicos

• Prueba de Catalasa
Objetivo

Separar géneros catalasa positivos (p. ej. Staphylococcus, Bacillus) de catalasa

negativos (Streptococcus, Enterococcus).

Materiales

 Peróxido de hidrógeno al 3% (H₂O₂).

 Asa/aguja estéril o palillo.
 Portaobjetos o tubo limpio.

Procedimiento

1. Se esteriliza el asa con el mechero

2. Con el asa la enfriamos en los bordes sin colonias del agar

3. Usamos el asa y agarramos la colonia del agar.

4. Coloca 1 gota de H₂O₂ 3% sobre un portaobjetos limpio.

5. Con un asa estéril, toma una pequeña cantidad de una colonia fresca (18–24 h) del
agar sangre evitando arrastrar sangre.

6. Mezcla la colonia con la gota de H₂O₂ y observa inmediatamente.

 7. Resultado: burbujas inmediatas y abundantes = catalasa positiva; sin burbujeo =
catalasa negativa.

Controles: usar una colonia conocida catalasa positiva (p. ej. S. aureus) y una
catalasa negativa (p. ej. S. pyogenes).

Precauciones / errores comunes:

 Evitar tomar una colonia con mucha sangre (eritrocitos pueden producir falsos
burbujeos con H₂O₂)
 No usar peróxido vencido / contaminado.
 Si la reacción es débil, repetir con otra colonia o método en tubo.

• Prueba de Coagulasa
Objetivo

Diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa +) de estafilococos coagulasa negativos

(SCN).

Coagulasa puede presentarse como bound (ligada) o free (libre), por eso se realizan
slide (rápida) y, si negativa, tubo (más sensible).

Materiales

 Plasma humano o de conejo (tratado con EDTA u otro anticoagulante según

protocolo)
 Portaobjetos
 Tubos
 Incubador 35–37 °C.

Procedimiento (método en porta / método en tubo)

Método en porta/Slide test (Coagulasa ligada)

1. Coloca 1 gota de solución salina en un porta.

2. Suspende una colonia catalasa + en la gota de salina (crear una suspensión densa).
3. Añade 1 gota de plasma a la suspensión y mezclar suavemente.
 4. Observa inmediatamente hasta 1–2 minutos.
- Coagulasa ligada positiva (sugiere S. aureus).
- Negativo en slide, se procede al tube test

Método en tubo (Coagulasa libre)

1. Añadir 0.5 mL de plasma estéril en un tubo (recomendado plasma citratado o

EDTA).
2. Inocular con 2–3 colonias bien aisladas (con asa estéril).
3. Incubar a 35–37 °C y leer a 1–4 horas; si negativo a 4 h, re-incubar hasta 24 h y
volver a leer (leer cada 4–6 h según protocolo).
4. Positivo: formación de un coágulo firme que no se mueve al inclinar el tubo;
Negativo: muestra permanece líquida.

Controles: plasma sin inocular (negativo) y una cepa control de S. aureus (positiva).

Interpretación

● Coagulasa positiva: formación de coágulo o aglutinación visible.

○ Especie característica: Staphylococcus aureus.
● Coagulasa negativa: ausencia de coágulo/agregación.
○ Especies típicas: Staphylococcus epidermidis, S. saprophyticus, S.
haemolyticus, entre otros.

Errores:

● Leer coágulos débiles erróneamente como positivos: considerar sólo coágulos

firmes como positivos en tube test.
● Plasma inadecuado o degradado puede dar falsos negativos
 Secuencia resumida de identificación

1. Agar sangre (18–24 h): seleccionar colonias

Catalasa

 Sospecha Staphylococcus hacer: Coagulasa.

 Sospecha Streptococcus/Enterococcus: seguir con otras pruebas (optoquina,
bacitracina, bilis-esculina según sospecha).

