Introducción - Historia

Microorganismos: Seres vivos muy pequeños que no pueden ser observados a simple
vista, solamente con el uso de microscópicos.

• Presentan una enorme diversidad y versatilidad fisiológica y metabólica.

• Son ubicuos encontrándose en diferentes ambientes como en el aire, agua, suelo
y en ciertas partes del organismo)
• Pueden presentar efectos beneficiosos y perjudiciales.

Los roles más importantes que llevan a cabo son:

✓ Reciclaje de la materia orgánica biósfera

✓ Incorporación de N2
✓ Son la base cadena alimentaria

Procariotas (Sin núcleo verdadero): Unicelulares

▪ Dominio Bacteria.
▪ Dominio Archaea; viven en ambientes extremos

Antes, ambos dominios se encontraban formando parte de uno solo, denominado

Archarbacteria.

Eucariotas (Con núcleo verdadero): Unicelulares y Pluricelulares

Dominio Eukaria: Hongos, Algas y Protozoarios

Virus

▪ Son entidades no-celulares y parásitos absolutos que viven a expensan de otras

células.
▪ Conforman el límite entre lo vivo y la materia inerte.

Historia de la microbiología

1673: Antonie Van Leeuwenhoek desarrolla un primer microscopio muy rudimentario.

Se produjo un retraso en el estudio de los microorganismos debido:

• Al tiempo que tomo el poder desarrollar buenos microscopios

• A la faltaban de técnicas adecuadas para poder estudiar dichos microorganismos.

Ya entrado el Siglo XIX, las investigaciones se centraban en poder develar 2 preguntas:

• ¿Existía la generación espontánea?

• ¿Quiénes causaban las enfermedades infecciosas?

A fines del siglo XIX; estas preguntas tuvieron respuesta y sentaron las bases para el
desarrollo de la Microbiología como Ciencia Independiente.

Generación espontánea (GE): Esta teoría intentaba explicar el origen de aquellos

organismos que se encontraban presentes en alimentos putrefactos.
Según esta teoría; las moscas y gusanos surgían a partir de la materia inerte y se

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estableció el término “germen” o semilla; la cual se encontraba en el aire:
Así; las larvas de moscas surgían de los cadáveres, las moscas del estiércol y las
serpientes y ratas del suelo húmedo.

1668: Redi, antes del microscopio, se opone a dicha teoría y realiza una serie de
experimentos.
Coloca trozos de carnea en un recipiente abierto y otro cerrado. Al descomponerse la
misma, observo que:

• En el recipiente abierto había moscas, huevos, larvas y gusanos.

• En el recipiente cerrado no había larvas ni gusanos.

Los defensores de la GE refutaron dichos resultados debido a que no había aire dentro de
los frascos, el cual era necesario para que se produzca el fenómeno de GE, a lo cual Redi
repitió el ensayo; pero en vez de sellar los frascos, los cubrió con gasas observándose
moscas, larvas y gusanos pero por fuera del frasco.

1673: Antonie Van Leeuwenhoek desarrolla un primer microscopio muy rudimentario.

1745: Needham calentó un caldo y lo dejo expuesto mientras se enfriaba, provocando una
“contaminación espontánea”.

1765: Spallanzani establece que “los microorganismos ingresan al caldo después de que
este fue hervido y dejado enfriar” y lo demostró calentando caldo en frascos cerrados; los
cuales no se contaminaban.

Needham refuta a Spallanzani diciendo que el calentamiento destruyó la “fuerza vital”, que
se mantuvo fuera, y no permitió que entre en contacto con el caldo al sellar el frasco.
Paralelamente Lavoisier demuestra la importancia del O2 en la vida, lo cual convalido la
postura de Needham con respecto a la de Spallanzani.

1858: Virchow desafía la teoría de GE enunciando el concepto de Biogénesis:

Todas las células vivas solo surgen de células vivas preexistentes

1861: Pasteur demuestra que los microorganismos se encuentran en el aire a través de

dos experiencias:

1. Al filtrar el aire y observa el filtro al microscopio, ve estructuras similares a las del

material putrefacto.
2. Al calentar dos caldos hasta ebullición, en donde:
A) Uno se deja enfriar abierto y se contamina.
B) Uno es sellado y se deja enfriar, el cual no se contamina.

Pero, este último experimento sufría las mismas objeciones: el aire no estaba presente
dentro de los frascos.
Al final, ideo un experimento ingenioso que no pudo ser refutado:
Tomo un balón con caldo y con calor forma en el balón un cuello de cisne. Calienta el
caldo hasta ebullición y lo deja enfriar, así debido a la abertura por el cuello de cisne, el
aire puede ingresar al balón.
El caldo no se contamina ya que los microorganismos quedan en la curvatura del cuello y
no logran alcanzar el caldo. Si se inclina y se hace tocar dicha región con el medio, este

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se contamina.
Así, logro refutar la GE y demostró que:

• Los microorganismos se hayan en el material inerte: aire, líquidos, sólidos

• La vida puede ser destruida por calentamiento.
• Es posible idear métodos que eviten el acceso de microorganismos a los medios,
métodos de ASEPSIA.

1857-1914: Edad de Oro de la Microbiología en la cual se establece la relación entre los

microorganismos y ciertas enfermedades infecciosas.

En 1876 se establece la teoría microbiana de las enfermedades infecciosas a través de

demostraciones experimentales se enuncian los postulados de Robert Koch (descubridor
del Mycobacterium tuberculosis):

• Se demuestra la presencia de microorganismos en el animal enfermo, los cuales

pueden ser aislados y cultivados (obteniéndose cultivos puros de los mismos).
• Si dichos microorganismos son inoculados en organismos sanos; se reproduce la
enfermedad. Y de esta nuevo organismo enfermo es posible re-aislar al germen y
probar que es el mismo.

De aquí surgió:

 Definición de cultivo puro.

 Walter Hesse ideo medios de cultivo sólidos a base de: papa, gelatina. Agar
(dulces de la esposa)

1880: Sergei Winograsky toma un tubo de vidrio en cual tenía

suelo o tierra en su fondo y por arriba de este sustrato, agua.
Observo el crecimiento de microorganismos pero a distintas
alturas del tubo. De este experimento empezaron a surgir las
teoría sobre las distintas necesidades de O2 por parte de los
microorganismo y la Ecología Microbiana (por ejemplo los
Ciclos biológicos del azufre y el reciclado de la materia).

1884: Hans Christian Gram ideo la coloración de Gram,

pudiendo clasificar a las bacterias en 2 grandes grupos, Gram
(+) o (-).

1887: Julius Richard Petri invento las cajas de Petri.

1892: Ivanowski estudio la enfermedad del mosaico del tabaco, descubrió que el agente
que la causaba era una partícula infinitamente minúscula capaz de atravesar e impregnar
los filtros de la porcelana, algo que las bacterias nunca podrían hacer, y el filtrado
reproducía la enfermedad. Acuño el termino Virus= veneno.

1935: Stanley, a través de sus estudios, estableció que los virus:

• Son diferentes a otros microorganismos

• Son tan simple y homogéneo que pueden ser cristalizados.

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1940: Se crea el microscopio electrónico

1735: Jenner: Primera vacuna

1894: Erlich: Teoría de la Inmunidad

1908: Erlich: Salvarsán

1930: Sulfamidas

1929: Fleming: Penicilina

Pasteur elucida la teoría de la inmunización en la que: Gérmenes avirulentos en

laboratorio pueden inocularse a un organismo sano, generando una protección o
inmunidad pasiva frente al mismo germen virulento.

Tecnología del DNA recombinante- Ingeniería genética

Se origina en base a:

• genética: mecanismos por los que los microorganismos heredan rasgos

• Biología Molecular: cómo está la información en el DNA y como se relaciona con la
síntesis de proteínas

1930: Comienza con genética en animales y vegetales

1940: En organismos unicelulares, como bacterias, los cuales son más simples y con un
alta velocidad de crecimiento.

1941: Beadle y Tatum establecen la relación entre genes y enzimas.

1944: El experimento Avery-Mac leod- Mc Carty demuestra que el DNA es la sustancia

que causa la transformación bacteriana.

1946: Lederberg y Tatum descubren la Conjugación Bacteriana.

1953: Watson y Crick establecen la estructura y replicación del DNA

Explosión

1961: Jacob y Monod realizan estudios sobre el control DNA, síntesis de Proteínas,
ARNm y Regulación.

1960: Berg descubre que fragmentos de ADN humano, o de otro animal, que codifican
proteínas pueden adherirse al DNA bacteriano; generando moléculas de ADN híbrido o
recombinante. Dicho ADN, insertado en una bacteria, produce la proteína deseada en
grandes cantidades; como insulina, hormona del crecimiento, etc.

Interés de su estudio

Los microorganismos patógenos para el ser humano son el principal problema:

• En países subdesarrollados, debido a las enfermedades emergentes

• En pacientes inmunodeprimidos
• Debido a la presencia de cepas resistentes.

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Ciertos microorganismos son importantes en la producción de alimentos:

• Como los alimentos fermentados

• Aditivos: cítrico, aspartamo
• Para evitar pérdidas por deterioro: conservación

Microorganismos importantes en Agricultura:

• Para la fijación de N2
• Microflora del rumen
• Reciclaje de nutrientes (Ciclos biogeoquímicos).
• Causantes de enfermedades de plantas y animales

Microorganismos importantes en Energía/Ambiente:

• Biomasa microbiana (fotosintéticos)

• Producción de metano, metanol, etanol (biocombustibles).
• Biorremediación: degradación de petróleo, solventes
• Biotecnología: microorganismos modificados genéticamente: control de plagas
(biosidas)

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Célula Procariota

Las células procariotas pueden pertenecer a 2 dominios:

• Eubacteria
• Archaea

Las procariotas son células sin núcleo celular diferenciado (no poseen núcleo verdadero)
cuyo material genético se encuentra disperso en el citoplasma reunido en una zona
denominada nucleoide. Sin excepción, los organismos basados en células procariotas son
unicelulares.
En el caso de las Archaea, son bacterias que habitan ambientes extremos y presentan
estructuras que difieren desde el punto de vista químico con las de las Eubacteria. Ej.:
poseen un pseudopared celular.

Los organismos unicelulares son seres microscópicos donde una célula individual
cumple todas las funciones necesarias; como ser las metabólicas, de crecimiento y
reproducción.

A diferencia de las procariotas, las células eucariotas presentan núcleos verdaderos, sus
funciones celulares son llevadas a cabo en organelas y presentan estructuras y
procesos de reproducción más complejos.

Dentro del domino Eukaria encontramos a los hongos, algas y protozoarios.

Morfología y tamaño celular

La forma determina el funcionamiento y estabilidad. No es trivial, ya que es una

característica genéticamente dirigida y la cual ha sido seleccionada por la evolución para
asegurar la adaptación de la especie a un hábitat en particular. Morfológicamente existen
3 estructuras básicas:

• Morfología esférica: Cocos

• Morfología bacilar o cilíndrica: Bacilos
• Morfología helicoidal o en forma de espiral: Espirilos

De las cuales surgen variaciones como ser:

• Vibrios (curvados, espirilinos, alargados, retorcido)

• Masa
• Filamentos

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Con respecto al tamaño, presentan rangos (los cuales varían dependiendo del
microorganismo) que por lo general son:

• Para Cocos: 1 a 1,5 µm.

• Para Bacilos: 0,5 a 2 o 5 µm.
• Para los Filamentos: 0,5 hasta 100 µm.

Salvo ciertas excepciones, como las cianobacterias (bacterias acuáticas que se

encuentran agregadas dentro de una cápsula mucilaginosa o formando filamentos
simples, los cuales pueden alcanzar dimensiones de 8x50 µm), la mayoría de las
bacterias son mucho más pequeñas que las células eucariotas; Ej.:

• Bacillus megaterium (1,5x4 µm)

• Escherichia coli (1x3 µm): Son bacterias muy pequeñas llamadas comúnmente
Cocobacilo.
• Streptococcus pneumoniae (0,8 µm de diámetro): Estas bacterias forman un
diplococo y son patógenas pudiendo llegar a provocar neumonía.
• Haemophilus influenzae (0,25x1,2 µm)

Debido a su pequeño tamaño, en comparación con células eucariotas, las procariotas:

➢ Puede crecer y multiplicarse a una velocidad superior, por ende, sus procesos
metabólicos son más cortos o requieren menos tiempo.
➢ El intercambio de nutrientes y sustancias de desechos con el medio es más
eficiente, lo que permite dicha alta velocidad metabólica.
➢ Producen cambios importantes (necesarios y beneficiosos para ellas mismas) en
parámetros físico-químicos de un ecosistema en tiempos relativamente cortos
debido a un mayor tamaño de población.

Modos de agrupación

Los modos de agrupación son fácilmente visibles al microscopio óptico.

Para el caso de los Cocos, dichos modos de agrupación se pueden clasificar según los
planos de división:

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Para el caso de los Bacilos, se dividirán exclusivamente a través de sus ejes menores
generando distintos modos de agrupación:

1. Bacilos aislados o diplobacilos (dos células juntas)

2. Streptobacilos: forman una cadena.
3. Cocobacilos: Son bacilos tan pequeños que, durante las divisiones, las células van
quedando una al lado de otras formando un aglomerado de las mismas)

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Estructura general de una célula procariota típica

La célula procariota presenta un

citoplasma rodeado de una membrana
plasmática que se haya rodeada
externamente por la pared celular.
Además de la pared celular, pueden existir
otras estructuras más externas, como
capsula, o asociadas a la motilidad, como
los flagelos.

I. Membrana citoplasmática

Es una bi (en eucariotas y Eubacteria) o monocapa (en algunas Archaeas) lipídica,

constante, formada por fosfolípidos y proteínas (integrales y periféricas).
Presentará funciones básicas y comunes a todos los tipos de organismos:

❖ Es una barrera vital que separa el citoplasma del medio ambiente

❖ Actuando como una barrera selectiva ya que presenta permeabilidad selectiva
❖ Es el límite osmótico de la célula y regula el intercambio de agua de la célula con
el medio.
❖ Transporte de nutrientes y desechos

En el caso particular de organismos procariotas, la membrana citoplasmática:

• No posee esteroles pero algunos microorganismos, especialmente organismos

fotosintéticos aerobios o anaerobios, pueden presentar membrana rica en
compuestos terpenoides pentaciclicos llamados hopanoides (cuya síntesis no
requiere pasos oxidativo). Estos equivalen a los esteroles y cumplen la misma
función que el colesterol en las células eucariotas; la de conferir rigidez a
la membrana plasmática.

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Diplopteno, un compuesto hopanoide Colesterol, un compuesto esterol

• Es una estructura constante y de la cual derivan los sistemas internos de

membrana que hacen las veces de ‘’organulos citoplasmáticos’’ como ser los
mesosomas (invaginaciones de la membrana), cromatóforos, citomembranas,
tilacoides, etc. en las bacterias.

Ciertas bacterias pueden presentar membranas internas:

▪ Tilacoide laminares y tubulares (Ej.: fotosintéticas)

▪ Cuerpos laminares (Ej.: metanogénicas y nitrificantes)

Son estructuras membranosas que no presentan continuidad con la membrana

plasmática. Particularmente, los procariotas no presentan cloroplastos, pero si
membranas tilacoides en donde se sitúan los centros de reacción fotosintéticos, y en
su cara externa se disponen los ficobilisomas; y dicho conjunto constituyen el
aparato fotosintético de las cianobacterias.

• Interviene en la generación de energía (fotosíntesis y respiración) debido a la

falta de mitocondrias y cloroplastos.
• Es importante en la biosíntesis de componentes de membrana, pared celular,
enzimas, capsula, etc.
• Anclaje del cromosoma
• La proporción de proteínas/lípidos (80:20) en procariotas es mayor que en
eucariotas.

Los lípidos presenten en las membranas de las Archaeas son diferentes al resto de las
bacterias y de las células eucariotas, dado que son hidrocarburos ramificados unidos al
glicerol por un enlace éter, pudiendo formar dieteres de 20 C o tetraeteres de 40 C.
También están presente fosfo, sulfo y glucolipidos.
Los dieteres forman bicapas regulares mientras que los tetraeteres se asocian
formando monocapas más rígidas; y ambos tipos pueden coexistir en la membrana de
las Archaeas.

II. Citoplasma bacteriano

Se presenta un estado de gel (gelatina), siendo mucha más consistente que en la

eucariota que presenta un citosol (-sol- deriva de solución). Al carecen de organelas, un
citoplasma más denso le permite a la célula procariota fijar funciones; es decir posicionar
componentes celulares, como los ribosomas o el ADN, en un determinado y adecuado
lugar para que puedan realizar sus funciones específicas.

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En el citoplasma de una procariota se puede encontrar gotas o gránulos de:

• Polisacáridos: Principalmente glucógeno y almidón que actúan como sustancia de

reserva.
• Cianoficina: Son gránulos refringentes de reservas nitrogenadas (cuando se
acercan a la fase estacionaria de crecimiento).
• Glóbulos de grasas: Formados por cera y polihidroxibutirato (PBH) el cual es un
elemento de reserva fundamental en el proceso de esporulación.
• Polifosfatos: Son reserva inerte de fosfato
• Azufre (en bacterias que usan (H2S) como donador de electrones para sus
oxidaciones)
• Inclusiones: Son componentes que cumplen funciones específicas:

1. Ribosomas 70s: Conformado por una subunidad menor 30s (formada por
ARN 16s + 20 proteínas) y una subunidad mayor 50s (formada por ARN 23s
y 5s + 50 proteínas). El ARN 16s se puede secuenciar e identificar
genotípicamente el organismo procariota.
2. Carboxisomas: Actúan en la fijación de CO2.
3. Magnetosomas: Son estructuras cubo u octaedros de magnetita la cual
utiliza la bacteria para detectar y desplazarse hacia campos magnéticos.
4. Vacuolas gaseosas: Producen la flotación y movilización en aquellas
bacterias sin flagelo.
5. Cromosoma: Las bacterias presentan un único cromosoma haploide,
superenrollado, CCC (circular, covalentemente cerrado).
Sus cargas negativas están estabilizadas por Mg y poliaminas.
En las Archaeas, dichas cargas son estabilizadas por histonas.
Los cromosomas aislados muestran una composición de un 60% de ADN,
30% de ARN y 10% de proteínas. El DNA (genóforo o cromosoma
procariótico) se encuentra en forma más o menos libre en el citoplasma y la
zona que ocupa se denomina nucleoide.
Excepto en algunas arqueas, muy pocas proteínas se asocian al DNA (el
cual queda desnudo) y puede contener otros elementos genéticos no
cromosómicos como plásmidos o genomas fágicos.

Existen algunas excepciones, en el sentido de que podemos encontrar cromosomas

lineares o incluso más de un cromosoma:

 En el género Borrelia el cromosoma es lineal con los extremos cerrados

covalentemente formando una especie de bucle de horquilla.
 El género Streptomyces poseen un cromosoma lineal, pero sus extremos
contienen secuencias cortas repetidas y están acomplejados con proteínas, lo que
recuerda de cierto modo los telómeros eucariotas.
 Rhodobacter sphaeroides, Vibrio, Leptospira y Brucella presentan 2 cromosomas
circulares. Sinorhizobium melitoti presenta 3. Distintas cepas de Burkholderia
cepacia presentan entre 2 y 4 y Agrobacterium tumefaciens cuenta con un
cromosoma lineal y otro circular.

III. Estructuras superficiales o externas de la célula bacteriana

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Las estructuras externas de una bacteria se encuentran englobadas en el glicocalix el
cual se define como las sustancias que contienen polisacáridos que forman
acumulaciones de material mucoso o viscoso situado externamente respecto de la pared
celular. Dichas estructuras externas pueden ser:

• Mucilago: Cuando el material polimérico secretado difunde al medio y forma

acumulaciones o una capa dispersas y amorfas separadas de la célula.
• Capsula: Cuando el material polimérico secretado forma una capa con integridad
estructural, compacta y bien cerrada que permanece adherida a la pared celular
actuando como un revestimiento exterior de extensión limitada.

Químicamente, la mayoría de estas envolturas están compuestas únicamente por

polisacáridos; siendo homo o hetero polímeros, pero:

➢ Existen muy pocos casos en donde dichas estructuras presentan una naturaleza
puramente proteica.
➢ Existen casos en donde dichas estructuras están compuestas por polisacáridos y
péptidos o polisacáridos y proteínas. Entre estos últimos se pueden generar
unidades estructurales más complejas.

Estructuralmente, se componen de macromoléculas asimétricas que forman series de

unidades repetitivas que se disponen siguiendo un orden regular radial o en láminas
concéntricas. Su matriz se encuentra muy hidratada.

Las funciones de dichas envolturas; especialmente referidas a la capsula, son:

• Permite la fijación o adhesión de ciertos microorganismos patógenos a sus

hospedadores.
• Protege de metales pesados y antibióticos
• Resisten mejor a las células fagocíticas del sistema inmunitario
• Resistencia a la desecación
• La composición química de la capsula determina capacidad antigénica de la
bacteria
• Receptora para fagos

Hay diferentes tipos de cápsulas, pero no son necesariamente excluyentes entre sí:

• Rígida: con consistencia estructural con un límite exterior definido

• Flexible: poca consistencia, carente de límites precisos
• Integral: íntimamente asociada con la superficie celular
• Periférica: No tan asociada a la superficie celular ni tan compacta, y finalmente se
dispersa al medio exterior.

Capa S

No en todas las bacterias, pero si en la mayoría, existe una cubierta externa paracristalina
(independientemente de la existencia o no de capsula), de naturaleza proteica o
glicoproteica llamada Capa S.
Es una estructura de amplia distribución la cual está presente en la mayoría de especies
del dominio Bacteria y prácticamente en todos los grupos del dominio Archaea.
Las proteínas de la capa adoptan una disposición bidimensional; dando la apariencia
paracristalina a la estructura.

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Se encuentra asociada:

 En Gram (+), al péptidoglucano (PG) de la pared celular, estando conformada por

subunidades idénticas de proteínas o glucoproteínas.
 En Gram (-), a lipopolisacaridos (LPS) de la membrana externa de la pared celular.
 En Archaeas, al no presentar una verdadera pared, es la única capa que rodea al
protoplasto (célula que no presenta pared celular) cumpliendo funciones de una
pared celular.

La función de esta capa no se conoce bien, pero crea una interfase entre la célula y el
ambiente que sirve:

• De protección contra las defensas del huésped (en el caso de microorganismos

patógenos).
• Como barrera de permeabilidad contra moléculas de alto peso molecular; como
virus. Esto todavía no se ha confirmado.
• En Eubacteria, provistas de pared celular, actuaría como un tamiz molecular
protector que impide la entrada de agentes antibacterianos.

También, la capa S le dará forma y rigidez a muchas especies del dominio Archaea, en
donde el ensamblaje de sus proteínas o glicoproteínas seguirá una simetría hexagonal,
tetragonal o trimérica.
A su vez, modificara su composición dependiendo de la clase de Archaea:

• Halófilas: Contiene glucopéptidos especiales, y está estabilizada por altas

concentraciones de sodio, presentes en su nicho. Ej.: Halobacterium.
• Termoacidófilas: Existen glucoproteínas en matrices hexagonales, ricas en
aminoácidos polares (Ser, Thr), estando la capa S estabilizada por los bajos pH
del medio. Ej.: Sulfolobus.

IV. Motilidad. Flagelos

Los flagelos son estructuras filamentosas que cumplen una función específica, la
motilidad. No están presenten en todos los microorganismos y son característicos de
un determinado género o especie, adquiriendo valor taxonómico.
Son submicroscópicos (no observables al microscopio óptico), miden 20 nm x 20 µm y
tienen una velocidad de rotación de 20-200 U/se (micras por segundo).

Según su número y localización en la célula se los puede clasificar en:

Ej.: E. coli puede presentar entre 4 y 10 flagelos.

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 En bacterias Gram (+) el flagelo
presenta un par de anillos, mientras
que en las Gram (-) presentará 2
pares de anillos:

• Par interno: Se encuentra a

nivel de la membrana citoplasmática,
y dichos anillos reciben el nombre de
anillos MS.
• Par externo: asociado a la
capa de peptidoglicanos (anillo P) y
a la membrana de lipopolisacaridos
externa (anillo L) de la pared celular.

Rodeando al par interno (el cual

conformara en parte el rotor) se
hayan el complejo de proteínas
Mot; las cuales conformaran el
estrator y harán posible la rotación
del flagelo utilizando como fuerza
motriz el gradiente electroquímico de
protones que existe a través de la membrana citoplasmática bacteriana.
Por debajo de los anillos MS se encuentran las proteínas Fli que actuaran como el
conmutador del motor. Estas indicaran y generar cambios en el sentido de rotación del
motor; y por ende del flagelo.

Formación del flagelo

1. Se produce la génesis del par de anillos interno (anillos MS).

2. A medida que estos se forman, también lo hace el eje del flagelo, el cual hueco.
Este alcanza la capa de peptidoglicano de la pared y se forma el anillo P.
3. El crecimiento del eje continua hasta alcanzar la capa de lipopolisacáridos, en
donde se forma el anillo L.
4. El eje continúa extendiéndose, abandonando la pared celular, hasta formar un
gancho, llamado gancho primario, sobre el cual se acomodará una proteína CAP
(compuesto por proteínas) transformándolo en un gancho maduro.
5. Paralelamente, se van sintetizando en el citoplasma las proteínas Mot, Fli y
flagelinas.
6. Las flagelinas abandonarán el citoplasma a través del conducto del eje y se irán
acomodando por debajo del CAP provocando el crecimiento apical del filamento
(desde el extremo apical del mismo y no desde la base, pero siempre por debajo
de las proteínas CAP).

Por lo tanto, las porciones filamentosas del flagelo estarán formadas por unidades
submicroscópicas de flagelina.
El eje y los pares de anillos conectan el flagelo a la envoltura, haciendo que el protoplasto
conserve los flagelos.

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La rotación flagelar puede ser:

• En contra de las agujas del reloj: Alineación los flagelos en un haz de rotación
simple, causando que la bacteria nade en línea recta hacia un gradiente químico
de un determinado atrayente que haya detectado (glucosa, aminoácidos).
• A favor de las agujas del reloj: Dobla los flagelos haciendo que cada uno apunte
en dirección diferente causando detención del movimiento y dejando estática a la
bacteria.

La bacteria no detecta concentraciones fijas de atrayentes o repelentes, sino gradientes

químicos de los mismos.

En aquellas bacterias que presentan flagelos dispuestos peritricamente:

➢ Debido al gradiente químico un determinado atrayente; como ser glucosa o

aminoácidos, que se haya detectado los flagelos rotaran en sentido contrario a
las agujas del reloj, alineándolos (flagelos en penacho) e impulsando a la
bacteria en dirección del gradiente positivo del atrayente.
➢ Debido al gradiente químico un determinado repelente; como antibiótico o
metales pesados, que se haya detectado los flagelos invierten su sentido de
rotación y comienzan a girar a favor de las agujas del reloj; esto hace que se
separen, abandonando la formación en penacho, deteniendo el movimiento y
ocasionando una ‘’voltereta’’ de la bacteria. Nuevamente, volverán a invertir su

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 sentido de rotación (otra vez en sentido contrario a las agujas del reloj)
impulsando a la célula en dirección contraria al gradiente positivo del repelente.

