UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA Bioquímica

“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA
SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE
ENFERMERIA

TRANSAMINASA
CURSO: Bioquímica

DOCENTE: Dra. Samame Talledo, Belinda Elvira

CICLO: 2023-II

ALUMNA: Valladolid Checa, Patricia Maribel

PIURA – PERÚ
2023

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ÍNDICE:
I. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................... 3

II. OBJETIVOS: ................................................................................................................... 3

III. MARCO TEÓRICO: ........................................................................................................ 4

3.1 ENZIMAS: ..................................................................................................................... 4

3.2 TIPOS DE ENZIMAS ................................................................................................... 5

3.3 TRANSAMINASAS GPT Y GOT ................................................................................ 5

GPT O ALT:............................................................................................................ 6

AST O GOT: ........................................................................................................... 6

3.4 TRANSAMINASAS ALTAS................................................................................... 6

3.5 IMPORTANCIA DE LAS TRANSAMINASAS: ......................................................... 8

IV. FUNDAMENTO DEL MÉTODO ................................................................................... 8

V. MATERIAL ........................................................................................................................ 8

VI. EQUIPOS .......................................................................................................................... 9

VII. REACTIVOS ................................................................................................................... 9

VIII. PROCEDIMIENTO:....................................................................................................... 9

IX. CALCULO DE LOS RESULTADOS ............................................................................ 10

X. CONCLUSIONES: ........................................................................................................... 11

XI. CUESTIONARIO: .......................................................................................................... 12

XII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:.......................................................................... 16

XIII. RECURSOS:................................................................................................................. 17

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LABORATORIO N.º 05
TRANSAMINASAS
“Determinación de Transaminasas”
I. INTRODUCCIÓN

Las transaminasas son enzimas cuya elevación en sangre indica destrucción

de las células que las contienen. Un aumento marcado de estas enzimas suele indicar una

importante destrucción de células hepáticas, además de ser una clase de enzimas cruciales

para el metabolismo y la salud del hígado. La medición de sus niveles en suero sanguíneo

puede proporcionar información valiosa sobre la función hepática y otros procesos

biológicos.

En esta práctica de laboratorio, se abordará la metodología y los

procedimientos utilizados para cuantificar la actividad de las transaminasas, lo que permitirá

comprender mejor su relevancia clínica y su papel en la evaluación de la salud hepática.

Además, se analizarán los resultados y se discutirán las implicaciones de las mediciones de

transaminasas en la práctica médica. Este laboratorio es fundamental para estudiantes y

profesionales de la salud que deseen comprender en profundidad cómo se utilizan las

transaminasas como biomarcadores y su importancia en el diagnóstico clínico.

II. OBJETIVOS:

• Medir la actividad de la enzima TGP en el suero de un paciente se utiliza como una

herramienta de diagnóstico.

• Identificar enfermedades hepáticas y, en gran medida, detectar ataques al corazón.

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III. MARCO TEÓRICO:

3.1 ENZIMAS:

Una enzima es un catalizador biológico. Por lo general es una proteína, pero podría ser

ARN. El objetivo de un catalizador es aumentar la velocidad con que ocurre una reacción.

Hay muchas, muchas enzimas que son codificadas por el genoma para producir proteínas o

ARN que aceleran las reacciones químicas y hacen varios miles de funciones diferentes

dentro de una célula. La enzima no se destruye durante la reacción y se utiliza una y otra

vez. Una célula contiene miles de diferentes tipos de moléculas de enzimas específicos para

cada reacción química particular. (1)

Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se encuentran en cada

órgano y célula del cuerpo, como en: (2)

• La sangre

• Los líquidos intestinales

• La boca (saliva)

• El estómago (jugo gástrico)

Las enzimas disminuyen la energía de activación de una reacción, es decir, la cantidad de

energía necesaria para que ocurra una reacción. Logran esto al unirse a un sustrato y

sostenerlo tal manera que permite que la reacción ocurra más eficientemente. (3)

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3.2 TIPOS DE ENZIMAS

1. Oxidorreductasas: Son las enzimas que catalizan reacciones de óxido-reducción.

Dentro de esta categoría se encuentran, entre otras, las deshidrogenasas, oxidasas y

peroxidasas. (4)

2. Transferasas: Transfieren un grupo funcional -por ejemplo, un metilo o un grupo

fosfato- de un compuesto a otro. Aquí tendríamos las fosfotransferasas,

metiltransferasas o quinasas. (4)

3. Hidrolasas: Catalizan la escisión hidrolítica de los enlaces C-O, C-N, C-C, entre

otros. En este grupo se incluirían, por ejemplo, las proteasas o las fosfatasas.

