Práctica de Laboratorio N°13

Programa Académico: MEDICINA Experiencia curricular: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Semestre académico: 2025-01 Ciclo de estudios: V Tiempo de desarrollo: 3 horas
Temática: Diagnóstico microbiológico de Infecciones de Transmisión Sexual: Treponema pallidum,
Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, VIH, Virus Papiloma Humano, Virus de la hepatitis B.
Lopez Pasapera Rut de los Angeles

DIÁGNOSTICOS:
1. Treponema pallidum (Sífilis)
Tipo de muestra
 Exudado de chancro.
 Sangre (para pruebas serológicas).
Diagnóstico directo
 Microscopía de campo oscuro: visualización directa del espiroqueta en lesiones
primarias.
 Tinción: No se tiñe bien con Gram; se usan tinciones argénticas (no es rutinario).
Cultivo
 No crece en medios artificiales → no se realiza cultivo.
Pruebas de identificación
Pruebas no treponémicas
 VDRL
 RPR
Detectan anticuerpos reagínicos → útiles para tamizaje y control de tratamiento.
Pruebas treponémicas
 FTA-ABS
 TPPA
 EIA/CLIA (anticuerpos contra T. pallidum)
Confirmatorias.
Diagnóstico molecular
 PCR en lesiones o sangre (más sensible en etapas tempranas).

2. Neisseria gonorrhoeae (Gonorrea)

Tipo de muestra
 Exudado uretral, endocervical, rectal, faríngeo.
 Primera orina del día en varones.
Tinción y examen directo
 Gram: diplococos Gram negativos intracelulares → diagnóstico rápido en varones con
uretritis.
Cultivo
 Medio selectivo Thayer–Martin o Martin-Lewis.
 Incubación en CO₂ al 5%.
Identificación
 Oxidasa (+)
 Fermentación de glucosa (solo glucosa)
 MALDI-TOF (en laboratorios avanzados)
Diagnóstico molecular
 NAAT/RT-PCR: prueba de elección por alta sensibilidad, especialmente en mujeres.
3. Trichomonas vaginalis (Tricomoniasis)
Tipo de muestra
 Flujo vaginal, uretral o primera orina.
Diagnóstico directo
 Examen en fresco: observación de trofozoíto móvil (muy rápido pero poca
sensibilidad).
 Tinción de Papanicolaou (incidental).
Cultivo
 Medio Diamond modificado (más sensible que el examen en fresco).
Diagnóstico molecular
 PCR / NAAT: prueba de elección por alta sensibilidad.
Pruebas rápidas
 Inmunocromatografía (antígenos).
4. VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana)
Tipo de muestra
 Sangre.
Diagnóstico directo (agudo)
  Carga viral por PCR (ARN de VIH)
Detecta infección en fase muy temprana.
Pruebas serológicas
Tamizaje
 Prueba combinada de 4ª generación: Ag p24 + anticuerpos (VIH-1/VIH-2).
Es el método estándar actual.
Confirmación
 Diferenciación VIH-1 / VIH-2 por inmunoensayo.
 Western Blot está en desuso en muchos países.
5. Virus del Papiloma Humano (VPH)
Tipo de muestra
 Células del cuello uterino (citología).
 Muestras genitales para PCR.
Diagnóstico directo
 No se observa el virus directamente.
Citología (Papanicolaou)
 Detecta cambios celulares (coilocitos) → no diagnostica VPH, detecta lesiones
asociadas.
Pruebas moleculares
 PCR / captura híbrida (HC2)
Detecta ADN de VPH de alto riesgo (16, 18, etc.)
→ Es la prueba diagnóstica más importante.
Genotipificación
 Identifica tipos específicos de VPH.
6. Virus de la Hepatitis B (VHB)
Tipo de muestra
 Sangre.
Pruebas serológicas
Para diagnóstico de infección activa
 HBsAg (+) → infección actual.
 HBeAg (+) → alta infectividad.
Para infección pasada o inmunidad
 Anti-HBc IgM (+) → infección aguda.
 Anti-HBs (+) → inmunidad o recuperación.
Diagnóstico molecular
 PCR cuantitativa: ADN del VHB
Evalúa carga viral y monitoreo de tratamiento.
No se cultiva
No hay cultivo clínico disponible.