En aquellas bacterias que presentan un flagelo dispuesto en forma polar:

➢ Debido al gradiente químico un determinado atrayente que se haya detectado el

flagelo rotara en sentido contrario a las agujas del reloj impulsando a la bacteria
en dirección del gradiente positivo del atrayente.
➢ Debido al gradiente químico un determinado repelente que se haya detectado el
flagelo invierte su sentido de rotación y comienzan a girar a favor de las agujas
del reloj impulsando a la célula en dirección contraria al gradiente positivo del
repelente.
En el caso de flagelos unidireccionales, mediante paradas periódicas, la bacteria
puede reorientación y luego; por medio de una rotación en contra de las agujas del
reloj, el flagelo desplazará a la célula; en este caso, en dirección opuesta al
gradiente positivo del repelente.

Otras formas de motilidad, además de los flagelos, la constituyen:

✓ Filamento axial o endoflagelo: En el caso de las espiroquetas, presenta flagelos

de forma helicoidal que emergen de ambos polos de la bacteria. Sin embargo,
estos se pliegan desde el polo hacia el cilindro protoplasmático y se mantienen
localizados en el peri plasma de la célula.
Como el cilindro protoplasmático es rígido y la vaina externa es flexible, cuando los
endoflagelos rotan en una misma dirección, el cilindro protoplasmático lo hará en
la dirección opuesta, generando torsión en la célula. De esta forma, las
espiroquetas se muevan mediante movimientos de flexión o de látigo.
✓ Motilidad deslizante: Algunos procariotas, generalmente bacterias filamentosas o
bacilares, son capaces de moverse aun careciendo de flagelos. A diferencia de la
movilidad flagelar, en la que las células pueden detenerse e iniciar una nueva
dirección, la movilidad por deslizamiento es una forma más lenta de
desplazamiento que normalmente ocurre de manera lineal siguiendo el eje mayor
de la célula y requiere que exista contacto entre las células y una superficie
sólida.
En la motilidad deslizante pueden estar involucrados distintos mecanismos:
o Las cianobacterias secretan un polisacárido mucoso sobre la superficie
externa de la célula conectándola con la superficie sólida por la cual la
célula se desplaza. A medida que este polisacárido se va adhiriendo a la
superficie, la célula se desplaza por tracción.

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 o La Cytophaga también se desplaza debido a una secreción mucosa, pero
en su caso la célula gira en torno a su eje mayor según se desplaza.
o La Myxococcus xanthus presenta dos formas de movilidad por
deslizamiento. Una basada en el uso de los pelos tipo IV ( el cual consiste
en la extensión y retracción repetida de los mismos que impulsan a la
célula) y la otra basada en la formación de un complejo proteico de
adhesión en un polo de la célula que permanece en una posición fija en la
superficie mientras la célula se mueve hacia delante; es decir que el
complejo de adhesión se mueve en dirección opuesta a la célula,
probablemente impulsada por algún tipo de movilidad citoplasmática
relacionada con el citoesqueleto.
✓ Flotación: Se da gracias a la presencia de vacuolas gaseosas; como en el caso de
las cianobacterias, varias bacterias fotótrofas rojas y verdes, algunas bacterias no
fotótrofas y Archaeas.
Son estructuras fusiformes, huecas, llenas de gas, rígidas y de longitud y diámetro
variable. Su membrana se compone de proteína (principalmente GvpA)
volviéndola impermeable al agua y a los solutos pero permeable a los gases.
La composición y presión del gas que las vesículas gaseosas encierran es la
misma que la del gas del medio en el que está suspendido el organismo. Sin
embargo, al encontrarse llenas de gas, disminuyen la densidad celular y aumentan
su flotabilidad. En el caso de organismos fotótrofos esto es muy beneficioso ya
que, en una columna de agua, les permite ajustar verticalmente su posición a
regiones donde la intensidad de la luz sea óptima para la fotosíntesis.
✓ Fimbrias y pelos bacterianos (pilina): Son estructuras filamentosas formadas por
proteínas que se prolongan desde la superficie celular.
Las fimbrias ayudan a los microorganismos a fijarse sobre superficies, como
tejidos animales (en el caso de las bacterias patógenas) y a formar películas o
biofilms (finas capas de células sobre la superficie de un medio líquido) para una
mejor captación de nutrientes.
Los pelos son similares a las fimbrias pero típicamente son más largos y solo hay
uno o unos pocos sobre la superficie celular. Pueden ser receptores para
algunos virus, unirse a superficies y facilitar el intercambio genético entre
células procariotas en el proceso de conjugación bacteriana.
La extensión y retracción de los pelos genera la movilidad a tirones, la cual es una
forma de deslizamiento sobre una superficie sólida. La energía para esta movilidad
se obtiene de la hidrólisis de ATP.

Quimiotaxis

Es un fenómeno en el cual las bacterias dirigen sus movimientos de acuerdo a ciertas

sustancias químicas presentes en su medio ambiente; siendo una respuesta sensorial,
mediada por quimiorreceptores, que modulan la dirección del motor flagelar ya sea para
acercarse o alejarse del estímulo.
Es una respuesta fisiológica básica en donde:

▪ Quimiotaxis positiva: Cuando el movimiento se produce en dirección hacia una

mayor concentración de sustancia química
▪ Quimiotaxis negativa: Cuando el movimiento se produce en dirección opuesta
respecto de una mayor concentración de sustancia química.

El proceso de quimiotaxis ocurre en tres etapas:

17
 1. Respuesta a la señal

Los procariotas, al ser tan pequeños, solo pueden percibir el cambio en la concentración
de una sustancia en función del tiempo, en lugar de la concentración absoluta del
estímulo químico.
Para detectar estos gradientes, las células utilizaran varias proteínas sensoras aceptoras
de metilo, localizadas en la membrana citoplasmática, que perciben la presencia de
atrayentes y repelentes. Estas proteínas son llamadas proteínas quimiotácticas
aceptoras de metilo (MCP) y puede percibir una serie dada de compuestos, Ej.: MCP
Tar de E. coli puede percibir atrayentes, como el aspartato y la maltosa, y repelentes
como cobalto y níquel.
Las MCP se unen a los atrayentes o repelentes directamente, en algunos casos, o
indirectamente mediante interacciones con las proteínas de unión periplasmáticas.
Las proteínas MCP no son quinasas sensoras pero interaccionan con proteínas quinasas
sensoras citoplasmáticas.
Cuando una MCP se une a una sustancia cambia su conformación y; debido a que está
en contacto formando un complejo con las proteínas citoplasmáticas CheW y CheA;
afecta la autofosforilación de CheA (quinasa sensora en la quimiotaxis) para formar CheA-
P; con la ayuda de CheW.
Los atrayentes disminuyen la velocidad de autofosforilación mientras que los
repelentes la incrementan.
A continuación, CheA-P pasa el fosfato a CheY; formando CheY-P, que es el regulador de
respuesta.
CheA-P también puede ceder el fosfato a CheB, otro regulador de la respuesta
quimiotactica, pero es una reacción mucho más lenta que la fosforilación de CheY.

2. Control de la rotación flagelar

CheY gobernará la dirección de la rotación flagelar, siendo CheY-P la especie capaz de

unirse a las proteínas Fli del flagelo, induciendo la rotación flagelar en sentido horario y el
tambaleo de la célula. Si no está fosforilada, CheY no puede unirse al motor flagelar y el
flagelo seguirá rotando en sentido antihorario; haciendo que la célula continúe
desplazándose.
CheZ, otra proteína reguladora de la respuesta quimiotactica, desfosforará a CheY-P.
Como los repelentes aumentan el nivel de CheY-P provocan el tambaleo, mientras
que los atrayentes disminuyen el nivel de CheY-P y por tanto provocan una natación
suave o desplazamiento.

3. Adaptación

El sistema debe ser capaz de detectar un cambio en la concentración del atrayente o el

repelente en función del tiempo; lo cual se logra mediante el proceso de adaptación.
La adaptación es el bucle de retroalimentación necesario para devolver al sistema a su
estado inicial e implicara la modificación covalente, más precisamente la metilación, de
las MCP.
La metilación de las MCP provoca cambios conformacionales y permite la adaptación a
las señales sensoriales.
La proteína citoplasmática CheR, también reguladora de la respuesta quimiotactica,
añade continuamente grupos metilo a las MCP a velocidad baja.
CheB es una demetilasa que elimina grupos metilo de las MCP y su fosforilación (CheB-
P) aumenta en gran medida la velocidad de su actividad.

18
  Si la concentración de atrayente aumenta, el nivel de CheA-P; y por lo tanto de
CheY-P y CheB-P, desciende y el nivel de metilación de las MCP empezara a
aumentar gradualmente debido a CheR, cuya actividad no se ve afectada.
De esta forma, MCP dejan de responder al atrayente (se adaptan), disminuyendo
la sensibilidad para el mismo, haciendo que la bacteria nade suavemente. Esta
pérdida de sensibilidad evita que la célula gaste energía innecesariamente al
desplazarse por acción de los flagelos, siguiendo un gradiente de atrayente
levemente mayor.
 Si la concentración de repelente aumenta, el nivel de CheA-P; y por lo tanto de
CheY-P y CheB-P, se incrementa y el nivel de metilación de las MCP empezara a
disminuir debido a la acción de CheB-P la cual no podrá ser contrarrestada por
CheR.
De esta forma, MCP aumentara su sensibilidad para el repelente, lo cual le
permitirá a la célula generar una adecuada ‘’respuesta de huida’’, evitando un
gasto energético y un desplazamiento excesivo al alejarse de la fuente nociva.

Endoesporas

Las esporas son elementos de resistencia que generan ciertas bacteria frente a
condiciones ambientales adversas como escasez de nutrientes, cambios de pH y
temperatura, radiaciones UV.
El proceso de esporulación, el cual tiene como objetivo generar dicha espora, involucra
cambios en la morfología y fisiología de la célula bacteriana los cuales están regulados
a nivel genético.
La célula madre se transforman en una espora, entrando en un estado de latencia,
dormancia o criptobiotico, dejando de crecer y de multiplicarse. Cando las condiciones
vuelven a ser favorables, la espora puede germinar transformándose nuevamente en
una célula vegetativa.
Las endoesporas son elementos de resistencia que se forman en el interior de las células
vegetativas.

Pared celular

La pared celular en procariotas es una característica distintiva muy importante ya que

todas las Eubacteria poseen pared celular a excepción del genero Micoplasma.
Es una estructura compleja y semirrígida, con una composición química única, que rodea
a la membrana celular subyacente y es la responsable de la configuración celular y de
protegerla de los cambios adversos del medio ambiente.

Tiene como función:

• Dar forma y rigidez; es decir una estabilidad a la Eubacteria.

• Da resistencia osmótica a la célula; ya que posee concentración interna 10 mM
(aproximadamente un 20% sacarosa) haciendo que se desarrolle una presión de
turgencia de aproximadamente 2 atm (la pared actuaría como si fuera una malla
antiestrés del neumático)

Si se produce una ruptura mecánica de una Eubacteria; saldrá todo el contenido celular
pero la pared queda intacta.
Normalmente, como las bacteria se encuentra en un medios hipotónico; el H2O del medio
tendera a ingresar a la célula hasta donde la pared se lo permita, evitando de este modo
que la célula estalle. En cambio, en un medio hipertónico, la célula tiende a perder H2O

19
hacia el medio, provocando que la membrana se retraiga pero la pared celular mantiene
su formar original (fenómeno conocido como plasmólisis).

Si se quiere producir la ruptura enzimática de la pared:

• En célula Gram (+), la pared celular se digiere totalmente por acción de lisozima.
Cuando se pierde totalmente la pared, la célula automáticamente se redondea (ya
que lo que le daba la forma era la pared) y forma un protoplato.
• En célula Gram (-) la pared celular se degrada parcialmente por acción de
lisozima, debido a la presencia de la capa externa de lipopolisacaridos la cual no
puede ser diferida por las lisozimas. De tal manera, dado los restos de pared
celular, se forma un esferoplasto.

Al no existir una pared y en medio hipotónico; se produce el ingreso pasivo de H2O a la

célula hasta que este estalla. En un medio isotónico la célula se estabilizara pero siempre
conservando una forma esférica. Y en un medio hipertónico se producirá la crenacion del
protoplasto (destrucción de la célula por deshidratación).
Al no haber pared celular tampoco se producirá la adsorción de los fagos, se perderán
las propiedades antigénicas de la Eubacteria, no se va a poder dividir ni revertir el
proceso.
Con respecto a lo último, existen bacterias, llamadas Formas L, que frente a condiciones
adversas (ATB, escasez de nutrientes) son capaces de generar autolisina y degradar su
pared, y después revertir el proceso.

Ambos tipos de bacterias presentan como único elemento en común al péptidoglucano

(PG).
Algunas Archaeas pueden presentan una estructura símil a la pared celular, llamada
pseudomureina; constituida por ácido talosaminuronico y n-acetil glucosamina (NAG)
pero carente de aminoácidos.
La mayoría de ellas poseen, en vez de la pseudomureina, polisacáridos o proteínas las
cuales forman capa S.

20
En Gram (+): Los ácidos teicoicos son polímeros de glicerol o ribitol fosfato y están
unidos covalentemente al PG (de pared) o a la membrana (llamándose ácidos teicoicos
de membrana o lipoteicoicos). Se encuentran ausentes en las Archaeas.
Actúan como:

• Soporte estructural del PG.

• Responsables de la carga negativa de la pared
• Antígenos de superficie.
• Receptores para fagos.
• Regulan la actividad de las enzimas de síntesis y degradación del PG (autolisinas)
durante el crecimiento, creando condiciones favorables para su actividad.

En Gram (-): La mayor parte de la pared celular está representada por una segunda
bicapa lipídica que, a diferencia de la membrana citoplasmática, no está compuesta sólo
por fosfolípidos y proteínas, sino que también contiene polisacáridos, denominándose
capa externa de lipopolisacaridos (LPS).
Los lípidos y los polisacáridos se presentan formando un complejo, de modo tal que la
estructura de la capa LPS consta de:

• Lípido A: Formado por la unión de dos moléculas de NAG en posición β 1-6 (un
disacárido) cuyos -OH 3, 4, 6 y –NH2 se encuentran esterificados con ácido
palmítico, láurico y mirístico. Las subunidades se unen con otras por medio de
uniones fosfato.
El lípido A se une al núcleo del polisacárido a través de cetodesoxioctanoato
(KDO).
Es la endotoxina bacteriana responsable de la antigenicidad y del
desencadenamiento de la respuesta inmunitaria en el sujeto infectado.
• Núcleo o core de polisacáridos: Conformado por 3 moléculas de KDO, 5 heptosas,
las cuales forman el core interno y 5 moléculas de hexosas (glucosa, galactosa,
NAG- en proporción 2.2.1-) que forman el core externo.
• Polisacárido O: Es un polisacárido específico y muy variable entre especies. Es
largo y presenta ‘’n’’ unidades formadas por 4 hexosas, siendo las más frecuentes
galactosa, glucosa, ramnosa y manosa; así como uno o más desoxiazúcares poco
frecuentes como abecuosa, colitosa, paratosa o tivelosa.

La mayor cantidad de proteínas (70%) de la capa LPS forman porinas (poros de la pared
que la vuelven relativamente permeable a pequeñas moléculas) unidas al PG y
lipoproteínas; las cuales también pueden estar unidas al PG, a las porinas y a los
fosfolípidos.
Una menor cantidad de proteínas de esta capa están implicadas en el transporte o actúan
como receptores de fagos.
La capa LPS presentara diversas funciones:

21
 ▪ Es un soporte de la toxicidad; mediado por el lípido A el cual es el responsable de
la toxicidad y antigenicidad.
▪ Otorga especificidad antigénica; mediada por los polisacáridos
▪ Es permeable a pequeñas moléculas y capaz de retener enzimas en el espacio
periplastico.

Composición de la pared celular

El PG está formado por 2 fracciones: una glucan (azucares) y una peptídica.

• La fracción glucan está conformada por unidades de disacáridos repetitivas; NAG

y acido n-acetilmuramico (NAM) unidos por enlaces β 1-4. Estas unidas se unen
formando hileras de 10 a 65 azúcares que constituyen el ‘’esqueleto” de hidratos de
carbono.
• La fracción péptica está formada por cadenas laterales de 4 aminoácidos, dispuestos
alternamente de formas D y L, unidas al NAM. Dichos aminoácidos son:
1. L-alanina
2. Ac. D-glutámico
3. Acido meso diaminopimelico (DAP) en Gram (-) o L-lisina en Gram (+).
4. D- Alanina

Las cadenas tetrapeptídicas laterales paralelas pueden unirse directamente entre

sí o mediante un puente transversal peptídico compuesto por una cadena corta de
aminoácidos. De este modo, las cadenas de glucanos se entrecruzaran lográndose
la rigidez característica.

Las arqueas no poseen peptidoglucano o mureína.

Síntesis de la pared celular

Ocurre en 3 etapas que tendrán lugar específicamente:

• En el citoplasmática: Donde se produce síntesis de precursores.

• En la membrana celular: Donde se produce el transporte, de estos precursores,
hacia la cara externa de la membrana y el ensamblaje parcial.
• En el exterior: Donde se produce el ensamblaje final mediante reacciones que no
precisan energía.

I. Fase citoplasmática

1. A partir de la fructosa-6-P, en presencia de la glutamina la cual le cede un grupo –

NH2 y se transforma en ácido glutámico, se forma glucosamina6-P que, en presencia
de acetil CoA el cual le cede un grupo acilo, se transforma un NAG-6-P.
2. Por acción de un epimerasa, la NAG-6-P se transforma en NAG-1-P.
3. La NAG-1-P necesita activarse, y lo hace al transformarse en UDP-NAG por acción
de la uridina trifosfato (UTP) junto con la liberación de pirofosfato inorgánico (PPi).
Parte del UDP-NAG se usara como precursor para formar NAM; en presencia del
fosfoenolpiruvato (PEP), el cual le cede su grupo enol-piruvico, se convierte en UDP-
NAM (o 3-O-D-lactil-eter de NAG) catalizado por una transferasa.
4. Al UDP-NAM se adicionan la secuencia ordenada de aminoácidos hasta formar un
pentapeptido; el cual contendrá un dímero de D-alanina. Como todos los aminoácidos
de las células procariotas poseen una configuración L, por medio de una racemasa,

22
 se genera D-alanina a partir del isómero L y la dimerización de ambos D aminoácidos
tiene lugar gracias a la acción de una sintetasa. Dicho dímero es el que finalmente
se incluirá en la cadena peptídica.
La estructura resultante (UDP-NAM + cadena pentapeptidica) se denomina
NUCLEOTIDO DE PARCK.

II. Fase de membrana plasmática

El nucleótido de Parck se aproxima a la membrana plasmática la cual no puede atravesar

debido a la hidrofobicidad de la misma, por ende debe asociarse a un transportador de
membrana; el bactoprenol (o undecaprenil-fosfato-Lip P). El bactoprenol (undecaprenil-
fosfato) o Lip-P es un poliisoprenoide de 55 átomos de carbono (derivado de la repetición
de 11 unidas de isoprenoide) con un fosfato terminal.

5. El nucleótido se une al bactoprenol a través de un enlace pirofosfato (PP) el cual se

crea entre el fosforo del Lip-P y uno del UDM asociado al NAM del nucleótido, con la
consiguiente liberación de UMP.
6. Antes que se produzca el transporte a través de la membrana se realiza la reacción
de transglucosidación β 1-4 entre el UDP-NAG y el NAM contenido en el nucleótido
de Parck asociado al Lip-P, con la consiguiente liberación del UDP.
Se obtiene como resultado final:

En esta fase se producen otras modificaciones como ser:

Ej.: En las Gram (+), como Staphylococcus aureus, el grupo -COOH del D-glutámico es
aminado (transformándolo en amida) y se introducen los puentes peptídicos
pentaglicina intercatenarios el cual, mediante un enlace péptico, se unirá a la L-lisina de
la cadena pentapeptidica del nucleótido de Parck unido al Lip-P.

III. Fase extracelular

Luego de producido el transporte a través de la porción lipídica de la membrana

(movimiento flip-flop) se expone las unidades de la pared celular a la cara exterior de la
misma para la polimerización de las mismas.

Transglucosidacion: La primera unidad disacarida-pentapeptida conservara el Lip P, el

cual quedara anclando a la membrana plasmática anclando a su vez la pared celular, pero
las unidades subsiguientes se desprenderán de él; liberándolo en su forma pirofosforilada
(Lip-PP) sobre la cual actuara una fosfatasa específica eliminando el fosfato terminal y
regenerando el Lip-P haciendo posible que ingrese nuevamente a la célula, listo para
comenzar otro ciclo (7).
El NAM contenido en dichas unidades se unirá al NAG del extremo libre (reductor) de una
cadena preexistente o a la primera unidad antes mencionada formando enlaces
glucosidicos β 1-4.
De esta forma se irán formando entre 10 y 70, o más, hileras las cuales engrosaran la
pared. Esto depende de la Gran negatividad o positividad de la bacteria.

23
Transpeptidación: Consiste en la formación de enlaces peptídicos entre el grupo –COOH
el 4to aminoácido; D-alanina, del PG naciente (aquel que ya se encuentra formando parte
de la pared) y el grupo –NH2 del 3er aminoácido del PG aceptor (aquel que es
translocado), o de la cadena peptídica paralela para otorgarle estabilidad a la estructura
La energía para la transpeptidacion la suministra la hidrólisis concomitante del enlace
peptídico entre las dos D-ala terminales. De modo tal que al final de la reacción de
transpeptidación se libera una D-ala en posición 5 quedando un tetrapeptido.
En el caso de las Gram (-), la unión entre el 3er y 4to aminoácido es directa.
En el caso de Gram (+), el otro extremo del puente intercatenario pentaglicina unido a la

24
L-lisina del PG aceptor se une, mediante un enlace peptídico, a la 4ta D-alanina. La
energía también será suministrada por la hidrolisis del dímero de D-alanina.

Célula eucariota. Generalidades

 Presentan un tamaño mayor que las procariotas; entre 2 a 100 µm.

 Presentan formas más variadas y complejas que los procariotas.
 Presentan una pared celular más gruesa pero químicamente más simple la cual les
confieren forma y rigidez, resistencia contra químicos y fagos, secreción de enzimas y
tiene relación con la sexualidad en hongos. En dichos organismos y en las algas, es
bifásica; presentando una estructura cristalina y una matriz amorfa.

Los hongos presentan:

• Una pared primaria compuesta de polisacáridos β 1-4 (celulosa quitosano, quitina)

que formaran las microfibrillas, y proteínas.
• Una pared secundaria amorfa que presenta glicoproteínas, glucanos, mananos y
heteropolisacáridos.

Las algas presentan:

• Un polisacárido estructural compuesto por celulosa y algunas también presentan

sílice.
• Una estructura externa compuesta por proteínas, mananos, xilanos, pectinas.

Los protozoarios generalmente no poseen pared celular pero algunos presentan una
especie de caparazón que cumple funciones de protección hecho de CaCO3, SrSO4 o
Sílice.

 La membrana plasmática presenta esteroles pero no hopanoides.

Sus funciones generales van desde transporte de nutrientes y deshechos hasta la
síntesis de componentes de pared.

En protozoarios, su membrana presenta ciertas particulares ya que participan en la:

25
 • Captación de nutrientes mediante procesos de endocitosis; por medio de vacuolas
(para sustancias particuladas) y vesículas (para sustancias liquidas); y exocitosis.
• Formación vacuolas contráctiles, en protozoarios de agua dulce, involucradas en
la regulación osmótica.

 Presentan organelas y membranas internas como ser:

• El retículo endoplasmático rugoso o liso: Son canales, vesículas y cisternas que
comunica el citoplasma, núcleo y exterior. Tiene como función (en el caso de RER)
la secreción de proteínas y membranas que se transfieren al Golgi.
• El aparato de Golgi: Son sacos apilados que presentan varias funciones como
acumulación y transporte de productos; afinado de proteínas (eliminación de
proteínas contaminantes; adición y remoción de azúcares, acetilación, etc.).

Ambos participan en la formación de vesículas, vacuolas y lisosoma; vesícula

especializada para la digestión la cual contiene proteasas, lipasas, peptidasas, etc.

• Un núcleo verdadero formado por una membrana doble, con ADN lineal
organizado en cromosomas y neutralizado con histonas. Dentro del núcleo se
puede encontrar el nucléolo encargado de la síntesis de ARN.
• Mitocondrias: Con una membrana externa y una interna; sin esteroles, que forma
las crestas donde ocurre el transporte de electrones y la respiración. La matriz
mitocondrial presenta un estado de gel, ribosomas 70s y ADNm.
• Cloroplastos: Con una membrana externa y membrana interna que envuelve al
estroma. Embebido en este se hayan las membranas tilacoides que contienen los
pigmentos (clorofila) y el sistema de transporte de electrones requerido para la
fotosíntesis, enzimas para la reducción del CO2, ribosomas 70s y ADN.

 Se divide por mitosis.

Son Diploides pero presentan alternancias de generaciones, con gametos haploides;
generados por la meiosis. En algunos predomina la fase diploide, en otros la
haploide, o tienen existencia independiente.
 Presentan una reproducción sexual que consiste en la conjugación de dos gametos
sexuales haploides para originar un zigoto diploide. Existen diferentes grados de
sexualidad:
• Dimorfismo: Interactúan estructura vegetativa morfológica y genética diferentes
(macho móvil, hembra inmóvil)
• Heterotalismo: Son morfológicamente iguales, pero genéticamente diferente
(Polaridad + y - )
• Homotalismo: Presentan una igualdad genética y morfológicamente. Interacción
sexual entre células de un mismo clon.
 Los microtubulos están involucrados en:
• División nuclear: En la formación del huso mitótico y centriolos.
• Contribuyen a la forma de la célula en el caso de que no exista pared celular.
• Movilidad: En células eucariotas está dada por:
o Flagelos: 250 µm con movimiento ondulante o helicoidal, con el centro fijo
o Cilias: 5 µm con movimientos en remos, para adelante y para atrás.
Ambos están conformados por microtubulos formados por tubulina y dineina
como una proteína motora (hidroliza ATP) y presentan una estructura de
(9x2)+2.
o También hay motilidad deslizante en algunas algas y hongos y movimiento
ameboide en ciertos protozoarios.

26
  Presenta un citosol, de menor consistente que el citoplasma de las procariotas por la
existencia de organelas.
 Ribosomas 80s; con una Subunidad mayor 60s y una Subunidad menor 40s.

