CULTIVOS DE MICROORGANISMOS FOTOSINT…TICOS

Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

TEMA 1. INTRODUCCI”N A LOS MICROORGANISMOS

FOTOSINT…TICOS
1. CARACTERÕSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS CON FOTOSÕNTESIS OXIG…NICA
Si hablamos del término “algas”, podemos incluir tanto las macroalgas que son pluricelulares como las
microalgas que son unicelulares, por lo que viven formando asociaciones o colonias. Aunque no es del todo
correcto, tambiÈn podrÌamos incluir las cianobacterias que son bacterias fotosintÈticas. Antes se incluÌan
llam·ndolas algas verdes-azuladas por los pigmentos que tienen, pero lo correcto es que pertenecen al reino
procariota.

En ambos casos estamos hablando de organismos fotosintÈticos que carecen de tejidos vasculares, son
organismos que no tienen ni raÌces ni tallos ni hojas definidas. Contienen clorofila a y β-caroteno, y estructuras
reproductivas simples. No tienen tejidos vasculares porque al vivir en flotaciÛn en un medio acu·tico tienen
muy accesibles todos los nutrientes.

Hay dos tipos de fotosÌntesis anoxigÈnica y oxigÈnica, en funciÛn de la fuente de los electrones. Nos vamos a
centrar en la oxigÈnica. Los electrones provienen del agua, se produce la fotÛlisis del agua y el transporte
electrÛnico fotosintÈtico en las membranas de los tilacoides, como consecuencia se va a generar una
transformaciÛn de energÌa, se transforma la radiaciÛn electromagnÈtica del sol en otras formas de energÌa como
serÌa la Redox que es NADPH, y tambiÈn se genera la ferredoxina reducida.

En estas reacciones lumÌnicas se produce el transporte electrÛnico fotosintÈtico, por tanto, surge un gradiente
de protones/electroquÌmico a lo largo de las membranas tilacoidales que es motor para la sÌntesis de energÌa
quÌmica en forma de ATP. Estas formas de energÌa se consumen en parte en las reacciones metabÛlicas del
carbono fotosintÈticas que tienen lugar en los cloroplastos de las plantas vasculares y microalgas y las catalizan
las enzimas que est·n en el estroma del cloroplasto. AhÌ se produce la fijaciÛn por el Ciclo de Calvin del CO2 y
da lugar a la formaciÛn de otras formas de carbono.

Las algas se pueden clasificar atendiendo a los siguientes criterios:

− Seg˙n los pigmentos fotosintÈticos que posee. El color que tiene una especie va a ser el del pigmento
predominante. De manera que, los pigmentos fotosintÈticos se componen de un cromÛforo que absorbe a
radiaciÛn electromagnÈtica gracias a sus dobles enlaces conjugados unido a una o varias proteÌnas, lo que
le permite tener la orientaciÛn adecuada para la captaciÛn de la luz y la transmisiÛn de la energÌa. Hay tres
tipos de cromÛforos en los pigmentos fotosintÈticos: clorofilas, carotenoides y ficobilinas (Ficoeritrobilinas,
Ficocianobilinas).
Pigmento Color del pigmento RadiaciÛn absorbida
Clorofilas Verde M·ximo de absorciÛn en la zona del azul (400-
480nm) y del rojo (600-690nm).
Carotenoides Amarillo-anaranjado Absorben en la zona del azul y del verde(350-
540nm).
Ficoeritrina Rojizo Absorben en la zona del azul-verdoso (460-
580nm).
Ficocianina Azulado Absorbe en regiÛn verde-amarillo (500-650nm).
− Seg˙n el carbohidrato de reserva de la fotosÌntesis: en el caso de las plantas vasculares el carbohidrato
principal de reserva es el almidÛn, que es una macromolÈcula que se sintetiza a partir de carbono fijado en
el Ciclo de Calvin y se acumula en el cloroplasto. Los compuestos de reserva productos de la fotosÌntesis
van a ser el almidÛn y polisac·ridos similares que se pueden acumular en cloroplastos, vacuolas, citoplasto,
etc.
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− Motilidad: se refiere a la capacidad de movimiento de las algas. Algunas algas presentan esta capacidad
debido a que poseen flagelos que solo estas presenten en determinados ciclos de la vida de esas algas. Las
que no tienen flagelos se mueven por las corrientes del agua.
− Pared celular: puede ser una simple cubierta alrededor de lo que serÌa el protoplasto o una estructura m·s
compleja, en la mayorÌa de los casos presentan una estructura compleja. Esta pared celular puede tener
diferentes componentes como son celulosa, mananos, xilanos, ·cido algÌnico, polisac·ridos sulfatados,
carbonato c·lcico y diÛxido de silicio.
− Otros criterios: las caracterÌsticas de forma (aisladas, colonias), h·bitat, pH y temperatura Ûptimos, an·lisis
del genoma, etc.

A. CARBOHIDRATOS DE RESERVA
1. AlmidÛn: polisac·rido de glucosa con enlaces α-1,4 y α-1,6. Formado por amilosa y amilopectina. Es el
carbohidrato de reserva en ClorofÌceas (sÌntesis y acumulaciÛn en cloroplasto) y PirrofÌceas/DinofÌceas
(acumulaciÛn en citoplasma).
2. AlmidÛn de florÌdeas: similar al almidÛn, pero es un polisac·rido de amilopectina con cadenas ramificadas.
Es el carbohidrato de reserva en RodofÌceas, algas rojas, se acumula en el citoplasma.
3. GlucÛgeno: polisac·rido de glucosa similar a la amilopectina del almidÛn, aunque m·s ramificado. Es el
carbohidrato de reserva en cianobacterias, se encuentra por el citoplasto/citoplasma (las cianobacterias no
tienen cloroplastos).
Hasta aquÌ son polisac·ridos formados por glucosas unidas por enlaces glucosÌdicos tipo α. Ahora vamos a ver
los β-glucanos, unidos por enlaces glucosÌdicos tipo β.
4. Paramilo: polisac·rido de glucosa con enlaces β-1,3. Es el polisac·rido de reserva de las EuglenofÌceas y su
sÌntesis y acumulaciÛn es en el citoplasma.
5. Crisolaminarina: polisac·rido de glucosa con enlaces β-1,3 y ramificaciones β-1,6 en proporciÛn 11:1. Es el
polisac·rido de reserva de las HaptofÌceas, BacilariofÌceas (diatomeas) y CrisofÌceas (algas doradas). En las
algas doradas se acumula en las vacuolas (sÌntesis en el citoplasma).
6. Laminarina: polisacáridos de glucosa con enlaces β-1,3 y β-1,6 en proporciÛn 3:1. Es el polisac·rido de
reserva de las FeofÌceas (algas pardas) que se acumulan en las vacuolas. …stas adem·s de laminarinas
pueden acumular manitol.

B. POSIBLES CARACTERÕSTICAS DE LAS ALGAS FOTOSINT…TICAS DEL REINO PROTISTA

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2. CARACTERÕSTICAS MOFORL”GICAS Y FOTOSINT…TICAS GENERALES DE LAS

CIANOBACTERIAS Y MICROALGAS
Comparando los tamaÒos de diferentes cÈlulas tenemos que el micoplasma mide 0,3-0,8µm, [Link] 1x2µm,
cianobacteria 10µm de di·metro y cÈlula de una planta 30x75µm. Podemos encontrar microalgas con tamaÒos
muy diversos (normalmente 22µm).

Las algas est·n formadas por el aparato fotosintÈtico que serÌan las membranas tilacoidales, el pirenoide,
mitocondrias, n˙cleo definido, etc. La diferencia con las cianobacterias es que Èstas no tienen n˙cleo definido
y no tienen org·nulos como el cloroplasto.

A. CIANOBACTERIAS
Son conocidas tambiÈn como las algas verdeazuladas en algunas clasificaciones. Son microorganismos
procariotas, pero realizan la fotosÌntesis oxigÈnica como las plantas vasculares y las microalgas eucariotas. Hay
diferentes subgrupos de cianobacterias, desde formas simples que viven de forma unicelular a otras que
adoptan una unidad estructural que forman un filamento de cÈlulas llamado tricoma. Estos tricomas pueden
estar formados ˙nicamente por cÈlulas vegetativas o en condiciones de estrÈs ambiental parte de sus cÈlulas
se pueden diferenciar para dar heterocistos (no poseen fotosistema II y pueden fijar nitrÛgeno) y acinetos
(formas m·s resistentes y grandes que la cÈlula vegetativa al tener la pared celular m·s gruesa).

La organizaciÛn interna en la cÈlula de cianobacteria desde el interior hacia fuera:

− Una regiÛn central (centroplasma o nucleoplasma) rica en ·cidos nucleicos que contiene el nucleosoma
(ADN).
− Una regiÛn perifÈrica (cromoplasma) que contiene las membranas tilacoidales fotosintÈticas, asÌ como
varias inclusiones.
− Una membrana plasm·tica o plasmalema.
− Una pared celular con varias capas envolventes.
− A menudo una capa de mucÌlago que suele tener una funciÛn de protecciÛn frente a la desecaciÛn
manteniendo la humedad de la cÈlula y facilitando el movimiento.
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− Pueden presentar diversos tipos de inclusiones (carboxisomas, gr·nulos de polifosfato, gr·nulos de

glucÛgeno y gr·nulos de cianoficina). Son unas formas de reserva de compuestos org·nicos e inorg·nicos.
▪ C·psula o membrana externa (a).
▪ Pared de peptidoglucano (b).
▪ Membrana plasm·tica (c).
▪ Cromoplasma (d).
▪ Gr·nulos de cianoficina (e): reserva de
nitrÛgeno, de amino·cidos. Son polÌmeros que
tienen una alta masa molecular formados por
arginina y ·cido asp·rtico en proporciÛn 1:1. Est·
formado por un n˙cleo de poliasp·rtico en el que
todos los carboxilos est·n unidos con L-arginina.
Los podemos ver en cÈlulas vegetativas, en los
acinetos son muy evidentes.
▪ Ribosomas (f): m·s pequeÒos que los de las eucariotas.
▪ Gr·nulos de glucÛgeno (g) o de polisac·ridos: es una forma de reserva de carbono. Suelen estar entre
las lamelas fotosintÈticas y presentar distintas formas (cristal, disco, barras). En periodos de oscuridad
prolongada desaparecen porque no hay fotosÌntesis ni fijaciÛn de CO2, y son productos de la
fotosÌntesis.
Se sintetizan a partir de glucosa-6-P por reacciones muy parecidas a la sÌntesis del almidÛn. Esta glucosa
por la enzima fosfoglucomutasa se transforma en glucosa-1-P, y Èsta con consumo de ATP da lugar a
ADP-glucosa + pirofosfato. Esta ADP-glucosa es la que va a reaccionar con el polÌmero creciente de
glucano formado por glucosas para liberar ADP..
▪ Cuerpos lipÌdicos (h).
▪ Carboxisomas (i): tienen una forma poliÈdrica que contiene en su interior las molÈculas de la RuBisCO
y anhidrasas carbÛnicas para transformar el bicarbonato en CO2 que es el sustrato de la RuBisCO.
Contienen 5-6 proteÌnas alrededor de la RuBisCO que forman la envuelta. Esto tiene interÈs para
obtener plantas transgÈnicas porque los mecanismos de concentraciÛn de concentrar CO2 en las plantas
son C4 y CAM. Entonces, los C4 son muy productivos, pero tienen una organizaciÛn anatÛmica diferente
a las C3 por lo que es muy difÌcil de extrapolar. Por ello, ha habido intentos de expresar los carboxisomas
en tejidos de plantas para intentar ver si las plantas pueden utilizar este modelo de concentrar el CO2
para aumentar la eficiencia fotosintÈtica. Sin embargo, el hecho de tener las proteÌnas alrededor de la
RuBisCO que forman la envuelta hacen que sea muy difÌcil de reproducir porque tienen que
ensamblarse en una posiciÛn muy determinada, por lo que es difÌcil obtener los transgÈnicos
funcionales.
▪ Ficobilisomas (j).
▪ Gr·nulos de polifosfatos (k): son reservas de fosfato que reciben el nombre de volutina y
metacromatina (se tiÒen de color rojo cuando se utilizan colorantes azules como son el azul de metileno
y azul de toluidina) y que desaparecen cuando hay deficiencia de fosfato. Esta volutina o metacromatina
no solo la podemos encontrar en cianobacterias y bacterias, sino que tambiÈn en algas, hongos,
protozoos, etc. Se induce su formaciÛn cuando hay una deficiencia diferente al fosfato, como sulfato.
En algunos casos se han descrito a estos gr·nulos como fuente de energÌa, pero para su sÌntesis tambiÈn
consumen energÌa.
P-P + ATP  P-P-P + ADP
(-P) n + ATP  (-P-) n+1 + ADP
Por ejemplo, la bacteria Acinetobacter elimina el fosfato de las aguas residuales, ya que lo acumula en
forma de volutina en la fase de aerobiosis de la bacteria.

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▪ Vacuolas de gas (l): hay subgrupos de cianobacterias que las presentan para mantener la flotaciÛn.
▪ Membranas tilacoidales (m):
▪ Nucleosoma (DNA) (n).

La envuelta celular (pared celular/membrana) de la cianobacteria tiene distintas capas o partes y como es una
Gram negativa presenta pared celular. Desde dentro hacia fuera encontramos la membrana plasm·tica o
plasmalema, pared de mureÌna que es una capa formada por peptidoglucano (heteropolÌmero de
az˙cares/amino·cidos: N-acetilglucosamina y N-acetilmur·mico), espacio peripl·smico, membrana externa,
capa S, capa de oscilina (proteÌnas fibrosas con forma helicoidal), y por encima puede haber una capa de
mucosa/mucÌlago. Adem·s, el plasmalema mantiene el contacto con las membranas tilacoidales en varios
puntos, las cuales son invaginaciones del plasmalema de forma que serÌa como una red interconectada.

B. APARATO FOTOSINT…TICO
Normalmente las membranas tilacoidales suelen estar comprimidas, pero cuando les llega la luz se separan
para ser m·s funcionales. Las cianobacterias poseen los ficobilisomas, que son complejos extramembranales
solubles que act˙an como una antena para la captaciÛn de la energÌa lumÌnica, electromagnÈtica.

La estructura de un ficobilisoma est· formada por un n˙cleo central, formado por 3 cilindros compuestos por
ficobiliproteÌnas, y unas varillas compuestas tambiÈn por ficobiliproteÌnas. Siendo toda la estructura la que
act˙a como antena.
Los 3 cilindros a su vez est·n formados cada uno de ellos por 4 apilamientos de aloficocianina y cada apilamiento
por un trÌmero de aloficocianina, lo que serÌa 6 aloficocianinas. Adem·s, en los dos cilindros basales hay otras
proteÌnas como grupos cromÛforos que van a actuar como aceptores terminales de esa excitaciÛn y que van a
transferir la energÌa a lo que serÌa el centro de reacciÛn de los fotosistemas, en concreto al fotosistema dos.

Estas ficobiliproteÌnas principalmente son

ficoeritrina (PE), ficocianina (PC) y aloficocianina
(AP). Adem·s, en algunas especies de
cianobacterias podemos encontrar tambiÈn
ficoeritrocianina. Estas proteÌnas se organizan
seg˙n su m·ximo de absorciÛn dentro de la
antena, de menor a mayor longitud de onda (PE,
PC, AP), asÌ la energÌa electromagnÈtica que se
va a ir transfiriendo a lo largo de la antena lo
har· por resonancia de excitaciÛn, de
ficoeritrina a ficocianina y de ficocianina a
aloficocianina. A partir del centro de la antena,
del ficobilisoma, se transfiere hacia lo que serÌa
los fotosistemas y la clorofila a.

Por ejemplo, en el fotosistema I la energÌa procede de la que captan clorofila a y los carotenoides. El OCP es
una proteÌna naranja carotenoide que act˙a regulando la funciÛn del ficobilisoma. Cuando en las plantas y las
algas hay un exceso de luz para evitar los daÒos oxidativos, se produce una disminuciÛn del pH en el lumen que
activa el ciclo de las anfofilas y eso hace que el exceso de energÌa de excitaciÛn se pierda en forma de calor. En
el caso de las cianobacterias, en condiciones de alta irradiancia le llegarÌa mucha energÌa de excitaciÛn al
aparato fotosintÈtico, entonces el OCP hace que haya una disipaciÛn de la energÌa haciendo que llegue menos
energÌa al centro de reacciÛn por interacciÛn con los ficobilisomas.

Las ficobilinas se encuentran presentes en cianobacterias, algas rojas, criptofÌceas y en algunas algas pirrofÌceas
(dinoflagelados).

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C. METABOLISMO DE CIANOBACTERIAS CON O SIN HETEROCISTOS

Tenemos un tricoma con una cÈlula diferenciada como heterocisto que
carece de fotosistema II, por tanto, no hay emisiÛn de oxÌgeno, se activa la
nitrogenasa, hay fijaciÛn de nitrÛgeno y da lugar a la producciÛn de
hidrÛgeno. En el caso de las cÈlulas vegetativas en condiciones normales
de luz, habrÌa fotosÌntesis. Entre las diferentes cÈlulas que forman esta
organizaciÛn multicelular puede hacer una comunicaciÛn y distribuciÛn de
nutrientes.

En este caso tenemos un tricoma de ˙nicamente cÈlulas vegetativas. En

condiciones de luz tanto en el tricoma filamentoso como unicelular habrÌa
fotosÌntesis, mientras que en condiciones de oscuridad se podrÌa dar
fijaciÛn de nitrÛgeno (siempre que dichas cÈlulas sean fijadoras y estÈn en
condiciones de cultivo de bajo oxÌgeno o anaerobiosis para que la
nitrogenasa estÈ activa).

En el caso de un heterocisto de una cianobacteria aerÛbica se podrÌa fijar el nitrÛgeno, aunque se cultive en
aerobiosis debido a que el heterocisto tiene una pared m·s gruesa, no se produce oxÌgeno en el interior porque
no posee fotosistema II y adem·s sÌ est· activo el fotosistema I con lo cual hay sÌntesis de ATP lo suficiente para
mantener la reacciÛn que cataliza la nitrogenasa y el metabolismo celular. La fijaciÛn de nitrÛgeno consume
una gran cantidad de ATP, por cada N que se reduce hasta amonio se necesitan 16 ATP, es una reacciÛn
altamente endergÛnica.

D. ALGAS EUCARIONTES
▪ Envuelta (B, D).
▪ N˙cleo (G): doble envuelta
separada por el espacio perinuclear
con una serie de poros para facilitar el
tr·nsito.
▪ Mitocondrias (A): no hay
muchas diferencias entre las cl·sicas y
la cÈlula eucariota. Podemos
encontrar microalgas con solo una
mitocondria por cÈlula o que tengan
varias (lo segundo es lo normal).
▪ Aparato de Golgi (H):
importante para un transporte
intracelular. Participa en empaquetar
sustancias para el transporte
extracelular.
▪ Estructuras locomotrices (E): serÌan los flagelos que no est·n presentes en todos los grupos de algas. Son
una especie de cilindros formados por 9 fibras rodeadas de membrana plasm·tica. Pueden ser lisos o con
una especie de apÈndice a modo de espinas.

Hay que recordar que en las HaptofÌceas habÌa una estructura llamada heptonema que no es un
flagelo, sirve para unirse a sustratos, para evitar la aproximaciÛn de otros organismos, etc.

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▪ Aparato fotosintÈtico (I, C): serÌa el cloroplasto. En las cianobacterias habl·bamos de la membrana
tilacoidal, pero en las cÈlulas eucariotas tienen cloroplastos que es donde tiene lugar la fotosÌntesis. Tienen
su propio ADN y ribosomas. En el caso de Clamidomonas, dentro del cloroplasto se encuentra el estigma,
pero no siempre est· dentro del cloroplasto como las Euglenoides que est· cerca de los flagelos.
▪ Gr·nulos de almidÛn (J).
▪ Pirenoide: similar al carboxisoma y localizado dentro del cloroplasto. En el pirenoide se acumulan las
molÈculas de la RuBisCO para la fijaciÛn del CO2 y la anhidrasa carbÛnica. En el caso de las Clorofitas el
pirenoide suele estar rodeado de almidÛn. Adem·s, los cloroplastos se pueden dividir por fisiÛn y dar lugar
a dos cloroplastos iguales.
▪ Macha ocular o estigma: act˙a como fotorreceptor porque es una especie de glÛbulos que van a contener
carotenoides y act˙a conjuntamente con los flagelos para orientar el movimiento de la cÈlula.
▪ VesÌculas (F).
▪ Vacuolas.
▪ RetÌculo endopl·smico/ribosomas:

Las algas, aunque tenga diferentes formas y tamaÒo tienen una estructura igual a una planta vascular, cÈlula
eucariota vegetal. Hay algunas caracterÌsticas que las diferencian de una cÈlula cl·sica vegetal como es la
presencia del pirenoide, gr·nulos de almidÛn, mancha ocular o estigma y estructuras locomotrices. Con
respecto a la envuelta, las algas pueden carecer de pared celular o estar cubierta de una capa de mucosa, la
mayor parte tiene pared. Cuando tienen capa de mucosa suelen ser polisac·ridos sulfurados, mientras que la
pared celular tiene celulosa, hemicelulosa y proteÌnas. En el caso de las diatomeas, tienen una pared celular de
sÌlice que forma la fr˙stula, de manera que estaba organizada en dos partes unidas por una especie de bisagra.

Si hablamos de algas multicelulares o macroalgas, tienen una estructura m·s compleja porque la pared adem·s
de celulosa tiene polisac·ridos de manosa/mananos, de xilosa/xilanos, sulfatados que dan flexibilidad o incluso
calcificaciones como consecuencia del uso del bicarbonato como fuente de carbono.

Existen diferentes metabolismos que ocurren dentro de las microalgas eucariotas como son el ciclo de Calvin,
reacciones lumÌnicas de la fotosÌntesis en las membranas tilacoidales, sÌntesis de almidÛn a partir de las triosas
fosfato del ciclo de Calvin que se acumula en el pirenoide, sÌntesis de ·cidos grasos, sÌntesis de amino·cidos en
el citosol y mitocondria, etc.

3. PRINCIPALES CIANOBACTERIAS Y MICROALGAS DE INTER…S EN BIOTECNOLOGÕA

Dentro de las cianobacterias tenemos:
1. Arthrospira (Spirulina): es una cianobacteria filamentosa multicelular con una coloraciÛn verdeazulada
como consecuencia de las ficobilinas que poseen. Al detalle, el filamento est· formado por cÈlulas cilÌndricas
que dan lugar a la formaciÛn de este tricoma helicoidal que no se ramifica y que se puede mover por
deslizamiento alrededor de su eje. No es una fijadora de nitrÛgeno, no se diferencia en heterocistos y tiene
un tamaÒo de 1-3µm hasta 3-12µm. Crece en distintos tipos de h·bitats: agua dulce, salada, termales,
suelos, etc. Pueden crecer en condiciones de alcalinidad y alta concentraciÛn de sales y temperaturas. Se
suelen encontrar tanto Spirulina platensis como Spirulina maxima en lagos de ¡frica y MÈxico con un pH
bastante alto (10-11), son lagos alcalinos debido a la alta concentraciÛn de carbonato y bicarbonato.
TambiÈn se pueden encontrar en lagos con alta concentraciÛn de sales del orden de 30 g/L o incluso hasta
270 g/L, siendo Spirulina los ˙nicos microorganismos que van a crecer. Cuanto m·s alcalinas y salinas sean
las aguas, m·s ser· predominante este gÈnero. Es una forma de cultivo puro, ya que en esas condiciones
no hay casi competencia. En cuanto a la temperatura, su temperatura de Ûptima de crecimiento es 35-40C.
RecibÌan el nombre de Tecuitlatl por parte de los aztecas. Se cultivan actualmente en EEUU, JapÛn, MÈxico
e Israel; para que tengan un buen rendimiento hay que considerar la profundidad y densidad de un cultivo

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para que la luz llegue a todo el cultivo y tenga una productividad alta. Esta densidad suele ser 0.3-0.5 g de
peso seco/L y la profundidad 10-15 cm.
Adem·s, la espirulina es una buena fuente de proteÌnas alternativa a otras fuentes vegetales como la soja,
y tambiÈn es una buena fuente de vitamina B12, la podemos encontrar en forma de comprimidos, polvos,
etc. TambiÈn tiene efectos beneficiosos para la salud como para tratamientos de c·ncer o cicatrizaciÛn de
heridas.
Las Nostoc·ceas son cianobacterias filamentosas fijadoras de nitrÛgeno.

Dentro de las algas eucariotas tenemos:

2. Chlorella (ClorofÌcea): es unicelular con una forma esfÈrica o elipsoide. Chlorella vulgaris es muy empleada
a nivel comercial para consumo humano. Crece a temperaturas bastantes suaves en torno a 20-30C en
h·bitats de agua dulce o marina. Se empezÛ a cultivar sobre 1950 y desde entonces JapÛn las cultiva y
produce unas 2000 toneladas desde entonces. Parte de ellas se usan para productos nutricionales y
piscifactorÌas. Las podemos encontrar en forma de polvo, comprimidos o como Chlorella growth factor, que
es un complejo localizado en el n˙cleo de la Chlorella, que ella misma lo produce cuando la fotosÌntesis es
muy alta, rico en ·cidos nucleicos, lo que le va a permitir un r·pido crecimiento. Adem·s, este factor tiene
efectos positivos para mejorar el crecimiento de bacterias l·cticas y a nivel mÈdico en humanos podrÌa
facilitar la reparaciÛn del material genÈtico celular humano.
3. Dunaliella (ClorofÌcea): es un alga unicelular de agua dulce o salada muy halotolerante. Si se aumenta la
concentraciÛn de sales o la situaciÛn de estrÈs, esta alga puede adquirir una forma resistente que se rodea
de una envuelta rÌgida y pierde los flagelos. Si no alcanza dicha forma resistente, presenta dos flagelos y
tiene una forma m·s ovoide. Tiene un gran cloroplasto con su pirenoide y no tiene pared celular, lo que la
diferencia de otras microalgas, est· rodeada de una membrana el·stica que se rodea con una capa de
mucosa y ˙nicamente cuando adquiere la forma de resistencia es cuando esa envuelta da lugar a una capa
m·s rÌgida. Se puede adaptar a medios con alta concentraciÛn de sal, entonces puede soportar
concentraciones de 0.1 a 5M NaCl. De hecho, es el ˙nico genero que se ha detectado en el Mar Muerto.
Podemos distinguir varias especies de este gÈnero que sean halotolerantes y halofÌlicas: las halotolerantes
pueden crecer con CO2 atmosfÈrico o con fuente de C (bicarbonato) a una concentraciÛn muy baja de 0.1%,
mientras que las halofÌlicas necesitan una concentraciÛn m·s alta del 2% de [Link]·s, las halotolerantes
son bastante m·s sensibles a la irradiancia que las halofÌlicas. Cuando la concentraciÛn externa de sal es
muy alta, por ejemplo 0.5M, se puede inducir la sÌntesis de un osmolitoprotector que es el glicerol haciendo
que dentro se alcance una concentraciÛn de 0.8M, es un mecanismo de osmoprotector. Entonces, en
situaciones de estrÈs (como deficiencia nutricional o alta intensidad de luz) se induce la sÌntesis de β-
carotenos que dan lugar a una apariencia naranja por su acumulaciÛn en vesÌculas lipÌdicas a pesar de ser
ClorofÌcea. Dunaliella salina y Dunaliella bardawil son productoras a nivel comercial de β-caroteno. Crece a
una temperatura Ûptima de 20-30C
4. Scenedesmus (ClorofÌcea): crece formando colonias de 4 o 8 cÈlulas, y m·s raramente de 16 cÈlulas. Esta
microalga que se encuentra tanto en agua dulce como salada se ha cultivado para comercialmente obtener
proteÌnas, ya que puede acumular hasta un 50% de proteÌna modificando las condiciones de cultiva. Tiene
una temperatura Ûptima de crecimiento m·s alta, de 30-34C e incluso 38C. Adem·s, puede tener un buen
crecimiento en condiciones heterÛtrofas, es decir, utilizar az˙cares como la glucosa en vez de CO2 como
fuente de carbono.
5. Botryococcus (ClorofÌcea): tambiÈn es formadora de colonias. Como caracterÌstica a destacar acumula
hidrocarburos en la matriz extracelular que hace que tenga un interÈs desde el punto de vista de la
obtenciÛn de combustibles a partir de ella. Estos hidrocarburos que se van a acumular pueden ser de varios
tipos y en funciÛn del tipo de hidrocarburo que acumulan se clasifican de diferente forma. Esta acumulaciÛn
da una flotaciÛn y hace que podamos ver una especie de espumas. Esta ClorofÌcea se encuentra en zonas

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templadas y tropicales y suelen ser normalmente de agua dulce. El inconveniente que tiene esta ClorofÌcea
es que tiene un tiempo de generaciÛn lento, lo que hace que no sea idÛnea para la aplicaciÛn de obtenciÛn
de combustibles.
6. Chlamydomonas (ClorofÌcea): es de tipo unicelular, posee dos flagelos, est· tanto en agua dulce como
salada y tiene aplicaciones ambientales como es el acondicionamiento de suelos evitando que se produzca
la erosiÛn del suelo al utilizar el riego por aspersiÛn, los carbohidratos que se liberan al suelo hacen que se
favorezca la retenciÛn de agua en el suelo, etc. Concretamente, Chlamydomona reinhardtii se ha utilizado
como modelo para estudios fisiologÌa y bioquÌmica que son extrapolables para estudios de plantas
superiores.
7. Phaeodactylum (diatomea/bacilarofÌcea): la ˙nica especie de este gÈnero es Phaeodactylum tricornutum,
la cual es formadora de colonias y pueden tener una forma variada (ovalada, fusiforme, etc.) y esas
diferentes formas van a depender de las diferentes condiciones ambientales. A diferencia de otras
diatomeas, Èsta puede vivir sin generar las fr˙stulas de silicio caracterÌsticas de las diatomeas. Desde el
punto de vista de aplicaciÛn comercial es interesante que en condiciones de deficiencia de nitrÛgeno los
cultivos de Phaeodactylum tricornutum pueden llegar a acumular gran cantidad de lÌpidos, normalmente
un 35%, lo que serÌa muy favorable para la producciÛn de biodiesel a partir de esta microalga. Adem·s, se
pueden alcanzar densidades de cultivo bastante altas (40 g de peso seco/m2 x dÌa), lo cual es muy
interesante.
8. Porphyridium (rodofÌcea): es unicelular, se encuentra en agua dulce y salada, su color viene dado por la
ficoeritrina y carece pr·cticamente de pared celular. Una de sus aplicaciones de interÈs es la producciÛn de
sustancias polimÈricas extracelulares que se expulsan al medio de cultivo, de manera que son ricos en
polisac·ridos y con diferente grado de sulfataciÛn. Estas sustancias polimÈricas extracelulares van a tener
diferentes aplicaciones y son de gran interÈs para la industria farmacÈutica. Los polisac·ridos de los cuales
est·n formados estas sustancias est·n disueltos en el medio de cultivo y se reponen en la superficie
proceden del aparato de Golgi. Diferenciamos Porphyridium cruentum o Porphyridium purpureum.

TEMA 1. INTRODUCCI”N A LOS MICROORGANISMOS FOTOSINT…TICOS 9

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

TEMA 2. T…CNICAS DE CULTIVO A ESCALA DE

LABORATORIO
1. MEDIOS NUTRITIVOS Y OTROS FACTORES QUE AFECTAN AL CRECIMIENTO
Las microalgas que se consideran para su producciÛn industrial son organismos fotoautÛtrofos, es decir, con
energÌa solar, agua, sales minerales y aire son capaces de generar toda su biomasa.

En un medio de cultivo encontramos tanto macronutrientes como micronutrientes:

− Macronutrientes: son esenciales para la sÌntesis de biomasa. Carbono, hidrÛgeno, oxÌgeno, nitrÛgeno,
fÛsforo y azufre (C, H, O, N, P, S), que forman parte de muchas biomolÈculas, tienen que estar
disponibles, pero tambiÈn hay que aportar otros elementos esenciales como Mg, K, Ca.
− Micronutrientes: son igual de importantes, pero se precisan en menor cantidad (se aÒaden al medio en
mg/L). Hierro (Fe), boro (B), cloro (Cl), manganeso (Mn), cobre (Cu), zinc (Zn), molibdeno (Mo), cobalto
(Co) y, en algunos casos, sodio (Na) y silicio (Si). El silicio es importante para la formaciÛn de la fr˙stula
de las diatomeas, por eso, se aÒaden silicatos al medio.

Las principales condiciones que se deben tener en cuenta a la hora de desarrollar una soluciÛn nutritiva son
las siguientes:
− ConcentraciÛn total de sales. No es igual que la microalga proceda de un medio salino, salobre o dulce.
Por tanto, la cantidad de sal viene determinada por el h·bitat natural de la especie. No existe una ˙nica
receta para una misma microalga. Ejemplo: para el cultivo de Arthrospira se requiere m·s sal que para el
cultivo de Chlamydomonas.
− Fuente de nitrÛgeno. Fundamental para que se obtenga una buena cantidad de biomasa, incluso a nivel
industrial. Las microalgas llegan a tener entre 7-9% en peso seco de nitrÛgeno (proteÌnas, ·cidos
nucleicos, etc.) por lo que es necesario un aporte mÌnimo de N2 para asegurar su crecimiento. Este
nitrÛgeno debe ser aportado de forma externa en forma combinada como nitrato o amonio, ya que las
microalgas no son fijadoras de N2. La forma m·s com˙n es nitrato pot·sico (KNO3). Para conseguir 1 g
peso seco de microalgas/L, se tiene que monitorizar el cultivo para que la cantidad de KNO3 estÈ entre
0,5 y 0,6 g/L. TambiÈn se pueden aÒadir amino·cidos o urea.
− Fuente de carbono. Aunque las microalgas se pueden desarrollar con el CO2 ambiental, no es suficiente
para soportar el crecimiento masivo de las mismas en el laboratorio. En las c·maras, las microalgas se
mantienen con 1-5% v/v de CO2 (por cada 100L de aire que se introducen en el cultivo mediante
burbujeo, 1-5L deben ser de CO2) para que el crecimiento sea activo. En el caso de las cianobacterias y
microalgas que habitan en medios salinos o salobres, se puede aÒadir bicarbonato como fuente de C y se
ajusta el pH simplemente insuflando CO2, es decir, el CO2 reduce el pH para que no se vuelva
excesivamente alcalino. En resumen, el CO2 sirve para controlar el pH y dar una fuente de carbono.
− La composiciÛn cuantitativa y cualitativa de los principales iones: N, P, K, Ca, Mg y S. Deben controlarse
todos y cada uno de esos iones.
− Elementos traza o micronutrientes. Son los micronutrientes que son esenciales a concentraciones de
microgramos/L. Para evitar que precipiten los elementos trazas se aÒaden quelantes como EDTA.
− pH de la soluciÛn va ligado al pH del h·bitat natural. Las microalgas crecen razonablemente bien entre
6,5-7,5 (ligeramente ·cido). Esto no quiere decir que algunas especies no puedan crecer a pH m·s ·cido
o m·s b·sico. Si el pH es alto, se favorece la precipitaciÛn de calcio, magnesio o de algunos
micronutrientes.
− Vitaminas. Algunas microalgas precisan de vitaminas para su crecimiento. Destacan las vitaminas B: B12
(cianocovalamina), B7 (biotina) y B1 (tiamina, componente esencial de la piruvato deshidrogenasa que
participa en el ciclo de Krebs). Aunque en general no es habitual aÒadirlo al medio de cultivo.

TEMA 2. T…CNICAS DE CULTIVO A ESCALA DE LABORATORIO 1

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

Hay otros factores que son muy importantes y afectan al desarrollo de los cultivos:
− Temperatura. Por tÈrmino medio, aunque hay excepciones, las microalgas crecen bien entre 20-30C.
Ejemplo: Arthrospira crece entre 35-40C. Existen las temperaturas Ûptimas de crecimiento.
− Irradiancia, profundidad/di·metro y densidad del cultivo. Este factor es crÌtico porque determina la
disponibilidad de la luz solar, ya que las microalgas son organismos fotoautÛtrofos y debe llegar la luz a
todo el cultivo, para ello debemos saber las dimensiones que tiene el giractor. TambiÈn debemos saber
la densidad que alcanza ese cultivo ya que es indicativo si debemos de diluir el medio aÒadiendo medio
fresco o renovando parte del volumen.
− pH. ”ptimo entre 6,5-7,5. Ejemplo: espirulina crece bien en medio alcalino
− Equilibrio CO2/O2. Es fundamental que no haya ni carencia ni exceso. Si hay un exceso de oxÌgeno
provoca que comience la fotorrespiraciÛn, asÌ como que ocurra daÒos por fotooxidaciÛn oxidativo
(recordemos que la rubisco tiene una doble actividad: carboxilasa y oxigenasa). Por eso, hay que
controlar la disipaciÛn del oxÌgeno, pero tampoco eliminarlo al completo porque las microalgas respiran
y necesitan oxÌgeno para ello. En funciÛn de los otros par·metros del medio de cultivo, podremos utilizar
aire enriquecido con CO2 o no.
− AgitaciÛn. Permite que las microalgas estÈn en suspensiÛn asÌ tienen disponibilidad de luz solar en todo
el cultivo y tambiÈn evita que se adhieran en las paredes del fotobiorreactor, ya que formarÌan un
biofilm y entorpecerÌa la llegada de la luz. Adem·s, permite la disipaciÛn tÈrmica (al subir la
temperatura, se favorece la fotorrespiraciÛn y provoca cambios en el crecimiento de las microalgas).
− Control de la especie. Si las condiciones de la especie son extremas, debemos controlar muy bien sus
par·metros. Es importante trabajar en condiciones de esterilidad porque utilizamos medios ricos (por
ejemplo: medio con fuente de carbono adicional, como acetato) que son susceptibles de ser
contaminados por levaduras y bacterias.

2. TIPOS DE CULTIVO EN EL LABORATORIO

Hay varias formas de cultivar las microalgas en el laboratorio, en concreto 4 tipos:
1. Cultivo estanco (batch culture). DespuÈs de inocularlo, nada se aÒade ni se retira de la suspensiÛn de
algas. Es el que vamos a utilizar en las pr·cticas, un inÛculo a partir de una placa.

Se parte de un inoculo y se cultiva en medio lÌquido para poder escalonar el cultivo y asÌ evitar los daÒos por
exceso de luz. Los tipos de fases son:
− Fase de latencia o inducciÛn: se pone el inÛculo.
− Fase exponencial o logarÌtmica
o Velocidad especifica de crecimiento (µ): es la diferencia entre los logaritmos del n˙mero de cÈlulas
en un intervalo entre la diferencia de tiempo.

o Tiempo de generaciÛn (tg) es el tiempo necesario para que se duplique una poblaciÛn de cÈlulas de
un cultivo. En las microalgas, suele ser de 7 horas.
TEMA 2. T…CNICAS DE CULTIVO A ESCALA DE LABORATORIO 2
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− Fase de desaceleraciÛn
− Fase estacionaria
− Fase muerte o carencia celular.

2. Cultivo semicontinuo. Es un cultivo estanco, pero se hacen

diluciones en intervalos constantes. Lo ideal es hacer el
subcultivo justo antes de llegar a la fase de desaceleraciÛn.
La muestra debe contener tanto medio como microalgas y
se le aÒade medio fresco. Siempre retiramos el mismo
volumen.

3. Cultivo estanco sincronizado. Es un cultivo que se caracteriza porque todas las cÈlulas est·n en la misma
fase del ciclo celular. Por tanto, todas las cÈlulas se dividen casi simult·neamente. Se consigue mediante
cambios repetidos en las condiciones ambientales (por ejemplo, cambios de temperaturas en ciclos) o
nutricionales (por ejemplo, cambios de concentraciones de nitrÛgeno) y tambiÈn por inoculaciÛn con
cÈlulas que est·n en la misma fase del ciclo de vida para hacer un subcultivo. Es m·s engorroso de
obtener.
4. Cultivo continuo. Se pretende mantener al cultivo en fase exponencial el mayor tiempo posible. Para
ello, se aÒade medio fresco a un caudal igual al de retirada de microalgas por el rebosadero. Se puede
llevar a un estado din·mico estacionario, donde se consigue que la velocidad especÌfica de crecimiento
sea igual que la tasa de diluciÛn: μ = D. ¿Por qué? Sabiendo que la fórmula de μ tiene unidades de h-1 y D
tiene unidades de ml x h-1 / ml, los ml se van y me queda h-1 a ambos lados de la ecuaciÛn.
La ventaja de un cultivo continuo es que se mantiene la tasa de producciÛn constante y a su valor
m·ximo. Esto es teÛricamente, ya que en la pr·ctica se comporta como un cultivo semicontinuo (se
retira una suspensiÛn de microalgas, se recogen y el medio de cultivo vuelve de nuevo al reactor, con lo
que se ahorra en agua y nutrientes).
Estas c·maras est·n formadas por varias gomas donde se introduce y se retira el mismo volumen de
medio. TambiÈn contiene una camisa la cual proporciona el sistema de iluminaciÛn. Estas camisas
pueden rodear completamente los pepinos para obtener mayor resistencia.

A. SISTEMA DE GASEO PARA UN CULTIVO

Presenta una bala de CO2, un compresor o una bomba de aire. Estos dos caudales van a ser regulados por un
rot·metro, el cual es un tubo de pl·stico calibrado donde contiene una bolita que sube o baja seg˙n la
concentraciÛn que haya de aire y nos va a dar una idea del caudal que pasa. En el caso del CO2, las unidades
del caudal son mL/h y en el del aire L/h.

Estos caudales se van a mezclar en un mezclador en proporciÛn de 1-5% de CO2 respecto al total de aire (es
lo que se enriquece el CO2). Una vez formada la mezcla antes de que entre en el cultivo, hay una trampa de
agua humidificando el aire para que no vaya tan seco al cultivo, y un filtro para que retenga los
contaminantes que contenga y no se arrastre ning˙n contaminante al cultivo.

TEMA 2. T…CNICAS DE CULTIVO A ESCALA DE LABORATORIO 3

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B. ESQUEMA DE UN FOTOBIORREACTOR
En el interior tenemos la suspensiÛn de cianobacterias o microalgas.
Presenta una entrada de mezcla aire-
CO2 que procede del sistema del gaseo.
Puede haber diferentes sondas de
mediciÛn de par·metros (temperatura,
pH, espuma, etc.). Presenta tambiÈn un
rebosadero por donde salen las
microalgas y el medio, de forma que el
volumen interno se mantenga
constante.
Debe haber una salida de gases para
que no se acumule oxÌgeno de forma
excesiva adem·s de que no suba
demasiado la presiÛn interna.
Para evitar que aumente mucho la
temperatura, se pone una camisa
alrededor del fotobiorreactor por donde
circula agua destilada para mantener el
interior (donde est· el cultivo de algas) a
una temperatura adecuada constante
para que el cultivo se mantenga a esa
temperatura y no se eleve demasiado.
El sistema de luces puede estar alrededor del fotobiorreactor o en la zona superior. Pueden ser
fluorescentes o luces LED (no aportan un exceso de calor).

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C. FUNCIONAMIENTO DE UN FOTOBIORREACTOR MEDIANTE CONTROL REMOTO

Por medio de control remoto, se pueden controlar los par·metros m·s determinantes como la densidad, pH,
temperatura, etc.
− La iluminaciÛn artificial puede ser externa
(camisa) o interna. Se tiene que controlar
que las longitudes de onda sean adecuadas
(entre 400 y 700 nm) para que sea
fotosintÈticamente activas.
− La tasa de fotosÌntesis varÌa en funciÛn de la
irradiancia: a mayor intensidad, aumenta la
tasa fotosintÈtica, ocasionando daÒos
irreversibles en caso de exceso.
− Para mezclar el cultivo se utiliza o aireaciÛn
(las cÈlulas se mantienen en suspensiÛn de
forma suave) o de forma mecanizada.
A la derecha observamos un fotobiorreactor que
se puede autoclavar.

3. M…TODOS PARA LA DETERMINACI”N DEL CRECIMIENTO

− Conteo manual de cÈlulas con c·mara de Neubauer, de Thoma. El problema es que es muy tedioso y en
el caso de las microalgas no es muy apropiado, ya que no es reproducible.
− Conteo electrÛnico de cÈlulas: se fundamenta en que cuando la microalga pasa por un pequeÒo orificio
aumenta la resistencia, ya que corta el paso de la luz, y esto se graba pudiÈndose determinar el n˙mero
de cÈlulas. Por tanto, esto es muy fiable y reproducible para cultivos unicelulares. El problema viene con
las microalgas que no son redondas o las que son filamentosas, ya que dan mucho error porque puede
que estÈ pasando una y que parezca que estÈn pasando m·s. La ventaja es que es m·s f·cil y menos
tedioso que el anterior mÈtodo.
− Turbidez: se mide la absorbancia con un espectrofotÛmetro entre 550-650nm, es decir, se mide la
turbidez que nos da una idea de la cantidad de algas que tenemos. El problema que tiene es que hay
microalgas que excretan exudados que aumentan la turbidez y por tanto la medida serÌa errÛnea, ya que
se estarÌan contando m·s microalgas de las que realmente hay. Ventaja principal: inmediatez absoluta,
es muy r·pido.
− Peso seco: es por excelencia el mejor mÈtodo, pero requiere un tiempo hasta que la muestra se seca,
por lo que se pierde la inmediatez de la turbidez, que es absoluta o la del conteo electrÛnico.
Es muy importante que la muestra estÈ homogÈnea. Una vez homogeneizado o bien se filtra o bien se
centrifuga para recoger la muestra. Una vez filtrado o centrifugado, hay que lavar las microalgas para
quitar las sales del medio. No es lo mismo que las algas sean dulceacuÌcolas (se lava con medio cultivo
diluido, con un tampÛn o incluso [aunque no es recomendable] con agua destilada) o marinas o salinas
(no lavar con agua destilada ni con nada muy diluido sino con medios que incluso est·n a la tercera
parte, para evitar el choque osmÛtico, a pesar de que tenga pared celular). En 24-48 horas
aproximadamente estar· seco. La estufa est· entre 70 y 80C. Cuando lo sacas a esa temperatura, se
pesa directamente o se guarda en desecadores que tiene sÌlice para que no cojan humedad.
− ConcentraciÛn de clorofila: es un mÈtodo r·pido y reproducible, pero la concentraciÛn de clorofila varÌa
seg˙n las condiciones ambientales o nutricionales e incluso durante todo el aÒo, lo que es una
desventaja. No hay relaciÛn de la clorofila con el peso seco.
Como la clorofila no es hidrosoluble, se aÒade un solvente org·nico (acetona pura, acetona al 80% en
volumen en agua, metanol [se suele usar mucho con cianobacterias], etanol y dietil Èter [en este caso el
calentamiento se hace suave hasta 40C como mucho para que no se evapore]). Para extraer bien la
clorofila hay que calentar un poco, por tanto, se hace calentamiento suave entre 40 y 45C.
*Las productividades hay que medirlas en peso seco.

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4. LAS CONDICIONES DE CULTIVO AFECTAN A LA PRODUCCI”N DE BIOMOL…CULAS

DE INTER…S
Los factores que afectan al desarrollo de los cultivos tambiÈn se pueden modificar para alterar la
composiciÛn bioquÌmica de la biomasa. Las principales son:
− Fuente de nitrÛgeno y relaciÛn C/N: las fuentes de nitrÛgeno pueden ser diversas como hemos visto. Por
ejemplo, si queremos obtener biodiesel debe haber una deficiencia de nitrÛgeno en el cultivo. La
relaciÛn C/N puede afectar a la composiciÛn bioquÌmica.
− Temperatura: cada especie tiene una temperatura Ûptima para su crecimiento. Por ejemplo, la
formaciÛn de pigmentos es influenciada por la temperatura.
− Profundidad/di·metro y densidad del cultivo. Puede afectar a que la luz llegue mejor o peor a todo el
cultivo. Hay microalgas que est·n adaptadas en aguas profundas y la cantidad de clorofila (los
pigmentos), cuando aumenta la profundidad llega menos luz solar, aumenta para conseguir captar la
misma luz.
− pH. Por ejemplo, cuando subimos el pH entre 8.5-9, en el gÈnero Anabaena provocamos la producciÛn
de exopolisac·ridos, lo que puede tener intereses comerciales.
− Equilibrio CO2/O2. No debe de haber un exceso de O2 y la concentraciÛn de CO2 condicionar· el pH.
Cuando echamos CO2 se baja el pH, mientras que cuando metemos bicarbonato de sodio (NaHCO3) se
aumenta el pH. Se puede jugar tambiÈn con NaOH y CO2.

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TEMA 3. T…CNICAS DE CULTIVO A ESCALA INDUSTRIAL

1. SISTEMAS DE CULTIVO A GRAN ESCALA DE MICROORGANISMOS FOTOSINT…TICOS
Hay tres aspectos tÈcnicos principales que hay que tener en cuenta en el desarrollo de sistemas comerciales
para el cultivo de microalgas a gran escala:
− ElecciÛn del reactor: sistema abierto o cerrado, forma, recubrimiento, profundidad y sistema de agitaciÛn.
Todos estos son par·metros que hay que ajustar para tener la mayor productividad posible. La luz tiene
que llegar a todo el cultivo para tener un buen rendimiento.
− Recogida de la biomasa (separaciÛn de las algas del medio de cultivo): hay que eliminar el medio de cultivo
para luego poder procesar esa biomasa. Es una fase que va a encarecer la producciÛn.
− DeshidrataciÛn de la biomasa: una vez que tenemos esa pasta de biomasa, se seca, se almacena congelado
o como producto liofilizado y se distribuye.

A. TIPOS DE CULTIVO A GRAN ESCALA

De forman general se van a clasificar en dos tipos: abiertos, que van a estar expuestos a la intemperie, y los
cerrados, donde los cultivos van a circular por tuberÌas, o son columnas donde crece el cultivo o son bolsas m·s
o menos cerradas en las que se dispone el cultivo (semiabierto). Elegir abierto o cerrado va a depender del tipo
de especie que vamos a cultivar y de la finalidad del producto que vamos a querer obtener. Por ejemplo, las
especies que son muy resistentes o que crecen en condiciones extremas como alto pH (Arthospira) o alta
concentraciÛn de sales (Dunaliella) serÌan buenas candidatas para cultivos abiertos porque dadas las
condiciones se podrÌa conseguir que el cultivo se mantuviera puro.

Entre los de tipo abierto se distinguen:

− Sistemas horizontales: mantener las microalgas en suspensiÛn (agitaciÛn o turbulencia) viene dada por
diferentes mÈtodos como puede ser la aeraciÛn, hÈlices, de paletas mec·nicas, etc.
− Superficies inclinadas con deflectores: los deflectores ayudan a que haya movimiento a travÈs de la
superficie y en la parte inferior se recoge un depÛsito y se bombea otra vez hacia la parte superior para que
la suspensiÛn de algas circule constantemente.
Si no queremos obtener un cultivo muy fino, los abiertos serÌan una buena opciÛn.