Coagulasa (si catalasa +)

- S. aureus probable.
- Estafilococo coagulasa negativo (SCN): considerar pruebas adicionales (novobiocina,
sensibilidad, identificación por sistema automatizado)

Qué especies/diagnósticos sugiere cada resultado (ejemplos)

 Catalasa + / Coagulasa +: Staphylococcus aureus (colonia dorada, β-hemólisis

variable).
 Catalasa + / Coagulasa −: S. epidermidis, S. saprophyticus (colonias
blancas/cremosas; SCN).
 Catalasa −: Streptococcus spp. o Enterococcus spp. (a partir de aquí aplicar pruebas
específicas: bacitracina/optoquina/bilis-esculina).

3. Pruebas de identificación lenta:

BILIS ESCULINA
Bilis esculina permite la identificación de bacterias que pueden hidrolizar la esculina
cuando las sales biliares están presentes al 40%, el resultado es positivo si el medio
cambia su color a negro. Es una prueba de crecimiento lento y su importancia clínica
es que permite orientar el diagnóstico en procesos asociados a estos microorganismos.
Tolerancia a las sales biliares: El medio contiene sales biliares que inhiben a la mayoría
de bacterias grampositivas, excepto a estreptococos del grupo D y Enterococcus, que
poseen resistencia natural debido a su estructura de membrana y bombas de flujo.

Hidrolización de la esculina: La esculina es un glucósido que algunas bacterias pueden

hidrolizar mediante la enzima esculinasa, cuando la esculina es hidrolizada, se liberan
dos productos: Esculetina y Glucosa.

La esculetina reacciona con el ion férrico (Fe³⁺) del medio, formando un complejo
negro. Este ennegrecimiento indica un resultado positivo.
 PRUEBA DE BACITRACINA

La prueba de Bacitracina es una técnica utilizada para la identificación presuntiva de

Streptococcus pyogenes (estreptococo beta-hemolítico del grupo A).
Se basa en la particular sensibilidad de S. pyogenes a bajas concentraciones de
bacitracina (0.04 unidades), característica que no presentan la mayoría de los otros
estreptococos beta-hemolíticos.
El procedimiento consiste en sembrar el aislamiento bacteriano en agar sangre, que
permite observar el patrón de hemólisis beta, y colocar sobre la superficie un disco
impregnado con bacitracina.
La bacitracina actúa inhibiendo la síntesis de peptidoglicano, bloqueando el transporte
de los precursores de la pared celular hacia el exterior. S. pyogenes es especialmente
susceptible a este mecanismo, incluso a concentraciones muy bajas.

Género y especie asociadas

Sensible (halo presente):

Streptococcus pyogenes

• Forma típicamente beta-hemólisis completa

• Asociado a faringitis, impétigo, fiebre reumática, glomerulonefritis
postestreptocócica

Resistente:

• Streptococcus agalactiae (Grupo B)

• Streptococcus dysgalactiae (Grupo
C)
• Streptococcus anginosus group
• Otros estreptococos beta-hemolíticos
no pertenecientes al grupo A
 PRUEBA DE OPTOQUINA

Es un método utilizado para la identificación presuntiva de Streptococcus pneumoniae,

un estreptococo alfa-hemolítico característico.
La optoquina (etilhidrocupreína) es un agente químico que inhibe de manera selectiva
el crecimiento de S. pneumoniae al interferir en la bomba de protones de su membrana
citoplasmática. Esta inhibición provoca la pérdida de la homeostasis celular, lo que
detiene el crecimiento bacteriano.

En la prueba, se siembra el aislamiento en agar sangre, donde se puede observar la típica

alfa-hemólisis (hemólisis verde). Luego se coloca un disco impregnado con optoquina
(disco P) sobre la superficie del cultivo.
El tamaño del halo de inhibición permite distinguir entre S. pneumoniae y otros
estreptococos alfa-hemolíticos del grupo viridans, los cuales son resistentes a este
compuesto.