Características Célula procariota Célula eucariota

Tamaño < 2 µm 2 a > 100 µm

Membrana con Sin esteroles pero pueden Con Esteroles y sin hopanoides
presentar hopanoides
Organelas Ausentes Presentes y numerosas
Citoplasma Consistencia gelatinosa Consistencia solución
Ribosomas 70s con subunidades de 50s y 80s con subunidades de 60s y
30s 40s
Núcleo Ausente, presenta una zona Presente
donde se concentra el material
genético (nucleoide)
Nucléolo Ausente Presente
Genomas El ADN (desnudo y CCC) El ADN lineal neutralizado por
forma complejos con proteínas histonas y otras proteínas,
que no son histonas, se organizado en varios
encuentra en el nucleoide sin cromosomas distintos
estar limitado por alguna
membrana
Cromosomas Único Múltiples
División celular Fisión y gemación Mitosis
Mitocondrias Ausente. Los procesos Presentes con ribosomas 70S y
bioquímicos equivalentes ADN mitocondrial circular. Allí se
tienen lugar en la membrana produce la respiración y el Ciclo
citoplasmática de Kreeps.
Metabolismo Sin mitocondrias. Las enzimas Las enzimas oxidativas se hallan
energético oxidativas están fijas a la empacadas a las mitocondrias
membrana plasmática.
Citoesqueleto Ausente Presente y con gran complejidad
Movimiento Ninguno Abundante en todas las
intracelular estructuras celulares
Nutrición Por absorción, en algunos Absorción, digestión y fotosíntesis
casos por fotosíntesis en algunas especies
Motilidad Flagelos sin estructura 9x2+2 Cilios y flagelos con estructura
(9x2)+2;
característica de microtúbulos

27
Nutrición

Los tipos de nutrientes que necesitan los microorganismos para poder crecer y
multiplicarse están asociados directamente a la composición química de la célula. Los
nutrientes serán utilizados como precursores en la síntesis de macromoléculas que serán
los constituyentes de todo el material celular y en la generación de la energía necesaria
para llevar a cabo sus procesos metabólicos.

Nutrición microbiana: Es un aspecto de la fisiología microbiana que trata sobre los

monómeros (o ingredientes precursores de monómeros) o nutrientes que la célula
necesita para crecer.

Nutrientes: Elementos, que en su mayoría son compuestos químicos, utilizados por las
células para la biosíntesis de macromoléculas y otros componentes y también para la
generación de energía. Dicha definición incluye también a la luz solar.

Todas las bacterias son OSMÓTROFAS; los nutrientes tienen que estar disueltos en agua
para que la célula los pueda incorporar.

Composición química de la célula

El agua constituye el 80-90% del peso total de la célula; esto es lógico debido a que actúa
como un solvente universal de muchos tipos de moléculas y por el tipo de nutrición que
presentan las células.
El peso seco de la célula (10-20%) está conformado por macro y micro nutrientes:

• Los macronutrientes son requeridos en grandes cantidades y por ende son los
principales elementos químicos de la célula. Son utilizados como material de
construcción a partir de los cuales se sintetizaran macromoléculas y como fuente
para la producción de energía.
• Los micronutrientes son requeridos en pequeñas cantidades y también son
necesarios para el crecimiento pero no son utilizados como bloques de
construcción.

El agua potable presenta en forma de trazas micronutrientes, por lo cual es común su uso
en la preparación de determinados medios de cultivo.

Micronutrientes

Elemento Función
Manganeso Cofactor de ciertas enzimas
(Mn+2)
Cobalto (Co+2) Vitamina B12
Cinc (Zn) Estabilización de complejos enzimáticos (ADN- y ARN-
polimerasas)
Molibdeno (Mo) Molibdoflavoproteínas ( en la asimilación de nitratos), cofactor de
nitrogenasas ( en la fijación del nitrógeno)
Níquel (Ni) Hidrogenasas (enzimas que captan o liberan H2)

Macronutrientes

28
Elemento % Fuente Función
Peso
seco
Carbono 50 Compuestos orgánicos, Constituyente del material celular
CO2
Oxigeno 20 Compuestos orgánicos, Constituyente del material celular
H2O,CO2,O2 y H2O cel.; aceptor de e- en la
respiración aerobia
Nitrógeno 14 Compuestos orgánicos Constituyente de aminoácidos,
NH3, NO3-, N2 ácidos nucleicos nucleótidos, y
coenzimas
Hidrogeno 8 Compuestos orgánicos, Constituyente de compuestos
H2O, H2 orgánicos y H2O celular
Fosforo 3 (PO4)-2 inorgánico y Constituyente de ácidos
orgánico nucleicos, nucleótidos,
fosfolípidos, lipopolisacaridos,
ácidos teicoicos
Azufre 1 Compuestos orgánicos Constituyente de cisteína,
azufrados, SO4-2, H2S, S metionina, glutatión, coenzimas
elemental
Potasio 1 Sales de K Principal catión inorgánico celular
y cofactor de enzimas
Magnesio 0,5 Sales de Mg Catión inorgánico celular y
cofactor de enzimas
Calcio 0,5 Sales de Ca Catión inorgánico cel., cofactor de
Enzimas y componente de
endoesporas
Hierro 0,2 Sales de Fe Componente de citocromos y
cofactor de reacciones
enzimáticas

Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su fuente de energía

Tipo de nutrición Fuente de energía

Fotótrofo Luz
Quimiotrofos Compuestos químicos
Si el compuesto químico es inorgánico (Ej.: H2, H2S, NH3, NO2) al organismo se lo
denomina quimiolitotrofos o litotrofos.
En cambio, si el compuesto es orgánico se denominan quimiorganotrofos u
organotrofos.

Sea cual sea la fuente de energía, la cadena transportadora de electrones es esencial

para la producción de ATP y obtención de energía.
Dependiendo del tipo de compuesto que actue como aceptor final de electrones, los
microorganismos realizaran:

• Respiración aeróbicas: O2
• Respiración anaeróbicas: Compuesto inorgánicos; como el NH3
• Fermentación: Compuesto orgánico.

29
Clasificación de los microorganismos de acuerdo a su fuente de carbono

Tipo de nutrición Fuente de carbono Ejemplos

Autótrofos CO2 (compuesto inorgánico) Cianobacterias,
Nitrosomonas,
Nitrobacter
Mesotrofos Compuesto orgánico e inorgánico Nitrosococcus
como fuente de carbono pero solo
NH3 como fuente de nitrógeno
Prototrofos Compuesto orgánico e inorgánico Pseudomonas
como fuente de carbono y NH3, N2,
NO2- y NO3- como fuentes de
nitrógeno
Heterótrofos Carbono orgánico Lactobacilos,
enterobacterias
Hipotrofos o Capacidad de síntesis nula Virus (bacteriófagos)
paratrofos

Tipo de nutrición Fuente de energía Fuente de

carbono
Fotoautotrofos Luz CO2
Fotoheterotrofas Luz Compuestos
orgánicos
Quimiolitotrofos Compuestos inorgánicos (H2, H2S, CO2
autótrofos o NH3, NO2)
Litoautótrofos
Quimioheterotrofas o Compuestos Orgánicos Compuestos
Heterótrofas orgánicos
Mixotrofos Compuestos inorgánicos (H2, H2S, Compuestos
NH3, NO2) orgánicos

Clasificación de los nutrientes de acuerdo a su función

• Nutrientes esenciales: Son aquellos que se adicionan al medio de cultivo, los cuales
la célula utiliza para su crecimiento. Penetran a la célula por diferentes mecanismos
de transporte, y en el caso de macromoléculas requieren una hidrolisis previa
producidas por enzimas extracelulares liberadas al medio. Ej.: Glucosa.
• Metabolitos esenciales: Compuestos que se sintetizan en el interior de la célula a
partir de los nutrientes esenciales y cuya presencia es fundamental para el normal
funcionamiento celular. No se agregan al medio de cultivo ya que no pueden ingresar
a la célula, Ej.: glucosa-6-P.
• Nutrientes no esenciales: Si están presentes en el medio, la célula dispondrá de ellos,
los incorporara y utilizara; pero si no es así, el microorganismo es capaz de crecer a
expensas de otro nutriente.
• Factores de iniciación: Son necesario solo en el primer cultivo, es decir cuando el
microorganismo es aislado de su medio natural y colocado en uno artificial. Luego
adquirirá la capacidad de sintetizarlo y ya no será necesaria la presencia del factor en
los siguientes transplantes o repiques.

30
 • Factores de estimulación: Sustancias que pueden no encontrarse en el medio, que si
lo están incrementan la velocidad de crecimiento del microorganismo, Ej.: glucosa o
alguno producto de su degradación.
• Factores de crecimiento: Son compuestos orgánicos específicos y esenciales para el
crecimiento celular, ya que el microorganismo es incapaz de sintetizarlo a partir de los
nutrientes disponibles. Son requeridos en muy pequeña cantidad y solo en el caso de
algunas células. Se clasifican en:
✓ Purinas y pirimidinas: Necesarias para la síntesis de ADN Y ARN
✓ Ciertos aminoácidos: Necesarios para la síntesis de proteínas
✓ Vitaminas: Utilizadas como coenzimas y grupos funcionales de ciertas
enzimas.

Salvo excepciones, no tienen función plástica (no van a ser precursores de

macromoléculas) ni sirven como fuente de carbono ni de energía.
La necesidad de tales factores de crecimiento surge del bloqueo o pérdida de una
parte de una vía metabólica de la célula.

En relación al requerimiento de factores de crecimiento los microorganismos se pueden

dividir en:

• Protótrofos: microorganismos que no requieren ningún factor de crecimiento, ya

que son capaces de sintetizar los tres tipos de factores que necesitan.
• Auxótrofos: microorganismos que requieren una fuente exógena de factores de
crecimiento debido a que son incapaces de sintetizarlos.

Transporte de nutrientes

El transporte de nutrientes puede hacer con gasto o sin gasto de energía.

I. Dentro del transporte pasivo tenemos:

 Difusión simple: La sustancia se disuelve y atraviesa la bicapa lipídica, Ej.: gases.
 Difusión facilitada: Se dan a través de proteínas transmembrana que pueden
o Formar un canal, Ej.: El ingreso de Na+ por medio de un canal de Na+ o la
regulación del transporte de H20 por medio de acuaporinas AqpZ; que
importan o exportan agua dependiendo de la presión osmótica. Las
acuaporinas se encuentran tanto en procariota como eucariota.
o Ser proteínas transportadoras del tipo permeasa, Ej.: El ingreso de glicerol
por medio del transportador de glicerol.

Debido a que no hay gasto energético, el sentido del transporte será a favor del
gradiente de concentración, el cual estará determinado por la diferencia de
concentraciones del soluto a ambos lados de la membrana.
Es por esto que en células procariotas, la mayoría de las sustancias NO penetran de
modo pasivo.

II. El transporte activo consiste en el transporte de sustancias en contra de un

gradiente de concentración, lo que requiere un gasto energético. Dentro de este tipo
de transporte encontramos:
 Transporte activo primario: Es aquel que utiliza la energía que deriva directamente
de la hidrolisis del ATP, Ej.: Na+/K+ ATPasa.
 Transporte activo secundario: Es aquel que provoca el movimiento de un sustrato
en contra de su gradiente de concentración acoplándolo al movimiento de otro

31
 compuesto químico que se produce pasivamente y a favor de su gradiente de
concentración; es decir obteniendo la energía necesaria mediante la disipación de
un potencial electroquímico previamente creado. Ej.: El simporte de lactosa en E.
coli, catalizado por la permeasa lac, junto con un H+ aprovechando dicho
gradiente electroquímico generado por procesos de respiración y fotosíntesis.
 Sistema ABC (ATP Binding Cassette): Está formado por la participación de
proteínas periplasmaticas que se fijan o englobar al sustrato y lo entrega un
transportador a nivel de membrana. Para que se produzca el pasaje por este
transportador hace falta energía, la cual deriva de la hidrolisis del ATP que se lleva
a cabo en una proteína anclada a la cara citoplasmática de la membrana.
 Translocación de grupo: Es un mecanismo de transporte con gasto de energía en
el cual no se utiliza la energía derivada de la hidrolisis del ATP sino la que deriva
de la ruptura de la unión fosfato de alta energía del PEP. Consiste en una serie de
reacciones enzimáticas en cadena donde están involucradas enzimas
constitutivas; E1 y HPr, e inducibles; E2a, E2b y E2c. Al hidrolizarse el PEP se
produce la transferencia de su fosforilo a la E1 y este a su vez pasara a HPr, E2a y
finalmente a E2B, desde la cual será eventualmente transferido al azúcar a
importar (E2b lo utilizara para poder fosforilar el azúcar) cuando esta esté
atravesando la membrana por medio de E2c. De este modo se obtendrá el azúcar
fosforilada, que es incapaz de atravesar la membrana, dentro de la célula.

Relaciones de las bacterias con el oxigeno

El oxígeno es un componente universal que puede actuar como aceptor final de

electrones en la cadena respiratoria. Sin embargo puede aceptar un único e- ,
reduciéndose univalentemente, por parte de las flavinas reducidas y convertirse en anión
superóxido (O2−) y otros radicales libre o especies reactivas del oxígeno. Estas
especies son dañinas para la célula ya que son agentes fuertemente oxidantes que
oxidan y desnaturalizan macromoléculas como proteínas, ácidos nucleicos, hidratos de
carbono y lípidos, ocasionando la muerte celular.

32
De acuerdo al metabolismo que presenten los microorganismos, podrán defenderse en
mayor o menor medida de estas especies reactivas mediante la síntesis de diferentes
enzimas que las metabolizan o transforman en compuestos menos tóxicos o inocuos.

Las enzimas encargadas de metabolizar dichas especies reactivas toxicas serán:

 Superoxido dismutasa (SOD):

 Catalasa:

 Peroxidasa:

Así, según el efecto que produce la presencia de O2 sobre el crecimiento y su rol en el

metabolismo microbiano, se puede clasificar a los procariotas en:

 Aerobios obligados: Necesitan O2 para crecer ya que depende de la respiración

aeróbica para cubrir sus necesidades energéticas. El O2 es el aceptor final de e-
en la cadena respiratoria.
 Aerobios facultativos: Pueden crecer en presencia o ausencia de O2. Cuando
este está disponible lo utilizan como agente oxidante terminal, y en su ausencia
pueden obtener energía mediante reacciones de fermentación o respiración
anaeróbica.
 Microaerofilos: Utilizan O2 solo cuando su tensión es menor que la del aire
debido a su limitada capacidad de respirar o por contener enzimas sensibles al
oxígeno.
 Anaerobios aerotolerantes: Toleran al O2 pudiendo crecer en presencia o
ausencia del mismo. Este no genera riego o beneficio alguno para el crecimiento
de dichos organismos. Su metabolismo es siempre fermentativo.
 Anaerobios estrictos u obligados: No crecen en presencia de O2, el cual es una
sustancia toxica que inhibe el crecimiento o mata a estos microorganismos.
Obtiene energía por medio de la fermentación, respiración anaeróbica,
metanogenesis o fotosíntesis bacteriana.

Grupo Relación con el O2 Tipo de metabolismo Ejemplo

Aerobio
Estricto Necesario para vivir Respiración aerobia Bacillus
Facultativo No es necesario pero Respiración aerobia, Enterobacterias
crecen mejor en anaerobia y
presencia de O2 fermentación
Microaerofilos Requieren O2 pero a Respiración aerobia Bifidobacterium

33
 bajas tensiones (2-10%)
Anaerobios
Aerotolerantes No necesitan O2 ni Fermentación Streptococcus
crecen mejor en pyogenes
presencia de el
Estrictos Letal, no pueden crecer Respiración Clostridium,
en presencia de O2 anaerobia o Bacteroides
fermentación,
metanogenesis o
fotosíntesis
bacteriana

Los procariotas reaccionaran de manera diferente frente a oxigeno dependiendo de su

metabolismo respiratorio lo que determinara la presencia, o no, de determinadas enzimas
detoxificantes.

Grupo Superoxido dismutasa Catalasa Peroxidasa

Aerobios estrictos (+) (+) (-)
Aerobios facultativos (+) (+) (-)
Microaerofilos (+) (-) (+)
Aerotolerante (+) (-) (+)
Anaerobios estrictos (-) (-) (-)

Medios de cultivos

Son medios artificiales diseñados y creados en el laboratorio que proveen en solución

todos los nutrientes necesarios para satisfacer las necesidades nutritivas de determinados
microorganismos permitiendo el crecimiento y la multiplicación de los mismos.
Pueden clasificarse:

I. Según la composición química:

• Sintético o químicamente definido: Medios preparados por la adicción de
cantidades precisas de sustancias químicas orgánicas o inorgánicas puras y agua
destilada; de esta manera se conoce exactamente la composición química del
mismo.
Se utilizan para estudiar los requerimientos nutricionales, factores de crecimiento y
metabolismo de los microorganismos. Ej.: Citrato de Simmos se utiliza para
investigar si el microorganismo utiliza citrato como única fuente de carbono.

Un medio mínimo es aquel que provee solo la cantidad exacta de nutrientes; incluyendo
algunos factores de crecimiento, necesarios para el desarrollo de ciertos
microorganismos. Su empleo es posible cuando se conocen exactamente los
requerimientos nutricionales del microorganismos a estudiar.
Un medio mínimo será químicamente definido.

• Complejo o químicamente indefinido: Medios preparados por la adicción de

cantidades precisas de sustancias altamente nutritivas pero químicamente
desconocidas; como ser digeridos crudos de caseína (proteína de leche), hígado,

34
 levadura o soja. Ej.: LBS (medio selectivo para Lactobacillus) o MRS (medio Man-
Rogosa-Sharpe).

II. Según el estado fisico-quimico:

• Medio de cultivo liquido: Los nutrientes son disueltos en agua destilada quedando
un caldo donde se cultivan los microorganismos los cuales, al crecer, provocaran
un enturbiamiento del mismo. Ej.: Caldo común.
• Medio de cultivo solido: Un medio de cultivo liquido es convertido a olido o
semisólido por el agregado de agentes gelificantes como gelatina o agar. Las
células, al crecer, formaran mansas visibles llamadas colonias.
Estos medios permiten el aislamiento de microorganismos.
o Gelatina: Es una proteína incompleta que contiene pocas cantidad de
cisteína, no contiene triptófano ni tirosina y se prepara a partir de huesos
descalcificados con ácidos fuertes.
Una solución que contenga más de 4% de gelatina solidificara al enfriarse
pero para obtener una verdadera jalea solida debe utilizarse, por lo menos,
un 10% de la misma. El pH<5 y el calentamiento disminuyen su poder de
solidificación.
Funde a 25 °C y solidifica a 20 °C. Muchos microorganismos tienen la
capacidad para licuar los medios gelatinados al degradar la proteína
gelificante.
o Agar: Es un carbohidrato complejo obtenido de ciertas algas marinas.
Los medios sólidos para el aislamiento y cultivo contienen generalmente
1,5 a 2 % de agar aunque también pueden prepararse agares blandos de
0,7% o menos. Al igual que en los medios gelatinados, la capacidad de
solidificación es menor por debajo de pH=5. Funde a 100 °C, quedando
solido en todo el rango de temperatura en que se cultivan los
microorganismos; sin embargo, una vez fundido, se mantiene líquido hasta
que la temperatura desciende por debajo de 45 °C. Este hecho hace posible
su uso para la preparación de cultivos en cajas de Petri. No es una fuente de
nutrientes para la mayoría de las bacterias y por ello la licuefacción del gel es
muy rara.

III. Según el origen:

• Vegetal: Las sustancias nutritivas que se emplean para preparar el medio derivan
o son componentes naturales de los vegetales. Ej.: De la papa se utiliza el
almidón, sustancias nitrogenadas y sales. También se emplea zanahorias, peptona
de soja, etc.
• Animal: Las sustancias nutritivas que se emplean para preparar el medio derivan
de los animales. Ej.: Peptona, hidrolizados de caseína, leche, suero sanguíneo,
liquido ascítico, huevo, etc.

IV. Según la finalidad:

• Enriquecidos: Se utilizan para obtener una cosecha más abundante, un
crecimiento más rápido o para permitir el desarrollo de microorganismo
nutricionalmente más exigentes. Se adiciona al medio de cultivo sustancias
nutritivas como azucares, sangre, suero, materias albuminosas, etc. Ej.: Medios
agua-peptona-glucosa, medio azucarados, medio agar sangre.
• Selectivos: Permite el desarrollo de un determinado grupo de microorganismo e
impide el desarrollo de los demás. Ej.: Medios a los cuales se les ha agregado
lactosa, bilis, NaCl, azida, taurocolato o ATB.
35
 • Diferenciales: Poseen en su composición una sustancia química o reactivo que, al
combinarse con algún producto del metabolismo de un microorganismos, da origen
a una coloración característica. Ej.: Las colonias de E. coli que se desarrollan en
un medio Endo serán rojas; dado que el medio presenta fucsina decolorada con
bisulfito que al combinarse con los aldehídos provenientes del metabolismo de
lactosa, recoloraran la fucsina originado dicho color.
• Selectivos-Diferenciales: Es una combinación de un medio Selectivo y Diferencial.
Permite el desarrollo de un determinado tipo de microorganismo y, al mismo
tiempo, produce una coloración característica del organismo en estudio. Ej.: Medio
con telurio de Na o K. el cual inhibe el desarrollo de microorganismos saprofitos y
favorece el de bacilos diftéricos.
• Electivos: Favorece el desarrollo un una determinada especie bacteriana, mientras
que el desarrollo de otros grupos se verá enlentecido y reducido. Ej.: En suero
coagulado, los bacilos diftéricos presentan un crecimiento rápido y abundante
mientras que otras bacterias casi no desarrollan.

El desarrollo de una población microbiana en un medio de cultivo artificial se denomina

cultivo.
Los cultivos que se originaron de una sola célula y contienen una sola clase de
microorganismo se denominan cultivos puros. Cuando contienen más de una clase de
microorganismo se denomina cultivos mixtos.

36
Crecimiento Microbiano

Cuando hablamos de crecimiento hablamos de un incremento ordenado de todos los

componentes de un sistema biológico, lo cual implica un aumento de masa celular que
eventualmente conduce a la multiplicación celular.
En organismos pluricelulares el crecimiento se ve reflejado en el aumento del tamaño del
individuo pero en organismos unicelulares el crecimiento se refleja en el aumento de
número de células de una población.
Para que exista un incremento en el número de células de la población primero debe
producirse un crecimiento individual de las células, por el cual adquirirán una masa
determinada para su división. En células procariotas el proceso de división se produce por
fisión binaria a partir de una célula se obtiene 2 células hijas idénticas que van a recibir
una copia del cromosoma, ribosomas, monómeros, iones y otros compuestos
macrocelulares necesarios para que puedan funcionar adecuadamente.
El aumento poblacional presenta una cinética de crecimiento determinada que va a estar
influenciada por factores físico-químicos del ambiente.

El ciclo celular es un conjunto ordenado de sucesos que conducen al crecimiento de

la célula y la división en dos células hijas. Durante el mismo:

• Se producen cambios físicos y bioquímicos en la célula relacionados con reacciones de

síntesis y degradación (transformación de energía, biosíntesis de pequeñas moléculas
y macromoléculas) con el fin de generar una mayor cantidad de material celular,
utilizando los nutrientes que se hayan en solución en el medio. Todos estos procesos
estarán regulados.
• Ensamblaje de macromoleculas y formación de estructuras celulares: pared celular,
membrana citoplasmática, ribosomas, inclusiones, flagelos.

Fisión binaria en E. coli – Bacilo Gram (-)

1. Debido al aumento del material celular

provocado por las fases anteriores del ciclo
celular, la célula adquiere un mayor tamaño y
masa y comienza a elongarse.
Para que se produzca la replicación del
ADN, debe unirse a un punto de la membrana
llamado mesosoma.
Ambos procesos ocurren simultáneamente.
2. Se produce la partición y
segregación del ADN replicado hacia los
polos de la célula elongada.
3. Al segregarse, en el centro de la célula
se produce la formación del septo
transversal marcando el inicio de la división
celular, la cual, concluirá con la terminación
del septo o tabique transversal generando
membranas y paredes celulares
independientes bien definidas entre las células
hijas.

Por ende, la replicación y segregación de ADN como la formación del septo son procesos
fundamentales.

37
Replicación y segregación de ADN

A medida que se produce la replicación del ADN, conjuntamente con el resto de

macromoléculas, se sintetizan proteínas de división que participan específicamente en
la formación del septo una vez finalizada la replicación y segregación del material
genético. Cuando esto ocurre una proteína de terminación sintetizada interactúa con
moléculas precursoras del septo dando comienzo a la formación del septo y la división
celular.

El tiempo de replicación es constante y característico para cada especie a determinadas

condiciones y marcar el ritmo de duplicación celular (el tiempo que demora una celular en
dividirse en 2 células hijas).
Puede suceder que el tiempo de duplicación sea menor al tiempo de replicación; Ej.: En
[Link], su tiempo de replicación de ADN es de 40 minutos pero puede ocurrir que el
tiempo de duplicación celular se reduzca a 20 minutos, debido a que en medio muy
ricos nutricionalmente la bacteria será capaz de empezar a duplicar de nuevo su ADN
antes de completar la primera división celular.

Formación del septo o anillo septal

Para una correcta formación del anillo septal y una división celular normal son esenciales
varias proteínas de división llamadas proteínas Fts (filamentos sensibles a la temperatura)
dado que las células con mutaciones en los genes que las codifican no se dividen
normalmente y forman largos filamentos. Las proteínas Fts están distribuidas
universalmente entre los procariotas incluyendo a las Archaeas.
Las proteínas Fts forman un aparato de división llamado divisoma. En células bacilares,
como E. coli, la formación de este comienza con la polimerización de varias moléculas de
Fts-Z para producir el anillo citocinetico o Z, el cual se ubica en el centro de la célula y
por debajo de la membrana plasmática, encargado de dirigir la formación del septo y de
señalar el plano de la tabicacion y división.
En la formación del divisoma también intervendrán otras proteínas, las cuales se irán
atrayendo en un orden determinado:

• ZipA: Es una proteína de anclaje la cual conecta el anillo Z con la membrana

citoplasmática logrando su estabilización.
• Fts-A: Es una proteína relacionada con la actina eucariota, la cual ayuda a anclar
el anillo Z a la membrana citoplasmática y recluta otras proteínas del divisoma.
• Proteínas con funciones biosinteticas: Como ciertas Fts, PBP3 y transglucosidasa-
transpeptidasa específica del tabique necesarias para la producción de PG septal.
Ej.: La Fts-I es una proteína de unión a la penicilina y su actividad resulta
bloqueada por dicho antibiótico.