4. Liasas: Son las enzimas responsables de las reacciones de ruptura y formación de

dobles enlaces; catalizan la adición de amoníaco, agua o dióxido de carbono a los

dobles enlaces, o bien los eliminan para formar dobles enlaces. Como ejemplo

tendríamos las aldolasas o las sintasas. (4)

5. Isomerasas: Catalizan la transferencia de grupos dentro de una molécula dando lugar

a formas isoméricas del sustrato. Las mutasas son un ejemplo de isomerasas.

6. Ligasas: Catalizan la unión de dos sustratos; las carboxilasas o las sintetasas son

ejemplos de este tipo de enzimas. (4)

3.3 TRANSAMINASAS GPT Y GOT

Las transaminasas (ALT o GPT y AST o GOT) son enzimas intracelulares que catalizan

reacciones de transaminación y que están localizadas en diversos tejidos del organismo,

siendo la más específica de lesión hepática la GPT. La elevación anormal viene definida por

valores superiores al rango de normalidad, que habitualmente se considera de 30-40 U/L. Su

aumento en sangre se debe a una destrucción celular o un trastorno de permeabilidad de la

membrana de las células que las contienen. No existe una clara correlación entre las cifras

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de transaminasas y el grado de lesión hepática. Pero sí podemos decir que, por debajo de 3

años, generalmente, la hipertransaminemia es debida a una participación hepática en un

proceso no hepático, siendo en niños mayores donde es más probable encontrar como causa

de dicha elevación una hepatopatía de base. (5)

➢ GPT O ALT: Significa alanina aminotransferasa. Es una enzima que se encuentra

principalmente en el hígado. Una prueba de ALT mide la cantidad de ALT en la

sangre. Cuando las células hepáticas están dañadas, liberan esta enzima en el

torrente sanguíneo. Niveles elevados en su sangre pueden ser un signo de lesión

o enfermedad del hígado. Algunos tipos de enfermedad del hígado causan niveles

elevados de ALT antes de mostrar síntomas de la enfermedad. Por ello, una prueba

de sangre de ALT permite la detección temprana de enfermedades del hígado. (6)

Otros nombres: Alanina transaminasa (ALT), SGPT, glutamato piruvato

transaminasa en suero, GPT. Está presente en concentraciones mucho más elevadas

en el hígado que en los demás órganos.

➢ AST O GOT: La transaminasa AST, GOT transaminasa o aspartato

aminotransferasa es una enzima que se encuentra en varios tejidos, sobre todo el

hígado, el corazón y el tejido muscular. Su valor elevado en sangre se asocia a

diversas causas, entre las que destacan una lesión hepática, un infarto agudo de

miocardio, miopatías o la administración de ciertos fármacos. Su vida media en el

torrente sanguíneo es de 17 horas.

Los valores normales de AST son de 8 a 33 U/L, específicamente de 8 a 40 en

hombres y de 6 a 34 en mujeres. (7), se localiza principalmente en el hígado,

miocardio, riñón, encéfalo y musculatura esquelética

3.4 TRANSAMINASAS ALTAS

Las elevaciones leves y asintomáticas (menos de 5 veces el límite superior de lo normal) de

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los niveles de alanina transaminasa y aspartato transaminasa son comunes en las clínicas de

atención primaria. Es más, se estima que hasta el 10 % de la población en algunos países de

alto ingreso (como EE. UU.) tienen los niveles de transaminasas elevados. Los

desencadenantes más comunes de los valores atípicos o preocupantes son los siguientes:

• Hepatitis B o C crónicas: son infecciones hepáticas potencialmente graves causadas

por los virus de la hepatitis B y C, de manera respectiva. Algunos casos son de curso

agudo, pero otros se instauran por más de 6 meses y generan hepatitis crónica con

daño del tejido hepático.

