UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESPECTROFOTOMETRÍA UV-Visible Parte II (Presencial)
Semana 04
INTEGRANTES
MESA 2
CARO CASTRO, Freddy Junior 21100045
FLORES AYMARA, Nicole Elizabeth 20100062
GOMEZ SILVERA, Jordan Francis 15100084
RAMOS TORRES, Raquel Graciana 21100088
ASIGNATURA
Bioquímica
DOCENTES
ZOILA RAQUEL SICCHA RAMIREZ
JORGE ZEBALLOS ALVA
Lima - Perú
2022
INFORME
1. Experiencia 1.
a)Con sus datos encontrados presente la Tabla 2. Recuerde trabajar con los rangos de
longitud de onda solicitados por el profesor y que van de acuerdo al modelo del
espectrofotómetro.
TABLA 2
Longitud de
424 464 504 544 584 624 664 704 744
onda
Absorbancia
0,031 0,049 0,076 0,858 0,438 0,865 1,423 0,104 0,024
del Tubo 2
Tabla 4 con los datos obtenidos para realizar la curva de calibración
b) Presente la Curva de absorción (espectrograma) para el azul de metileno de acuerdo
a los datos de la Tabla 2.
c) Determine la λmax. Interprete sus resultados.
De la gráfica de b) vemos los distintos valores de absorbancia en relación con las distintas
ondas de longitud que indican en la guía de práctica, por cada onda distinta se llevaba la A=0
en la muestra blanco, que sería el agua destilada. En las primeras tres longitudes dieron
resultados menos a 1, luego en la cuarta se incrementó a 0,858 que es un valor cercano a 1,
aunque al variar la longitud el valor de absorbancia disminuye a 0,438 y después de esto
sigue subiendo hasta alcanzar su punto máximo que sería en la 𝜆 =664 y la absorbancia llega
a superar la unidad, siendo la A=1,423; finalmente la absorbancia va decayendo
abruptamente hasta llegar a 0,024.
d)Indague en el internet si el azul de metileno absorbe también la luz UV, muestre el
espectrograma hallado.
Para explicar esta pregunta se hizo este experimentos se realizaron en un cuarto oscuro, con
agitación magnética y burbujeo constante de O2. La suspensión se preparó con 50 mL de
solución de azul de metileno a diferentes concentraciones y con 50 mg de dióxido de titanio.
Los experimentos iniciales de fotocatálisis heterogénea se realizaron con azul de metileno
durante 2 horas, se tomaron al minuto contacto de la solución con el semiconductor, se dejó
durante 15 minutos previo al encendido de la lámpara y al encender la lámpara se iniciaron la
toma de muestras cada 30 minutos. En dichos experimentos iniciales se presentó desorción
del azul de metileno, por lo que se realizaron nuevos experimentos, durante 2 horas, pero
dejando estabilizar la muestra durante 1 hora sin la luz de la lámpara UV, al término de esta
hora se encendió y se observara la degradación. En los experimentos posteriores se dejó 90
minutos estabilizando (sin lámpara UV).
Para rectificar datos, se realizaron otra serie de experimentos en los cuales se dejó 24, 48 y 84
horas de estabilización, se continuó con la exposición a la luz de la lámpara UV por un
tiempo de 1 hora 30 minutos.
Las lecturas de absorbancia del azul de metileno se realizaron a una longitud de onda de 664
nm.
La degradación fotocatalítica se realizó utilizando un lámpara de UV de luz negra de 8 W
modelo UVA-18 (Ultralim Inc), con longitud de onda principal a 354 nm.
2. Experiencia 2
a) Presente los cálculos para hacer las preparaciones de los estándares de Azul de
metileno (AMet) de la Tabla 3.
Tubos Cálculo del volumen inicial de Azul de
Metileno
SDT1 V1=0,2mg/dL x2,5mL/1,0 mg/dL=0,5 mL
STD2 V1=0,4 mg/dL x 2,5mL/1,0mg/dL=1,0mL
STD3 V1=0,8mg/dL x 2,5mL/1,0 mg/dL=2,0mL
STD4 V1=1,0 mg/dL x 2,5mL/1,0 mg/dL=2,5 mL
Tabla 3
Soluciones Tubos
Blanco Std1 Std2 Std3 Std4 MP
Concentración de azul de 0 0,2 0,4 0,8 1,0 ¿?
metileno, mg/dL
mL de Azul de metileno 1 0 0,5 1,0 2,0 2,5 0
mg/dL
mL de Agua destilada 2,5 2,0 1,5 0,5 0 0
mL de Muestra problema (MP) 0 0 0 0 0 2,5
de Azul de metileno
b)Con sus datos encontrados de lectura de A, presente la Tabla 4 y una foto de la
batería de soluciones preparadas.
Tabla 4
Tubos Concentración Azul de A(664 nm)
metileno mg/dL
Blanco 0 0
SDT1 0,2 0,272
STD2 0,4 0,558
STD3 0,8 1,274
STD4 1,0 1,484
MP ¿? 0,832
c) Presente la Curva de calibración para el azul de metileno con los datos de la Tabla 4 y
la hoja de cálculo del Excel y obtenga la ecuación de la recta. En esta curva debe
aparecer la proyección de la A de la MP sobre el eje X de concentración.
La ecuación de la recta es: y=1.5669x-0.0448
d) Determine la concentración de la muestra problema del azul de metileno (tubo 6):
i) Presente una fotografía de la gráfica en papel milimetrado donde se muestra la
concentración de MP por interpolación de su A,
ii) Concentración de MP de AMet realizando los cálculos de la Opción 1.
iii) Concentración de MP de AMet realizando los cálculos de la Opción 2.
iv) Concentración de MP de AMet empleando el factor de calibración promedio. Use
unidades de mg/dL en todos los casos .
[Link]
1. Explique qué ocurre cuando una molécula absorbe la energía de la luz UV/Visible.
Una molécula está formada por la unión entre átomos, estas uniones no son estáticas ya que
permanentemente vibran y rotan. Las uniones entre átomos se deben a enlaces entre sus
electrones externos. Por lo tanto, cuando hablamos de la energía interna (E) de una molécula
estamos hablando de tres componentes: E rotacional, E vibracional y E electrónica.
Tomando en cuenta esta estructura interna de una molécula tenemos que pensar que los
electrones dentro de la molécula tendrán determinado nivel energético de vibración y de
rotación además de su nivel electró[Link] separación entre los niveles de energía estará dada
por cantidades discretas de energía, es decir “cuantos” de energía (E = h x ν). Esto quiere
decir que para que un electrón pase de un nivel energético a otro dentro de la molécula debe
absorber cantidades discretas de energía.
La transición electrónica será la que alcance según la energía absorbida,pero es un hecho que
si la energía fue suficiente para hacer un salto electrónico, fue más que suficiente para hacer
saltos vibracionales y rotacionales ya que son de menor energía. Las moléculas excitadas son
inestables al igual que los átomos, por lo tanto también buscarán la manera de regresar a su
nivel de menor energía posible liberando calor o emitiendo luz
3. Calcular la T % que corresponde a cada uno de los siguientes valores de A:
a) 0,800
b) 0,115
c) 0,585
d) 0,057
5. Determine la concentración de una solución de albúmina sérica bovina (fracción V),
cuya absortividad específica es 6.6 g-1 .[Link]-1 ,y tiene una absorbancia de 0.732 en
una celda de 1cm de paso de luz.