Los de tipo cerrado son fotobiorreactores (FBR), se controlan mejor las condiciones de cultivo y es un cultivo
m·s limpio. La suspensiÛn de algas circula por tubos de pl·stico transparente dispuestos en un plano o como
un serpentÌn cilÌndrico. Asimismo, podemos encontrar fotobiorreactores planos que son en bolsas y se pueden
considerar cerrados o semiabiertos por el hecho de que no son hermÈticos, se pueden abrir y cerrar.

a) ABIERTOS

Los sistemas horizontales se pueden distinguir en dos diseÒos b·sicos en cuanto a su forma:
1. Estanques circulares con agitaciÛn mediante un brazo giratorio para que se mantenga la suspensiÛn de
microalgas. Alcanzan un di·metro de hasta 50m, ocupando una gran
cantidad de terreno, lo que supone una serie de desventajas porque da
lugar a un menor aprovechamiento de este terreno, deben tener un
gran refuerzo en estructuras lo que supone una gran inversiÛn, tienen
un alto consumo de energÌa porque para mantener la agitaciÛn continua
hace falta bastante energÌa. Adem·s, en el centro hay escasa
turbulencia lo que puede hacer que se depositen algas allÌ y se reduzca
la productividad afectando a la calidad. En este tipo de estanques se
cultiva Chlorella y Arthrospira.

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2. Estanques como circuitos de forma alargada u oblonga (raceway). Son los reyes de los sistemas abiertos, la
mayor parte de algas que se cultivan en sistemas abiertos son de este tipo, aunque los circulares tambiÈn
est·n en uso. Pueden tener diferentes tipos de sistemas de agitaciÛn, paletas giratorias, inyectores de aire
o hÈlices, que van a facilitar el movimiento a lo largo del raceway. TambiÈn pueden presentar paletas de
guiado que favorecen el movimiento del cultivo. Su longitud puede alcanzar casi 200 m y una anchura total
de 20 m separada por un tabique central colocado longitudinalmente (2 x 10 m). Pueden ser unidades
individuales o varias unidades conectadas donde el flujo se mantiene todo en uno, por lo que tiene que
recorrer m·s distancia.
Es necesario realizar un escalado partiendo de un
pequeÒo cultivo e ir pasando a uno mayor
sucesivamente.
Estos estanques pueden estar cubiertos, lo que tiene
ventajas: evita pÈrdidas por evaporaciÛn (se puede
perder hasta 3.000 L por m2 al aÒo), se ahorra agua y
energÌa al evitar el bombeo, disminuye la concentraciÛn
de sales que afectan al rendimiento del cultivo, se disminuyen los contaminantes y el polvo; y da lugar al
efecto invernadero, lo que controla las temperaturas. En cuanto a las desventajas de la cubierta tenemos:
al ser pl·sticos no del todo transparentes, depositarse polvo encima de la cubierta y condensarse agua
dentro, se evita que la luz pase bien hacia el interior, afectando al rendimiento del cultivo. Adem·s, la
cubierta es una inversiÛn que aumenta el coste del sistema de cultivo.
En los dos casos pueden estar cubiertos por pl·stico siempre transparente o en el caso de los circulares
pueden tener una especie de c˙pula de cristal o metacrilato, que hacen que a veces se les designen como
cerrados, pero en realidad son abiertos con cubierta. La profundidad es importante porque si es demasiada
la luz no llegarÌa igual a todo el cultivo. Es en los sistemas horizontales aproximadamente 15 cm y la
densidad no puede ser muy alta, entre 0’1-0’5 g/L.

El otro sistema abierto eran las superficies inclinadas con deflectores. Estas consisten en un plano o l·mina de
cristal levemente inclinado (aproximadamente un 3%) por el que circula la suspensiÛn de algas desde la parte
superior del plano hasta la inferior donde se recoge en un tanque o depÛsito y se bombea de nuevo hacia la
parte superior donde se va desplazando por la superficie inclinada. Es en esta superficie donde se encuentran
los deflectores que facilitan el movimiento del cultivo aumentando la turbulencia.

La profundidad es mucho menor, entre 3 y 5 cm, a diferencia de los sistemas horizontales. Esto quiere decir,
que se pueden alcanzar densidades superiores, hasta 3 g/L.

Estos sistemas inclinados han permitido alcanzar grandes

productividades en fase experimental de hasta 60 g (ps)/m2dÌa con la
microalga Scenedesmus, una clorofÌcea unicelular.

B·sicamente durante el dÌa est· continuamente bombeando desde los

depÛsitos a la parte superior y durante la noche no se mantiene en
funcionamiento, sino que se resguardan los depÛsitos del frÌo.

En general, los abiertos van a tener m·s dificultad para mantener un cultivo puro sin ning˙n tipo de
contaminaciÛn, por eso se suelen utilizar especies que tengan unas caracterÌsticas de cultivo bastante
resistentes para aumentar la productividad y minimizar las pÈrdidas por contaminaciÛn.

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b) CERRADOS

TambiÈn conocidos como fotobiorreactores (FBR). Pueden estar formados por tubos de pl·stico transparentes
por los que circula la suspensiÛn de algas que son los llamados reactores en columnas y tubulares, o pueden
ser en bolsas que son los llamados fotobiorreactores planos.

Los fotobiorreactores en columna pueden tener diferentes disposiciones: como serpentÌn cilÌndrico o en un
plano que puede ser paralelo, perpendicular o formando otro ·ngulo con el suelo. Consisten en unas columnas
cerradas verticales, como una especie de columna en la que se burbujea aire. La suspensiÛn de cÈlulas se puede
mantener por aireaciÛn o por una bomba impulsora que va a mantener la agitaciÛn facilitando la introducciÛn
de CO2 y la retirada del exceso de O2, sobre todo cuando la fotosÌntesis est· muy activa y se est· emitiendo
mucho oxÌgeno. Si ese exceso no se elimina, podrÌan ocurrir daÒos por fotooxidaciÛn.

El inconveniente de estos reactores en columna es que su escalado es

complicado porque para hacer el cultivo m·s grande hay que aumentar el
di·metro de la columna, y cuando eso se lleva a cabo, la parte central del
cultivo puede tener problemas para captar la cantidad de luz suficiente y
necesaria. TambiÈn supondrÌa un problema el aumento de la altura, en este
caso con la presiÛn, ya que serÌa muy fuerte y no funcionarÌa bien el sistema
de burbujeo.

En estos sistemas cerrados la densidad serÌa intermedia entre los

horizontales y los inclinados, estaría entre 0’5 y 2 g/L. Adem·s, estos
reactores son comunes en piscifactorÌas.

Estos fotobiorreactores tubulares se acoplan a una columna de desgasificaciÛn donde se lleva a cabo el
intercambio tÈrmico y se elimina el exceso de O2.

Los fotobiorreactores planos o en bolsa consisten en una bolsa de pl·stico que contiene el cultivo de algas y
que se introduce entre dos soportes met·licos (como una especie de s·ndwich). Esta bolsa no esta hermÈtica,
sino que tiene como una solapa que se abre y cierra, y por eso se considera un sistema semiabierto. Adem·s,
la estructura met·lica permite que el plano tenga diferentes inclinaciones respecto al suelo, de manera que hay
determinadas inclinaciones que tienen mejor eficiencia. Por ejemplo, la inclinaciÛn este-oeste parece ser mejor
que la de norte-sur para capturar la luz. La altura m·xima que tienen estos reactores es de 2 metros y la anchura
de la bolsa de 20 cm, de manera que cuanto m·s estrecha sea mejor ser· la eficiencia fotosintÈtica porque
llegar· mejor la luz. TambiÈn pueden presentar en el interior sistemas de aireaciÛn mediante bombas y sistemas
de refrigeraciÛn que consisten en intercambiadores de calor por los que circula agua a la temperatura que sea
necesaria para el cultivo y la especie.

El principal inconveniente de estos fotobiorreactores planos en bolsa

es el biofilm que se forma, el cual hace que se reduzca la disponibilidad
de la luz. En los reactores tubulares tambiÈn podrÌa ocurrir, pero al
estar en continuo movimiento e introducir bolitas de teflÛn que se van
moviendo, se evita la formaciÛn de estos biofilms sobre las paredes de
estos reactores.

TEMA 3. T…CNICAS DE CULTIVO A ESCALA INDUSTRIAL 3

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2. OTROS ASPECTOS T…CNICOS PARA EL CULTIVO INDUSTRIAL

A. REVESTIMIENTO DEL ESTANQUE
Es un aspecto importante para tener en cuenta sobre todo en los sistemas abiertos y en los fotobiorreactores
tubulares. En el caso de los abiertos, este revestimiento serÌa lo m·s caro porque aparte de reforzar estructuras
con hormigÛn o cemento, en interior tambiÈn tiene un revestimiento para que las microalgas no formen
biofilms ni tengamos m·s pÈrdidas que afecten seriamente el cultivo.

Los materiales que se utilizan para hacer ese revestimiento son el policloruro de vinilo (PVC), polietileno o
polipropileno. A la hora de elegir el material es importante que sea resistente a la luz UV y que sea durable
mÌnimo durante 20 aÒos.

En el caso de querer cultivar microalgas que se vayan a usar en alimentaciÛn tambiÈn hay que tener muy en
cuenta el revestimiento para que no haya problemas a la hora que absorban materiales tÛxicos y afecten a la
calidad del alimento

B. SUMINISTRO DE CO2
Sabemos que la atmÛsfera contiene 400ppm de CO2, lo que
es un 0,04%, y el hecho de que los cultivos no tengan mucha
profundidad permite a las algas obtener el CO2 del aire, sin
embargo, el rendimiento no es muy alto en el caso de los
sistemas abiertos, ya que directamente tienen como fuente
de carbono el CO2 del aire. Por ello, para mejorar su
productividad se les suministra tambiÈn CO2 en forma de
pequeÒas burbujas. Este aporte suele ser controlado por un
sensor de pH que nos a permitir detectar cuando hay que
inyectar CO2.

Es una forma de suministrar carbono en forma de CO2 y de controlar que el pH no se vuelva demasiado alcalino.
Como ya sabemos, cuando las microalgas realizan la fotosÌntesis el pH va aumentando como consecuencia de
la asimilaciÛn del CO2 y de la reducciÛn del nitrato. Si el pH no se controla, se alcanzan valores muy b·sicos que
muchas veces para la estirpe que se cultiva no son adecuados y no serÌa viable la producciÛn. Por tanto, la
mejora de productividad por inyecciÛn de CO2 se alcanza en especies que crecen cerca de un pH neutro.

En general, cuanto m·s alcalino es el pH que requiere la suspensiÛn de algas, m·s alta es la eficiencia en el
suministro del CO2, ya que este cuando se disuelve en agua acidifica el medio. Su disoluciÛn depende de factores
como la temperatura y la salinidad, por lo que no todo el CO2 se va a disolver, sino que parte se va a la atmÛsfera
a pesar de ser suministrado en burbujas (mÈtodo que favorece la solubilidad). ⁄nicamente un 20-25% del CO2
que se inyecta es el que se fija.

Por otra parte, los cultivos que se encuentran en sistemas cerrados se les da un aporte de aire.

C. AGITACI”N O TURBULENCIA
Una buena agitaciÛn va a ser importante para tener una buena productividad, ya que el cultivo se mantendr·
en suspensiÛn. Mantener un flujo turbulento es importante para que el cultivo tenga acceso a la luz, para que
se pueda dar mejor el intercambio gaseoso y tÈrmico; y para evitar la sedimentaciÛn de algas en el fondo del
estanque que puede dar problemas como la degradaciÛn de materia org·nica, la descomposiciÛn por
anaerobiosis y afectar a la calidad del cultivo en general si se genera alg˙n producto tÛxico.

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Existen diversas tÈcnicas que se pueden utilizar para la agitaciÛn de los cultivos, y en todas ellas se ha hecho la
estimaciÛn del coste energÈtico para un reactor de unos 100 m2:
− Paletas giratorias: es la tÈcnica m·s empleada, las podemos encontrar en cultivos experimentales a
pequeÒa escala y en cultivos de gran producciÛn. Las paletas pueden ser de pl·stico, de metal, de madera,
etc. y suelen moverse a una velocidad de 1 km/h. El consumo energÈtico es relativamente caro, consume
bastante energÌa, 600 W para 100 m2.
− AireaciÛn: el aire se impulsa por bombas, por lo que el aire se burbujea a travÈs de tuberÌas. Esta tÈcnica
presenta una serie de ventajas: es m·s econÛmico (250 W 100 m2), asegura una buena transferencia de CO2
y el exceso de O2 producido por la elevada productividad fotosintÈtica en las horas centrales del dÌa se
reduce muy f·cilmente. Sin embargo, necesita un mantenimiento continuo porque los poros de salida de
las tuberÌas se suelen obstruir.
− Plano inclinado con bomba impulsora: es econÛmico energÈticamente (100-200 W para 100 m2), pero la
construcciÛn y mantenimiento sÌ son costosos, lo que limita un poco este sistema de agitaciÛn.
− Inyector: la suspensiÛn de algas y el CO2 se inyecta a travÈs de una boquilla o tobera, lo que hace que sea
el m·s costoso energÈticamente (1000-2000 W para 100 m2). Este sistema mantendrÌa por una parte esa
alta turbulencia y la transferencia de CO2, sin embargo, no es adecuado para especies filamentosas porque
las romperÌa.
− HÈlice libre: tampoco es adecuado para especies filamentosas, solo se emplea en estanques experimentales
y es m·s econÛmico. Por lo general, suelen formar biofilm en las paredes del estanque posiblemente como
consecuencia de que el cultivo no tenga una buena agitaciÛn y entonces se acumulan formando esa capa.
− Sistemas de baja tecnologÌa: es econÛmico, pero poco eficiente. No se suele usar casi nunca.

AquÌ tenemos una tabla en la que se comparan los estanques raceway con los fotobiorreactores tubulares para
el cultivo de microalgas:

* Consumo de agua: en general, en todos los sistemas se intenta recircular el medio cultivo, sobre todo en los
tubulares, para reducir gastos de los medios nutritivo y el agua. Adem·s, en los raceway hay m·s evaporaciÛn
por lo que el consumo de agua es m·s alto.

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* Eficiencia: los tubulares tienen una alta eficiencia debido a que presentan una orientaciÛn adecuada, inyecciÛn
autom·tica de cultivo que hace que las densidades se mantengan en valores Ûptimos. En los raceway est· todo
menos controlado (pH, densidad de cultivo, etc.).

* Necesidad de control de la temperatura: en los tubulares el cultivo est· siempre en circulaciÛn pasando por
el desgasificador y tambiÈn se nebuliza agua por el exterior para que no se alcancen temperaturas muy altas.
Los raceway son ·reas m·s grandes por lo que es m·s difÌcil controlar la temperatura.

* Transferencia gaseosa: es baja en los raceway porque al ser sistemas abiertos pierden parte del CO2.

* AcumulaciÛn de O2: los sistemas tubulares al ser cerrados tienen una alta acumulaciÛn, ya que en el pico del
fotoperiodo llega m·s radiaciÛn, se alcanzan mayores valores de fotosÌntesis y mayor producciÛn de O2.

* EstrÈs hidrodin·mico: mientras que en los sistemas raceway es bajo porque a pesar de que mantiene la
agitaciÛn, no es un movimiento continuo, en los tubulares el estrÈs es alto porque el cultivo est· bien agitado
para evitar la formaciÛn de los biofilms.

* Control de especies: alto en tubulares al ser un sistema cerrado donde el cultivo parte de inÛculos de un
cultivo en columna que se mantiene puro. En los raceway el control es bajo, a no ser que se cultiven
determinadas especies que crezcan a alto pH o alta salinidad que haga m·s f·cil controlar la especie que crece.

* Calidad del producto: depende mucho del diseÒo del sistema.

* Requerimiento energÈtico: es m·s alto en los fotobiorreactores tubulares porque est· todo m·s
automatizado.

3. SISTEMAS DE RECOGIDA DE LA BIOMASA

La recogida de las biomasas va a afectar a la rentabilidad del cultivo, entonces una vez cultivadas las microalgas
(suspensiÛn de algas de 0’2-1 g (ps)/L) hay que concentrarlas aproximadamente dos Ûrdenes de magnitud
(hasta 20-100 g/L). En todos los sistemas se recicla el medio de cultivo cuando se recoge la biomasa, tanto el
agua como los nutrientes disueltos en ella.

Los dos mÈtodos que se pueden emplear para la recogida de la biomasa:

− SedimentaciÛn por gravedad natural: es el m·s sencillo y econÛmico. Consiste en dejar que decante y se
concentre naturalmente. Sin embargo, tiene un rendimiento muy bajo, por lo que no es muy rentable. Es
por ello que se suele utilizar m·s como paso previo que como un mÈtodo de recogida.
Otros inconvenientes que presentan son que solo sirve para algunas especies y se necesitan decantadores
que ocupan una gran cantidad de espacio. Adem·s, decantar de forma natural puede llevar mucho tiempo,
lo que puede hacer que se alteren las propiedades y caracterÌsticas de las microalgas favoreciendo la
apariciÛn de contaminantes y la degradaciÛn de la biomasa.
− CentrifugaciÛn: es el mejor mÈtodo, ya que es r·pido, eficiente y adecuado para la gran mayorÌa de
microalgas, es cuestiÛn de jugar con la velocidad de centrifugaciÛn (500-1000 g tiempos cortos, desde
segundos hasta 1 minuto). No serÌa necesario utilizar ning˙n tipo de agente externo para favorecer la
recogida de la biomasa. Sin embargo, tiene un coste energÈtico bastante alto, asÌ como en instalaciÛn y
mantenimiento.

Por ejemplo, Spirulina tiende a flotar por lo que se puede recoger f·cilmente sin centrifugar.

− FiltraciÛn: se puede utilizar para muchas especies. Existe una gran variedad de filtros (arena fina, tierra de
diatomeas, fibras de celulosa) que se pueden emplear para llevar a cabo la filtraciÛn, no obstante, se
pueden obstruir con algas e incrustaciones (fouling), lo que enlentece la filtraciÛn. Cuando ocurre esta
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obstrucciÛn lo que se hace es lavar los filtros con agua o mejor con medio diluido para que no haya
problemas de rotura de cÈlulas. Adem·s, los filtros se pueden contaminar ya que pueden crecer
microorganismos indeseados, por lo que hay que ir renov·ndolos.
Una variante es usar un filtro de tambor rotatorio, con o sin movimiento vibratorio, con presiÛn o succiÛn,
etc. para la separaciÛn de sÛlidos en suspensiones acuosas. Dependiendo del filtro que se utilice m·s
costoso ser· energÈticamente, de manera que cuando m·s pequeÒo sea el poro m·s energÌa va a costar la
filtraciÛn del cultivo.
− Criba o tamizado: se utiliza para microalgas filamentosas o para aquellas microalgas que formen colonias.
Se utilizan tamices o mallas de nilÛn o de teflÛn que son m·s estables. Por ejemplo, para filamentos de 30-
150 µm y 3-4 de di·metro el tamaÒo adecuado de malla serÌa de 44 µm. Si los filamentos estuvieran entre
200-300 µm, la malla serÌa m·s pequeÒa, de 25-44 µm. TambiÈn se pueden cribas vibratorias para favorecer
el tamizado del cultivo.

Ejemplo de recogida de biomasa de la empresa AlgaEnergy a la que Ìbamos a ir de visita: primero se cosecha
por gravedad a un pozo que se encuentra por debajo de los biorreactores (depÛsito subterr·neo), despuÈs
pasa a un decantador lamelar para empezar a depositarse y concentrarse el cultivo de microalgas y luego
el cultivo preconcentrado se centrifuga. Por ˙ltimo, la biomasa h˙meda se refrigera, congela o liofiliza en
funciÛn de lo que se quiera hacer a partir de esa microalga.
− FloculaciÛn: obtener las microalgas del medio de cultivo es m·s f·cil y simple si esas cÈlulas se adhieren
entre ellas y forman flÛculos capaces de sedimentar o flotar. Esa floculaciÛn puede ser espont·nea si se
produce por cambio de pH o por cationes del medio de cultivo; o puede ser inducida por agentes floculantes
de f·cil uso que dan lugar a la formaciÛn de agregados celulares que facilitan la recogida. De esta manera,
el coste serÌa m·s asequible ya que no harÌa falta, por ejemplo, la infraestructura de la centrifuga.

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▪ AutofloculaciÛn: est· asociada a la elevaciÛn del pH o a la coprecipitaciÛn de las cÈlulas por sales de
carbonato/fosfato de magnesio/calcio presentes en el medio de cultivo. Por ejemplo, Scenedesmus
empieza a autoflocular si se alcanza un pH superior a 8’5. En el caso de la coprecipitaciÛn, habrÌa que
lavar despuÈs muy bien los flÛculos ara eliminar el exceso de calcio. TambiÈn puede darse
autofloculaciÛn por la interacciÛn de algas- bacterias, de diferentes tipos de algas entre ellas si los
cultivos no son puros o con polÌmeros que secreten las propias algas.
▪ FloculaciÛn quÌmica: se pueden utilizar diferentes floculantes quÌmicos como el sulfato de aluminio,
sulfato ferroso y fÈrrico, cloruro fÈrrico, etc. Por ejemplo, el sulfato de aluminio da mejores resultados,
hay que aÒadir 150 mg/L a un de pH de 6-6’5. El uso de estos floculantes tiene el inconveniente de que
la biomasa recogida hay que lavarla bien para eliminar el exceso y poder procesarla.
Adem·s de floculantes quÌmicos se pueden usar polielectrolitos como pectinas, carragenanos, alginatos
y carboximetil celulosa, pero estos se usan en una menor concentraciÛn, 1-20 mg/L.
Asimismo, el quitosano es un floculante comestible no tÛxico que se usa bastante para filtraciÛn y
depurados de aguas y vinos. Este quitosano procede de la desacetilaciÛn de la quitina de crust·ceos. Se
aÒade 50 mg/L a un pH de 8.
▪ ElectrofloculaciÛn: se aplica un campo elÈctrico de 3 V/cm durante 30 minutos. Se produce la electrolisis
del agua, se liberan pequeÒas burbujas de oxÌgeno e hidrÛgeno que causan la formaciÛn de los flÛculos
flotantes de las algas.

4. SISTEMAS DE SECADO DE LA BIOMASA

El secado de la biomasa, al igual que su recogida, puede encarecer la producciÛn. Todo va a depender del tipo
de secado que se le haga, en funciÛn tambiÈn del producto final que se quiere obtener o para que se quiere
utilizar la biomasa de algas.
− Secado al sol: es el mÈtodo m·s simple, econÛmico y ecolÛgico. Sin embargo, es lento, depende de las
condiciones ambientales y requiere grandes ·reas para extender la pasta de algas. Con lo costosa que es la
producciÛn de algas puede ser que este secado daÒe la calidad de esa pasta de algas.
− Secado en superficies calientes: es econÛmico, r·pido y se consigue una buena digestibilidad. No obstante,
tanto los pigmentos como las vitaminas se descomponen parcialmente. Si se desea obtener un producto
destinado a la alimentaciÛn animal (piensos para ganado o piscifactorÌas), serÌa una buena opciÛn emplear
este secado.
− Secado por pulverizaciÛn: es el secado a partir de una suspensiÛn de algas con aire caliente. Es un mÈtodo
r·pido, eficiente y preserva los pigmentos y vitaminas. Pero es m·s caro y la digestibilidad del producto se
ve afectada, ya que disminuye.

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− LiofilizaciÛn: serÌa el mÈtodo ideal porque es el que mejor calidad del producto final puede dar, pero es muy
caro. Hay liofilizadores en los que se tiene que introducir la biomasa ya congelada u otros en los que en las
propias bandejas del liofilizador se extiende la pasta que viene de las centrÌfugas. Si hay una r·pida
congelaciÛn del material antes de la liofilizaciÛn se obtiene un excelente producto.

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TEMA 4. AUMENTO DE LA PRODUCCI”N DE LÕPIDOS

EN MICROALGAS
1. CARACTERÕSTICAS GENERALES DE LA BIOSÕNTESIS DE LÕPIDOS
La sÌntesis de los lÌpidos tiene lugar principalmente en plastos y el retÌculo endopl·smico (en eucariotas). En
los plantos ocurre tanto la sÌntesis de ·cidos grasos como la desaturaciÛn de algunos de ellos. Por ejemplo, el
·cido este·rico se desatura y da lugar al ·cido oleico, aunque es verdad que en microalgas la proporciÛn de
·cido oleico es mucho menor que en plantas.

Los ·cidos grasos una vez que se sintetizan, sus grupos acilos se excretan al citosol y es en el retÌculo
endopl·smico donde los ·cidos grasos se van a modificar en cuanto a elongaciÛn y desaturaciones. TambiÈn
se va a producir en el retÌculo endopl·smico la sÌntesis de los triacilglicÈridos que se acumulan en los cuerpos
lipÌdicos.

El ciclo de Calvin va a proporcionar excretos carbonados para la sÌntesis de los ·cidos grasos. De hecho, el
acetil-CoA es el precursor de la sÌntesis de ·cidos grasos y la fase lumÌnica de la fotosÌntesis suministra energÌa
para generar esta fuente de excretos carbonados.

El acetil-CoA puede proceder de la descarboxilaciÛn oxidativa de piruvato, el cual se puede generar a partir de
excretos carbonados que tambiÈn deriven del ciclo de Calvin. Por eso, en tÈrminos generales se puede decir
que emplean intermediarios de energÌa que proceden de la fotosÌntesis.

TEMA 4. PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS 1

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A. CLASIFICACI”N
Como ya sabemos, los lÌpidos se pueden clasificar dentro de dos grupos:
− Los lÌpidos apolares son lÌpidos de almacenamiento y son principalmente los triacilgliceroles formados por
una molÈcula de glicerol esterificada en sus tres grupos hidroxilo con tres ·cidos grasos que pueden ser
saturados o insaturados. Entonces, los triacilglicÈridos pueden alcanzar hasta un 50% del peso seco.
Normalmente, se sintetizan en condiciones de luz, se van a almacenar y, posteriormente, cuando ocurran
los ciclos de oscuridad ser· cuando se reutilicen para sintetizar los lÌpidos estructurales o polares.
− Los lÌpidos polares son los estructurales de membrana y los de seÒalizaciÛn. Hay diferentes tipos, entre
ellos los fosfolÌpidos y los glucolÌpidos. A diferencia de la mayorÌa de los organismos no fotosintÈticos en
los que los principales componentes lipÌdicos de las membranas son los fosfolÌpidos, una parte importante
de los lÌpidos de las membranas tilacoidales son los glucolÌpidos. Esto puede deberse a que las membranas
tilacoidales tienen menor acceso al fosfato inorg·nico.
Los lÌpidos que se encuentran en abundancia en las membranas tilacoidales en plantas y algas son los
glucolÌpidos monogalactosildiacilglicerol (MGDG), digalactosildiacilglicerol (DGDG) y del sulfolÌpido
sulfoquinovosildiacilglicerol (SQDG), junto con el fosfolÌpido fosfatidilglicerol (PG).
A diferencia de las plantas, varias algas eucariotas contienen ·cidos grasos poliinsaturados de cadena muy
larga de 20 o m·s ·tomos de carbono en sus glucolÌpidos. Esto se debe a que las plantas carecen de
determinadas enzimas para la sÌntesis de estos ·cidos grasos poliinsaturados de cadena larga.
Las algas (sin referirnos a las membranas tilacoidales, sino en general los lÌpidos polares) contienen tres
fosfolÌpidos principales: fosfatidilglicerol (PG), fosfatidiletanolamina (PE) y fosfatidilcolina (PC).

B. TRIACILGLICEROLES (TAGs)
La estructura quÌmica de los triacilgliceroles es un triple Èster en el que el glicerol va a formar enlaces Èster
con tres ·cidos grasos que pueden ser insaturados o con diferentes grados de saturaciÛn. Estos TAGs van a ser
el sustrato para la reacciÛn de obtenciÛn del biodiesel (Èsteres metilo de ·cidos grasos) que se forma por
transesterificaciones mediante cat·lisis b·sicas con hidrÛxido pot·sico, aunque tambiÈn puede ser una
cat·lisis enzim·tica.

TAG + 3 metanol = glicerol + 3 metil-Èster (biodiesel)

TambiÈn se podrÌa utilizar como alcohol el etanol y se obtendrÌa etil-Èster, que cambiarÌa un poco las
caracterÌsticas del biodiesel, pero serÌa m·s o menos similar.

En la ruta de sÌntesis de TAG podemos distinguir varias etapas:

− SÌntesis de ·cidos grasos: ocurre en los plastos. La primera reacciÛn es la carboxilaciÛn del acetil-CoA para
formar malonil-CoA. Esta reacciÛn est· catalizada por la acetil-CoA carboxilasa.
− La elongaciÛn/insaturaciÛn de los ·cidos grasos: el este·rico, por ejemplo, se puede modificar por
desaturaciÛn y dar lugar al oleico en los plastos. La elongaciÛn suele ir sumando de dos en dos carbonos
en los plastos tambiÈn. Algunas modificaciones pueden ocurrir en el retÌculo endopl·smico.
− La formaciÛn de TAG y elongaciÛn y elongaciÛn de ·cidos grasos: en el retÌculo endopl·smico.

C. BIOSÕNTESIS DE LOS ¡CIDOS GRASOS (FA)

Los ·cidos grasos son los componentes b·sicos para la mayorÌa de los lÌpidos celulares. No solamente son
esenciales para el funcionamiento de las membranas, sino tambiÈn para el correcto funcionamiento de las
algas. En el caso de los vegetales y las algas su biosÌntesis se produce exclusivamente en el estroma de los
plastos (eucariota).
TEMA 4. PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS 2
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En cuanto a su composiciÛn, van a tener una longitud carbonada entre 12 y 22 molÈculas lineales de carbono
siempre en un n˙mero par, saturados o insaturados, donde la posiciÛn y el n˙mero de dobles enlaces es entre
1 (oleico) y 6 (docosanoico), siendo por lo general cis la configuraciÛn de estos. Los ·cidos grasos m·s
frecuentes son de 16 a 18 carbonos.

Si hacemos la comparaciÛn entre cianobacterias y algas eucariÛticas, las algas eucariotas contienen
generalmente muchos m·s ·cidos grasos insaturados. Por ejemplo, las microalgas de agua dulce suelen tener
mayor contenido de ·cidos grasos saturados y monoinsaturados frente a las especies marinas que, sin
embargo, tienen mayor contenido de polinsaturados (PUFAs).

En cuanto a los ·cidos grasos saturados, el ·cido palmÌtico (C16) es el m·s abundante en algas, y el ·cido oleico
(C18:1) es mucho menos abundante que en plantas.

* ANEXO A MODO DE CONSULTA, NO HAY QUE SAB…RSELO AL DETALLE

Para la sÌntesis de ·cidos grasos son necesarios ciclos en los que se van aÒadiendo carbonos de dos en dos
derivados de acetil-CoA. En esta sÌntesis participa la ·cido graso sintasa (FAS) que es un complejo
multienzim·tico, formada por diferentes dominios que van a participar en las reacciones.

1. La biosÌntesis de ·cidos grasos: empieza con la enzima acetil-CoA-carboxilasa (ACC) que cataliza la
conversiÛn/carboxilaciÛn de acetil-CoA y CO2 (en forma de bicarbonato) en malonil-CoA (de 3 carbonos).
2. Una vez sintetizado el malonil-CoA es transferido por la malonil-CoA:ACP transacetilasa (MAT) a una
proteÌna transportadora (Carrier) de grupos acilo (ACP), la cual forma parte de FAS. Se forma malonil-ACP.
3. En una reacciÛn de condensaciÛn en la que hay pÈrdida de un carbono en forma de CO2 (se iban sumando
dos carbonos, pero en este caso debido a la pÈrdida de 1C solo se suma uno), el grupo acetato de otra
molÈcula de acetil-CoA es transferido a otra subunidad de FAS (KAS). La cetoacil-ACP-sintasa cataliza la
condensaciÛn del malonil-ACP y el grupo acetato para formar cetoacil-ACP (de 4 carbonos).
4. El cetoacil-ACP es transformado a travÈs de tres reacciones de: reducciÛn (catalizada por la subunidad KAR
= cetoacil-ACP reductasa), deshidrataciÛn (catalizada por la subunidad HD = hidroxiacil-ACP deshidratasa)
y reducciÛn (catalizada por la unidad ENR = enoil-ACP reductasa). En estas reacciones se elimina/reduce
el grupo ceto del carbono 3 y se forma acil-ACP (de forma general) o butiril-ACP (de 4 carbonos).
5. Ahora se da un segundo ciclo de condensaciÛn (formaciÛn de grupos acilo) para seguir creciendo la
cadena. El ·cido graso de 4C (·cido butÌrico) se condensa con otra molÈcula de malonil-ACP, que da lugar
a la adiciÛn de dos carbonos a la cadena creciente. El ciclo contin˙a hasta 16-18C (en el propio cloroplasto
la mayorÌa de 18:0-ACP son convertidas eficientemente por las desaturasas a 18:1-ACP). Una vez formado
el ·cido graso, la ACP se separa gracias a la acciÛn de la acil-ACP tioesterasa que hidroliza el enlace tioÈster
que los une y ya sale de los plastos al citosol.

La elongaciÛn de ·cidos grasos se produce tanto en plastidios como en el retÌculo endopl·smico

y requiere como sustratos acetil-CoA, 1 molÈcula de ATP (se usa al inicio en la primera etapa de
carboxilaciÛn) y 2 molÈculas NADPH (para las reacciones de triple reducciÛn) por cada unidad de
alargamiento de C2 en la cadena de carbonos.

TEMA 4. PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS 3

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En la siguiente imagen tenemos de nuevo el metabolismo de los lÌpidos, pero con el nombre de las enzimas
que participan en cada una de las reacciones y etapas:

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A continuaciÛn, tenemos un esquema de los org·nulos implicados en la sÌntesis de lÌpidos en las microalgas
clorofÌceas y que reacciones ocurren en cada uno de ellos (la profesora no le ha dado mucha importancia):

D. BIOSÕNTESIS DE TRIACILGLIC…RIDOS (TAG)

Este proceso ocurre en el retÌculo endopl·smico. Los acilos una vez sintetizados en los plastos se excretan, no
se sabe muy bien el mecanismo, y ya en el citosol los acilos se unen de nuevo a acetil Co-A por una reacciÛn
catalizada por una acil-CoA sintetasa (situada en la envuelta exterior del pl·stido) dando lugar a acil-CoA, que
va a participar en la biosÌntesis de los triglicÈridos a partir de glicerol-3-fosfato.

Entonces, los acil-CoA citosÛlicos se transfieren posteriormente al retÌculo endopl·smico para su posterior
elongaciÛn, modificaciÛn o participaciÛn en la sÌntesis de lÌpidos de membrana o de TAGs de almacenamiento.

Los TAGs se sintetizan sobre todo a la luz, se almacenan en los cuerpos lipÌdicos, y en la oscuridad
se inmovilizan para poder ser reutilizados para la sÌntesis de lÌpidos polares.

1. El primer paso en la sÌntesis de TAGs es a partir del precursor glicerol-3-fosfato

que procede de la reducciÛn de dihidroxiacetona-3-fosfato (que se genera en el
ciclo de Calvin) mediante la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (tambiÈn puede
catalizar la reacciÛn en sentido inverso). Ocurren dos reacciones de acilaciÛn:
− CondensaciÛn (transferencia del grupo acilo) de acil-CoA y glicerol-3-fosfato
que forma ·cido lisofosfatÌdico (LPA) catalizado por la glicerol-3-fosfato
aciltransferasa (GPAT).
− LPA es posteriormente condensado con otra molÈcula de acil-CoA para formar
·cido fosfatÌdico (PA) catalizado por la ·cido lisofosfatÌdico aciltransferasa
(LPAAT).
2. PA puede desfosforilarse y dar lugar a diacilglicerol por la fosfatasa de ·cido
fosfatÌdico (PA).
3. Ahora es el diacilglicerol el que se condensa con una tercera molÈcula de acil-
CoA mediante la diacilglicerol aciltransferasa (DAGAT) dando lugar a la sÌntesis
de los triacilglicÈridos que se acumulan en los cuerpos lipÌdicos. La enzima

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DAGAT es uno de los puntos de regulaciÛn de la biosÌntesis de TAGs m·s importantes. El otro punto es la
glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (G3PDH).

AquÌ tenemos la relaciÛn entre los diferentes precursores y sustratos que se van formando en la biosÌntesis de
triacilglicÈridos:

− A partir de glucosa se puede dar lugar a la sÌntesis de fosfoenolpiruvato y de este se puede generar
piruvato por la piruvato quinasa.
− A partir de malato que puede proceder del ciclo de Krebs puede generar piruvato por la reacciÛn de
descarboxilaciÛn oxidativa catalizada por la enzima m·lico y poder reductor que es el aceptor de los
electrones.
− El piruvato generado por el complejo de piruvato deshidrogenasa (PDH) puede dar lugar a acetil-CoA. Esta
reacciÛn tambiÈn serÌa una descarboxilaciÛn oxidativa: piruvato + CoA + NAD+  acetil-CoA + CO2 + NADH
− El citrato, que puede proceder de la mitocondria, puede salir al citosol por el sistema de lanzaderas y en
oxalacetato y acetil-CoA.
− A partir de acetil-CoA comenzarÌan las reacciones de sÌntesis de ·cidos grasos que se ha explicado antes.
− Una vez que los acilos salen al citosol entrarÌan en lo que serÌa la sÌntesis de triacilgliceroles.

2. PRODUCTIVIDAD DE LÕPIDOS EN DIFERENTES ESTIRPES DE ALGAS

AquÌ tenemos una tabla que nos ilustra ejemplos del contenido de proteÌnas, carbohidratos y lÌpidos en
diversas estirpes de microalgas. Nos quedaremos con algunos valores representativos.

− El contenido de proteÌnas, carbohidratos y lÌpidos varÌa en funciÛn de la especie. En funciÛn de cual sea el
objetivo de nuestro cultivo de algas interesar· m·s o menos el contenido que presenten de estos tres
compuestos.
− Por ejemplo, en la producciÛn de biodiesel interesa que tenga un alto contenido de lÌpidos que son los
valores que aparecen en rojo y que serÌan las especies de interÈs para este caso.

TEMA 4. PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS 6

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− Si interesa un alto contenido de proteÌnas interesarÌan Spirulina maxima o Spirulina platensis. De hecho,
estas son productos que son comerciales como fuentes de proteÌnas o suplementos o incluso para piensos.
En general son interesan las especies cuyos valores aparecen seÒalados en verde.

Varias especies de microalgas son capaces de acumular lÌpidos en cantidades significativas y, por tanto, se
caracterizan como oleaginosas. La capacidad que tienen las microalgas de sobrevivir a diversas y extremas
condiciones se refleja en la tremenda diversidad y muchas veces en el inusual patrÛn de lÌpidos celulares. De
forma genÈtica pueden acumular m·s lÌpidos, pero muchas veces no solamente depende de la propia
naturaleza, sino que las condiciones que se aplican al cultivo pueden producir una mayor rentabilidad y
producciÛn de los lÌpidos.

La productividad de lÌpidos en diferentes estirpes de algas puede modificarse porque en respuesta a diferentes
estreses se puede activar la biosÌntesis de lÌpidos y aumentar su contenido. Dichas condiciones de estrÈs
pueden ser la deficiencia de nutrientes (ejemplo: insuficiente nitrÛgeno afecta bastante a la sÌntesis de lÌpidos),
cambios en la temperatura (puede afectar al perfil o composiciÛn de ·cidos grasos), cambios en salinidad, pH,
luz o irradiancia.

Esta respuesta a los cambios en las condiciones ambientales conduce a la formaciÛn y acumulaciÛn de lÌpidos
neutros (TAG), y estos lÌpidos son precursores adecuados para la producciÛn de biodiesel.

A. CONTENIDO DE LÕPIDOS Y SU PRODUCTIVIDAD EN DIVERSAS ESTIRPES DE MICROALGAS

A continuaciÛn, se muestra una tabla con las diferentes microalgas que son propias de h·bitat marino o de
agua dulce y su contenido en peso seco de lÌpidos, asÌ como la productividad de lÌpidos en litro y dÌa.

Hay que ver que estirpe de microalgas tiene un buen contenido de lÌpidos, pero tambiÈn que tenga un buen
crecimiento de la cual se pueda obtener una buena productividad. Esto se debe a que hay determinadas
microalgas que pueden tener un buen perfil, pero sin embargo no tienen un buen crecimiento.

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B. MODIFICACION DEL METABOLISMO LIPÕDICO EN RESPUESTA A CAMBIOS AMBIENTALES

Cada especie tiene una composiciÛn quÌmica, es decir, un determinado contenido de lÌpidos, carbohidratos y
proteÌnas, pero este perfil puede alterarse por variaciones en las condiciones ambientales y nutricionales,
incluyendo la temperatura y la luz.

En condiciones de estrÈs afecta a la divisiÛn celular haciendo que haya menor crecimiento, y muchas algas
cambian sus rutas metabÛlicas haciÈndose m·s lentas y activando m·s la biosÌntesis de lÌpidos de
almacenamiento o polisac·ridos. Esta redirecciÛn a la sÌntesis de lÌpidos tiene lugar siempre y cuando haya
suficiente luz y CO2 disponible para la fotosÌntesis.

Cuando el crecimiento de las algas se ralentiza y disminuye la sÌntesis de nuevos compuestos de membrana,
las cÈlulas depositan los ·cidos grasos en TAG. Los TAG acumulados en condiciones de estrÈs (20-50% de peso
seco) les hace precursores adecuados para la producciÛn de biodiesel.

El redireccionamiento de las rutas a un aumento de la producciÛn de triacilglicÈridos es una forma de acumular

energÌa para cuando se activen las condiciones favorables, tambiÈn es una forma de a partir de estos lÌpidos
de reserva poder suministrar lÌpidos estructurales cuando se pueda activar el crecimiento y tambiÈn sirve
como mecanismos de protecciÛn. Si sigue activa la fotosÌntesis hay sÌntesis de ATP, de poder reductor, y de
esta forma habrÌa un consumo de energÌa que evitarÌa que se daÒara la cÈlula.

a) CARENCIA DE NITR”GENO

Dentro de las carencias nutricionales, la que m·s afecta al metabolismo de los lÌpidos es la carencia de
nitrÛgeno, ya que es la que m·s activa dicho metabolismo. La respuesta es el aumento de la producciÛn de
lÌpidos, especialmente de los TAG.

Es una de las condiciones de cultivo que se emplea bastante para la producciÛn de lÌpidos. DespuÈs de un
cultivo en condiciones completas donde este ya ha alcanzado una determinada densidad, se le aplican unos
ciclos de deficiencia o bien se pone nitrÛgeno de tal manera que a partir de un punto ya estÈ en deficiencia de

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nitrÛgeno y se active este metabolismo de sÌntesis de lÌpidos, con lo cual aumenta su producciÛn antes de
recoger las algas.

AquÌ tenemos una tabla con diferentes especies de microalgas en las que se han analizado o se han llevado a
tratamientos para aumentar la producciÛn de lÌpidos:

− La limitaciÛn de S va a disminuir la concentraciÛn sulfoquinovosildiacilglicerol y aumenta la sÌntesis de

fosfatidilglicerol, y en el caso de la limitaciÛn de P disminuye la presencia en las membranas y en el
fosfatidilglicerol y aumentarÌa la sÌntesis de sulfoquinovosildiacilglicerol.
− En el caso del silicio, es esencial para las diatomeas ya que es el componente principal de su pared celular.
− En Dunaliella se da un incremento de la salinidad. Es un alga halÛfila que es capaz de crecer en medios con
alta concentraciÛn de sales, pero el cambio en la salinidad lleva consigo un cambio en el perfil de lÌpidos.
− Un aumento de pH en Chlorella vulgaris da un aumento de TAG. Si no se controla el pH con la inyecciÛn
CO2 o aireaciÛn con lleva a una alcalinizaciÛn del medio.
− Aunque no aparece en la tabla tambiÈn se puede inducir un cambio en el perfil de lÌpidos por metales
pesados (Cd, Cu, Zn), lo que pasa que no es una aproximaciÛn muy buena.
b) CAMBIOS EN LA TEMPERATURA

Es la tendencia general que se observa en muchas microalgas y cianobacterias. Cuando se disminuye la

temperatura se aumentan los ·cidos grasos insaturados, sin embargo, cuando se aumenta la temperatura
aumentan los ·cidos grasos saturados (acompaÒada tambiÈn de un aumento de hidratos de carbono y una
disminuciÛn de contenido de proteÌnas).

Digamos que son cambios en la composiciÛn de lÌpidos que hacen que cambien las propiedades fÌsicas de la
membrana, pero se mantienen las caracterÌsticas funcionales: permeabilidad de iones, fotosÌntesis, procesos
respiratorios, etc.

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Entonces la explicaciÛn que tiene esta modificaciÛn es mantener la fluidez de las membranas. Con bajas
temperaturas aumenta el contenido de ·cidos grasos insaturados y con altas temperaturas hay mayor
proporciÛn de ·cidos grasos saturados. Los FA con dobles enlaces carbono-carbono no pueden ser tan
densamente empaquetados como los FA saturados, por lo tanto, se aumenta la fluidez de las membranas que
contienen insaturados FA. Como la fluidez de la membrana se reduce a temperaturas m·s bajas, el aumento
de insaturaciÛn FA proporciona una adaptaciÛn a los cambios del entorno.

La ruta de transducciÛn de seÒales que genera este aumento de insaturaciones de los ·cidos grasos como
consecuencia del descenso de temperatura parece que se lleva a cabo a travÈs de una proteÌna que es una
histidina quinasa de membrana (HIK33). Esta proteÌna percibe el cambio de fluidez (menor) por descenso de
la temperatura y se activarÌa por autofosforilaciÛn/dimerizaciÛn. Esa forma activa lo que hace es fosforilar a
un regulador de respuesta que activarÌa la transcripciÛn de determinadas desaturasas que van a generar el
aumento de los ·cidos grasos insaturados.

Adem·s de ese aumento de los FAs insaturados como consecuencia del descenso de temperatura, tambiÈn
participa el fosfatitidilglicerol. En plantas resistentes al frÌo ese fosfatidilglicerol contiene ·cidos grasos
insaturados del tipo 18:1 y las plantas sensibles al frÌo contiene ·cidos grasos saturados del tipo 18:0 o 16:0.

c) CAMBIOS EN LA IRRADIANCIA

Esto son cambios en la intensidad de luz. Sin luz evidentemente la fotosÌntesis no ocurre y distintas
intensidades de irradiancia pueden alterar el perfil de lÌpidos.

Una baja intensidad de la luz induce la formaciÛn de lÌpidos polares, en particular los lÌpidos polares de
membrana asociados con el cloroplasto, lo que serÌa la membrana tilacoidal. Por otra parte, alta intensidad de
luz disminuye el contenido de lÌpidos polares totales con un aumento simult·neo de la cantidad de lÌpidos de
almacenamiento neutral, principalmente TAGs.

Estos cambios en la irradiancia no solo afectan a la fracciÛn de lÌpidos, sino tambiÈn al contenido de pigmentos.
Cuando la intensidad de luz es muy alta, el ratio de carotenoides con respecto a clorofilas es bajo, es decir,
van a haber m·s clorofilas. Sin embargo, cuando la intensidad de luz es baja, aumenta el contenido de
carotenoides, particularmente β-caroteno y la luteÌna, ya que son fotoprotectores frente a daÒos por
fotooxidaciÛn.

3. LAS ALGAS: FUENTE DE ACIDOS GRASOS POLIINSATURADOS

En este apartado lo que vamos a ver es el interÈs que tienen las microalgas para producir ·cidos grasos
poliinsaturados (PUFA). Este tipo de ·cidos grasos normalmente los tomamos de la dieta aliment·ndonos de
pescado, pero las microalgas son productoras primarias de ellos.

Los PUFA poseen m·s de un doble enlace (instauraciÛn). Consideramos los PUFA beneficiosos para la salud
humana del tipo ω-3 y ω-6, dependiendo de la posiciÛn del primer doble enlace.

En las cÈlulas de las microalgas esos ·cidos grasos poliinsaturados no est·n libres, sino que est·n esterificados
con un alcohol que suele ser el glicerol para formar los triacilglicÈridos o los lÌpidos polares (fosfolÌpidos y
glucolÌpidos). Tienen bastante interÈs los que son los ·cidos grasos poliinsaturados de cadena larga de 20 o 22
carbonos, el ·cido eicosapentaenoico (EPA) y el ·cido docosahexaenoico (DHA) respectivamente.

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En esta tabla aparecen ordenados por el grado de insaturaciÛn:

− El ·cido γ-linolÈnico (GLA) presenta 18 carbonos y 3 insaturaciones.

− El ·cido araquidÛnico (AA) presenta 20 carbonos y 4 insaturaciones.
− El ·cido eicosapentaenoico tiene 20 carbonos y 5 insaturaciones.
− El ·cido docosahexaenoico tiene 22 carbonos y 6 insaturaciones.

Hay bastante interÈs en generar plantas transgÈnicas que expresen transgenes de microalgas para poder
producir ·cidos poliinsaturados.

En 2018 se identificaron nuevas cepas de diatomeas en los fiordos ·rtico y noruego que presentaban alto
contenido de EPA. En el mercado ya hay productos comerciales de omega 3 de microalgas Schizochytrium sp.
Este ejemplo concretamente es una mezcla de DHA y EPA, constituyendo asÌ una fuente de ·cidos grasos
poliinsaturados que no sea animal.

* ANEXO A MODO DE CONSULTA, NO HAY QUE SAB…RSELO AL DETALLE

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La sÌntesis de ·cidos grasos insaturados de cadena larga requiere la presencia de elongasas y desaturasas
especÌficas que act˙an principalmente en los ·cidos grasos palmÌtico (C16:0), este·rico (C18:0) y oleico (C18:1).

La elongasa de ·cidos grasos es un complejo que consta de cuatro subunidades: β-cetoacil-CoA sintasa (KCS),
la reductasa de β-cetoacil-CoA, la dehidratasa β-hidroxiacil-CoA y la enoil-CoA reductasa.

Las KCSs se dividen en la “elongasa de ·cidos grasos de cadena muy larga” (ELOVL) que contribuyen a la
biosÌntesis de los esfingolÌpidos y la “elongasa de ácidos grasos” (FAE) para los TAG o la biosÌntesis de ceras.

Los ·cidos grasos poliinsaturados de mayor interÈs son los de cadena larga:

− ¡cido γ-linolÈnico (GLA): es un ·cido graso poliinsaturado esencial de 18 carbonos con 3 dobles enlaces
(18:3) de la serie ω-6. Es un precursor para la sÌntesis de ·cido araquidÛnico.
− ¡cido araquidÛnico (AA): es un ·cido graso poliinsaturado esencial de 20 carbonos con 4 dobles enlaces
(20:4) de la serie ω-6. Est· en las membranas celulares y es precursor de otras molÈculas lipÌdicas. Es
precursor para la sÌntesis de prostaglandinas.
− ¡cido eicosapentaenoico (EPA): es un ·cido graso poliinsaturado esencial de 20 carbonos con 5 dobles
enlaces (20:5) de la serie ω-3. Es precursor para la sÌntesis de prostaglandinas y tromboxanos.
− ¡cido docosahexanoico (DHA): es un ·cido grado esencial poliinsaturado de 22 carbonos con 6 dobles
enlaces (22:6) de la serie ω-3.