• Hígado graso (esteatosis hepática): como su propio nombre lo indica, esta patología

se caracteriza por la acumulación de grasa en el hígado. Si está causada por

alcoholismo se trata como una hepatopatía alcohólica, pero también puede verse

promovida por la obesidad y otras condiciones.

• Mononucleosis infecciosa: esta infección es causada, en general, por el virus de

Epstein-Barr (VEB). Los pacientes que tienen mononucleosis infecciosa debido a

una infección por VEB pueden mostrar un funcionamiento anormal del hígado.

• Enfermedad de Wilson: la enfermedad de Wilson es un trastorno hereditario poco

común que causa una absorción y conservación exagerada de cobre en el organismo.

Si se deposita en el hígado, provoca la muerte de las células y su cicatrización.

• Alcoholismo: los niveles de transaminasas y de gammaglutamil transferasa se

pueden ver elevados en personas con hepatitis alcohólica.

La enfermedad hepática es la causa principal del aumento de las transaminasas en sangre,

pero también puede ocurrir por otros padecimientos. La anemia hemolítica, el daño

muscular, el infarto de miocardio y las patologías pancreáticas también pueden provocar

valores alterados en este frente. De todas formas, un resultado anormal en las pruebas de

transaminasas indica la necesidad de someterse a otros estudios para detectar

disfuncionalidades orgánicas. (7)

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3.5 IMPORTANCIA DE LAS TRANSAMINASAS:

Su función principal es catalizar una reacción de transaminación entre un aminoácido y un

α-cetoácido, lo cual es importante en el proceso de síntesis de proteínas. Además, cabe

destacar que se trata de enzimas inducibles: su actividad puede aumentarse por la acción de

ciertas hormonas, como glucocorticoides y hormonas tiroideas.

La concentración de transaminasas en sangre es un parámetro que se mide en las analíticas

sanguíneas rutinarias. Un aumento anormal de sus valores suele ser indicativo de un daño

hepático, el cual puede verse propiciado por muchas condiciones (alcoholismo, hepatitis B,

hemocromatosis y más). La lesión de las células hepáticas se manifiesta por una actividad

elevada de las transaminasas séricas, incluso antes de la aparición de los síntomas y signos

clínicos (como la ictericia). (7)

IV. FUNDAMENTO DEL MÉTODO

La GOT cataliza la siguiente reacción:

- aspartato +  – cetoglutarato GOT glutamato + oxalacetato

La GPT Cataliza la siguiente reacción:

1 - alanina +  – cetoglutarato GPT glutamato + piruvato

El Piruvato formado reacciona con la 2,4 – dinitrofenilhidracina produciéndose, en medio

alcalino, un compuesto coloreado que se mide a 505 nm.

V. MATERIAL

- Jeringa

- Alcohol

- Algodón

- Ligadura

-Tubos de ensayo 13 x 100

- Gradilla - Pipetas 1 ml
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- Pipetas 5 ml

-Muestra: Sangre (suero)

VI. EQUIPOS

_ Espectrofotómetro

_ Centrífuga

VII. REACTIVOS

- Set de Transaminasas:

- Sustrato GOT

- Sustrato GPT

- 2,4 – DNFH

- Hidróxido de Sodio (diluyente para enzimas)

- Standard (Solución de pirulato de Sodio 2 mmo/l)

VIII. PROCEDIMIENTO:

En dos tubos de ensayo, colocar:

B D

Sustrato GOT o GPT 0,5 ml 0,5 ml

Colocar en Baño María a 37°C unos minutos

Agregar:

Suero …. 100 ul
Agua destilada 100 ul. ……
Mezclar por agitación suave e incubar 30 minutos.

Agregar:

RVO 2,4 DNFM 5 ml 5 ml

- Mezclar por inversión y retirar del baño.

- Después de 2 minutos leer la absorbancia en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el

aparato a cero con Agua destilada. Valores Normales: Hasta 12 U/l.

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IX. CALCULO DE LOS RESULTADOS

Elaborar una curva de Calibración utilizando el Estándar.

En un papel milimetrado trazar un sistema de coordenadas colocando en el eje vertical las

absorbancias de los diferentes estándares y en el horizontal la actividad de GPT y GOT.

