PLÁSMIDOS

[Link] MD
 JoshuaLederberg
El término plásmido fue introducido por el biólogo molecular estadounidense
Joshua Lederberg en 1952

• Joshua Lederberg fue un molecular estadounidense

biólogo conocido por su trabajo en genética,
inteligencia artificial y exploración espacial.
Tenía apenas 33 años cuando ganó el
Premio Nobel de Fisiología o Medicina 1958
para descubrir que las bacterias pueden aparearse y
intercambiar genes. Compartió el premio con
Edward L. Tatum y George Beadle que ganaron
por su trabajo con la genética.
Joshua Lederberg
Gana el Premio Nobel
 ¿Qué es un plásmido?
• Un plásmido es una molécula de ADN que es independiente.
de, y puede replicarse independientemente de,
ADN cromosómico. Son de doble cadena
y, en muchos casos, circulares. Los plásmidos suelen
ocurren naturalmente en las bacterias, pero a veces
encontrado en organismos eucariotas (por ejemplo, el 2-
micrómetro-anillo en Saccharomyces cerevisiae.
 Comprensión básica del plásmido
• Un plásmido es un vehículo que puede transportar artificialmente
ADN insertado. Se replicará en E. coli, y con su
su propia replicación también replicará el insertado
ADN, independiente de su origen. De alguna manera, uno puede ver
un plásmido como una minute fábrica de ADN. Los principales criterios
para un 'buen' plásmido es que acepta el inserto que tú
quiero poner en, y que se replique en suficiente
cantidades, y que no destruya tu inserción
during the process.
 ¿Qué es un plásmido?
• Una pieza circular de
replicación autónoma
ADN

• Evolucionado originalmente por

bacterias

• Puede expresar antibiótico

gen de resistencia
o ser modificado para expresar
proteínas de interés
Plásmido bacteriano
 Plásmidos

• Plasmids are molecules

de ADN que se encuentran en
bacterias separadas de
la bacteria
cromosoma.
• Son pequeños (unos pocos
mil pares de bases
generalmente llevo solo uno o
algunos genes son circulares
tener un origen único de
replicación
 Multiplicación de plásmidos
• Los plásmidos se replican por
la misma maquinaria que
replica las bacterias
cromosoma. Algunos
los plásmidos se copian a
acerca de la misma tasa que el
cromosoma, así que un solo
la célula tiende a tener solo un
copia única del plásmido.
Otros plásmidos son copiados
a una alta tasa y un solo
la célula puede tener 50 o más de
ellos.
Los plásmidos entran en las bacterias
con facilidad.
• Los plásmidos ingresan al
célula bacteriana con relativa
facilidad. Esto ocurre en la naturaleza
y puede contar para el
rápida propagación de antibióticos
resistencia en hospitales y
en otros lugares. Los plásmidos pueden ser
introducido deliberadamente
en bacterias en el
laboratorio transformando el
celda con la entrada
genes.
 INTRODUCCIÓN
• Los plásmidos son ADN extracromosómico autorreplicante
moléculas de tamaño finito que son heredadas de manera estable y
intercambiado promiscuamente entre un amplio espectro de
bacterias y otros dominios (Perlin, 2002).

• Los plásmidos permiten a las bacterias (incluidos otros dominios)

poblaciones para 'muestrear' el banco genético horizontal
rasgos adaptativos que podrían ser ventajosos para la supervivencia
bajo presión selectiva local (Sorensen et al., 2005).

• Los plásmidos también proporcionan variación genética, actúan como fuentes de

recombinación y puede permitir una fijación de genes más rápida que lleva a
mayor probabilidad de que el ‘nuevo’ rasgo persista (Sorensen
et al., 2005).
 INTRODUCCIÓN
• La clasificación de plásmidos se basa generalmente en el grupo de incompatibilidad
(determinado por sus funciones de replicación/particionamiento) o el genético
información especificada por su ADN (Perlin, 2002). Incompatibilidad
se había utilizado la agrupación para agrupar plásmidos de especies de Pseudomonas
(Jacoby, 1977) y las Enterobacteriaceae en 26 grupos de incompatibilidad
(Couturier et al., 1988).