Crypthecodinium cohnii, que es un dinoflagelado, se utiliza desde el punto de vista comercial para su
producciÛn junto con Schizochytrium que tambiÈn se utiliza para producir comercialmente. En cultivos de
Crypthecodinium cohnii el contenido de DHA es del 30-50% del total de ·cidos grasos, que aumenta a menor
temperatura (1g de DHA cuesta aproximadamente 500€).

4. AUMENTO DE LA PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS POR INGENIERÕA

GEN…TICA
Vamos a hablar de algunas aproximaciones que se pueden hacer para mejorar la producciÛn de lÌpidos por
ingenierÌa genÈtica.

En comparaciÛn a las plantas terrestres, en microalgas no hay tantos datos de la investigaciÛn aplicada a la
biosÌntesis y catabolismo de lÌpidos y modificaciÛn de la longitud/grado de insaturaciones de los ·cidos grasos.

Muchos de los genes implicados en el metabolismo de los lÌpidos en plantas terrestres tienen homÛlogos en
microalgas y algunas estrategias de modificaciÛn genÈtica tambiÈn pueden ser empleadas en microalgas.

En cualquier caso, se puede abordar este aumento de producciÛn de lÌpidos por estas tres estrategias:

− Modificando el contenido de lÌpidos: modificar la expresiÛn de genes que participan en la ruta de

biosÌntesis de los lÌpidos.
− Bloqueando rutas competitivas.
− Modificando enzimas que indirectamente est·n implicadas en la ruta de biosÌntesis de lÌpidos porque dan
sustratos que se van a utilizar en la ruta.

A. MODIFICANDO EL CONTENIDO LIPÕDICOS

Los primeros intentos que se hicieron fueron con las enzimas que parecÌan m·s representativas o que deberÌan
conducir a una mayor producciÛn de lÌpidos:

− Acetil-CoA carboxilasa (ACCasa): cataliza la conversiÛn de acetil-CoA en malonil-CoA. El gen que codifica
esta proteÌna se ha sobreexpresado en las diatomeas Cyclotella cryptica y Navicula saprophila, aunque la

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actividad ACCasa aumentÛ 2-3 veces, no se aumentÛ claramente la producciÛn de lÌpidos. Esto sugiriÛ que
existe un segundo paso limitante para la sÌntesis de lÌpidos.
− 3-cetoacil-ACP sintasa (KAS): cataliza la conversiÛn de malonil-ACP en 3-cetoacil-ACP. Es una subunidad
del complejo ·cido graso sintasa. Su sobreexpresiÛn en plantas lleva a una reducciÛn de la sÌntesis de
lÌpidos y a una acumulaciÛn de ·cidos grasos del tipo 16:0 (·cido palmÌtico), por lo que no fue un resultado
muy satisfactorio.
− Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (G3PDH): este es el primer punto de sÌntesis de los triacilgliceroles, que
serÌa la enzima que cataliza la reducciÛn de DHAP en glicerol-3-fosfato. La sobreexpresiÛn de un gen de
levaduras en plantas aumentÛ un 40% el contenido lipÌdico en semillas, por lo tanto, serÌa una buena
aproximaciÛn.

Otros genes de enzimas a los que se pueden modificar su expresiÛn son aquellos que codifican para los pasos
de transferencia de grupos acilo al glicerol-3-fosfato:

− Glicerol-3-fosfato aciltransferasa (GPAT): acil-Coa + glicerol-3-fosfato que forma lisofosfatidato (LPA).

− ¡cido lisofosfatÌdico aciltransferasa (LPAAT): conversiÛn de ·cido lisofosfatÌdico en ·cido fosfatÌdico.
− Diacilglicerol aciltransferasa (DAGAT): acil-CoA + diacilglicerol y forma TAG.

En este caso, su expresiÛn en plantas sÌ se tradujo en un aumento dr·stico de triacilgliceroles.

B. BLOQUEANDO RUTAS COMPETITIVAS

La fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) cataliza la formaciÛn de oxalacetato a partir de fosfoenolpiruvato

(PEP), el cual se puede usar tambiÈn como sustrato para generar acetil-CoA porque el fosfoenolpiruvato puede
dar piruvato por una piruvato quinasa y el piruvato a acetil-CoA por el complejo piruvato deshidrogenasa.

El fosfoenolpiruvato si se convierte en oxalacetato es una perdida de sustrato para la formaciÛn de acetil-CoA.

Entonces, en este caso se inhibe la PEPC por silenciamiento gÈnico. La expresiÛn de antisentido de PEPC en
Brassica napus incrementÛ el contenido de lÌpidos y tambiÈn se hizo en la cianobacteria Synechococcus sp y
Chlamydomonas.

C. MODIFICANDO ENZIMAS INDIRECTAMENTE MPLICADAS EN LA RUTA DE BIOSÕNTESIS DE LÕPIDOS

La acetil-CoA sintasa (ACS) cataliza la conversiÛn de acetato en acetil-CoA entonces una mayor expresiÛn de
ACS puede dar lugar a una mayor sÌntesis de ·cidos grasos.

TambiÈn tenemos la enzima m·lico que cataliza la conversiÛn de malato en piruvato y NADPH
(descarboxilaciÛn oxidativa). La sobreexpresiÛn de esta enzima permite una mayor asimilaciÛn de malato hacia
piruvato y, sobre todo, el incremento de NAD(P)H en el citosol que lo pueden aprovechar las enzimas
implicadas en la biosÌntesis de TAG. Se aumenta la producciÛn de lÌpidos.

Muchas veces se han hecho estudios en paralelo o se han extrapolado los resultados de plantas
a microalgas.

TEMA 4. PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS 13

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AquÌ tenemos un esquema del aprovechamiento integral del cultivo de microalgas que va a ser lo que vamos
a empezar a ver en el tema siguiente.

Se cultivan microalgas a partir de la energÌa solar, se inyecta CO2 mezclado con aireaciÛn y a partir de la
biomasa de microalgas que se cultiva se puede extraer la fracciÛn lipÌdica que se puede utilizar, por ejemplo,
para la obtenciÛn de biocombustible. La biomasa residual se puede utilizar de nuevo entrando a un biorreactor
para la obtenciÛn, por ejemplo, de metano. Los nutrientes que se pueden separar se reciclan para mantener
el cultivo de las microalgas.

TEMA 4. PRODUCCI”N DE LÕPIDOS EN MICROALGAS 14

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TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A

PARTIR DE MICROALGAS
1. INTRODUCCI”N
Hay mucho interÈs por obtener una fuente alternativa para la obtenciÛn de biodiesel. AquÌ tenemos una
representaciÛn de las fechas de caducidad de las reservas que tenemos de petrÛleo. Vemos el efecto
combinado del aumento de la poblaciÛn, que puede ser una estimaciÛn de 1.5% o 3% del crecimiento.

Las lÌneas azul y verde (1P) tienen en cuenta el agotamiento de las reservas m·s directas y las lÌneas roja y
morada (URR) el agotamiento de las reservas menos directas y de m·s difÌcil extracciÛn. Como vemos la fecha
de caducidad m·xima estarÌa entre 2085 y 2112 aproximadamente. Estos lÌmites m·ximos son los que han
hecho que sea necesario buscar una fuente alternativa al diÈsel y ese tipo de combustibles.

Esta gr·fica anterior puede cambiar si tenemos en cuenta la posibilidad de obtener tambiÈn combustibles a
partir del fracking, Este proceso es empleado en yacimientos atrapados en rocas poco porosas y permeables,
como las pizarras, situados a grandes profundidades (entre 4.000 y 5.000m). Para liberarlos se rompen las
capas de pizarras bituminosas, enquistobituminosas o lutitabituminosas, para que puedan fluir hacia arriba.
Son pizarras que tienen unos depÛsitos org·nicos, que se les denomina querÛgenos, que se pueden utilizar
como fuentes de combustibles si se les hace fracking.

Para fracturar las rocas, tras hacer un agujero vertical, se hace una perforaciÛn hidr·ulica horizontal de varios
kilÛmetros de largo para obtener combustibles fÛsiles que pueden estar retenidos en las pizarras.

Lo que se hace es utilizar unas barras que calientan hasta 650C las pizarras bituminosas para aumentar la
fluidez de esos compuestos org·nicos. AquÌ lo que se produce entonces es un proceso de pirÛlisis al aumentar
la temperatura y se produce la extracciÛn del aceite de petrÛleo o puede dar lugar a la formaciÛn de gases.

TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE MICROALGAS 1

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Como consecuencia de esta fracturaciÛn, el petrÛleo o el gas (esa mezcla de aceite, petrÛleo y gas) ascenderÌa
a la superficie junto con la mezcla de agua y otros aditivos. En este proceso se utiliza adem·s arena y algunos
aditivos quÌmicos que act˙an como catalizadores.

El problema es que esa fractura hidr·ulica consume mucha agua, contamina bastante la zona es la que se
produce y puede producir incluso seÌsmos. Por eso desde el punto de vista ambiental, est· muy mal visto el
fracking.

En resumen, si tenemos en cuenta el fracking, la estimaciÛn de la fecha de caducidad m·xima podrÌa ser un
poco mayor, tendrÌamos combustibles fÛsiles m·s tiempo.

AquÌ tenemos la posibilidad de producir distintos tipos de biocombutibles a partir de microalgas. Si en vez de
utilizar otras fuentes vegetales para producir biodiesel se utilizan microalgas, no se consumir·n recursos del
suelo y se podr· hacer frente a la demanda de energÌa sin aumentar la presiÛn sobre la tierra cultivable.
Adem·s, como consumen CO2 pueden contribuir a la captura del exceso CO2 que se emiten por la combustiÛn
de combustibles fÛsiles y las industrias. Es otra alternativa bastante buena.

Las microalgas necesitan luz, CO2, agua y nutrientes para crecer. A partir de los distintos componentes que
tienen las microalgas se pueden generar distintos tipos de biocombustibles: a partir de lÌpidos se puede formar
diÈsel, de az˙cares y almidÛn etanol, de proteÌnas se obtiene metano y de forma directa hidrÛgeno. Es una
fuente potencial de materias primas para obtener biocombustibles.

AquÌ tenemos un sistema de aprovechamiento integral. El principal problema de utilizar microalgas es hacerlo
rentable y para eso hay que hacer un modelo de aprovechamiento en el que se diversifiquen los diferentes
tipos de productos que podemos llegar a tener.

TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE MICROALGAS 2

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Se obtiene, por ejemplo, aceite de algas a partir del cual podemos obtener biodiesel o extraer a la vez a partir
de la biomasa compuestos de interÈs farmacÈutico, para la alimentaciÛn humana, nutracÈuticos, algunas
biomolÈculas de interÈs o para alimentaciÛn animal. Los restos, una vez ya extraÌdo todo lo anteriormente
comentado, se pueden utilizar para hacer fertilizantes o para generar electricidad que producirÌa CO2 que
vuelve de nuevo a ser una fuente para cultivar m·s microalgas. Adem·s, se recuperan agua y nutrientes
porque hay un sistema de reciclaje. Esto es la mejor estrategia comercial.

2. PRODUCCI”N DE ENERGÕA: CONVERSI”N T…RMICA

Vamos a ver diferentes formas de cÛmo a partir de la biomasa de microalgas se pueden producir distintos
tipos de biocombustibles:

− CombustiÛn directa: Chlamydomonas reinhardtii es un modelo que produce hidrÛgeno de forma asociada
a la fotosÌntesis. La forma directa no es demasiado practica porque hace falta una gran cantidad de
biomasa, pero sÌ se podrÌa utilizar la biomasa de microalgas en centrales tÈrmicas para generar
electricidad.
− ReacciÛn quÌmica: por transesterificaciÛn se puede obtener biodiesel.
− ConversiÛn bioquÌmica: por fermentaciÛn alcohÛlica a travÈs de microorganismos se pueden obtener
etanol, acetona y butanol por lo que serÌa necesario suministrar la fuente de carbonos (carbohidratos o
fracciÛn enriquecida en estos); y por digestiÛn anaerÛbica se puede producir metano e hidrÛgeno por
diferentes bacterias.
− ConversiÛn termoquÌmica: la biomasa por mÈtodos termoquÌmicos puede dar lugar a un gas de sÌntesis
mediante gasificaciÛn o por pirÛlisis obtendrÌamos una mezcla de tres fases de bioaceites (lÌquida), gas y
carbÛn vegetal (sÛlida). Adem·s, por licuefacciÛn obtendrÌamos bioaceites que los podrÌamos utilizar
como fracciÛn de lÌpidos para la posterior producir de biodiesel.

AquÌ tenemos las definiciones de lo que serÌan los tres procesos de conversiÛn termoquÌmica. De los cuales la
licuefacciÛn serÌa el ˙nico proceso que podrÌa emplear biomasa h˙meda y en los otros dos se parte de biomasa
seca con lo cual ya serÌa un pequeÒo inconveniente desde el punto de vista de la rentabilidad energÈtica.

− GasificaciÛn: es la conversiÛn de biomasa seca en una mezcla de gases combustibles a travÈs de la

oxidaciÛn parcial de la biomasa a altas temperaturas (800-900C).
− PirÛlisis: es la conversiÛn de la biomasa seca en fracciones lÌquida (bioaceites), sÛlida (carbÛn vegetal) y
gaseosa (gas de sÌntesis) por calentamiento de la biomasa en ausencia de oxÌgeno a temperaturas que
oscilan entre 350-700C.
− LicuefacciÛn directa: es la conversiÛn de la biomasa en combustibles lÌquidos (bioaceites) por la conversiÛn
termoquÌmica a temperatura entre 300-350C y alta presiÛn (5-20 MPa) de la biomasa e la presencia de
un catalizador y en la presencia de hidrÛgeno. No tiene mucha aplicabilidad industrial. Hay una opciÛn a
la pirÛlisis que es la carbonizaciÛn hidrotermal en la que se consume menos energÌa porque se da a menos
temperatura y se puede utilizar biomasa h˙meda.
− LicuefacciÛn indirecta: esta sÌ tiene uso industrial. Primero hay una fase se gasificaciÛn y se obtiene un gas
de sÌntesis que luego se licua (es como un pretratamiento).

A. GASIFICACI”N
Hay diferentes modos de llevar a cabo la gasificaciÛn:

− GasificaciÛn convencional de la biomasa: la biomasa se descompone a alta temperatura y en presencia de

un compuesto gasificante que puede ser de naturaleza muy diversa, puede ser aire, oxÌgeno, vapor de
agua, hidrÛgeno, etc. En funciÛn del gasificante que se utilice va a variar la composiciÛn de esa fase

TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE MICROALGAS 3

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gaseosa que vamos a obtener. Normalmente, el contenido calorÌfico del gas de sÌntesis que se obtiene
suele ser menor que el gas natural (principalmente metano). Si se utilizara oxÌgeno en vez de metano se
producirÌa sobre todo monÛxido de carbono.
− GasificaciÛn de agua supercrÌtica: por encima de una temperatura y presiÛn se alcanzan las condiciones
super crÌticas, 374C y 221 bar. Por encima de estas condiciones el agua comparte propiedades entre el
estado lÌquido y vapor, con lo cual mejora mucho la extracciÛn de esta agua supercrÌtica y causa la hidrÛlisis
de los componentes de la biomasa en pequeÒas molÈculas.
El agua supercrÌtica tiene ventajas frente a la convencional:
▪ Consume menos energÌa.
▪ Es adecuada para obtener energÌa a partir de biomasa h˙meda con lo cual se elimina el gasto de
energÌa para el secado de la biomasa de algas.
▪ Presenta la caracterÌstica de la alta solubilidad de los componentes de la biomasa.
▪ Requiere temperaturas inferiores a las de la convencional.

B. PIR”LISIS
Hay muchos estudios y trabajos relacionados con la obtenciÛn de biocombustibles por pirÛlisis. Hay distintos
tipos de pirÛlisis: flash, fast y slow, que se diferencian en los tiempos de residencia del gas en el reactor. De
estos tres tipos, el flash serÌa un buen mÈtodo y tendrÌa un buen rendimiento para la producciÛn de bioaceites.

Adem·s, vemos en la tabla las tres fases dÈcada tipo. En el caso de la pirÛlisis flash hay un enriquecimiento en
la fase lÌquida, por lo que si nos interesa un biocombustible lÌquido utilizarÌamos este tipo.

A parte de las microalgas, hay muchos estudios relacionados con la obtenciÛn de biocombustibles utilizando
otras materias primas vegetales como pueden ser materiales ricos en lignina o restos de poda. Por ejemplo,
para la pirÛlisis de desechos pl·sticos utilizan catalizadores como la zeolita para disminuir la temperatura del
proceso.

Si el objetivo es maximizar el rendimiento de los productos lÌquidos resultantes de la pirÛlisis de la biomasa la

temperatura debe ser moderada, la velocidad e calentamiento corta y la permanencia de los gases corta.

C. LICUEFACCI”N
− Ventaja: se puede utilizar biomasa h˙meda.
− Inconveniente: requiere un consumo de hidrÛgeno. SerÌa un biocombustible limpio, pero es caro.

El rendimiento de la obtenciÛn de bioaceites va a depender del contenido de lÌpidos que contenga una misma
especie y de cÛmo se haga la extracciÛn. A continuaciÛn, tenemos una tabla donde aparecen diferentes
temperaturas a las que se lleva a cabo la pirÛlisis. La temperatura Ûptima para la obtenciÛn de biodiesel por
pirÛlisis es 775 K.

Se compara una macroalga (Cladophora fracta) con una microalga (Chlorella proothecoides).

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AquÌ tenemos una tabla comparativa entre distintas tecnologÌas de conversiÛn termoquÌmica para la
obtenciÛn de biocombustibles, donde vemos como la pirÛlisis es la que m·s resultados fiables y prometedores
presenta.

*HHV: poder calorÌfico.

3. PRODUCCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE BIOMASA DE MICROALGAS

Vamos a ver ejemplo de la producciÛn de combustibles a
partir de microalgas, la alternativa que ofrecen las
microalgas frente a otras fuentes vegetales. El biodiÈsel
podemos obtener de diferentes vegetales, igual que el
bioetanol.

AquÌ tenemos el esquema del aprovechamiento. A partir de

las microalgas adem·s de biocombustibles, se pueden
obtener diferentes productos de alto valor aÒadido, pienso
de animales a partir de aquellas que presentan alto
contenido en proteÌnas, etc.

A. BIODIESEL (BIOACEITES)
Las principales materias primas que han sido empleadas para la producciÛn de biodiesel por diferentes paÌses
son las siguientes:

Por ejemplo, Neutral Fuels es una empresa que utiliza aceites de cocina
de cocina para la producciÛn de biodiesel. Su formulaciÛn puede
emplearse en cualquier vehÌculo actual de la UniÛn Europea sin
necesidad de adaptaciÛn ni modificaciÛn alguna del vehÌculo.

Esta empresa est· distribuyendo a diversos paÌses, por lo que ya no es

˙nicamente propio de China.

El uso de microalgas da salida a dos debates importantes: destinar

alimentos para la producciÛn de combustibles y el fuerte impacto
ambiental.

Producir la fuente oleaginosa que va a dar la fracciÛn de lÌpidos a partir de la cual vamos a obtener el biodiÈsel
es lo que m·s encarece el producto. El 75% del coste de la producciÛn de biodiÈsel se la va a llevar la obtenciÛn
de la materia prima.

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AquÌ tenemos una comparativa entre los precios del aceite de palma
y del petrÛleo crudo. Hace 20 aÒos se utilizaba aceite de palma
porque era muy rentable, ya que obtenÌamos un producto de un
precio mucho menor. Sin embargo, ahora el perfil de precios se ha
invertido, ya no es tan rentable la producciÛn de biodiÈsel a partir de
aceite de palma con respecto al del petrÛleo (el diÈsel normal).

Entonces, el aceite de palma que inicialmente

era simplemente una especie que crecÌa se
convirtiÛ en cultivo que se extendiÛ a una
gran cantidad de paÌses. AquÌ vemos la
evoluciÛn del aceite de palma en el caso de
Indonesia y Malasia, que creciÛ mucho
dentro de nuestro siglo, lo que ocasionÛ una
gran deforestaciÛn. Podemos decir entonces
que podrÌan ser una opciÛn a este tipo de
cultivos.

AquÌ tenemos una tabla con ejemplos del contenido de aceite de diferentes tipos de microalgas. Algunas de
las especies m·s utilizadas en los estudios para la producciÛn de biodiÈsel son Botryococcus braunii (25-75%
de aceites), Nannochloropsis sp. (31-68%), Neochoris oleoabundans (35-54%) y Schizochytrium sp. (50-77%,
rica en ·cidos grasos poliinsaturados).

Estas algas pueden tener un potencial interÈs

porque acumulan un contenido de aceites
considerable con respecto a su peso seco. Es
importante hacer una buena elecciÛn de la estirpe
para lo que serÌa la extracciÛn de ese aceite. Son
factores que van sumando para luego obtener un
buen rendimiento.

Otras estirpes interesantes son Dunaliella salina

para la producciÛn de β-carotenos, Nannochloris
sp, Chlorella vulgaris que acumula una importante
fuente de proteÌnas para alimentaciÛn humana,
etc.

Ahora tenemos una comparaciÛn entre el biodiÈsel de primera generaciÛn que serÌa el obtenido a partir de
las plantas de cultivo (oleaginosas vegetales) y el de segunda generaciÛn que serÌa el biodiÈsel de algas.
TambiÈn se compara con el diÈsel de petrÛleo.

Tanto el de primera generaciÛn como el de segunda generaciÛn m·s o menos tienen las mismas propiedades
fÌsicas y quÌmicas, por lo que es una opciÛn buena para la sustituciÛn del diÈsel de petrÛleo.

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TambiÈn aparecen en la tabla una serie de est·ndares que son la norma internacional de caracterÌsticas de
biodiÈsel (EN14214) que las cumplen los dos biodiÈseles. Podemos concluir que el biodiÈsel de algas es
igualmente competitivo con el obtenido a partir de otras fuentes vegetales. El problema que tiene es hacer
que el proceso sea rentable, que el precio del biodiÈsel de microalgas sea competitivo frente al de los
combustibles fÛsiles que todavÌa hay. Cuando ya no haya, aunque sea caro ser· una opciÛn, pero como todavÌa
hay combustibles fÛsiles tiene que tener un precio competitivo.

La ecuaciÛn siguiente da una idea de como tiene que ser el precio del biodiÈsel de microalgas para que tenga
un precio competitivo:

𝑃𝑟𝑒𝑐𝑖𝑜 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑏𝑖𝑜𝑑𝑖é𝑠𝑒𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑔𝑎 = 6′ 9 · 10−3 𝑥 𝑃𝑟𝑒𝑐𝑖𝑜 𝑏𝑎𝑟𝑟𝑖𝑙 𝑑𝑒 𝑝𝑒𝑡𝑟ó𝑙𝑒𝑜 (159 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠)
El biodiÈsel de microalgas es menos daÒino para el medioambiente porque emite menos gases, pero es m·s
caro.

Tenemos el cultivo de microalgas que necesita agua, sol y nutrientes, en el caso de deficiencia de alg˙n
nutriente por ejemplo nitrÛgeno se inhibe la formaciÛn de lÌpidos que luego se extraen y hay una reacciÛn
quÌmica de transesterificaciÛn para convertirse en biodiÈsel. Adem·s, hay que realizar un paso de purificaciÛn
para eliminar la glicerina.

Un proyecto relacionado con la producciÛn de biodiÈsel de algas es el proyecto CYCLAG, liderado por Neiker-
Tecnalia que es el Instituto vasco de investigaciones agrarias y, a su vez, coordinado por cinco centros
tecnolÛgicos pertenecientes a Euskadi, Navarra y Francia. El objetivo de este proyecto es la obtenciÛn de un
biodiésel que tenga un precio competitivo de 3’3 euros por litro. Utilizan microalgas heterotrÛficas que no
dependen de la luz para su crecimiento, lo que le permite tener actividad productiva independientemente de
la localizaciÛn geogr·fica. Entonces las algas obtienen la energÌa de carbono org·nico que encarece el
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producto, sin embargo, este proyecto lo que hace es obtener el carbono org·nico de los residuos
agroalimentarios con lo cual se estarÌan uniendo varios tipos de finalidades (obtenciÛn de biodiÈsel, de
biomolÈculas con valor aÒadido para cosmÈtica, pienso, fertilizantes, etc.).

El biodiÈsel en general que puede proceder de diferentes fuentes presenta ventajas frente al diÈsel: no
contiene azufre y emite menos gases contaminantes (reducciÛn del 80-90% de la emisiÛn de CO, sulfato e
hidrocarburos no quemados).

De manera general el biodiÈsel se usa mezclado con diÈsel y la pureza de este puede verse por el n˙mero:
B100 (biodiÈsel puro), B5 (5% de biodiÈsel), B15 (15%) o B20 (20%). Esta mezcla o proporciÛn varÌa en funciÛn
de los paÌses. En la UniÛn Europea el uso de biocarburantes en el mercado de combustibles es pequeÒa (precio
no competitivo frente a los carburantes convencionales). Los principales paÌses que producen, ensayan y usan
biodiÈsel son Estados Unidos, Canad·, Alemania, Austria, Francia e Italia, y lo emplean en automÛviles,
camiones y transporte p˙blico.

En Alemania y Austria hay ejemplos de su empleo puro (100%) para m·ximo beneficio ambiental. Por ejemplo,
una conocida cadena de comidas r·pidas transforma el aceite que descarta en biodiÈsel y este es el que mueve
el transporte p˙blico de la ciudad austriaca de Graz. Adem·s, la compaÒÌa de taxis m·s grande de Graz est·
cambiando su flota de automÛviles diÈsel a biodiÈsel, y puso una estaciÛn de servicio a disposiciÛn del p˙blico
para promover el uso de combustible m·s limpio.

Otro ejemplo es la ciudad austriaca de Mureck. A 70 kilÛmetros de Graz, hay un complejo formado por una
planta de biog·s, biodiÈsel (compaÒÌa austriaca BiodiÈsel International) y biomasa que abastece a la ciudad
con un sistema de calefacciÛn urbano mediante tuberÌas subterr·neas (district heating). La planta procesa
16.000 toneladas de aceites (90% aceites usados y grasas animales, asÌ como 10% de colza) y est· capacitada
para llegar a las 25.000 toneladas.

En EspaÒa la misma compaÒÌa tiene 8 plantas de producciÛn de biodiÈsel que est·n preparadas para la
producciÛn de biodiÈsel de microalgas. De ellas, solo 2 est·n en funcionamiento y generan biodiÈsel, pero a
partir tambiÈn de aceite de cocina. Sin embargo, antes de que entrara en vigor la legislaciÛn antidumping de
defensa comercial de la UE, las plantas de producciÛn de biodiÈsel con aceites vÌrgenes (producciÛn parcial a
partir de aceite de cocina) frenaron su producciÛn durante un tiempo en EspaÒa y Europa (solo aceite de
cocina), como consecuencia de la importaciÛn del biodiÈsel americano que era mucho m·s barato.

Algunos de los proyectos de investigaciÛn en EspaÒa son:

1. Un gran proyecto financiado por la UniÛn Europea es el denominado BIOFAT (Biofuel from Algae
Technologies) con nueve socios de siete paÌses, siendo el coordinador principal la empresa Abengoa.
2. El proyecto denominado “Captura, fijación y valorización del CO2” complementa uno anterior llamado
“Desarrollo de un proceso de producción de biocombustibles y valorización de la biomasa residual a partir
de microalgas marinas”. Se realizan en colaboración con Endesa y forma parte del Programa Estatal para
la captura de CO2 y producciÛn de biocombustibles con microalgas del PlanE (Programa Nacional para el
EstÌmulo de la EconomÌa y el Empleo). La microalga empleada en su estudio es la estirpe Nannochloropsis
gaditana.
3. Las Universidades de Huelva y C·diz con la financiaciÛn de CEPSA, la empresa BioOils y el Ministerio de
EconomÌa y Competitividad est· trabajando en la obtenciÛn de biodiÈsel de precio competitivo a partir de
microalgas para 2020 (grupo de investigaciÛn del profesor Carlos VÌlchez). Adem·s de en plantas piloto de
CEPSA, gran parte de las investigaciones se realizan en el Centro Internacional de Estudios y Convenciones
EcolÛgicas y medioambientales (Ciecem), situado en MatalascaÒas.
4. El proyecto “High added-value industrial opportunities for microalgae in the Atlantic Area-Enhanced
Microalgae” tiene el objetivo de explotar el potencial biotecnolÛgico de las microalgas en el ·rea atl·ntica
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(programa de CooperaciÛn Transfronteriza Interreg-Espacio Atl·ntico 2014-2020). El proyecto pretende

estudiar el uso de nuevas especies, el desarrollo de nuevos productos especÌficos (desde alimento en
acuicultura hasta la exploraciÛn de diferentes tecnologÌas, como la nanotecnologÌa entre otras), la
obtenciÛn de tratamientos mÈdicos, cosmÈticos, extractos nutracÈuticos, producciÛn fitoquÌmica o
nutriciÛn humana, entre otros.

5. The ALGAE4A-B busca explotar la diversidad de microalgas, como una fuente de biomolÈculas de alto valor
agregado relevantes para la acuicultura y la cosmÈtica (proyecto con financiaciÛn del programa de
investigaciÛn e innovaciÛn Horizon 2020 de la UniÛn Europea).
Uno de los productos es el TetraSOD, que es la microalga liofilizada y constituye una fuente de
antioxidantes.
6. VALUEMAG (proyecto activo europeo) pertenece al programa de la UE Horizon 2020. El objetivo es
transformar microalgas con unas partÌculas magnÈticas para que se puedan retener sobre un soporte
magnÈtico en forma de cono y que puedan disminuir el consumo de agua para su cultivo. Dentro de los
beneficios tenemos la producciÛn de biomasa con poca agua que se utilizarÌa para productos nutricionales,
cosmÈticos, alimentaciÛn, etc. El propÛsito del proyecto serÌa realizar un uso eficiente de la tierra, ya que
utilizarÌan menos superficie para el cultivo de las microalgas. Se obtiene una producciÛn muchos m·s
eficiente de la biomasa de microalgas y disminuye el coste de producciÛn como unas 20 veces respecto
del actual, pudiÈndose alcanzar hasta 0,3 euros por kilo de la biomasa.
Entonces, estas partÌculas super-paramagnÈticas (SPAN) de 10nm por 2nm de di·metro se introducen en
el protoplasma de las cÈlulas de microalgas de diferentes especies mediante electroporaciÛn para obtener
microalgas modificadas magnÈticamente (MAGMA). Estas MAGMA se inmovilizan utilizando un gradiente
magnÈtico debido a un cono magnÈtico blando (SOMAC) de 6m de di·metro y ~ 6m de altura.
Los fotobiorreactores magnÈticos son econÛmicos y viables (mPBR) para un r·pido crecimiento y f·cil
recolecciÛn de biomasa utilizando un SOMAC cubierto con MAGMA inmovilizado y una capa de agua
delgada con un consumo total de energÌa de 11kW.
− Las compaÒÌas con interÈs en la b˙squeda de estrategias de cultivo para mejorar la productividad de
los lÌpidos en las microalgas son Solazyme, Aurora Algae, Bionavitas, Seambiotic y Solix.
− Las compaÒÌas con interÈs en encontrar mÈtodos de cosecha de la biomasa, extracciÛn del aceite o en
los procesos de producciÛn de combustible son Origin Oil, Algae Tec Ltd, Dynamic Fuels, Solazyme y
General Atomics.

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a) PROCESO PARA LA PRODUCCI”N DE BIODI…SEL A PARTIR DE MICROALGAS

AquÌ tenemos un esquema tÌpico del proceso de producciÛn de biodiÈsel a partir de microalgas:

− Se empieza con la selecciÛn de las algas y del sitio. Por

ejemplo, si se quiere descontaminar un sitio hay muchas
veces que se aisla la microalga adecuada en alg˙n lugar
cercano para que tenga un buen crecimiento y una buena
adaptaciÛn a condiciones adversas. Muchas proceden de
aguas ya contaminadas con alta concentraciÛn de metales
y se utilizan para descontaminar metales de balsas.
− Luego se cultivan las microalgas.
− La recogida es lo que puede implicar una parte
importante del coste de producciÛn, hasta un 30%.
− ConcentraciÛn de microalgas: obtenemos la biomasa
como una pasta de algas. Se puede concentrar entre un
15-25% de peso seco.
− A partir de estas pastas se procede a la extracciÛn del
aceite.
− El aceite se procesa para la obtenciÛn de biodiÈsel.

b) EXTRACCI”N DE ACEITES

Para extraer los aceites se parte de biomasa seca, pero la temperatura de secado puede afectar al proceso de
extracciÛn de lÌpidos y a la composiciÛn final. Es importante establece un equilibrio entre la eficiencia de
secado y la rentabilidad. Una temperatura superior a 60C puede disminuir el contenido de lÌpidos en general
y de los triacilgliceroles que son el sustrato que se utiliza para la producciÛn de biodiÈsel.

Por ejemplo, la compaÒÌa OriginOil vio que habÌa un proceso que era bastante eficiente donde no se partÌa de
biomasa completamente seca, sino que estaba parcialmente h˙meda, y se hacÌa un pretratamiento con
ultrasonido y con pulso electromagnÈtico para favorecer que se rompiera las paredes celulares y asÌ poder
extraer mejor el contenido de aceite.

Existen tres mÈtodos bien conocidos de extracciÛn de aceites de algas:

1. Expeller/press: las algas se secan y se prensan con una prensa de aceite para obtener la fracciÛn de lÌpidos.
A veces se utilizan medios mec·nicos como la prensa en combinaciÛn con solventes de extracciÛn.
2. MÈtodo del solvente de hexano: este es uno de los solventes de extracciÛn m·s utilizados, ya que no es
muy caro. Una vez que el aceite es extraÌdo con una prensa, se utiliza el ciclohexano para extraer el
contenido remanente del alga. Luego por destilaciÛn se separa el ciclohexano del aceite.
3. ExtracciÛn supercrÌtica del fluido: es un mÈtodo capaz de extraer el 100% del aceite, pero necesita un alto
rendimiento. El CO2 a una presiÛn y temperatura determinadas presenta las propiedades de un lÌquido y
un gas, entonces este fluido supercrÌtico act˙a como un solvente de extracciÛn para el aceite de las algas.

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Las ventajas y limitaciones de los diferentes mÈtodos para la extracciÛn de aceites en las microalgas son:

MÈtodo de extracciÛn Ventajas Limitaciones

EconÛmico y f·cil de usar. Se necesita una gran muestra.
Prensado
No requiere solventes. Proceso lento.
Relativamente econÛmico. Solventes tÛxicos e inflamables.
Solventes org·nicos
R·pido y reproducible. RecuperaciÛn de los solventes cara.
No siempre se consigue una buena
No es tÛxico ni inflamable.
Fluido supercrÌtico interacciÛn entre el CO2 supercrÌtico y la
Sencillo de operar.
muestra.
ExtracciÛn r·pida y eficaz. Elevado coste econÛmico.
Ultrasonidos
Menor consumo de solventes. DifÌcil de emplear a gran escala.

*Ultrasonidos se suele utilizar m·s como pretratamiento que como extracciÛn en sÌ.

Las extracciones consumen una gran cantidad de energÌa, entonces inicialmente se parte de biomasa seca con
lo cual hay que consumir energÌa para obtener esa biomasa seca, y muchas son en caliente. Una vez producida
ya la extracciÛn, mediante un rotavapor se evapora el solvente y luego se recupera con una trampa de
refrigeraciÛn donde se condensarÌa.

En el caso de la extracciÛn por CO2 supercrÌtico (SCCO2), es un mÈtodo prometedor y constituye la tecnologÌa
verde porque no utiliza ning˙n tipo de solvente con lo cual se obtiene la fracciÛn de lÌpidos limpia y no hay
que separarla despuÈs del solvente. Esos fluidos supercrÌticos se alcanzan a partir de una temperatura y
presiÛn determinada.

En la imagen vemos que se utiliza una fuente de CO2 que hace que aumente la presiÛn y con una bomba entra
en el biorreactor que est· calent·ndose con unas placas calefactoras como si fuera una especie de horno.
Entonces cuando se alcanza una determinada presiÛn y temperatura se convierte en un fluido supercrÌtico
que tiene la capacidad de penetrar mejor en la materia. Adem·s, tiene mayor difusiÛn incluso que los gases.

De esta forma utilizan el CO2 supercrÌtico, pero se pueden utilizar otros. Sin embargo, el CO2 es un fluido
supercrÌtico bastante bueno porque no es tÛxico, no es inflamable, es bastante econÛmico y tiene una
temperatura crÌtica no muy alta. El inconveniente de este proceso es que tiene un alto coste de infraestructura
y operaciÛn.

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Este serÌa el caso del CO2, donde vemos que la

temperatura crítica es 31’1C y la presión 72’9 atm.
Por encima de esos valores se convertirÌa en un
fluido supercrÌtico que tendrÌa mayor capacidad de
extracciÛn de lÌpidos.

Para mejorar lo que serÌa el proceso de extracciÛn de lÌpidos se puede hacer un pretratamiento con
microondas y ultrasonidos. Por ejemplo, los resultados obtenidos en Chlorella sp. indican que un
pretratamiento de la biomasa de microalgas con microondas extrae lÌpidos de manera m·s r·pida y eficaz en
comparaciÛn con el pretratamiento ultrasÛnico.

La rotura de las cÈlulas en el proceso de microondas es debido a la enorme presiÛn causada por el r·pido
calentamiento de la humedad dentro de las cÈlulas de microalgas (tratamientos de 2,450 MHz y 530 W durante
45 o 75 segundos).

En el proceso de ultrasonidos las cÈlulas se rompen por ondas de choque al estallas burbujas de cavitaciÛn
(tratamientos de 40 kHz de frecuencia y una potencia de 200 W durante 10 o 20 minutos).

c) SÕNTESIS DE BIODI…SEL: TRANSESTERIFICACI”N

La sÌntesis de biodiÈsel se produce de forma quÌmica por transesterificaciÛn o alcohÛlisis.

Reacciona el triacilglicÈrido con 3 moles de metanol y da lugar a glicerina o glicerol y 3 metilÈsteres. Es una
reacciÛn que est· catalizada por lo que para que se lleve a cabo es necesario aÒadir un catalizador que puede
ser ·cido, b·sico o enzim·tico. Aunque esta es la estequiometria de la reacciÛn para que trascurra,
normalmente de forma industrial en vez de utilizar 3 moles de metanol utilizan 6 por cada triacilglicÈrido para
asegurar que la reacciÛn estÈ totalmente desplazada hacia la derecha, hacia la producciÛn de biodiÈsel que
son los metilÈsteres.

Entonces la transesterificaciÛn es una reacciÛn entre un alcohol y un Èster y se forma un nuevo

alcohol y un nuevo Èster.

En esta imagen tenemos los diferentes sustratos con su fÛrmula quÌmica. Como vemos es una reacciÛn que se
produce de manera secuencial: un triacilglicÈrido reacciona con una molÈcula de metanol y se produce
diacilglicÈrido y un metilÈster, este diacilglicÈrido reacciona con una segunda molÈcula de metanol que da
monoacilglicÈrido y otro metilÈster y, por ˙ltimo, este monoacilglicÈrido reacciona con el tercer metanol para
dar glicerol/glicerina y otro metilÈster.

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El balance final de la reacciÛn es entonces el que hemos mencionado antes: un triacilglicÈrido reacciona con
3 moles de metanol y da lugar a glicerina o glicerol y 3 metilÈsteres.

La transesterificaciÛn para la formaciÛn de biodiÈsel (tambiÈn llamada alcohÛlisis) se basa en la reacciÛn de

molÈculas de triglicÈridos (el n˙mero de ·tomos de las cadenas est· comprendido entre 15 y 23, siendo el m·s
habitual de 18) con alcoholes de bajo peso molecular (metanol, etanol, propanol, butano) para producir
Èsteres y glicerina. Generalmente se utiliza el metanol porque es barato.

Los triglicÈridos ricos en ·cidos grasos poliinsaturados son menos deseables para la producciÛn de biodiÈsel
porque disminuyen el n˙mero de cetano y la estabilidad a la oxidaciÛn del combustible. El n˙mero de cetano
es una caracterÌstica de los biocombustibles que indica la facilidad para la inflamaciÛn de los combustibles.
Normalmente, si el n˙mero de cetano es bajo (cuando los ·cidos grasos son poliinsaturados) implica que el
combustible se va a quemar r·pidamente, y esto no es deseable.

Por otro lado, los triglicÈridos ricos en ·cidos grasos monoinsaturados en el intervalo de 16-20 carbonos,
especialmente en ·cido oleico (18:1), resultan ideales para la producciÛn de biodiÈsel.

El posible inconveniente de utilizar microalgas para la producciÛn de biodiÈsel es que estas tienden a producir
una alta cantidad de ·cidos grasos poliinsaturados, lo que disminuye la estabilidad del biodiÈsel. Sin embargo,
estos ·cidos poliinsaturados tienen puntos de fusiÛn bajos, por lo que en climas frÌos es mucho m·s ventajoso
que otros tipos de biocombustibles.

Si habl·ramos de un aumento n˙mero de ·tomos de carbonos en los ·cidos grasos darÌa lugar a un aumento
del punto de fusiÛn. Cuanto m·s n˙mero de carbonos hay, mayor n˙mero de enlaces de Van der Waals son
necesarios de romper, lo que da lugar a un aumento del punto de fusiÛn. En presencia de dobles enlaces
disminuye el punto de fusiÛn y aumenta la fluidez.

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d) SÕNTESIS DE BIODI…SEL EN CONDICIONES DE METANOL SUPERCRÕTICO

Tradicionalmente, el biodiÈsel de algas se produce a partir de la biomasa de algas mojada en una serie de
pasos: secado, extracciÛn de aceites de algas con disolventes quÌmicos y la conversiÛn del aceite de algas en
biodiÈsel con un catalizador.

El secado de la biomasa y la extracciÛn de aceites de algas por mÈtodos convencionales es costoso. Una
alternativa a la extracciÛn y mÈtodos de transesterificaciÛn convencional es hacer la extracciÛn y producciÛn
de biodiÈsel en un mismo proceso utilizando metanol supercrÌtico.

El agua en las algas en h˙medo puede participar como un co-disolvente sintonizable en el proceso supercrÌtico
del metanol, que en estas condiciones act˙a como un monÛmero solvatando los TGA. No sÛlo acelera la
conversiÛn de grasas y aceites de algas a Èsteres metÌlicos de ·cidos grasos, sino que tambiÈn aumenta su
solubilidad.

Este proceso tendrÌa buenas ventajas porque las condiciones son m·s suaves con lo cual se evita la formaciÛn
de otros productos, las temperaturas tambiÈn son m·s moderadas por lo que es necesario menor
requerimiento de energÌa, y adem·s es menos costoso.

Aparte del CO2 hay otros fluidos supercrÌticos y sus propiedades aparecen recogidas en la siguiente tabla:

Bajo las condiciones supercrÌticas (270 a 400C y presiÛn >80 atm) la reacciÛn se completa en pocos minutos.

La fuente de aceite o de lÌpidos que son los

triacilglicÈridos pueden proceder de aceites
de microalgas, de aceites vegetales puros o
de aceites vegetales reciclados y grasas
animales.

− En el caso de que procedan de aceites

vegetales reciclados y grasas animales hay
que hacer un paso adicional de esterificaciÛn
en el que se trata con ·cido sulf˙rico y metal
o agua (son aceites con un contenido en
·cidos grasos libres mayor del 2%).
− En cualquier caso, cuando se produce
la transesterificaciÛn a partir de las fuentes
de aceite se trata con metanol y KOH
(catalizador) dando lugar a dos fases:
glicerina y metil Èster.

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− Las dos fases se procesan para obtener los productos comerciales. Laglicerina que se forma en el proceso
es inmiscible con el biodiÈsel (con los Èsteres metÌlicos), lo que hace que la reacciÛn se desplace bien hacia
la derecha hacia la formaciÛn de los metilÈsteres. Esta glicerina luego se trata para despuÈs tratarla como
producto en cosmÈtica, alimentaciÛn, farmacia, etc.
− El metanol se recicla para de nuevo volver a reaccionar con nuevas fuentes de aceite.

Los diferentes tipos de catalizadores que se pueden utilizar para producir biodiÈsel se pueden clasificar en
·cidos, b·sicos y enzim·ticos.
1. Dentro de los ·cidos encontramos los homogÈneos (H2SO4, HCl, H3PO4, RSO3) y heterogÈneos (zeolitas,
resinas sulfÛnicas, SO4/ZrO2, WO3/ZrO2).
2. Dentro de los b·sicos tenemos los heterogÈneos (MgO, CaO, Na/NaOH/Al2O3) y los homogÈneos (KOH,
NaOH) que son los m·s utilizados porque act˙an m·s r·pido y permiten operar en condiciones moderadas.
3. MetÛxidos (KOCH3, NaOCH3).
4. Enzim·ticos (Lipasas: Candida, Penicillium, Pseudomonas): son m·s caros.

La eficacia del catalizador va a venir dada por la facilidad que tenga de disolverse en el alcohol. Por ejemplo,
el KOH tiene que disolverse en el metanol y en esa reacciÛn se producen metÛxidos que ser·n los que
reaccionen con el triacilglicÈrido para facilitar que se produzca la reacciÛn de transesterificaciÛn.

La reacciÛn de transesterificaciÛn con un catalizador ·cido requiere de condiciones de temperaturas elevadas,

por lo que normalmente se utilizan los b·sicos homogÈneos, aunque a veces puedan dar lugar a reacciones
de saponificaciÛn.

Utilizamos KOH frente a NaOH porque la glicerina que se obtiene como producto es menos tÛxica que cuando
se utiliza NaOH y se disuelve mucho mejor en metanol.

Las caracterÌsticas que tendrÌan que cumplirse para tener una buena eficiencia en la reacciÛn de
transesterificaciÛn utilizando un catalizador b·sico son:
− Los glicéridos y el alcohol deben ser anhidros (poco contenido en agua, menos del 0’05% v/v) parra evitar
que se produzca la saponificaciÛn.
− Adem·s, los triacilglicÈridos deben tener una baja proporciÛn de ·cidos grasos libres para evitar que se
neutralicen con el catalizador y se formen tambiÈn jabones.
e) REACCI”N DE SAPONIFICACI”N

Los ·cidos grasos libres reaccionan con el catalizador b·sico para dar jabÛn y agua.

La saponificaciÛn est· favorecida cuando se utiliza KOH o NaOH, ya que sus molÈculas contienen grupos OH
responsables de esta reacciÛn.

Se deben utilizar aceites y alcoholes anhÌdricos, ya que el agua favorece la formaciÛn de jabones por
saponificaciÛn (hidroliza los TAG y produce ·cidos grasos y glicerol) e hidroliza los Èsteres de metanol-·cidos
grasos y produce ·cidos grasos.

f) REACCI”N DE NEUTRALIZACI”N DE ¡CIDOS GRASOS LIBRES

Para aumentar el rendimiento en la transesterificaciÛn, una manera de eliminar los ·cidos grasos libres es
mediante una reacciÛn de esterificaciÛn previa con un catalizador ·cido. De forma com˙n se realiza calentando

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una mezcla de alcohol, ·cidos grasos y ·cidos sulf˙rico para la formaciÛn de Èster metÌlico (esterificaciÛn de
Fisher).

g) CONDICIONES COMUNES PARA LA TRANSESTERIFICACI”N DE TGAs

− La transesterificaciÛn puede ser catalizada por ·cidos, bases o enzimas lipasas. La transesterificaciÛn con
cat·lisis b·sica es la m·s empleada a escala industrial y emplea como catalizador NaOH o KOH entre el
0’5-1’5% del peso del aceite. Transcurre 4000 veces m·s r·pida que la ·cida.
− Tiene lugar generalmente a 60-65C y presiÛn atmosfÈrica.
− ReacciÛn completa entre 1-3 horas.
− El alcohol m·s empleado es el metanol. Pueden ser usados otros alcoholes diferentes del metanol de
menor peso molecular, pero son m·s caros.
− Los glicÈridos y el alcohol deben se anhidros y con baja proporciÛn de ·cidos grasos libres.

B. BIOETANOL
Se obtiene a partir de la fermentaciÛn a partir de diferentes materiales vegetales como puentes ser la caÒa de
az˙car, maÌz, trigo, remolacha, materiales lignocelulÛsicos y microalgas. La ˙nica desventaja que presentan los
materiales lignocelulÛsicos es que la lignina puede afectar al rendimiento del proceso de fermentaciÛn.

La reacciÛn de fermentaciÛn alcohÛlica en condiciones de anaerobiosis es la siguiente:

Por cada molÈcula de az˙car se producen dos de etanol y dos de CO2. El rendimiento m·ximo teÛrico es de
0’51 kg de etanol y 0’49 kg de CO2 por 1 kg de glucosa consumido. Por ejemplo, Chlorococum sp se ha utilizado
como sustrato para la fermentaciÛn con levaduras y se ha conseguido una productividad del 38% del peso
seco.

AquÌ tenemos un ejemplo de una mutaciÛn genÈtica en la que se han obtenido estirpes mutantes de
Synechocystis PCC6803 en la cual se ha introducido los transgenes para la producciÛn de etanol, ya que esta
cianobacteria carece de la ruta.

Los genes introducidos son la piruvato descarboxilasa (PDC) y la alcohol deshidrogenasa (ADH). Estas enzimas
participan en la producciÛn de etanol y proceden de la bacteria Zymomonas mobilis.

El piruvato se descarboxila por la PDC y da lugar a la formaciÛn de acetaldehÌdo y CO2. Este acetaldehÌdo luego
por la ADH se reduce a etanol.

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Entonces las estirpes transgÈnicas de Synechocystis son estables y sintetizan etanol a partir de CO2 con luz
como fuente de energÌa liberando el alcohol al medio de cultivo. La ventaja de que Synechocystis produzca el
etanol en vez de la propia Zymomonas mobilis es que la cianobacteria no tiene que utilizar una fuente de
carbono org·nico para su crecimiento con lo cual es un ahorro importante en el coste de la producciÛn.

AquÌ tenemos diferentes rendimientos de etanol utilizando varios cultivos vegetales. Seg˙n vemos, esta
tecnologÌa aplicada a microalgas podrÌa tener una importante productividad por el uso del suelo de las
microalgas y que tienen una mayor posibilidad de m˙ltiples cosechas.

TambiÈn el estrÈs, como puede ser la deficiencia en nitrÛgeno, puede afectar a la producciÛn de diferentes
productos como es la producciÛn de lÌpidos y afectar al contenido de carbohidratos.

Con lo cual, esta condiciÛn de cultivo aumenta el contenido de carbohidratos y favorecerÌa un mayor
contenido de sustratos para lo que serÌa los procesos de fermentaciÛn y tener un mayor rendimiento.