Las absorbancias obtenidas de las muestras llevarlas a estas curvas para determinar la

concentración de transaminasas GOT y GPT

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X. CONCLUSIONES:

• Se puede determinar si las transaminasas, como la alanina aminotransferasa (ALT o

GPT) y la aspartato aminotransferasa (AST o GOT), se encuentran dentro de los

rangos normales o si están elevadas. Niveles elevados de estas enzimas pueden indicar

daño hepático o cardíaco.

• La medición de las transaminasas permite evaluar la función hepática. Si los niveles de

ALT están elevados, esto puede indicar un posible daño hepático, como en casos de

hepatitis o cirrosis.

• Función cardíaca: Además de su función hepática, la AST también se encuentra en el

músculo cardíaco. Por lo tanto, niveles elevados de AST pueden sugerir daño cardíaco,

como en un infarto de miocardio.

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XI. CUESTIONARIO:

1. ¿Para qué es útil la determinación de actividad enzimática, actividad específica y

recambio molecular?

Actividad enzimática: Se utilizan para identificar la presencia o la cantidad de una

enzima específica en un organismo, tejido o muestra. Ejemplos de dichas enzimas son la

α-amilasa, la catalasa, la lactasa, la peroxidasa, la lisozima y las enzimas reporteras

fosfatasa alcalina y luciferasa. Se encuentran ampliamente disponibles diversos reactivos

y metodologías que permiten la investigación de interacciones enzima-sustrato

específicas. La selección de una secuencia de trabajo apropiada depende de la

sensibilidad que requiera el investigador. Las soluciones colorimétricas son útiles para la

detección, mientras que los reactivos fluorescentes son más adecuados para la

cuantificación de la actividad enzimática. (8)

Actividad especifica: La actividad específica se utiliza para evaluar cuán pura es una

preparación de enzima o proteína. Es la cantidad de sólido necesaria para hidrolizar una

cantidad predeterminada de un cierto sustrato en un cierto tiempo y a una cierta

temperatura. A la hora de escoger una enzima, es necesario elegir la de mayor actividad,

ya que esto significa que es necesario una menor cantidad de enzima para hidrolizar un

sustrato, y, por tanto, será menor la cantidad de enzima que deberemos eliminar después

del tratamiento. La actividad específica está expresada en unidad de sustrato

transformado por miligramo de preparación enzimática, en condiciones estándar de

temperatura y a un cierto valor de pH. Cuanto más alto es el valor, mayor es la capacidad

catalítica de una cierta cantidad de enzima. (9)

Recambio molecular: Se refiere a la renovación de los componentes moleculares

esenciales de una enzima. Esto puede incluir la sustitución o reemplazo de ciertos grupos

funcionales, cofactores o subunidades dentro de la estructura de la enzima.

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La actividad molecular (número de moléculas de sustrato transformadas por una sola

molécula de enzima por minuto) de distintos enzimas oscila entre unos pocos miles y

varios millones de moléculas de sustrato por minuto. (10)

2. ¿Qué es un sistema enzimático y de que elementos está formado?

Grupo de enzimas cuya misión es acelerar (catalizar) millones de veces las reacciones

químicas en los organismos vivos. Hay un gran número de enzimas específicas que

desempeñan un papel importante en los procesos fisiológicos (digestión, conducción

nerviosa, síntesis hormonal, etc.). (11)

Los elementos que lo conforman son:

1. Sustrato: La bioquímica sostiene que un sustrato es una molécula sobre la cual actúa

una enzima. Dicho de otra forma, las enzimas se encargan de catalizar las reacciones

químicas que involucran a un sustrato. La unión entre la enzima y el sustrato forma

un complejo. (12)

2. Enzimas: un conjunto de proteínas encargadas de catalizar (disparar, acelerar,

modificar, enlentecer e incluso detener) diversas reacciones químicas, siempre que

sean termodinámicamente posibles. Esto quiere decir que son sustancias reguladoras

en el cuerpo de los seres vivos, por lo general disminuyendo la energía inicial

requerida para poner en marcha la reacción. (13)