• La mayoría de los plásmidos tienen un rango de hospedador estrecho que permite solo intraespecie
transferencia y replicación. Sin embargo, un pequeño grupo de plásmidos llamados el
los plásmidos de amplio rango de hospedador (BHR) (IncP, Q, W, N y C) pueden ser
transferido y replicado en una amplia gama de bacterias (Hill y Top, 1998;
Dale y Park, 2004). Los plásmidos BHR pueden ser autotransmisibles
Tra+, Mob+) o movilizable pero no auto-transmisible (Tra -, Mov+)
(Perlin, 2002).

• pr
Los plásmidos son complejos

• Los procariotos fueron inicialmente

pensamiento de albergar solo circular
plásmidos. Sin embargo, con el
descubrimiento de la doble hélice
plásmidos lineales en la espiroqueta
que causa la enfermedad de Lyme, Borrelia
borgdorferi (Barbour y Garon,
1987), los plásmidos lineales también han
se ha detectado en los géneros
Estreptomyces (Kinashi et al.,
1994), Micobacterium(Le
Dantecet al., 2001),
Rhodococcus (Larkin et al.
2005) y Arthrobacter
(Overhage et al., 2005).
 Entendiendo un Plásmido
• Muchas bacterias tienen accesorios
moléculas de ADN además de
su cromosoma más grande. Estos
las moléculas, llamadas plásmidos, son
ampliamente utilizado en genética
ingeniería. Con el fin de ser
útiles en laboratorios, estos plásmidos
necesito tener un origen de
replicación (ori), que permite
ellos para replicar dentro de una
célula bacteriana. También necesitan
tiene múltiples enzimas de restricción
sitios para habilitar el corte y
inserción de ADN en un plásmido.
Papelenlaresistenciaalosantibióticos

• La mayoría de los plásmidos tienen uno

o dos identificables
marcadores que dan un
fenotipo distinto al
célula bacteriana. Ejemplos
de tales marcadores incluyen
resistencia a los antibióticos
(ampR) o expresión de
una enzima que cataliza
una reacción que produce
un cambio de color (lacZ).
 Plásmidos yAmpicilina
Resistencia
• Algunos plásmidos tienen el ampRgen
que confiere resistencia al
antibiótico ampicilina. Células de E. coli
que contiene este plásmido, denominado
+ampRcélulas, pueden sobrevivir y formar
colonias en agar LB que ha sido
suplementado con ampicilina. En
en contraste, células que carecen del ampR
plásmido, denominado "–ampRcélulas, son
sensible al antibiótico, que mata
ellos. Una célula sensible a la ampicilina (–
amperioR) se puede transformar en un
ampicilina-resistente (+ampR) celda por
su captación de un plásmido extranjero
containing the ampRgen
 Plásmidos y Microbios
• En microbiología, un elemento genético extracromosómico que ocurre
en muchas cepas bacterianas. Los plásmidos son ácido desoxirribonucleico circular
(ADN) moléculas que se replican independientemente de la bacteria
cromo. No son esenciales para la bacteria, pero pueden
conferir una ventaja selectiva. Una clase de plásmidos, colicinogénicos
(o Col) factores, determina la producción de proteínas llamadas
colicinas, que tienen actividad antibiótica y pueden matar otras bacterias.
Otra clase de plásmidos, los factores R, confiere a las bacterias
resistencia a los antibióticos. Algunos factores Col y factores R pueden transferirse
de una celda a otra y así son capaces de
se está propagando rápidamente a través de una población bacteriana. Un plásmido que es
unido a la membrana celular o integrado en la bacteria
un cromosoma se llama episoma.
Plásmidos en Genética
Ingeniería
• Los plásmidos son extremadamente
herramientas valiosas en los campos de
biología molecular y
genética, específicamente en el
area ofgenetic engineering.
Desempeñan un papel crítico en
procedimientos tales como gene
cloning, recombinant protein
producción (por ejemplo, de humano
insulina), y terapia génica
investigación. En tales procedimientos,
un plásmido se corta en un sitio específico
sitio (o sitios) que usan enzimas
llamada restricción
endonucleasas
 Estructura de los Plásmidos
• El tamaño del plásmido varía de 1
a más de 1,000 kilobases
pares (kbp). El número de
plásmidos idénticos dentro de un
una sola célula puede variar
cualquier lugar desde uno hasta incluso

miles bajo algunos

circunstancias. Los plásmidos pueden
ser considerado parte de la
mobiloma, ya que a menudo son
asociado con conjugación, un
mecanismo de transferencia horizontal de genes

transferir
Plásmidosutilizadoscomovectores
• Plásmidos
• pequeño (1-1000 kb)
• circular
• ADN extracromosómico