C. BIOBUTANOL
Se puede obtener de dos maneras:

− Microalgas como materia prima. El proceso de producciÛn consta de las siguientes etapas:
1. La primera etapa del proceso es el pretratamiento de las algas procedentes de aguas residuales. Para
alimentar el fermentador se recoge la biomasa, se seca y se tritura hasta polvo fino. Adem·s, hay una
extracciÛn previa de carbohidratos para formar una fracciÛn rica en estos que ser· el alimento del
fermentador. Esta extracciÛn se realiza mediante un tratamiento con ·cido en caliente para
convertirlos en az˙cares simples y luego hay un tratamiento posterior con una base calientes, y antes
de la fermentación se neutraliza a pH 6’5.
2. En la segunda etapa del proceso de fermentaciÛn, las bacterias fermentativas (Clostridium sp)
convierten los az˙cares de las algas pretratadas (10%) en butanol, acetona y etanol (ABE).
El proceso tuvo mayor rendimiento si en el paso de fermentaciÛn se suplementaba con glucosa 1% o
con enzimas xilanasas y celulasas, que son polisac·ridos que pueden ser degradados a su forma m·s
simple.
− Microalgas como productoras: tenemos un ejemplo donde se ha modificado Synechocystis para la
producciÛn de biobutanol.

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Synechocystis en condiciones de deficiencia de nitrÛgeno dirige la fijaciÛn del carbono hacia la formaciÛn
de compuestos de almacenamiento como son el glucÛgeno y el polihidroxibutirato (PHB). TambiÈn hay
una acumulaciÛn de poder reductor que no se est· consumiendo.

Lo que han hecho son varias modificaciones:

1. Una primera modificaciÛn en la que las condiciones de cultivo para la estirpe Synechocystis hay
deficiencia de nitrÛgeno.
2. Han delecionado los genes (phaC y phaE) que codifican la PHB sintasa y han introducido una serie de
genes phaJ (enoil-CoA hidratasa de [Link]), ter (trans-enoil-CoA reductasa de [Link]) y adhE2
(aldehÌdo/alcohol deshidrogenasa de [Link]) de los que carece la estirpe para la producciÛn
de butanol. Se ha interrumpido la vÌa hacia la producciÛn de pHB al mutar los genes relacionados con
su sÌntesis.

Como resultado de estos cambios, se ve que en deficiencia de nitrÛgeno va a haber producciÛn de

biobutanol que era el objetivo que se buscaba, pero al estar en deficiencia de nitrÛgeno el crecimiento
celular est· detenido con lo cual aÒadieron otra modificaciÛn.

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3. Se sobreexpresan los genes que codifican las fosfocetolasas (xfpk) en condiciones nutricionales
completas. Esta sobreexpresiÛn hace que haya una mayor producciÛn de acetil-CoA que al final
repercute en que haya una mayor producciÛn de butanol, al estar mutada la sÌntesis de PHB.
Una de las fosfocetolasas cataliza la escisiÛn de fructosa-6-P en eritrosa-4-P y acetil-P y otra cataliza la
escisiÛn de xilulosa-5-P en acetil-P y gliceraldehÌdo-3-P. Este acetil-P se va a convertir en acetil-CoA y
esto va a ser el precursor que de lugar a la formaciÛn de butanol.

AquÌ aparece la ruta de biosÌntesis del polihidroxibutirato:

El modelo de biosÌntesis de PHB es la cianobacteria Synechocystis PCC6803. Son necesarias tres enzimas
codificadas por cuatro genes: phA (slr1993), phaB (slr1994), phaC (slr1830) y phaE (slr1829).
− phA y phB est·n organizados en un operÛn que codifica una β-cetotiolasa y acetoacetil-CoA reductasa.
− phaC y phaE est·n tambiÈn organizados en un operÛn que codifica a dos subunidades de PHA sintasa de
tipo III.

Las ventajas que presenta el butanol frente a otro alcohol como puede ser el etanol son:
− El butanol libera m·s energÌa por unidad de masa que el etanol (es decir, tiene mayor poder calorÌfico) y
puede ser mezclado con la gasolina en concentraciones m·s altas que el etanol.
− Es menos corrosivo que el etanol y puede ser enviado a travÈs de los oleoductos ya existentes.

El butanol de microalgas presenta algunas diferencias en comparaciÛn con el obtenido de materiales

lignocelulÛsicos (restos de caÒa de az˙car, etc.). Las microalgas carecen de lignina, y por tanto, de compuestos
inhibidores presentes en el hidrolizado lignocelulÛsico (son los principales problemas que afectan al
rendimiento de la fermentaciÛn).

a) ISOBUTENO

Global Bioenergies es una firma francesa de combustibles renovables con una planta piloto que genera
isobuteno mediante procesos de fermentaciÛn en Leuna (Alemania).

Para los procesos de fermentaciÛn pueden emplear az˙car de grado industrial de remolacha y caÒa, jarabe de
glucosa de cereales, az˙cares de segunda generaciÛn extraÌdos de paja de trigo, astillas de madera, entre otros
(microalgas).

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El isobuteno producido se puede usar en el sector del combustible para fabricar isooctano, ETBE y MTBE, que
son compuestos valiosos utilizados en mezclas de gasolina. Adem·s, se puede convertir en isododecano, un
compuesto que se encuentra en el combustible para aviones.

Global Bioenergies produce isobuteno gaseoso (C4H8), y en segundo paso, el Centro Fraunhofer de Procesos
BiotecnolÛgicos QuÌmicos (CBP) en Leuna utiliza hidrÛgeno adicional para transformarlo en isooctano (C8H18)
y el combustible est· libre de azufre y benceno, lo que lo hace especialmente bajo en contaminantes cuando
se quema.

D. BIOHIDR”GENO
Las microalgas serÌan productoras directas de hidrÛgeno, el cual es una fuente de energÌa renovable ideal para
combatir el efecto invernadero. De forma industrial, el hidrÛgeno se puede obtener a partir de gas natural
(metano) mediante reformaciÛn por vapor de agua. Esta reacciÛn transcurre a alta temperatura y con ayuda
de un catalizador.

Hay tres rutas diferentes para la sÌntesis biolÛgica de H2:

− BiofotÛlisis de agua usando microalgas.

− FotodescomposiciÛn de compuestos org·nicos por bacterias fotosintÈticas.
− ProducciÛn fermentativa de H2 a partir de compuestos org·nicos.

La producciÛn de hidrÛgeno no es exclusiva de microalgas, pero inicialmente se identificÛ en un alga verde

que era Scenedesmus y despuÈs se observÛ que tambiÈn producen hidrÛgeno otras especies fotosintÈticas
como son las cianobacterias.

El proceso de producciÛn de hidrÛgeno es algo que es muy atractivo y tiene bastante atenciÛn porque utiliza
luz solar para convertir el agua en hidrÛgeno y oxÌgeno, que se van a liberar en un proceso de dos fases, una
aerÛbica y otra anaerÛbica.

a) PRODUCCI”N FOTOBIOL”GICA DE GAS H2 VÕA HIDROGENASA EN CLAMYDOMONAS REINHARDTII

Algunas especies de microalgas verdes son capaces de producir hidrÛgeno como una respuesta a condiciones
de estrÈs.

Unas condiciones de cultivo adecuadas para la inducciÛn de la producciÛn de hidrÛgeno en las algas verdes
son: la privaciÛn de azufre (S), en luz (se mantiene activo el transporte electrÛnico fotosintÈtico) y en medios
con acetato como fuente de carbono org·nico.

La producciÛn fotobiolÛgica de H2 se lleva a cabo en dos fases:

− Fase aerÛbica: se produce oxÌgeno, hay fijaciÛn de CO2 y sÌntesis y acumulaciÛn de almidÛn. Est· activa la
fotosÌntesis y el ciclo de Calvin.
− Fase anaerÛbica: en la que funciona menos el transporte electrÛnico fotosintÈtico y, al no estar activo el
ciclo de Calvin, empieza a degradarse el almidÛn para suministrar carbono. Se produce hidrÛgeno
(activaciÛn de Fe-hidrogenasa).

Hay diferentes tipos de cultivos de microalgas. Dependiendo del tipo de metabolismo utilizado por las
microalgas para su crecimiento, la fuente de carbono puede ser org·nica (glucosa, acetato, glicerol, fructosa,
etc.) o inorg·nica (CO2):

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− FotoautotrÛficamente: las microalgas utilizan la luz como fuente de energÌa y el CO2 como fuente de
carbono para obtener energÌa quÌmica a travÈs de la fotosÌntesis.
− HeterotrÛficamente: en crecimiento en ausencia de luz las microalgas utilizan compuestos org·nicos
exclusivamente como fuente de carbono y energÌa.
− MixotrÛficamente: utilizan carbono org·nico e inorg·nico como fuente de carbono y captan la energÌa de
la luz y del carbono org·nico.

En estos experimentos el crecimiento fue fotoheterotrÛfico (es un medio TAP que lleva carbono org·nico en
forma de acetato, pero tambiÈn lleva una fuente de carbono inorg·nico en forma de CO 2 al 3%), la luz es la
fuente de energÌa.

El acetato se metaboliza a triosa en el Ciclo del Glioxilato (se parece a la ruta del ·cido cÌtrico), mientras que
el carbono inorg·nico (CO2) se reduce a triosa durante la fotosÌntesis. Si, por ejemplo, partimos de un cultivo
de cÈlulas que est·n en condiciones de control normal y durante la primera fase de su crecimiento hay
fotosÌntesis, emisiÛn de oxÌgeno, asimilaciÛn de CO2 y producciÛn de carbohidratos porque el ciclo de Calvin
est· activo. Sin embargo, llega un momento que entra en deficiencia de azufre que afecta a la frecuente
reposiciÛn de la proteÌna D1 (PSII) y disminuye la tasa de fotosÌntesis hasta el punto en que la tasa de emisiÛn
del oxÌgeno fotosintÈtico en el cloroplasto es menor que la tasa de consumo de oxÌgeno respiratorio en las
mitocondrias.

El acetato favorece alcanzar la fase anaerÛbica al estimular la respiraciÛn en luz en las cÈlulas de [Link]
(cultivadas en medios burbujeados con aire, la deficiencia de azufre que afecta a la fotosÌntesis oxigÈnica no
afecta a la respiraciÛn mitocondrial).

Transcurridas 24-48 horas en condiciones de falta de azufre y con luz, las cÈlulas est·n en anaerobiosis, con lo
cual el oxÌgeno se ha consumido, el fotosistema II est· parcialmente inhibido, el ciclo de Calvin se ha detenido,
se degrada la RuBisCO y se activa la hidrogenasa, que al ser muy sensible al oxÌgeno necesita condiciones de
anaerobiosis para activarse.

En condiciones de anaerobiosis y en la luz, estas algas pueden liberar electrones desde el sistema/cadena de
transporte electrÛnico en forma de gas hidrogeno, como una reacciÛn de emergencia para evitar en daÒo
oxidativo a las cÈlulas.

La hidrogenasa en el estroma del cloroplasto de algas acepta electrones de ferredoxina reducida y los dona de
manera eficiente a 2 H+ para generar una molÈcula de H2. La reducciÛn de los protones es una forma de disipar
el exceso de electrones, esa presiÛn reductora, porque el ciclo de Calvin est· detenido.

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Parte de las plastoquinonas reducidas que participan en el transporte electrÛnico fotosintÈtico proceden de
la fotÛlisis del agua y parte de especie cargadas de la glucÛlisis o del ciclo de los ·cidos tricarboxÌlicos. Esta
serÌa la procedencia de los electrones para dar lugar a la sÌntesis de hidrÛgeno, para la reducciÛn de los
protones.

Esta serÌa una forma de eliminar ese exceso de electrones que no se est·n consumiendo a travÈs del ciclo de
Calvin, que es un sumidero del poder reductor que se genera en la fase lumÌnica de la fotosÌntesis.

AquÌ tenemos una comparaciÛn entre dos estirpes de Chlamydomonas. Una es la estirpe mutante Stm6 que
tiene bloqueado el transporte cÌclico alrededor del fotosistema I y tiene mayor reserva de almidÛn respecto a
la estirpe silvestre, lo que podrÌa ser la clave de que produzca 5 veces m·s de hidrÛgeno que el silvestre.

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En este caso se representa en la gr·fica A el silvestre y la B el mutante, las bolitas negras son la producciÛn de
oxÌgeno en el silvestre, las bolitas blancas la producciÛn de hidrÛgeno y las bolitas rojas son la producciÛn de
oxÌgeno en el mutante.

Vemos una primera fase de aerobiosis y una segunda de anaerobiosis. El mutante entra en anaerobiosis mucho
antes que el silvestre y tiene una mayor producciÛn de hidrÛgeno.

Se utiliza un inhibidor, el DCMU, que afecta al fotosistema II. Las barras azules son los controles tanto en el
mutante como en el WT. El hecho de que haya una caÌda respecto al control significa que la producciÛn de
hidrÛgeno se ve afectada por DCMU.

Vemos que el transporte electrÛnico fotosintÈtico sigue estando activo

porque utilizan un inhibidor que afecta al fotosistema II y al cultivarlos
en presencia de este inhibidor cae la producciÛn de hidrÛgeno con lo
cual el transporte electrÛnico fotosintÈtico tiene que mantenerse algo,
es decir, que participa, porque se ve la caÌda tanto en el silvestre como
en el mutante.

En el mutante Smt6 con el transporte cÌclico de electrones afectado, el

transporte electrÛnico cÌclico competirÌa con las hidrogenasas por los
electrones, es como si hubiera un efecto sinÈrgico de la atenuaciÛn del
transporte cÌclico y la acumulaciÛn de almidÛn. Que tenga m·s almidÛn
quiere decir que puede mantener una mayor tasa de respiraciÛn.

E. BIOMETANO
Se puede producir biometano utilizando las microalgas como materia prima, no como productoras. Un factor
limitante para el crecimiento futuro de la producciÛn de biometano a partir de fuentes vegetales es la
disponibilidad de la biomasa.

El inconveniente del biometano es que se utiliza una gran cantidad de biomasa, 10.000-12.000 toneladas por
aÒo para producir 500 kW de biometano.

La productividad de la cantidad de biometano que se produce va a depender del tipo de biomasa que se utilice.
La biomasa vegetal m·s utilizada son los cultivos de cereales como el girasol (productividad 2.000-4.500 m3

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de biometano/hect·rea  aÒo) y el maÌz (5.700-12.400 m3/h  a). Por ejemplo, los rendimientos del maÌz son
m·s altos y varÌan con la especie, el contenido de almidÛn y el momento de la cosecha.

La biomasa de las microalgas tambiÈn se puede usar para producir metano mediante digestiÛn anaerÛbica por
microorganismos que producen biog·s (realmente es una mezcla que serÌa enriquecida con metano).

En Madrid hay un parque tecnolÛgico, ValdemingÛmez, que utiliza residuos domÈsticos para la producciÛn de
biometano en lugar de microalgas.

El problema de la producciÛn de la digestiÛn anaerÛbica de estos residuos es el olor. Una vez que producen el
biog·s, para inyectarlo en la red tienen que alcanzar una pureza muy alta en torno al 95%. Para purificarlo hay
diferentes mÈtodos: corrientes de agua (en caso de contaminaciÛn de CO2 que es bastante soluble) o filtros
de carbÛn activo.

La fermentaciÛn de 240.000 toneladas de biomasa (residuos domÈsticos) produce 34 millones de metros

c˙bicos de biog·s.

El gas generado se utiliza para la producciÛn de electricidad por medio de motores e combustiÛn interna y con
turbina de gas. Se han utilizado diferentes restos como son purÌn de cerdo o vacuno, estiÈrcol de cerdo o
vacuno y ensilado de maÌz.

La producciÛn de biomasa de microalgas por hect·rea se estima que puede ser 5-30 veces la de las plantas de
cultivo. La ventaja de las microalgas frente a la utilizaciÛn de otras fuentes vegetales es que carece de lignina,
ya que esta puede hacer que el rendimiento de la fermentaciÛn pueda verse afectado. Adem·s de esto, las

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microalgas constituyen el candidato ideal para la producciÛn eficiente de biometano por fermentaciÛn debido
a su alto contenido en lÌpidos, almidÛn y proteÌnas.

El proceso de digestiÛn anaerobia se favorecerÌa cuando hay bajo contenido de nitrÛgeno y sodio y si hay una
rotura previa de las paredes celulares. Por ejemplo, la deficiencia de nitrÛgeno se utiliza para una mayor
producciÛn de lÌpidos en muchas estirpes y una mayor producciÛn de metano. Esto se debe a que aumenta el
rendimiento de los procesos de fermentaciÛn.

En la siguiente tabla tenemos diferentes estirpes de macroalgas que tambiÈn se pueden utilizar para la
producciÛn de biometano, aunque el rendimiento es mucho m·s bajo.

La capacidad de conversiÛn de biometano varÌa seg˙n en que componentes sea rica la fuente:
− LÌpidos: 1.390 litros de biog·s (72% CH4, 28% de CO2) por kg de materia org·nica seca. Las fuentes ricas en
lÌpidos presentan una conversiÛn m·s alta que las fuentes ricas en proteÌnas y carbohidratos.
− ProteÌnas: 800 litros de biog·s (60% CH4, 40% de CO2) por kg de materia org·nica seca.
− Carbohidratos: 746 litros de biog·s (50% CH4, 50% de CO2) por kg de materia org·nica seca.

En general, las ventajas de la producciÛn de metano en microalgas son:

− La biomasa residual de la digestiÛn anaerÛbica puede ser reprocesada para hacer fertilizantes (al igual que
otras fuentes vegetales).
− Es renovable y sostenible y fomenta pr·cticas agrÌcolas sostenibles que contribuyen a una mayor eficiencia
y reducciÛn de los costos de producciÛn.
− Alta eficacia de conversiÛn para la digestiÛn anaerobia debido a la ausencia de lignina.

Los inconvenientes de la producciÛn de metano en microalgas son:

− El alto coste de producciÛn en comparaciÛn con otros tipos de biomasa vegetal.
− Baja capacidad de producciÛn con lo cual para alimentar la demanda de biog·s comercial no es suficiente.
− El biog·s que se obtiene es una mezcla de metano y CO2.

Si se utilizara el cultivo de microalgas acoplado al tratamiento de aguas residuales, se evitarÌan procesos de

eutrofizaciÛn.

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Las bacterias hidrolÌticas y

fermentativas ayudan a degradar la
materia org·nica en cada uno de sus
compuestos m·s simples.

Luego tenemos las acetogÈnicas y las

metanogÈnicas que producen
acetato y metano respectivamente.

Aunque las microalgas ofrecen un

buen potencial para la producciÛn de
biog·s, a˙n no hay producciones
comerciales.

En la siguiente tabla vemos una comparativa entre los biocombustibles a partir de microalgas, los fÛsiles y los
procedentes de madera.

El poder calorÌfico de los biocombustibles obtenidos a partir de microalgas no es tan alto como el de los
combustibles fÛsiles, pero tampoco est· tan mal, es pasable.

4. VENTAJAS DEL USO DE MICROALGAS FRENTE A PLANTAS DE CULTIVO (BIODI…SEL

DE 1 GENERACI”N) EN LA GENERACI”N DE BIODIESEL
1. Mayor eficiencia fotosintÈtica que las plantas superiores: convierten entre el 3-8% de la energÌa solar en
biomasa, mientras que el rendimiento observado en las plantas es de aproximadamente un 0’5%.
2. Mayor tasa de crecimiento: duplican su biomasa en aproximadamente 24 horas.
3. Periodos de cosecha muy cortos (menos de 10 dÌas dependiendo del proceso), lo que permite m˙ltiples o
continuas cosechas a diferencia de las plantas que se cosechan una o dos veces por aÒo.
4. Mayor productividad: las microalgas tienen el potencial para producir mayor cantidad de biomasa y de
aceite por hect·rea que cualquier planta oleaginosa (15-300 veces m·s aceite).

TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE MICROALGAS 26

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5. Pueden tener contenidos muy altos de carbohidratos y lÌpidos.

6. F·cil cultivo: pueden cultivarse en zonas ·ridas y semi·ridos donde no pueden desarrollarse cultivos
agrÌcolas. No compiten con la agricultura tradicional.
7. Capaces de fijar grandes cantidades de CO2 (su demanda estequiomÈtrica de CO2 es de aproximadamente
1’7 kg de CO2 por kg de biomasa seca). Se puede utilizar para asimilar CO2 y mitigar su exceso, con lo cual
se puede paliar el efecto invernadero.
8. Capacidad para utilizar los nutrientes de aguas residuales en su crecimiento (especialmente nitrÛgeno y
fÛsforo) lo que hace que se ahorre en el cultivo.
9. La biomasa residual, posterior a la extracciÛn de los lÌpidos, tiene aplicaciones diversas en las industrias:
alimentaria, farmacÈutica, agropecuaria e incluso en la producciÛn de alcoholes combustibles y en la
generaciÛn de energÌa.

AquÌ tenemos la gran capacidad de producciÛn de biodiÈsel de las microalgas en comparaciÛn con otras
oleaginosas.

Las microalgas superan hasta 10 veces la mejor productora como es la palma, por lo que en cuanto a
producciÛn de biodiÈsel no tienen competencia.

A. VENTAJAS DEL BIODI…SEL DE MICROALGAS

El biodiÈsel en general tiene varias ventajas sobre el diÈsel de petrÛleo:
− Se deriva de la biomasa y, por lo tanto, es renovable y biodegradable.
− Contiene niveles reducidos de partÌculas, entonces emiten menos hollÌn, monÛxido de carbono,
hidrocarburos y SOx.
− Como partimos de biomasa vegetal que ha fijado previamente carbono en forma de CO2, se reducen las
emisiones de CO2 hasta el 78% en comparaciÛn con las emisiones de diÈsel de petrÛleo.

El biodiÈsel de microalgas en comparaciÛn con el biodiÈsel de primera generaciÛn es m·s adecuado para el
uso en la industria de la aviaciÛn, donde los puntos de congelaciÛn bajos y las altas densidades de energÌa son
criterios fundamentales. Los dobles enlaces impiden la ordenaciÛn molecular haciendo que se genere un
biodiÈsel m·s adecuado para la aviaciÛn.

B. ASPECTOS A TENER EN CUENTA PARA LA OBTENCI”N DE UN BIODI…SEL DE MICROALGAS

− ElecciÛn de la microalga y su sistema de cultivo: capacidad para producir esas microalgas con alta
producciÛn de aceites a gran escala.
− Capacidad para extraer el aceite a gran escala.

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− Capacidad para convertir ese aceite en biocombustibles a gran escala.

5. SISTEMAS DE TRANSFORMACI”N DE MICROALGAS

La primera transformaciÛn nuclear estable en algas se realizÛ en Chlamydomonas reinharrdtii en 1989 con el
mutante Nit1- y Arg7- que se complementaron con los genes y se obtuvo la estirpe complementada, similar a
lo realizado en pr·cticas.

Los diferentes marcadores de selecciÛn que se utilizan para la transformaciÛn del genoma de Chlamydomonas
reinharrdtii son los siguientes:

Normalmente, se utilizan marcadores nucleares y a veces de cloroplastos.

Se ha publicado para Chlamydomonas reinharrdtii un sistema para su transformaciÛn. Los Golden Gate
Modular Cloning (MoClo) son pl·smidos de clonaciÛn modular que contienen partes genÈticas b·sicas:
promotores, regiones 5’ no traducidas, pÈptidos seÒal, secuencias codificantes y terminadores.

La clonaciÛn modular Golden Gate (MoClo), basada en enzimas de restricciÛn tipo IIS, ofrece una amplia
estandarizaciÛn y permite el montaje de ADN multigÈnico complejo a partir de partes genÈticas b·sicas (por
ejemplo, promotores, CDS, terminadores) en solo dos pasos.

A los elementos genÈticos que se han empleado previamente se les ha eliminado los sitios de restricciÛn Bpil
y Bsal (las dos enzimas utilizadas por MoClo) por mutagÈnesis basada en PCR.

Existen varios promotores para el aumento de la expresiÛn de bioproductos en microalgas, algunos

constitutivos, otros inducibles en condiciones de deficiencia de nitrÛgeno, etc.

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Otros marcadores de selecciÛn disponibles para la transformaciÛn del genoma del cloroplasto y en otras
microalgas son:
− Para transformaciÛn nuclear se utiliza la fitoeno desaturasa modificada (Leu por Arg en H. pluvialis o en
Chlorella zofingiensis) resistente a herbicidas norflurazÛn.
− Para transformaciÛn plastidial se utiliza el gen arg9 de C. reinhardtii que codifica una N-acetil ornitrina
aminotransferasa plastidial, una enzima implicada en la sÌntesis de arginina.

Para hacer estudios de expresiÛn de donde se expresan determinados genes se utilizan genes reporteros. Los
m·s utilizados son:
− ProteÌna fluorescente verde (GFP) de Aequorea victoria.
− La luciferasa de Renilla reniformis (rluc).
− luxAB luciferasa bacteriana modificada para la expresiÛn Ûptima del genoma de los cloroplastos y
nombrada luxCt.
− GFP de A. victoria modificada para la expresiÛn Ûptima del genoma de los cloroplastos y nombrada gfpCt.
− lucCp luciferasa de luciÈrnaga.

En el diseÒo de los pl·smidos de transformaciÛn hay que tener presente:

− CaracterÌsticas de los promotores: se aconseja el uso de promotores de algas o especies afines.
− Tipo de promotores: constitutivos o inducibles.
− Intrones: la presencia de intrones produce incrementos en la expresiÛn de determinados transgenes,
aunque los intrones no son absolutamente necesarios para conseguir la expresiÛn de un transgÈn.

A. PRINCIPALES GRUPOS DE MICROALGAS QUE HAN SIDO TRANSFORMADAS

1. Clorofitas: el alga modelo dentro de este grupo para este tipo de estudios es Chlamydomonas. Se han
obtenido Chlamydomonas modificadas genÈticamente que tienen usos biotecnolÛgicos en la producciÛn
de hidrÛgeno, en la obtenciÛn de vacunas recombinantes y en la biorremediaciÛn.
2. Diatomeas: varias especies de este grupo tienen importantes aplicaciones biotecnolÛgicas (pared celular
rica en silicio y por ser fuente de aceites esenciales). Se han transformado algunas especies como
Phaedactylum tricornutum, Cyclotella criptica, Navicula saprophila y Cylindrotheca fusiformis.
3. Dinoflageladas: constituyen una parte importante del fitoplancton marino. Algunas especies producen
compuestos luminiscentes y compuestos tÛxicos para los vertebrados. Los gÈneros Amphidinium y
Symbiodinium son de los grupos de algas que m·s f·cilmente se transforman.

B. ESTRATEGIAS PARA LA OBTENCI”N DE MICROALGAS CAPACES DE SINTETIZAR ETANOL

Se insertÛ en el genoma de la cianobacteria Synechocystis por recombinaciÛn homÛloga de los genes de
Zymomonas implicados en la sÌntesis de etanol. La construcciÛn que se insertÛ fue la siguiente:

DespuÈs se analizÛ si se habÌa producido correctamente la integraciÛn en el genoma del huÈsped, asÌ como su
segregaciÛn (mediante Southern blot) y la expresiÛn de los genes bajo condiciones de inducciÛn (por Northern

TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE MICROALGAS 29

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blot). A continuaciÛn, se miden las actividades enzim·ticas en extractos celulares y se verifica la presencia de
etanol en el medio externo.

A pesar de todo, estas enzimas no est·n optimizadas para su funcionamiento en medios con oxÌgeno y pueden
necesitar ser modificadas para sistemas eucariotas.

TEMA 5. OBTENCI”N DE BIOCOMBUSTIBLES A PARTIR DE MICROALGAS 30

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TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL

AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2
1. BIOMITIGACI”N DEL CO2 POR MICROALGAS
La concentraciÛn de CO2 en la atmÛsfera va en aumento, desde 300 ppm hasta 400 ppm. Parte de esta gran
emisiÛn que se produce por la combustiÛn de combustibles fÛsiles la absorben los ocÈanos y las grandes masas
de aguas que act˙an como tampones, haciendo que el pH de estas aguas sea cada vez m·s ·cido.

Los ocÈanos son inmensas bombas de carbono, en el sentido de que son bombas de solubilidad de CO2 porque
parte de este se disuelve en ellos, y tambiÈn son bombas biolÛgicas de CO2. Las microalgas y los
microorganismos fotosintÈticos que crecen en las superficies de los ocÈanos van a incorporar CO2, que si se
deposita en los fondos marinos constituirÌa una forma de almacenamiento de carbono. El carbono procede de
diferentes empresas se comprime para utilizarlo en industrias, para almacenarlo en la superficie terrestre o
en el ocÈano.

Dentro de ese almacenamiento de

carbono hay varios modos como
serÌa el almacenamiento
geolÛgico, oce·nico o quÌmica, y
desde el punto de vista de
biomitigaciÛn estarÌa la
reforestaciÛn o la depuraciÛn o
captura de CO2 mediante
microorganismos fotosintÈticos.

Una alternativa a la emisiÛn de

gases serÌa utilizar energÌas
alternativas limpias que
disminuyeran dicha emisiÛn.

Este es un esquema de las

diferentes formas posibles de
generar CO2 y como se capturan.
La diferencia entre los diferentes
tipos serÌa en funciÛn de si la
extracciÛn o purificaciÛn de CO2 es
previa o posterior a la
combustiÛn. En el caso de
oxÌgeno-gas, se utiliza oxÌgeno en
lugar de aire para quemar
combustibles y en el caso de los
procesos industriales se quemarÌa
con aire enriquecido con oxÌgeno.
Si las empresas tienen sistemas de
captaciÛn de CO2 o no, hace que
consuman m·s o menos
electricidad. Las capturas por medios quÌmicos consumen m·s electricidad que en el caso del almacenamiento
oce·nico.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 1

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La utilizaciÛn de microorganismos fotosintÈticos para la fijaciÛn de CO2 se basa en el proceso de fotosÌntesis.

Las microalgas frente a las plantas vasculares son m·s productivas en el sentido de biomasa por hect·rea y
aÒo (hasta 10 toneladas), por lo que son m·s interesante a la hora de capturar o fijar CO2. Por ejemplo, las
microalgas podrÌan utilizar los gases de combustiÛn que procedan de empresas que consumen mucho como
son las tÈrmicas, asÌ eliminarÌan gases de efecto invernadero.

Las microalgas no consumen recurso de tierra porque no utilizan para su cultivo fertilizantes, sino que utilizan
la fuente de carbono que proceda de los gases de las chimeneas. Adem·s, permiten cosechas mucho m·s
r·pidas, lo que implica altas productividades y consumo de pocos recursos. Si se combinan con aguas
residuales no hay que utilizar una fuente de sales para su cultivo.

A. EXPERIENCIAS PREVIAS/PROYECTOS
Desde mediados de los aÒos 70 el Departamento de EnergÌa de los Estados Unidos de AmÈrica (DOE) financia
proyectos de investigación (“Aquatic Species Program” (ASP)) centrados en la producción de combustibles a
partir de microalgas, comenzando con la producciÛn de microalgas y su posterior transformaciÛn en biog·s y
biodiÈsel.

En JapÛn, “Research Institute of Innovate Technologies of the Earth” (RITE) realizó proyectos sobre la
biofijaciÛn de CO2 con microalgas (desde finales de los 90). RITE tiene cuatro laboratorios que trabajan en la
separaciÛn de CO2, la captura y almacenaje de CO2 y la fijaciÛn de CO2 por plantas.

En la ˙ltima dÈcada se siguen impulsando proyectos dirigidos a utilizar microalgas para la eliminaciÛn de CO2
de gases de combustiÛn, aunque actualmente la atenciÛn se centra en maximizar la velocidad de fijaciÛn de
CO2 mediante selecciÛn de estirpes adecuadas, modificaciÛn genÈtica y mediante la optimizaciÛn de los
sistemas de cultivo, m·s que en la producciÛn de combustibles como el biodiÈsel.

Entre los proyectos que se est·n llevando a cabo tenemos:

− En Japón, la “Mitsubishi Heavy Industries” ha financiado proyectos en este sentido.
− En Estados Unidos, el DOE-NETL (Laboratorio Nacional de TecnologÌa EnergÈtica) ha financiado proyectos
basados en el empleo de fotobiorreactores cerrados incluyendo el empleo de fibra Ûptica. Tiene proyectos
activos en la actualidad.
El DOE tambiÈn ha financiado una red internacional sobre biofijaciÛn de CO2 con microalgas en la que
participan empresas como Eni Technologie, RÌo Tinto, Produzione Ricerca o ExxonMobil, entre otras.
El objetivo de “DOE-NETL Carbon Sequestration Program” era el de desarrollar tecnologías de secuestro
de CO2 con un coste de 2’7$ por tonelada de CO2. Sin embargo, actualmente la tecnologÌa de eliminaciÛn
de CO2 con microalgas no puede alcanzar ese objetivo si no es mediante la mejora de la economÌa del
proceso por valorizaciÛn de los coproductos y/o servicios adicionales obtenidos.
− En cuanto a Europa y relacionado con biodiÈsel, se est·n financiando proyectos de investigaciÛn como el
“AQUAFUELS” (activo) o el “Enerbioalgae” (no activo actualmente).
El proyecto “Enerbioalgae” tenía como finalidad el aprovechamiento y depuración de aguas residuales,
urbanas e industriales a la vez que la depuraciÛn de gases de combustiÛn mediante microalgas.
CO2algaefix (microalgas para la captaciÛn y biofijaciÛn de diÛxido de carbono) fue llevado a cabo por la
industria Algaenergy, que forma parte del consorcio europero Bio-based Industries Consortium (BIC)
impulsado por la ComisiÛn Europea para la b˙squeda de biocombustibles alternativos a los derivados del
petrÛleo.

B. LÕNEAS DE INVESTIGACI”N
Se han realizado diversas experiencias a pequeÒa y media escala sobre el uso real de gas de combustiÛn como
fuente carbonada para la producciÛn de microalgas.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 2

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El caso m·s sencillo es el gas de combustiÛn que se inyecta directamente en reactores abiertos. Los
inconvenientes que esta inyecciÛn presenta son que parte del gas de combustiÛn que estamos inyectando se
pierde a la atmÛsfera y la productividad de la biomasa es baja porque ese aporte de carbono que le querÌamos
dar se est· perdiendo. El empleo de fotorreactores cerrados permite aumentar la productividad porque son
m·s eficaces, pero son m·s caros. La productividad es mayor en fotorreactores planos verticales con inyecciÛn
directa de los gases de combustiÛn procedentes de una central tÈrmica de gas natural (previo enfriamiento).

Por otra parte, tambiÈn es posible llevar a cabo una captura previa de CO2 en una fase lÌquida mediante una
absorciÛn gas-lÌquido. El gas de combustiÛn es previamente depurado en una unidad de absorciÛn donde el
CO2 es transferido a un medio acuoso que, posteriormente, es suministrado al cultivo de microalgas. Este
proceso aparece representado en el siguiente esquema:

Es un proceso de absorciÛn de CO2 en fase acuosa que se va a carbonatar porque est· disolviÈndose el CO2
con los cual los gases de combustiÛn se est·n depurando, y la fase acuosa serÌa la que alimentarÌa el reactor
bilÛgico. De esa manera se reducen las pÈrdidas de CO2, que en el caso de inyecciÛn directa de gas de
combustiÛn son muy grandes, este reactor puede emplearse para el tratamiento de aguas residuales y con lo
cual tenemos una doble aplicaciÛn ambiental, estamos depurando los gases de combustiÛn, tratando aguas
residuales y obteniendo una biomasa que se puede utilizar como fertilizante o para obtener biocombustibles.

C. CLASIFICACI”N DE LAS ESTRATEGIAS DE MITIGACI”N DE CO2

1. Basadas en reacciones quÌmicas:
▪ Se hace reaccionar el CO2 con monÛxido met·lico para dar lugar a carbonato en un reactor de
carbonataciÛn. TambiÈn podrÌa tener lugar la reacciÛn inversa (calcinaciÛn) en sentido contrario para
producir Ûxido met·lico en un reactor de egeneraciÛn.

▪ Hoy en dÌa lo que m·s se da es la absorciÛn con agua. Por ejemplo, cuando se produce el biog·s se
eliminan las impurezas con corrientes de agua porque el CO2 tiene mayor solubilidad que el metano y
asÌ se elimina m·s f·cilmente. El problema de utilizar corrientes es que se consume mucha agua y
luego el gas hay que secarlo antes de incorporarlo al sistema. TambiÈn se puede utilizar para separar
el CO2 de la mezcla de gases carbonato pot·sico o el lavado con una soluciÛn acuosa de alcanolaminas.
La soluciÛn m·s empleada es la monoetanolamina (MEA) porque forma soluciones alcalinas m·s
fuertes que el carbonato pot·sico y reduce m·s el contenido de gases ·cidos.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 3

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2. MitigaciÛn de CO2 biolÛgica: es la que m·s interesa. Para ello, es necesario identificar microalgas que
tengan gran tolerancia a altas concentraciones de CO2 y que crezcan bien en CO2. En la siguiente tabla
tenemos algunos ejemplos de especies y las concentraciones m·ximas de CO2 en las que son capaces de
crecer:

Algunas cepas toleran condiciones de alto CO2 (pueden ser originarias del Mesoproterozoico), pero no tienen
buen crecimiento. Por ejemplo, Scenedesmus obliquus puede tolerar hasta 18% de CO2, pero su crecimiento
Ûptimo es con 6% de CO2.

A continuaciÛn, se muestra un experimento que se diseÒÛ para identificar estirpes tolerantes a altas
concentraciones de CO2. Las cepas de algas utilizadas en este estudio se aislaron a partir de aguas procedentes
de diferentes partes de la bahÌa de Chesapeake Bay, del puerto interior de Baltimore y del RÌo Back (Baltimore,
Maryland).

En cada uno de los pocillos de la gradilla se aÒade medio de cultivo lÌquido en el que se inocularon diferentes
estirpes y se pusieron en bolsas semihermÈticas donde se variÛ el ambiente de cultivo con aire enriquecido a
diferentes porcentajes de CO2.

Se vio que las especies de Scenedesmus, Nannochloris y Chlorococcum son candidatas potenciales para el
secuestro de CO2 en los gases de combustiÛn de plantas de energÌa porque crecen muy bien a las diferentes
concentraciones de CO2.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 4

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En las siguientes gr·ficas vemos lo mismo que en los pocillos. Se representa la densidad Ûptica 600nm a lo
largo de los dÌas para observar el crecimiento de cultivo. Interesa que las lÌneas que representan el crecimiento
del cultivo con 20% de CO2 tengan una densidad Ûptica muy alta.

No solamente son interesantes aquellas estirpes tolerantes a alta concentraciÛn de CO2, sino que tambiÈn
tienen que ser tolerantes a la presencia de gases ·cidos contaminantes como el Ûxido nÌtrico o el diÛxido de
azufre, que suelen estar presentes en los gases de combustiÛn. Por ejemplo, las especies de Nannochloris sp
pueden crecer con 100 ppm de Ûxido nÌtrico (NO) y las especies de Tetraselmis sp pueden crecer con 185 ppm
de SOX, 125 ppm de NOX y 14’1% de CO2.

Adem·s, si son microalgas marinas (especies de Nannochloris sp, Nannochloris salina, Chlorococcum littorale,
etc.) tienen una ventaja aÒadida, ya que el agua del mar puede ser utilizada directamente como un medio de
cultivo de manera que los costes de mantenimiento del cultivo de microalgas podrÌan reducirse. Asimismo,
muchas fuentes de CO2, tales como centrales elÈctricas, se encuentran a lo largo de la zona costera.

2. MECANISMOS DE CONCENTRACI”N DE CO2 EN ALGAS (CCMs)

Muchas especies de microalgas, al igual que las plantas, han desarrollado mecanismos para concentrar el CO2
en la localizaciÛn de la RuBisCO. De esta manera se favorece la fijaciÛn fotosintÈtica y la carboxilaciÛn frente
a la oxigenaciÛn para que se minimicen las pÈrdidas por fotorrespiraciÛn.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 5

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Las plantas superiores de tipo CAM o C4 tienen una serie de adaptaciones fisiolÛgicas para concentrar el CO2.
Las microalgas no tienen tanta complejidad como las plantas vasculares, muchas son unicelulares y viven
formando asociaciones en medios acu·ticos, lo que supone una limitaciÛn para captar el carbono inorg·nico.

El sustrato que se emplea en la fotosÌntesis es el CO2, el cual difunde f·cilmente dentro de la cÈlula. Sin
embargo, la difusiÛn del CO2 en el agua es mucho menor que en el aire, lo que limita la disponibilidad de este
para que las algas lo capten.

Adem·s, en funciÛn del pH y la temperatura hay una relaciÛn u otra de las diferentes formas de carbono
org·nico que podemos encontrar en los mares. Por ejemplo, la concentraciÛn de CO2 en el agua de mar en
equilibrio con el aire es 0’014 mmol/L a 15°C, frente a valores de HCO3- (2 mmol/L) y CO32- (0’2 mmol/L) a pH
8’1. Entonces en este caso la forma mayoritaria en los océanos sería el bicarbonato, el cual a diferencia del
CO2 es una especie cargada, por lo que no puede difundir tan libremente entre membranas.

Por tanto, las microalgas van a obtener el carbono inorg·nico tanto a partir del CO2 como del bicarbonato, y
que en su interior van a concentrar el carbono en forma de bicarbonato. Esta es una de las caracterÌsticas de
los mecanismos de concentraciÛn que tienen las microalgas. Sin embargo, el bicarbonato acumulado debe
convertirse en CO2 antes de que la fijaciÛn por la RuBisCO tenga lugar. Muchas microalgas que poseen
mecanismos de concentraciÛn de CO2 concentran la RuBisCO en una localizaciÛn, donde el bicarbonato
concentrado es convertido en CO2 por acciÛn de una anhidrasa carbÛnica (CA). En el caso de las cianobacterias,
esa RuBisCO se localiza en los carboxisomas y en caso de las microalgas eucariÛticas es el pirenoide dentro del
cloroplasto (las que poseen pirenoide, hay microalgas eucariÛticas que poseen los mecanismos de
concentraciÛn de CO2, pero no tienen pirenoide).

En el caso de las plantas vasculares, la RuBisCO se encuentra en el estroma del cloroplasto.

Esta concentraciÛn de CO2, tanto en los carboxisomas como en el pirenoide, va a permitir que haya una mayor
eficiencia de la fotosÌntesis y se reduzcan las pÈrdidas por fotorrespiraciÛn.

El entorno de la RuBisCO se preserva de un ambiente de oxÌgeno que se est· produciendo en el fotosistema

II. Adem·s, como est· acumulada la anhidrasa carbÛnica que est· convirtiendo bicarbonato en CO2, hay un
aumento de este sustrato frente al oxÌgeno favoreciendo su fijaciÛn frente a la reacciÛn con el oxÌgeno.

En esta tabla tenemos diferentes tipos de fotosÌntesis:

− Las plantas C3 ˙nicamente tienen el ciclo de Calvin como mecanismo de concentraciÛn de CO2 y la RuBisCO
se localiza en el estroma del cloroplasto de la mayor parte de las cÈlulas fotosintÈticas de las hojas.
− Las plantas C4 tienen capacidad de concentrar CO2. La RuBisCO se encuentra en el cloroplasto en las
cÈlulas de la vaina.
− Las microalgas eucariotas tienen capacidad de concentrar CO2 y acumulan la RuBisCO en el pirenoide del
cloroplasto.
− Las cianobacterias tambiÈn tienen capacidad de concentrar CO2 y acumulan la RuBisCO en los
carboxisomas.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 6

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Como hemos dicho, una de las caracterÌsticas de esos mecanismos de concentraciÛn de CO2 de microalgas es
que acumulan en el interior celular.
Existe una gran diferencia de acumulaciÛn entre
cianobacteria y microalgas eucariotas. Esta diferencia se
debe a que la RuBisCO de las microalgas tiene mayor
afinidad de sustrato que la de cianobacterias.

A. C”MO ENTRA EN LA C…LULA HCO3-/CO2

Otra caracterÌstica a destacar es la importante funciÛn que tiene la forma en que la cÈlula adquiere el carbono
inorg·nico que puede ser en forma de CO2 o bicarbonato. Mientras que el CO2 entra a la cÈlula por difusiÛn,
el bicarbonato necesita un sistema de transporte activo mantenido con energÌa.

En las cianobacterias encontramos la RuBisCO y la anhidrasa carbÛnica en los carboxisomas. El CO2 entra por
una difusiÛn mantenida por la hidrataciÛn activa, es decir, el CO2 entrarÌa por difusiÛn pasiva, pero la
concentraciÛn de este en agua no es muy alta de forma que para mantener la difusiÛn hay una hidrataciÛn del
CO2 a travÈs de deshidrogenas que van a catalizar la conversiÛn de CO2 en bicarbonato. Esto supone un gasto
de energÌa en forma de Redox. Este proceso ocurre tanto en la membrana plasm·tica como en la membrana
tilacoidal.

En cambio, el bicarbonato entra por sistemas activos, hay 3 sistemas de transporte identificados. Uno de ellos
consume ATP para la entrada del bicarbonato y los otros cotransportan sodio conjuntamente con el
bicarbonato (simporte).

Hubo un momento que se planteÛ la posibilidad de modificar genÈticamente plantas de cultivo con
componentes de los CCMS de cianobacterias para aumentar la concentraciÛn de CO2 en el entorno de la
RuBisCO con el objetivo de incrementar la fotosÌntesis y, por tanto, su productividad. La ventaja respecto a
otros mecanismos de concentraciÛn como puede se el C4 fue que los cambios fisiolÛgicos a los que se sometÌan
fueron menores. Sin embargo, tambiÈn hubo problemas como que la envuelta de los carboxisomas codificada
por 9 genes y algunos con varios productos deben expresarse en la proporciÛn y posiciÛn correcta, con lo cual
no es tan f·cil reproducirlo para conseguir mimetizar este modelo en plantas superiores. Adem·s, deben de
ensamblarse alrededor de la RuBisCO y de la anhidrasa carbÛnica.

Asimismo, se ha realizado un modelo teÛrico de simulaciÛn introduciendo transportadores de bicarbonato

que son dependientes de sodio, en el que se ha conseguido una mejora de la fotosÌntesis del 9-16%.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 7

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En las microalgas eucariÛticas tambiÈn se puede obtener el carbono inorg·nico a partir de CO2 que difunde,
pero en este caso dicha difusiÛn se mantiene por la presencia de anhidrasas carbÛnicas en diferentes
localizaciones. Hay anhidrasas presentes en el espacio peripl·smico, en el citoplasma y en el pirenoide. Gracias
a ellas el CO2 puede convertirse a bicarbonato y entrar por transporte activo, de manera que se mantiene el
gradiente desde el exterior hacia el interior.

Por otro lado, el transporte activo del bicarbonato est· mediado por proteÌnas transportados que van a
facilitar su entrada a travÈs de la membrana plasm·tica y la del cloroplasto. Es m·s complejo que en
cianobacterias, ya que el carbono inorg·nico tiene que atravesar dos sistemas de membrana para alcanzar el
sitio de carboxilaciÛn: la membrana plasm·tica y la envuelta del cloroplasto.

B. RESUMEN DE LAS CARACTERÕSTICAS/COMPONENTES DE LOS CCMS EN MICROALGAS

− Concentrar el CO2 en forma de bicarbonato.
− Concentrar la RuBisCO en una localizaciÛn especÌfica (compartimentos subcelulares: carboxisoma,
pirenoide), donde el bicarbonato es convertido en CO2 por acciÛn de una anhidrasa carbÛnica (CA).

Respecto a la entrada de CO2 y bicarbonato:

− Tanto las cianobacterias como las microalgas eucariotas tienen sistemas de transporte activos para la
entrada del medio al citosol de bicarbonato. Adem·s, en el caso de las microalgas tambiÈn est·n presentes
en la membrana del cloroplasto.
− En cianobacterias, el gradiente de difusiÛn del CO2 es mantenido por la hidrataciÛn activa del CO2 a
bicarbonato con gasto de NAD(P)H al no poseer CA en el citosol.
− En las microalgas eucariotas, el gradiente de difusiÛn del CO2 es mantenido por las CA presentes en el
citosol.

Las cianobacterias acumulan glucÛgeno como carbohidrato de reserva en vez de almidÛn como las
microalgas eucariotas (en ambos casos el precursor es la ADP-glucosa).

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 8

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

C. METABOLISMO C4 (SIMILAR) EN DIATOMEAS

Las algas m·s importantes del fitoplancton son las diatomeas, algas unicelulares eucariotas. Se ha observado
que la especie marina Thalassiosira weissflogii parece que tiene un metabolismo de tipo C4 el cual es tÌpico
de plantas superiores y que necesitan una serie de cambios fisiolÛgicos con respecto a las C3.

Sin embargo, en esta especie de diatomeas se han encontrado los genes que codifican enzimas caracterÌsticas
del metabolismo C4 como son PEPC, PEPCK y PPDK.

Han diseÒado un experimento

para ver si no solamente est·n
presentes en esta especie los
genes, sino que adem·s
pueden presentar un
metabolismo tipo C4 funcional.

Las condiciones de cultivo del

experimento son en deficiencia
de CO2, ya que es cuando se
activa el metabolismo tipo C4.

El experimento se realiza en la estirpe Thalassiosira weissflogii que aparece representado en la primera gr·fica
y luego se hace un control (2 gr·fica) para control con otra microalga que no tiene ning˙n indicio de tener
metabolismo C4.

AÒaden un inhibidor en las dos condiciones, DCDP, que afecta a la actividad de la fosfoenolpiruvato carboxilasa
(PEPC), de manera que si hay actividad PEPC la adiciÛn de DCDP producirÌa un cambio en el perfil, que es la
emisiÛn de oxÌgeno durante la fotosÌntesis.

En el control como no hay ning˙n tipo de actividad PEPC, cuando se aÒade el inhibidor pr·cticamente no se
ve afectada la emisiÛn de oxÌgeno. En Thalassiosira weissflogii se ve que al aÒadir el inhibidor sÌ que se afecta,
lo que quiere decir que en las condiciones del experimetno sÌ estarÌa activa la PEPC y serÌa responsable de los
valores de la producciÛn de oxÌgeno fotosintÈtico.

Lo mismo se observÛ en otra diatomea marina, la Thalassiosira pseudonana:

− Se identificaron dos genes codificantes de la enzima fosfoenolpiruvato carboxilasa: PEPC1 y PEPC2.
− TambiÈn se identificaron descarboxilasas: genes codificantes de la enzima m·lica dependiente de NADP
(NAD-ME) y fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPCK).

Cuando esta diatomea se cultivÛ en bajo contenido de CO2 y se aÒadieron inhibidores de la PEPCK y la PEPC
se vio que afectaba a la tasa m·xima de fotosÌntesis. Esto significa que est·n activas y hay un metabolismo
similar al tipo C4.

D. METABOLISMO DEL CO2 EN COCOLITOF”RIDOS

No es exactamente un mecanismo de concentraciÛn de CO2, pero es la ˙nica microalga que aparte de utilizar
carbono para fijarlo fotosintÈticamente, tambiÈn forma carbonatos a partir de Èl. Esto ocurre en los
cocolitÛforos, que son haptofÌceas.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 9

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Estos cocolitÛforos que son algas unicelulares marinas van a utilizar el carbono para calcificar, que se
depositar· en unas vesÌculas (cocolitos) que van a rodear a la cÈlula. Estas algas van a contribuir a la formaciÛn
de los depÛsitos de carbonato en los fondos de los ocÈanos.