Las Proteínas de división pueden ser citoplasmáticas, periplasmáticas o embebidas en la

membrana pero no se encuentran membrana externa (Gram (-)).
FtsZ presenta similitudes estructurales con la tubulina, una proteína importante en la
división celular de los eucariotas, y una actividad enzimática GTP-asa siendo capaz de
hidrolizar guanosina trifosfato (GTP) para liberar energía, la cual es necesaria en la
polimerización y despolimerización del anilloZ.
La contracción del anillo, por la despolimerización de unidades FtsZ, arrastra y contrae la
membrana plasmática, la pared celular y la membrana externa de las Gram (-) lo que,
sumado a la síntesis de nueva membrana y pared celular a nivel septal, finaliza la división
celular.

38
Existen 2 factores que regulan la localización del anillo Z en el centro de las células:

• La segregación del ADN deja una zona libre de material nuclear en el antiguo
nucléolo lo cual ayudaría a establecer la posición en la cual se formaría el anillo
pero este factor no es esencial para el proceso.
• Proteínas Min: Son proteínas encargadas de la localización del punto medio real.
MinD forma una estructura en espiral en la superficie de la membrana
citoplasmática, que oscila moviéndose de un polo a otro, y permite localizar a
MinC en la membrana. Conjuntamente, inhibirán la formación del anillo Z.
MinE también oscila de polo a polo barriendo en su movimiento a MinC y D,
haciendo que estas permanezcan más tiempo en los polos que en otras partes de
la célula durante su oscilación. Como el centro de la célula tiene en promedio la
concentración más baja de estas proteínas, será el lugar más permisivo para el
ensamblaje del anillo Z. Min E antagoniza la inhibición de Min D y C en el centro
de la célula.

Determinación de la forma celular

La proteína MreB, tanto bacterias como en Archaea, presenta una homología muy notable
con la actina y forma una especie de citoesqueleto en dichas células disponiéndose en
bandas filamentosas en espiral, por el interior de la célula, y justo por debajo la membrana
citoplasmática.
El citoesqueleto de MreB determinaría la forma celular reclutando otras proteínas que
dirigen el crecimiento de la pared celular siguiendo un patrón específicos, gracias a que:

• La estructura helicoidal formada por la MreB no es estática y rota dentro de la

célula en crecimiento.
• La síntesis del PG se produce en los puntos donde las hélices contactan con
la
• membrana citoplasmática.

Así, MreB localiza la síntesis de nuevo PG y de otros componentes de la pared en lugares

específicos determinando una forma bacilar.
La inactivación del gen que codifica MreB en bacilos convierte a las células en cocos.
Mientras que las bacterias con forma de coco carecen de proteínas MreB. Por ende, la
forma de una bacteria «por defecto» es esférica y las variaciones en la disposición de los
filamentos MreB determinan la forma bacilar u otras morfologías.

Durante la elongación bacilar, que antecede a la división, la proteína PBP2 es la

responsable para la síntesis de PG y membrana lateral esencial para que, efectivamente,
la célula logre elongarse. El material celular (pared y membrana) se deposita en varios
puntos a lo largo de su eje mayor; es por esto que la síntesis de pared celular y de
membrana citoplasmática es difusa.

Formación del septo transversal en cocos Gram (+)

Al igual que ocurre en las células bacilares, los cocos crecen aumentando de tamaño. La
síntesis de nueva pared celular y membrana citoplasmática necesaria para que tenga
lugar este incremento de tamaño se produce en una región ecuatorial de la célula bien
localizada; mas precisamente alrededor de la hendidura por debajo de la cual se haya el
39
divisoma en la zona ecuatorial.
La síntesis de nueva pared celular y membrana citoplasmática no es difusa, sino zonal,
y se encuentra restringida a las regiones adyacentes a la hendidura; o al anillo Z, y a nivel
septal.
Tanto en bacilos como en cocos, el peptidoglicano preexistente debe ser cortado para
permitir la inserción del peptidoglicano recién sintetizado. En la zona del anillo Z, se abren
pequeños huecos en la pared por medio de autolisinas, las cuales hidrolizan los enlaces
glicosídicos β-1,4 que unen la NAG y el NAM en el PG y el nuevo material se añade a
través de estas aberturas. La unión entre el PG nuevo y el antiguo forma un reborde en la
superficie de las bacterias grampositivas llamado banda de pared, análoga a una cicatriz.
Resulta esencial que los nuevos precursores de la pared celular se incorporen dentro del
preexistente de una manera coordinada para evitar una discontinuidad en la integridad del
PG. Una ruptura podría ocasionar la autólisis.
El tabique completo, de doble grosor, se ira degradando desde el exterior al centro por la
acción de las autolisinas y así cada célula hija presenta pared sintetizada de novo y pared
correspondiente a la célula madre contenidas y aisladas en los polos.

Crecimiento

En el crecimiento sincrónico todas las células se encuentran simultáneamente en la

misma fase del ciclo celular. Es posible generar cultivos sincrónicos en el laboratorio pero
pierden rápidamente esa propiedad.
En la naturaleza, es difícil encontrar poblaciones microbianas con crecimiento sincrónico
debido a las condiciones ambientales y de crecimiento no controladas y a la co-existencia
de diferentes especies en un mismo ambiente pero es posible llegar a tener poblaciones
con crecimiento sincrónico en el laboratorio, mediante el control de dichas condiciones
que serán establecidas para favorecer un microorganismo en particular.

Debido a la fisión binaria, el crecimiento de una población bacteriana será un crecimiento

exponencial en donde:

La división celular representa una progresión geométrica

Si se gráfica:

40
 Se obtendrá una curva exponencial debido a que las
coordenadas elegidas son aritméticas

Para facilitar el cálculo de los parámetros de crecimiento, es preferible graficar:

Donde se obtiene una gráfica semi-logarítmica en

donde el aumento lineal siempre se traduce en una
recta.

Parámetros de crecimiento: K y g

Velocidad o tasa de crecimiento (K) es valor promedio de las velocidades de

crecimiento de una población.
Es una constante que se define como ‘’el número de generaciones (n) que ocurren en una
unidad de tiempo (t) en un cultivo en fase de crecimiento exponencial’’.
Depende de la especie microbiana y de las condiciones del medio.

Tiempo de generación (g) es ‘’el tiempo necesario para que la población se duplique’’ y
es inversamente proporcional a K ya que a mayor velocidad de crecimiento, menos
será el tiempo necesario para duplicar la población.
Dependerá de la especie microbiana y de las condiciones del medio; como ser el tipo y
cantidad de nutrientes o las condiciones fisico-quimicas.

Determinación gráfica de g y K

41
Cuando se trabaja con cultivos continuos:

En vez de utilizar la constante K, la cual es un valor promedio, se usa la Velocidad

instantánea de crecimiento (µ) es la variación del nº de células en un instante de
tiempo.

Tiempo de duplicación instantáneo (T):

El valor de µ y K son muy cercanos, por lo cual no hay diferencias significativas en el la

velocidad de crecimiento instantáneo y la velocidad de crecimiento promedio en una
población. Pero si es más notoria la diferencia entre el tiempo de generación y el tiempo
de duplicación instantánea.

Factores que afectan la velocidad del crecimiento

Concentración de sustrato

Si se realiza una gráfica, velocidad de crecimiento vs [S]:

42
Se obtiene una gráfica similar a la de Michaelis-Menten, en donde la velocidad de
crecimiento aumenta a medida que aumenta la concentración de nutrientes hasta
alcanzar el punto de saturación y por más que se aumente la concentración del nutriente
limitante no aumenta la velocidad.
Si bien cuando se trabaja a µ max la velocidad de crecimiento no aumenta, si lo hace el
número de células:

A bajas [S] (no saturantes), no se alcanza µ max pero la magnitud de la velocidad de

crecimiento aumenta a medida que también lo hace [S] conjuntamente con el número
de células viables.
A altas [S] (saturantes), se observa que las µ para las diferentes concentraciones son
iguales a µ max pero el número de células viables será mayor cuanto más alta sea [S]. El
tiempo requerido para alcanzar el punto de saturación será menor.

Medidas de crecimiento de poblaciones microbianas

Para determinar el número de células total, es decir el número de células viables y

muertas, se puede utilizar los métodos de:

• Recuento directo en cámara

• Recuento indirecto en portaobjeto
• Contadores automáticos de partículas
• Nefelometría

Para determinar el número de células viables, se pueden utilizar los métodos:

43
 • Filtración sobre membrana
• Cuantificación de ATP intracelular (indirecto)
• Recuento en placa por diluciones sucesivas
o Siembra en superficie
o Siembra por inclusión

Para determinar la masa celular se puede utilizar los métodos:

• Determinación de peso seco (Desecación hasta peso constante)

• Determinación de turbidez o Turbidimetria
• Cuantificación de constituyentes celulares.

También se pueden medir el crecimiento de una población microbiana indirectamente:

• Determinando parámetros físico-químicos como el pH, rH2 (medida del potencial

oxido-reducción) y la impedancia
• Determinando ciertas actividades metabólicas referidas al consumo de nutrientes
o producción de algún metabolito por unidad de tiempo oxígeno (QO2) y consumo
de carbónico (QCO2).

Los métodos más empleados son:

Recuento de colonias en medio solido: Es la forma más efectiva de distinguir entre células
viables y no viables contenidas en una suspensión bacteriana. El fundamento del método
se basa en que cada bacteria es capaz de dar lugar a la formación de una colonia,
después de ser incubada en un medio solido apropiado.
La técnica consiste en diluir la muestra (método de las diluciones sucesivas), tomar un
volumen determinado y sembrarlo en un medio agarizado líquido que será luego colocado
en cajas de Petri estériles. Se incuba y una vez desarrollado el cultivo se cuenta el
número de colonias. Con ese dato, y conociendo la solución realizada y el volumen
sembrado, se calcula el número de células vivas/ml de muestra o UFC/ml.
Existe ciertos factores que hay tener en cuanta al implementar este método como ser:

• Elección del medio • La temperatura

• La presencia de bacterias • El tiempo de incubación
incapaces de multiplicarse • El diluyente empleado.
Ventajas:

• Alta sensibilidad; dado que cualquier célula viable es capaz de originar una
colonia, en condiciones adecuadas.
• Posibilidad de obtener un cultivo puro a partir de las colonias aisladas.

Desventajas:

• Posibilidad de que una colonia se haya originado a partir de más de una

célula.
• Elección correcta del medio de cultivo a emplear de manera tal que sea
satisfactorio para las exigencias nutricionales del microorganismo.

44
Este método requiere un tiempo de incubación de por los menos 24 horas para poder
observar las colonias a simple vista.

Determinación de peso seco: Consiste en establecer una relación entre el número

de bacterias y el peso seco.
Para ello se toma un volumen conocido de una suspensión bacteriana; la cual debe
ser previamente lavada o filtrada para eliminar sustancias orgánicas y restos de
medio de cultivo remanentes, y se lo evapora en horno a 105 °C hasta peso
constante.
La evaporación puede realizarse en pesa filtros o en membrana filtrantes,
esterilizados y tarados previamente.
La diferencia de peso del pesa filtro o de la membrana antes y después del
calentamiento representa el peso seco de la masa celular.

Turbidimetria: Las bacterias presentan un elevado índice de refracción dispersando

la luz que incide sobre ellas. Esto permite determinar la turbidez producida por el
crecimiento microbiano en un medio liquido utilizado longitudes de onda entre 490 y
660 nm. La turbidez es lineal en densidades bacterianas que se encuentran 0,01 –
0,5 mg de peso seco/ml (aproximadamente 107 células).
La técnica es de fácil ejecución y da resultados inmediatos.

Los datos obtenidos a partir de más de un método pueden correlacionarse por

comparación. Ej.: Las medidas turbidimetricas y el número total de células viables
(determinado por distintos métodos) pueden relacionarse mediante una curva
estándar de densidad óptica en función del número de células. En los próximos
ensayos, si se mantiene idénticas condiciones, basta determinar la densidad óptica
para obtener el número de células viables utilizando dicha curva estándar.

Sistema cerrado o cultivo no renovado

Son sistemas en donde se mide el crecimiento desde que se inocula el

microorganismo en el medio de cultivo hasta que cesa el crecimiento. En este caso
se producirá un número de generaciones limitado y una curva de crecimiento
característica constituida por distinta fases:

• Fase de Latencia o Lag: Puede haber divisiones celulares aisladas pero no

hay crecimiento poblacional neto, por ende K=0. Es un periodo de adaptación
para comenzar el crecimiento en donde las células aumentan de tamaño e
incrementan la síntesis de macromoleculas, material celular y enzimas
responsables del metabolismo de nutrientes.
Al final de esta etapa se produce una pequeña fase de aceleración. La
presencia y duración de la fase lag depende del estado fisiológico del
microorganismo, edad del cultivo, composición del medio de cultivo, la
cantidad de inoculo y tiempo de generación, Ej.: Si se realiza un repique,
usando exactamente el mismo medio de cultivo, de un cultivo que se haya en
fase exponencial.
• Fase exponencial o Log: Las células se dividen regularmente, existiendo un
crecimiento microbiano neto positivo, siguiendo un ritmo determinado por el
tiempo de generación y las condiciones del medio.
Se puede alcanzar un crecimiento sincrónico y balanceado con K máxima y
constante; la población total es casi uniforme en lo que se refiere a
composición química de la células, actividad metabólica y otros caracteres

45
 fisiológicos.
En esta fase es donde se determina los parámetros de crecimiento.
Al final de esta fase se produce un fenómeno de desaceleración del
crecimiento para dar lugar a la siguiente fase.
• Fase estacionaria: Debido al agotamiento de nutrientes, la acumulación de
desechos y los cambios físicos que producen los microorganismos en el
medio (como la disminución del pH por la liberación de ácidos orgánicos
provenientes de su metabolismo), disminuye la velocidad de crecimiento
(reflejada en el fenómeno de desaceleración observado a final de la fase
exponencial) y se detiene volviendo K=0.
El número de células viables se mantiene constante debido a que algunas se
dividen y otras mueren, generando un crecimiento críptico y desbalanceado.
Las células viables continúan metabólicamente activas y algunas células
muertas se lisan y liberan enzimas líticas (proteasa, nucleasas y lipasas) que
degradaran las macromoleculas proporcionando sustratos más pequeños a
las células vivas.
Esta fase puede extenderse por horas o días dependiendo de la especie y del
tipo de medio.
• Fase de muerte: Si la incubación continua se produce la muerte masiva de la
población microbiana. K adquirirá valores negativos, pudiéndose denominar
‘’velocidad de muerte’’, y constantes comportándose como una función
exponencial; es decir que el número de células viables decrece con el tiempo
en progresión geométrica.
En ciertos casos, la muerte se acompaña de lisis celular, lo que se manifiesta
por una disminución del número de células viables y de la masa celular.
Cuando no hay lisis, decrece el número de células viables pero se mantiene
constante la masa celular.
La duración de esta fase varían en las distintas especies bacterianas.

Si bien es posible medir K en cualquier fase del crecimiento, esta acción carece de
importancia en las fases Lag o Estacionaria dado que su valor será ‘’0’’

Crecimiento bifásico

Se da cuando un microorganismo crece en presencia de dos fuentes de energía,

ambas catabolizables pero una más fácilmente utilizable. Ej.: Glucosa+lactosa.
Al utilizar primero la glucosa existente se forma la primera fase exponencial. El

46
conjunto de genes encargados de catabolizar la lactosa, contenidos en el operón
lactosa, están sujetos a control por represión catabólica de la glucosa. Cuando se
haya consumido toda la glucosa (fase lat) se empezaran a sintetizar las enzimas
encargadas de metabolizar la lactosa generando la segunda fase exponencial.

Cultivo continuo. Sistema abierto

Un cultivo continuo es esencialmente un cultivo de volumen constante al que se le

añade medio fresco y del que rebosa medio usado, o medianamente usado, junto con
células a una velocidad constante. Permite mantener una población microbiana en un
determinado estado fisiológico durante un tiempo prolongado; lo cual es casi
imposible de realizar con los cultivos cerrados.
Una vez alcanzado el estado de equilibrio en el sistema, el número de células y el
estado metabólico es constante.

Los factores que están relacionados con el estado de equilibrio son:

 Flujo (F), medido en ml/h

 Volumen de la cámara de cultivo (V, en ml)
 Densidad celular en la cámara (X)
 Velocidad de dilución D = F/V (en h-1)

Cuando µ= D, entonces -dx/dt = 0, y se alcanzara un estado de equilibrio dinámico.

Las pérdidas de células por drenaje se compensan con las ganancias por
crecimiento.
Como el volumen es constante D va a ser proporcional a la velocidad de adición de
nutriente al medio en un determinado tiempo (F).

Quimiostato

En este sistema los factores determinantes para el equilibrio son D y la

concentración limitante de un nutriente; el cual actuara como factor limitante del
crecimiento. La velocidad de flujo de entrada y salida de nutrientes se mantiene a un

47
valor determinado de tal manera que la velocidad de crecimiento del cultivo queda
ajustada a esa velocidad de flujo.
En el quimiostato se puede controlar la biomasa y la velocidad de crecimiento:

 La densidad celular se controla por el nivel del nutriente que actúa como factor
limitante.
o Si se incrementa la concentración del nutriente en el medio entrante y
se mantiene constante D, aumenta la densidad celular.

Manipulando D y el nivel del nutriente limitante se puede obtener una gran

variedad de densidades poblacionales creciendo a distintas velocidades de
crecimiento.

 La velocidad de crecimiento (µ) se controla mediante cambios en la velocidad

de dilución (D).

El sistema siempre busca autorregularse para restablecer el estado de

equilibrio en el cual:

Si bien el aumento de D produce un aumente en µ, ya que al haber un mayor

aporte de nutrientes haciendo que las células incrementen su velocidad de
crecimiento para restaurar el equilibrio pero solo en ciertos límites; ya que un
aumento exagerado de D provoca el lavado del sistema debido a que la
población no podrá compensar; ni aun llegando a µ max, la cantidad de
células que se pierden por el rebosado.
Si se trabaja a velocidades de flujo muy bajas las velocidades de crecimiento
serán muy bajas o estacionarias.

A medida que aumenta D, aumentara

µ debido a la disminución del tiempo
de generación (g), el cual alcanza un
valor límite por debajo del cual no
podrá reducirse más, provocando el
lavado del sistema.

Usos: Obtener poblaciones creciendo en fase exponencial pero a baja velocidad;

semejante a las condiciones naturales en las que crece un microorganismo.

Turbidiostato

48
 Se trabaja con valores de D variables y el medio de cultivo no contiene un
nutriente limitante haciendo que no sea posible modificar la velocidad de
crecimiento (µ), utilizando únicamente µ max.
Se puede modificar la densidad celular, pudiendo aumentar o disminuirla.
Usos: Se usa en la industria para la obtención de levadura

Quimiostato Turbidiostato
Trabaja con concentraciones limitantes de Trabaja con concentraciones saturantes de
sustrato y funciona mejor a valor bajos de sustratos y funciona mejor a valor altos de
D. D.
Se puede modificar la densidad de Se puede modificar la densidad población
población y µ pero no µ

Comparación entre medio cerrados y abiertos

Medio cerrado Medio continuo o abierto

Numero de generaciones limitado Número ilimitado de generaciones
Condiciones de cultivo varían Condiciones se mantienen constantes
µ impuesta por las condiciones del medio µ determinada por D
Presentes todas las fases de la curva de No presentes todas las fases de la curva
crecimiento de crecimiento

Cultivo semi-continuo (feed-batch)

Es un cultivo cerrado al que se añaden nutrientes concentrados para permitir un

mayor crecimiento o una producción más efectiva de metabolitos secundarios pero no
se renueva el medio.

Usos: Producción de penicilina

49
Esporulación

La esporulación es un proceso de diferenciación celular. Cuando las condiciones

ambientales le son adversas, algunas bacterias son capaces de diferenciarse
morfológicamente creando estructuras de resistencias, llamadas esporas.
Cuando estas estructuras se generan dentro de la célula vegetativa se denominan
específicamente endoesporas.
Las condiciones desfavorables del ambiente que inducen la esporulación en
procariotas pueden ser:

• Nutricionales: Carencia de nutrientes esenciales.

• Fisicoquímicas: Variaciones extremas de temperatura, radiaciones ionizantes
y UV, cambios bruscos en el pH, presión hidrostática, en las condiciones
osmótica, etc.

En la actualidad se conocen 20 géneros de bacterias que tienen la capacidad de

esporular.
Los hongos, a diferencia de las procariotas, producen esporas que actúan como
elementos de resistencia y de reproducción, siendo capaces de generar el
proceso de esporulación en condiciones totalmente normales y favorables.

El crecimiento y esporulación son procesos opuestos, nunca una célula se

hallara en su fase exponencial de crecimiento y esporulando a la vez.

El proceso de esporulación abarca grandes cambios de índole MORFOLÓGICOS,

FISIOLÓGICOS y GENÉTICOS, en donde:

1. Para que la célula inicie el proceso debe detener el crecimiento vegetativo y la

división celular.
2. Comenzará a desarrolla un esporo en el interior de la célula vegetativa;
llamada también esporangio.
3. Una vez madura la espora se liberara del esporangio al medio; este último se
degrada. La espora no presentara ninguna actividad metabólica
permaneciendo en un estado durmiente, criptobiótico o latente en el cual no
crece ni se multiplica.
4. Debido a cambios nutricionales o fisicoquímicos favorables en el medio, la
espora (que permanecía en dicho estado criptobiotico) revertirá el proceso
transformándose en una célula vegetativa a través de la germinación.

La espora es sumamente resístete a los cambios y a condiciones extremas del medio

provocadas por:

• Agentes físicos: Como la temperatura, radiaciones ionizantes, desecación

extrema, vacío y presión hidrostática.
• Agentes químicos: Como ácidos, bases, fenoles, aldehídos, colorantes,
agentes alquilantes y ATB.

Ej.: Si calienta una muestra que presenta células vegetativas y esporas a 80-100 °C
durante 10 minutos, se eliminaran las células vegetativas y se enriquecerá en
esporos la misma.

50
Ubicación y tamaño

Por lo general miden entre 0,5 -1,5 µm y, en el caso de las endoesporas en bacterias
bacilares, pueden ser:

Presentan refringencia siendo visible al

microscopio óptico sin la necesidad de tinciones.

Géneros formadores de endoesporas

Gram (+)
Bacillus sp (bacilo) Aerobios heterótrofos
Virgibacillus sp(bacilo) Aerobios heterótrofos
Sporosarcina sp (cocos) Aerobios heterótrofos
Thermoactynomyces sp (filamentoso) Aerobios heterótrofos, termófilo
Sporolactobacillus sp (bacilo) Microaerofílicos, heterótrofos
Sporohalobacter sp (bacilo) Anaerobios, heterótrofos, halófilos
Clostridium sp (bacilo) Anaerobios, heterótrofos fermentadores
Anaeobacter sp (bacilo) Anaerobios, heterótrofos fermentadores
Heliobacterium sp (bacilo) Anaerobios, fotótrofos
Heliophilum sp (bacilo) Anaerobios, fotótrofos
Gram (-)
Desulfotomaculum sp (bacilo) Anaerobios, reductores de sulfato
Oscilospira sp (bacilo filamentoso, No cultivable, no se conoce la forma
móviles) vegetativa

Cambios morfológicos

51
 I. Presenta un núcleo o core conformado por el citoplasma y las estructuras celulares
habituales de la célula vegetativa, protegidas por un estado de deshidratación,
característica que le otorga a la endospora su resistencia a la desecación,
temperatura y radiaciones. Posee dipicolinato de calcio (quelato) en altas
concentraciones el cual estabiliza o inmoviliza los constituyentes del núcleo. El
núcleo también:
• Presenta enzimas de la vía glucolítica pero sin actividad.
• Presenta ARN polimerasa pero no ARNm,
• Presenta nucleósidos mono y di fosfato pero no trifosfato.
• No presenta enzimas biosinteicas, aminoácidos, bases nitrogenadas libre ni
cofactores reducidos (NADH ni CoA).
• Presenta Proteínas SASP las cuales se acomplejan al ADN protegiéndolo del
daño de las radiaciones UV.
• Presenta 3-fosfoglicerato el cual se convertirá en 2-fosfoglicerato y luego PEP,
del cual se liberara piruvato necesario para la síntesis de ATP durante la
germinación de la espora.

II. Inmediatamente por fuera del core se encuentra la membrana esporal interna la
cual corresponde a la membrana plasmática de la célula vegetativa.
La espora presenta también una membrana esporal externa, la cual provendrá de
la membrana citoplasmática del esporangio durante la fase englobamiento.

III. Por fuera de la membrana esporal interna existe una capa de PG químicamente
similar al de la pared de la célula vegetativa llamada germen de la pared celular.
Esta, una vez que germine la endospora, será la precursora desde el cual se
empezara a sintetizar la pared celular de la nueva célula vegetativa.

IV. Entre el germen de la pared celular y la membrana esporal externa existe una
gruesa capa, de espesor variable, denominada córtex. Está constituido por PG cuya
estructura es más laxa, flexible y menos rígida que el PG normal presente en la
célula vegetativa o en el germen de la pared. Esto se debe a un menor número de
enlaces peptídicos (6 %) que le permite expandirse y sufrir una rápida autólisis
durante la germinación.
También juega un papel importante en la deshidratación de la espora ya que, al ser
laxo, se expande comprimiendo el core de la misma y provocando la expulsión del
agua. La expansión se produce debido a la repulsión que existe entre las cargas
negativas de los aminoácidos que lo conforman; como el ácido glutámico y el meso
diaminopimelico. Dichas cargas, en condiciones normales, se encuentran
neutralizadas principalmente por iones Ca+2 que, durante el proceso de
esporulación, son secuestrados al interior del core y quelados por el ácido
dipicolinico (agente quelante) formando dipicolinato de calcio.

V. Por fuera de la membrana esporal externa se presentan varias capas de proteínas

conformando la túnica esporal, rica en cisteína y aminoácidos hidrófobos y
azufrados. Debido a esto, y a la abundancia de puentes S-S, la estructura se vuelve
compacta, estable químicamente e impermeables (resistencia) a agentes químicos
como colorantes y a las radiaciones.
Ej.: Por eso que se usa el calor para que el verde de malaquita puede penetrar en la
coloración de Shaeffer-Fulton.

52
VI. Exteriormente a la túnica esporal puede haber un exosporio, el cual es no es una
estructura permanente ni universal dado que endosporas de ciertas especies
carecen de él.
Está compuesto de proteínas, polisacáridos complejos y lípidos y presenta una
elevada resistencia a enzimas proteolíticas, actuando como barrera de defensa de
la espora.

Mecanismos de esporulación (en Bacillus subtilis)

Existen pasos claves o generales que son característicos para todos los géneros de
bacterias esporulantes, habiendo igualmente ciertas diferencias en el proceso entre
especies. Se toma como modelo del mecanismos de esporulación al Bacillus subtilis.

El tiempo total de esporulación puede durar entre 7-8 horas y se produce en una serie
de etapas:

Etapa 0-1 (Crecimiento normal y división celular): Las células bacterianas presentan
un ciclo celular bastante rápido y acelerado, por lo cual es muy probable que cuando
se gatille el proceso de esporulación, por algún factor externo, esta se encontrase en
vías de dividirse. Aun así, el ADN termina de replicarse pero se cancela el proceso de
división celular. El ADN se alinea formando un filamento axial.