• El crecimiento es independiente de
el ciclo celular del huésped;
amplificación de gen
producto
• Un tipo de vector de clonación
solía llevar un gen no
encontrado en la bacteria
cromosoma del huésped
VARIEDADES DE PLÁS MIDES BASADAS
SOBRELAESTRUCTURA
Mapa genético de ColE1
plásmido circular: colE1,
genes para la producción
de, y la inmunidad a la colicina
E1;códigos de movilidad para nucleasa
requerido para la movilización;
códigos rom para proteínas
requerido para ser efectivo
control del número de copias;
oriT: origen conyugal
transfer;oriV: origin of
replicación (Dale y Park,
2004).
 Losplásmidospueden...

• Los plásmidos se consideran material genético transferible

elementos, o "replicones", capaces de autónoma
replicación dentro de un huésped adecuado. Los plásmidos pueden ser
encontrado en los tres principales dominios, Arqueas, Bacterias
y Eukarya. Similar a los virus, los plásmidos no son
considerado una forma de "vida" tal como se define actualmente.
A diferencia de los virus, los plásmidos son ADN "desnudo" y no
codificar genes necesarios para encapsular el material genético
material para la transferencia a un nuevo anfitrión, aunque algunos
las clases de plásmidos codifican el pilus sexual necesario
para su propia transferencia
 Losplásmidosactúancomovectores

• Los plásmidos son vectores clave de

transferencia horizontal de genes
y genética esencial
herramientas de ingeniería. Ellos
código para genes involucrados en
many aspects of microbial
biología, incluyendo
detoxication, virulence,
interacciones ecológicas, y
resistencia a los antibióticos.
Los plásmidos originaron varios fármacos.
mecanismos de resistencia
• El papel de los plásmidos en la evolución del genoma bacteriano y la adaptación a
cambios ambientales específicos han contribuido inmensamente a la
emergencia de plásmidos de resistencia a antibióticos y metales pesados.

• Esta hazaña es facilitada por las actividades de los transposones, que promueven el
movimiento de genes de resistencia entre plásmidos o desde el cromosoma
de organismos naturalmente resistentes a un plásmido (Dale y Park, 2004;
Kapil, 2005).

• Las bacterias pueden ser resistentes a varios antibióticos ya sea por la adquisición de
varios plásmidos independientes o a través de la adquisición de un solo plásmido con
muchos determinantes de resistencia en él (Hill y Top, 1998).
 VARIEDADES DE PLÁSMIDOS BASADOS EN FUNCIONES

Extracción del metal tóxico de la célula bacteriana,

bioacumulación en compuestos fisiológicamente inaccesibles
y química redox en la que una especie iónica más tóxica es
convertido a un ion menos tóxico (Endo et al., 2002)

• Mercurio mediado por plásmido (mer) (Silver y Walderhaug

1994), arsénico (ars) (Wu y Rosen, 1993), cadmio
(Cad) (Tsai et al., 1993) y cromato (Chr) (Pimentelet
al., 2002) se ha informado resistencia para Gram positivos
y Gram negativos con varios mecanismos de resistencia.
VARIEDADES DE PLÁSMIDOS
BASADO EN FUNCIONES
• Mapa genético de Escherichia coli
El factor F que muestra los cuatro principales

regions: Theinc,repregion
determina la replicación y
plasmid incompatibility
properties; thetraregion
proporciona ADN conjugativo
funciones de movilización; el
región que contiene los cuatro
elementos transponibles que
facilita la interacción entre F
factor y otras moléculas de ADN;
y la región silenciosa (Porter,
2002).
Clonación de Escherichia coli
Vectores de Expresión
• Métodos de tecnología genética
junto con el ADN
secuenciación y PCR
las metodologías tienen
revolucionarizado básico y
investigación aplicada en molecular
biología que involucra todo tipo de
organismos desde eubacterias hasta
humanos. Desde casi todos los
los experimentos de clonación
comenzar por la inserción de ADN
fragmentos en Escherichia
coliplásmido
VARIEDADES DE PLÁSMIDOS BASADAS EN FUNCIONES
Tabla 1: algunos plásmidos de resistencia a antibióticos, su
grupos de incompatibilidad y fenotipos