El problema de la acidificaciÛn de los ocÈanos con el aumento de las emisiones de CO2 puede afectar a muchos
organismos marinos, entre ellos a los cocolitÛforos, afectando a la formaciÛn de las conchas de los animales.

Aunque no funcionan como mecanismo de concentraciÛn de CO2, cuando hay una baja concentraciÛn de este
hay una redistribuciÛn de este carbono inorg·nico desde la calcificaciÛn hacia la fotosÌntesis, se enlentece la
calcificaciÛn para que haya fijaciÛn fotosintÈtica.

Por ejemplo, la calcita refleja la luz por lo que los afloramientos de esta microalga son f·cilmente visibles desde
el espacio. TambiÈn tenemos los acantilados de Dover en el Reino Unido que contienen antiguos cocolitos del
periodo Cret·cico que le dan el color blanco. Los cocolitofÛridos aunque se desarrollan en las capas
superficiales del ocÈano, al morir sus cocolitos se hunden llevando carbono con ellos a los sedimentos del
fondo marino.

3. OPTIMIZACI”N DE LA FOTOSÕNTESIS Y DEL METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS

POR INGIENERÕA GEN…TICA
Se pueden hacer una serie de modificaciones transgÈnicas para mejorar la eficiencia fotosintÈtica en el caso
de microalgas. La eficiencia de la fotosÌntesis y, por lo tanto, el rendimiento en la obtenciÛn de biomasa
depende de tres factores: la concentraciÛn de sales, temperatura y la intensidad lumÌnica.

Respecto a la intensidad lumÌnica es tan malo un exceso como una deficiencia. Para muchas especies la
intensidad de luz a la que corresponde un m·ximo de eficiencia fotosintÈtica oscila entre los valores de 200 a
400 µmol de fotones por metro cuadrado y por segundo. Las intensidades de luz por encima de los
correspondientes a esos m·ximos de eficiencia fotosintÈtica afectan negativamente a la fotosÌntesis y al
crecimiento (fotoinhibiciÛn).

Cuando las algas absorben m·s luz de la que necesitan en fotosÌntesis, el exceso de luz es disipado como calor
y fluorescencia. Cuando se incrementa la utilizaciÛn de fotones, aumenta la eficiencia de la conversiÛn de luz
y la capacidad de fijar CO2.

El objetivo de estas modificaciones serÌa aumentar la eficiencia fotosintÈtica disminuyen el efecto de

fotoinhibiciÛn, lo cual se consigue reduciendo el tamaÒo de las antenas clorofÌlicas. Para ello hay diferentes
estrategias:

1. MutagÈnesis al azar con alta intensidad de luz durante un largo periodo.

2. ManipulaciÛn genÈtica con tÈcnicas basadas en ARNi para afectar a la proteÌna LHC del fotosistema I y la
proteÌna LHC del fotosistema II.

Al reducir el tamaÒo de las antenas, se absorbe menos luz, lo que hace que los cultivos se hagan m·s
transparentes y la luz de alta intensidad luminosa pueda penetrar en cultivos de alta densidad. Esto hace que
se puedan alcanzar altos valores de fotosÌntesis debido al hecho de que las cÈlulas est·n sujetas a una menor
fotoinhibiciÛn.

Las proteÌnas colectoras de luz (LHC, light harvesting complex) est·n embebidas en la membrana tilacoidal de
los cloroplastos y son una parte estructural importante que mantienen a las clorofilas y los carotenoides en
una orientaciÛn determinada y optimizan la captura de la luz (en funciÛn de si est·n asociadas al PSI o PSII son
LHCI o LHCII).

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 10

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La estrategia de reducir el tamaÒo de las antenas para minimizar las pÈrdidas y favorecer la penetraciÛn de
luz en el biorreactor tiene aplicaciÛn en la producciÛn de combustibles.

Ejemplo de aproximaciÛn experimental: se obtuvieron mutantes que reprimen la expresiÛn de proteÌnas

LHCI/II por RNA interferentes, tomando como una regiÛn de alta homologÌa en todos los genes LHC (Stm3LR3).
Como estirpe de partida se tomÛ un mutante de C. reinhardtii de NAB1 (la proteÌna de uniÛn a RNA, NAB1
regula la transcripciÛn de varias proteÌnas LHCII, esta estirpe es la Stm3. A continuaciÛn, en las gr·ficas se
observa la reducciÛn de la fotoinhibiciÛn (se mide la emisiÛn de oxÌgeno) y el aumento del crecimiento celular
cuando las microalgas se cultivan en condiciones de alta luminosidad (1400 µmol m2s-1).

Otros ejemplos de estrategias para reducir los complejos antenas en microalgas:

En otro experimento midieron el rendimiento cuanticofotosintÈtico. El

valor m·ximo en el PSII es 1, entonces el 100% de los fotones que se
absorben se utilicen en el proceso de conversiÛn fotoquÌmica. Si el valor
fuese 0, todos esos fotones que se absorben se estarÌan perdiendo por
fluorescencia en las clorofilas.

El rendimiento cu·ntico del mutante Stm3 es mucho m·s pequeÒo que el

mutante 3LR3 (con renducciÛn de antena). La menor fluorescencia en
3LR3 es otra forma de asegurar la mayor eficiencia fotosintÈtica de la luz
que se absorbe.

A. OPTIMIZACI”N DEL METABOLISMO DE LOS CARBOHIDRATOS

Si las microalgas se utilizan para producir diferentes biocombustibles es porque se utilizan como biomasa para
los fermentadores y mejoran la acumulaciÛn de carbohidratos.

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La mayor parte de estrategias y experimentos est·n hechos en plantas, pero se pueden extrapolar a microalgas
porque el metabolismo es m·s o menos paralelo. Todos los experimentos est·n relacionados con modificar el
metabolismo del almidÛn o favoreciendo la acumulaciÛn de az˙cares solubles.

No es f·cil modificar la ruta de sÌntesis del almidÛn, ya que aquellos mutantes que sintetizan menos almidÛn
o que tienen reducida la capacidad de degradar almidÛn suelen tener un crecimiento reducido.

B. AUMENTO DE FOTOSÕNTESIS AL INTROUCIR UNA ALDOLASA DE CIANOBACTERIAS EN LA

MICROALGA CHLORELLA VULGARIS
En el ciclo de Calvin, la aldolasa cataliza en la etapa de regeneraciÛn de RuBP la conversiÛn de:

1. Dihidroxiacetona-3-P (DHAP) + gliceraldehÌdo-3-P (GAP) a fructosa-1,6-bisfosfato (FBP).

2. De DHAP + eritrosa 4-P a sedoheptulosa-1,7-bisfosfato.

Se ha visto que modificando y aumentando la expresiÛn de la aldolasa aumenta la fotosÌntesis. Esto se vio
expresando la aldolasa de Synechocystis (FBA) con una construcciÛn con GFP en cloroplasto.

Este es el modelo de trabajo que hicieron.

Lo que se observÛ fue que se obtuvo una
mayor expresiÛn de la aldolasa que
produjo un aumento en diferentes rutas
contribuyendo a que hubiera mayor
crecimiento de Chlorella vulgaris. En este
caso utilizaron el promotor 35S, pero se
podrÌa haber utilizado un promotor
endÛgeno que hubiera funcionado mejor,
como puede ser el de la RuBisCO, para
mejorar la expresiÛn.

El aumento de la RuBP puede afectar

positivamente sobre la actividad
RuBisCO, al ser el sustrato de la enzima.

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Adem·s, al tener m·s activo el ciclo de Calvin el transporte de electrones se ve afectado positivamente, ya
que hay una transferencia de electrones m·s r·pida entre los fotosistemas.

4. EL BIOCARB”N DE MICROALGAS COMO SISTEMA DE SECUESTRO DE CARBONO

El carbono se puede capturar de varias formas:
1. La biomasa de microalgas cuando mueren se deposita en los fondos constituyendo una forma de
secuestrar carbono.
2. La extracciÛn de la fase de aceite o lÌpidos serÌa una forma estable de almacenamiento.
3. Almacenamiento en forma de biocarbÛn. Nos vamos a centrar en este tipo.

El biocarbono (BIOCHAR) es una forma estable del carbono que puede persistir en el suelo durante millones
de aÒos. Est· formado por m·s de 90% de carbono y es un subproducto de la pirÛlisis a altas temperaturas en
presencia de catalizadores bajo condiciones anaerÛbicas.

Como alternativa a la pirÛlisis, la carbonizaciÛn hidrotermal (HTC) es un proceso que tiene lugar en agua en el
que la biomasa se calienta en agua bajo presiÛn para crear un producto de carbÛn. A partir de proteÌnas,
lÌpidos (en menor medida) e hidratos de carbono de las microalgas (generalmente no celulosa) se obtiene
carbÛn y una fase acuosa.

En el proceso de HTC se forman tres fases que son el biocarbÛn (fase sÛlida), la fase acuosa rica en nutrientes
(posible medio de cultivo para microalgas) y ·cidos grasos o TAG que se quedan adsorbidos en el biocarbÛn
que se ha generado.

Las ventajas de la carbonizaciÛn hidrotermal frente a la pirÛlisis son:

− ReducciÛn del consumo de energÌa en comparaciÛn con la pirÛlisis directa (cuya biomasa de partida debe
estar relativamente seca).
− Se descubriÛ que los triacilglicÈridos (TAG) no contribuyen a la formaciÛn del carbÛn. Principalmente, los
TAG quedan adsorbidos en el carbÛn creado en ese proceso, que pueden ser hidrolizados a ·cidos grasos.

El balance del carbono es el siguiente:

− Alrededor del 55% del carbono va a formar parte del biocarbÛn quedando en la fase sÛlida.
− Un 45% va a quedar en la fase lÌquida que se puede utilizar luego otra vez como nutrientes para cultivar
microalgas.
− Un 7% se pierde en forma gaseosa.

Lo importante del carbono algal es que se puede utilizar como combustible.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 13

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El biocarbÛn tiene varios usos potenciales a parte de que es una forma de secuestro del CO2. Se puede utilizar
como sustrato para la sÌntesis de gas y del tratamiento de suelos, como reductor en la fabricaciÛn de acero,
como combustible para la generaciÛn de energÌa elÈctrica y como adsorbente para la purificaciÛn de aire/agua.

AquÌ tenemos un esquema del proceso de carbonizaciÛn hidrotermal. A partir de las microalgas se obtiene un
producto que pasa por un filtro donde se recupera la fase lÌquida que vuelve al cultivo para el crecimiento de
m·s biomasa. DespuÈs el carbÛn algal impregnado de lÌpidos se puede tratar para eliminar los lÌpidos y obtener
el carbÛn. A partir de esos lÌpidos eliminados se pueden realizar reacciones de transesterificaciÛn para la
formaciÛn de biodiÈsel.

TEMA 6. APLICACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL AUMENTO DE LA FIJACI”N DEL CO2 14

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS

MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES
1. UTILIZACI”N DE LAS MICROALGAS COMO BIOFERTILIZANTES
HistÛricamente las microalgas se han utilizado en agricultura como biofertilizantes y acondicionadores del
suelo en las regiones costeras, ya que estas tienen beneficios para los suelos porque se asocia con la capacidad
de retenciÛn de aguas, con el aporte de minerales al suelo y pueden inducir respuestas de defensa a las plantas
frente al ataque de patÛgenos.

Cuando hablamos de acondicionadores de suelo, nos referimos a que mejoran las propiedades fÌsicas y de
fertilidad del suelo. Esta pr·ctica se utiliza porque favorece la retenciÛn del agua, la aireaciÛn y recuperaciÛn
del suelo. En zonas templadas se emplean microalgas verdes unicelulares eucariotas como agentes
acondicionadores en zonas de regadÌo para controlar la erosiÛn. Por ejemplo, las algas del gÈnero
Chlamydomonas y cianobacterias del gÈnero Nostoc se emplean en el control de la erosiÛn del suelo en los
que se emplea riego pivotante.

Como biofertilizantes, tambiÈn hay soluciones ya preparadas a partir de extractos de cÈlulas de

microorganismos, que pueden ser fijadores o no de nitrÛgeno, solubilizadores de fÛsforo, oxidantes de sulfuro
o materia org·nica descompuesta.

Las cianobacterias son organismos importantes en la fijaciÛn de nitrÛgeno, especialmente en los cultivos de
arroz en diversos paÌses (extendido en paÌses del trÛpico). Pueden suministrar al suelo 20 o m·s kilogramos
de nitrÛgeno por hect·rea y por aÒo. Las cianobacterias fijadoras de nitrÛgeno puede ser organismos de vida
libre o pueden establecer simbiosis, siendo las m·s comunes en arroz Anabaena sp y Nostoc sp.

A. SIMBIOSIS CIANOBACTERIA-AZOLLA
Esta simbiosis se establece en las cavidades de las hojas de Azolla (helecho de agua) y es utilizada como
biofertilizante. La Azolla se beneficia de la fijaciÛn de nitrÛgeno de Anabaena Azollae enriqueciendo el cultivo
en nitrÛgeno. La mayor parte del nitrÛgeno que aporta la Azolla (en simbiosis con cianobacterias) al cultivo de
arroz procede de su mineralizaciÛn despuÈs de su muerte.

La Azolla crece conjuntamente con las cosechas de arroz de manera que aumenta el rendimiento de la cosecha
y la calidad del arroz. La Azolla en simbiosis con Anabaena Azollae adem·s de aportar nitrÛgeno al arroz,
proporciona potasio (alta concentraciÛn), ya que la Azolla absorbe y concentra potasio.
Los inconvenientes de utilizar este sistema como biofertilizantes son:
− Para su crecimiento es preferible ·reas que tengan temperaturas frescas (media de 25C), ya que altas
temperaturas reducen su crecimiento.
− Su crecimiento es Ûptimo a pH de 4.5-7 y sobrevive en un rango entre 3.3-10. No es un gran inconveniente,
pero para que sea efectiva debe haber un crecimiento Ûptimo (una cosa es que sobreviva y otra que tenga
un crecimiento Ûptimo).
− El fÛsforo es el mayor nutriente limitante para el crecimiento de Azolla, por lo que se requiere la aplicaciÛn
de Èste en la mayor parte de los cultivos de Azolla. Es por ello que ser· favorable en suelo ricos en fÛsforo.

2. APLICACIONES DE CIANOBACTERIAS EN BIORREMEDIACI”N

Las microalgas son muy sensibles a la toxicidad por metales, por eso incluso se utilizan para la construcciÛn de
biosensores. Su efecto tÛxico puede afectar a varias partes del metabolismo, como puede ser a determinados
grupos prostÈticos dando lugar a pÈrdida de funciÛn de una enzima o de una ruta. Por tanto, aquÌ vamos a ver

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES 1

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que tanto las cianobacterias como las microalgas tienen la capacidad de eliminar los metales pesados por
diferentes procesos.

Durante el crecimiento de las algas, los metales son eliminados del ambiente que les rodea y se acumulan en
las cÈlulas por procesos no dependientes del metabolismo (adsorciÛn) o por procesos dependientes del
metabolismo (absorciÛn).

Se han hecho intentos de utilizar cÈlulas vivas de microalgas para

eliminar metales pesados de aguas contaminadas, ya que las
especies resistentes que han sido aisladas de aguas
contaminadas tienen mayor capacidad de acumular metales
pesados.

En la gr·fica vemos una comparaciÛn entre dos especies de

Chlorella, siendo el control la que se representa con el cÌrculo
negro. A medida que se va aumentando la concentraciÛn de
nÌquel en el medio acu·tico, va aumentando la concentraciÛn
del metal en el interior de la cÈlula. Respecto al control se
aumenta m·s de dos veces, por lo que serÌa una buena
candidata para la eliminaciÛn de nÌquel y se podrÌa utilizar para
biorremediaciÛn.

La biosorciÛn es un tÈrmino aplicado al uso de biomasa no necesariamente viva para recubrir determinados
soportes como material de sorciÛn, y es empleada en procesos como la detoxificaciÛn de elementos met·licos
tÛxicos. Ejemplo: biomasa comercial Alga SORB consiste en algas muertas inmovilizadas en polÌmeros de sÌlice
gel. Las caracterÌsticas que pueden tener estos biosorbentes son:

− Los metales pesados adsorbidos en la superficie de la pared celular de la biomasa de algas se pueden
eliminar y para reutilizar la superficie.
− La capacidad de uniÛn de metales varÌa con las especies, la composiciÛn de la pared celular del organismo
del cual deriva y la composiciÛn quÌmica de la soluciÛn de iones met·licos a tratar.
− Para la elecciÛn el biosorbente hay que conocer el metal a tratar y la concentraciÛn estimada de Èste.

Los metales pesados pueden causar graves daÒos a los seres vivos debido a su capacidad de permanecer,
acumularse y biomagnificarse a travÈs de la cadena alimentaria acu·tica. Los metales m·s comunes
encontrados en un ecosistema acu·tico son el cadmio (Cd), cobre (Cu), zinc (Zn), plomo (Pb), cromo (Cr) y
mercurio (Hg).

La ficorremediaciÛn basada en el uso de algas para el tratamiento de aguas residuales es una alternativa al
uso de otros mÈtodos existentes de extracciÛn de metales pesado (adsorciÛn con carbÛn activado, filtraciÛn
por membrana, intercambio iÛnico o precipitaciÛn quÌmica). Entre el fitoplancton destacan las diatomeas que
tienen una estructura de fr˙stulas de sÌlice que proporcionan una gran aÈrea de contacto para la adsorciÛn de
metales pesados. Como est·n muy presentes en el fitoplancton de ecosistemas acu·ticos, pueden contribuir
significativamente a eliminar metales pesados del ambiente contaminado.

Existen dos tipos de mecanismos:

1. Mecanismos de biosorciÛn extracelular: proceso pasivo que tiene lugar por la interacciÛn electrost·tica
entre los grupos funcionales de la pared celular (carga negativa) y los elementos met·licos (carga positiva).
Por ello hay que tener muy en cuenta la composiciÛn de la pared que va a ser diferente dependiendo de
la estirpe. Suele estar formada por cÈlula, hemicelulosa, pectina y diferentes grupos que le otorgan a la
pared una carga negativa. Los exopolisac·ridos extracelulares (EPS) pueden tambiÈn facilitar la adhesiÛn

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES 2

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de los elementos met·licos (las microalgas diatomeas y cianobacterias pueden formar consorcios que
tambiÈn producen exopolisac·ridos).
La interacciÛn electrost·tica va a depender del pH, temperatura, tiempo de contacto, fuerza iÛnica,
concentraciÛn del metal en el agua, composiciÛn de pared celular, etc.
2. Mecanismos de bioacumulaciÛn intracelular: proceso activo que consume energÌa en el que la absorciÛn
de metales pesados implica diferentes mecanismos: uniÛn con ligandos intracelularmente y formaciÛn de
complejos con metalotioneÌnas, funcionamiento de bombas/transportadores, cambios redox y
compartimentaciÛn celular (entre vacuolas).

AquÌ tenemos una tabla con ejemplos de eliminaciÛn de metales pesados a travÈs de microalgas donde se
destaca que el zinc tiene una alta tasa de adsorciÛn y el cadmio de acumulaciÛn.

En la mayorÌa de los casos se utiliza el alginato para crear la matriz donde se van a inmovilizar las algas.

A. USOS POTENCIALES DEL CONSORCIO FORMADO ENTRE MICROALGAS/CIANOBACTERIASCON

BACTERIAS PARA LA ELIMINACI”N DE CONTAMINANTES
Las microalgas se pueden utilizar en combinaciÛn con bacterias, lo que se llama consorcios, que pueden ser
entre microalgas, cianobacterias y bacterias para emplearlas conjuntamente en la eliminaciÛn de
contaminantes como metales y metaloides.

Las microalgas pueden eliminar xenobiÛticos por confinamiento, transformaciÛn y degradaciÛn. Adem·s,
suministran oxÌgeno por fotosÌntesis (necesario para la rotura de los anillos arom·ticos y compuestos
alif·ticos), compuestos org·nicos simples o nitrÛgeno fijado (cianobacterias), que normalmente es limitante
en diferentes entornos.

Aunque algunos contaminantes los eliminan directamente las microalgas, otros compuestos, sobre todo
org·nicos y petrÛleos, son eliminados por las bacterias aerÛbicas organotrÛficas. Las bacterias aerÛbicas

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES 3

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degradan directamente estos componentes ayudadas por los suministros aportados por las microalgas. En el
tratamiento de aguas contaminadas con petrÛleo las microalgas pueden actuar siempre y cuando la
concentraciÛn no sea muy alta para que la luz pueda penetrar y puedan crecer.

No siempre es beneficioso, ya que a veces hay efectos perjudiciales por el hecho de crecerlos conjuntamente.
Por ejemplo, las microalgas por medio de la fotosÌntesis aumentan el pH y esto puede favorecer la
precipitaciÛn de fosfatos o afecta al crecimiento de las bacterias. TambiÈn la bacteria o la microalga puede
secretar al medio metabolitos que inhiban el crecimiento del otro microorganismo.

Un trabajo que se realizÛ y tuvo Èxito experimentalmente fue la detoxificaciÛn de uranio de aguas
contaminadas mediante el consorcio microalgas-bacterias. Primero los ligandos en la pared celular de las algas
eliminan eficientemente el uranio (VI) de las algas, entonces estas algas-uranio pasan a sedimentadores,
donde finalmente las cÈlulas de las algas muertas suministran carbono, nitrÛgeno y fÛsforo a las bacterias
heterotrÛficas que van a reducir el uranio (VI) a uranio (IV).

Otro ejemplo es la biorremediaciÛn en Fukushima con microalgas, aunque no se sabe hasta que punto es de
aplicaciÛn pr·ctica. De la central nuclear de Fukushima Daiichi escaparon grandes cantidades de radioisÛtopos
(solubles en agua) al medio ambiente, entre los que encontramos: 18 PBq de 134Cs, 15 PBq de 137Cs, 2.0 PBq
de 89Sr,0.14 PBq de 90Sr, y 160 PBq de 131I. En la b˙squeda de recursos naturales para la descontaminaciÛn se
ha identificado una nueva cepa de microalga verde Parachlorella sp. binos (Binos) capaz de acumular
radioisÛtopos hidrosolubles de muestras de agua y suelo recolectadas en zonas muy contaminadas (I, Sr y Cs).
La cepa de microalgas verdes aislada procede de los lodos activos en una planta de tratamiento de aguas
residuales en Kitaibaraki, Ibaraki, JapÛn, muy cerca de la planta nuclear.

Esta cepa es viable a altas temperaturas (hasta 60 ºC) y es resistente a condiciones ·cidas y alcalinas en un
intervalo de pH de 3–11, siendo capaz de crecer en agua dulce y agua de mar. Esta cepa tiene abundantes
cloroplastos que ocupan la mayor parte de su citosol. El exterior de esta microalga verde est· cubierto por
una gruesa matriz extracelular que contiene alginato, un polisac·rido aniÛnico caracterÌstico de algas
marrones, pero no verdes.
Cuando esta cepa se cultivÛ con yodo radioactivo, se observÛ una absorciÛn (citosol) de yodo radioactivo
dependiente de la luz, pero tambiÈn incorpora (adsorciÛn) los isÛtopos de estroncio y cesio radiactivo de una
manera independiente de la luz. Adem·s, se vio que la afinidad de uniÛn por adsorciÛn era mucho mayor para
el estroncio que para el cesio (matriz extracelular).
Establecieron una relaciÛn entre los abundantes cloroplastos y la retenciÛn del yodo radiactivo, y esto sugerÌa
que la adsorciÛn estaba mediada en parte por un aumento del poder redox u oxidativo de la fotosÌntesis, por
ellos dicha retenciÛn serÌa dependiente de luz.

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES 4

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Por otra parte, el consorcio formado entre microalgas/cianobacterias con bacterias tambiÈn puede eliminar
otros contaminantes org·nicos. En la tabla aparecen distintos contaminantes como el acetonitrilo, fenantreno,
etc.

El contaminante m·s destacable es los BaP, compuestos hidrocarburos policÌclicos arom·ticos (PAHs o HAPs)
que son productos bastante frecuentes de la combustiÛn. Estos compuestos pueden tener diferentes anillos
arom·ticos:
− Los que tienen uno, dos o tres anillos pueden ser degradados complemente por determinadas bacterias.
− Los que tienen m·s de cuatro anillos no se degradan tan f·cilmente.

Por ejemplo, el benzo(a)pireno (BaP) es un HAP de cinco anillos que puede ser degradado por la microalga
verde Selanastrum capricornutum estirpe UTEX 1648, por la acciÛn de dioxigenasas y con la formaciÛn de
esteres sulfato de BaP y conjugados de glucosa. Mientras que Mycobacterium sp. estirpe RJGII y Sphingomonas
yanoikuyae estirpe B1 pueden degradar parcialmente BaP. De manera que la combinaciÛn de estos tres
microorganismos (distintas combinaciones microalga-bacteria) es m·s ˙til para la degradaciÛn de BaP que las
estirpes individuales.
En el caso del petrÛleo, la combinaciÛn de microalgas/cianobacterias y bacterias serÌa tambiÈn adecuada. Las
estirpes de microalgas (Stichococcus sp, Chlorella sp y Scenedemus quadricauda) y cianobacteria (Nostoc sp. y
Phormidium sp) son capaces de crecer sin ning˙n efecto tÛxico en un medio con 1% de aceite y bacterias
protectoras (alcanotrÛficas). AquÌ serÌa importante diluir si hay un vertido de una gran mancha de petrÛleo
porque las microalgas y cianobacterias no podrÌan subsistir, ya que necesitan que pase la luz.
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B. POTENCIAL UTILIZACI”N DE LAS MICROALGAS EN EL TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES

Las aguas residuales domÈsticas provenientes de la actividad humana tienen todas normalmente un
tratamiento similar. Sin embargo, las aguas residuales que procedan de diferente tipo de f·brica tienen un
tratamiento especÌfico dependiendo del contaminante que sea, por ello no hay un tratamiento est·ndar. En
muchos casos, para utilizar las microalgas o los consorcios es necesario diluirlas para que no sean tÛxicas para
el propio microorganismo que se estÈ empleando para la detoxificaciÛn.

Algunos ejemplos de cianobacterias que se han empleado para la eliminaciÛn de diferentes contaminantes de
aguas residuales:
− Oscillatoria sp BDU 30501, Aphanocapsa sp BDU 16 y la bacteria halÛfita Halobacterium US 101 han sido
utilizadas para tratar las aguas residuales de una f·brica y consiguieron disminuir los niveles de calcio y
cloro que impedÌan la supervivencia y multiplicaciÛn de los peces.
− Phormidium valderanum BDU 30501 (cianobacteria marina) fue empleada en la reducciÛn de
concentraciones de fenol.
− Oscillatoria boyana BDU 92181 se empleÛ para eliminar pigmentos melanoidinos (pigmentos pardos) de
aguas residuales de una destilerÌa.

Las algas verdes Chlorella y Scenedesmus sp han sido utilizadas en el tratamiento de aguas residuales
(tratamientos secundarios biolÛgicos). Uno de los inconvenientes que nos podemos encontrar sobre todo a
nivel de coste para el cultivo de microalgas es la recogida de su biomasa ates del vertido de las aguas ya
tratadas, ya que su uso va a depender del tipo de agua tratada. En cuanto a las ventajas del uso de algas serÌan
la biorremediaciÛn de las aguas contaminadas y el ahorro del coste de la soluciÛn nutritiva para el cultivo de
microalgas (potencial uso en producciÛn de biodiÈsel-lÌpidos).

Para tener Èxito en la recogida lo ideal es inducir la floculaciÛn. Si no flocula de manera natural, se puede hacer
un consorcio entre microalgas/cianobacterias y bacterias productoras de biofloculantes de manera que la
biomasa alga-bacteria biofloculante puede ayudar a separar la biomasa de algas por sedimentaciÛn. Otras
alternativas a los problemas de recogida son cultivar distintos tipos de microalgas conjuntamente que tengan
capacidad de floculaciÛn o inmovilizar las microalgas en diferentes tipos soportes por distintas tÈcnicas.

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a) ALTERNATIVA 1: CULTIVO DE CONSORCIO FORMADO ENTRE MICROALGAS Y BACTERIAS BIOFLOCULANTES

1. Ejemplo 1: se utiliza Chlorella vulgaris con una bacteria que produce biofloculantes que favorecen la
floculaciÛn. Consiste en tratar las aguas residuales para conseguir la biorremediaciÛn y el aumento del
contenido lipÌdico de la microalga.
El mÈtodo de floculaciÛn ahorra energÌa y costes en el proceso de producciÛn frente a otros procesos de
recogida. Por ejemplo, los floculantes quÌmicos tradicionales (sales) hacen que los lÌpidos producidos
tengan un alto contenido de iones met·licos, por lo que no son muy adecuados para obtener el agua
tratada. TambiÈn se podrÌa inducir autofloculaciÛn por cambios en la temperatura, en la irradiancia que
afecta a la producciÛn de EPS o en el pH (superior a 9).
Adem·s de las bacterias, hay hongos tambiÈn capaces de inducir la biofloculaciÛn de las microalgas.
El cultivo axÈnico (=puro) de microalgas puede no ser suficiente para descontaminar el agua, por lo que
con frecuencia el efluente del agua tratada no es de buena calidad. Esto se puede mejorar co-cultiv·ndolas
con bacterias, ya que las bacterias pueden degradar contaminantes que pudieran ser tÛxico para el cultivo
de las microalgas. Las desventajas de ese uso combinado son:
− Las bacterias compiten con las microalgas por los nutrientes y puede afectar a la densidad del cultivo
y a su contenido de lÌpidos.
− Algunas microalgas pueden ser incompatibles para establecer asociaciones con bacterias.
− La biofloculaciÛn de microalgas con bacterias requiere de una fuente de energÌa adicional
(normalmente glucosa) para el crecimiento bacteriano. Esto favorece la contaminaciÛn bacteriana
indeseable y encarece el proceso.

Los aspectos a tener en cuenta para mejorar los resultados de los consorcios de microalgas y bacterias
son: ajustar los ratios de inoculaciÛn de microalgas y bacterias, controlar el contenido de glucosa y
establecer tiempos precisos de co-cultivo.

2. Ejemplo 2: las aguas residuales de las piscifactorÌas son muy ricas en nutrientes N y P) y generan problemas
de eutrofizaciÛn. En este ejemplo, se utilizan co-cultivos con bacterias para aumentar la biofloculaciÛn de
las microalgas y evitar la eutrofizaciÛn.
El uso de bacterias generadoras de biofloculantes genera unos flÛculos de microalgas que sedimentan
r·pidamente debido a su gran tamaÒo pudiÈndose retirar eficientemente con un filtro de tamaÒo de poro
de 200 µm.
Se ha propuesto que la carga de grupos funcionales presentes en los bioflocculantes podrÌan mediar su
agregaciÛn a las cÈlulas de microalgas por interacciÛn de cargas.

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Este es un reactor MaB-Flocs (Microalgal Bacterial Flocs) que se diseÒÛ para hacer biorremediaciÛn de los
gases de combustiÛn y de las aguas residuales. Consiste en tres ciclos diarios, siendo cada uno de ellos 8
horas: se dejan reaccionar las microalgas/bacterias con el agua residual (6h 30 min), se deja sedimentar
(30 min), se retira el efluente (30 min) y de nuevo se vuelve a rellenar (30 min).
Adem·s de biorremediar los gases y las aguas, esos flÛculos que se han formado sirven de alimento para
las piscifactorÌas aumentando el rendimiento del proceso. Por ejemplo, las aguas residuales y los fÛculos
del cultivo de la lucioperca se pueden utilizar para alimentar al camarÛn Liopenaeus vannamel. Los fÛculos
no son adecuados para alimentar a la lucioperca, ya que al ser un pez se alimenta de zooplancton, sin
embargo, los camarones (incluido los flÛculos MaB al 8%) son omnÌvoros, se alimentan tanto de
fitoplancton como zooplancton.
La dieta de camarones incluye un 8% de MaB-flÛculos lo que supone que por cada gramo de alimento hay
0’14 mg de carotenoides (astaxantina entre otros) procedente de MaB-flÛculos. Esto contribuye a un
aumento en la pigmentaciÛn de los camarones mejorando su color.
b) ALTERNATIVA 2: CO-CULTIVO (CO-BIOFLOCULACI”N)

Es el uso combinado de diferentes microalgas, una de ellas con capacidad de flocular y que arrastran a las que
tienen baja capacidad de floculaciÛn, que ser·n las que tengan interÈs para la biorremediaciÛn.
La auto-floculaciÛn se refiere a la agregaciÛn celular y la adhesiÛn de las cÈlulas entre sÌ en cultivo lÌquido
debido a las propiedades especiales de la superficie celular. Algunas especies con capacidad de flocular:
Scenedesmus obliquus, Ankistrodesmus falcatus, Tetraselmis suecica y Ettlia texensis.
Al tener que hacer un co-cultivo puede haber costes adicionales porque las caracterÌsticas nutricionales ser·n
diferentes. En cuanto a ventajas, a veces el co-cultivar diferentes microalgas conjuntamente puede que
desencadene la agregaciÛn como mecanismo de defensa, haciendo m·s f·cil la recogida de la biomasa.

Se han llevado a cabo estudios de floculaciÛn en Ettlia texensis cultivada conjuntamente con Chlorella vulgaris.
Estos estudios muestran que las sustancias polimÈricas extracelulares secretadas y las que permanecen unidos
a la superficie celular tienen un papel importante tanto en la autofloculaciÛn como en la biofloculaciÛn. Las
sustancias polimÈricas extracelulares de E. texensis contienen un alto contenido proteico (polÌmeros de
glicoproteÌnas).

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En general se ha propuesto que la auto-floculaciÛn en las cÈlulas de microalgas puede tener lugar cuando los
agentes floculantes (por ejemplo, polisac·ridos y glicoproteÌna) producidos por las mismas microalgas act˙an
como pegamento o formando puentes entre las cÈlulas a travÈs de la neutralizaciÛn de las cargas.
c) ALTERNATIVA 3: USO DE LAS MICROALGAS INMOVILIZADAS
La inmovilizaciÛn de microalgas en un soporte hace que sea f·cil de remover, eliminar y cambiar. Se emplean
bastante en la eliminaciÛn de nutrientes, concretamente nitrÛgeno y fÛsforo.
La inmovilizaciÛn de algas que m·s se usa es geles de alginato y carragenanos, ya que tienen la misma eficiencia
para la eliminaciÛn de nitrÛgeno y fÛsforo de aguas residuales que las cÈlulas libres en suspensiÛn
(tratamientos secundarios biomasa fija).
En la Universidad de Utah se llevÛ a cabo un proyecto en el cual a travÈs de biofilms se retenÌan las microalgas
para que hicieran el tratamiento de aguas residuales con el objetivo de ver la eliminaciÛn de nitrÛgeno y
fÛsforo.
▪ TRATAMIENTO CON MICROALGAS DEL AGUA DE LAVADO DE LAS ACEITUNAS
El proyecto ALGATEC de la Universidad de Huelva trabaja en una soluciÛn para depurar los residuos lÌquidos
contaminantes de aguas de lavado de las aceitunas con microalgas.
Este proyecto se basa en la acciÛn de las microalgas sobre la materia org·nica que contamina las aguas de
lavado de las aceitunas. Hay un paso de tratamiento de las aguas sucias en un fotobiorreactor y un posterior
filtrado (para su posterior uso como agua potable).
En la obtenciÛn de aceitunas de mesa se genera una gran cantidad de aguas de lavado: lejÌas de cocido, aguas
de lavado tras el cocido, salmueras de fermentaciÛn de aceitunas verdes, aguas del proceso de oxidaciÛn de
aceitunas negras en medio alcalino y aguas de otros procesos (de lavado del fruto, del fruto semielaborado
(deshueso, relleno o rodajado), derrames de salmueras de envasado, salmueras de conservaciÛn y de
estabilizaciÛn de negras, de limpiezas, etc.).
Los problemas que se generan en el lavado para la obtenciÛn de aceitunas de mesa son:
− Se emplean grandes vol˙menes de agua.
− Las aguas de lavado presentan un alto contenido en materia org·nica poco biodegradable.
− Presentan un elevado porcentaje de grasas y sÛlidos en suspensiÛn.
− Pueden tener pH ·cido o alcalino.
− Aguas con color por la presencia de unos compuestos que tienen las aceitunas (polifenoles).
En el mercado existe un tratamiento biolÛgico del alpechÌn basado en bacterias del grupo EIDE en colaboraciÛn
con los laboratorios SPECHIM. El alpechÌn es un lÌquido contaminante, resulta de la mezcla del agua caliente
de lavado empleada en la obtenciÛn del aceite, y el agua de la propia aceituna. Al alpechÌn se le hace un
tratamiento enzim·tico y luego un tratamiento con bacterias, que se dejar· en diferentes decantadores con
diferentes gases de incubaciÛn hasta que alcanza un producto que ya deja de ser tÛxico o prejudicial.
▪ BIORREMEDIACI”N DE BISFENOL-A
El bisfenol-A es un aditivo o un componente que se utiliza en una gran variedad de productos en insecticidas,
fabricaciÛn de pl·sticos, ingredientes de fragancias, productos quÌmicos agrÌcolas, productos farmacÈuticos, y
que es liberado como contaminante y compuesto tÛxico en los rÌos y mares. Adem·s, el bisfenol-A tiene
actividad estrogÈnica que afecta a la reproducciÛn.
La microalga marina Amphidinium crassum es capaz de glicosilar al bisfenol-A para obtener un glucÛsido de
Èste que, en principio, no tiene la toxicidad del bisfenol-A. De todas formas, los estudios de las actividades
fisiolÛgicas de glicÛsidos de bisfenol-A est·n ahora en progreso.

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▪ TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES CON CONSORCIOS

Los consorcios entre microalgas/cianobacterias con bacterias se pueden emplear en la eliminaciÛn de
nutrientes de aguas residuales, siendo el mÈtodo de los lodos activos uno de los primeros usos de la
biotecnologÌa en biorremediaciÛn. Por ejemplo, la asociaciÛn de microalgas Chlorella vulgaris Hamburg y lodos
activos de bacterias a altas concentraciones (activated sludge bacteria/masa activada de microorganismos
capaces de la estabilizaciÛn aerÛbica del contenido org·nico de un residuo) mejoraron el funcionamiento de
los estanques de estabilizaciÛn de residuos.

Las aguas residuales van a suministrar nitrÛgeno, fÛsforo, azufre, etc. para el crecimiento de microalgas y
cianobacterias. De esta forma, se eliminan de las aguas residuales y evitan la eutrofizaciÛn en las zonas de
vertido.
AquÌ tenemos un esquema general de lo que serÌa
la comunidad de crecimiento conjunto de
microalgas y bacterias. Las bacterias pueden
solubilizar fosfatos inorg·nicos del suelo, producir
amoniaco y CO2 como consecuencia de su
respiraciÛn. Todo esto puede ser utilizado por la
microalga para fijar junto con el CO2 atmosfÈrico
el CO2 del medio acu·tico para producir formas
org·nico y oxÌgeno que suministrar· a las
bacterias. A partir de aquÌ se puede generar
biomasa que se puede utilizar y el agua sin
contaminantes.

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AquÌ tenemos un esquema similar al anterior de las asociaciones o sistemas mixtos de algas y bacterias para
la producciÛn de metano. Tenemos los procesos aerÛbicos y anaerÛbicos que pueden estar asociaciados a la
formaciÛn de metano.

La biomasa de algas muertas se puede utilizar por las bacterias anaerÛbicas para la producciÛn de metano. De
esta forma, los residuos se pueden usar como fertilizante o biosorbente para la eliminaciÛn de metales
pesados.
Las aplicaciones de las microalgas en el tratamiento de aguas residuales son:
− BOD (demanda bioquÌmica de oxÌgeno): es la cantidad de oxÌgeno que necesitarÌan los microorganismos
aerobios que est·n creciendo. Las microalgas pueden suministrar oxÌgeno necesario para las actividades
aerÛbicas de las bacterias.
− EliminaciÛn de los nutrientes de las aguas residuales.
− EliminaciÛn de metales pesados por mecanismos de absorciÛn o adsorciÛn. TambiÈn asociada a la
variaciÛn del pH que puede producir la actividad fotosintÈtica dando lugar a la precipitaciÛn de algunos
metales.
− EliminaciÛn de patÛgenos.
− EliminaciÛn de determinados contaminantes.
− ProducciÛn de biog·s. La biomasa de algas muertas se puede utilizar por bacterias aerÛbicas para dar lugar
a la formaciÛn de metano.
− Son muy sensibles a la presencia de contaminantes por lo que se pueden utilizar para el diseÒo de
biosensores o en ensayos de ecotoxicidad.
Las etapas de la depuraciÛn de aguas residuales son:
1. Pre-tratamiento: se eliminan de las aguas residuales todos aquellos elementos de diferente tamaÒo que,
por su acciÛn mec·nica, pueden afectar al funcionamiento del sistema depurador, asÌ como las arenas y
elementos minerales que pueden originar sedimentaciones y/o abrasiones a lo largo de las conducciones
o elementos mec·nicos de la instalaciÛn.
2. Tratamiento primario: tiene como objetivo la eliminaciÛn, por medios fÌsicos, de los sÛlidos en suspensiÛn
no eliminados en el pre-tratamiento. El proceso se realiza en unos tanques, llamados decantadores
primarios, rectangulares o circulares, que disponen de mecanismos de arrastre y extracciÛn de los fangos
depositados en el fondo y rasquetas superficiales para recuperar las materias flotantes y espumas.

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3. Tratamiento secundario: una vez eliminados de un 40 a un 60% de los sÛlidos en suspensiÛn, el

tratamiento secundario reduce la cantidad de materia org·nica no biodegradable que no se ha conseguido
eliminar en el tratamiento anterior. Esto se logra mediante el desarrollo de microorganismos capaces de
asimilar dicha materia org·nica. El tratamiento secundario puede llevarse a cabo por distintos
procedimientos:
− BiolÛgico: la materia org·nica causante de la contaminaciÛn se emplea como sustrato alimenticio para
el metabolismo de microorganismos, que reducen asÌ la carga contaminante, adem·s de separar por
decantaciÛn la masa biolÛgica del agua tratada. La aportaciÛn de oxÌgeno se realiza por aireaciÛn
forzada. Los microorganismos se mantienen en suspensiÛn mediante diversas formas de agitaciÛn,
generando una masa homogÈnea (fangos activados, estanques de estabilizaciÛn, canales de oxidaciÛn,
aireaciÛn prolongada).
− Tratamiento secundario (Biomasa fija): los microorganismos se adhieren a unos soportes, generando
una pelÌcula biolÛgica que consume la materia org·nica y se desprende en forma de flÛculos
decantables (biodiscos, biotambores lechos bacterianos). Cualquiera que sea el proceso utilizado, la
mezcla de agua residual y fangos, conocida como "licor mezcla", se conduce a unos decantadores para
la separaciÛn, por sedimentaciÛn floculenta, del fango y del agua depurada. Una parte del fango se
vuelve a introducir en el proceso biolÛgico, constituyendo la llamada recirculaciÛn de fangos,
evacu·ndose el resto al sistema de tratamiento de fangos.
4. Tratamiento terciario: el efluente de un
tratamiento secundario puede estar todavÌa
insuficientemente depurado para determinados usos,
siendo precisa una serie de procesos que se agrupan
bajo el nombre de tratamiento terciario. Este se lleva
a cabo para eliminar fundamentalmente la materia
org·nica que no ha sido retenida en el tratamiento
biolÛgico, o bien que no es biodegradable, y las sales
inorg·nicas disueltas, entre las que destacan el N y el
P, m·ximos responsables de la eutrofizaciÛn de los
depÛsitos de agua.
5. Tratamiento de fangos: en un tratamiento
biolÛgico de aguas residuales, se obtienen
considerables vol˙menes de fangos que requieren un
tratamiento especÌfico, estando compuesto,
generalmente, por los siguientes procesos:
espesamiento previo (se hacen m·s densos),
digestiÛn (para degradar la materia org·nica presente
en los fangos y puede llevarse a cabo por vÌa aerobia
o anaerobia), secado (para reducir su volumen y
facilitar su manejo), eliminaciÛn (existen varias
posibilidades de eliminaciÛn de fangos: descarga en
vertedero, incineraciÛn, aplicaciÛn en la agricultura u
otros usos).

3. UTILIZACI”N DE ALGAS EN ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD

Los sistemas acu·ticos son susceptibles de ser alcanzados por una gran cantidad de tÛxicos antropogÈnicos.
En el estudio de ecotoxicidad es importante elegir una microalga que tenga unas buenas caracterÌsticas:
tamaÒo y morfologÌa adecuada, crecimiento r·pido y una respuesta constante a los contaminantes.

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La ecotoxicologÌa determina los efectos tÛxicos producidos por agentes fÌsicos o quÌmicos sobre la totalidad
del ecosistema. Se han hecho estudios de ecotoxicidad con el alga marina Dunaliella tertiolecta:

4. LAS MICROALGAS COMO BIOINDICADORES

Las microalgas pueden ser utilizadas como biosensores para determinar la presencia de contaminantes tales
como pesticidas (herbicidas, fungicidas e insecticidas), metales pesados y compuestos org·nicos vol·tiles con
buena sensibilidad, en el rango de partes por billÛn. Son biosensores muy sensibles y m·s reproducibles que
los basados en an·lisis quÌmicos o fÌsicos y pueden hacer medidas frecuentes. Sin embargo, suelen tener baja
selectividad, entonces pueden dar una seÒal global de presencia de contaminantes que corresponda a un
rango de sustancias.
Cuando se construye un biosensor se consideran dos partes:
− Bioreceptor: elemento biolÛgicamente sensible que serÌan las microalgas.
− Transductor: detecta los cambios en forma de seÒales bioquÌmicas y las transforma en seÒales medibles
elÈctricas y Ûpticas.

Las microalgas act˙an como sensores al afectar los contaminantes su actividad metabÛlica. La forma en la que
se afecta se registra a travÈs de cambios en seÒales elÈctricas u Ûpticas.
El paso limitante en la construcciÛn del biosensor es la inmovilizaciÛn de las microalgas que pueden ser
soportes org·nicos (como polivinilalcohol, PVA), biopolÌmeros (alginato de calcio) o materiales porosos de
silica. Lo importante ala hora de elegir el soporte es que no afecte a la estabilidad de las cÈlulas y evite pÈrdidas
(que no se desprendan) para que la seÒal se mantenga constante.

Las matrices de alginato de calcio en un principio podrÌan ser las m·s adecuadas porque son biocompatibles,
pero se ha visto que se degradan con el tiempo, con lo cual no tienen gran estabilidad. Parece que los
materiales porosos de sÌlice pueden ser los m·s estables.

Analizaremos ejemplos de biosensores realizados con especies de tres familias de microalgas (microalgas
eucariotas verdes y diatomeas) y las cianobacterias procariotas.

A. MICROALGAS EUCARIOTAS VERDES/CLOROFITAS

Chlorella vulgaris es una buna candidata para hacer biosensores debido a su elevada estabilidad en producir
seÒales biolÛgicas.

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a) DETECCI”N DE HERBICIDAS

Se mide cÛmo afectan los herbicidas a la actividad fotosintÈtica a travÈs de medidas de la fluorescencia emitida
por la clorofila (Ûpticas) o mediante mÈtodos electroquÌmicos (amperiomÈtricos). El lÌmite de detecciÛn
depende de la concentraciÛn total en agua de una clase de herbicidas, la cual tiene que ser inferior a 1—0’5
µg/L.
− Sensores Ûpticos (medidas de cambios de fluorescencia del sistema fotosintÈtico): la actividad
fotosintÈtica de las cÈlulas vivas se modifica por la presencia de determinados herbicidas. Estos sensores
est·n basados en variaciones en la fluorescencia de la clorofila contenida en los cloroplastos debido a la
presencia de sustancias tÛxicas. Los herbicidas diana del PSII pertenecen a diversas clases quÌmicas:
triazinas, triazonas, ureas, biscarbamatos, dintrofenoles y cianofenoles.
− Sensores amperiomÈtricos: los cambios en la actividad fotosintÈtica tambiÈn pueden analizarse mediante
mÈtodos amperiomÈtricos en vez de medir fluorescencia. Con el electrodo de Clark se mide la emisiÛn de
oxÌgeno fotosintÈtica, de manera que cuanto m·s oxÌgeno se genera m·s corriente pasa entre un ·nodo
de plata (oxidaciÛn) y un c·todo de platino (reducciÛn). Si hay presencia de contaminantes, afecta a la
emisiÛn de oxÌgeno y a la producciÛn de corriente asociada a esa emisiÛn.
b) DETECCI”N DE METALES PESADOS E INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS

Las microalgas tienen una alta afinidad por los iones met·licos de manera que son capaces de acumular
grandes cantidades de metales (los metales se unen a la superficie de las algas vivas o muertas). En este caso
los biosensores se construyen y se diseÒan en base a como afecta una actividad enzim·tica, que es la de la
fosfatasa alcalina, por lo que es necesario que las algas estÈn vivas.

Se mide la inhibiciÛn de la actividad fosfatasa alcalina a travÈs de cambio en la emisiÛn de la fluorescencia

(Ûpticos) o electroquÌmicos—conductimÈtricos. La actividad fosfatasa alcalina (APA) del alga Chlorella vulgaris
se inhibe en presencia de metales pesados, se puede construir un biosensor que determine metales pesados
por la inhibiciÛn de APA presente en una membrana externa que contenga Chlorella vulgaris.

− Los biosensores Ûpticos utilizan microalgas libres sin soporte. Se aÒade el sustrato de la reacciÛn que es el
metil umbelliferoil y se obtiene como producto el MUF (metilumbelliferona) que es fluorescente. Si en el
medio hay alg˙n contaminante esta fluorescencia se va a ver afectada. La actividad AP se mide por emisiÛn
de fluorescencia (fluorÛmetro) a 460 nm bajo una luz de excitaciÛn de 350 nm.
Se hacen una serie de controles. Hacen un ensayo utilizando la presencia o no de un unidor de metales
para poder hacer el blanco y ver el background de fluorescencia que puede haber.
− Biosensor conductimÈtrico basado en la actividad APA. Sobre un electrodo de platino se colocan una serie
de monocapas de alcanotiolato y sobre ellas se inmovilizan las microalgas. Se miden los cambios de
conductividad en diferentes condiciones en las que se quiera determinar la presencia de contaminante
(en este caso, de metales pesados).

La actividad enzim·tica va
disminuyendo de manera
proporcional a medida que
aumenta la concentraciÛn del
metal.

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− Biosensores de gases: es otro tipo de sensores amperiomÈtricos que determinan compuestos org·nicos
vol·tiles (VOC). La mayor parte de los biosensores basados en enzimas o microorganismos son efectivos
˙nicamente en soluciones acuosas. Se han desarrollado biosensores que determinan VOC en forma de
aerosoles basados en el alga Chlorella vulgaris inmovilizada en una membrana de un electrodo de oxÌgeno
de Clark.