Género y especie asociadas

Sensible a optoquina (halo definido):

• Streptococcus pneumoniae
• Alfa-hemólisis típica
• Importante agente de neumonía, otitis media, sinusitis y meningitis

Resistentes a optoquina (sin halo o halo pequeño):

• Streptococcus mitis
• Streptococcus sanguinis
• Streptococcus mutans
• Otros Streptococcus del grupo viridans
4. Procedimiento cultivo de faringe, que germen espera encontrar

¿Qué es?
El cultivo de faringe, también conocido como cultivo de exudado faríngeo, es una
prueba utilizada para identificar qué microorganismo está provocando una infección a
nivel de la garganta. Se solicita con mayor frecuencia cuando existe la sospecha de una
faringitis de origen bacteriano y se necesita confirmar si hay un agente patógeno
específico involucrado.

Materiales:
1. Hisopo estéril
2. Bajalenguas
3. Asa bacteriológica
4. Mechero Bunsen
5. Placa de agar sangre

1 2 3y4 5

Procedimiento:
1. Se le pide al paciente que se siente derecho y que incline ligeramente la cabeza hacia
atrás, para facilitar la visualización interna de la boca.
2. Luego se le solicita que abra la boca lo más posible.
3. Para evitar que la lengua tape la garganta, se utiliza el bajalenguas y se la deprime
con firmeza pero con cuidado. Así se pueden ver directamente las amígdalas y la pared
posterior de la faringe.

4. Una vez visible la zona, se abre el hisopo estéril sujetándolo solo por el mango. La
punta no debe tocar nada antes de entrar en la boca.

5. Con movimientos suaves pero firmes, el hisopo se pasa sobre ambas amígdalas y la
pared posterior faríngea, que son las zonas donde más frecuentemente se alojan los
patógenos. Durante este paso es crucial evitar que el hisopo roce la lengua, los dientes
o las mejillas, porque esto puede arrastrar flora normal y contaminar la muestra.
6. Se abre el agar sangre y con el hisopo recién utilizado, se toca suavemente la
superficie del agar sangre para transferir la muestra.

[Link]és de esterilizar el asa y enfriar, se hace un primer estriado a lo largo de un

sector de la placa sin aplicar mucha presión para no dañar el agar.

8. Luego se realiza el estriado por agotamiento, que puede ser en zigzag o en cruz. Este
patrón de siembra tiene la finalidad de dispersar el material para que las bacterias se
separen y formen colonias individuales, lo cual es indispensable para diferenciarlas por
tipo de hemólisis.
9. Al finalizar la siembra, se cierra la placa para evitar exposición al ambiente.

11. Finalmente, la placa se coloca en su contenedor o incubadora.

Precauciones a tomar durante el procedimiento

Para garantizar que el cultivo faríngeo sea confiable, es necesario mantener un control
estricto durante la toma y el manejo de la muestra. En primer lugar, es fundamental
evitar cualquier tipo de contaminación. Esto implica que el hisopo no debe entrar en
contacto con la lengua, los dientes o las mejillas del paciente, ya que estas áreas
contienen flora normal que podría alterar el resultado. Además, el hisopo utilizado debe
ser completamente estéril y abrirse únicamente en el momento de la toma.

Una vez obtenida la muestra, el material debe manipularse con rapidez y de forma
adecuada. La siembra en la placa de agar sangre debe realizarse inmediatamente para
preservar la viabilidad del microorganismo. Asimismo, es esencial efectuar un estriado
correcto que permita la separación de las bacterias y la formación de colonias aisladas,
lo cual facilita la identificación y la observación del tipo de hemólisis.
Fundamento del agar sangre
El agar sangre es un medio enriquecido que permite recuperar bacterias exigentes y,
además, evaluar el tipo de hemólisis que producen. Se usa debido a que favorece el
crecimiento de Streptococcus y otros patógenos faríngeos y ayuda a diferenciar
microorganismos por su acción sobre los glóbulos rojos.

Tipos de hemólisis:
1. Beta-hemólisis:
• Hemólisis total.
• Se observa un halo claro alrededor de la colonia.
• Ejemplo clásico: Streptococcus pyogenes.