- Fundamentar e interpretar los métodos de diagnóstico para Infecciones de

Transmisión Sexual.
Las Infecciones de Transmisión Sexual requieren métodos que detecten:
A. El microorganismo directamente
 Neisseria gonorrhoeae: tinción de Gram, cultivo en medios especiales.
 Trichomonas vaginalis: examen en fresco, cultivos o PCR.
 Treponema pallidum: microscopía de campo oscuro, PCR.
 VPH: PCR para ADN viral.
 VIH y VHB: detección de antígenos, anticuerpos y carga viral.
Interpretación: Estos métodos confirman infección activa cuando el microorganismo o su
material genético están presentes.
B. La respuesta inmune del paciente
 VDRL, RPR, TPHA para Treponema pallidum.
 Pruebas de anticuerpos VIH.
 Serología para Hepatitis B (HBsAg, anti-HBc, anti-HBs).
Interpretación: Útiles para tamizaje, confirmación y seguimiento del tratamiento.
C. Métodos moleculares (PCR, NAAT)
Se usan para:
 VIH (ARN viral)
 VPH (ADN viral)
 Neisseria gonorrhoeae y Chlamydia
 Trichomonas vaginalis
Interpretación: Altamente sensibles y específicos, detectan incluso sin síntomas.

- Identificar los agentes infecciosos que causan ITS: Treponema pallidum, Neisseria
gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis, VIH, Virus Papiloma Humano, Virus de la
hepatitis B.
Treponema pallidum

Espiroqueta que causa sífilis. No se cultiva. Diagnóstico: VDRL/RPR, TPHA, FTA-ABS, PCR.
Neisseria gonorrhoeae

Diplococo Gram negativo intracelular, causa gonorrea. Se cultiva en agar chocolate y Thayer-
Martin.

Trichomonas vaginalis

Protozoario flagelado. Diagnóstico: examen en fresco, cultivo, pruebas rápidas o PCR.

VIH

Retrovirus (ARN). Diagnóstico: prueba de 4ta generación (Ag p24 + Ac) y PCR.

Virus del Papiloma Humano (VPH)

Virus ADN. Diagnóstico: PCR, Captura Híbrida, citología para lesiones.

Virus de Hepatitis B (VHB)

Virus ADN. Diagnóstico: HBsAg, anti-HBc, anti-HBs, PCR de ADN viral.

- Para que es el agar chocolate, agar Thayer-Martin y para qué es la Prueba de

fermentación de carbohidratos
Agar chocolate

 Medio enriquecido con eritrocitos lisados.

 Proporciona factor V (NAD) y factor X (hemina) necesarios para:
o Neisseria gonorrhoeae
o Haemophilus

Uso en ITS: Permite aislar Neisseria gonorrhoeae de muestras urogenitales.

Medio selectivo para Neisseria gonorrhoeae

Contiene antibióticos:

 Vancomicina → inhibe Gram +

 Colistina → inhibe Gram –
 Nistatina → inhibe hongos

Uso en ITS: Aísla exclusivamente Neisseria gonorrhoeae, evitando contaminación de flora

genital.
Es el medio de cultivo estándar para gonorrea.

Diferencia especies de Neisseria según los azúcares que fermentan:

Bacteria Glucosa Maltosa Lactosa Sucrosa

Neisseria + – – –
gonorrhoeae
Neisseria + + – –
meningitidis
 - Para que es la Prueba de RPR y la Prueba de VDRL

Ambas son pruebas NO TREPONÉMICAS para sífilis.