Etapa 2 (División asimétrica y formación de septo): La membrana citoplasmática

comienza a invaginarse en un extremo de la célula y, sobre dicha posición, se
empezara a producir un septo el cual, una vez finalizada su síntesis, genera una pre-
espora (o célula hija) y un esporangio (o célula madre).

En estos primeros pasos ambas células sintetizan antibióticos (en el caso de B.

subtilis), y enzimas extracelulares, proteasas y peptidasas que conformaran el
recambio o turnover de proteínas necesario para la hidrolisis y degradación las
proteínas; solubles y estructurales, de la célula vegetativa. Así serán usadas como
sustrato en la producción de energía y síntesis de proteínas esporales; debido a
la escasez de nutrientes en el ambiente.

Etapa 3 (Englobamiento): La membrana citoplasmática del esporangio continúa

creciendo en forma unidireccional y engloba a la hija. Esta última adquiere 2
membranas (su propia membrana citoplasmática y la de la madre) que presentaran
polaridad opuesta.
Antes que se produzca el englobamiento, la célula hija debe sintetizar los productos
que van a ser necesario para los siguientes pasos de la esporulación y las enzimas
necesarias para la germinación; ya que al finalizar la etapa 3, dejara de trabajar y
de ser activa desde el punto de vista biosintetico.

Etapa 4 (Formación del Córtex): El esporangio sintetiza ácido dipicolinico y unidades

de PG correspondientes al córtex y los entrega a la célula hija. Este PG se ira
depositando entre las membranas esporales externa e interna haciendo que esta
última empuje y comprima el núcleo provocando la eliminación de agua del mismo.
Se produce ingreso de Ca+2 por transporte activo al esporangio desde el cual, por
difusión facilitada debido a la presencia de dos membranas de polaridad opuesta que
impide el transporte activo, es cedió a la célula hija.

Etapa 5 (Deposición de las cubiertas esporales): Comienza la formación del

Exoesporo y del Germen de pared celular.

53
Etapa 6 (Maduración): En esta etapa todo estos procesos anteriores se irán
incrementando a medida que pasa el tiempo. Continua la deshidratación del core, la
acumulación de ácido dipicolinico y la síntesis de las capas de la túnica esporal y de
las proteínas SASP (acidosolubles). Todos estos elementos son sintetizados y
exportados por la célula madre.

Etapa 7: Se sintetizan autolisinas van a terminar destruyendo o lisándola a la madre

para q se libere la espora una vez madura.

Cambios Fisiológicos

Esporulación

La mayoría de las bacterias que se encuentra en un estado vegetativo presentan un

metabolismo fermentativo, en el cual a partir de una azúcar, como glucosa, producen
ácidos orgánicos.
Cuando se gatilla la esporulación, debido a la escasez de nutrientes en el medio, la
célula cambia su metabolismo fermentativo por uno oxidativo ya que necesitara
sustratos para la producción de energía y la síntesis de las estructuras esporales.
Por lo tanto:

• Se sintetizaran enzimas del ciclo de Krebs que estaban reprimidas o ausentes

• La célula usara los ácidos orgánicos para formar ATP en el ciclo del Krebs
• Aumenta el pH, debido a la disminución en la concentración de ácidos
orgánicos.
• Aumenta el consumo de oxígeno, por el metabolismo oxidativo.

Por la falta de nutrientes, las proteasas producidas en el Turnover de los primeros

estadios de la esporulación degradaran:

 Proteínas de la célula vegetativa, liberando péptidos y aminoácidos que serán

usados como precursores de fuente de energía y precursores en síntesis de
proteínas de la endospora.
 Los gránulos de poli-beta-hidroxi-butirato (fuentes ricas en fosfato), con la
producción de energía necesaria para las nuevas síntesis.

El DNA no se replica, solo concluye la síntesis que comenzó al iniciarse la

esporulación
Hay ARN polimerasa pero no síntesis de ARN soluble (ARNt y ARNm) ni ARNr.

Germinación

Es un proceso que pone fin al estado criptobiotico en el cual se encuentra la espora.

Hay esporas que pueden conservar su germinabilidad durante muchos, o miles de
años. Para que la germinación ocurra se necesita que se produzca:

• Activación del esporo: Consiste en la alteración y desestabilización de los

aminoácidos y la estructura de las cubiertas proteicas esporales. La ruptura
o desestabilización puede darse por shock térmico, oxidantes fuertes, pH
extremos, elevada presión, etc.
• El disparo de la germinabilidad: A nivel de la membrana esporal interna hay
receptores alostericos que presentan actividad proteasas pero que se hayan
inactivas. Frente a un estímulo, nutricional (como glucosa, L-alanina,

54
 ribosidos) o no nutricional (como iones, enzimas hidrolíticas, tensoactivos) se
activan y actúan sobre una proenzima inactiva unida al PG del córtex. Esta
enzima se liberara y empezara a hidrolizar y generar cortes en las capas de
PG cortical.

Paralelamente, las enzimas de la vía glicolitica se activan y se utiliza el 3-fosfo-

glicerato para la producción de ATP.
El dipicolinato de calcio empieza a degradarse librando Ca el cual sale de la célula, el
cual luego se utilizara para neutralizar los aminoácidos con carga negativa de las
cadenas peptídicas de las nuevas unidades de PG que la célula producirá. Se
produce el ingreso de agua, debido también en parte a la degradación de córtex,
haciendo que la célula se hinche y se rehidrate.

Todos estos procesos son lentos no hay un metabolismo activo, ni síntesis muy activa
de macromoléculas.

Cambios genéticos

La esporulación se desencadena por condiciones externas adversas, como la

inanición, la desecación o las temperaturas que inhiben el crecimiento. Dichas
condiciones ambientales son monitorizadas, y a su vez activan, un grupo de cinco
quinasas sensoras, ubicadas a nivel de la membrana plasmática, las cuales se
autofosforilan (utilizando ATP) y ponen en marcha un sistema de fosfotransferencia.
El resultado neto de las condiciones adversas es la fosforilación sucesiva de varias
proteínas llamadas factores de esporulación, y culmina con el factor de
esporulación Spo 0A. Cuando aumenta la concentración de Spo 0A fosforilado
(Spo 0A-P), se desencadenan los mecanismos que conducen a la esporulación.

Se conocen 200 genes implicados en los procesos de esporulación y germinación,

llamándose genes spo y ger, respectivamente. A su vez, también existen genes que
codifican para las proteínas SAPS, proteínas estructurales de la cubierta, enzimas
hidrolíticas o de síntesis, la división asimétrica y la formación del septo.
Los genes se hayan ubicados ordenadamente uno al lado del otro, de acuerdo a
como se ira desarrollando el proceso de esporulación o germinación. Sin embargo,
hay espacios ocupados por genes que no participan en ninguno de los dos procesos
y es por esto que la regulación genética de la esporulación o de la germinación
es un proceso sumamente ordenados y organizados que se dan tanto en forma
temporal como espacial.
Los genes spo se encontraran organizados en operonres SPO.

Los factores son proteínas que se encuentran en procariotas como subunidades de

la ARN polimerasa que le permiten reconocen secuencias promotoras en el ADN
iniciando la transcripción de diferentes genes.
Existen distintas clases de factores σ asociados a:

• La parte vegetativa: Son llamados factores celulares.

o σA regula la expresión de los genes asociados a la primera etapa de la
esporulación, como ser la síntesis de proteasas o ATB.
o σH regula la expresión de los genes asociados al ciclo de los
tricarboxilicos en la germinación.
• La esporulación: Llamados factores de esporulación.
o σG y σF asociados a la célula hija.

55
 o σE y σK asociados a la célula madre.

Spo 0A-P activa a la Spo 2A-P eliminándole el grupo fosfato que la mantenía en un
estado inactivo. Spo 2A se une al factor antiσ (Spo 2AB) liberando el factor σF, el
cual regulara la expresión de los genes tempranos en la célula hija como ser:

 Genes que codifican para las proteínas asociadas a la germinación.

 Gen que codifica para del factor σG.
 Genes involucrados en la síntesis de productos necesarios en la últimas
etapas de la esporulación.
 Genes que codifican para las proteínas encargadas de activar el factor
σE en la célula madre.

El factor σE, al encontrarse activo, regula la expresión genes tempranos en la

célula madre como ser:

• Genes involucrados en formación del septo.

• Genes involucrados en la formación del córtex, exosporio y la síntesis de
ácido dipicolinico.
• Genes que codifican para las proteínas encargadas de activar el factor
σG en la célula hija.

El factor σG, al encontrarse activo, regula la expresión genes tardíos en la célula

hija y la expresión de genes que codifican para las proteínas encargadas de
activar el factor σK en la célula madre.

El factor σK, al encontrarse activo, regula la expresión genes tardíos en la célula

madre como ser:

 Genes involucrados en formación de la cubierta proteica.

 Genes involucrados en la síntesis y acumulación de ácido dipicolinico.

La esporulación puede estar precedida por un canibalismo celular. Aquellas células

en las que Spo 0A ha sido activada secretan una toxina que lisa células vecinas de la
misma especie, cuyas Spo 0A no está aún activa. Dicha toxica va acompañada por
una segunda proteína que retrasa la esporulación de las células vecinas. Las células
que ya iniciaron el proceso de esporulación también pueden sintetizan una antitoxina
para protegerse de los efectos de su propia toxina. Las células hermanas sacrificadas
son utilizadas como fuente de nutrientes.

56
Efecto de factores ambientales sobre el crecimiento

El crecimiento microbiano va a depender de las condiciones químicas y físicas del

medio:

• Condiciones químicas están referidas a los nutrientes y a sustancias químicas

que pueden ser nocivas.
• Condiciones físicas están referidas a factores fisiqui-quimicos.

Estos factores nos permitirán:

• Comprender la distribución de los microorganismos en la naturaleza

• Idear formas para controlar el crecimiento de microorganismos patógenos o
indeseables, como microorganismos alterantes de alimentos.
• Idear métodos para favorecer el desarrollo de microorganismos útiles para la
industria y de aquello que se desean estudiar en el laboratorio.

Existen varios factores ambientales pero los más importantes son:

Temperatura

Los microorganismos crecen en un cierto rango de temperatura determinado por las

temperaturas cardinales:

• Temperatura máxima (T max).

• Temperatura mínima (T min).
• Temperatura optima (T op).

Todos los microorganismos necesitan, para su nutrición, transportar nutrientes

desde el medio externo hacia el interior y, una vez incorporados, realizar distintas
reacciones químicas y enzimáticas propias de su metabolismo. Estos dos factores
determinar, en gran parte, la velocidad de crecimiento de una población microbiana.
A medida que aumenta la temperatura, incrementa la fluidez de la membrana lo que
favorece la incorporación de nutrientes y; el calor como forma de energía, incrementa
la velocidad de las reacciones químicas y enzimáticas. Así, la velocidad de
crecimiento se va incrementando hasta alcanzar un valor máximo, el cual
corresponde a la T op, en la cual el desarrollo microbiano es máximo.

➢ En este punto, si se sigue aumentando la temperatura, comenzara a disminuir la

velocidad de crecimiento debido a una disminución en las velocidades de las
reacciones metabólicas.
La velocidad de crecimiento se volverá nula cuando el valor de la temperatura
sobrepase T max, por sobre la cual el desarrollo y viabilidad microbiano no
existe. Esto ocurre debido a reacciones adversas; como la desnaturalización de
las proteínas, colapso de la membrana plasmática o lisis térmicas, influenciadas
por la temperatura.
➢ Cuando el valor de temperatura se encuentra por debajo de la T min, no existe
crecimiento microbiano y la velocidad de crecimiento es nula. Esto se debe a la
gelificacion de la membrana; que entorpecen los procesos de transporte de
nutrientes, y la reducción en la velocidad de las reacciones metabólicas, pero no
supone que necesariamente se haya producido la muerte de los
microorganismos.

57
 Si se grafica la velocidad de crecimiento
vs la temperatura se obtendrá una curva
asimetría, en donde se observa la
cercanía entre la T op y T max.

Los extremofilos son un grupo de

microorganismos que tiene la aptitud para desarrollarse en condiciones fisicoquímicas
en los que el hombre y la mayor parte de los seres vivos nos serían capaces de
sobrevivir. Este grupo está compuesto en su mayor parte por Archaeas, Ej.:
Pyrococcus furiosus (más de 100°C) y Sulfolobus acidocaldarius (80°C y pH 2)

T Min T Op T Ejemplo
Max
Psicrofilos
Obligados 0 10-15 < 20 Chlamydomonas nivalis (en nieve),
Polaromonas vacuolata (mares helados y
Antártida)
Facultativos, 0 15-30 > 25 En suelos y aguas de climas templados y
psicrotrofos o en alimentos refrigerados
psicrotolerantes
Mesofilos 15-20 30-40 <45 Mayoría de los microorganismos

Termófilos
Facultativos 34 42-45 >50 Thermus aquaticus (del cual se extrajo la
Taq ADN polimerasa, usada en PCR)
Estrictos 45 50-75 >80 Bacillus sterotermophillus (manantiales
calientes, sedimentos oceánicos, suelos
calientes)
Extremos 65 80- >100 Archaea: Pyrolobus fumarii, Pyrolococcus
105 Furiosus, Thermoplasma acidophilus.
Eubacteria: Aquifex pyrophilus
(Fuentes hidrotermales de profundidades
marinas, fumarolas)
Los psicrotolerantes pueden tolerar bajas temperaturas, pero un incremento de la
misma resulta beneficio para ellos, es por eso que presentan una T max >25 °C.

Las adaptaciones que le permiten a los psicrofilos desarrollarse a temperaturas tan

bajas son:

• Una membrana citoplasmática con un alto contenido de ácidos grasos

polinsaturados que permiten mantener la semifluidez de la membrana.
Debido a las insaturaciones presentes en la cadena hidrocarbonada del ácido
graso, la molécula se vuelve más voluminosos y obliga a un mayor
distanciamiento entre los fosfolípidos, disminuyendo el empaquetamiento y
evitando que se congele la membrana.

58
 • La presencia de lípidos ricos en ácidos grasos poliinsaturados e hidrocarburos
de cadenas largas con dobles enlaces.
• Proteínas que son activas o catalíticamente eficiente y estructuralmente
flexibles a bajas temperaturas. Esto se produce debido a modificaciones a
nivel de la estructura secundaria y terciaria:
o Una mayor proporción de hélices σ, que le confieren mayor
flexibilidad comparada con una hélice β, y aminoácidos polares.
o Una menor proporción de enlaces débiles; como enlaces de Van
del Valls e hidrofóbicos, e interacciones entre dominios estructurales.
o Una menor proporción de enlaces S-S, interacciones proteína-
solvente e interacciones hidrofóbicas en el núcleo.

Las adaptaciones que le permiten a los termófilos desarrollarse a temperaturas muy

altas son:

• Una membrana plasmática con un alto contenido de ácidos grasos

saturados que permiten mantener la semifluidez de la membrana. Debido a la
elevada empaquetamiento de los fosfolípidos de membrana resultante de la
sumatoria de las fuerzas hidrofóbicas, se evita la lisis térmica de la misma por
acción de las altas temperaturas.
• La presencia de ARNm, ARNt y ADN genómico con un mayor contenido de
guanina y citosina, lo que producirá uniones más fuertes y una mayor
estabilidad.
También hay un mayor contenido de purinas en ARNm; lo que impedirá su
agregación, y la existencia de proteínas que se unen al ADN
incrementando su temperatura de fusión.
• Proteínas termoestables y catalíticamente eficientes a altas temperaturas;
contrarias a la de los psicrofilos las cuales son termolábiles. Serán menos
flexibles y más rígidas debido a modificaciones producidas a nivel de la
estructura secundaria y terciaria:
o Una mayor proporción de aminoácidos cargados y una menor
proporción de aminoácido polares no cargados, lo que le permite a
la proteína formar un mayor número de enlaces iónicos, uniones
hidrogeno y puentes salinos intermoleculares manteniendo se
estabilidad y flexibilidad
o Presentan un empaquetamiento altamente hidrofóbico en el
interior que genera una disminución del número y del volumen de
cavidades internas, lo cual incrementa la rigidez.
o La existencia de solutos que ayudan a estabilizar las proteínas
como el di-inosotiol-P, di-glicerol-P y monosilglicerato.

Los mesofilos no pueden crecer a muy bajas temperaturas porque la velocidad de sus
reacciones metabólicas disminuirá mucho o se detendría por debajo de su T min.
Presentan proteínas termolábiles, aunque en menor grado que las de los psicrofilos,
lo que imposibilita el desarrollo de estos microorganismos a elevadas temperaturas.

En las membranas de las Archaeas en lugar de ácidos grasos presentan cadenas

hidrocarbonadas de 20 C compuestas de unidades repetitivas de isopreno. Los
principales hidrocarburos son: fitanil (C20) y bifitanil (C40).
Estos se unen al glicerol fosfato por uniones éter, las cuales presentan mayor
resistencia que las uniones ester, lo que le permite mantener la semifluidez de su

59
membrana a altas temperaturas.
Las uniones entre estos dos tipos de moléculas pueden ser di o tetraeter.

En el caso de uniones tetraeter se formara una membrana monocapa en vez de una

bicapa, aumentando la estabilidad de la misma.
Los termófilos son de importancia en microbiología industrial para la obtención de
enzimas termoestables y activas a altas temperaturas.

Efecto del pH

Todos los microorganismos presentan un rango de pH en el que es posible su

desarrollo, clasificándose en:

Rango de pH Ejemplo
Acidofilo 1a5 Principalmente hongos. Eubacteria: Thiobacillus sp.
Archaea: Sulfolobus, Termoplasma, Ferroplasma,
Picrophilus oshimae (Acidofilos extremos ~ 2 pH)
Neutrófilo 5,5 a 8 Mayoría de las bacterias
Basófilo o 8,5 a 11,5 Bacillus alcalophilus (en lagos sódicos o suelos ricos en
alcalófilo carbonatos), algunos son archaeas halófitas extremas
(de importancia industrial)
Los acidofilos pueden vivir en dichas condiciones tan acidas debido a la estabilidad
de su membrana citoplasmática la cual necesita de H+ para alcanzar dicha
estabilidad. Cuando el pH es neutro, la membrana citoplasmática de las bacterias
acidófilas se destruye y las células se lisan.

La Archaea Picrophilus oshimae, un termófilo (T op 60 °C) acidofilo obligado (pH

optimo 0,7). Fue aislada de suelos sulfatados en Japón y puede desarrollarse en
medio con una acidez semejante a una solución 1 M de H2SO4.

Sea cual sea el rango de pH para su crecimiento, todos presentan un pH

citoplasmático cercano a la neutralidad, el cual es mantenido por una serie de
mecanismos de regulación del pH interno.

60
 El pHi tendrá a ser más acido o básico según se
trate de un acidofilo o basófilo respectivamente.

Si se producen modificación en el pH del medio que

superan las capacidades de regulación del pH
interno del organismo, este se modificara en el mismo sentido que en el medio
provocando efectos nocivos.

El efecto nocivo directo del pH está relacionado con la acidificación o alcalinización

del pH interno que lleva a la desnaturalización de componentes vitales:

• Proteínas a bajos pH
• Ácidos nucleicos y ARN a altos pH

El efecto nocivo indirecto del pH consiste en la ionización de los nutrientes impidiendo

su incorporación, debido a que la gran mayoría son incorporados de forma pasiva y
estado en su forma no ionizada.

• Compuestos débilmente ácidos no podrán ingresar a pH altos.

• Compuestos débilmente básicos no podrán ingresar a pH bajos.

Mecanismos de regulación del pH interno

La regulación del pHi puede darse por:

• Un sistema antiporte H+/K+, el cual puede funcionar en dos sentidos,

generalmente expulsa H+ e introduce iones K+; alcalinizando y acercando a la
neutralidad el pHi.
• Bacterias; como E. coli o Salmonella typhimurium, a un pH a 6 o 5,5 son
capaces de inducir una respuesta de tolerancia a ácidos, la cual consistente
en la síntesis de ATPasas translocadoras de H+ y chaperonas para corregir las
proteínas desnaturalizadas por el descenso del pHi.

Para evitar variaciones bruscas del pH en los medios de cultivo se agregan buffers.

Disponibilidad de agua. Presión osmótica

Todos los microorganismos necesitan agua para vivir ya que todas las reacciones del
metabolismo se realizan en medio acuoso.
La disponibilidad de agua se expresa como actividad de agua (Aw) y está dada por
el cociente entre la presión de vapor de agua en el aire que se encuentra sobre una
solución y la presión de vapor del agua pura a la misma temperatura.
Aw puede tomar valores entre 1 y 0 pero no toda el agua en un medio se encuentra
disponible para los microorganismos ya que Aw se ve disminuida por el efecto
osmótico (interacción con los solutos) y matrico (adsorción a superficies).
A bajas Aw los microorganismos tienen mayor dificultad para captar el agua de su
ambiente y disminuye su crecimiento.

Aw: agua pura: 1, sangre: 0,995, jamón: 0,90

En relación al efecto osmótico, la presión osmótica es la presión que se debe aplicar

a una solución para detener el flujo neto de disolvente a través de una membrana
semipermeable, que en este caso se trataría de la membrana plasmática de los

61
microorganismos. Por lo tanto, el efecto de esta presión determinara la entrada o
salida de agua de la célula por osmosis.
Osmosis: Difusión de las moléculas del disolvente desde una solución de menor
concentración de soluto (o de mayor presión osmótica) a una de mayor
concentración de soluto (o de menor presión osmótica).

Como la mayoría de las bacterias crecen en medios hipotónicos, el hecho de que su

concentración de solutos interna sea osmóticamente activa y elevada, provoca que el
medio ejerza una presión externa sobre la membrana citoplasmática generando el
ingreso abundante de agua. Para evitar la ruptura de la membrana las bacterias se
rodean de la pared celular. En la cara interior de dicha pared se genera una presión
hidrostática que se opone a la presión osmótica, llamada presión de turgor (P),
originada por el empuje que realiza el contenido celular sobre la pared provocado por
el ingreso osmótico de agua.
En medios hipotónicos, las bacterias Gram (+) son menos propensas a experimentar
lisis celular que las Gram (-) debido al mayor grosor y resistencia de su pared celular.
En medio hipertónico la mayoría de las bacterias no crece debido a la baja Aw,
empiezan a perder agua osmóticamente impidiendo su desarrollo y provocando la
muerte por deshidratación, a este fenómeno se lo denomina plasmólisis.

Clasificación de microorganismo según sus necesidades de disponibilidad de agua

Aw Ejemplos
Normales 1-0,95 Mayoría de las bacterias
Osmotolerantes 1-0,80 Staphylococcus aureus (0.87)
Osmofilos 0,80 - 0,75 Saccharomyces bailii, Penicilum martensii
Osmofilos 0,75 - 0,63 Halobacterias, Hongos xerofilicos
extremos
Los osmofilos pueden crecer en medios con elevadas concentraciones de azucares,
como mermeladas.
Los microorganismos xerofilos son capaces de vivir en ambientes secos, con muy
baja humedad, así como aquellos que presentan una alta concentración de azucares;
como cereales y frutas secas

A una Aw=0.6 ya no se produce crecimiento microbiano, lo que permite idear

métodos de conservación generando métodos muy hipertónicos.

62
Clasificación según su tolerancia o requerimiento de NaCl

➢ Halotolerantes: Toleran y pueden crecer en elevadas concentraciones de

NaCl pero no lo requieren, Ej.: Staphylococcus aureus.
➢ Halófilos moderados: Crecen en presencia de 1- 6% de NaCl (generalmente
3,5%) y Aw de 0.98; similar a la del agua de mar. Ej.: Bacterias marinas como
Aliivibrio fischeri.
El Na+, en estos microorganismos, es necesario para:
o El mantenimiento de la membrana citoplasmática y lo sistemas de
transporte.
o La estabilización de la pared celular.
o Enzimas
➢ Halófilos extremos: Crecen en lagunas salinas y pescados salados y
requieren concentraciones saturantes de NaCl (15-30%) y Aw de 0,75. Ej.:
Archaeas como Halobacteriaceae y Halobacteria.
El Na+ es responsable de mantener:
o La estabilidad y actividad de ribosomas.
o La estabilidad de enzimas y sistemas de membrana y de transporte.

Estos microorganismos logran incrementar la concentración de solutos internos

compatibles para igualar la presión osmótica del medio, evitando la plasmólisis y
desarrollarse.
Estos solutos compatibles son compuestos orgánicos de bajo peso molecular que no
interfieren con el metabolismo celular ni producen un efecto toxico y permiten
aumentar la concentración de osmolitos citoplasmáticos. Pueden ser de diferentes
tipos:

• Aminoácidos y relacionados: Como glicina, betaina, ectoína, glutamato,

propionato de dimetilsulfónico
• Carbohidratos: sacarosa, trehalosa
• Alcohol: glicerol, manitol
• Potasio y cloruro: En el caso de los halófilos extremas dichos iones son
bombeados al interior de la célula por un sistema de antiporte con H+.

Las células pueden aumentar su concentración interna de solutos compatibles ya sea

captándolos del medio y acumulándolos o sintetizándolos.

Presión hidrostática

Presión ejercida por una columna de agua sobre el fondo de la columna y afecta
principalmente la vida en las profundidades de los océanos a la cual la mayoría de
las bacterias no sobreviven.
Los efectos nocivos que produce sobre las células son:

• Aumento de la viscosidad del citoplasma.

• Disminución de la capacidad de las enzimas de unirse a sus respectivos
sustratos.
• Interferencia en procesos de transporte a nivel de membrana y biosíntesis de
proteínas.
• Interfiere con la división celular y por lo tanto no hay crecimiento.

63
 Presión hidrostática Habitad
Barotolerantes Optima a presión atmosférica pero Aguas oceánicas
resisten hasta 500 atm (2000m)
Barofilas Crecen a presión atmosférica y poseen Aguas oceánicas (5000
Moderadas un óptimo de 400 atm – 7000m)
Barofilas No crecen a presión atmosférica y tienen Aguas oceánicas (a más
Extremas un óptimo mayor a 600-700 atm de 7000m)
La mayoría de las bacterias son barosensibles, no soportan elevadas presiones
hidrostáticas y solo crecen a presión atmosférica, las cuales son posibles de romper
por prensa french.

Oxigeno

Potencial redox

El potencial de óxido-reducción es una medida cuantitativa de la tendencia de los

compuestos a ceder electrones; y con el cual se pude determinar la electropositividad
o electronegatividad de un medioambiente.
La medida del potencial redox (rH2) sirve para expresar la actividad oxidante o
reductora de una solución. Un potencial positivo indicara condiciones oxidantes y
uno negativo, condiciones reductoras.