3. Cofactores: Es un componente no proteico, termoestable y de bajo peso molecular,

necesario para la acción de una enzima. El cofactor se une a una

estructura proteica denominada apoenzima, y a este complejo se le

denomina holoenzima. Entre los cofactores mencionables se encuentran: Iones

metálicos (Fe2+, Cu2+, K+, Mn2+, Mg2+, entre otros) y moléculas orgánicas o

coenzimas. (14)

4. Coenzima: Las coenzimas son compuestos orgánicos que facilitan la acción de las

enzimas y pueden unirse temporal o permanentemente a una enzima. Las coenzimas

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pueden catalizar reacciones, pero no con la misma eficacia que cuando están unidas a

una enzima. Las coenzimas que están estrecha o covalentemente unidas a las

enzimas se denominan grupos protésicos. Las coenzimas que están más débilmente

asociadas a las enzimas pueden describirse como cosustratos. (15)

5. Catalizador: Sustancia que acelera una reacción química sin sufrir un cambio. (4)

6. Sitio activo: La parte de la enzima donde se une el sustrato. (4)

3. ¿Cuáles son las reacciones generales de ínter conversión de los aminoácidos y que

importancia tienen las transaminasas en la evacuación funcional de algunos tejidos?

Una reacción general de aminoácidos es su descarboxilación a aminas; de este modo se

forman una serie de aminas que son farmacológicamente activas. Así, por ejemplo, la

histidina se decarboxila a histamina, la tirosina a tiramina y el glutamato a 𝑦-ami-no-

butirato. (16)

También están las reacciones de transaminación son fundamentales para la

interconversión de aminoácidos. En estas reacciones, un grupo amino (-NH2) de un

aminoácido se transfiere a una cetona o a un grupo alfa-cetoglutarato, produciendo un

nuevo aminoácido y un nuevo alfa-cetoácido. Esto se lleva a cabo gracias a la acción de

las enzimas llamadas aminotransferasas o transaminasas. Por ejemplo, la alanina se puede

convertir en piruvato o viceversa mediante la transaminación.

Las transaminasas o aminotransferasas catalizan la reacción de transferencia del grupo

amino de un aminoácido a un a-cetoglutarato (un -cetoácido). Las más conocidas son la

transaminasa glutámico-oxalacética (TGO) o aminotransferasa de aspartato (AST) y la

transaminasa glutámico-pirúvica (TGP) o aminotransferasa de alanina (ALT). La GOT se

localiza principalmente en el hígado, miocardio, riñón, encéfalo y musculatura

esquelética; la TGP está presente en concentraciones mucho más elevadas en el hígado

que en los demás órganos. La medición en sangre de ambas enzimas es un indicador

sensible de la integridad de muchos tejidos, en particular de las células hepáticas,

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coadyuvando en el diagnóstico etiológico y en la implementación de las medidas

terapéuticas específicas. (17)

4. ¿Como interviene los estados malnutrición proteico calórico en las características

osmolares y buffer de las proteínas?

La desnutrición calórico-proteica, antes llamada malnutrición calórico-proteica, es una

deficiencia energética causada por el déficit de todos los macronutrientes. Suele estar

acompañada de deficiencias de muchos micronutrientes. La desnutrición calórico-

proteica puede ser súbita y completa (inanición) o gradual. La gravedad varía desde

deficiencias subclínicas hasta una emaciación evidente (con edema, alopecia y atrofia

cutánea) y la inanición. Con frecuencia, afecta a varios sistemas orgánicos. Para el

diagnóstico, suelen realizarse pruebas de laboratorio, entre ellas, la medición de la

albúmina sérica. (18)

La malnutrición proteico-calórica a menudo conduce a una disminución en la

concentración de proteínas en sangre, incluyendo albúmina y otras proteínas séricas. Esto

puede dar como resultado una disminución de la presión osmótica coloidal del plasma

sanguíneo. Una disminución en esta presión puede contribuir a la retención de líquidos y

edema. Las proteínas, en particular las histidinas de las proteínas, pueden actuar como

sistemas amortiguadores (buffers) en el cuerpo para mantener el equilibrio del pH. En

condiciones de malnutrición proteico-calórica, donde la síntesis de proteínas puede estar

comprometida, la capacidad de las proteínas para actuar como buffers y ayudar a

mantener un pH adecuado en el cuerpo puede verse afectada.

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XII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

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XIII. RECURSOS:

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