RPR (Rapid Plasma Reagin)

VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)

Detectan anticuerpos reagínicos (IgG/IgM) contra lípidos liberados por daño celular
(cardiolipina).

Uso:

 Pruebas de tamizaje para sífilis.

 Monitoreo de tratamiento (los títulos deben disminuir).
 Detección temprana (aunque puede fallar en sífilis primaria).

Interpretación:

 Positivos → sospecha de sífilis

 Falsos positivos pueden ocurrir (embarazo, lupus, TB, malaria, COVID, etc.)

Siempre se confirman con pruebas treponémicas.

- Para que se utiliza el TPHA y la prueba Western-blot

TPHA (Treponema pallidum Hemagglutination Assay)

Prueba treponémica confirmatoria.

Detecta anticuerpos específicos contra Treponema pallidum.

Uso:

Permanece positivo de por vida ⇒ NO sirve para control del tratamiento.

 Confirmar sífilis cuando RPR/VDRL salen positivos.


¿Para qué se usa la prueba WESTERN BLOT?

Prueba confirmatoria para VIH: (En algunos países ya reemplazada por pruebas de 4ta
generación + diferenciación VIH-1/VIH-2).
Qué detecta: Anticuerpos contra proteínas específicas del VIH:

 gp120, gp160
 p24, p31, p55

Uso:

 Confirmar infección por VIH cuando el tamizaje es positivo.