B. DIATOMEAS
a) SENSORES ”PTICOS

Tienen la caracterÌstica de poseer una pared de sÌlice que forma las fr˙stulas. Esta fr˙stula tiene una
nanoestructura porosa, cuya dimensiÛn de los poros (nanÛmetros) hace que las sustancias vol·tiles (solventes,
hidrocarbonos…), e incluso gases puros, puedan penetrar y condensarse en su interior.

El sÌlice es conocido por sus propiedades fotoluminiscentes en el rango visible, de forma que la presencia de
contaminantes gaseosos afecta a esta luminiscencia. Midiendo los cambios de fotoluminiscencia podrÌamos
determinar la presencia de contaminantes.

b) SENSORES ELECTROQUÕMICOS-AMPERIOM…TRICOS

Sobre un electrodo de oro se ve el aumento de los nanoporos de la fr˙stula. Esta estructura permite
determinar marcadores inflamatorios a valores de pµ/mL.

TambiÈn se pueden inmovilizar anticuerpos que estÈn unidos a estreptavidina para usarlos en reconocimiento
de antÌgenos. Esta estructura de poros permite la detecciÛn de marcadores vasculares. Los sensores se cubren
de fr˙stulas de diatomeas y suministran gran densidad de nanopocillos.

C. CIANOBACTERIAS
Las cianobacterias fueron de entre los primeros organismos empleados para desarrollar biosensores que
monitorizaran el ambiente (primero como sensores amperiomÈtricos, pero se vieron que no eran demasiado
estables).

a) SENSORES ”PTICOS: HERBICIDAS

Se detectaron la presencia de herbicidas mediante el efecto de inhibiciÛn de la actividad fotosintÈtica. Las

cÈlulas microbianas pueden ser genÈticamente modificadas por la introducciÛn de un gen reportero que

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conecta la inicial interacciÛn biolÛgica del quÌmico analizado a una seÒal f·cilmente medible. Los reporteros
m·s utilizados son el gen de la β-galactosidasa, la GFP y la luciferasa.

Con estos genes reporteros se obtienen unos biosensores que van a ser bioluminiscentes. La cantidad de
bioluminiscencia nos va a dar una idea del buen estado de la cÈlula. Cuanta m·s luminiscencia mejor estado,
entonces la presencia de contaminantes disminuye la luminiscencia.

Los herbicidas analizados reducen especÌficamente el estado de energÌa de las cÈlulas bloquedano el flujo de
electrones en el PSII e inhibiendo la fotosÌntesis, por lo que la reacciÛn se ve afectada y la respuesta que den
los genes reporteros ser· menor. La presencia de estos biosensores luminiscentes es que son m·s simples,
r·pidos, exactos y econÛmicos que otros mÈtodos, siempre y cuando ya tengamos la cianobacteria modificada
que exprese los genes reporteros (se requiere el conocimiento de herramientas genÈticas).

b) SENSORES ”PTICOS: METALES PESADOS

Algunos organismos con genes reporteros luminiscentes fusionados con promotores inducibles por iones
met·licos pueden ser usados como biosensores para la determinaciÛn de metales pesados. Por ejemplo, hay
biosensores de mercurio que se fusionaron los genes lux de la bacteria Vibrio fischeri a un operÛn de genes de
con resistencia a Hg del trasposon 21 (Tn21 mer), de manera que pueden detectar la presencia de mercurio
en aguas contaminadas en el rango de nM y µM.
Los diferentes biosensores de microalgas que se pueden construir son los siguientes:

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES 16

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

TEMA 7. POTENCIALES APLICACIONES DE LAS MICROALGAS EN ASPECTOS MEDIOAMBIENTALES 17

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

TEMA 8. PRODUCCI”N DE METABOLITOS

BIOL”GICAMENTE ACTIVOS
1. TOXINAS DE CIANOBACTERIAS (CIANOTOXINAS) Y OTRAS MICROALGAS
(DINOFLAGELADOS, DIATOMEAS)
Al igual que las plantas superiores, la composiciÛn quÌmica de las algas no es un factor intrÌnseco constante
(influencia de factores ambientales).

El crecimiento excesivo (bloom-floraciones) de determinadas cianobacterias pueden ocasionar la presencia en

el agua de toxinas en alta concentraciÛn. Este/as crecimiento/floraciones masivo/as de cianobacterias en las
aguas producen otros efectos secundarios:
− Puede consumir una gran cantidad de oxÌgeno dando lugar a condiciones de anoxia.
− SÌntesis de compuestos vol·tiles que dan un sabor y olor desagradable a las aguas (geosmina, 2-
Metilisoborneol (2-MIB)).

Con lo cual la floraciÛn da lugar a una inhabilitaciÛn del agua tanto como por la producciÛn de toxinas en sÌ
como por otros factores que derivan del proceso.

Estas cianotoxinas pueden ser un mecanismo de defensa frente a depredadores igual que las plantas tienen
los taninos y fenoles. Las toxinas aparecen en las aguas cuando los blooms mueren, se lisan las cÈlulas y
entonces se quedan en el agua. Determinados compuestos quÌmicos pueden hacer que las cÈlulas se lisen m·s
f·cilmente y que se viertan las toxinas en m·s cantidad a las algas. Algunos compuestos capaces de hacer esto
son antif˙ngicos como el sulfato de cobre.

Se considera que cuando hay un bloom o proliferaciÛn entre el 50-65% de las proliferaciones van a ser tÛxicas
y van a producir cianotoxinas. Dentro de los 150 gÈneros de cianobacterias hay unas 2.000 especies y de estas
al menos 80 son productoras de toxinas. Adem·s, una misma especie puede tener cepas productoras y no
productoras.

Los principales gÈneros de cianobacterias productores de cianotoxinas son: Anabaena, Aphanizomenon,

Cylindrospermopsis, Lyngbya, Microcystis, Nostoc, Nodularia y Oscillatoria.
Las cianotoxinas se clasifican en tres grupos en funciÛn de su estructura quÌmica:
1. Los pÈptidos cÌclicos: son las hepatotoxinas que afectan al hÌgado y hay dos tipos que son las
microcistinas y nodularinas, que son las que m·s frecuentemente se encuentran en los blooms.
2. Los alcaloides: tenemos ejemplos que afectan de forma diversa. Encontramos hepatotoxinas
cilindroespermopsinas, las neurotoxinas anatoxina-a, anatoxina-a(S) (S significa factor de salivaciÛn) y
saxitoxinas (STX). Adem·s, dentro de este grupo de alcaloides est·n las cianotoxinas marinas
aplysiatoxina (policÈtidos), debromoaplisiatoxina y lyngbyatoxinas que causan irritaciones en la piel y
gastrointestinales.
3. Los lipopolisac·ridos cianobacterianos (LPs): se puede considerar un subgrupo de los alcaloides. Son
potencialmente irritantes y son de todos los que menor toxicidad ofrecen.

Las cianobacterias son responsables de gran parte de las intoxicaciones relacionadas con ficotoxinas (toxinas
de origen vegetal). El inconveniente de las cianotoxinas es que no se eliminan por los procesos convencionales
de potabilizaciÛn del agua, sino que tienen que haber unas etapas adicionales para eliminarlas.

TEMA 8. PRODUCCI”N DE METABOLITOS BIOL”GICAMENTE ACTIVOS 1

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Otra clasificaciÛn de las cianotoxinas es en funciÛn de sus efectos. TambiÈn se calcifican en tres grupos:
1. Dermatoxinas (alcaloides): destacan lyngbyatoxina A y aplysiatoxina producidas por cianobacterias
marinas como Lyngbya y Oscillatoria; Debromoaplysiatoxinas (Lyngbya).
1.2. Dermatoxinas-Endotoxinas: son lipopolisac·ridos cianobacterianos (LPs). Son toxinas responsables de
una gran variedad de efectos en humanos desde irritaciones en la piel, y reacciones alÈrgicas a irritaciones
gastrointestinales. Los principales gÈneros productores son Microcystis, Anabaena y Oscillatoria.
2. Neurotoxinas: ejercen su efecto sobre el sistema neuromuscular y entre ellas se encuentran
Anatoxina-a y anatoxina-a(s) (alcaloides) producidas por Anabaena, Microcystis y Oscillatoria.
TambiÈn destaca la saxitoxina (alcaloide) que es producida por dinofagelados marinos, pero se ha visto
que tambiÈn la producen cianobacterias como Aphanizomenon flosaquae, Anabaena circinalis y
Planktothrix.
3. Hepatotoxinas: hay tres familias principales de cianotoxinas que afectan al hÌgado:
a) Microcistina (pÈptido cÌclico): es la que m·s est· implicada en envenenamiento de animales y
humanos y es producida por varios gÈneros de cianobacterias como Microcystis, Anabaena,
Planktothrix y Oscillatoria.
b) Nodularina (pÈptido cÌclico): producida por la especie Nodularia spumigena especialmente en
aguas saladas.
c) Cilindrospermopsina (alcaloide): es producida por Cylindrospermopsis raciborskii y
Aphanizomenon ovalisporum entre otras.

A. P…PTIDOS CÕCLICOS
Son las microcistinas (MCs) y las nodularinas, siendo ambos muy parecidos en cuanto a estructura quÌmica y
mecanismo de acciÛn del efecto tÛxico. Ambas est·n presentes en aguas dulces.

a) MICROCISTINAS (MCs)/HEPATOTOXINAS

Los principales gÈneros de cianobacterias productores de MCs son Microcystis, Anabaena, Nostoc y
Aphanizomenon. Microcystis es el gÈnero m·s importante y presentan en su interior vacuolas de gas que les
otorga una alta flotabilidad y tasa fotosintÈtica.

Su estructura quÌmica es ciclo-(D-alanina-X-D-MeAsp-Z- Adda-D-glutamato-Mdha) y est· formada por siete

amino·cidos.

Los dos amino·cidos terminales del pÈptido lineal se condensan para formar el compuesto cÌclico, que
contienen un amino·cido especÌfico Adda (3-amino-9-metoxi-10- fenil-2,6,8-trimetil-deca-4,6-·cido dienoico)
de 20 carbonos. Este Adda va a ser el responsable de la toxicidad de las microcistinas.
− X y Z son L-amino·cidos variables. Sin embargo, X sobre todo es leucina, arginina o tirosina, aunque
tambiÈn es posible homotirosina, alanina, fenilalanina, homofenilalanina, metionina-S-oxido o
triptÛfano. Z suele ser arginina o alanina, pero tambiÈn puede ser ·cido amino-isobutÌrico,
homoarginina o metionina-S-oxido.
− D-MeAsp es D-eritro-β-metilasp·rtico (otra variaciÛn estructural: en casos aparece desmetilado).
− Mdha es N-metildehidroalanina (otra variaciÛn estructural: en casos aparece desmetilado). En algunas
microcisteinas Mdha es reemplazado por L-serina y D-Ala por D-serina.

TEMA 8. PRODUCCI”N DE METABOLITOS BIOL”GICAMENTE ACTIVOS 2

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La estructura general de una microcistina es la siguiente:

Concretamente, corresponde a la microcistina LR ciclada que es la m·s estudiada y la que se encuentra con
mayor frecuencia en la naturaleza. Los nombres de las microcistinas vienen dados por cuales son los
amino·cidos que se encuentran en las posiciones variables X y Z. En este caso de la microcistina LR, en la
posiciÛn X tendrÌamos una leucina y en la posiciÛn Z una arginina. Otros ejemplos de microcistinas se recogen
en la tabla siguiente:

▪ MECANISMO DE ACCI”N

Las microcistinas se concentran en el hÌgado, en lo que serÌan los hepatocitos. El efecto tÛxico se desencadena
porque inhibe las protein fosfatasas de tipo 1 y 2A, de forma que se unen covalentemente a estas protein
fosfatasas provocando una hiperfosforilaciÛn de las proteÌnas hep·ticas. Esto afecta al citoesqueleto
produciendo una deformaciÛn hep·tica con colapso de la arquitectura del hÌgado. Adem·s, el consumo
crÛnico de microcistina lleva a la degeneraciÛn hep·tica vÌa necrosis, fibrosis progresiva e incluso
tumorogÈnesis llegando a provocar la muerte. En microalgas tambiÈn act˙an inhibiendo la formaciÛn de ROS
que afecta al crecimiento o muerte celular.

Las proteÌn fosfatasas PP1 y PP2A de las cÈlulas eucariotas est·n implicadas en muchos procesos celulares:
divisiÛn celular, sÌntesis de proteÌnas, seÒalizaciÛn celular, la contracciÛn muscular, el transporte de calcio, etc.
▪ BIODEGRADACI”N EN EL AMBIENTE

Podemos encontrar hasta 100 variantes de microcistinas, entonces tienen diferentes grados de metilaciÛn, de
hidroxilaciÛn, diferente toxicidad, etc.

En cuanto a la biodegradaciÛn, al ser pÈptidos cÌclicos son bastante estables y resistentes a la hidrÛlisis y
oxidaciÛn a pH prÛximo a neutro. Las microcistinas pueden persistir incluso despuÈs de hervir los alimentos
contaminados.

Se puede favorecer su hidrÛlisis, aunque sea lenta, cuando las temperaturas son m·s altas, los medios son
m·s b·sicos, pero no en las condiciones ambientales que normalmente se encuentran. Se podrÌan oxidar por
oxidantes fuerte como es el ozono o por ultravioleta.

TEMA 8. PRODUCCI”N DE METABOLITOS BIOL”GICAMENTE ACTIVOS 3

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Bajo la luz solar, las microcistinas pueden tener roturas fotoquÌmicas lentas e isomerizaciones, que pueden
acelerarse en presencia de pigmentos celulares solubles en agua (ficobiliproteÌnas) o en presencia de
sustancias h˙micas que act˙an como fotosensibilizadores. Esto darÌa lugar a isÛmeros menos tÛxicos.
Asimismo, las microcistinas pueden ser rotas por bacterias acu·ticas. SÛlo se han identificado unas pocas
estirpes con capacidad de degradar MCs, entre ellas se encuentran estirpes de Sphingomonas (Pseudomonas).
Es un proceso eficiente de biodegradaciÛn, pero se necesitan dÌas/semanas de tratamiento. Se han hecho
estudios en los que esta lisis mediada por bacterias implica al menos 3 enzimas bacterianas, y una de ellas es
la microcistinasa, que rompe el enlace entre 2 de los 7 amino·cidos en el heptapÈptido cÌclico, en el que Adda
es al menos uno de los amino·cidos.
b) NODULARINAS (NODs)/HEPATOTOXINAS

La principal especie de cianobacterias productora de NODS es Nodularia spumigena, que al igual que
Microcystis presentan en su interior vacuolas de gas que les otorga una alta flotabilidad y tasa fotosintÈtica.

Su estructura quÌmica es ciclo-(D-MeAsp-L-Arg-Adda-D-glutamato-Mdhb) y est· formada por cinco

amino·cidos. D-MeAsp, Adda y D-glutamato son comunes con las microcistinas.

Los dos amino·cidos terminales del pÈptido lineal se condensan para formar el compuesto cÌclico, que
contienen un amino·cido especÌfico Adda de 20 carbonos.
− D-MeAsp es D-eritro-β-metilasp·rtico
− Mdhb es el ·cido 2-metilamino-2-dihidrobutÌrico
− L-Arg es L-arginina
El amino·cido Adda (3-amino-9-metoxi-10-fenil-2,6,8-trimetil-deca-4,6-·cido dienoico), es com˙n en todas
las microcistinas, y tambiÈn est· presente en las nodularinas. Se considera el principal responsable de la
toxicidad de estos pÈptidos.
La estructura general de una nodularina ciclada es la siguiente:

Hay variaciones naturales de nodularinas:

− Dos variaciones des/metiladas: con D-Asp en vez de D-MeAsp y con DMAdda en vez de Adda.
− Se ha descrito una forma no-tÛxica de nodularina que en vez de Adda contiene un isÛmero de Adda,
por lo que pierde la toxicidad.

Las nodularinas tienen propiedades quÌmicas similares a las microcistinas, ambas son molÈculas relativamente
polares, ya que el residuo Adda le confiere el car·cter hidrofÛbico de esas toxinas.
▪ MECANISMO DE ACCI”N

Es exactamente en mismo que en las microcistinas. Son inhibidores de las protein fosfatasas 1 y 2™ eucariÛticas
(PP1 y PP2A). La toxicidad y la patologÌa inducida en el hÌgado son similares a las causadas por las MCs,
pudiendo causar insuficiencia hep·tica con necrosis de hepatocitos.

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▪ BIODEGRADACI”N EN EL AMBIENTE

TambiÈn similar a lo explicado para las microcistinas, al ser pÈptidos cÌclicos van a ser estables a la degradaciÛn.
Las estirpes bacterianas descubiertas que se encuentran implicadas en la degradaciÛn de MCs y NDs
pertenecen a la familia de las Sphingomonadaceas.

Se ha probado la degradaciÛn de NDs por la estirpe Sphingomonas B9 y diversas estirpes de Paucibacter

toxinivorans (encontradas en los sedimentos de lagos de Finlandia).
Cuando hay degradaciÛn de MCs y NDs la estructura lineal es menos tÛxica respecto a la forma ciclada (hasta
100 veces menos).

Tanto las nodularinas como las microcistinas constituyen un problema a nivel mundial, ya que
est·n bastante presentes en aguas dulces (rÌos, lagos) al ser muy hidrosolubles. Sin embargo,
tambiÈn pueden encontrarse en aguas saladas soportando cierto nivel de salinidad.

B. ALCALOIDES
a) CILINDROESPERMOPSINA (CYN)/HEPATOTOXINA

En este caso la estructura quÌmica es bastante diferente ya que es un alcaloide tricÌclico que posee un residuo
de guanidina tricÌclico combinado con hidroximetiluracilo.

*La parte de la molÈcula seÒalada corresponde al hidroximetiluracilo.

Esta hepatotoxina es bastante hidrosoluble debido a que tiene una forma de ion dipolar que hace que tenga
una alta solubilidad, suponiendo un problema medioambiental.

En cuanto a su mecanismo de acciÛn, su acciÛn es bloquear la sÌntesis de proteÌnas, pero tambiÈn produce
modificaciones en el ADN y ARN. Los primeros sÌntomas clÌnicos son fallos en el hÌgado y riÒÛn. Si se ingiere
oralmente las CYN producen gastroenteritis, hepatitis, disfunciÛn renal y hemorragia.

Con respecto a su biodegradaciÛn, se degradan mejor que las microcistinas y nodularinas por fotodegradaciÛn
o por acciÛn bacteriana. Cuando las cÈlulas se descomponen en las aguas de los blooms, se promueve la
degradaciÛn natural de las cilindroespermopsinas en presencia de pigmentos de plantas y enzimas bajo la luz
solar. Recientemente se ha probado que las bacterias probiÛticas del tracto digestivo humano pueden ser
efectivas para eliminar MCs y cilindrospermopsinas.
Adem·s, en cuanto a MCs, NDs y CYN se controlan eliminando las partes de los animales que puedan estar
acumulando estas toxinas. Por ejemplo, el hÌgado de los peces, las agallas, el hepatop·ncreas de los moluscos,
etc. HabrÌa que limpiarlos antes de su procesamiento o cocinado.

b) ANATOXINA-A/NEUROTOXINA

Los principales gÈneros productores de anatoxina-A son Anabaena, Aphanizomenon, Microcystis y

Planktothrix (Oscillatoria).
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Es una amina secundaria bicÌclica [2-acetil-9-azabiciclo (4-2-1) non-2-eno] con una estructura similar a la
cocaÌna (relacionada con los alcaloides de la clase de los tropanos, entre los que se encuentra la cocaÌna).

Parece ser que su sÌntesis deriva de la putrescina debido a que comparten algunas enzimas como la Arginina
descarboxilasa y la Ornitina descarboxilasa. TambiÈn participa en su sÌntesis la Diamina oxidasa que participa
ciclando la putrescina que posteriormente es transformada a anatoxina-A.

Es un agonista colinÈrgico, es decir, que es capaz de unirse y reconocer receptores nicotÌnicos de acetilcolina.
Esta anatoxina se une de forma irreversible a este receptor compitiendo con la acetilcolina, la cual activa el
impulso nervioso. En cambio, cuando se une la anatoxina-A, como no puede ser degradada por la
acetilcolinesterasa, mantiene activa la estimulaciÛn de manera persistente al mantener los canales de sodio
abiertos durante largos periodos. AsÌ causa par·lisis de los m˙sculos respiratorios e incluso convulsiones,
porque inhibe la producciÛn de cualquier otro impulso nervioso posterior.

Una de las ventajas que presenta esta cianotoxina es que se degrada bastante bien. En ausencia de pigmentos
es capaz de fotodegradarse bien bajo la luz del sol. De hecho, en condiciones normales de fotoperiodo y pH, y
siempre y cuando las concentraciones no sean muy altas, puede degradarse en un par de semanas.

c) ANATOXINA-A(S)/NEUROTOXINA

Las estirpes que se han encontrado que la producen son Anabaena flos-aquae cepa NRC 525-17 (Canad·) y
[Link] (Dinamarca).

Esta anatoxina es un Èster fosfÛrico de una N-hidroxiguanidina cÌclica. Su

mecanismo de acciÛn, aunque tiene el mismo efecto que la anatoxina-A
porque produce una estimulaciÛn persistente, en este caso se hace de
forma diferente. La anatoxina-A(S) se une al centro activo de la
acetilcolinesterasa impidiendo que esta enzima realice su funciÛn de
hidrolizar la acetilcolina despuÈs de haberse unido a su receptor.

Al final el efecto es el mismo, una sobreestimulaciÛn muscular.

Su biodegradaciÛn es mala, siendo el ˙nico fosfonato similar a los plaguicidas y a los agresivos
organofosforados. Es m·s estable en soluciones ·cidas que en soluciones neutras o alcalinas, por lo que es
m·s f·cil de degradar en ambientes alcalinos. Adem·s, la diferencia de pH que pueden tener los estÛmagos
de diferentes especies animales puede ser el responsable del distinto grado de intoxicaciÛn y la distinta
susceptibilidad.

d) SAXITOXINAS (STs)/NEUROTOXINAS

Presentan una estructura tricÌclica con anillos de hidropurina. De forma general, son un grupo de alcaloides
carbamatos tÛxicos y los vamos a clasificar en tres tipos: no-sulfatados (STXs), sulfatados una vez
(gonyautoxinas GTXs) o doblemente sulfatados (C-toxinas, en las cuales al menos uno de los grupos sulfato
est· formando un grupo sulfocarbamoil).
Adem·s, se han identificado otras saxitoxinas especÌficas de determinadas especies como en Lyngbya-wollei
que ha dado el nombre a las nuevas toxinas (LWTXs) y en cianobacterias derivados descarbamilados (dc).
Todas las saxitoxinas bloquean canales de sodio dependientes de voltaje impidiendo la transmisiÛn del
impulso nervioso y provocando par·lisis muscular, entumecimiento y otros efectos.

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En cuanto a su biodegradaciÛn, en oscuridad y temperatura ambiente las STXs experimentan lentas reacciones
de hidrÛlisis quÌmicas. Sin embargo, cuando hay una mezcla de saxitoxinas puede darse que la toxicidad
aumente m·s al principio y a medida que se van degradando van teniendo menor efecto tÛxico. Las dc-GTXs,
GTXs y STXs se degradan lentamente hasta productos no tÛxicos no identificados todavÌa.
Las C-toxinas pierden el grupo N-sulfocarbamoil para formar dc-GTXs, siendo estas m·s tÛxicas que las C-
toxinas (un factor de 10 a 100).

e) APLYSIATOXINAS Y DEBROMOAPLYSIATOXINA/DERMATOXINAS
Es el grupo de cianotoxinas que menos informaciÛn se tiene. Las aplysiatoxinas y debromoaplysiatoxinas son
bislactonas fenÛlicas.
Lo poco que se sabe es que son potentes promotores tumorales y activadores de la proteÌna quinasa C, que
fosforilan los residuos de serina y treonina de determinadas proteÌnas activando cascadas de transducciÛn de
seÒales como, por ejemplo, un aumento de calcio.

Respecto a su biodegradaciÛn no se conoce nada.

f) LYNGBYATOXINA A/DERMATOXINAS

Lyngbya es la microalga marina que produce esta cianotoxina. Contiene un grupo indol y es idÈntica a un
isÛmero de teleocidina encontrado en los micelios de varias estirpes de Streptomyces, que se sabe que es un
activador tumoral. En caso de ingestiÛn produce inflamaciÛn intestinal y dermatitis.

SerÌa tambiÈn un activador de la proteÌna quinasa C y no se ha determinado a˙n su mecanismo de

biodegradaciÛn.

C. LIPOPOLISAC¡RIDOS CIANOBACTERIANOS (LPs)

Son endotoxinas o dermatoxinas. Los principales gÈneros de cianobacterias productores de LPs son
Microcystis, Anabaena y Oscillatoria.

Los lipopolisac·ridos son componentes de la pared y envuelta celular de las cianobacterias y de bacterias gram
negativas. En sus componentes tienen varias partes: polisac·ridos, oligosac·ridos y lÌpido A. Este ˙ltimo es la
parte que se considera endotoxina y que confiere la toxicidad.

Este lÌpido A es un disac·rido de glucosamina esterificada con ·cidos grasos que desencadena la respuesta
inmunitaria en la cÈlula.

Para que tenga lugar la acciÛn tÛxica los lipopolisac·ridos tiene que haber un reconocimiento del lÌpido A con
un receptor de la cÈlula huÈsped, ya que de por sÌ ellos no son tÛxicos al ser son necesarias diversas proteÌnas
en las cÈlulas huÈsped para desarrollar su potencial tÛxico.

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Se sugiere que la conformaciÛn tridimensional de los LPS est· relacionada con su actividad como endotoxina
y la capacidad de unir proteÌnas receptoras de la cÈlula huÈsped. Adem·s, la presencia de suficientes cargas
negativas en el disac·rido tiene una gran importancia en la conformaciÛn molecular de los lÌpidos A
En el caso de las bacterias se han identificado varios receptores TOLL-like (TLR) que van a mediar la respuesta
inmune a los LPS bacterianos. Para cianobacterias podrÌa ocurrir algo similar.

A continuaciÛn, tenemos una tabla en la que se observa la dosis letal 50 (DL50), que es la dosis letal necesaria
para matar a la mitad de la poblaciÛn en estudio:

Evidentemente cuanto menor sea DL50 m·s tÛxica ser· la cianotoxina. Vemos como los lipopolisac·ridos
dentro de las cianotoxinas tienen un valor de toxicidad menor que las otras.

En la tabla siguiente quedan resumidas todas las cianotoxinas, sus mecanismos de acciÛn y los posibles
efectos:

La homoanatoxina-A presenta un grupo propionil en vez de acetil y act˙a de forma similar a la anatoxina-A.

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D. OTRAS TOXINAS DE CIANOBACTERIAS

Kalkitoxina (neurotoxina producida por la cianobacteria marina Lyngbya majuscula). Esta neurotoxina
(lipopÈptido) bloquea canales celulares de sodio y conduce a la par·lisis y posible muerte por parada
respiratoria. Su actuaciÛn serÌa similar a la saxitoxina.
Curacin-A (el principal lÌpido de la cianobacteria marina Lyngbya majuscula). Es un potente agente antimitÛtico
que inhibe el ensamblaje de los microt˙bulos y la uniÛn de la colchicina a la tubulina (posiblemente por
inhibiciÛn competitiva). Es un agente antiproliferante que inhibe la polimerizaciÛn de la tubulina. Tiene
bastante interÈs en el sentido de tratamientos mÈdicos.

E. GRUPOS PRINCIPALES DE TOXINAS EN OTRAS MICROALGAS

No ˙nicamente las cianobacterias son productoras de toxinas, sino que tambiÈn otras microalgas las producen.

El ·cido domoico es una neurotoxina producida por diatomeas y el ·cido okadaico es producido por un
dinoflagelado y afecta al sistema digestivo.

a) ¡CIDO DOMOICO (DA)/NEUROTOXINA

Es un amino·cido no proteico soluble en agua.

Contiene un anillo de prolina, un grupo imino y tres
grupos carboxilo. Los grupos carboxilo son
responsables de la alta hidrofilicidad y la polaridad de
la molÈcula. La estructura quÌmica de DA es similar a
la de otra neurotoxina (el ·cido caÌnico, KA) y al ·cido
glut·mico.

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Como es similar al ·cido glut·mico, reconoce receptores del glutamato y del ·cido propanoico actuando como
un amino·cido excitatorio. Se produce una uniÛn no funcional que como consecuencia se genera una
acumulaciÛn de calcio que desencadena una serie de cascadas de seÒales y de daÒos funcionales, produciendo
al final una inflamaciÛn neuronal, especies reactivas ROS, peroxidaciÛn lipÌdica, etc.

A esta toxina se le denomina amnÈsica porque uno de los efectos que puede causar es la pÈrdida de memoria.
Cuando se cocinan los alimentos que la contienen no se eliminan, se queda retenida en el caldo de cocciÛn sin
solubilizarse.

Respecto a su degradaciÛn, es una toxina bastante estable por lo que no es f·cilmente biodegradable. Su
descomposiciÛn se observa a altas temperaturas (>50C) y a pH extremo (pH 2 o 12), pero de manera parcial.
La exposiciÛn de DA a la radiaciÛn ultravioleta de alta energÌa (253,7 nm) provoca su degradaciÛn r·pida en el
agua de mar. TambiÈn est· descrita su degradaciÛn por bacterias. En general, no son condiciones de
degradaciÛn muy ambientales.

b) ¡CIDO OKADAICO (AO)

Es producido por especies dinoflageladas pertenecientes a los

gÈneros Dinophysis y Prorocentrum. Es un Èter policÌclico cuyo
mecanismo de acciÛn se parece al de las microcistinas y
nodularinas.

Es un potente inhibidor de las protein-fosfatasas (PP1 y PP2a,

serina y treonina), enzimas que son responsables de la
desfosforilaciÛn de ciertas proteÌnas y que desempeÒan un papel
crÌtico en el control de procesos biolÛgicos tales como la divisiÛn
y el crecimiento celular, la organizaciÛn estructural, el
metabolismo, el control hormonal.

Mientras que las MCs y NDs daÒaban el hÌgado, este afecta sobre todo al sistema digestivo, siendo su efecto
m·s seÒalado la producciÛn de diarreas. El mecanismo de acciÛn que se describe serÌa que se produce una
hiperfosforilaciÛn de los canales iÛnicos de las cÈlulas epiteliales del intestino y eso hace que se altere el
equilibrio hÌdrico ocasionando las diarreas. Adem·s, es un potente promotor tumoral.

El ·cido okadaico tambiÈn es bastante estable y no se destruye con la cocciÛn de los alimentos. De las m·s de
2.000 especies de dinoflagelados, alrededor de 75 tienen la capacidad de producir potentes toxinas (entre
ellas, saxitoxinas).

El consumo de especies marinas (molusco-marisco) contaminadas con toxinas procedentes de microalgas

origina envenenamiento en seres humanos:
− PSP (Paralytic Shelfish Poisoning): causado por saxitoxinas producidas por dinoflagelados marinos
(Alexandrium tamarensense) y que se bioacumulan en los mariscos y pescados consumidos. Se
caracteriza por trastornos gastrointestinales y sobre todo neurolÛgicos. Cada aÒo reportan m·s de
2.000 casos de PSP de los cuales un 15% suelen ser fatales.
− ASP (Amnesics Shelfish Poisoning): causado por el ·cido domoico producido por diatomeas marinas
(gÈnero Pseudo-nitzschia) y que se bioacumula en mariscos y pescados consumidos. Se caracteriza por
desordenes gastrointestinales y neurolÛgicos, incluyendo la pÈrdida de memoria.

TEMA 8. PRODUCCI”N DE METABOLITOS BIOL”GICAMENTE ACTIVOS 10

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

− NSP (Neurotoxic Shelfish Poisoning): causado por brevetoxinas producidas por dinoflagelados marinos
(Karenia brevis) y que se bioacumulan en los mariscos y pescados consumidos. Se caracteriza por
trastornos gastrointestinales y neurolÛgicos. Los aerosoles tÛxicos formados por la acciÛn de las olas
provocan sÌndromes de asma que pueden incluso provocar la muerte.
− DSP (Diarrhetic Shelfish Poisoning): causado por el ·cido okadaico producido por dinoflagelados
marinos (Dinophysis acuminata) y que se bioacumula en mariscos y pescados consumidos. Se
caracteriza por trastornos gastrointestinales como la diarrea.

M·s de siete millones de salmones mueren en Noruega en unas piscifactorÌas como consecuencia de una
floraciÛn de un alga tÛxica, Chrysochromulina leadbeateri, que tiene efectos tÛxicos y en muchos casos
mortales en peces.

La ciguatera es una intoxicaciÛn alimentaria por ingesta de peces que se alimentan o habitan en los arrecifes
coralinos (trÛpicos y subtrÛpicos). El pescado con toxinas no se diferencia por tener un sabor, olor o color
concretos que permita su identificaciÛn antes de ingerirlos. Son unas toxinas resistentes al frÌo y al calor que
no se eliminan por congelaciÛn o el cocinado. Como precauciÛn se podrÌa eliminar la cabeza o las vÌsceras que
es donde se acumulan estas toxinas.
Los dinoflagelados marinos de las especies de Gambierdiscus son productoras de las toxinas marinas
ciguatoxinas y maitotoxinas (polieter) que causan intoxicaciones humanas en todo el mundo reconocidas
como intoxicaciÛn por peces Ciguatera.
Se ha descrito su posible funciÛn: las ciguatoxina activan canales de sodio dependientes de voltaje y las
maitoxinas inducen la entrada de calcio en la cÈlula que provocarÌa la muerte celular.
La ingesta peces y moluscos contaminados de estas toxinas es un peligro, pero estas toxinas tambiÈn se utilizan
para determinados fines con lo cual se comercializan y tienen un precio bastante caro.

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A continuaciÛn, tenemos diferentes casos de animales que han sido envenenados relacionados con la
producciÛn de cianotoxinas:

En esta tabla encontramos la toxicidad relativa y la persistencia en aguas de cada una de las toxinas
(biodegradabilidad):

Los distintos controles de toxinas que se pueden llevar a cabo son:

− Monitoreo regular: monitoreo quincenal de algas en el agua cruda (agua potable).
− Nivel de vigilancia: 500 cÈlulas/mL. An·lisis semanal de algas en el agua cruda.

Una vez monitorizada y confirmada la presencia de microalgas en las aguas, se comienza a analizar la presencia
de toxinas.

− Nivel de alerta 1: >5.000 cÈlulas/mL. An·lisis quincenal de toxinas en la fuente. Si las toxinas > valor
guÌa se realiza un an·lisis de estas en el agua tratada.

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− Nivel de alerta 2: >10.000 cÈlulas/mL indica la confirmaciÛn de la presencia de toxinas. An·lisis de

algas en agua cruda y tratada dos veces a la semana y an·lisis semanas de toxinas en agua tratada.
− Nivel de alerta 3: >20.000 cÈlulas/mL (toxinas > valor guÌa). An·lisis de algas en agua cruda y tratada
tres veces a la semana y an·lisis semanas de toxinas en agua tratada.

Los niveles guÌa o de referencia para las aguas recreativas son los siguientes. En EspaÒa no hay una legislaciÛn
en cuanto a las aguas recreativas, pero sÌ que hay unas recomendaciones de la OMS igual que para las aguas
potables.

La OMS recomienda un valor de 1 µg/L para aguas de consumo humano. Los niveles guÌa o de referencia para
las aguas potables son:

Por ejemplo, Nueva Zelanda lo tiene tabulado para muchas m·s cianotoxinas que otros paÌses. Lo m·s curioso
es que Brasil tenga un valor de guÌa de 15 µg/L.

Las toxinas no se eliminan por el tratamiento normal del agua, hay que hacer algo especÌfico para que se
eliminen:
− AdsorciÛn por carbÛn activado.

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− OxidaciÛn quÌmica y desinfecciÛn (cloro, diÛxido de cloro, ozono, permanganato de potasio, perÛxido
de hidrÛgeno, radiaciÛn UV).
− PreoxidaciÛn.
− Procesos de membrana y Ûsmosis inversa (microfiltraciÛn y ultrafiltraciÛn).

Para lo que es la detecciÛn se puede utilizar:

− CromatografÌa lÌquida de alta resoluciÛn (HPLC).
− CromatografÌa lÌquida/espectrometrÌa de masa (LC/MS).
− CromatografÌa gaseosa (GC-MS/ECD).
− Fosfatasa (para microcistinas).
− ELISA.
− InhibiciÛn de la acetilcolinesterasa (para anatoxina-A(S)).

El microcystest es una prueba para detectar f·cilmente con determinada sensibilidad microcistinas y
nodularinas tanto en agua potable como en recreativa. Se basa en la inhibiciÛn de la actividad fosfatasa PP2A
por las microcistinas.

2. CIANOTOXINAS Y OTROS METABOLITOS SECUNDARIOS

Mientras que el crecimiento excesivo de cianobacterias genera blooms que pueden deteriorar la calidad del
agua, las cianobacterias son productoras de nuevas sustancias activas que potencialmente pueden contribuir
a la reducciÛn del n˙mero de virus, bacterias y otros microorganismos, y por tanto pueden contribuir a
tratar/mejorar la calidad del agua.
Las microalgas y cianobacterias son capaces de producir una gran cantidad de metabolitos secundarios. Aparte
de las toxinas que hemos visto tambiÈn pueden producir otro tipo de metabolitos como terpenos o
compuestos org·nicos. Esos metabolitos fuera de su funciÛn fisiolÛgica se pueden purificar y utilizarlos como
biocidas (alguicidas, herbicidas e insecticidas).

Hay especies que producen metabolitos que les otorgan ventaja frente a otras especies e influyen en otras
plantas y microorganismos. De manera natural, ya parcialmente act˙an asÌ, entonces es una forma de
mantener y regular la comunidad y las interacciones especÌficas haciendo que persista una determinada
especie en funciÛn de su capacidad competitiva.
El modo de acciÛn de los compuestos depende de la naturaleza de la interacciÛn entre el organismo donador
y el organismo diana. Los diferentes modos de acciÛn de los compuestos bioactivos son:
1. Inhibidores de la fotosÌntesis: la inhibiciÛn del crecimiento y eventualmente la muerte por inhibiciÛn
de la fotosÌntesis es el modo extendido de acciÛn de las cianobacterias. Este tipo de compuestos se
podrÌan utilizar como potenciales alguicidas, herbicidas o fungicidas (fischerellina A).
▪ Los compuestos alelop·ticos producidos por Scytonema hofmanni (cyanobacterin) y Trichormus
doliolum (compuesto no identificado) inhiben la transferencia de electrones fotosintÈtica
mediada por el fotosistema II.
▪ Fischerellina A, producida por Fischerella muscicola, es otro compuesto que afecta al PSII. Adem·s
de su acciÛn contra la fotosÌntesis, Fischerellina A es tÛxica para los hongos a altas
concentraciones.
▪ Fischerellina A similar a Tellimagrandina II y otros polifenoles de M. spicatum (planta acu·tica)
cuyo mecanismo de acciÛn es probablemente causar un aumento en el potencial redox para el Fe
no-Hemo, localizado entre las quinonas primaria y secundaria aceptoras de electrones (QA y QB
en el PSII).
2. InhibiciÛn enzim·tica: muchas microalgas producen glicosidasas e inhibidores de proteÌnas que se
liberan al medio de cultivo.
▪ Hay un inhibidor de α-amilasa de bajo peso molecular que ha sido aislada de Anabaena flos-aquae.
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▪ Se han aislado diversas aeruginosinas (inhibidores de serin-proteasas) en Microcystis aeruginosa,

Microcystis viridis y Nodularia spumigena.
3. Par·lisis celular: aunque no est· identificado el metabolito se conoce que Anabaena flos-aquae
cuando se cultiva juntamente con Chlamydomonas reinhardtii produce la par·lisis de Chlamydomonas
y asÌ coloniza m·s r·pido.
4. InhibiciÛn de la sÌntesis de ·cidos nucleicos: inhibe el crecimiento debido a la inhibiciÛn de la sÌntesis
proteica.
▪ Dos alcaloides aislados de Fischerella sp. (el isonitrilo 12-epihapalindol E) y Calothrix sp.
(calotrixina A) tienen actividad inhibidora de la RNA polimerasa de bacterias, hongos y algas
verdes.
▪ Calotrixina A tambiÈn inhibe la sÌntesis de ADN.
5. GeneraciÛn de ROS: el pigmento violeta nostocina A, producido por Nostoc spongiaeforme, es
altamente citotÛxico para diversas microalgas. Se ha determinado que acelera la formaciÛn de
especies reactivas de oxÌgeno (ROS) en el alga verde C. reinhardtii.
Un mecanismo que se propone es que esta nostocina A serÌa reducida por molÈculas reductoras de la
cÈlula diana, como puede ser NADPH, y despuÈs serÌa oxidada por el oxÌgeno. De esta forma se
generarÌa el anillo superÛxido.

A. METABOLITOS CON ACTIVIDAD INSECTICIDA

Hay especies que producen cianotoxinas y otros metabolitos bioactivos (tÛxicos) con actividad insecticida que
les otorgan ventaja frente a otras especies.
CIANOTOXINAS EFECTO T”XICO
Neurotoxinas y microcistinas Mortalidad de las larvas del mosquito Aedes aegpti
Microcistinas-LR Varios insectos
¡cidos grasos insaturados de Oscillatoria agardhii Efecto tÛxico para larvas de mosquito Aedes
albopictus
Especie de Nostoc sp productora de criptoficina Produce toxinas para Helicoverpa armigera

B. METABOLITOS CON ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA (ANTIBI”TICOS)

Dentro de los antibiÛticos producidos por las microalgas encontramos ·cidos grasos, sustancias fenÛlicas
como: bromofenoles, taninos; terpenoides, polisac·ridos y otros carbohidratos, alcoholes glicolÌpidos,
pÈptidos y enzimas inhibidoras.
− Los ·cidos grasos son componentes comunes y no son considerados tÛxicos, sin embargo, en
organismos marinos se ha observado actividad antibacteriana.
− Bromofenoles: los halÛgenos contienen fenoles que se sabe que funcionan como antisÈpticos y
desinfectantes, por lo tanto, presentan actividad antibacteriana.
− Floroglucinol y taninos: presentan actividad antibacteriana y coagulaciÛn de proteÌnas.
− Terpenoides: se ha observado que inhiben el crecimiento de bacterias y de hongos.
− Otros antibiÛticos: cetonas halogenadas y butonas, estas cetonas son fuertemente inhibidoras en el
crecimiento de bacterias de los gÈneros Staphylococcus y Vibrio.

C. COMPUESTOS ANTIF⁄NGICOS
− Dioxa-diazacyclohexadecenetetrona es un producto antif˙ngico con patente aislado de la
fermentaciÛn de una cyanobacteria (Nostoc sp.). El compuesto es un nuevo antif˙ngico con una
especificidad general hacia hongos filamentosos, pero m·s efectivo contra Cryptococcus sp. Este
hongo es bastante mortal para aquellas personas inmunodeprimidas.
− Se han aislado lipopÈptidos antif˙ngicos (nostofungicidina 1), de cianobacterias terrestres Nostoc
commune.

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− Se ha aislado una lactona (tanikolido 1) con actividad antif˙ngica de la cianobacteria marina Lyngbya
majuscula.
− Diversos tipos de escitoficinas (macrÛlido-antibiÛtico natural) y derivados de ellas (Èsteres) son nuevos
agentes antif˙ngicos a partir de la cianobacteria Scytonema pseudohofmanni.
− Se ha descrito que Calothrix sp. inhibe a Macrophomina phaseolina (hongo que causa la enfermedad
en las semillas del maÌz y el sorgo) (metabolito por identificar).

D. METABOLITOS CON ACTIVIDAD ANTI-INCRUSTANTE (ANTI-FOULING)

El biofouling consiste en los cambios que sufre una superficie sÛlida (por ejemplo, cascos de los navÌos) tras
su exposiciÛn en el agua, tanto por fenÛmenos de adsorciÛn de macromolÈculas como por el desarrollo de
biofilms formados por microorganismos y macroorganismos. Supone un problema tanto econÛmico como
ambiental porque puede arrastrar especies invasoras.

Las cianobacterias producen una gran variedad de metabolitos bioactivos que pueden prevenir el biofouling
por colonizaciÛn de organismos. Las molÈculas con actividad antifouling (AF) incluyen molÈculas como: ·cidos
grasos, lipopÈptidos, amidas, alcaloides, terpenoides, lactonas, pirroles y esteroides.
Estos compuestos biogÈnicos pueden ser de utilidad en el desarrollo de pinturas antifouling no daÒinas para
el ambiente.

3. POTENCIALES APLICACIONES DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN BIOMEDICINA

(C¡NCER) Y FARMAC…UTICA
El interÈs de estos metabolitos es para conseguir inhibir el crecimiento de lÌneas de cÈlulas cancerÌgenas
mediante productos naturales y descubrir nuevas drogas y tratamientos efectivos anticancerÌgenos.

Algunos ejemplos de molÈculas bioactivas son:

1. La cianobacteria Lyngya majuscula es una fuente importante para la producciÛn de diversas clases
quÌmicas de productos naturales con propiedades antiproliferantes y propiedades anticancerÌgenas:
malingamidas y las apratoxinas, entre otros. Se han utilizado en diferentes tratamientos de lÌneas
cancerÌgenas como c·ncer de pecho, pulmÛn, etc.
▪ Las malingamidas son amidas de ·cidos grasos.
▪ Las apratoxinas son lipopÈptidos.
2. CiclopÈptidos de cianobacterias, microcistinas (mcs) y AN¡LOGOS tienen potencial en tratamientos
terapÈuticos contra el c·ncer: utilizaciÛn de MC dirigida para el tratamiento de la met·stasis de c·ncer
en cÈlulas que expresen unos transportadores especÌficos OATP (organic anion transporting
polypeptides), los cuales se encuentran en abundancia en los hepatocitos.
Las Microcistitinas son heptapÈptidos cÌclicos hidrofÛbicos que causan daÒo celular posterior a su
transporte a travÈs de OATP. Es interesante que ciertos tipos de c·ncer expresen OATP, lo que cualifica
a las MCs como candidatos potenciales para el desarrollo de drogas para su tratamiento.
Algunos ejemplos de mecanismos de acciÛn de las molÈculas bioactivas son:
3. Las isomalingamidas (Lyngya majuscula) se pueden usar como antiproliferantes de cÈlulas
cancerÌgenas. Se ha propuesto que a travÈs de la inhibiciÛn de determinadas proteasas necesarias
para el crecimiento tumoral. Al inhibir estas proteasas se detiene la invasiÛn tumoral y met·stasis.
4. Los bis-bromoindoles (Rivularia sp.) y malingamida 2 (Lyngya majuscula) tienenuna actividad
antiinflamatoria.
5. La criptoficina producida por Nostoc sp induce la apoptosis, con lo cual de forma localizada se podrÌa
utilizar para determinadas aplicaciones mÈdicas.

Hasta aquÌ son los ejemplos con cianobacterias.

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6. Los canales de Na+ y Ca2+ participan activamente en la transducciÛn de seÒales, por tanto, los
compuestos que modifican la fisiologÌa de los canales pueden ser usados como drogas para aliviar
dolores neurop·ticos, epilepsia, convulsiones, anestesia local, desÛrdenes bipolares…
− Nitzshia pungens var. multiseries (diatomea) produce ·cido domoico que ayuda a evitar la
neurodegeneraciÛn. Act˙a como potente excitante (agonista) de los receptores de glutamato.
− Los dinoflagelados del gÈnero Amphidinium produce gonyatoxinas, y se han hecho infiltraciones
anales para tratar fisuras crÛnicas.
7. ProducciÛn de proteÌnas recombinantes a partir de microalgas. Entre los diferentes organismos
productores vemos como las microalgas tienen caracterÌsticas muy ventajosas frente a los otros para
su obtenciÛn:

Presentan unas caracterÌsticas similares a las plantas, pero tienen un tiempo de producciÛn mucho
m·s corto. La mayor parte de los biof·rmacos son proteÌnas recombinantes porque son molÈculas
biolÛgicas con uso terapÈuticos.

Existen diferentes tipos de proteÌnas recombinantes que se expresan en el modelo de Chlamydomonas

reinhardtii. Las podemos clasificar en tres grupos: las que generan anticuerpos (normalmente
monoclonales), las que son antÌgenos para vacunas o proteÌnas terapÈuticas.

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Algunas compaÒÌas americanas involucradas en el desarrollo de proteÌnas recombinantes de interÈs

mÈdico a partir del cloroplasto de Chlamydomonas reinhardtii: PHYCOBIOLOGICS (enfocada
principalmente al desarrollo de proteÌnas recombinantes de interÈs veterinario) y PROTELICA.

8. Microalgas que protegen frente a la infecciÛn de virus. El actual tratamiento para infecciones HSV son
compuestos an·logos a nucleÛsidos como: aciclovir y Famciclovir (an·logos de la guanosina) y el
prof·rmaco valaciclovir (precursor de aciclovir). Aciclovir lo que hace es inhibir la ADN polimerasa y la
replicaciÛn del ADN viral.
Sin embargo, adem·s de estos f·rmacos a partir de microalgas se pueden obtener compuestos que
protegen frente a la infecciÛn vÌrica.

Los polisac·ridos sulfatados de pared celular tienen una actividad antiviral bastante eficiente para el
virus del herpes simplex. Previenen la adsorciÛn del virus y su replicaciÛn, asÌ como la apariciÛn de los
sÌntomas.
Adem·s del virus del herpes simplex, esos polisac·ridos de Porphyridium sp. tambiÈn protegen frente
a la infecciÛn de otros virus:
− la inhibiciÛn del retrovirus MuLV (Murine Leukemia Virus).
− la transformaciÛn celular del virus MuSV-124 (Murine Sarcoma Virus).
− la inhibiciÛn de la replicaciÛn del virus ASFV (African Swine Fever Virus).
− La inhibiciÛn de la replicaciÛn y del virus VHSV (Virus de la septicemia hemorr·gica virAL) en
salmÛnidos.
El polipÈptido cianovirina-N (CN-V) de Nostoc ellisosporum muestra un gran potencial para:
− La inhibiciÛn del retrovirus HIV (Human immunodeficiency virus).
− La cianovirina-N es una proteÌna tipo lectina que reconoce carbohidratos de la c·pside del
virus. El mecanismo de acciÛn antiviral serÌa impedir que el virus entre, se fusionen
membranas y se propague la infecciÛn.
− Tiene potente actividad contra los virus de inmunodeficiencia: HIV-1, estirpes trÛpicas M y T
de HIV-1 y HIV-2 y FIV.
A modo de resumen, las microalgas m·s utilizadas en la producciÛn de proteÌnas recombinantes de
aplicaciÛn en biomedicina son:
▪ Chlamydomonas reinhardtii: expresiÛn de proteÌnas recombinantes en el n˙cleo y cloroplasto.
▪ Chlorella ellipsoidea: expresiÛn de proteÌnas recombinantes en el n˙cleo.
▪ Dunaliella tertiolecta: expresiÛn de proteÌnas recombinantes en el cloroplasto.
▪ Dunaliella salina: expresiÛn de proteÌnas recombinantes en el n˙cleo.