Eh: Potencial redox del H2 a pH=0; 1 atm

El oxidante principal es el oxígeno y su presencia eleva el potencial mientras que

agentes reductores lo disminuyen.
Todos los microorganismos que viven en un medio dado tienen un máximo de
actividad para un determinado calor de rH2 del medio y que es bien definido para
cada especie. Este comportamiento depende de su tipo de respiración, el que a su
vez depende de su capacidad enzimática, en particular la de usar o no el oxígeno
gaseoso como aceptor final de electrones en la cadena respiratoria.

Como el O2 es un nutriente esencial para los aerobios estrictos, estos crecerán a

valores de rH2 elevados:

• En la superficie de los medios de cultivo.

• En medio con agitación o aireados.

Como O2 es letal para los anaerobios estrictos, estos crecerán a valores de rH2 bajos:

• En medios colocados en botellas con cierre hermético, previamente

sometidas a ebullición para eliminar el aire,

64
 • En medios que contengan agentes reductores como ascorbato, cisteina o
tioglicolato.
• En medios en donde se burbujea gases inertes como N2 o CO2, quienes al
desplazar el aire junto con el O2.
• En medios en donde se burbujea H2 estéril, lo que incrementa su presión
parcial en el medio liquido reduciendo rH2.

Tensión superficial

En el seno de un líquido, cada molécula está sometida a fuerzas de atracción que en

promedio se anulan permitiéndoles conservar un estado de baja energía. Sin
embargo, las moléculas ubicadas en la interface liquido-gaseoso están sometidas a
fuerzas de atracción no equilibradas siendo fuertemente atraídas hacia el interior del
líquido, por las moléculas situadas por debajo de ellas, y débilmente fuera de el por
las moléculas gaseosas. Debido a que la fuerza atractiva hacia el exterior resulta
despreciable dada la gran diferencia de densidades entre el líquido y gas, existirá una
fuerza neta hacia el interior del líquido que actúa sobre las moléculas superficiales
generando el fenómeno de tensión superficial.

Los organismos aerobios estrictos tienden a crecer en la superficie de los medios

líquidos, donde la concentración de O2 es mayor, formando una ‘’película’’ mantenida
por las fuerzas de la tensión superficial. Al usar los nutrientes de la superficie, se crea
un gradiente de concentración inverso al gradiente de oxígeno.

Este tipo de desarrollo los obliga a crecer con una permanente limitación nutricional.
Para evitar estos efectos, se utilizan sustancias que reducen la tensión superficial
llamados agentes tensioactivos o surfactantes. El agregado de estas sustancias,
en concentraciones adecuadas, a los medios de cultivos líquidos permite el desarrollo
de los aerobios de manera uniforme en todo el medio.
Al reducir la tensión superficial, el O2 difunde más fácilmente llegando hasta el fondo
de los tubos, favoreciendo la nutrición.

65
Los grumos o agregados que forman algunos microorganismos durante el
crecimiento, desaparecen también con el uso de estos agentes.
El surfactante más comúnmente usado es el Tween 80. Es un detergente no-iónico
cuya molécula presenta un cuerpo carbonado y una cabeza polar que recuerda los
fosfolípidos de membrana. Usados en concentraciones adecuadas, favorecen el
desarrollo de los microorganismos pero en exceso, producen daños en la membrana
celular intercalándose entre los fosfolípidos.

Radiaciones

Las radiaciones UV y de menor longitud de onda (ionizantes) tienen fuertes efectos,

tanto mutacionales como letales, sobre los sistemas biológicos. El efecto letal de
estas radiaciones dependerá mucho:

• La dosis absorbida; lo que a su vez está relacionado con el tiempo de

exposición a la radiación y las condiciones del procedimiento experimental;
usando lámparas que emitan radiaciones con diferentes longitudes de onda y
exponiendo las cajas durante diferentes periodos de tiempo.
• Del estado fisiológico del microorganismo y de las condiciones ambientales
durante la exposición; siendo más efectivas en cultivos que se hallen en fase
exponencial que en fase lag o estacionaria.

Las radiaciones son muy usadas para esterilización de ambientes (UV) y material
descartable (radiaciones ionizantes). La efectividad de las radiaciones UV es muy
limitada debido a su poco poder de penetración, por lo que solo puede ser
utilizada para la esterilización de superficies.

66
Control Microbiano

El control microbiano es esencial tanto para:

➢ La conservación de fuentes nutricionales o alimentos, siendo fundamental en

la industria alimenticia.
➢ La conservación de bienes inorgánicos; como monumentos o metales.
➢ El control de enfermedades infecciosas y en la realización de cualquier
trabajo o estudio microbiológico; mediante procesos de esterilización.

Dicho control puede hacerse manipulando diferentes factores:

• Físicos: Calor, deshidratación, presión osmótica, filtración y radiaciones.

• Químicos: Agentes desinfectantes, antisépticos y conservadores de alimentos.

El control microbiano puede limitar el crecimiento de los microrganismo o

provocar la destrucción o pérdida de viabilidad de los mismos.
Dicha inactivación o destrucción de las células viables puede ser:

✓ Parcial: Se produce una reducción de la carga bacteria, quedando siempre

una fracción de células viables. Ej.: Pasteurización.
✓ Total o Esterilización: En donde se elimina toda forma de vida microbiana;
obteniendo así materiales e instrumentos esterilizados.

El grado de inactivación dependerá del tiempo, del tipo de agente utilizado y de su

concentración o magnitud.
La esterilización es el proceso por el cual se eliminan toda forma de vida; ya sea en
estado vegetativo o esporulado, de una sustancia, objeto o ambiente. Es un término
absoluto ya que un material se haya completamente desprovisto de vida microbiana o
no.

Cinética de muerte de una población bacteriana

Cuando una población microbiana es sometida a un proceso que le provoca perdida

de viabilidad, se observa una disminución progresiva en el número de
microorganismo sobrevivientes en función del tiempo de exposición del agente.
La muerte microbiana sigue un comportamiento de tipo exponencial.

Graficando el Log. del número de microorganismos sobrevivientes vs el tiempo de

exposición del agente químico se obtiene una recta denominada ‘’Curva de
sobrevida’’; que permite describir la cinética de destrucción de la población
microbiana en las condiciones elegidas.
K determinara la pendiente de la curva y será función de:

• Las condiciones de esterilización (Temperatura, tenor de humedad,

concentración del agente químico).
• De la resistencia del microorganismos al proceso de esterilización.

67
De dicha curva se puede obtener distintos parámetros, entre ellos el tiempo de
reducción decimal (D) el cual es el tiempo (en minutos) requerido para reducir la
población microbiana en un 90% o en orden de magnitud.

Agentes Esterilizantes físicos

Calor

El calor es el agente esterilizante más utilizado tanto en la industria como en los

laboratorio. El mecanismo de muerte por calentamiento consiste en una
desnaturalización de proteínas, y es una función exponencial o de primer orden y
ocurre más rápidamente a medida que la temperatura se eleva.
Los microorganismos presentan una T op en la cual la velocidad de crecimiento es
máxima debido a que:

• la velocidad las reacciones metabólicas y el transporte de nutrientes a

través de la membrana plasmática es máximo.

Un valor de temperatura por encima de T max produce la pérdida de la viabilidad de

los microorganismos debido a:

68
 • La desnaturalización de enzimas y proteínas esenciales.
• El colapso de la membrana citoplasmática
• Lisis térmica de la célula.

A pesar de la existencia de los psicrofilos, existe un límite de temperatura,

representado por T min, por debajo del cual es imposible la reproducción y el
crecimiento microbiano. Esto se produce por:

• Disminución de la fluidez de la membrana y el transporte de nutrientes

• Aumento de la viscosidad del citoplasma
• Enlentecimiento de las reacciones metabólicas.

La congelación evita el crecimiento microbiano pero no causa necesariamente la

muerte celular. A pesar que puede haber pérdida de viabilidad de algunas células,
esta puede ser utilizada como un método de conservación de microorganismos.

Para medir en la práctica la inactivación por calor de una suspensión bacteriana se

utilizan los siguientes parámetros:

Tiempo de reducción decimal (D): Para estudiar la influencia de la temperatura sobre

D, se grafica Log D en función de la temperatura; obteniéndose una recta en donde la
inversa de su pendiente (Z) es la variación de temperatura necesaria para reducir D
en una unidad logarítmica (10 veces).

Tasa de muerte térmica: Es la mínima temperatura necesaria para destruir una

suspensión microbiana en 10 minutos. Esta suspensión debe estar estandarizada y
los microorganismos deben encontrarse en la fase exponencial de crecimiento; en
general. Este parámetro variara con las diferentes especies de bacterias y
microorganismos:

E. coli 55 °C, Mycobacterium tuberculosis 60 °C, endosporas de Bacillus

120 °C

Tiempo de muerte térmica: Es el mínimo tiempo requerido para destruir una población
a una temperatura determinada. Este parámetro puede variar por varios factores:

✓ Tipo de material: normalmente los materiales ácidos (tomates, frutas)

requieren menos tiempo que los neutros (maíz)

69
 ✓ Azúcares, proteínas o grasas: A mayor concentración de estos compuestos
mayor será temperatura y/o el tiempo.
✓ Concentración de sales: puede obligar a aumentar o disminuir los valores de
tiempo y temperatura, dependiendo del tipo de microorganismos.

En el último caso, existen alimentos que poseen una vida de estante larga (como las
harinas, mermeladas, charqui) debido a su baja disponibilidad de agua (Aw)
producida por su alta concentración de osmolitos.

La determinación de D es un procedimiento muy preciso pero que requiere mucho

tiempo ya que se requiere realizar un recuento de las células viables. En cambio, la
determinación del tiempo de muerte térmica es un camino más corto pero menos
satisfactorio. Se lo puede terminar simplemente:

1. Calentando diferentes muestras de la suspensión bacteriana a diferentes

tiempos
2. Sembrándolas, en medios de cultivos adecuados, e incubarlas
3. Cuando todas las células han muerto, no se observara crecimiento en los
medios sembrados.

El tiempo de muerte térmica varía con el tamaño de la población bacteriana inicial,

necesitando de un mayor tiempo para matar todas las células. Es por esto que se
trabaja con inóculos que contienen un número estandarizado de células; lo que
también permite comparar la sensibilidad al calor de diferentes organismos a través
de su tiempo de muerte térmica.

Calor húmedo

En la esterilización por calor un factor importante es la humedad. Cuando los

microorganismos son sometidos a una dada temperatura en un ambiente húmedo, se
produce cambios protoplasmáticos irreversibles que llevan a la muerte celular
debido a la desnaturalización de las proteínas a través de un proceso de
coagulación de las mismas.
El agente esterilizante es el calor que se transmite por medio del vapor de agua; que
puede estar bajo presión o no, a través del proceso de condensación (modo de
acción); por ende, toda esterilización con vapor se basada en el contacto directo de
este con el material a esterilizar para que pueda transferirle su calor latente. Por ello
los aceites, grasas y polvos no debes esterilizarse por este método ya que el vapor
no alcanzara todas sus porciones, condensándose en las superficies expuestas y no
permeando hacia el interior.

I. Vapor bajo presión

El calor húmedo bajo la forma de vapor saturado de agua a presión es el método más
recomendable para la esterilización. El vapor saturado bajo presión proporciona
temperaturas superiores que las que se obtiene por ebullición, permea más
fácilmente las sustancias porosas y facilita la coagulación de las proteínas. El vapor
bajo presión es utilizado en:

• Autoclave: Además del autoclave de Chamberland, existen varios tipos de

autoclaves como ser horizontales, verticales, de gas, de vapor y hasta algunos
conectados a computadoras. Se basa en el principio que el agua calentada en un
recipiente cerrado, en donde el vapor queda retenido bajo presión, alcanza

70
 temperaturas elevadas sin hervir.
Como el agua tiene mayor coeficiente de transferencia de calor que el aire, el
proceso de purgado (eliminación de todo el aire) del autoclave es fundamental ya
que:
o Una mezcla de aire-vapor no alcanza, bajo ninguna presión, la
temperatura que se alcanzaría con vapor puro, comprometiendo la
eficacia de la esterilización.
o La acción esterilizante del vapor se debe a la facilidad con que se
condensa sobre la superficie fría de los objetos cediéndole su calor
latente. El aire dificulta esta condensación formando una película
protectora en torno al material, evitando la penetración del calor.
Es de uso corriente en laboratorios bacteriológicos y en hospitales para preparar
material aséptico de cirugía.
Se utiliza para esterilizar medios de cultivo y sustancias termoestables, productos
de algodón, material de vidrio, instrumental quirúrgico sin filo a 121 °C, 1 atmosfera
de sobrepresión, por 20 minutos.

• Uperizacion: Es un método de esterilización moderno utilizado especialmente en la

leche, el en cual se produce la destrucción total de los microrganismos, tanto las
formas vegetativas como esporuladas, sin modificar la composición, estructura o
caracteres organolépticos de la misma.
La leche, precalentada a 80 °C, circula por el aparato de uperizacion donde, por
medio de una inyección de vapor de alta temperatura, alcanza por 1-2 segundos
150 °C y 13 atmosferas de presión. Luego pasa a un recipiente de expansión
refrigerado; con una presión inferior a la atmosférica, en donde el vapor pierde
presión y la leche se pulveriza por el choque violento contra las paredes. Así, la
leche pierde el vapor de agua y es recogida por una bomba estéril e impulsada a
través de un cambiador tubular que termina de enfriarla antes de ser envasada en
botellas estériles.

II. Vapor fluente o a presión atmosférica

• Tindalización: Es un método de esterilización que se utiliza sobre todo en el

industria alimenticia; dado que para evitar las alteraciones en los caracteres
organolépticos de los alimentos, el tiempo y la temperatura de esterilización no
deben ser muy elevados, y en sustancias sensibles altas temperaturas bajo
presión pero que soportan los 100 °C.
Consiste en el calentamiento fraccionado del material por 3 días a 100 °C durante
30 -60 minutos con periodos de incubación (24 horas a 37°C) entre día y día:
o En el primer día, el calor eliminara las formas vegetativas y será el
responsable del shock térmico necesario para que, una vez puesto el
material a incubar, germinen las esporas.
o Al segundo día, el calor eliminara las células vegetativas que
germinaron de las esporas.
o El tercer día garantizara la eliminación completa de cualquier resto de
vida microbiana.

La acción prolongada del calor sobre las esporas las hincha, por osmosis, y las
hace sensibles a temperaturas de 100 °C. Si se disminuye la temperatura, se
necesitaran periodos de tiempo más prolongado; entre 5 a 6 horas de
calentamiento.

71
Existen métodos que no provocan una esterilización total, sino una parcial o una
disminución en la carga microbiana:

• Calentamiento a 100 °C: Reduce la carga microbiana al eliminar formas

vegetativas de bacterias patógenas pero no destruye las endosporas ni ciertos
virus; como el de la hepatitis.

• Pasteurización: Reduce la carga microbiana en alimentos y de la leche. La

temperatura seleccionada para la pasteurización está basada en el tiempo de
muerte térmica del microorganismo patógeno más resistente que debe ser
destruido en el proceso; en el caso de la leche el Mycobacterium tuberculosis (60
°C - 10 min). También se pueden emplear el tiempo de muerte térmica de otras
bacterias como ser Salmonella, Brucella, Streptococcus.
En la industria se utilizan dos procesos de pasteurización:
o LTLT (baja temperatura y largo tiempo) en donde se alcanza 62 °C por
30 minutos.
o HTST (altas temperaturas y corto tiempo) es el más usado, en donde
se alcanza 71 °C solo por 15 segundos.

Calor seco

En una atmosfera seca los microorganismos son más resistentes al calor y la muerte
ocurre a temperaturas más elevadas que las necesarias para que se produzca la
coagulación de las proteínas. El mecanismo de muerte celular consiste también en
una desnaturalización de las proteínas pero a través de un proceso de oxidación de
las mismas.

• Incineración y flameado: En ambos métodos se produce la incineración de los

microorganismos en forma vegetativa como esporulada.
La incineración es excelente para la destrucción rápida de gasas, ropa de cama,
material patógeno, etc. Para la destrucción de agujas se utilizan hornos piroliticos
a 1000 °C.
El flameado se utiliza para la esterilización de ansas, agujas de siembra, bocas de
tubos, etc. en el laboratorio. Se calienta, al rojo vivo en el caso de ansas y agujas,
directamente con la llama del mechero.

Bajo la forma de aire caliente, el calor seco calienta los objetos a esterilizar por medio
del proceso de conducción (modo de acción), en el cual el calor es absorbido por la
superficie externa de un objeto y calienta el interior. Debido a esto, penetra en los
materiales lentamente por lo que se requieren largos periodos de tiempo y altas
temperaturas para la esterilización (160-180 °C durante 2 horas) haciendo que los
microorganismos se deshidraten antes de que se coagulen sus proteínas; de ahí que
el mecanismo de muerte consista, principalmente en un proceso de oxidación o
incineración lenta.

• Esterilización con aire caliente: Debido a que el aire es un mal conductor del calor,
debe cuidarse que los materiales estén separados uno de otros para permitir la
libre circulación de aire entre ellos. La acción microbicida del calor seco está
influenciada por la naturaleza del líquido o sustancias que rodean al
microorganismo. En presencia de materia orgánica, como una capa de aceite o
grasa, el microorganismo está protegido de la acción del calor seco, de aquí la
importancia de una limpieza previa de los instrumentos.

72
 El esterilizador de aire caliente de uso corriente es el de convección por gravedad;
que permite un control exacto de la temperatura en el rango deseado. La velocidad
de circulación depende de la ventilación. Con este tipo de aparato, la temperatura
se alcanza lentamente.
Esterilizadores con aire comprimido o forzado; el aire caliente circula a gran
velocidad dentro de la cámara permitiendo una rápida transferencia del calor al
material, reduciendo el tiempo necesario para esterilizar (aproximadamente 12
min).
Se utiliza por medio de hornos para esterilizar material de vidrio, instrumental
quirúrgico con filo y objetos metálicos, aceites, polvos y grasas, jeringas (no
desgasta la superficie de las jeringas de vidrio ni estropea el filo), arena.

Se utiliza el calor seco únicamente en aquellos casos en donde es imposible

esterilizar por vapor bajo presión.
Filtración

La filtración es el pasaje de un líquido o gas a través de un material filtrante con poro

lo suficientemente pequeños como para retener los microorganismos.
Mediante este método no se busca provocar la pérdida de viabilidad de los
microorganismos sino retenerlos y eliminar su presencia de las sustancias a
esterilizar.
Se puede esterilizar soluciones y aire a partir del uso de filtros de membrana y
filtros de flujo laminar, respectivamente.

Filtro de membrana: Son membranas de porosidad uniforme compuestas por esteres

de celulosa o polímeros plásticos.
Presentan 1 mm de espesor y poros que van desde 0,22 a 0,45 µm generalmente;
diseñados en base al diámetro de la E. coli que es aproximadamente 0,5 µm.
También existen membranas con poros de 0,01 µm diseñados para retener virus e
incluso proteínas.

1) Las membranas y aparatos filtrantes

se esterilizan previamente en autoclave
2) El filtro de membrana se coloca en
un portafiltro.
3) En el momento de filtrar, se adapta el
dispositivo filtrante a un kitasato estéril,
en el cual se crea un vacío parcial. Si
este vacío, el líquido no sería capaz de
atravesar el filtro debido al pequeño
diámetro que presentan sus poros.

Las características de estos filtros son:

• Uniformidad en el tamaño de • Alta porosidad

sus poros • Alta velocidad de flujo

73
 • Retención absoluta en la • No hay retención de volúmenes
superficie significativos ni absorción de
• Resistencia térmica componentes de la solución.
• Bajo contenido de cenizas • Químicamente inertes
• Generalmente hidrofilicos.

Desde el punto de vista de la esterilización interesa la alta porosidad del filtro, su

estabilidad térmica y su inercia química.
Se utiliza en la esterilización de medios de cultivo y sustancias termolábiles como ser
soluciones de suelo, azucares, enzimas, vitaminas, vacunas, antibióticos, saliva.
También es un método importante para la purificación de agua potable.
Una vez terminada la filtración, las membranas pueden colocarse en un medio de
cultivo para realizar un recuento de colonias a posteriori que permitirá establecer la
efectividad del filtro.

Filtro o cabinas de flujo laminar: El sistema de flujo laminar consiste en el paso

unidireccional y en láminas de aire estéril, limpio, climatizado, sin turbulencias y de
temperatura, humedad y velocidad controlables. Está diseñado para dar seguridad al
producto pero no ofrece ninguna protección al operador.
Utiliza filtros de aire particulados de alta eficiencia (HEPA) que elimina 99.97% de los
microorganismos de un diámetro mayor de 0,3 µm.
El aire del ambiente se capta desde la parte superior de la cabina a través de un pre
filtro con el que se atrapa partículas más grandes y se prolonga la vida del filtro
principal.
Dentro de los flujos laminares se utilizan mecheros de alcohol y no eléctricos.

Las cabinas de seguridad biológica son cabinas proyectadas para ofrecer

protección al usuario, al producto y al ambiente de los riesgos asociados al manejo de
material infeccioso o peligrosos, incluyendo materiales radiactivos, tóxicos o
corrosivos.

Radiaciones

Es el fenómeno de propagación de la energía a través del espacio en forma de ondas

electromagnéticas o partículas subatómicas.

Por medio de esta ecuación se puede determinar la

cantidad de energía sujeta a una onda electromagnética
en función de su longitud de onda (λ); clasificándolas en:

• Radiación infrarroja (IR) de 106 • Rayos X 13 a 0,4 nm

a 800 nm. • Rayos γ 0,14 a 0.001 nm
• Radiación visible 380 a 800 nm • Rayos cósmicos < 0.001 nm
• Ultravioleta (UV) 380 a 13 nm

Salvo las radiaciones visibles, son rayos invisibles que emanan de fuentes naturales;
como el sol, o artificiales; como máquinas de rayos X, reactores nucleares,
aceleradores de partículas, Co60, Cs137 (utilizados en medicina).

La energía asociada a cada tipo de radiación dependerá de su λ y, según la cantidad

de cuantos absorbidos por el material, se las pueden clasificar en:

74
 ✓ Radiaciones ionizantes: Cuando el cuanto de energía absorbida es mayor a
10 eV.
o Rayos X
o Rayos cósmicos
o Emanaciones de materiales radiactivos (Co60, Cs137)
✓ Radiaciones no Ionizantes: Cuando el cuanto de energía absorbida es menor
a 10eV
o IR-Visible: Pueden resultar beneficiosas para algunos microrganismo
fotosintéticos, la cual utilizan como fuente de energía.
o UV: Usualmente letal

Radiaciones no ionizantes: UV

Son radiaciones de λ entre 250 a 260 nm. Las radiaciones UV provenientes del sol,
comparadas con las lámparas germicidas (250 nm), son menos letales para los
microorganismos ya que presentan λ un poco mayor.
La absorción de estas radiaciones, por las bacterias, se debe:

• Principalmente a los ácidos nucleicos; cuyas purinas y pirimidas absorben

intensamente a 260 nm.
• En menor proporción a las proteínas; en donde los anillos aromáticos del
triptófano, tirosina y fenilalanina absorben con mayor moderación a 280 nm.

Los rayos UV provocan cambios químicos y alteran dichas moléculas absorbentes,

generando compuestos que son llamados genéricamente fotoproductos, que
provocaran la inactivación de estas macromoleculas; como el ADN, ARN y proteínas.
El mecanismo molecular de muerte de las radiaciones UV se da principalmente por
lesiones irreversibles del ADN que bloquean su síntesis o producen su ruptura.
Los fotoproductos del ADN derivan principalmente de alteraciones en las bases
pirimidicas citosina y timina, como ser:

❖ Dímeros pirimidicos: La radiación UV provoca que las pirimidas adyacentes del

ADN experimenten una dimerización a través de la formación de enlaces
covalentes. Los restos de timinas adyacentes son especialmente susceptibles de
sufrir esta reacción y forman dímeros de timina. Estos dímeros bloquean la
replicación del ADN.
❖ Hidratación de la citosina: Letal para el microrganismo
❖ Formación de enlaces estables entre el ADN y moléculas de proteínas y otros
cambios de naturaleza desconocida.
❖ Fotoproducto de la endospora (5-timinil-5,6-dihidrotimina).

No todos los dímeros pirimidicos son letales ya que el daño en el ácido nucleico
puede ser reparado por mecanismos presentes en muchos tipos de células:

✓ Fotoreactivacion: En la cual la fotoliasa, una enzima activada por la luz, divide

al dímero restaurando los restos de timina originales.
✓ Reactivación oscura: Llevada a cabo por un sistema enzimático el cual:
o Por medio de una endonucleasa, se elimina el dinucleotido timina-
timina de la cadena hidrolizando los enlaces internucleatidos a ambos
lados del mismo pero a uno o dos bases de distancia.

75
 o La cadena se repara a través de la inserción enzimática de nucleótidos
complementarios a la banda inalterada, por medio de la ADN
polimerasa y la ligasa.

Se utiliza para esterilizar aire y superficies, salas de cirugía de hospital sin ángulos
muertos, salas de transferencia de cultivos y laboratorios de microbiología. Puede ser
aplicado unas cuantas horas antes o toda la noche antes del uso del ambiente.
Presenta un bajo poder penetrante, no atraviesa el vidrio, cartón u objetos opacos.
Para que actúe las radiaciones deber incidir de forma directa sobre el material a
esterilizar.
Son muy dañinas para los ojos y se debe evitar el contacto directo o por reflexión
desde superficies.

Radiaciones ionizantes

Son las radiaciones más poderosas ya que presentan longitudes de onda muy cortas
(menos de 200 nm).
El mecanismo de acción de las radiaciones puede ser por un:

 Efecto letal directo: Que produce daños al ADN que son, principalmente,
roturas o entrecruzamiento en ambas cadenas que no puedan repararse. Es
la acción que predomina en materiales secos.
 Efecto letal indirecto: Es el efecto más importante en donde la energía de las
radiaciones ioniza el agua (radiolisis) provocando la aparición de radicales
hidroxilo (OH·) e hidrógeno naciente (H·).
El OH· Es un oxidante fuerte y el H· un reductor poderoso. Ambos
reaccionaran química y rápidamente con los constituyentes celulares
inactivándolos. Si bien todos se ven afectados, el daño al ADN es el más
importante.
 Efecto mutagénico: Son daños menores al ADN que pueden repararse por
mecanismos propensos a error.

La dosis de exposición es la cantidad de radiación a la cual se somete un material y

se miden en roentgen (R= 83 erg/gr de aire).
La dosis de absorción es la fracción de la dosis de exposición que realmente es
absorbida por el sistema biológico y se mide en Rad (1 rad=100 erg/gr de aire), en
Mrad (1 Mrad=1000000 de rad) o Gray (1 Gy= 100 rads).
La sensibilidad humana a las radiaciones es mucho mayor comparada con la de los
procariotas:

 Dosis letal humana: 10 Gy

 Dosis letal células vegetativas de Deinococcus radiodurans: 2200 Gy
 Dosis letal endosporas de Clostrydium: 2000-3000 Gy

A diferencia de las radiaciones UV, las ionizantes penetran fácilmente a través del
vidrio y otros materiales y se utilizan para la esterilización de drogas, alimentos,
material descartable, material empaquetado, etc.
Pero debido a ese gran poder de penetración, debe tenerse estrictas precauciones en
el uso y manejo de las mismas ya que son altamente letales.