2. Alfa-hemólisis:
• Hemólisis parcial; halo verdoso.
• Típico de Streptococcus viridans o Streptococcus pneumoniae.

3. Gamma-hemólisis:
• No hay hemólisis.
• Colonias sin halo.

Gérmenes esperados en el cultivo de faringe y su relevancia clínica

En un cultivo de faringe pueden aparecer distintos microorganismos, ya que la
orofaringe es una zona donde se hallan microorganismos residentes de la faringe
acompañados de agentes patógenos que pueden aparecer de forma esporádica. Sin
embargo, cuando se solicita este tipo de cultivo, el germen que se busca principalmente
es Streptococcus pyogenes, también conocido como estreptococo β-hemolítico del
grupo A, este microorganismo es el principal que causa faringitis bacteriana aguda, por
lo que su identificación es importante por el riesgo de complicaciones no supurativas
como fiebre reumática o glomerulonefritis post estreptocócica. En el agar sangre suele
mostrar β-hemólisis bien definida, lo que facilita su sospecha inicial antes de las
pruebas confirmatorias.

Además de S. pyogenes, se pueden encontrar bacterias que forman parte de la flora

normal de la faringe, entre las cuales se encuentran los estreptococos del grupo viridans,
que producen α-hemólisis y no suelen tener relevancia clínica en cuadros faríngeos.
También pueden aparecer Staphylococcus aureus, algunas especies de Neisseria no
patógenas y, ocasionalmente Haemophilus influenzae, especialmente si la muestra se
siembra también en agar chocolate, estos microorganismos, aunque pueden estar
presentes no son los responsables de la faringitis aguda.

Por lo tanto, en el cultivo faríngeo se centra en reconocer si hay crecimiento de un β-

hemolítico compatible con S. pyogenes, evaluando la intensidad de la hemólisis y la
morfología en placa, para después confirmarlo con pruebas específicas como
bacitracina. En ausencia de S. pyogenes, el hallazgo de flora comensal se considera
normal y no explica por sí solo un cuadro clínico de faringitis.

Pruebas de identificación lenta: Bilis esculina

BACITRACINA
Fundamento de la prueba

La prueba de bacitracina es una técnica utilizada para la

identificación presuntiva de Streptococcus pyogenes
(estreptococo beta-hemolítico del grupo A).
Se basa en la particular sensibilidad de S. pyogenes a bajas
concentraciones de bacitracina , característica que no
presentan la mayoría de los otros estreptococos beta-
hemolíticos.

El procedimiento consiste en sembrar el aislamiento

bacteriano en agar sangre, que permite observar el patrón
de hemólisis beta, y colocar sobre la superficie un disco impregnado con bacitracina.
La bacitracina actúa inhibiendo la síntesis de peptidoglicano, bloqueando el transporte
de los precursores de la pared celular hacia el exterior. S. pyogenes es especialmente
susceptible a este mecanismo, incluso a concentraciones muy bajas.

Resultado esperado (ampliado)

● Sensible (halo de inhibición):

Se observa una zona clara alrededor del disco, donde el crecimiento
bacteriano fue inhibido.
Esto indica que la cepa es probablemente Streptococcus pyogenes (Grupo A),
ya que este germen muestra sensibilidad característica.

● Resistente (sin halo o halo mínimo):

El crecimiento llega hasta el borde del
disco o presenta un halo muy pequeño
no significativo.
Este resultado es típico de otros
estreptococos beta-hemolíticos, como
Streptococcus agalactiae (Grupo B),
grupo C o grupo G.
Esta es una prueba presuntiva, útil en el contexto del patrón de hemólisis beta. Se
suele complementar con pruebas de detección de antígenos o PYR.

5. Procedimiento y resultado de prueba Strep A, qué germen espera encontrar?

¿Qué es la prueba Strep A?

La prueba Strep A es un test rápido que se usa para analizar un hisopado de la garganta
y ver si en la muestra está presente el antígeno del estreptococo del grupo A. Es una
prueba sencilla, de lectura rápida, que ayuda a identificar si la faringitis puede ser
causada por esta bacteria.