Abreviaturas usadas: Km, kanamicina; Tc, tetraciclina; Ap, ampicilina; Sm,

streptomycin; Sp, spectinomycin; Cm, chloramphenicol, Tp, trimethoprim; BHR,
amplio rango de hospedadores (Hill y Top, 1998)
 VARIEDADES DE PLÁS MIDAS BASADAS EN FUNCIONES
Plásmidosdeferomonassexuales

• Las feromonas son sustancias químicas secretadas que se utilizan para la señalización entre dos o
más individuos. Los plásmidos conjugativos de feromonas están confinados a los
Enterococcus y codifican resistencia a antibióticos, bacteriocinas y hemolisinas
(Grohmann et al., 2003).

• En este sistema de transferencia novel, las células receptores secretan una familia de proteínas termorresistentes.
feromonas péptidas con especificidades para donantes que llevan varios
plásmido conjugativo que desencadena una respuesta de las bacterias donantes que albergan un
plásmido particular, que sintetiza una adhesina que facilita el
formación de agregados de apareamiento con receptores cercanos (Dale y Park,
2004).

• Ejemplos de plásmidos de feromonas sexuales son pAD1 (59.3-kb,

plásmido hemolisina/bacteriocina), y pCF10 (65-kb, resistencia a la tetraciclina)
(Grohmann et al., 2003).
 VARIEDADES DE PLÁS MIDAS BASADAS EN FUNCIONES
Plásmidos de senescencia en hongos
• La senescencia es un programa degenerativo inherente en los organismos multicelulares
que se manifiesta por un declive progresivo en la producción de energía celular
culminando en la muerte de una parte o del organismo entero (D ’souza y
Maheshwari, 2002).

• Se encontró que este fenómeno estaba asociado con la acumulación de altos

número de copias de plásmidos circulares (ADN sen) en la respiración mitocondrial
lo que resulta en la muerte del hongo (D'souza y Maheshwari, 2002).

• Los plásmidos lineales basados en mitocondrias de Neurospora sp. también se encontraron en

ser responsable de la muerte de las cepas que los albergan mediante la inserción de
su ADN en el genoma mitocondrial, lo que resulta en la interrupción de varios
genes que conducen a la senescencia y la muerte debido a la respiración defectuosa (Bertrand,
2000; Griffiths, 1998).
1973SeInventalaIngenieríaGenética
 Clonación: Digestión

GEN ÉTICO

ADN DE ORIGEN
Clonación: Fragmentos digeridos

TARGET GENE
 Clonación: Ligadura
LIGASA DE ADN

GEN DE OBJETIVO
Clonación: Recombinante
Plásmido
GEN DE OBJETIVO
Clonación: Transformación

E. coli
Clonación: Competencia
Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+
Ca2+
Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+
Ca2+ Ca2+ Ca2+
Ca2+
Ca2+ Ca2+
Ca2+
Ca2+
E. coli
Ca2+ Ca2+
Ca2+
Ca2+
Ca2+
Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+ Ca2+
Ca2+ Ca2+
Ca2+
Clonación: Competencia

E. coli
Clonación: Transformación

E. coli
Clonación: Transformación

E. coli
Plásmidos en la Resistencia a losAntibióticos

• Además, los plásmidos llevan

genes de resistencia a los antibióticos
y su difusión en
las bacterias patógenas son de
gran importancia médica.
Los plásmidos se utilizan en
estudios moleculares de
varios organismos con
ramificaciones en sintético
biología, medicina, ecología
Resistencia a los antibióticos