Agentes químicos

76
Los agentes químicos pueden matar o inhibir el crecimiento de los microorganismos y
actuar como antisépticos, desinfectantes y/o esterilizantes.
Su acción y efecto sobre las células variara en función de la concentración del agente
y del tiempo de exposición, pudiendo ser:

 Bacteriostático: Inhibe desarrollo y reproducción de las bacterias al inhibir la

síntesis proteica al unirse reversiblemente a los ribosomas. Así, si se elimina
el agente el crecimiento puede reanudarse.
 Bactericida: Produce la muerte o la incapacidad de reproducción de las
bacterias.
 Bacteriolítico: Produce tanto la muerte bacteriana como la lisis celular.

Desinfectantes: Son agentes antimicrobianos de acción inespecífica que se emplean

solamente sobre objetos inanimados o medios inertes debido a que son tóxicos
celulares protoplasmáticos con capacidad para destruir la materia viva. Ej.: Cloro y
compuestos clorados, compuestos Fenólicos, aldehídos, óxido de etileno, plasma de
H2O2 más ácido peracético y O3.

Antisépticos: Son agentes de acción inespecífica de uso preferentemente superficial

que pueden destruir o inhibir el desarrollo de microorganismos presentes en la piel,
mucosas y heridas. Su objetivo esencial consiste en prevenir la multiplicación de
microorganismos patógenos sin alterar el ecosistema. Ej.: Alcoholes, yodo, agentes
catiónicos y aniónicos, órganos Mercuriales, H2O2 y colorantes.

Bacteriocinas: Son sustancia de naturaleza proteica, producidos por bacterias que

inhiben el desarrollo de otros microrganismos. Ej.: colicina producida por la E. coli.

Agentes quimioterápicos: Son sustancias que se utilizan para el control de

enfermedades infecciosas cuyo requerimiento clave es su toxicidad selectiva. Ej.:
droga sulfa.

Antibióticos: Son agentes quimiterapicos producidos por algún microrganismo o por

síntesis química en donde también es importante su toxicidad selectiva, es decir que
actúen sobre el organismo patógeno (generalmente procariota) y no sobre el
hospedador (eucariota).

Los mecanismos de acción de los antisépticos y desinfectantes son complejos y

pueden comprometer varias funciones en forma simultánea o secuencial.
Considerando la zona de impacto primaria, se los puede clasificar:

1) Agentes que dañan la integridad de la membrana y pared celular alterando

el orden de los lipidos y proteínas lo que interfiere en los procesos de
transporte y del metabolismo energetico o provocando la salida de pequeñas
moleculas del citoplasma.
2) Agentes desnaturalizantes de proteínas y modificadores de grupos
funcionales presentes en los centro activos de enzimas
3) Agentes que afectan el acido nucleico.

Condiciones ideales de los antisepticos y desinfectantes

• Elevada actividad antimicrobiana aun estando diluido o en presencia de

materia organica.

77
 • Amplio espectro de acción: Gram (+) y (-), BAAR (Mycobacterium), virus y
hongos.
• Ser microbicida antes que microbiostatico y producir la muerte de los
microorganismos en un tiempo no superior a 15 minutos.
• Ser estables varios meses en preparaciones comerciales y permanecer activo.
• Poseer homogeneización uniforme en el diluyente.
• Compatibilidad con otros productos de uso simultáneo o anterior.
• Propiedades organolépticas no desagradables
• No perder la actividad por la temperatura o el pH.
• Ser biodegradables
• Poseer sustantividad (acción residual del agente químico).
• Costo moderado
• No ser toxico para los tejidos (en el caso de antisépticos).
• Actividad preferente en soluciones acuosas y baja tensión superficial para
facilitar la penetración en pus, exudados, sangre (en el caso de antisépticos).
• No corrosivo para madera, metales o superficies pintadas (en el caso de
desinfectantes)

Los agentes químicos antimicrobianos también pueden ser empleados como agentes
esterilizantes, mediante procedimiento que se conocen comúnmente como
esterilización en frio. Esta tiene un amplio uso en situaciones donde es imposible
emplear el calor como agente esterilizante. Ej.: Para esterilizar termómetros,
instrumentos de cirugía o de cristal, tubos y catéteres de polietileno, equipamiento de
anestesia e inhalación
La esterilización en frio es llevada a cabo en dispositivos cerrados herméticamente,
similares al autoclave, pero que emplean agentes químicos en estado gaseoso tales
como:

Óxido de etileno: Es un gas incoloro a presión y temperaturas normales. Puede

utilizarse en estado gaseoso o líquido (a temperaturas inferiores a 10,7°C) en una
concentración final entre 0,5 y 1%.Es un agente alquilante.
El anillo inestable del óxido de etileno se abre en presencia de átomos de hidrogeno
lábiles presentes en las moléculas orgánicas de las células. Estos se unirán al
oxigeno formando el radical hidroxietileno (-CH2-CH2-OH) que luego se fijara a la
molécula orgánica en el sitio que dejo vacante dicho átomo de hidrogeno. De esta
forman, el radical hidroxietileno bloquea los grupos reactivos de las enzimas
microbianas, produciendo una inhibición y muerte celular. Esta reacción es
irreversible, lo que explica sus propiedades germicidas.
Es un compuesto químicamente inestables (descomponiéndose en solución acuosa
dando etilenglicol, responsable de sus efectos no deseables), explosivo y toxico para
los humanos. Para disminuir el riesgo de combustión, se emplea mezclado con CO2.

Plasma de peróxido de hidrogeno (H2O2): El plasma es el cuarto estado de la materia,

el cual consiste en una nube de particular cargadas positiva y negativamente justo a
partículas atómicas neutras y otras especies moleculares.
El H2O2 líquido es el mejor precursor para la formación de plasma para la
esterilización. Una solución al 58% es vaporizada en el interior de una cámara
hermética y por medio de inducción de radiofrecuencias se generan campos
eléctricos que provocan la aceleración de electrones y otras partículas que
colisionaran entre sí. Estas colisiones inician reacciones que producirán radicales
libres como hidroxilos, hidroperoxidrilos, peróxidos activados, UV y otras especies

78
activas.
Los radicales libres y otras especies presentes en el plasma interactúan con la
membrana celular, enzimas y ácidos nucleicos, provocando la anulación de las
funciones vitales del microorganismo y su muerte.
Se utiliza para esterilizar instrumentos quirúrgicos con lumen especial utilizados en
procedimientos urológicos, laparoscópicos y artroscópicos pero presenta limitaciones
como respecto a materiales celulósicos y de nylon; como cables, conectores,
insufladores, ya que absorben demasiado el H2O2 o material de cobre y níquel que lo
descomponen catalíticamente.

Ozono (O3): Actúa destruyendo, neutralizando o inhibiendo el crecimiento de

microorganismos patógenos. Se disipa rápidamente y posee intensa actividad biosida
sobre células vegetativas y esporos bacterianos actuando por degradación oxidativa.
Se lo utiliza en tratamientos y obtención de agua potable con el objetivo de minimizar
la ingesta de sustancias extrañas que se forman durante el transcurso de otros
procesos de desinfección como la cloración; como ser los trihalometanos que poseen
actividad genotoxica.
El O3 no posee toxicidad y puede eliminar olores, sabores y colores extraños en el
agua y evita la formación de trihalometanos.
Su aplicación durante 6 minutos (a una concentración de 0,35 y 0,70 mg/L) provoca la
muerte de:

• E. coli • Pseudomona aeruginosa

• Vibrio cholerae • Aeromonas hydrophila
• Salmonella typhi • Listeria monocitogenes
• Yersinia enterocolitica • Staphylococcus aureus.
Su aplicación durante 8 minutos produce la destrucción total de esporos de Bacillus
subtilis y del genero Clostridium.
Se lo obtiene a través de descargar eléctricas sobre aire comprimido, previamente
desecado, en un equipo generador de ozono.

Factores que afectan la potencia de un desinfectante

I. Concentración y tiempo de exposición

La concentración requerida para un determinado efecto dependerá:

➢ Del agente químico en si

➢ Del tipo de microrganismo a eliminar
➢ Del método de ensayo del efecto

Los fenoles poseen un n= 5 o 6, por ende pequeñas variaciones en C provocan

grandes cambios en t para poder generar un mismo efecto en la población microbiana
(para mantener constante K).

79
Los hipocloritos poseen n=1, por ende pequeños cambios en C no provocan grandes
cambios en t.

II. El pH

Afecta tanto a la carga superficial neta de la bacteria como al grado de ionización del
agente. Las formas no ionizadas atraviesan mejor las membranas biológicas y por lo
tanto son más efectivas.

III. Temperatura

Normalmente, al aumentar la temperatura aumenta la potencia de los desinfectantes.

Al aumentar 10 °C, se duplica la potencia del agente, salvo en el caso del fenol en el
cual la potencia se quintuplica.

IV. Presencia de materia orgánica (sangre, pus, suero)

Disminuye la potencia de los desinfectantes del tipo oxidante; como hipocloritos, y

desnaturalizantes de proteínas ya que al ser de acción inespecífica reaccionan con
cualquier elemento proteico, disminuyendo la concentración de agente libre hasta el
punto de hacerse inactivos. Por ende, es importante en todos los procesos
antisépticos y de desinfección limpiar bien la zona o el material con jabón, para
reducir la cantidad de materia extraña.

V. Naturaleza del microorganismo y otros factores asociados a la población

microbiana

Evaluación de la potencia de un desinfectante

Existen dos métodos para evaluar la potencia de un desinfectante:

1. Comparando la potencia del compuesto a ensayar con un desinfectante

estándar; el fenol, y calculado el coeficiente fenólico (CF):

La determinacion del CF se utiliza en todo el mundo y es parte de la evaluacion

de todos los desinfectantes. La FDA (Administración de Alimentos y
Medicamentos) emplea un test oficial para desinfectantes en condiciones
normalizadas, usando cepas bacterianas; cuya susceptibilidad al fenol se conoce
exactamente, como ser: Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa.
2. Mediante la determinacion de un concentración equivalente:
Consiste en determina la concentración del desinfectante a ensayar que presente
el mismo efecto que tiene una dada concentración de un desinfectante estándar
sobre una bacteria de referencia.
Tambien es importante determinar la toxicidad por medio del indice de
toxicidad:

80
Clasificación de los desinfectantes según nivel de actividad

Alto (producen Intermedio Bajo(microrganismos

estirilidad) (sobreviven viables)
esporas)
Esporas bacterianas + - -
Micobacterias + + -
Virus pequeños sin + + -
lipidos
Hongos + + -
Bacterias vegetativas + + +
Virus medianos con + + +
lipidos

Los agentes desinfectantes con un nivel de actividad alto eliminan toda forma de vida.
Los agentes desinfectantes con un nivel de activdad intermedio eliminan toda forma
de vida salvo los esporos bacterianos, habiendo una sobrevida de estas.
Los agentes desinfectantes con un nivel de actividad bajo solamente eliminan las
formas vegetativas y virus medianos.

Conservadores empleados en la industria alimentaria

Conservante Usos
Acido propionico Agente antifungico en panes, torta
Acido sorbico Agente antifungico quesos
Acido benzoico Agente antifungico margarina, cidra
Diacetato de sodio Agente antifungico en panes
Acido lactico Agente antifungico en queso, amteca
SO2, sulfitos Agente antimicrobiano en frutas desecadas y vino
Nitrito de sodio Agente antimicrobiano en embutidos
NaCl Previene el deterioro microbiano en carnes vacunas y
pescado
Azucar Previene el deterioro microbiano en mermeladas y jaleas
Ahumado Previene el deterioro microbiano en carnes vacunas y
pescado

81
Antibiosis

Los agentes químicos antimicrobianos son compuesto químicos de origen natural o

sintéticos que pueden provocar la muerte o pérdida de la viabilidad de
microrganismos o solamente inhibir su crecimiento. Según su efecto contra diversos
microrganismos se denomina:

Para que un antimicrobiano pueda ser considerado un quimioterapico debe:

• Poder ser utilizado en el tratamiento de enfermedades infecciosas.

• Debe ser perjudicial para el microorganismo parásito pero inofensivo para el
huésped; es decir poseer toxicidad selectiva.

Cronología de quimioterapéuticos

Los primeros quimioterapicos que surgieron son los de síntesis química.

➢ 1909: Ehrlich descubre que el salvarsán (derivado arsenical) es efectivo contra la

sífilis y concibe la idea de usar compuestos químicos de síntesis como "balas
mágicas" selectivas hacia los microorganismos acuñando el término
‘’quimioterapia’’.
➢ 1929: Fleming descubre la penicilina, el primer antibiótico natural, pero fracasa en
su intento de purificarlo.
➢ 1935: Siguiendo los pasos de Ehrlich, se descubre la acción del rojo de prontosilo
(la primera sulfamida) sobre el neumococo y otros estreptococos in vivo; cuyo
farmacoforo resultaría ser la p-aminobenceno sulfanilamida.
➢ 1939: Chain y Florey extraen y purifican la penicilina lo cual ayudo a controlar las
enfermedades infeccionas durante la 2da Guerra Mundial.
➢ 1940: Woods descubre el mecanismo de acción de las sulfamidas.
➢ 1944: Waksman descubre la estreptomicina y comienza la época dorada de los
antibióticos descubriéndose docenas de nuevos quimioterapicos naturales
procedentes de actinobacterias y hongos.

Los agentes quimioterapicos pueden ser:

 Sintéticos: Sustancias producidas de manera sintética capaces de inhibir el

crecimiento o matar los microorganismos. No son sinónimos de antibióticos
(ATB).
 Naturales: Sustancias sintetizadas por microorganismos; bacterias u hongos,
que inhiben o matan a otros microorganismos. Son sinónimos de
antibióticos (ATB).

Para que un agente quimioterápico sea efectivo:

82
 • Debe tener toxicidad selectiva: Solo debe destruir o prevenir la actividad del
microorganismo sin dañar las células del individuo.
• Debe ser capaz de entrar en contacto con el microorganismo penetrando
células y tejidos a concentraciones efectivas.
• No debe alterar los mecanismos de defensa naturales del individuo.

Quimioterapicos sintéticos

Estos compuestos pueden actuar como:

 Antimetabolitos
 Análogos estructurales de factores de crecimiento, la mayoría
 Inhibidores competitivos de enzimas

Sulfamidas y Trimetoprima

El ácido p-aminobenzoico (PABA) es un metabolito esencial para la biosíntesis de

nucleótidos de timidina y de ácidos nucleicos.
La dihidropteroato sintasa cataliza la reacción de condensación entre el PABA y la
pteridina para formar ácido dihidropteroico el cual se conjugara con ácido
glutámico para originar ácido dihidrofolico (DHF).
El DHF, por acción de una dihidrofolato reductasa y en presencia de NADPH + H+
(reducido), se reduce a ácido tetrahidrofolico (THF).
El THF, por acción de una serina-hidroximetil transferasa, adquiere un grupo
metileno (-CH2) transformándose en N5, N10-metilen-THF.
En presencia de la timidilato sintasa, el N5, N10-metilen-THF transferirá el grupo metilo
y un e- al desoxiuridina monofosfato (dUMP) transformándose en desoxitimidina
monofosfato (dTMP) que, por acción de una kinasa, se transformara en
desoxitimidina trifosfato (dTTP), esencial para la síntesis del ácidos nucleicos.
El THF se oxida a DHF, que volverá a ser reducido para comenzar otro ciclo.

Las sulfamidas actúan como un análogo estructural del PABA e inhiben, por
competencia, la acción de la dihidropteroato sintasa (enzima bacteriana no presente
en humanos) bloqueando la formación de ácido dihidropterocio y por ende la síntesis
de DHF y THF.
La trimetoprima también actúa en la vía del THF pero inhibe competitivamente la
83
 dihidrofolato reductasa, inhibiendo así la síntesis de THF y de nucleótidos.
De esta forma, las bacterias no pueden sintetizar los ácidos nucleicos que necesitan
para su crecimiento, por lo cual este queda interrumpido.

La isoniazida es un análogo estructural de las vitaminas nicotinamida y piridoxal.

Tiene efecto bactericida, incluso a bajas concentraciones, y se la utiliza contra
especies patógenas de Mycobacterium y bacterias ácido-alcohol resistentes (AAR)
como Nocardia y Corynebacterium.
Ejerce varios efectos probablemente debido a mecanismos que se encuentran
relacionados entre sí:

 Interfiere con la biosíntesis de la pared celular de las bacterias AAR,

específicamente con la biosíntesis del ácido micólico.
 Actúa como antimetabolito de nicotinamida y piridoxal.
 Activación de la NAD-asa, lo que conduce a reducir el "pool" de nicotinamida
adenina dinucleotido (NAD)

El etambutol es un bacteriostático que detiene la proliferación de casi todos los

bacilos de tuberculosis resistentes a isoniazida y estreptomicina.

Antibióticos

Son agentes antimicrobianos producidos por microorganismos (bacterias y hongos) o

una sustancia similar elaborada de forma parcial o total por síntesis química, cuya
única función consiste en inhibir o matar otros microorganismos interfiriendo con los
procesos biológicos de estos últimos; actuando siempre a bajas concentraciones
(µg/mL).
Son moléculas de bajo peso molecular y de naturaleza diversa, producidas como
metabolitos secundarios.
Para que un ATB sea efectivo debe:

• Penetrar
• Encontrar y unirse al receptor para modificarlo,
• No ser modificado o inactivado durante el contacto.

Los microorganismos productores de antibióticos pueden ser:

 Bacterias: Como el género Bacillus y Streptomyces (se encuentra dentro del

grupo de las Actinobacterias), entre otros.
 Hongos: Como el género Penicillium y Aspergillus, entre otros.

Clasificación

I. Según su espectro de actividad:

• Amplio: Actúan sobre un gran número de microorganismos.
Ej.: Tetraciclinas contra Gram (+), (-), ricketsias y clamidias.
• Reducido: Actúan sobre un grupo restringido de microorganismos.
Ej.: Ciclohexamida (levaduras), polienos o polioxinas (contra hongos).
Análogos nucleosidicos e inhibidores de transcriptasa o proteasas
(especialmente en virus ARN).

84
 La penicilina se caracteriza por actuar sobre bacterias Gram (+) pero existe un gran
número de derivados semisinteticos de este ATB que pueden actuar sobre Gram (-) y
bacterias parasitas como clamidias; ampliando el espectro.

II. Según su estructura química:

Son sustancias de estructura química muy diversa y no existe un patrón estructural

• β lactámicos: Penicilina o Cefalosporina

• Aminósidos u oligosacáridos: Gentamicina, Estreptomicina, Kanamicina,
Neomicina
• Quinonas y compuestos relacionados: Tetraciclinas como Aureomicina o
Terramicina
• Compuestos aromáticos: Cloranfenicol o Thianfenicol
• Macrólidos: Eritromicina, Espiramicina, Oleandomicina, Lincomicina
• Rifamicinas: Rifamicina SV, Rifampicina.
• Polipeptídicos: Polimixina, Bacitracina.

III. Según el modo de acción:

• Bacteriostáticos: Inhiben el crecimiento pero no producen muerte de los
microorganismos, por ende, si se elimina el ATB el crecimiento puede
reanudarse.
Ej.: El cloranfenicol y la eritromicina se unen de forma reversible a los
ribosomas produciendo una inhibición en la síntesis proteica.
• Bactericidas: Impiden el crecimiento y producen la muerte de los
microorganismos pero no lisis celular. Ej.: La estreptomicina y la neomicima
producirán una inhibición en la síntesis proteica pero se unirán
irreversiblemente a los ribosomas.
Ciertos ATB que interfieren específicamente con la estructura y función normal
del ADN también actúan como bactericidas; pero no han demostrado una
toxicidad selectiva aceptable para su uso clínico.
• Bacteriolíticos: Producen la muerte de los microorganismos y lisis celular
manifestándose en una disminución del número de células viables y de
células totales, respectivamente. Ej.: ATB que impiden la síntesis de la pared
celular (penicilina, cefalosporina) o que actúan sobre la membrana celular
alterando su permeabilidad (polimixina, nistatina).

Pasos para determinar el modo de acción de un ATB:

1. Se incuba un microorganismo sensible al ATB en un medio de cultivo líquido

adecuado hasta que este alcance la fase exponencial de crecimiento.
2. Se le adiciona al medio una concentración determinada de ATB y, durante
toda la experiencia, se determina el número de células viables; calculando el
UFC/ml, por el método de las diluciones sucesivas y la masa celular del
cultivo; determinando la absorbancia por medio de métodos turbidimetricos.
3. Se confecciona una gráfica del Log. UFC/ml y la Absorbancia en función del
tiempo.

En los bacteriostáticos ambas curvas son idénticas ya que, al detenerse el

crecimiento, UFC/ml se volverá constate. De este mismo modo, y al no haber lisis
celular, la Absorbancia también se mantendrá constante.
En los bactericidas, la curva de UFC/ml desciende debido al efecto bactericida del

85
ATB. Sin embargo, como no se produce lisis celular, la Absorbancia se mantiene
constante.
En los bacteriolíticos, ambas curvas descienden debido a que se produce perdida de
viabilidad y lisis celular.

Mecanismo de acción de los ATB

Los ATB actúan selectivamente sobre un proceso biológico o estructura celular:

A. Inhibición de la síntesis de la pared celular

B. Alteración de la funcionalidad de la membrana plasmática
C. Inhibición de la síntesis o función de los ácidos nucleicos
D. Inhibición de la síntesis de proteínas

A. Inhibición de la síntesis de pared celular

I. A nivel de la fase citoplasmática:

Fosfomicina: Es un análogo del PEP, la cual se une al sitio activo de la transferasa,

inhibiendo la transformación de UDP-NAG a UDP-NAM.
Ciclocerina: Inhibe la acción de la rasemasa y la sintetasa lo cual impide la
conversión de
L-alanina en D-alanina y la formación del dimero de D-alanina que se une a la cadena
tripeptidica del UDP-NAM.

II. A nivel de la fase de membrana plasmática:

Vancomicina: Inhibe, por impedimento estérico, al unirse fuertemente al dímero D-

alanina terminal del nucleótido de Parck, la transglucosilacion entre el UDP-NAG y el
NAM contenido en dicho nucleótido; el cual ya se haya unido al Lip-P en la cara
citoplasmática de la membrana plasmática,
De esta forma, inhibe la síntesis de unidades disacaridas-pentapeptidicas de PG.
Bacitracina: Impide la acción de la fosfatasa sobre la forma pirofosforilada del
bactoprenol (Lip-P), impidiendo que retorne a la célula e inhibiendo el transporte de
unidades de PG hacia el exterior celular.

Tanto la fosfomicina, ciclocerina y vancomicina son sintetizadas por el género

Streptomyces. La bacitracina por el género Bacillus.

86
 III. A nivel de la fase extracelular:

Penicilina y derivados (cefalosporina): Inhiben el proceso de transpeptidacion al

unirse e inactivar las transpeptidasas que catalizan la hidrolisis del dímero D-alanina
terminal necesaria para la generación de energía para dicho proceso. La pared se
seguirá formando pero estará debilitada debido a la inexistencia de los enlaces
transversales entre las unidades del PG.
Estas transpeptidasas se denominan proteínas de unión a la penicilina (PBP). El
complejo antibiótico-PBP estimula la liberación de autolisinas que empezaran a
digerir la pared celular existente. El resultado final es una pared celular tan debilitada
y degradada que las diferencias de presión osmótica entre el interior y exterior de la
célula provocan la lisis.

La primera penicilina (penicilina G) presentaba un espectro reducido y solo actuaba

sobre Gram (+), siendo resistentes las Gram (-). A partir de este descubrimiento, el
hombre estudio y modifico la estructura química de la penicilina para generar
compuestos de espectros de acción más amplios o que puedan ser administrados por
diferentes vías.
Dichas modificaciones químicas solo afectaron al grupo acilo presente en el ácido 6-
amino penicilanico. Ej.:
Ampicilina: de amplio espectro de acción siendo efectiva también contra Gram (-).
Penicilina V: Penicilina natural que puede administrarse por vía oral.

Todos los ATB que actúan a nivel de la pared celular solo serán efectivos contra
bacterias que se encuentran creciendo y multiplicando activamente.
En el caso de las penicilinas, como la célula debe elongarse para poder dividirse,
necesitara degradar y resintetizar porciones de pared celular en diversos sitios. Estas
acciones serán mediadas por las autolisinas y transpeptidasas, las cuales son los
blancos de acción del ATB.
Algunas penicilinas también podrán actuar y bloquear la actividad de ciertas proteínas
que conforman el divisoma; como la Fts-I. De este modo evitan la formación del septo
transversal durante la fisión binaria.

87
B. Alteración de la funcionalidad de la membrana plasmática

Los ATB con este mecanismo de acción no necesita que la célula este en crecimiento
o multiplicándose para ser eficaces.

Antibióticos para Procariotas Antibióticos para Eucariotas

Son de naturaleza polipeptidica, por lo Es un compuesto polienociclico,
general. Ej.: polimixina B. generalmente. Ej.: Anfotericina b,
Nistatina.
Sintetizada por una cepa del genero Presenta una cadena rígida hidroxilada y
Bacillus pero no a nivel ribosoma ya que una cadena muy flexible con dobles
contiene aminoácidos raros (distintos a enlaces conjugados
los 21 aminoácidos comunes)
Presenta un cola hidrofóbica que se Las membranas de las eucariotas
inserta entre los fosfolípidos de presentan esteroles, principalmente
membrana produciendo orificios que ergosterol en los hongos. Diez
alteran su permeabilidad, y con ella, su moléculas de anfotericina B se unen al
selectividad (se produce el ingreso y ergosterol y forman un canal que
salida de compuestos indiferentemente) altera la permeabilidad de la
y la lisis celular membrana.

El ketoconazol es un derivado
imidazolico que actúa inhibiendo la
síntesis de colesterol.

C. Inhibición de síntesis o función de los ácidos nucleicos

I. A nivel de la síntesis de ADN procariota

Trimetroprima: Si bien no es un antibiótico, bloquea la síntesis de THF, al inhibir la

actividad de la DHF reductasa, el cual es un precursor de nucleótidos.
Mitomicina C: Forma enlaces transversales entre 2 guaninas del ADN haciendo que
las bandas no se puedan separar ni replicar. Presenta actividad bactericida.
Quinilonas: Actúan a nivel de la ADN girasa bacteriana, enzima encargada de cortas
los puentes hidrógenos que existen entre las bases complementarias de dos hebras
de ADN para desenrollarlas y permitir la replicación.
Esta enzima presenta dos subunidades: A y B.
Las Quinolonas de 1° y 2° generación; como el Ácido Nalidixico y Norfloxacina,
actúan sobre la subunidad A una vez que se haya formado el complejo enzima-ADN.
Se producirá el corte en el ADN pero no la reparación de las bandas ya que el
acercamiento y acción de la ligasa se verá impedido estéricamente.
La Novobiocina se une a la subunidad B alterando su conformación. Esto inhibe la
acción ATPasa intrínseca de la subunidad B la cual subministraba la energía
necesaria para varias de sus reacciones enzimáticas.