TEMA 8. PRODUCCI”N DE METABOLITOS BIOL”GICAMENTE ACTIVOS 18

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Las microalgas utilizadas en la producciÛn de otros compuestos de aplicaciÛn en biomedicina son:

En este gr·fico se representa la actividad biolÛgica que presenta los compuestos de cianobacterias
marinas. Vemos que algunas citotÛxicas podrÌan incluirse dentro de anticancerÌgenas y antibiÛticas,
aun asÌ, aproximadamente el 50% tendrÌan actividad con potencial para el desarrollo de f·rmacos.
Algunas podrÌan tener un tratamiento localizado.

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TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE VALOR

A—ADIDO
1. PRODUCCI”N DE BIOPL¡STICOS
Cada vez hay m·s interÈs y estamos m·s concienciados del uso de pl·sticos biodegradables en numerosos
formatos y aplicaciones. Podemos definir los biopl·sticos como polÌmeros biodegradables de forma natural
por la acciÛn de microorganismos como bacterias, hongos, algas y cianobacterias. Estos biopl·sticos se
mineralizar·n hasta formar CO2 y agua.

En condiciones de desequilibrio nutricional, las cianobacterias estimulan las sÌntesis de biopl·sticos como una
forma de acumular carbono y energÌa. Dichas condiciones pueden ser muy variadas: deficiencia de nitrÛgeno,
fÛsforo, magnesio, oxigeno. TambiÈn puede desencadenar la formaciÛn de polÌmeros PHA el exceso de
abundancia de carbono.

Aunque las bacterias son las que industrialmente se emplean para la producciÛn de polihidroxialcanoatos,
cada vez hay m·s interÈs en utilizar una fuente de polihidroxialcanoatos sostenible. Esto se debe a que las
bacterias necesitan un aporte de carbono org·nico que supone el 50% del coste del proceso, por lo que serÌa
interesante utilizar un sistema de cultivo en el que se pueda usar la energÌa solar y sea sostenible.

Los polihidroxialcanoatos se acumulan formando una especie de gr·nulos insolubles en el citoplasma. Estos
gr·nulos se pueden ver al microscopio, ya que se pueden teÒir con un colorante lipÛfilo como el Nile blue.

IMPORTANTE: los pl·sticos biodegradables no se fabrican obligatoriamente de materias primas renovables,

tambiÈn pueden producirse con petrÛleo. La biodegradabilidad no depende de la materia prima, sino de la
estructura quÌmica.

Los polÌmeros procedentes de recursos naturales en la fabricaciÛn de biopl·sticos se dividen en tres grandes
grupos dependiendo de su origen:
− PolÌmeros obtenidos a partir de biomasa (polisac·ridos, proteÌnas) como el almidÛn, celulosa, caseÌna
y gluten.
− PolÌmeros obtenidos con la participaciÛn de biointermediarios a partir de materia prima (az˙cares,
etc.) procedente de recursos naturales. Por ejemplo, el ·cido l·ctico se obtiene por fermentaciÛn de
azucares que se obtienen de recursos naturales. A partir de este se produce una reacciÛn de
polimerizaciÛn para obtener el ·cido polil·ctico (PLA) para la fabricaciÛn de biopl·sticos.
− PolÌmeros producidos por microorganismos como el PHA, PHB.

TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE ALTO VALOR A—ADIDO 1

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Los polÌmeros biodegradables procedentes de recursos renovables de gran uso actualmente son el ·cido
polil·ctico (PLA), el polihidroxibutirato (PHB) y los polihidroxialcanoatos (PHA). Algunas veces los pl·sticos que
no son biodegradables se pueden mezclar con componentes que sÌ lo son, entonces lo que se obtienen un
pl·stico que no se va a degradar de forma natural, pero sÌ parcialmente dando trozos de pl·sticos m·s
pequeÒos.

A. POLIHIDROXIALCANOATOS
Son poliÈsteres lineales insolubles que se acumulan formando gr·nulos en el citosol de las cÈlulas de una gran
variedad de microorganismos. Act˙an como fuente de energÌa y almacenamiento de carbono en condiciones
desfavorables de crecimiento (falta de O, P, N, Mg) o exceso de carbono.

El P y N son las condiciones m·s empleadas cuando se quiere estimular la producciÛn de polihidroxialcanoatos
de forma industrial o controlada.

De todos los tipos que hay nosotros nos vamos a centrar en el poli-3-hidroxibutirato.

El Èster se forma entre el grupo hidroxilo de un monÛmero con el grupo alcohol del siguiente grupo.

TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE ALTO VALOR A—ADIDO 2

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Esto serÌa el gr·nulo de polihidroxialcanoatos que se acumula. Los gr·nulos est·n rodeados de una monocapa
de fosfolÌpidos donde tambiÈn se localizan una serÌa de enzimas que se encargan de la formaciÛn y
degradaciÛn de estos polihidroxialcanoatos (enzimas polimerasas y despolimerasas).

Dentro de los polihidroxialcanoatos podemos distinguir diferentes tipos en funciÛn de sus monÛmeros:
− De cadena corta: monÛmeros de menos de 5C. AquÌ estarÌa el polihidroxibutirato.
− De longitud de cadena media: monÛmeros de 5-14C.
− De longitud de cadena larga: monÛmeros de m·s de 14C.

Los polihidroxialcanoatos (6% de su peso seco) son producidos por hasta 250 bacterias diferentes y algunas
cianobacterias como Spirulina platensis. Las bacterias productoras a nivel industrial producen mucha m·s
cantidad.

El tipo de polihidroxialcanoato que va a sintetizar un tipo de microorganismo (bacterias, cianobacteria) va a

depender de ese tipo de microorganismo. Por ejemplo, las cianobacterias producen polihidroxialcanoatos de
cadena corta.

B. POLIHIDROXIBUTIRATOS
El PHB es un ejemplo de polihidroxialcanoato de cadena corta. Se ha intentado expresar la ruta bacteriana de
sÌntesis de PHB Ralstonia eutropha H16 en la diatomea Phaeodactylum tricornutum y se ha visto que es posible
de producir en una cantidad del 10,6% de peso seco en microalgas.
Esto puede ser muy interesante, pero en el caso de la bacteria (Ralstonia eutropha H16) que se produce a nivel
industrial la producciÛn de PHB es mucho m·s alta (80% de su peso seco). A pesar de que produce menos PHB,
el interÈs que tiene cianobacterias es a nivel nutricional, ya que podemos tener un cultivo autÛtrofo.

En plantas tambiÈn se ha intentado reproducir esto que se ha hecho en diatomeas. En el caso de Arabidopsis
se obtuvo un crecimiento malo y afectÛ negativamente a la fertilidad. En Nicotina tabacum sÌ se obtuvo
mejores resultados, hasta un 18% de PHB por peso seco, sin aparentes efectos en el crecimiento.

La ventaja de utilizar microalgas o cianobacterias modificadas frente a plantas es el uso del suelo y agua.

Este PHB, que es el que producen mayoritariamente cianobacterias, es bastante interesante en la producciÛn
de biopl·sticos porque tiene caracterÌsticas muy parecidas al polipropileno que deriva del petrÛleo. Por ello
serÌa un buen sustitutivo para evitar el uso de derivados del petrÛleo en la fabricaciÛn de pl·sticos.

TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE ALTO VALOR A—ADIDO 3

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a) PHB SÕNTESIS

El precursor del polihidroxibutirato es el

acetil-CoA. Su sÌntesis necesita de tres
enzimas:
− 3-cetotiolasa: cataliza la
condensaciÛn de dos acetil-CoA a
acetoactecil-CoA.
− acetoacetil-CoA reductasa: el
acetoactecil-CoA se reduce a 3-
hidroxibutiril-CoA. Se necesita poder
reductor.
− PHB sintasa: cataliza la formaciÛn del
polihidroxibutirato.

Esta en la ruta de sÌntesis en bacterias, pero

en cianobacterias serÌa exactamente igual.

Estas tres enzimas est·n codificadas por cuatro genes: phA (slr1993), phaB (slr1994), phaC (slr1830) y phaE
(slr1829).
− phA y phB est·n organizados en un operÛn que codifica una β-cetotiolasa y acetoacetil-CoA reductasa.
− phaC y phaE est·n tambiÈn organizados en un operÛn que codifica a dos subunidades de PHA sintasa
de tipo III.

En funciÛn de la fuente de carbono, las condiciones de cultivo pueden ser fotoautÛtrofas o heterÛtrofas
(suplementaciÛn con fructosa/acetato). En la siguiente tabla se recogen varios estudios donde se pretende
ver la producciÛn de polihidroxialcanoato en funciÛn del tipo de cultivo:

En el caso de la condiciÛn fotoautÛtrofa se analiza como varÌa esa producciÛn aplicando carencias
nutricionales. En el cultivo heterotrÛfico vemos que los rendimientos son bastante altos.

A diferencia de las microalgas eucariotas donde el almidÛn es la forma de reserva, en cianobacterias es el

glucÛgeno. TambiÈn la sÌntesis de PHB muestra algunas semejanzas con la sÌntesis de triacilglicerol (TAG) en
algas verdes, donde la sÌntesis de TAG tambiÈn sirve como sumidero de electrones y es una vÌa de consumo
del exceso de NADPH.
En deficiencia de nitrÛgeno, las cÈlulas cambian gradualmente de un estado vegetativo a un estado latente.
La caracterÌstica m·s obvia es el fenÛmeno que se denomina "clorosis por nitrÛgeno".

TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE ALTO VALOR A—ADIDO 4

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Synechocystis sp. PCC6803 produce PHB de forma natural, pero se quiere aumentar su producciÛn mediante
una modificaciÛn genÈtica que aumente la cantidad de acetil-CoA. Para esto, ser· necesaria la deleciÛn de los
genes pta y ash y la sobreexpresiÛn de xfpk. Al delecionar estos dos genes se evitarÌa la codificaciÛn de la
fosfotransacetilasa (por pta), la acetato quinasa y la hidrolasa de acetil-CoA (por ach), dando lugar a la no
metabolizaciÛn del acetil-CoA en acetato.

El que haya mayor disponibilidad de acetil-CoA se refuerza con la sobreexpresiÛn de las fosfocetolasas (xfpk)
que catalizan la escisiÛn de xilulosa 5-fosfato (Xu5P) o fructosa 6-fosfato (F6P) a acetil-P y gliceceraldehÌdo-3-
P o eritrosa-4-P, respectivamente.
A continuaciÛn, tenemos un listado de cianobacterias donde indica cÛmo se cultivan modificando la fuente de
carbono y las condiciones nutricionales:

TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE ALTO VALOR A—ADIDO 5

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La producciÛn de esos polihidroxialcanoatos se induce en condiciones de estrÈs. Por ejemplo, si comparamos

Spirulina platensis en condiciones completas de nutriciÛn con Synechococcus MA19 en deficiencia de
nitrÛgeno, vemos como en deficiencias nutricionales hay mayor producciÛn de polihidroxialcanoatos. Aunque
tambiÈn es cierto que la producciÛn varÌa dependiendo de la especie que estemos cultivando.

Las cianobacterias productoras de PHA pueden ser cultivadas en diferentes condiciones de fuentes de
carbono. Las clases de PHA m·s comunes son el polihidroxibutirato y el polihidroxivalerato, siendo las m·s
comerciales. Podemos ver como varÌa el rendimiento:

Normalmente se hacen mezclas comerciales de polihidroxibutirato y polihidroxivalerato (hasta un 14%).

C. PROPIEDADES DE LOS BIOPL¡STICOS BIODEGRADABLES DE PHA

− Sus propiedades tÈrmicas y mec·nicas varÌan en funciÛn de su composiciÛn. Algunos son rÌgidos y
quebradizos (estructura cristalina: rigidez). Algunos son de goma y moldeables.
− Sus propiedades pueden ser manipuladas por los polÌmeros de mezcla o modificaciones genÈticas.
− Son hidrofÛbicos y muestran bajas permeabilidades al oxÌgeno y al vapor de agua.

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− Son de origen renovable, biodegradables y biocompatibles.

Los que son de cadena corta suelen ser termopl·sticos, es decir, cuando se calientan las interacciones
intermoleculares se hacen m·s dÈbiles haciendo que sean moldeables a temperaturas superiores a las de su
punto de fusiÛn. Cuando se enfrÌan vuelven al estado inicial. Si los comparamos con el que procede de
derivados del petrÛleo serÌa el polipropileno, serÌan an·logos.
Los de cadena media suelen ser elastomÈros, de manera que tienen la capacidad de elongarse. Son bastante
parecidos al polietileno derivado del petrÛleo.

D. BIODEGRADACI”N
− La m·s r·pida: en las aguas residuales anaerobias y la m·s lenta en agua de mar.
− Depende de: la temperatura, la luz, la humedad, el ·rea de superficie expuesta, el pH y los
microorganismos.
− La degradaciÛn por microorganismos: colonizan la superficie del polÌmero y secretan PHA
despolimerasas.
PHA  CO2 + H2O (aerÛbicamente)
PHA  CO2 + H2O + CH4 (anaerÛbicamente)

E. PROYECTOS Y PRODUCTOS COMERCIALES

En el proyecto europeo splash (Sustainable Polimers from Algae and Hydrocarbons) de la Universidad de
Huelva participan 20 grupos cientÌficos de universidades y empresas, financiado con cargo al VII Programa
Marco de la UE.
La finalidad es que polisac·ridos e hidrocarburos producidos por las microalgas puedan ser usados como
materia prima en la elaboraciÛn de pl·sticos -poliÈsteres y poliolefinas-: envases, cuerdas o fibras entre otras
aplicaciones.
La productora de estos productos de polisac·ridos e hidrocarburos era Botryococcus braunii, pero su cultivo
no era f·cil ni rentable a gran escala. Por ello se transformÛ C. reinhardtii con los genes que codificaban las
proteÌnas para su sÌntesis.

Los compuestos hidrocarbonados que producÌa Botryococcus braunii eran parecidos a un compuesto que se
llama nafta y que es muy importante para la formaciÛn de pl·sticos.

Algunos productos comerciales que son biopl·sticos generados a partir de microalgas son:
− CEREPLAST: Biopropylene 109D. est· hecho con 20% de biomateria de algas post-industria. Esta
empresa tambiÈn ofrece dos grados de compuestos hÌbridos que consisten en polipropileno
convencional mezclado con almidÛn del 50% al 55% de maÌz, tapioca, trigo y/o patatas. Cereplast
pretende reemplazar hasta el 30% del almidÛn con algas secas y en polvo.
− ALGIX: es una compaÒÌa que produce biopl·sticos a partir de algas cultivadas empleando aguas
procedentes de aguas residuales e instalaciones de acuicultura. Estos biopl·sticos los emplea para
producir espumas que se emplearan por Vivofarefoot para hacer calzados a partir de biomasa de algas.
La misma empresa comercializa otros modelos de zapatos sostenibles hecho con un biopolÌmero de
maÌz.

A parte de productos comerciales, existen algunos proyectos que est·n destinados para la generaciÛn de
biopl·sticos a partir de microalgas:
1. El proyecto Oli-PHA project: a partir de cianobacterias obtienen los polihidroxialcanoatos y a travÈs
de residuos que quedan despuÈs de obtener el aceite de oliva extraen los polifenoles. Con los
polifenoles se tratan los pl·sticos que han generado a partir de cianobacterias y asÌ se mejoran las
calidades de los pl·sticos en cuanto a una mayor conservaciÛn de los alimentos.

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2. ProducciÛn de biopl·sticos basados en polÌmeros de algas a travÈs de una impresora 3D.

3. Trabajando conjuntamente con el grupo quÌmico JaponÈs Asahi Kasei, un grupo de investigaciÛn de la
Universidad de California UC Davis ha usado cianobacterias para convertir diÛxido de carbono en 2,3-
butanodiol.
4. El proyecto ECLIPSE (Algae-Derived PLA project): se basa en la fabricaciÛn de biopolÌmeros (PLAs) a
partir de biomasa de microalgas.
El ·cido l·ctico se obtiene a travÈs de procesos de fermentaciÛn anaerÛbica, y tras la fermentaciÛn el
·cido l·ctico se somete a un proceso de polimerizaciÛn, para formar el poli (·cido l·ctico).
Este polÌmero se obtiene a partir de recursos renovables procedentes de plantas de cultivo (maÌz,
remolacha, trigo) y otros productos ricos en almidÛn (algas). Es biodegradable hasta H2O, CO2 y CH4.
Su proceso de obtenciÛn implica la extracciÛn de los azucares (principalmente dextrosa, pero tambiÈn
glucosa y sacarosa) para despuÈs fermentarlos a ·cido l·ctico. El ·cido l·ctico se purifica y se
polimeriza por apertura del anillo del dÌmero del ·cido l·ctico.
En comparaciÛn con algunos de los principales termopl·sticos comerciales (PS, PP, PET) el PLA posee
en general propiedades mec·nicas similares.

2. APLICACIONES DE LAS SUSTANCIAS POLIM…RICAS EXTRACELULARES

Las sustancias polimÈricas extracelulares (EPS) son de naturaleza variable. Est·n formadas principalmente por
polisac·ridos, pero tambiÈn contienen proteÌnas, ·cidos nucleicos y lÌpidos, entre otros.

La variaciÛn en las condiciones fisiolÛgicas influye en gran medida en la composiciÛn de las sustancias
polimÈricas extracelulares, lo que sugiere que las microalgas modulan su maquinaria de biosÌntesis para
adaptarse a las condiciones ambientales.

Los polisac·ridos (exopolisac·ridos) son los compuestos m·s abundantes en los EPS, por ellos se les suele
denominar com˙nmente como EPS.

Los polisac·ridos que forman parte de la composiciÛn de los polisac·ridos suelen ser heteropolisac·ridos y
est·n constituidos principalmente por galactosa, glucosa, fucosa, xilosa, arabinosa, manosa, ramnosa, fructosa
y derivados de az˙cares (·cidos urÛnicos) en diferentes proporciones.

AquÌ tenemos una tabla con diferentes microalgas y cianobacterias que van a producir estas sustancias
polimÈricas extracelulares presentan diferentes grados de sulfataciÛn y proteÌnas. Este contenido va a variar
dependiendo de la especie que estemos considerando.

Adem·s de la presencia de sulfato y otros compuestos inorg·nicos en los polisac·ridos extracelulares, otros
sustituyentes que afectan a las propiedades fÌsicas y biolÛgicas de las sustancias polimÈricas extracelulares
son: los ·cidos urÛnicos y compuestos polianiÛnicos o policatiÛnicos como xantana o N-acetilglucosamina que
contribuyen a la adhesiÛn de las cÈlulas y la formaciÛn de agregados.

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Los diferentes usos y aplicaciones de las sustancias polimÈricas extracelulares dependen de su estructura y
caracterÌsticas fisicoquÌmicas.

Todos los componentes que forman parte de estas sustancias polimÈricas extracelulares van a participar como
nutrientes. Las propiedades antivirus, antioxidantes y antiinflamatorio se les atribuyen a los polisac·ridos.
Como surfactante y emulsificante tendrÌamos los lÌpidos y los polisac·ridos.
Hay numerosos estudios para la producciÛn de EPS en microalgas rojas del gÈnero Porphyridium (ejemplos:
especies P. cruentum, P. purpureum y P. aerugineum) por su valor en aplicaciones biomÈdicas y farmacÈuticas.

A. ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE LOS EPS-POLISAC¡RIDOS

Aunque no se conoce exactamente el mecanismo, los virus se unen a las cÈlulas por una interacciÛn entre la
glicoproteÌna de la envoltura viral y el receptor de la superficie celular.
El complejo virus-cÈlula se formarÌa principalmente por las interacciones iÛnicas entre los grupos aniÛnicos
(principalmente sulfato) del receptor y los amino·cidos b·sicos de la glicoproteÌna viral, cargada
positivamente.
Entonces la actividad antiviral de los exopolisac·ridos consiste evitar la uniÛn del virus al receptor. Los
exopolisac·ridos de los EPS al unirse directamente al virus (complejo virus-exo-polisac·ridos) podrÌan
bloquear el proceso de la adsorciÛn viral y la posterior entrada del virus.
Se ha observado que el aumento de contenido de sulfato de los exopolisac·ridos indujo una actividad antiviral
m·s alta.

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Otros posibles modos de acciÛn antivirales propuestos son: inhibiciÛn de la replicaciÛn del virus durante las
primeras fases de la infecciÛn del virus y la prevenciÛn de la formaciÛn de diversas transcriptasas inversas
retrovirales sin efectos citotÛxicos contra las cÈlulas huÈsped.

B. OTRAS APLICACIONES DE LOS EPS DE MICROALGAS MARINAS

1. Actividad antioxidante: est· actividad se asocia a los polisac·ridos que contienen las EPS. Los
polisac·ridos sulfatados acumulados en respuesta a estreses oxidativos actuarÌan potencialmente
como efectivos antioxidantes para proteger sus propias cÈlulas de los radicales libres.
La actividad antioxidante de algunos de estos polisac·ridos puede ser debida a la inducciÛn de la
expresiÛn gÈnica de enzimas antioxidantes (superÛxido dismutasa o la glutatiÛn peroxidasa).
La bioactividad de los exopolisac·ridos, dependiente de la dosis, se correlaciona positivamente con el
contenido de sulfato, negativamente con su peso molecular y es dependiente de su estructura y
conformaciÛn. TambiÈn se postula la posibilidad de que las glicoproteÌnas contribuyan a las
propiedades antioxidantes.
Asimismo, esto tiene un potencial uso en alimentaciÛn y cosmÈtica.
2. Actividad antiinflamatoria: los exopolisac·ridos de las microalgas marinas Porphyridium,
Phaeodactylum y Chlorella tienen actividad farmacolÛgica como actividad antiinflamatoria. Por
ejmplo, act˙a inhibiendo el eritema.
Su forma de actuar serÌa inhibiendo el movimiento y la adhesiÛn de leucocitos. ActivarÌan la
producciÛn de Ûxido nÌtrico y citoquininas. TambiÈn se ha descrito una relaciÛn entre el peso
molecular de los exopolisac·ridos y la fuerza de activaciÛn de la respuesta inmune.
3. Agentes antiadhesivos: serÌa ˙til en tratamiento de heridas o cirugÌas. Se ha descrito que hay
polisac·ridos sulfatados de microalgas marinas que bloquean la adhesiÛn de microorganismos
patÛgenos, con lo que se plantea la posibilidad de emplearlos en terapias antiadhesivas.
4. Agentes con actividad anticoagulante: inicialmente su actividad anticogulantes estarÌa asociada con el
alto contenido de sulfato de los polisac·ridos. Sin embargo, se ha planteado la hipÛtesis de que la
actividad anticoagulante podrÌa verse afectada tanto por el contenido de residuos de sulfatos como
por la distribuciÛn o posiciÛn de los grupos sulfato y/o por configuraciones de la cadena del polÌmero.
5. Biolubricantes: los exopolisac·ridos de Porphyridium son m·s estables a altas temperaturas que la
mayor parte de lubricantes usados.
Los exopolisac·ridos de Porphyridium podrÌan ser buenos candidatos para sustituir al ·cido
hialurÛnico como biolubricantes y se empleado en tratamientos de artritis.
Asimismo, presentan caracterÌsticas reolÛgicas adecuadas.
6. Emulsionantes: los EPS de cianobacterias pueden ser relevantes para la eliminaciÛn de contaminantes
como el aceite porque disminuye la tensiÛn superficial dando un aumento de la solubilidad. Los EPS
gelificados en condiciones alcalinas pueden emplearse para eliminar contaminantes de efluentes
textiles.
Algunos ejemplos de cianobacterias utilizadas para la obtenciÛn de EPS: Aphanocapsa halophytica,
Cyanothece sp, Anabaena sp ATCC 33047 y Synechococcus sp.

3. BIOSÕNTESIS DE MAAs: COMPUESTOS FOTOPROTECTORES Y ANTIOXIDANTES

La sustancial pÈrdida de la capa de ozono estratosfÈrica y le incremento de la radiaciÛn UV en la superficie
terrestre ha aumentado el interÈs por la b˙squeda de compuestos naturales fotoprotectores.
Los amino·cidos tipo micosporinas (MAAS) son compuestos fotoprotectores que absorben radiaciÛn UV tanto
UV-A como UV-B, protege en el rango de 268 y 362 nm. Los MAAs son compuestos solubles en agua, que
consisten en cromÛforos de aminociclohexenona o aminociclohexenimina conjugados con sustituyentes
nitrogenados o sus aminoalcoholes.

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Los MAAs aporta protecciÛn frente a la radiaciÛn UV no sÛlo a los organismos productores, sino tambiÈn a
los consumidores primarios y secundarios de la cadena alimenticia.
El mecanismo de sÌntesis de MAAs no est· claro, pero si parece estar implicada la ruta del shikimato, por lo
que los animales no producen estos compuestos. La sÌntesis de MAAs est· restringida a bacterias,
cianobacterias, fitoplancton y macroalgas, pero no en animales que carecen de la ruta del shikimato.
Entre las especies de microalgas estudiadas que producen MAAs se encuentran: las cianobacterias Nodularia
spumigea, Nodularia b·ltica y Nodularia harveyana; y en microalgas eucariotas fundamentalmente son
miembros de Dinophyceae, Bacillariophyceae y Haptophyceae. Algunas especies de dinoflagelados tambiÈn
producen altas concentraciones de MAAs. Las mayores productoras de MAAs serÌan las micoralgas.
Adem·s, los MAAs tienen una alta actividad antioxidante eliminando aniones superÛxido e inhibiendo
peroxidaciÛn de lÌpidos resultantes de la producciÛn de ROS inducida por UV.

A. APLICACIONES COMERCIALES DE MAAs

1. Origen natural de Protextrem. Protextrem est· formulado, entre otros elementos, por un compuesto
a base de un extracto del alga roja Porphyra umbilicalis (Alga Nori), rico en amino·cidos tipo
micosporina. Esta partÌcula posee una acciÛn antirradicalaria y antioxidante, y adem·s tiene la
capacidad de absorber y bloquear las radiaciones ultravioletas UV para que no daÒen a las cÈlulas.
2. Helioguard 365 es otro producto que contiene amino·cidos tipo micosporina de Porphyra umbilicalis.

4. SÕNTESIS DE POLIC…TIDOS (METABOLITOS SECUNDARIOS BIOACTIVOS)

Los policÈtidos (polienos-polihidrÛxidos) son una importante clase de metabolitos secundarios de gran interÈs
en la industria farmacÈutica (ejemplo: antibiÛticos macrÛlidos).
Las microalgas producen y almacenan policÈtidos policÌclicos y policÈtidos de cadena abierta. En el
dinoflagelado Amphidinium sp se han identificado diferentes tipos de policÈtidos:
− PolicÈtidos cÌclicos de cadena larga presentan una estructura parecida a los macrÛlidos y se llaman
amfidinolidos.
− PolicÈtidos de cadena lineal que se llaman anfidininas (tipo A, C, D, E y F).
La mayor parte de estos compuestos tienen fuertes efectos tÛxicos y hay que tener atenciÛn al ser aplicados
en terapia humana.
▪ Los amfidinolidos citotÛxico A, B y C son antif˙ngicos: su forma de acciÛn es formar un poro para
aumentar la permeabilidad de iones a travÈs de la membrana por interacciÛn con la bicapa lipÌdica.
▪ Los amfidinolidos H y N muestran una potente citotoxicidad contra lÌneas tumorales, y se espera que
a partir de ellos se obtengan nuevas drogas antic·ncer. El amfidinolido H se une de forma covalente a
la actina del citoesqueleto.

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Otros policÈtidos de cadena larga de Amphidinium sp. adem·s de los amfidinolidos: luteofanoles y
colopsinoles.
▪ Las anfidininas (C, D, E y F) tienen actividad microbiana contra las bacterias y/u hongos.

5. INGENIERÕA GEN…TICA DE CIANOBACTERIAS PARA PRODUCIR ISOPRENO

El isopreno es un hidrocarbono vol·til a temperatura ambiente de cadena corta sintetizado a partir de
productos fotosintÈticos del ciclo de Calvin. El estrÈs por calor es un importante inductor.
PodrÌa ser interesante generar isopreno a partir de fuentes renovables, al ser un compuesto de interÈs
industrial para que no contribuya al cambio clim·tico o a otra degradaciÛn ambiental.
Hay dos rutas biosintÈticas que conducen a la biosÌntesis de isopreno:
− La ruta de ·cido mevalÛnico que tiene lugar en el citosol de eucariotas y archaeae.
− La ruta del metil-eritriol-4-fosfato (MEP), que es de origen procariota y que est· presente en los
plastos vegetales.
El isopreno es producido en muchos pl·stidos vegetales, pero es poco pr·ctico aislarlo de plantas verdes
debido al alto coste de la producciÛn. Sin embargo, las microalgas pueden crecer hasta alcanzar altas
densidades, dentro de un fotobiorreactor cerrado.
Synechocystis sp. PCC 6803 no presenta isopreno sintasa (IpS), pero sÌ expresa la ruta de MEP a travÈs de la
cual sintetizan una gran variedad de molÈculas del tipo terpenoides y la IPP isomerasa que cataliza
lainterconversiÛn del IPP y DMAPP. Entonces se ha transformado con la isopreno sintasa (IpS) de Pueraria
montana (kudzu, planta que pertenece a la familia de las Fabaceas). La expresiÛn de IpS estaba regulada por
un promotor de un componente del fotosistema II (psbA2).
Las compaÒias Glycos Biotechnologies Inc. y Solix BioSystems Inc han demostrado la posibilidad de obtener
isopreno a partir de aceites de algas.

TEMA 9. OBTENCI”N DE PRODUCTOS DE ALTO VALOR A—ADIDO 12

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TEMA 10. LAS MICROALGAS SON FUENTE DE

PIGMENTOS
El contenido y el tipo de pigmentos va a estar determinado por las condiciones de cultivo de las microalgas.
Por ejemplo, sabemos que la clorofila a est· presente en todas las algas, asÌ como el β-caroteno, pero la
proporciÛn entre los distintos pigmentos va a variar dependiendo de la intensidad de la luz y la carencia de
nutrientes.
En condiciones de baja intensidad de luz: aumentan los niveles de aquellos pigmentos cuya funciÛn primaria
es la recolecciÛn de luz (clorofilas, ficobilinas y carotenoides primarios).
En condiciones de alta intensidad de luz: aumentan los niveles de pigmentos con funciÛn fotoprotectora (β-
caroteno, astaxantina, zeaxantina…).
Para la producciÛn industrial β-caroteno se emplea Dunaniella salina y para astaxantina [Link] en
condiciones de alta intensidad de luz y carencia de nitrÛgeno.

1. APLICACI”N DE CLOROFILAS EN NUTRICI”N, TERAP…UTICA Y COSM…TICA

La clorofila presenta los m·ximos de absorciÛn en la zona del azul (400- 480nm)
y del rojo (600-690nm), que serÌa la regiÛn del espectro visible, y son de color
verde porque reflejan en la zona de dicho color.

El cromÛforo presenta un anillo de porfirina (tetrapirrol coordinado por

nitrÛgenos) con un ·tomo de magnesio (cabeza polar) y una cadena
hidrocarbonada formada por fitol (cadena de 40 carbonos que se une al cuarto
anillo de la porfirina). A travÈs de la cadena establece los complejos con
proteÌnas e interacciona con la bicapa lipÌdica. Los dobles enlaces son los
responsables de la absorciÛn de la luz por los electrones deslocalizados.

Tenemos diferentes tipos de clorofilas:

− La clorofila a est· presente en todas las algas y plantas terrestres,
incluyendo la cianobacteria procariota.
− Las plantas y las algas verdes contienen clorofila a y junto a Èsta, en
una cantidad menor, entre un tercio y la mitad, se encuentra la clorofila b.
− En lugar de clorofila b, las algas pardas, diatomeas y dinoflagelados
contienen junto a la clorofila a el tipo de clorofila llamada clorofila c, mientras
que las algas rojas contienen clorofila d.

En general, todos los pigmentos como caracterÌstica com˙n van a ser antioxidantes.

A. USOS POTENCIALES DE LAS CLOROFILAS

1. Efecto protector anticancerÌgeno de las clorofilas: tanto la hemoglobina como la clorofila presenta un
anillo de porfirina, sin embargo, a diferencia de la clorofila, la hemoglobina presenta un catiÛn de
hierro en el centro del anillo que es altamente reactivo. Este grupo hemo daÒa las cÈlulas epiteliales
de la superficie del colon aumentando la proliferaciÛn epitelial y dando lugar a un c·ncer de colon.
Adem·s de que estimula la peroxidaciÛn oxidativa (efecto negativo).
Las clorofilas inhiben los efectos cancerÌgenos inducidos por el grupo hemo. El mecanismo propuesto
para que la clorofila proteja es que Èsta bloquee los grupos hemo mediante la formaciÛn de un

TEMA 10. LAS MICROALGAS SON FUENTE DE PIGMENTOS 1

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s·ndwich/complejo hidrofÛbico hemo-clorofila y, por tanto, la generaciÛn de los radicales mediados

por el metabolismo del grupo hemo y los cambios inducidos por hemo en las cÈlulas epiteliales.

Para ver cÛmo de efectiva era la protecciÛn frente a la peroxidaciÛn lipÌdica por parte de las clorofilas
se alimentaron a ratas con distintos tipos de pienso. Se observÛ que la fuente natural de clorofila es
la que tiene protecciÛn frente a la peroxidaciÛn en comparaciÛn con el pienso de hemoglobina.

▪ Afecta a la absorciÛn de dioxinas: tienen un efecto positivo al evitar la absorciÛn o favorecer

la excreciÛn de dioxinas, que son compuestos clorados que se acumulan en las grasas de los
alimentos y son difÌciles de eliminar al tener una excreciÛn lenta. Las policlorodibenzodioxinas
(PCDD) y policlorodibenzofuranos (PCDF) estimulan la formaciÛn de c·ncer, inmunosupresiÛn,
hiperqueratosis (acumulaciÛn de queratina en las capas externa de la piel), toxicidad hep·tica
y teratogenicidad (malformaciones en el feto).
Datos recientes de la OMS muestran que las medidas introducidas a partir de los aÒos 80 para
controlar la liberaciÛn de dioxinas han dado como resultado una reducciÛn sustancial en la
ingesta de esos compuestos en los ˙ltimos aÒos. La OMS destaca que los beneficios de una
dieta balanceada, supera cualquier riesgo a partir de las dioxinas.
Un estudio sobre los h·bitos alimenticios en CataluÒa concluyÛ que est·n por debajo de las
cantidades tÛxicas permitidas. Se han hecho otros estudios en Huelva con el pescado de la
zona y ha salido lo mismo. Por ejemplo, en los salmones analizados del mar B·ltico sÌ hay
mayor nivel de dioxinas.
Como el pescado azul tiene m·s grasas y las dioxinas se acumulan en m·s grasas se concluye
que a un mismo nivel de exposiciÛn se acumulan en mayor intensidad en pescados azules.
▪ Reduce la absorciÛn de otros compuestos tÛxicos como aminas heterocÌclicas (halladas en
m˙sculo cocinado), hidrocarburos policÌclicos (presentes en alimentos ahumados y cocinados
a la parrilla) y la aflatoxina (un moho de cacahuete).
TEMA 10. LAS MICROALGAS SON FUENTE DE PIGMENTOS 2
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Las clorofilas forman complejos con los compuestos cancerÌgenos limitando su

biodisponibilidad.
2. La clorofila reduce olores corporales: la clorofila tiene acciÛn bactericida frente a ciertas bacterias
patÛgenas y causantes de mal olor en el tracto digestivo.
3. La clorofila repara tejidos daÒados: como en el tratamiento de ˙lceras o irritaciÛn digestiva al
presentar propiedades antiinflamatorias.
4. Clorofila a como colorante alimenticio: A. platensis es una importante fuente natural de clorofila a
para productos alimenticios, cosmÈticos y farmacÈuticos. Hay colorantes naturales como Èste y de
sÌntesis como las clorofilas sintÈticas.

2. APLICACI”N DE CAROTENOIDES EN NUTRICI”N, TERAP…UTICA Y COSM…TICA

Los carotenoides absorben en la zona del azul y del verde (350- 540nm) y presentan un color amarillo-naranja
en funciÛn del tipo de carotenoide.

El cromÛforo es un compuesto terpenoide derivado del isopreno, en concreto son tetraterpenos (terpenos de
40 carbonos). Son altamente insaturados contando con 9 o m·s dobles enlaces conjugados, y al igual que las
clorofilas son insolubles en agua.

Hay dos tipos:

− Aquellos que en los extremos tienen ˙nicamente sustituyentes hidrocarbonados. SerÌan los carotenos
(ejemplo: β-caroteno).
− Aquellos que tienen en los extremos sustituyentes oxigenados. SerÌan las xantofilas (ejemplo: luteÌna).

Podemos clasificar los carotenoides de la siguiente manera:

TEMA 10. LAS MICROALGAS SON FUENTE DE PIGMENTOS 3

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1. Carotenoides primarios: son componentes estructurales y funcionales del aparato fotosintÈtico

celular, asÌ que son esenciales para la supervivencia.
2. Carotenoides secundarios: son los producidos por las microalgas sÛlo despuÈs de la exposiciÛn a
estÌmulos ambientales especÌficos como situaciones de estrÈs. Se localizan en vesÌculas lipÌdicas.

Para poner a punto cual es la condiciÛn ambiental Ûptima para la producciÛn de un determinado pigmento se
hacen estudios donde se optimizan la temperatura, pH y salinidad. Se ha visto que la falta de nitrÛgeno, alta
salinidad y alta irradiaciÛn con alta temperatura pueden aumentar el contenido de carotenoides en las
microalgas. Esto ser· variable dependiendo con la especie que se quiera trabajar.

En la tabla se indican las temperaturas Ûptimas para la producciÛn de los diferentes pigmentos en diversas
especies:

Vemos como una diferencia de 5C puede afectar significativamente y de manera positiva a la producciÛn de
β-caroteno y astaxantina.

En cuanto al efecto de la intensidad y el color de la luz en la producciÛn de pigmentos:

En Spirulina platensis no hay mucha diferencia, pero

aun asÌ la primera condiciÛn serÌa m·s favorable para
la producciÛn de clorofila.

Las dos condiciones seÒaladas serÌan las condiciones

Ûptimas para clorofila y para β-caroteno.

Vemos como efectivamente varÌa en funciÛn de cual

es el pigmento que se quiere producir.

Respecto al pH Ûptimo para Spirulina spp. serÌa entre 8-11 y para Dunaliella salina serÌa 7-9.

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Por ˙ltimo, el efecto de la salinidad en la producciÛn de pigmentos:

Ejemplo: Chlamydomonas nivalis da lugar a la nieve color rojo (Watermelon snow) debido a que induce la
sÌntesis de pigmentos rojos para la protecciÛn frente a la luz UV. Esta microalga es conocida como alga de
nieve y crece en la zona Ant·rtica en la Època estival. Esta nieve presenta un aspecto mucho m·s lÌquido que
la nieve “normal”.

En esta tabla tenemos diferentes microalgas eucariotas y algunos ejemplos de carotenoides que se podrÌan
producir con estas microalgas:

A. β-CAROTENO
La diversidad de pigmentos que ofrecen las algas es mucho m·s alta que la de las plantas terrestres, entonces
muchos de ellos van a ser comunes, aunque tambiÈn algunos ser·n caracterÌsticos. Las algas presentan m·s
de 40 carotenos y xantofilas aisladas y caracterizadas.

El β-caroteno es provitamina A, entonces nuestro organismo a partir de β-caroteno puede sintetizar vitamina
A que la metaboliza en el hÌgado e intestino, con lo cual para nosotros el β-caroteno es una fuente importante
de vitamina A.

Muchas microalgas sintetizan vitaminas como provitamina A, vitamina B12, B6, biotina, etc. El β-caroteno es
quÌmicamente el carotenoide m·s simple y se encuentra en todas las algas y todas las plantas.

El alga verde halÛfila Dunaliella salina es la mejor fuente natural de β-caroteno y es el organismo fotosintÈtico
eucariota m·s halotolerante. Su capacidad de soportar grandes salinidades gracias a la sÌntesis de un osmolito
protector, el glicerol. El aumento del glicerol hace que disminuya el potencial de soluto y, en consecuencia, el
potencial hÌdrico de la cÈlula, haciendo que pueda tomar agua y nutrientes del medio extracelular en el que
se encuentra.

Dunaliella salina es una clorofÌcea a pesar de que presenta un color rojizo por la acumulaciÛn de β-carotenos,
en un estado no estresado o de no sÌntesis serÌa verde.
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Las cÈlulas de Dunaliella carecen de una pared celular de polisac·ridos rÌgida, est·n delimitadas por una
membrana plasm·tica el·stica cubierta por una superficie mucosa. Esta pÈrdida de rigidez es lo que hace que
pueda responder a cambios en el entorno de forma r·pida.
En condiciones de extrema salinidad, por encima de la saturaciÛn, Dunaliella pierde los dos flagelos y una
mucosa que le rodea, y la cÈlula se rodea con de una pared gruesa para formar una forma resistente a la
deshidrataciÛn.
Las estirpes de Dunaliella productoras de β-caroteno pueden acumularlo en m·s del 10% de su peso seco. En
respuesta a condiciones de estrÈs o de limitaciÛn de crecimiento (sal, temperatura, luz, y deficiencias
nutricionales) D. salina sintetiza y acumula β-caroteno en los glÛbulos de lÌpidos en los cloroplastos,
concretamente en el espacio intertilacoidal.
La cascada de seÒalizaciÛn en condiciones de estrÈs que induce finalmente la producciÛn de β-caroteno es la
siguiente:

El β-caroteno en Dunaliella puede ser sintetizado en forma de dos estereoisÛmeros el 9-cis y all-trans. El ratio
de estos dos depende de la intensidad luminosa y del tiempo de divisiÛn celular determinada por las
condiciones de crecimiento.
Dunaliella sigue la misma ruta biosintÈtica de carotenoides que otros organismos eucariotas y plantas con los
mismos sustratos, sin embargo, la reacciÛn de isomerizaciÛn de la forma 9-cis est· todavÌa sin identificar.
a) USOS POTENCIALES DEL β-CAROTENO
1. NutriciÛn:
− El β-caroteno es una fuente importante de vitamina A como suplemento en la dieta para los
humanos. El alga verde halofÌlica Dunaliella salina es la mejor fuente natural de β-caroteno.
− Se utiliza como colorante natural, aunque hay algunas formas sintÈticas. Hay distintas formas de
procesar el producto y se distribuye en el mercado en tres categorÌas:
▪ Extracto de β-caroteno: los extractos purificados de β-caroteno se venden como aceite vegetal
(1-20%) para dar color a diversos productos alimenticios. El β-caroteno purificado
generalmente est· acompaÒado de otros carotenoides de Dunaliella, predominantemente:
luteÌna, neoxantina, zeaxantina, violaxantina, criptoxantina, α-caroteno (15% de la
concentraciÛn de caroteno) y es comercializada bajo el nombre de mezcla de carotenoides

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(vitaminas o suplementos alimenticios). Parte de ese extracto se utiliza para darle color a
distintos productos alimentarios.
▪ Polvo de Dunaliella para consumo humano: los polvos secos de Dunaliella baja en sales en
forma de tabletas o capsulas [3-20 mg de mezcla de β-caroteno 9-cis y all-trans] por unidad.
Las c·psulas se revisten de az˙car y se empaquetan separadamente en aluminio o polietileno
para evitar la oxidaciÛn y extender la vida media del producto a temperatura ambiente.
▪ Dunaliella seca para uso alimenticio sin lavar las sales.
2. Salud:
− Se ha descrito que los β-carotenos y la fucoxantina tienen actividad antitumoral y previenen el
c·ncer (antioxidantes). Aunque son estudios con animales o cÈlulas tumorales, no es que revierta
el efecto negativo sino de mejora o detener el proceso.
− β-caroteno es un potencial protector de la piel porque es un excelente inactivador de oxÌgeno
singlete y ROS. Adem·s, es metabolizado a retinol, una molÈcula de seÒalizaciÛn relacionada con
el mantenimiento de la piel. Se emplea como aditivo en cosmÈtica.

B. XANTOFILAS
Todas las xantofilas sintetizadas por plantas superiores (violaxantina, anteraxantina, zeaxantina, neoxantina y
luteÌna) pueden ser tambiÈn sintetizadas por las microalgas. Sin embargo, estas poseen xantofilas adicionales,
ejemplos:
− Microalgas verdes: sintetizan loroxantina y cantaxantina.
− Algas pardas y diatomeas: sintetizan diatoxantina, diadinoxantina y fucoxantina.
− Dinoflagelados: sintetizan peridina y fucoxantina.
− Cianobacterias: sintetizan mixoxantina y mixoxantofilas.

La disipaciÛn termal de energÌa requiere de las xantofilas, particularmente zeaxantina y en menor medida
luteÌna. Nos quedamos con que las m·s importantes son fucoxantina y cantazantina.

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a) LUTEÕNA

En general la luteÌna, no solo las de microalgas, se acumula en la m·cula l˙tea de la retina junto con otros
pigmentos como son zeaxantina y mesozeaxantina. Esta m·cula es la que protege a los ojos de la luz azul
(ejemplo: pantallas de ordenadores), la cual puede provocar daÒos oxidativos. Una alimentaciÛn rica en
luteÌna puede evitar la degeneraciÛn macular, las cataratas y mejorar la salud de la piel.

Sirve como aditivo alimenticio (humana y animal), ya que la luteÌna proporciona color al plumaje de aves y es
ampliamente usado en avicultura para la pigmentaciÛn de los huevos y de la carne al depositarse en las grasas
animales. Por ejemplo, los huevos contienen normalmente de 0,3 a 0,5 mg de xantofilas totales y
aproximadamente la mitad es luteÌna.
La luteÌna puede encontrarse de distintas formas. En los huevos la luteÌna est· presente en su forma de alcohol
libre, mientras que en los vegetales de forma mayoritaria se encuentra en la forma esterificada (menor
biodisponibilidad). Hay formatos comerciales de luteÌna vegetal (FloralÆ), que ha sido saponificada para
eliminar los Èsteres para su mayor biodisponibilidad
Hay estudios que han demostrado que los niveles sÈricos de luteÌna son mayores despuÈs de la administraciÛn
de luteÌna libre en la dieta en comparaciÛn con la suplementaciÛn con luteÌna esterificada.
Ciertas microalgas clorofitas (Muriellopsis sp., Scedenesmus almeriensis o Chlorella protothecoides), acumulan
carotenoides (entre otros la luteÌna) como parte de su biomasa, lo que representa una alternativa a otras
fuentes vegetales. Adem·s, la luteÌna suele encontrarse en su forma no esterificada, lo que supone un gran
interÈs a la hora de la extracciÛn y biodisponibilidad.
Comercialmente, la luteÌna se obtiene de la microalga
Scenedesmus obliquus que tiene interÈs por su actividad
antioxidante, salud respiratoria y proteger la vista. Se han
hecho estudios con diferentes tipos de luz para observar
como afecta a la producciÛn de este pigmento. La mayor
producciÛn se obtiene con la luz roja o azul.
La luteÌna est· ampliamente presente en la dieta: zanahorias, espinacas, coles, nabos, guisantes verdes, maÌz,
brÛcoli, lechuga, huevos, piÒa, etc.
b) FUCOXANTINA

Tiene gran actividad antioxidante frente a la producciÛn y estabilizaciÛn de especies reactivas de oxÌgenos. Se
ha visto que en base a esta actividad tiene gran potencial anti-inflamatorio, se podrÌa utilizar como
anticancerÌgeno y tiene una actividad beneficiosa contra la obesidad y la diabetes.

− Antioxidantes: la fucoxantina y derivados (fucoxanthinol) presentan actividades antioxidantes que

aparecen atribuidos a eliminar los radicales libres y oxÌgeno singlete in vitro.
En estudios experimentales se observado que la fucoxantina secuestra eficazmente los radicales libres
generados quÌmicamente, como los del radical DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl). Este radical
cuando se reduce cambia de color.
− Antiobesidad y antidiabetes: en la obesidad la desregulaciÛn de la producciÛn adipocitoquina en el
tejido adiposo blanco (WAT) es inducida a travÈs de la acumulaciÛn de grasa excesiva e induce
resistencia a la insulina, lo que lleva a la diabetes tipo 2. Esta cantidad de tejido adiposo blanco se
puede atenuar con la fucoxantina afectando positivamente a la diabetes.
La fucoxantina induce la proteÌna de desacoplamiento mitocondrial 1 (UCP1) en el tejido adiposo
blanco de ratones obesos que normalmente se expresa en el tejido adiposo marrÛn (BAT). La
diferencia entre estos dos tejidos es que el marrÛn es rico en mitocondrias y muy caracterÌstica en los
reciÈn nacidos, ya que produce calor.

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Esta UCP1 desacopla lo que serÌa la oxidaciÛn de los ·cidos grasos de la sÌntesis de ATP dando lugar a
una energÌa que se libera y se disipa en forma de calor (termogÈnesis), comportamiento que por lo
general se expresa sÛlo en niveles bajos en WAT. Entonces es como si el tejido adiposo blanco se
comportara como el marrÛn. Adem·s, en los adipocitos marrones cl·sicos la exposiciÛn al frÌo es
inductor de UCP1 en el WAT.
Por lo tanto, los efectos antiobesidad de fucoxantina pueden estar relacionados con el
“pardeamiento” de los adipocitos blancos. No se convierten en BAT, pero se comportan como tales a
travÈs de la regulaciÛn positiva de la UCP1, lo que resulta en un aumento del gasto de energÌa en el
cuerpo.

Los ratones obesos se alimentan con fucoxantina y con un alimento

control. Se ve como se reduce el tejido adiposo blanco en
comparaciÛn con el control. Esta reducciÛn tiene un mecanismo
positivo sobre la diabetes al poder mejorar la sensibilidad a la insulina
que podrÌa ser por la represiÛn de las adipoquininas
proinflamatorias.

c) ASTAXANTINA

Este pigmento tiene un color rojizo que dar· el color a los crust·ceos, salmones y plumas de los flamencos, y
no presenta actividad provitamÌnica.

La clorofita Haematococcus pluvialis es considerada como la fuente que tiene mayor capacidad de acumular
astaxantina, pudiendo acumular astaxantina hasta 4-5% de su peso seco y junto con las levaduras (hongo
levaduriforme basidiomiceto) Xanthophyllomyces dendrorhous y Phaffia rhodozyma, son los microorganismos
empleados para su producciÛn a nivel industrial.

El cultivo de Haematococcus pluvialis es bastante delicado, muy sensible a contaminantes y velocidad de

crecimiento baja. Por ello se han hecho diferentes intentos para optimizar su producciÛn de astaxantina:
1. Modificando las condiciones de cultivo: en deficiencia de nitrÛgeno o aumentando la intensidad de la
luz.
2. Modificaciones genÈticas: se puede mejorar haciÈndola resistente al norflurazÛn (herbicida) mediante
la introducciÛn de una mutaciÛn del gen de la fitoeno desaturasa.
Otra forma es sobreexpresar el gen lcia que es un transportador de bicarbonato e introducir un gen
modificado de un represor tradicional de las proteÌnas LHCII, reduciendo el tamaÒo de antenas. Con
esto se consigue un mayor acceso a fuentes de carbono.