Procedimiento:

Materiales para la prueba Strep A

● Hisopo estéril para toma de muestra faríngea

● Kit de prueba rápida Strep A (cassette o dispositivo de lectura)
● Reactivo 1 (solución extractora)
● Reactivo 2 (solución neutralizante)
● Tubo de extracción
● Guantes
● Contenedor para desechos biológicos

Procedimiento:

1. Preparar materiales y equipo.

Se revisan y colocan el kit, reactivos, hisopos y guantes sobre la mesa limpia
para evitar errores y contaminación cruzada.
2. Tomar la muestra faríngea con el hisopo.
Con guantes, se pasa el hisopo por las amígdalas y la pared posterior de la faringe
sin tocar lengua ni mucosa bucal para obtener la mayor cantidad de secreción
posible.

3. Colocar el hisopo en el tubo con reactivo 1.

Se introduce y presiona/gira el hisopo dentro del reactivo para liberar el antígeno
bacteriano de las fibras del hisopo al medio líquido.

4. Añadir reactivo 2 y mezclar.

Se agrega el segundo reactivo para completar la extracción y neutralizar o
preparar la muestra; se mezcla suavemente para homogeneizar el extracto.
5. Retirar el hisopo dejando el extracto en el tubo.
Se extrae el hisopo apretándolo contra la pared del tubo para liberar todo el
líquido; así el extracto recoge el antígeno disponible.

6. Aplicar 2–3 gotas del extracto en el cassette de la prueba.

Se depositan las gotas en la ventana del dispositivo para que el líquido fluya y
reaccione con los anticuerpos inmovilizados.

7. Leer el resultado en el tiempo indicado.

Se verifica la línea de control y la de prueba: la aparición de la línea de prueba
indica antígeno de S. pyogenes; la ausencia sugiere que no se detectó.
 Resultados:
El resultado negativo indica que no se detectó el antígeno específico del
Streptococcus pyogenes (estreptococo beta-hemolítico del grupo A) en el hisopado
faríngeo. La prueba Strep A utiliza un método inmunocromatográfico que solo
reacciona cuando está presente el carbohidrato del grupo A en cantidades
suficientes.

Por lo tanto, un resultado negativo sugiere que el paciente no presenta una faringitis
causada por S. pyogenes, o que la concentración del antígeno es inferior al límite
de detección del test. En la mayoría de los casos, este hallazgo orienta hacia una
etiología viral, mucho más frecuente en las faringitis, o hacia la presencia de otros
estreptococos no pertenecientes al grupo A que no son detectados por esta prueba.

Además, como la sensibilidad de los test rápidos oscila entre 70–90 %, un resultado
negativo no descarta al 100 % la infección; sin embargo, en el contexto de
laboratorio docente, el resultado se acepta como ausencia de S. pyogenes en la
muestra.

¿Qué germen espera encontrar?

El germen que se espera encontrar con la prueba Strep A es Streptococcus pyogenes,

conocido como estreptococo beta-hemolítico del grupo A. Este microorganismo es el
principal causante de las faringitis bacterianas agudas y por eso esta prueba está
diseñada exclusivamente para detectarlo. Si el test llega a dar positivo, significa que en
la muestra hay antígeno de S. pyogenes, lo que confirma la presencia de esta bacteria
en la garganta. Como la prueba es específica para este germen, no detecta otros tipos
de estreptococos ni otras bacterias que también pueden estar en la faringe.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Murray, Rosenthal & Pfaller. Microbiología Médica, 9.ª ed. Elsevier.

2. TECiL. (2020, octubre). Prueba rápida de antígeno COVID-19 (Hisopo nasofaríngeo)
[Folleto informativo]. [Link]
[Link]
3. Mayo Clinic. (2024, febrero 28). Prueba de diagnóstico de COVID-19. Mayo Clinic.
[Link]
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