 Evitar falsos positivos de pruebas rápidas o ELISA.
INTERPRETACIÓN:
Interpretación general del diagnóstico microbiológico de ITS:
El documento presenta los métodos fundamentales para diagnosticar las infecciones de
transmisión sexual más prevalentes: Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum,
Trichomonas vaginalis, VIH, VPH y VHB. Cada agente requiere técnicas
microbiológicas específicas, debido a sus diferencias biológicas (bacteria, parásito o
virus) y a su comportamiento en el huésped.
La práctica enfatiza que el diagnóstico clínico por sí solo no es suficiente, pues muchas
ITS son asintomáticas o presentan síntomas similares. Por ello, la confirmación de
laboratorio es indispensable para vigilancia epidemiológica, tratamiento oportuno y
prevención de complicaciones graves como infertilidad, neurosífilis, cáncer
cervicouterino o transmisión materno-infantil.
Discusión del diagnóstico de ITS
1. La diversidad biológica define el método diagnóstico.
No se puede usar el mismo método para N. gonorrhoeae (bacteria), T. pallidum
(espiroqueta), T. vaginalis (protozoario) o virus (VPH, VIH, VHB).
2. La sensibilidad de los métodos varía según la etapa clínica.
o Campo oscuro: útil en sífilis primaria.
o RPR/VDRL: más útiles en fases secundarias y latentes.
o NAAT/PCR: detectan infecciones incluso sin síntomas.
3. Las pruebas rápidas mejoran la accesibilidad, pero deben confirmarse con
métodos más específicos.
4. Interpretar correctamente los resultados evita falsos diagnósticos, sobre
todo en sífilis, donde falsos positivos son frecuentes.
5. El diagnóstico temprano evita complicaciones graves, como:
o Infertilidad por gonorrea.
o Neurosífilis.
o Carcinoma cervical por VPH.
o Inmunodeficiencia progresiva por VIH.
o Hepatocarcinoma por VHB.
6. La práctica destaca la importancia epidemiológica, ya que la OMS reporta
millones de casos y muchas ITS son asintomáticas.
 Agente Método(s) utilizado(s) según Fundamento Interpretación de Análisis crítico del método (ventajas y
etiológico el documento microbiológico resultados limitaciones)
Neisseria - Tinción de Gram- Cultivo en Diplococo Gram - Gram (+ en varón): Ventajas: Gram muy sensible en
gonorrhoeae agar chocolate y Thayer- negativo intracelular diplococos Gram (–) varones (>98%). Cultivo permite
Martin- Pruebas bioquímicas: que requiere medios intracelulares → estudio de [Link]: En
Oxidasa(+), Catalasa(+), enriquecidos y CO₂ gonorrea confirmada.- mujeres el Gram es poco confiable.
Fermentación de para crecer; es muy Cultivo: colonias Gonococo muy delicado: si la muestra
carbohidratos (Glucosa +, frágil y muere fuera grisáceas, opacas 0.5–1 se transporta mal, el cultivo falla.
Maltosa −, Sacarosa −) del cuerpo mm en 24–48 h.-
rápidamente. Fermentación solo de
glucosa confirma
especie.
Treponema - Microscopía de campo Espiroqueta móvil - Campo oscuro Ventajas: Campo oscuro detecta
pallidum oscuro- Pruebas no que no se cultiva en mostrando espiroquetas infección activa temprana. Serologías
treponémicas: RPR, VDRL- medios artificiales; móviles confirma sífilis permiten diagnóstico en fases
Pruebas treponémicas: FTA- requiere detección primaria.- RPR/VDRL [Link]: Falsos
ABS, TPHA, Western Blot directa o serológica. positivos → infección positivos en no treponémicas; pruebas
probable (pero falsos treponémicas permanecen positivas de
positivos posibles).- por vida (no sirven para seguimiento).
FTA-ABS/TPHA
positivos →
confirmación definitiva.
Trichomonas - Examen en fresco- Tinción Protozoario flagelado - Visualización de Ventajas: Examen rápido y
vaginalis de lámina móvil; la movilidad es trofozoítos móviles → [Link]: Baja sensibilidad
la clave diagnóstica. infección confirmada.- (50–60%); si el trofozoíto pierde
En tinción: forma movilidad, puede dar falsos negativos.
piriforme, núcleo y
flagelos.
VIH - Pruebas rápidas de Virus ARN retroviral; - Prueba rápida positiva Ventajas: Detección temprana con Ag
inmunocromatografía- detección combinada = sospecha.- Prueba p24. Pruebas rápidas
 Flujograma de diagnóstico de Ag p24 + confirmatoria o [Link]: Puede existir
(prueba combinada, anticuerpos reduce el diferenciadora = período ventana; pruebas rápidas
confirmación, carga viral) período ventana. diagnóstico final.- Carga pueden dar falsos positivos si no se
viral: confirma infección confirman.
y seguimiento.
Virus de - Citología de mucosa Virus ADN que - Pap: identifica lesiones Ventajas: Pap detecta lesiones
Papiloma cervical (Pap)- Pruebas infecta epitelios; sugestivas, no detecta [Link]: Pap no
Humano moleculares (se mencionan en genera cambios virus directamente.- detecta infección temprana; pruebas
(VPH) introducción general) citopáticos Moleculares: detectan moleculares no están en toda práctica
(coilocitosis). ADN viral y tipifican. básica.
Virus de - Pruebas rápidas: HBsAg, Virus ADN - HBsAg (+) = infección Ventajas: Pruebas rápidas permiten
Hepatitis B Anti-HBs, HBeAg hepatotropo con activa.- HBeAg (+) = diagnóstico [Link]:
(VHB) múltiples antígenos alta infectividad.- Anti- No diferencian infección aguda vs
que permiten definir HBs (+) = inmunidad. crónica sin panel completo; no mide
estadio de infección. carga viral.
ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS
Plantear el esquema para el diagnóstico microbiológico de las ITS.
ESQUEMA GENERAL DEL PROCESO DIAGNÓSTICO EN INFECCIONES DE
TRANSMISIÓN SEXUAL
1. Obtención de muestras clínicas
o Hisopado endocervical, uretral o anal.

o Exudado faríngeo en casos de prácticas orogenitales.

o Primera orina de la mañana para detección de patógenos intracelulares.

o Muestra de sangre para estudios serológicos (VIH, sífilis, hepatitis).