• El plásmido a menudo contiene genes

o casetes génicos que confieren
una ventaja selectiva para el
bacteria que los alberga,
por ejemplo, la capacidad de construir un
resistencia a los antibióticos. Cada
el plásmido contiene al menos uno
secuencia de ADN que sirve como
unorigen de replicaciónorori
(un punto de partida para el ADN
replicación), lo que permite
el ADN plasmídico a ser
duplicado independientemente
del ADN cromosómico
 Los plásmidos pueden ser diseñados para
NecesidadesSelectivas
• Aunque hay solo un par de elementos esenciales que un
el plásmido debe tener, los trabajadores del ADN han diseñado un
número de características en muchos plásmidos que hacen
más fáciles de usar. Primero lo esencial: 1) debe
tiene el gen _ori_, que permite que el plásmido sea
replicado en las células huésped, 2) debe tener un
marcador seleccionable
el plásmido crecerá en cultivo. Esto es casi siempre un
gen que confiere resistencia a un antibiótico en particular,
para que las células cultivadas en presencia del fármaco lo hagan todas
contener el plásmido.
 Expresión basada en plásmidos
Sistemas para Células Mamíferas
• En contraste con las bacterias y las levaduras
no se encuentran plásmidos naturales en
células mamíferas. Por lo tanto
many attempts to construct
vector de expresión diferente
sistemas para células mamíferas
se han hecho en los últimos años.
Estos sistemas vectoriales pueden ser
categorizado en términos de vector
administración, mecanismos de
replicación de vectores y
mecanismos para lograr nuclear
persistencia de los vectores
 Limitaciones de los plásmidos
• Hay limitaciones en cada uno de estos pasos: grande
las inserciones requieren plásmidos especializados (cosmidos o YACs
para inserciones del tamaño de megabase), cuanto más grande un
plásmido+insertar, menor será su tasa de replicación, pero
hay formas de mejorar el rendimiento, y ciertas
los plásmidos resultan en eliminaciones frecuentes de (partes de) el
insertar, aunque esto a veces se debe al anfitrión
(la E. coli o alguna otra célula huésped) o debido a la naturaleza
del inserto también.
 Plásmidos en terapia génica
• El éxito de la terapia génica depende de la eficiencia
inserción de genes terapéuticos en el adecuado
sitios objetivo cromosómicos dentro del genoma humano,
sin causar daño celular, mutaciones oncogénicas o
una respuesta inmune. Aunque los vectores virales ofrecen
vehículos excelentes para la transducción altamente eficiente de
las células humanas, las preocupaciones de seguridad asociadas hacen
entrega no viral de genes terapéuticos mediante el uso de
el ADN plasmídico en las células es más atractivo.
Cassettesdeplásmidosdeexpresióndualparalaexpresión
deungendeinteréspSELECT
• pSELECTplásmidos ofrecen todo el
características necesarias para expresar un
gen de interés a niveles altos en
un gran número de tipos de células.
pSELECT plásmidos contienen dos
unidades de transcripción, la primera
impulsa la expresión del gen
de interés y los segundos impulsos
la expresión de una gran elección
de marcadores seleccionables dominantes
for bothE. coliand mammalian
células.
 TransferenciaHorizontaldeGenes
Mediado por Plásmidos
• Entre los elementos móviles y mecanismos de HGT,
plasmids are undoubtedly critical players because of
su capacidad para transferirse por conjugación entre ambos
huéspedes bacterianos muy cercanos y muy lejanos relacionados. Esto
la característica les permite distribuir ampliamente los genes o
clusters de genes que codifican para varios beneficiosos para el hospedador

fenotipos. El evento, generalmente reconocido como

la transferencia horizontal de genes (THG), ahora se considera como
una fuerte fuerza impulsora para la evolución de las bacterias
organización del genoma y para la adaptación rápida a la
entornos circundantes
 ADNplasmídicocomoprofilácticoyterapéutico
vaccinesforCancerandInfectiousDiseases
• Concepto de ADN plásmido
como una vacuna protectora
estrategia para el cáncer y
enfermedades infecciosas.
Sin embargo, el cruce
aplicación en humano
se han cumplido los estudios
con resultados pobres basados
en los vectores de ADN¹
incapacidad para proporcionar
clínicamente relevante
profiláctico y
beneficio terapéutico
 Perfilesdeplásmidosenlavigilanciaepidemiológicade
brotesdeenfermedadesyresistenciaalosmedicamentos

• Los plásmidos también pueden servir como

marcadores de diversas bacterias
tensiones cuando un sistema de escritura
conocido como perfilado de plásmidos,
o huella dactilar de plásmido es
usadas. Porque muchas especies de
las bacterias contienen plásmidos,
la tipificación del perfil de plásmidos ha sido

utilizado para investigar brotes de

muchas enfermedades bacterianas y a
rastrear inter- e intra-especies
propagación de la resistencia a los antibióticos.
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