Han sido descritas tres formas de astaxantina en H. pluvialis: la astaxantina libre, monoÈsteres de astaxantina
y diÈsteres de astaxantina, de los cuales predominan los monoÈsteres de astaxantina.
La libre es particularmente susceptible a la oxidaciÛn, por lo tanto, en la naturaleza la astaxantina se conjuga
con proteÌnas o est· esterificada con uno o dos ·cidos grasos formando monoÈster o diÈsteres. En H. pluviales,
la astaxantina existe principalmente en su forma esterificada, en concreto en forma de monoÈster. Cuando
m·s grado de esterificaciÛn haya, m·s hidrÛfoba ser·.
La mayor parte de los carotenoides se encuentran predominantemente en la naturaleza como isÛmeros trans,
los cuales son m·s estables que los cis. Aunque la astaxantina existe principalmente como Èsteres de trans-

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astaxantina de ·cidos grasos, tambiÈn se detectan los Èsteres de cis-astaxantina en extractos de pigmentos
de algas.

Algunos autores han descrito que las cis-astaxantinas, especialmente el isÛmero 9-cis, podrÌan tener mayor
actividad antioxidante que los isÛmeros trans en la inhibiciÛn de especies reactivas de oxÌgeno (potencial
efecto neuroprotector para la enfermedad del Parkinson).

La mayor parte de astaxantina de sÌntesis quÌmica se encuentra como una mezcla de estereoisÛmeros y de
forma mayoritaria se produce como hidroxiastaxantina libre, en este aspecto es igual a la producida por
Xanthophyllomyces dendrorhous (levadura).
La principal ventaja que presenta la astaxantina esterificada es mayor estabilidad que la forma libre frente a
la oxidaciÛn. Sin embargo, cuando la trucha o el salmÛn se alimentan de microalgas ricas en astaxantinas
necesitan hidrolizar primero el enlace Èster para que Èstas estÈn biodisponibles, por ello lo ideal serÌa que
estuvieran en la forma libre.
En base a estudios realizados en salmÛnidos con H. pluvialis como fuente de pigmento en la alimentaciÛn, se
concluyÛ que lo ideal serÌa utilizar un cultivo de Haematococcus pluvialis lo m·s joven posible. Esto se debe a
que cuanto m·s viejo estÈ el cultivo, mayor cantidad de astaxantina en forma diÈster tendr·.
Para evitar su baja solubilidad, estabilidad o biodisponibilidad se han desarrollado diversas estrategias como
son: microencapsulaciÛn, incorporaciÛn en liposomas y nanoemulsiÛn. Por ejemplo, en la microencapsulaciÛn
se ha utilizado una matriz de quitosano que interacciona con molÈculas cargadas negativamente.
Es deseable que la astaxantina se incorpore bien al interior celular. Se ha descrito que el Èster de astaxantina
con ·cido n-octanoico (sintÈtica) podrÌa ser absorbida mejor que la forma extraÌda de H. pluvialis. A efectos
de color ambas astaxantinas son iguales.
La astaxantina es uno de los carotenoides con mayor capacidad antioxidante, es decir, todos los pigmentos
son antioxidantes pero la astaxantina es la que m·s. Su capacidad antioxidante es superior a β-caroteno (10
veces), zeaxantina, cantaxantina, vitamina C y vitamina E (α-tocoferol, 500 veces). Esta alta capacidad se debe
a su cadena de polieno, a sus dobles enlaces conjugados y a la presencia de grupos hidroxilo.
▪ USOS POTENCIALES
1. NutriciÛn: se utiliza como agente colorante alimenticio, como aditivo alimenticio para la industria
ganadera o en la coloraciÛn de p·jaros y especialmente en la acuicultura (salmÛn, truchas, crust·ceos).
2. Salud-usos medicinales: se usan para compuestos nutracÈuticos, tiene un papel antic·ncer, antidiabetes,
propiedades antiinflamatorias y efecto protector en un sentido amplio (Ûrganos, vasos sanguÌneos,
sistema nervioso o piel). Todo ello es consecuencia de su actividad antioxidante, lo que serÌa la
eliminaciÛn o estabilizaciÛn de radicales superÛxidos o evitar que se produzcan daÒos oxidativos. Sus
propiedades son atribuidas a interacciones fisicoquÌmicas con las membranas.
Asimismo, la astaxantina produce inmunoglobulinas mejorando la respuesta inmune ante antÌgenos y
estimuladores T-dependientes.
TambiÈn tiene actividad antiinflamatoria que podrÌa llevarse a cabo inhibiendo la producciÛn de Ûxido
nÌtrico. Algunos de los efectos antiinflamatorios son:
− La astaxantina reduce la producciÛn de O2.- y H2O2, que parecen estar mediado por la liberaciÛn de
calcio almacenado intracelularmente.
− Se induce las actividades superÛxido dismutasa y catalasa, y en paralelo desciende los daÒos
oxidativos en lÌpidos y proteÌnas.
− La astaxantina reduce la producciÛn de citoquinas proinflamatorias.
− Los resultados muestran tambiÈn que la astaxantina favorece la fagocitosis por neutrÛfilos. Capacidad
microbicida.
En cuanto a los efectos gastroprotectores, Helicobacter pylori causa ˙lceras, gastritis e incluso c·ncer de
estÛmago, y se ha visto que la astaxantina puede reducir la inflamaciÛn g·strica causada por dicha

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bacteria. TambiÈn protege contra la toxicidad del etanol y las drogas, ya que su consumo genera radicales
libres de oxÌgeno y induce la peroxidaciÛn de lÌpidos. La administraciÛn oral de astaxantina protege las
lesiones e inhibe el aumento de perÛxidos lipÌdicos en la mucosa g·strica.
Por ˙ltimo, se le atribuye actividad antidiabÈtica. En la diabetes las cÈlulas β-pancre·ticas que son las que
sintetizan la insulina dejan de funcionar y parece ser que la astaxantina puede mantener la funciÛn de
estas cÈlulas inhibiendo las ROS y los productos finales de glicaciÛn producidos en la diabetes. En los
ensayos realizados la astaxantina reduce el estrÈs oxidativo y disminuye la concentraciÛn de glucosa en
sangre. No se ha visto que se mejore la funciÛn o que se estimule, pero hay un efecto positivo en la
reducciÛn del estrÈs.
d) CANTAXANTINA
Determinadas microalgas acumulan cantaxantina y astaxantina en respuesta a deficiencias nutricionales u
otras condiciones de estrÈs, tales como deficiencia de nitrÛgeno y alta intensidad de luz. Entre estas microalgas
se encuentran algunas estirpes de Chlorella, Chlamydomonas, Scenedesmus, Ankistrodesmus, Coelastrum y
Dictyococcus. Ambos pigmentos se utilizan bastante en agricultura y las piscifactorÌas, aunque inicialmente se
utilizaba m·s la cantaxantina.
La cantaxantina es un aditivo alimentario, que tambiÈn tiene un efecto beneficioso al estimular la respuesta
inmune. Se puede depositar en la piel para utilizarse como bronceador quÌmico, pero dosis elevadas pueden
dar lugar a la apariciÛn de depÛsitos de pigmento en la retina dando una coloraciÛn amarilla a los ojos. La
cantidad aceptable recomendada para humanos es de 0,03 mg/kg de peso.

3. APLICACI”N DE ESCITONEMINA EN NUTRICI”N, TERAP…UTICA Y COSM…TICA

La escitonemina es determinada de ciertas cianobacterias y como es un pigmento que absorbe la luz
ultravioleta se ha utilizado en algunos procesos terapÈuticos, pero principalmente en cosmÈtica.

Los daÒos que puede generar la radiaciÛn UV son la formaciÛn de enlaces entre las cadenas del ADN y la
dimerizaciÛn de pirimidinas formado el dÌmero de ciclobutano pirimidina (CPD) y fotoproducto 6-4 pirimidina-
pirimidona. Estas lesiones pueden dar lugar a alteraciones de los procesos.

Las cianobacterias pueden corregir estas lesiones a travÈs de sus mecanismos de reparaciÛn: fotorreactivaciÛn
y reparaciÛn por escisiÛn de nucleÛtidos.
− FotorreactivaciÛn: se produce cuando una enzima fotoliasa (que contiene los cofactores diazaflavin y
flavina adenina dinucleÛtido (FAD)) utiliza la energÌa proporcionada por la luz azul para escindir la
lesiÛn de ADN.
− ReparaciÛn por escisiÛn de nucleÛtidos: se produce cuando se activa la endonucleasa de UvrABC y se
une a una lesiÛn de ADN. Una hebra de 12 nucleÛtidos se escinde del ADN y se retira. Una vez retirada,
la ADN polimerasa utiliza la cadena complementaria para resintetizar la cadena de ADN sin la lesiÛn
original.

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A pesar de la presencia de mecanismos de reparaciÛn del ADN, los efectos de la radiaciÛn UV en cianobacterias
serÌa perjudicial sin un mÈtodo adicional de protecciÛn. Dicho mecanismo de protecciÛn son las escitoneminas.
En el espectro de radiaciÛn electromagnÈtica y la zona de ultravioleta est·n los MAA (·cidos de tipo
micosporina) que tienen el m·ximo de absorciÛn en la zona del UV-A y UV-B, y la escitoneminas. Estos dos
compuestos son fotoprotectores de la radiaciÛn ultravioleta.

Entonces este pigmento, que no es un carotenoide, tiene una coloraciÛn amarilla-naranja y absorbe en la zona
UV-A, B y C.

Algunas estirpes de cianobacterias exclusivamente producen el pigmento

escitonemina en su vaina de exopolisac·ridos (cubierta). La biosÌntesis de la
escitonemina probablemente estÈ relacionada con derivados de la tirosina y
triptÛfano, y es conocido que ambos absorben radiaciÛn UV ambiental. Su
estructura es un homodÌmero de tipo indÛlico y es liposoluble.

En Nostoc punctiforme han identificado un cl˙ster de 18 genes asociados con

la biosÌntesis de escitonemina.
Si se estimula su sÌntesis por ultravioleta, los genes que codifican este pigmento lo expresan. Adem·s, la
temperatura tambiÈn tiene efecto sinÈrgico de manera que en conjunto con la UV hace que haya una mayor
producciÛn de escitonemina que si sumamos el efecto de cada factor por separado.

A. USOS POTENCIALES
1. Fotoprotector: act˙a como una pantalla de protecciÛn de las cianobacterias contra la radiaciÛn
ultravioleta. TambiÈn se ha demostrado que la escitonemina es suficiente para una protecciÛn sustancial
contra daÒos ocasionados por UV-C (su m·ximo de absorciÛn es 280 nm). Por tanto, en cosmÈtica es un
buen candidato para su utilizaciÛn como compuestos naturales de pantalla para radiaciÛn UV en humanos.
2. Usos terapÈuticos: inhibe la actividad quinasa en diversos mecanismos del ciclo celular, por lo que se cree
que se podrÌa usar en el tratamiento de afecciones crÛnicas como inflamaciones o proliferaciÛn celular. El
pigmento pÈptido cÌclico escitonemina A de Scytonema sp. est· siendo estudiado para su potencial uso en
drogas en estos aspectos.

4. APLICACI”N DE FICOBILINAS EN NUTRICI”N, TERAP…UTICA Y COSM…TICA

A continuaciÛn, tenemos el cromÛforo de las ficobilinas, lo que serÌa el grupo prostÈtico.

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Estos pigmentos accesorios solubles en agua son producidos por cianobacterias, glaucofitas, algas rojas
(rodofitas) y criptofitas.

Un organismo individual puede producir hasta tres ficobilinas diferentes. En algunas algas pueden modular un
proceso metabÛlico llamado adaptaciÛn crom·tica en la cual una forma u otra es preferencialmente
sintetizada de acuerdo con la calidad de la luz disponible.

Las microalgas empleadas en la producciÛn comercial de ficobiliproteÌnas son Spirulina y Phorphyridium

(ejemplos: Spirulina platensis y Phorphyridium cruentum).
La producciÛn de ficocianina en Arthrospira se puede favorecer cambiando las condiciones de intensidad de
luz:

A medida que se disminuye la intensidad se va aumentando la producciÛn de ficocianina, con lo cual la relaciÛn
entre ambas es inversa.

A. USOS POTENCIALES
1. InvestigaciÛn: se utilizan como marcadores fluorescentes en biologÌa celular (receptores, anticuerpos u
otras molÈculas bioactivas) para cultivos celulares y visualizaciÛn de tejidos. Debido a las propiedades del
espectro de absorbancia, la ficoeritrina se ha utilizado como un segundo color en los anticuerpos de
marcaje fluorescente (fluorescencia dorada frente a la fluorescencia roja de la ficocianina). La ficoeritrina
marcada con estreptavidina se puede utilizar para la detecciÛn de ADN y proteÌnas.
2. CosmÈticos: para dar color en productos como l·piz de labios o delineador de ojos.
3. AlimentaciÛn: se emplean como colorantes alimenticios. La Lina Blue (ficocianina comercializada) se utiliza
en chicles, sorbetes, golosinas, etc. La ficocianina y ficoeritrina obtenidos de S. platensis son empleados
como colorantes en productos alimenticios.
Adem·s de las propiedades colorantes, ficoeritrina tiene propiedades de fluorescencia de color amarillo y
este color fluorescente se utiliza para hacer piruletas, refrescos y bebidas alcohÛlicas. Las propiedades
fluorescentes no son del cromÛforo, sino de la proteÌna.
4. Salud-usos medicinales: las ficobilinas tienen una aplicaciÛn comercial en la industria farmacÈutica por su
actividad antioxidante La ficocianina obtenida de Aphanizomenon flos-aquae (AFA) ha mostrado una alta
actividad antioxidante. Tiene mayor actividad antioxidante que la vitamina C (20 veces superior) y que un
an·logo de la vitamina E (16 veces superior).

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En la siguiente tabla se recogen los pigmentos de interÈs que son producidos por distintas microalgas

La peridinina es un carotenoide exclusivo de los dinoflagelados con una estructura muy similar a la
fucoxantina. Es un fuerte antioxidante, se ha visto en estudios que es inhibidora de la peroxidaciÛn que puede
ocurrir en las cÈlulas del endotelio y tambiÈn puede ser un compuesto citotÛxico para las cÈlulas del c·ncer
de colon.

El valor de mercado de los carotenoides naturales es:

− β-Caroteno natural puede alcanzar un precio que oscila entre 215-2150 €/Kg.
− La astaxantina puede alcanzar un precio de 7150 €/Kg (la astaxantina de sÌntesis quÌmica tiene un
precio de 2500 $/Kg
− Las ficobilinas naturales pueden alcanzar un precio que oscila entre 215-1790 €/Kg.
El ComitÈ de Expertos de la FAO/OMS estableciÛ en Aditivos Alimentarios una ingesta diaria admisible de 0-5
mg/kg de peso corporal de la suma de carotenoides utilizados como aditivos de color.
La astaxantina est· aprobada como colorante de alimentos para usos especÌficos en la alimentaciÛn de los
animales y los peces por la FDA.

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Est· aprobada como aditivo para piensos en la UE para el salmÛn y la trucha a 100 mg kg-1 alimento completo
y se le da el n˙mero E161j.
La FDA ha modificado recientemente la normativa de aditivos de color para permitir el uso seguro de
astaxantina dimetil disuccinato en alimentos para peces diseÒado para mejorar el color rosa/rojo de salmÛn y
pescado para el consumo humano.
La clorofila (E140) y clorofilina (E141) se permiten como colorantes alimentarios. Las ficobiliproteÌnas
actualmente no requieren de autorizaciones previas a la comercializaciÛn por parte de la FDA.

TEMA 10. LAS MICROALGAS SON FUENTE DE PIGMENTOS 15

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Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

TEMA 11. LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N

1. EL EJEMPLO DE LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N: ACUICULTURA,
GANADERÕA Y EN LA ALIMENTACI”N HUMANA
A. EL EMPLEO DE LAS MICROALGAS EN ACUICULTURA
En la acuicultura se utilizan las microalgas para cultivas las larvas de los peces y crust·ceos. Su uso en
acuicultura puede ser de forma directa o indirecta:
− Para el consumo directo de moluscos o crust·ceos (camarÛn peneido).
− Se usa indirectamente como alimento para la presa viva, principalmente rotÌferos (zooplancton),
copÈpodos (pequeÒos crust·ceos, en ocasiones microscÛpicos) y Artemia nauplii (pequeÒos
crust·ceos-camarÛn), que a su vez son usados para la alimentaciÛn de larvas de peces y crust·ceos.

La dieta de moluscos bivalvos depende del aporte o utilizaciÛn de microalgas marinas durante todo su ciclo de
vida.

Cada vez se est·n utilizando m·s las microalgas en acuicultura, de hecho, muchas piscifactorÌas tienen su
propio sistema de cultivo de microalgas que se abastece a partir de un biorreactor.

Los gÈneros m·s importantes utilizados son: Isocrysis galbana, Tetraselmis suecica, Phaeodactylum
tricornutum, Thalassiossira weisflogli y Nannochloropsis gaditana.

En cuanto a especies en funciÛn del cultivo se emplea unas m·s u otras, o incluso en combinaciones.

TEMA 11. LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N 1

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En esta tabla observamos que microalgas se emplean en funciÛn de si el cultivo es molusco, crust·ceo o
rotÌferos:

Los principales motivos del empleo de microalgas en los cultivos que se desarrollan en acuicultura son:
1. Son importantes porque van a hacer que el producto que obtengamos tenga una mayor calidad,
haciendo que el cultivo tenga mayor desarrollo, crecimiento, una mejor supervivencia y resistencia a
enfermedades. Para un mejor balance nutricional a veces se emplea una mezcla de cultivos de
microalgas en pienso para de este modo obtener:
− Un buen balance de proteÌnas porque a diferencia de los cereales, las proteÌnas de las microalgas
son bastante completas por lo que se obtiene un buen balance cuando Èstas se emplean como
alimento.
− Contenido adecuado de vitaminas.
− ¡cidos grasos poliinsaturados que en funciÛn de la especie que se utilice se va a obtener mayor o
menor proporciÛn. Por ejemplo: eicosapentaenoico (EPA), ·cido docosahexaenoico (DHA) y ·cido
araquidÛnico (AA). Este enriquecimiento en ·cidos grasos poliinsaturados de cadena larga
garantiza o favorece que haya una mayor supervivencia y crecimiento durante las primeras etapas
de la vida de los organismos marinos.
2. Aportan los pigmentos que necesitan las especies en cautividad como son los salmÛnidos (salmones y
truchas), camarones, langosta y dorada. Esta suplementaciÛn de pigmentos de carotenoides en su
dieta es para:
− Obtener su caracterÌstico color.
− Los carotenoides (astaxantina y cantaxantina) tienen beneficios en la salud del animal, ya que
promueven el desarrollo de las larvas y el crecimiento en los peces y camarones cultivados, lo que
supone un efecto positivo en la respuesta inmune y frente al estrÈs oxidativo.

Se propone un mÌnimo de 10 mg de astaxantina o cantaxantina por kilogramo de la dieta para los peces y
crust·ceos. TambiÈn se han descrito beneficios por suplementaciÛn de carotenoides en peces no
salmÛnidos como la carpa y tilapia.

3. Las microalgas pueden prevenir el ataque de patÛgenos. Cada vez est· m·s restringido el uso de
antibiÛticos en piscifactorÌas, entonces utilizar microalgas es una forma de actuar como organismos
probiÛticos para preservar que no se desarrollan organismos daÒinos, bacterias y patÛgenos que
afecten a los cultivos.
− Se ha descrito que el ·cido eicosapentaenoico en altas concentraciones es capaz de inhibir el
crecimiento de Vibrio fischeri, presente en cultivos de peces damisela. La microalga marina

TEMA 11. LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N 2

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Isochrysis galbana y Diacronema vlkianum (Haptophyceae) producen ·cidos grasos de cadena

larga poliinsaturados (LCPUFA), principalmente ·cido eicosapentaenoico (EPA) y tambiÈn ·cido
docosahexaenoico (DHA), que se acumulan como gotitas de aceite en cuerpos lipÌdicos. Estas
microalgas han sido utilizadas para alimentar especies para la crÌa comercial de muchos animales
acu·ticos, particularmente larvas y moluscos, crust·ceos y diversas especies de peces.
− Porphyridium cruentum produce un exopolisac·rido que evita que Vibrio campbellii, Vibrio ordalii
y Streptococcus saprophyticus (bacterias patÛgenas de peces) se adhieran a las cÈlulas
hospedadoras (actividad antibacteriana).
− Las microalgas se utilizan para mantener las aguas limpias y mejorar su calidad, ya que tienen un
efecto positivo en el crecimiento y supervivencia de las larvas. Por ejemplo, utilizando
Nannochloropsis oculata junto con el cultivo de langostas se mantienen las aguas limpias.
Aparentemente excretan compuestos que inhiben la actividad de microorganismos patÛgenos y
adem·s act˙an en la eliminaciÛn de compuestos nitrogenados.
− Algunos estudios en peces parecen demostrar que Arthrospira platensis tiene propiedades
estimuladoras del sistema inmune, asÌ como del crecimiento. Lo que implicarÌa un menor uso de
antibiÛticos.
− Las microalgas dentro de la dieta pueden aumentar la velocidad de ingestiÛn estimulando la
secreciÛn de determinadas enzimas digestivas en los peces. Esto da lugar a un incremento del
crecimiento y la supervivencia, asÌ como de la calidad del pescado que consumimos.

B. EL EMPLEO DE LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N DEL GANADO

La mayor producciÛn de microalgas es para acuicultura, de forma que hay mucho menos en ganaderÌa. Aun
asÌ, dentro de la ganaderÌa donde mayor producciÛn de microalgas hay es en la parte aviar.

Las algas que se usan en ganado son:

− Microalgas: Chlorella, Tetraselmis, Spirulina, Nannochloropsis, Nitzchia, Navicula, Chaetoceros,
Scenedesmus, Haematococcus, Crypthecodinium.
− Las macroalgas: Laminaria, Gracilaria, Ulva, Padina y Pavonica pueden ser utilizadas para la
alimentaciÛn tanto de animales acu·ticos y terrestres.
PequeÒas cantidades de biomasa microalgal puede afectar positivamente la fisiologÌa de animales por la
respuesta mejorada inmune causando la promociÛn de crecimiento, la resistencia a enfermedad, la acciÛn
antiviral y antibacteriana, la funciÛn mejorada visceral, el funcionamiento reproductivo y el control de peso.
Los mayores expertos europeos que trabajan actualmente en el desarrollo de microalgas como fuente proteica
alternativa y sostenible para alimentaciÛn animal.
a) AVES DE CORRAL

Como hemos mencionado, las microalgas son una forma de aportar proteÌnas y pigmentos, los cuales son muy
apreciados para los cultivos de aves de campo.

Se han empleado diversas microalgas en la alimentaciÛn de aves de corral como fuente de proteÌnas: Chlorella,
Scenedesmus y Spirulina, el porcentaje depende de la especie de alga (normalmente hasta 10%).
Los carotenoides o fuentes de pigmentos que se utilizan en los piensos para el crecimiento de aves de corral
pueden proceder de los cereales/fuentes vegetales o pueden ser exÛgenos.

Para propÛsitos de pigmentaciÛn de los pollos y yemas, la dieta debe contener una fuente carotenoides.
Tradicionalmente fueron usados alfalfa deshidratada y el maÌz amarillo, pero sin embargo ahora, se utiliza la
materia prima m·s econÛmica para proporcionar altas dietas de energÌa y controlar el contenido de pigmento
por la suplementaciÛn apropiada.

TEMA 11. LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N 3

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El efecto de los carotenoides presentes en Chlorella vulgaris sobre la yema de huevo es comparable al de
pigmentos comerciales sintÈticos. La microalga Haematococcus tambiÈn puede ser utilizada como colorante.
Los pigmentos amarillos m·s usados en avicultura son:
1. Etil-Èster de un ·cido apocarotenÛico, conocido genÈricamente como apoÈster, es una molÈcula
de origen sintÈtico de color amarillo-naranja.
2. LuteÌna: es una molÈcula de color amarillo presente en varios vegetales como la alfalfa, los granos
de maÌz, la flor de cempas˙chil, o microalgas.
3. Zeaxantina: es una molÈcula de color naranja presente en varios vegetales como la alfalfa, los
granos de maÌz, la flor de cempas˙chil, etc.
Respecto a los pigmentos rojos m·s usados en avicultura, para el pollo de engorde tambiÈn se emplea la
cantaxantina. Antes del 2003 el contenido m·ximo permitido era de 80 miligramos por kilo de pienso, pero
desde enero de 2003:
− 25 miligramos/kg en alimentos para salmÛnidos y pollos de carne.
− 8 miligramos/kg en piensos para gallinas ponedoras (la dÈcima parte).
En los estudios con pollos alimentados con la microalga roja Porphyridium sp. la biomasa (al 5 % y 10 % en la
dieta) mostrÛ un nivel de colesterol de sangre reducido, a pesar de que no hubo ninguna diferencia del peso
de cuerpo, el n˙mero de huevo ni el peso de huevo.
Los huevos de dichas gallinas adem·s de presentar niveles menores de colesterol mostraron un incremento
en los niveles de ·cido linoleico, de ·cido araquidÛnico y de carotenoides, con una coloraciÛn m·s oscura de
la yema con respecto a los huevos de gallinas control como consecuencia de los altos niveles de carotenoides
(sin adiciÛn de la microalga).
El uso de suplementos con Schizochytrium en la avicultura destinada a la puesta de huevos, incrementÛ el
contenido de DHA (·cido docosahexaenoico) en el huevo.
A continuaciÛn, tenemos una tabla donde se observa el contenido de DHA en huevos de gallina que tuvieron
una dieta en la que habÌa microalgas:

Los valores de DHA incrementan a medida que lo hace el porcentaje de microalgas contenido en la dieta.
Se hizo un estudio sobre la alimentaciÛn de pollos con Chlorella vulgaris (CV), Spirulina platensis (SP) y
Amphora coffeaformis (AC). Los resultados mostraron:
− Una ganancia de peso mejor con AC y CV).
− Aumento de amino·cidos esenciales (mejor con AC y SP).
− Aumento de ·cidos grasos esenciales (mejor con AC y SP).
− El descenso del crecimiento microbiano aumentÛ el contenido de ·cidos grasos en el m˙sculo
mamario (pechuga) (mejor con AC y SP).
− Aumento de la actividad superÛxido, menor contenido de malodialdehÌdo (MDA) en m˙sculo mamario
(pechuga) (en AC, CV y SP).
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Teniendo en cuenta estos resultados podemos concluir que Amphora coffeaformis serÌa la mejor candidata
seguida de Spirulina platensis.
b) CERDOS
Chlorella, Scenedesmus y Spirulina fueron utilizadas para substituir en su dieta la soja en concentraciones hasta
el 10 %, sin diferencias de la eficacia de conversiÛn de comida (FUENTE DE PROTEÕNAS).
Los autores recomiendan 25% de biomasa de algas, aunque otros autores llegan hasta 33%.
c) RUMIANTES
DeberÌa esperar que los rumiantes representen el grupo de animales m·s convenientes para alimentarse por
algas, ya que estos animales son capaces de digerir incluso material de algas no procesado. Sin embargo, este
grupo de animales tampoco tiene muchos estudios debido a la gran cantidad de algas que se requieren para
realizar experimentos de alimentaciÛn apropiados con esta especie de animal.
Con ovejas y corderos sÌ se ha hecho alg˙n trabajo, concluyendo que no pueden digerir eficientemente la
fracciÛn de hidrato de carbono de las algas (Chlorella, Scenedesmus obliquus y Scenedesmus quadricauda). La
mejor digestibilidad fue obtenida con Spirulina (al 20% en la dieta de las ovejas). La ventaja es que la leche
que se produce tenÌa menos grasas saturadas, teniendo asÌ m·s interÈs comercial.

C. ALIMENTACI”N HUMANA
La composiciÛn nutricional de las microalgas, al igual que las plantas superiores, est· constituida
principalmente por carbohidratos, lÌpidos y micronutrientes como son vitaminas, antioxidantes y elementos
traza. La composiciÛn especÌfica varÌa en funciÛn de la especie y de cÛmo se haga el cultivo. Por ejemplo,
Chlorella vulgaris presenta un contenido de proteÌnas tanto o m·s que una fuente rica en proteÌnas que
utilicen los veganos.
Las microalgas:
− Presentan amino·cidos esenciales: se ha demostrado que las proteÌnas
− Tienen vitaminas y elementos traza:
− Deben proceder de aguas limpias porque tienen capacidad de adsorber y absorber muchos
compuestos tÛxicos. Por eso en las microalgas debe ser analizada la presencia de compuestos tÛxicos,
·cidos nucleicos o metales pesados de manera previa a su comercializaciÛn.
− Otra consideraciÛn a tener en cuenta es su digestibilidad. Las microalgas tienen una pared celular por
lo que si hay un proceso de liofilizaciÛn o una rotura de la pared no hay problema, pero si tenemos el
producto de microalgas entero en sÌ puede dar lugar a problemas de digestibilidad en un muy alto
porcentaje.
En la tabla siguiente se recogen algunas algas que se han comercializado para su consumo humano. El consumo
humano de biomasa de microalgas se restringe a unas pocas tasas.

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Arthrospira y Aphanizomenon flos-aquae son cianobacterias, mientras que Chlorella y Dunaliella salina son
clorofÌceas. Adem·s de las de la tabla, la diatomea Odontella aurita tambiÈn tiene permiso comercial, asÌ como
Clamydomonas en algunos paÌses. Hay m·s comercializados para el uso animal que para el consumo humano.
Algunos formatos y productos son:
− SpirulinaPowder: la espirulina es un alga de color azul que com˙nmente crece en lagos y estanques
de agua dulce. Se considera una proteÌna completa, ya que contiene un equilibrio ideal de todos los
amino·cidos esenciales, y el polvo de espirulina es inmensamente m·s digerible que otras fuentes
ricas de proteÌnas como la carne roja e incluso la soja.
− Chlorella: alga muy rica en proteÌnas, vitaminas y minerales con gran cantidad de clorofila. Es un eficaz
desintoxicante hep·tico y depurador sanguÌneo. Elimina toxinas, pesticidas y metales pesados
absorbidos con los alimentos.
− β-caroteno y Dunaliella salina 90 perlas.
− Klamath Blue Green Algae (Aphanizomenon flos-aquae).
Otros productos comerciales de microalgas son:

Spirulina platensis tiene muchÌsimas aplicaciones, es una de las que m·s formatos y utilidades presentan.
− Presenta alto contenido de ·cidos grasos.
− Se produce industrialmente.
− Tiene principios activos como polisac·ridos, ficocianina, ·cido γ-linolÈnico, antioxidantes, β-caroteno
y minerales como calcio y magnesio.
AquÌ tenemos diferentes funcionalidades que
podemos obtener de distintos compuestos de
diferentes microalgas:

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Las microalgas son fuente de diferentes principios activos de valor:

− ProteÌnas para alimentaciÛn humana y pienso para ganado.
− LÌpidos poliinsaturados.
− Clorofila.
− Carotenoides: β-caroteno a partir de Dunaliella salina y luteÌna a partir de Scenedesmus almeriensis.
− Pigmentos (FicobiliproteÌnas).
− Polisac·ridos inmunoestimulantes: Chlorella y Spirulina spp.
− PÈptidos antihipertensivos: Chlorella y Spirulina spp.
− Biomasa celular para acuicultura: Tetraselmis e Isochrysis spp.
En esta gr·fica vemos las especies que se han utilizado bastante de microalgas y macroalgas. Vemos como a
lo largo de los aÒos ha ido creciendo mucho Spirulina en cuanto a otras producciones y sigue en aumento.
Spirulina serÌa la especie m·s explotada en su incorporaciÛn en los nuevos productos lanzados al mercado
durante los cinco ˙ltimos aÒos, seguida a amplia distancia de la Chlorella, Kelp, Dulse y la Alga roja.

Dulse es Palmaria palmata y en los paÌses nÛrdicos se utiliza desde hace muchos aÒos. Se emplea frita como
una patata o seca como potenciador del sabor. SerÌa un sustituto de los potenciadores artificiales como es el
glutamato. Los celtas y vikingos usaban esta alga contra el escorbuto gracias a su gran cantidad de vitamina C.
Algunos de los productos que se han desarrollado con Spirulina y algunos de los paÌses que los han producido
son:

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Estado Unidos y Reino Unido est· en cabeza en este tipo de producciones siendo los principales productores.
Algunos productos comerciales de Spirulina son:

Algunas de las empresas con interÈs en este tipo de producciones son:

− Seaweed: cultivo de Spirulina sp y producciÛn de bioestimulantes de uso agrÌcola.
− FeyeCon: producciÛn de omega 3 de consumo humano a partir de microalgas.
− CleanAlgae: producciÛn de fitodietas de uso en acuicultura.
− Biomar: producciÛn de nutracÈuticos a partir de microalgas.
− BONNYSA: cultivo de microalgas asociados a explotaciones hortofrutÌcolas tradicionales.
− Aurantia: producciÛn de biodiÈsel a partir de microalgas.
− BTM: producciÛn de astaxantina y carotenoides de consumo humano.

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Aunque generalmente encontramos las microalgas en forma de tabletas o polvos, se est· creando un nuevo
sector para los productos de microalgas:
− Bebidas saludables de Chlorella. Se ha descrito que esta microalga tiene un factor de crecimiento que
aparece dentro de sus caracterÌsticas comerciales en muchos productos.
− Extractos de aceites enriquecidos con carotenoides de Dunaliella en forma de c·psulas.
− Extracto de CO2 lÌquido de Spirulina. TambiÈn en forma de c·psulas antioxidantes.
TambiÈn se ha visto que Spirulina adem·s de para el cultivo y efectos probiÛticos, tiene efectos prebiÛticos
favoreciendo el crecimiento de determinadas bacterias beneficiosas del intestino (lactobacilli). Por ello puede
ser incorporada a productos alimenticios como pastas, galletas, pan o yogurts para aumentar las
caracterÌsticas nutricionales.
Algunos ejemplos serÌan:
1. Su incorporaciÛn en aceite de oliva virgen provoca un aumento del contenido de β-caroteno y luteÌna
considerablemente, asÌ como la estabilidad oxidativa al inhibir la peroxidaciÛn.
Lo que se hace es aÒadir extractos ricos en carotenoides de Scenedesmus almeriensis a aceites de oliva
virgen extra a diferentes concentraciones con la intenciÛn de generar un producto con una alta
capacidad antioxidante. Se produjo un cambio en el color de los aceites convirtiÈndolos en naranja-
rojo, pero los ·cidos grasos y tocoferoles del aceite no se vieron afectados. FaltarÌa el an·lisis de la
estabilidad de este tipo de aceites durante el almacenamiento y durante el proceso culinario (tiempo,
temperatura y exposiciÛn a la luz).
2. Su incorporaciÛn a emulsionantes con el fin de aportar color y ver la estabilidad que tendrÌa frente a
la oxidaciÛn en el tiempo. Para ello se utilizaron concenraciones crecientes de Haematococcus pluvialis
(produce astaxantina) y Chlorella vulgaris (produce cantaxantina). Parece que la ataxantina mantiene
mejor la estabilidad del color frente al tiempo que el aporte de cantxantina debido a que la primera
presenta mayor capacidad antioxidante.
TambiÈn se pueden aportar microalgas con el objetivo de mejorar el sistema inmunolÛgico utilizando
Chlorella y Spirulina.
3. Su incorporaciÛn en galletas fue con el fin de aportar color y reforzar el sistema inmunolÛgico.
− Para colorear las galletas se fue aumentando el contenido de Chlorella vulgaris y se vio que a partir
del 1% ya no aumentaba m·s el color.
− Para reforzar el sistema inmunolÛgico (tambiÈn con Chlorella y Spirulina) uno de los proyectos que
se desarrollÛ fue Inmugal, financiado por el Ministerio de Ciencia e InnovaciÛn (MICINN) a travÈs
del programa Profit de Centros TecnolÛgicos para la InvestigaciÛn Aplicada y Programada de
Proyectos de Desarrollo Experimental (PROFIT). Ha tenido una duraciÛn de dos aÒos y ha contado
tambiÈn con la colaboraciÛn de AlgaEnergy. Consiguieron desarrollar prototipos de chocolates,
salsas sopas, barritas energÈticas, preparados de pescado y snacks con polisac·ridos obtenidos de
las microalgas para nuestra alimentaciÛn y la acuicultura.
Para ello optimizan el cultivo de las microalgas a travÈs del cultivo de bajo coste en sistemas de
producciÛn cerrados y reduciendo un 25% su tiempo de cultivo.

2. MICROALGAS COMO FUENTE DE ¡CIDOS GRASOS (OMEGA 3)

Las microalgas son una fuente de donde obtener omega 3. En particular las microalgas marinas son una
excelente fuente de ·cidos grasos poliinsaturados esenciales de la serie omega 6 (n-6) como los ·cidos γ-
linolÈnico (GLA), el ·cido araquidÛnico (AA), y de la serie omega 3 (n-3) los ·cidos eicosapentaenoicos (EPA) o
el ·cido docosahexaenoico (DHA).

Cada vez hay m·s interÈs en incorporar en la dieta alimentos ricos en omega 3 por los beneficios que tiene en
la salud. De hecho, un alto porcentaje (hasta 25%) de la pesca o producciÛn de peces se utiliza para la
obtenciÛn de productos de omega 3. Estos ·cidos grasos previenen la arterioesclerosis, enfermedades
coronarias de corazÛn y alivian problemas inflamatorios como la artritis.

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Actualmente una fuente principal comercial de ·cidos grasos de cadena larga omega-3 para la dieta son los
aceites presentes en el pescado fresco. Sin embargo, sus problemas en la estabilidad y olor hacen que estos
aceites no sean apropiados para su empleo como aditivos o suplementos alimenticios. Estos problemas no
ocurren con las microalgas, lo que supone una ventaja.
El aceite de algas es una fuente de los ·cidos grasos omega-3: ·cido eicosapentaenoico (EPA) y ·cido
docosahexaenoico (DHA).
− Algunas algas son ricas en EPA como Nannochloropsis sp. y Spirulina, pero el aceite de microalgas rico
en EPA es todavÌa limitado.
− El DHA obtenido de algas est· disponible comercialmente y tiene efectos beneficiosos similares a los
de los aceites de pescado. Se comercializa el aceite de algas unicelulares como la Crypthecodinium
cohnii y Schizochytrium sp. (el consumo de este ·cido graso podrÌa influir positivamente para evitar el
deterioro que causa el Alzheimer (CientÌficos de la Universidad de California).
− El DHA obtenido de algas una fuente adecuada. Podemos obtener DHA por conversiÛn de ALA
procedente de fuentes como son las semillas de lino, para ello el cuerpo tiene que realizar dos
conversiones enzim·ticas para obtener DHA de ALA (·cido alfa-linolÈnico, otro ·cido graso omega-3).
Aunque el organismo puede generar DHA a partir de ALA, el grado de conversiÛn es reducido, por lo
que es difÌcil obtener la cantidad recomendada de 220 mg diarios de DHA. El ALA es un isÛmero del
omega 6 γ-linoleico (gla).
En 2018 se identificaron nuevas cepas de microalgas diatomeas de los fiordos ·rtico y noruego con alto
contenido en ·cidos grasos omega-3 (EPA). Actualmente el mercado de ·cidos grasos omega-3 es un mercado
en aumento, ya que serÌa una opciÛn para veganos y vegetarianos para incorporar omega-3 en la dieta.
Otra posibilidad que se ha estudiado es la de obtener productos enriquecidos en omega-3. Por ejemplo, se
pueden incorporar en galletas para hacerla ricas en ·cidos grasos poliinsaturados mediante el uso de Isochrysis
galbana (se aÒadiÛ biomasa entre 0,1-3%). Isochrysis galbana contiene altos niveles de ·cidos grasos de
cadena larga omega-3, concretamente EPA y DHA. El perfil de los ·cidos grasos de las galletas est· relacionado
con los de la mantequilla que son principalmente saturados (60%) y monoinsaturados (30%). Con la adiciÛn
de esta microalga se consiguiÛ mejorar la composiciÛn nutricional de las galletas, la textura y mantener la
estabilidad.

Las microalgas son una fuente de PUFAs, lo cuales tienen muchas aplicaciones:
− Como aditivos para la leche de fÛrmula para lactantes.
− En la alimentaciÛn de pollos para producir huevos enriquecidos.
− Como fuente de ·cidos grasos omega-3.

Actualmente, el ·cido docosahexaenoico (DHA) es el ˙nico PUFA de algas que est· disponible comercialmente.
Los extractos de algas todavÌa no son fuentes competidores de otras fuentes del ·cido eicosapentaenoico
(EPA), γ-linolÈnico (GLA), y ·cido araquidÛnico (AA).

Otros usos de las microalgas no relacionados con la alimentaciÛn es la construcciÛn de edificios urbanos, de
forma que todas las cristaleras/ventanas son fotobiorreactores con su sistema de burbujeo, de entrada y salida
de medio nutritivo, de recogida de microalgas para su posterior procesamiento, etc.

3. LA UTILIZACI”N DE LAS MACROALGAS EN LA ALIMENTACI”N Y EN LA SALUD

HUMANA/ANIMAL
Los ficocoloides de macroalgas son de alto interÈs comercial. Los ficocoloides son polisac·ridos de alto peso
molecular formados por polÌmeros de unidades de az˙car. Son principalmente componentes estructurales de
la pared celular de las algas.

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En base a su pigmentaciÛn las algas marinas se pueden clasificar en tres grupos:

Nos vamos a centrar principalmente en las dos primeras.

A. POLISAC¡RIDOS DE PHAEOPHYTA (ALGAS MARRONES/PARDAS)

a) ALGINATO

Es un polisac·rido lineal formado por subunidades de ·cido-β-D-manurÛnico y ·cido-α-L-glucurÛnico. Es el

polisac·rido de pared celular m·s abundante de las algas pardas. TambiÈn recibe el nombre de algina o ·cido
algÌnico.

Se emplea mucho en la industria alimentaria y farmacÈutica debido a su capacidad de formar geles y de quelar
iones met·licos. Por ejemplo, en alta cocina se utiliza para hacer las famosas esferificaciones.

Son sustancias gelificantes que tienen la capacidad de convertir un lÌquido en un gel. Por ello se emplea para
la tinciÛn de textiles o como espesantes y estabilizantes.

Como curiosidad, las algas m·s jÛvenes tienen menor contenido de alginato que las algas maduras. La masa
molecular del alginato puede variar hasta 100.000 g/mol dependiendo del tipo de alga, por ejemplo, Laminaria
japÛnica tiene un alto peso molecular. Este alginato se puede hidrolizar en funciÛn de cÛmo interese usarlo
comercialmente.

El oxÌgeno degrada con facilidad el alginato por lo que hay que preservar las algas secas durante su
almacenamiento y procesado, ya que puede disminuir su viscosidad. Adem·s, la forma ·cida es la menos
estable, mientras que la sal sÛdica es la m·s estable. En disoluciÛn, es estable entre 5,5 y 10.

En medicina e industria farmacÈutica:

− El ·cido algÌnico en polvo se aÒade a comida dietÈtica dado que en presencia de agua se hincha y da
una sensaciÛn de lleno.
− Se aÒade en algunas pastillas para el reflujo g·strico.
− Los odontÛlogos emplean alginato de calcio para hacer moldes dentales.
− Algunas medicinas son encapsuladas en alginato, ya que este permite una liberaciÛn paulatina y
controlada.
b) LAMINARINA

Es un polisac·rido se reserva que se encuentra com˙nmente en las algas pardas. Est· formado por unidades
de glucosa, en las que algunos presentan ramificaciones en el carbono 6 de la cadena principal.

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Algunas laminarinas se han identificado como posibles moduladores del metabolismo del intestino debido a
su efecto en la composiciÛn mucosa, el pH del intestino y la producciÛn de ·cidos grasos de cadena corta,
especialmente butirato. Adem·s, sus formas sulfatadas se pueden utilizar como anticoagulantes.
c) FUCANOS/FUCOIDANOS
A veces se consideran fucoidanos a los homopolÌmeros de L-fucosa sulfatados y los fucanos serÌan los
heteropolÌmeros formados por de L-fucosa, D-xilosa, D-galactosa, D-manosa, ·cido-D-glucurÛnico, etc.
En general podemos decir que son polisac·ridos sulfatados (heteropolisac·ridos de L-fucosa sulfatada) que se
encuentra en la pared celular o matriz extracelular de las algas pardas y pueden alcanzar hasta el 40% de peso
seco del alga.
Se ha descrito que los fucoidanos tienen actividad biolÛgica y fisiolÛgica como: anticoagulantes,
antitrombÛticos, antivirales, antitumorales, immunomoduladores, antioxidantes y antinflamatorios. Su
potencial actividad terapÈutica aumenta con el grado de sulfataciÛn.

d) FLOROTANINOS
Se desconoce el porquÈ de la producciÛn fisiolÛgica de los florotaninos, pero se piensa que pueden constituir
un mecanismo de defensa. Entre las funciones propuestas para los florotaninos se les atribuye una funciÛn de
protecciÛn frente a la radiaciÛn UV-B.
Los florotaninos son compuestos fenÛlicos (polÌmeros derivados del florogucinol) presentes en las algas pardas
(macroalgas) del phyllum Phaeophyta. Son compuestos policÈtidos que se acumulan en unas vesÌculas
intracelulares denominadas “physodes”.

B. POLISAC¡RIDOS DE RHODOPHYTA
a) AGAR

En su estado natural, el agar-agar es un carbohidrato estructural de la pared celular de ciertas rhodophytas

(gÈneros Gelidium y Gracilaria). Es una mezcla compleja de polisac·ridos de galactosa: agarosa (polÌmero
neutro) y agaropectina (polÌmero con carga, sulfatado).
La agarosa es la fracciÛn gelificante (aprox. 70% del total): es una molÈcula lineal neutra, esencialmente libre
de sulfatos. Se trata de un polÌmero lineal de D-galactosa y 3,6-anhidro-L-galactosa con enlaces β-(1,3) y α-
(1,4).
La agaropectina es la fracciÛn no-gelificante (aprox. 30% del total): es un polisac·rido de galactosa sulfatado
(3%-10% de sulfato). Tanto la agarosa como la agaropectina tienen la misma estructura b·sica, pero se
diferencian en la presencia de grupos sulfato y piruvato, relativamente abundantes en la agaropectina y muy
escasos (idealmente ausentes) en la agarosa.
La proporciÛn de estos dos polÌmeros varÌa de acuerdo con la especie del alga y en la agarosa representa
normalmente por lo menos dos tercios del agar-agar natural.
Se puede usar como gelatina en la cocina, adem·s de otras gelatinas que se comercializan que son de origen
animal (se obtiene a partir del col·geno de la piel, huesos y cartÌlagos de animales, son proteÌnas).
− Gelatina: son de origen animal porque son proteÌnas.
− Agar o agar-agar: son de origen vegetal porque se obtiene de las algas rojas. Es un carbohidrato, pero
no tiene calorÌas por lo que act˙a como fibra debido a que pocos organismos son capaces de degradar
estos polisac·ridos de agar-agar.

TEMA 11. LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N 12

 CULTIVOS DE MICROORGANISMOS FOTOSINT…TICOS
Y SUS APLICACIONES BIOTECNOL”GICAS

Se fabrica con diversos grados de pureza y su uso es diverso.

− Agar de calidad baja:

▪ Agar de baja calidad se utiliza en productos alimenticios (alimentos congelados, productos de
pastelerÌa, merengues, helados, caramelos y zumos.
▪ En aplicaciones industriales: encolado del papel, en el recubrimiento del papel, adhesivos,
impresiÛn y teÒido de textiles.
− Agar de calidad media: como sustrato en los medios de cultivo biolÛgicos y en productos
mÈdicos/farmacÈuticos como laxantes, supositorios, capsulas, anticoagulantes.
− Agar de calidad alta: la agarosa purificada se emplea en procesos de separaciÛn en biologÌa molecular
(electroforesis, cromatografÌa...). TambiÈn se emplea en medicina en terapias en cÈlulas cancerÌgenas,
ya que induce la apoptosis en las cÈlulas tratadas.
b) CARRAGENANOS

Son polisac·ridos formado por galactanos sulfatados solubles en agua en donde se alternan unidades de β-D-
galactosa y α- D-galactosa sulfatadas. Estos polisac·ridos van a formar unos geles rÌgidos y fuertes.

La macroalga Kappaphycus alvarezii se ha cultivado a gran escala para su uso en alimentaciÛn industrial.
− Se emplean bastante como emulsionante, estabilizante en numerosos productos alimenticios,
especialmente en productos l·cteos como los batidos de leche y chocolate, helados, leche evaporada,
jaleas, mermeladas, comidas de mascotas (por sus propiedades espesantes).
− Hay usos potenciales de los carragenanos: antitumoral, antiviral, anticoagulante y como
inmunomodulador.
Aunque se ha descrito que la degradaciÛn de carragenanos puede causar ˙lceras y c·ncer gastrointestinal.

Algunas algas comercializadas en AndalucÌa son Suralgas que comercializa algas la BahÌa de C·diz (de la zona
de San Fernando, Cliclana, Puerto Real), la lechuga de mar, aonori verde, agonori, etc.
Algunos ejemplos de productos de cosmÈtica de alta gama que tienen como ingredientes microalgas y
macroalgas son:
− Extracto de Feoficea canalizado: obtenido a partir de pequeÒas algas marrones resistentes a las
variaciones de temperatura y salinidad. Posee la capacidad de proteger la piel, defendiÈndola de los
oxidantes daÒinos y de la irritaciÛn. Contribuye a reducir la cantidad y la superficie de arrugas y
mejorar la hidrataciÛn, el tono y la firmeza de la piel.
− Extracto de Algas Rojas: estas algas tienen su origen en un agua profunda y lÌmpida, donde se exponen
a una radiaciÛn ultravioleta extrema. Se protegen de forma natural mediante la producciÛn de una
poderosa sustancia que contiene amino·cidos que act˙an de antioxidantes. AsÌ pues, el extracto de
Algas Rojas proporciona una protecciÛn antioxidante a la piel, impidiendo la apariciÛn de lÌneas de
expresiÛn, arrugas y otros signos del envejecimiento.
− Microalgas Revitalizantes: Un extracto (producido biotecnolÛgicamente a partir de las microalgas
Dunaliella Salina) que recarga a la piel de energÌa. Las algas en su forma natural resisten la tensiÛn de
su h·bitat natural (lagos salados) gracias a su elevado contenido energÈtico. Este extracto puede
traspasar la energÌa a la piel y reforzar asÌ la renovaciÛn celular natural. TambiÈn normaliza el nivel de
hidrataciÛn de la piel al mismo tiempo que proporciona antioxidantes para proteger frente los factores
medioambientales daÒinos.
− Microalgas Verdes: estas ayudan a aumentar la firmeza y la elasticidad de la piel al aumentar la
producciÛn de col·geno y elastina naturales e inhibir las enzimas que los destruyen. TambiÈn
refuerzan la uniÛn entre la dermis y la epidermis. El OligopÈptido de Microalgas Verdes puede ayudar
a reducir la apariciÛn de ojeras, concediendo asÌ una imagen m·s radiante y vital a la zona del contorno
de los ojos.

TEMA 11. LAS MICROALGAS EN LA ALIMENTACI”N 13