2. Evaluación microscópica directa

o Gram: permite visualizar morfología bacteriana y la presencia de neutrófilos.

 Diplococos gramnegativos → sospecha de Neisseria gonorrhoeae.

 Leucocitos sin microorganismos → sugiere infección por Chlamydia
trachomatis.
3. Cultivo microbiológico
o N. gonorrhoeae: medios selectivos como Thayer-Martin o Martin-Lewis.

o H. ducreyi: cultivo en agar chocolate enriquecido.

o Trichomonas vaginalis: medios especializados para protozoarios.

o Patógenos no cultivables (p. ej., T. pallidum) se diagnostican por pruebas

indirectas.
4. Métodos de diagnóstico molecular
o Pruebas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) para Chlamydia y
gonorrea (gold standard).
o Técnicas de amplificación isotérmica o PCR en tiempo real según
disponibilidad.
5. Pruebas serológicas
o Sífilis: pruebas no treponémicas (VDRL/RPR) y treponémicas confirmatorias.

o VIH: ELISA de cuarta generación y prueba confirmatoria.

o Hepatitis B: detección de HBsAg y anticuerpos asociados.

6. Estudios de sensibilidad antimicrobiana

o Cuando se dispone del aislamiento, se realizan antibiogramas para orientar el
tratamiento, sobre todo en gonorrea debido a la resistencia actual.
Elaborar una tabla con las principales características de las ITS.

Agente Tipo de Vía de Manifestaciones Método

etiológico patógeno transmisión clínicas típicas diagnóstico
principal

Neisseria Bacteria Contacto Uretritis purulenta, Gram, cultivo

gonorrhoeae gramnegativa sexual y cervicitis, artritis selectivo,
perinatal gonocócica NAAT

Chlamydia Bacteria Sexual Uretritis, cervicitis NAAT

trachomatis intracelular mucopurulenta,
enfermedad pélvica
inflamatoria

Treponema Espiroqueta Sexual, Chancro, exantema Pruebas

pallidum vertical palmoplantar, serológicas
complicaciones tardías

Trichomonas Protozoario Sexual Flujo espumoso, Microscopía en

vaginalis prurito, eritema vulvar fresco, pruebas
rápidas

VIH Retrovirus Sexual, Síndrome retroviral Pruebas

vertical, agudo, serológicas y
parenteral inmunosupresión carga viral
progresiva

Virus del Virus ADN Sexual Vesículas dolorosas PCR o cultivo

herpes simple recurrentes viral
(HSV-2)

Virus de Virus ADN Sexual, Asintomático o Detección de

hepatitis B vertical hepatitis aguda, riesgo HBsAg
de cronicidad
Explicar la importancia médica de las ITS.
Desde el punto de vista médico, su importancia radica en varios aspectos:
1. Alta carga de enfermedad
Las ITS afectan a millones de personas y muchas cursan de manera silenciosa,
favoreciendo su diseminación.
2. Consecuencias reproductivas
Infecciones como clamidia y gonorrea pueden provocar enfermedad pélvica
inflamatoria, infertilidad y embarazos ectópicos.
3. Complicaciones sistémicas
Enfermedades como la sífilis pueden comprometer órganos vitales en fases tardías
(cardiovascular, neurológico).
4. Incremento del riesgo de adquirir VIH
La presencia de úlceras genitales o inflamación facilita la transmisión del virus.
5. Transmisión perinatal
Varias ITS pueden infectar al recién nacido, generando desde conjuntivitis neonatorum
hasta sífilis congénita.
6. Resistencia antimicrobiana
Especialmente en N. gonorrhoeae, se observa pérdida de sensibilidad a múltiples
grupos de antibióticos, dificultando el tratamiento.
7. Impacto psicológico y social
Estas patologías pueden generar estigma, ansiedad, cambios en la vida sexual y
dificultades en relaciones interpersonales.