II. A nivel de la síntesis de ADN eucariota

Flucitosina: Los hongos poseen una enzima que desamina el antibiótico formado
5-Fluoruracilo o 5-Fluordesoxiuridilico, los cuales son análogos de la desoxiuridina
monofostato (dUMP) e inhibidores de la timidilato sintetasa, bloqueando la síntesis de

88
timidina monofosfato (TMP).
Nitroimidazoles: Efectivos contra parásitos y microorganismos anaerobios que
presentan enzimas que actúan a muy bajo potencial redox. Estas logran reducir el
grupo nitro del ATB generando radicales muy inestables y fuertemente oxidantes que
desestabilizan y dañan la estructura del ADN impidiendo su síntesis.

III. A nivel de síntesis de RNA

Actinomicinas: Afectan la estructura del ADN patrón intercalándose entre las bases
citosina y guanina. De esta forma la ARN polimerasa será incapaz de transcribir
desde la hebra de ADN patrón, inhibiéndose la síntesis de ARNm. Son sintetizadas
por los Actinomycetes.
Rifampicina: Actúa sobre la ARN polimerasa pero solo cuando la enzima se
encuentra libre. Se une a la subunidad β alterando su conformación e impide la unión
de la proteína al promotor; de esta forma bloquea el inicio de la transcripción.
Estreptolidigina: Actúa sobre la ARN polimerasa sin importar si se encuentra libre o
unida al ADN. También se unirá a la subunidad β, alterando la conformación de la
enzima, y bloqueando la iniciación o una transcripción en marcha.

D. Inhibición de la síntesis de proteínas

La síntesis proteica tiene lugar en los ribosomas, en donde su cantidad está

directamente relacionada con la tasa de crecimiento.
En procariotas, los ribosomas están formados por subunidades formadas por ARNr
específicos y proteínas ribosómicas:

• Subunidad menor 30s: Contiene ARNr 16s y 21 proteínas

• Subunidad mayor 50s: Contiene ARNr 5s y 23s y 31 proteínas

La ‘’s’’ se refiere a las unidades Svedberg del coeficientes de sedimentación de las

respectivas moléculas cuando son sometidas a una fuerza centrífuga. Las partículas
más grandes poseen valores mayores pero la relación no es lineal y estos no se
sumar, es por eso que los ribosomas bacterianos presentan un coeficiente de
sedimentación de 70s.
Aunque la síntesis proteica es un proceso continuo, se puede dividir en etapas:

La iniciación consiste en el ensamblaje de los componentes del sistema de

traducción, es decir:

▪ Las dos subunidades ribosomales

▪ El ARNm
▪ El primer aminoacil-ARNt; el cual en el caso de las bacterias es siempre
formilmetionina-ARNt (fmet-ARNt)
▪ GTP; como fuente de energía
▪ Factores de iniciación

El ribosoma consta de tres sitios localizados principalmente en la subunidad 50S:

✓ El sitio A: Es el punto de entrada para el aminoacil-ARNt; excepto para el

primer aminoacil-ARNt, el fmet-ARNt, que entra en el sitio P.
✓ El sitio P: Es donde se "aloja" el peptidil-ARNt
✓ El sitio E: Es el sitio de salida del ARNt una vez descargado tras ofrecer su
aminoácido a la cadena peptídica en crecimiento.

89
La iniciación tiene lugar en la subunidad ribosómica 30S libre en donde:

❖ El ARNr 16s reconoce el sitio de acoplamiento ribosómico del ARNm

denominado como la secuencia Shine-Dalgarno (5-10 bases por delante
del codón de iniciación AUG) que solo se encuentra presente en procariotas.
Esto ayuda a posicionar correctamente el ribosoma sobre el ARNm para que,
posteriormente el sitio P, se haya directamente sobre el codón de iniciación.
❖ El factor de iniciación (IF-2), con actividad GTPasa, se asocia con el fmet-
ARNt y le ayuda a acoplarse con la subunidad ribosómica pequeña.
❖ El IF-3 ayudara a posicionar el fmet-ARNt en el sitio P, de manera que el
fmet-ARNt interactúa por complementariedad de bases con el codón de
iniciación del ARNm.

Simultáneamente el IF-1 bloquea el sitio A para asegurar que el fMet-ARNt sólo se

puede acoplar al sitio P y que ningún otro aminoacil-ARNt puede acoplarse al sitio A
durante la iniciación; y IF-3 bloquea el sitio E y evita que las dos subunidades se
asocien.
La iniciación termina cuando la subunidad ribosómica grande se une al sistema
provocando el desacoplamiento de los factores de iniciación.

La elongación de la cadena polipeptídica consiste en la adición de aminoácidos al

extremo carboxilo de la cadena.
El sitio A (el sitio aceptor) es el sitio en donde se une los nuevos ARNt cargado. El
viaje y la unión de un ARNt al sitio A son facilitados por el factor de elongación Tu
(EF-Tu), una pequeña GTPasa.
El sitio P (el sitio del péptido) es el lugar en que un ARNt sujeta a la cadena
polipeptídica en crecimiento.
El polipéptido creciente, que está conectado al ARNt en el sitio P, se desacopla del
ARNt y forma un enlace peptídico entre el último de los aminoácidos del polipéptido y
el aminoácido que está acoplado al ARNt en el sitio A. Así, en el sitio A quedara
anclado al ARNt el péptido en crecimiento mientras que el sitio P habrá un ARNt
descargado (sin aminoácido).
Este proceso, llamado transpeptidacion, está catalizado por una ribozima,
la peptidil-transferasa, una actividad intrínseca al ARNr 23s de la unidad ribosómica
50s y varios EF.
En la fase final de la elongación, en el proceso de translocación, el ribosoma se
mueve 3 nucleótidos hacia el extremo 3' del ARNm. Como los ARNt están enlazados
al ARNm mediante la apareamiento de bases codón-anticodón, los ARNt se mueven
respecto al ribosoma desplazando el polipéptido naciente del sitio A al sitio P y
moviendo el ARNt descargado al sitio E de salida. Este proceso está catalizado por
EF-G gastando GTP; siendo en realidad el ribosoma el que se mueve a lo largo del
ARNm.
La elongación continúa hasta que el ribosoma alcanza un codón de terminación en el
ARNm (UAA, UGA o UAG).
La terminación ocurre cuando uno de los tres codones de terminación entra en el sitio
A. Estos codones no son reconocidos por ningún ARNt. En cambio, son reconocidos
por unas proteínas llamadas factores de liberación que disparan la hidrólisis del
enlace éster de la peptidil-ARNT y la liberación del ribosoma de la proteína recién
sintetizada.

90
A nivel de subunidad 30s

Los ATB que actúan a este nivel provocan un efecto irreversible que lleva a la
muerte celular por medio de dos mecanismos:

Inhibición de la unión del ARNt al sitio A

• Kasugamicina: Bloquea la iniciación y la formación del complejo de iniciación

al evitar que el fmet-ARNt acceda al sitio P en la subunidad ribosómica 30s.
• Tetraciclinas: Permiten la iniciación de la síntesis proteica pero, al unirse al
sitio A, altera el reconocimiento codón-anticodon inhibiendo la elongación de
la cadena peptídica.
Para que actúen las tetraciclinas el ribosoma 70s debe estar intacto.

Falsean la lectura

Son ATB, generalmente aminoglicosidicos, que se unirán a la subunidad 30s

alterando y desestabilizando su conformación.
Dependiendo de las distintas proteína S ribosomal que afecten, producirán distintos
tipos de falseos de lectura del ADN que desencadenaran la síntesis de proteínas
erróneas, anormales y no funcionales.

• Estreptomicinas: Provoca errores de lectura sobre las bases pirimidicas (T y

C) que se hallen en posición 1 o 2.
• Neomicinas: Provocan error de lectura de cualquier triplete y hasta 2 bases
nitrogenadas del mismo codón. Se transporta de forma activa a la célula.

I. A nivel de subunidad 50s

Los ATB que actúan a este nivel provocan un efecto bacteriostático reversible por
medio de dos mecanismos:

Inhibición de la transpeptidacion o translocación

• Cloranfenicol: Se une a la peptidil-transferasa y evitando la transpeptidacion al

disminuir la afinidad de esta por el aminoacil-ARNt. Es un bacteriostático.
• Ciclohexidina: Produce el bloqueo de la transpeptidacion al igual que el
cloranfenicol pero actúa en células eucariotas
• Eritromicina: Se une a la proteína L15 del centro peptidil-transferasa, por lo
cual no bloquea la transpeptidacion pero si la translocación ya que impide
que el polipéptido en formación pase del sitio A al P. ARNr 23s??

Análogos del complejo ARNt-aminoácido

• Puromicina: Es un análogo del aminoacil-ARNt el cual, debido a su similitud,

ingresa al sitio A produciéndose la transpeptidacion y la incorporación del ATB
al polipéptido. Debido a esto, el péptido con la puromicina terminal no
transloca y es liberando junto con la disociación ribosomal.

Mecanismos de resistencia a antibióticos

91
La resistencia es la capacidad adquirida de un organismo para resistir los
efectos quimioterapéuticos al cual es sensible habitualmente.
Los antibiótico NO crea resistencia y NO actúa sobre algún componen celular,
como ser el ADN o una enzima, para gatillar una resistencia. Existen bacterias que
nunca estuvieron frente a un antibiótico pero presentan una resistencia innata a él.
Así mismo, microrganismo se encuentra permanentemente sometido a dosis altas de
antibióticos, de alguna forma reconoce la toxicidad de esa sustancia y genéticamente
desarrolla una resistencia. Es por eso que no se debe abusar de los mismos.
Los ATB también seleccionaran las cepas resistentes presentes en un determinada
población, haciéndolas dominantes.

La resistencia se debe a la presencia de genes de resistencia, que proviene de

microorganismos productores de ATB, en ciertas células como producto de:

✓ Mutaciones espontaneas del cromosoma: Son aleatorias y pueden afectar a

cualquier gen. Dichas mutaciones podrán revertirse, persistir o matar a la
célula. Si esta sobrevive, la transmitirá a las células hijas.
✓ Transferencia del plásmido de resistencia R entre dos células: Dicha
transferencia puede producirse por conjugación aunque genes asociados a la
resistencia que se encuentran en forma de ADN libre podrán ser incorporados
al plásmido o al cromosoma de la bacteria por medio del proceso de
trasformación.
Muchos plásmidos contienen varios genes de resistencia diferentes y pueden
conferir resistencia múltiple a una célula que previamente era sensible a cada
ATB por separado
✓ Transposición bacteriana.

Los mecanismos bioquímicos, regidos a nivel genéticos, que están implicados en la

resistencia son:

➢ Disminución de la permeabilidad del ATB:

o Modificación de una barrera preexistente: En las cepas sensibles, los
ATB ingresan normalmente a través de las porinas; las cuales forman
un poro en la membrana plasmática. Debido a mutaciones
cromosómicas, esas porinas sufren modificaciones estructurales y
cierra la entrada al ATB.
o Mecanismo de extrusión activa del antibiótico: El mecanismo de
extrusión esta mediado por el plásmido R, cuya expresión de sus
genes de resistencia dará como resultado proteínas que bombean el
ATB hacia el exterior de la célula. Ej.: Tetraciclinas
➢ Síntesis de nuevas enzimas resistentes: En general esta mediadas por
plásmidos R el cual contendrán genes de resistencia que codificaran para:
o Enzimas resistentes al ATB. Ej.: una DHF reductasa resistente a la
trimetroprima
o Enzimas que alteran e inactivan el ATB. Ej.: β-lactamasas que rompen
el anillo β-lactámico de la mayoría de las penicilinas o acetil
transferasa que inactiva la cloranfenicol.
➢ Modificación química de la diana sobre la cual actúa el ATB: En el caso de la
estreptomicina, por mutaciones cromosómicas, se producen cambios en las
proteínas S de la subunidad 30s sobre las cual actúa el ATB, evitando así su
acción y el falseo de lectura.

92
 ➢ Alteración del mecanismo de transporte: En el caso de la [Link], la cicloserina
aprovecha el mecanismo de transporte de la valina para ingresar a la bacteria.
Frente a esto la célula, por mutación cromosómica, modifica las permeasas
para que no ingrese el ATB ni la valina.
➢ El microorganismo puede carecer de la estructura que es inhibida por el ATB.
Ej.: El género micoplasmas carecen de una pared celular, por lo que son
resistentes de forma natural a las penicilinas.
➢ El microorganismo puede ser impermeable al antibiótico. Ej.: Las bacterias
Gram (-) son impermeables y resistentes a la penicilina G debido a su capa
externar de LPS.

Bacteriocinas

Son sustancias de naturaleza polipeptidica de acción antimicrobiana y de bajo peso

molecular producidas por determinados microorganismos como la E. coli (colicina) o
B. subtilis (subtilicina).
Tiene actividad bactericida, pueden provocar o no lisis celular y son más activas
frente a especies próximas a la cepa productora.
Se las usa principalmente para evitar la proliferación de bacterias perjudiciales en
ciertos alimentos.
Están muy estudiadas en bacterias lácticas, las cuales son organismos GRAS
(seguras no patógenas), que han sido consumidas por el hombre durante siglos sin
efectos nocivos

Ej.: La Nisina A es preservante en la industria alimentaria de amplio espectro. Inhibe

Gram (+), Clostridium botulinum, Listeria monocytogenes.

Fármacos antimicóticos

Si bien existen algunos antibióticos que se usan contra los hongos, como la
polimixina B, al ser organismos eucariotas presentar una maquinaria celular similar a
las células del hombre, plantas y animales, haciendo que dichos compuestos afecten
también las rutas metabólicas del hospedador, volviéndose bastante tóxicos.
En general, se usan antimicóticos que, al administrarse de forma tópica, presentaran
toxicidad selectiva frente al hongo y actúan sobre su estructura o procesos
metabólicos específicos.

A nivel superficial:

Causa la distorsión de las hifas en cultivos de dermatofitos y otros Ej.: Griseofulvina

A nivel de membrana

Interacción con el ergosterol uniéndose a este y formando un canal que altera la

permeabilidad de la membrana. Son muy efectivos en el tratamiento de micosis
sistémicas e inefectivas en las micosis superficiales y cutáneas.
Ej.: Polienos como la anfotericina B.
Inhibiendo la síntesis de ergosterol lo que provoca lesiones en la membrana. La
mayoría de estos antimicóticos inhiben la síntesis dependiente del citocromo P-450,
presente en todos los eucariotas que, frente a una sustancias toxicas, participa y
pone en marcha de un proceso metabólico para degradar dicha sustancia toxica. Los
antimicóticos desactivaran el citocromo P-450 para que no sean degradados por el
mismo. Ej.: Agente triazol

93
Derivado imidazólico: ejerce un efecto fungicida alterando la permeabilidad de la
membrana celular del hongo.

Fármacos antivirales

La dependencia de los virus por los mecanismos celulares para su replicación

dificulta la obtención de fármacos antivirales efectivos, ya que es difícil inhibir la
multiplicación viral sin afectar al mismo tiempo la propia célula hospedadora.
Otra limitación es que las enfermedades virales se hacen evidentes sólo después de
una intensa multiplicación viral, es decir, cuando ya han ocurrido las alteraciones
celulares.
La mayoría de quimioterapicos antivirales son más tóxicos para el virus que para la
célula hospedadora, pero existe un grupo que actúan directamente sobre el virus
siendo los más eficaces.

Aciclovir: Es un análogo sintético de las purinas el cual presenta una gran afinidad por
la timidina quinasa viral. Se incorpora en el ADN viral e inhibe su replicación. Ej.:
Contra Virus Herpes.
Amantadina: Inhibe la replicación del virus interfiriendo con la penetración y el
desnudamiento. Ej.: Contra Virus de la influenza A.
Indinavir: Inhibidor de la proteasa del VIH.
Lamivudina: Es un análogo de purinas que inhibe la síntesis del ADN viral por
inhibición de la enzima transcriptasa reversa. Ej.: Contra VIH.

Cuantificación de la actividad microbiana. Antibiograma

El antibiograma es un método de laboratorio que estudia la sensibilidad de un

microorganismo a la acción de distintos antimicrobianos. Como los resultados de
estas pruebas se encuentran bajo la influencia marcada de los reactivos y
condiciones experimentales (como densidad del inoculo, tiempo y temperatura de
incubación, pH, estabilidad del ATB, etc.) es importante la estandarización
metodológica para obtener una buena reproducibilidad de los resultados.
Los principales métodos usados en el laboratorio son:

Método de difusión en agar: Permite determinar cualitativamente la sensibilidad

bacteriana a un determinado antimicrobiano in vitro.
Consiste en usar una plancha de papel absorbente en forma de estrella que tiene en
los extremos pequeños discos que contienen, cada uno, un antimicrobiano dado en
una concentración conocida. Actualmente se recomienda reemplazar dicha plancha,
llamada discograma, por monodiscos: discos individuales impregnados cada uno con
un ATB distinto.
Los monodiscos se colocan asépticamente sobre la superficie del medio de cultivo
previamente sembrado por diseminación con el microorganismos a ensayar,
respetando normas internacionales en cuanto al número de discos por placa, a la
distancia desde el borde de la caja y a la distancia entre los discos. Estos,
inicialmente secos, se humedecen al tocar el medio de cultivo con lo que el
antimicrobiano difunde rápidamente formando un gradiente de concentración.
Después de incubar a una temperatura y tiempo adecuado, la sensibilidad relativa
del microorganismo al antimicrobiano se manifiesta por la aparición de halos de
inhibición de crecimiento alrededor de los discos. Esto es el resultado de dos
procesos: la difusión de la droga y el crecimiento de la bacteria.
El diámetro del halo de inhibición se mide en milímetros y se lo compara con tablas

94
confeccionadas por el Comité Internacional usando cepas testigo de colección; aun
así la prueba solo es de carácter cualitativo.
La concentración del agente disminuye a medida que aumenta la distancia al
monodisco. A una determinada distancia del disco se alcanza la concentración
mínima inhibitoria (CIM) en donde, a partir de ese punto, habrá crecimiento
generando el halo.
El diámetro de la zona es proporcional a:

• La cantidad de antimicrobiano añadido al disco

• La solubilidad del agente
• El coeficiente de difusión
• La eficacia del agente.

Se usa de forma rutinaria para ensayar la sensibilidad a los ATB y es constituye un

elemento de valor clínico y epidemiológico incuestionable.

Método de dilución en tubo y placa: Son métodos cuantitativo que permiten

determinar CIM; siendo esta la menor concentración del agente que produce la
inhibición en el crecimiento de un microorganismo. En ambos métodos, se debe
realizar diluciones seriadas del agente antimicrobiano, inocularlas con el
microorganismo sensible e incubar a la temperatura adecuada por el tiempo
necesario.

Dilución en tubos:

1. Se realizar diluciones seriadas del agente antimicrobiano a ensayar.

2. Se prepara una serie de tubos con un medio de cultivo; generalmente se
recomienda usar caldo Müller Hilton.
3. A cada tubo con medio se le agrega un volumen fijo de la dilución
correspondiente del antimicrobiano.
4. Se siembra un inoculo estandarizado y se lo incuba por un tiempo y a una
temperatura determinados.
5. Se observa si ha habido crecimiento, reflejada por aparición de turbidez.

El tubo que contenga la menor concentración del agente antimicrobiano que inhibe
completamente el crecimiento del microorganismo define la CIM.

Dilución en agar:

1. Se realizar diluciones seriadas del agente antimicrobiano a ensayar.

2. Un volumen determinado de cada dilución del antimicrobiano se la mezcla con un
volumen fijo de medio de cultivo agarizado de Müller Hilton, previamente fundido
y enfriado a 50 °C.
3. Se vierte la mezcla en cajas de Petri estériles, obteniéndose en cada caja una
concentración diferente del agente antimicrobiano.
4. Una vez solidificadas, se inocula cada caja con el microorganismo a ensayar con
un ansa calibrada (5 µl) y se incuba en estufa un tiempo adecuado.
5. Se observa macroscópicamente el crecimiento del microorganismo.

La CIM se expresa como la mayor dilución que no presenta crecimiento visible.

Ambos métodos dan resultados cuantitativos directos, no están bajo la influencia de

la velocidad de crecimiento del microorganismo y se debe trabajar siempre con cepas

95
testigo de colección como controles de estandarización del método.
Se debe trabajar siempre con 2 controles, uno del antimicrobiano y otro del
microorganismo.
Si el microorganismo es un anaerobio estricto se recomienda usar el medio BHI y se
debe tener en cuenta las condiciones anaeróbicas de incubación.
La CIM es una medida del efecto inhibitorio del crecimiento pero no permite
determinar el modo de acción del antimicrobiano. Para ello se determinar la
concentración bactericida mínima (CBM).

1. Se toman 5 µl de los tubos de que no presentaron desarrollo visible (del ensayo

de dilución anterior) y se los siembra en un caja de Petri con el medio de cultivo
adecuado sin el antimicrobiano.
2. Se lo inocula 24 horas a una temperatura adecuada y se determina el número de
células viables.

La CBM es la menor concentración del antimicrobiano que produce la muerte de

las bacterias presentes en el inoculo.
De esta forma, si existe crecimiento en la placa que fue sembrada por el tubo cuya
concentración de antimicrobiano definía la CIM, quiere decir que el agente ejerce un
efecto bacteriostático; ya que las células reanudaron su crecimiento una vez que el
antimicrobiano fue removido.
Si no existe desarrollo en dicha placa; el agente antimicrobiano presenta un efecto
bactericida; dado que aunque el agente fue removido, las células ya se encontraban
muertas por la acción del mismo.

Detección de β-lactamasa

Método cefalosporin cromogenico: Se utilizan discos de papel de filtro impregnados

con cefalosporin cromogenico. La β-lactamasa hidroliza la unión amida del anillo β-
lactamico y produce un cambio de color en pocos segundos. Es fácil de realizar y
detecta la mayoría de las β-lactamasas.

Método iodometrico:

1. Se coloca un poco una solución de penicilina G en un tubo al cual se le

agregan varias colonias de un cultivo en agar chocolate hasta obtener una
suspensión considerablemente más densa que un cultivo en caldo.
2. Se mantener a temperatura ambiente por 30 minutos.
3. Se añade gotas de solución de almidón y se mezcla.
4. Colocar el reactivo iodo-ioduro de potasio observándose inmediatamente una
coloración azul que resulta de la reacción del iodo y el almidón.
5. Se agita la mezcla y si se observa una decoloración rápida indica la
producción de β-lactamasa. Si la solución permanece azul por más de 10
minutos; el cultivo no produjo la enzima.

El cambio de color se debe a la formación del complejo iodo-ácido penicilinoico que

desplaza al complejo iodo-almidón. El ácido penicilinoico, compuesto sin actividad
antimicrobiana, se genera por la acción de la β-lactamasa que actúa sobre el anillo β-
lactamico de los anticrobianos β-lactamicos.
La presencia de falsos positivos se debe a la generación espontánea de ácido
penicilinoico en soluciones de penicilina almacenadas por un tiempo prolongado.

96
97
Virus

Historia

1892: Dimitri Ivanovski demostró que los extractos de hojas molidas de plantas
infectadas con el virus del mosaico del tabaco (TMV) seguían siendo infecciosos aun
después de ser filtrados a través de un filtro de porcelana. Sugirió que la infección
podría ser causada por una toxina producida por bacterias.
1898: Loeffler y Frosch pasaron el agente de la fiebre aftosa (el aftovirus) por un filtro
similar y descartaron la posibilidad de que se tratara de una toxina debido a la baja
concentración. Llegaron a la conclusión de que el agente se podía multiplicar, debido
a que en pequeñísimas cantidades provocaba una infección de gran proporción.
1899: Beijerinck repitió los experimentos de Ivanovski y quedó convencido de que se
trataba de una nueva forma de agente infeccioso que solo se multiplicaba dentro
de células vivas. Como sus experimentos no mostraban que estuviera compuesto de
partículas, lo llamo germen viviente soluble y reintrodujo el término ‘’virus’’ dándole un
nuevo sentido a la palabra ya que hasta ese entonces, se defina como virus a
cualquier agente que produce una enfermedad, como una toxina o hasta el veneno
de serpiente.
1901: Reed descubre que la fiebre amarilla se produce por un virus. De esta forma
descubren que el hombre también puede actuar como hospedador para este tipo de
agentes; hasta el momento solo se conocía como hospedadores a las plantas y
animales.
1915: Twort y d’Herelle; por separado, descubren los bacteriófagos. De esta forma
descubren que las bacterias también pueden actuar como hospedadoras.
1935: Stanley logra cristalizar el TMV.
1937: Bawden y Pirie descubren que el TMV estaba formado principalmente por
proteínas y ácidos nucleicos.
1939: Gracias al microscopio electrónico se dilucida finalmente la estructura de los
virus.

Características generales

 Son partículas ultrafiltrables, muy pequeñas que pueden presentar tamaños

que van desde los 28 nm (Ej.: poliovirus) hasta 400x200 nm (Ej.: Smallpox o
virus de la viruela).
 Pueden ser cristalizables, debido a la homogeneidad y pureza de sus
componentes.
 Presentan un metabolismo nulo y son parásitos absolutos ya que necesitan
infectar un organismo vivo para poder realizar su ciclo vital y reproducirse.
 Alternan entre dos fases:
• Extracelular: En la cual se trasladan de un organismo a otro y es la
única fase en la que se lo puede cristalizar
• Intracelular: Cuando se está multiplicando dentro de una célula
hospedadora.
 Se encuentran en el límite de lo vivo y lo no vivo ya que presentan
propiedades de ambos, como el desarrollo de un ciclo vital y la cristalización,
respectivamente.
 Presentan dos macromoléculas principales:
• Proteínas: Las cuales pueden encontrarse como glicoproteínas o
hasta glicolipidos en pequeñas cantidades

98
 • Ácidos nucleicos: Puede ser ADN o ARN pero no ambos no pueden
estar presentes al mismo tiempo en el genoma vírico.
El ácido nucleico puede ser doble o simple cadena (ds o ss)
 El tamaño del genoma vírico es mucho menor al bacteriano.
• Virus MS2 o Qβ: 1x106 daltons que codifica para 3-4 proteínas; o más
por solapamiento.
• Virus de la serie T-par 1x108 daltons que codifica para 100 proteínas.

Tamaño y morfología

Varían tanto en tamaño como en su morfología. Los más simples van desde una
forma esférica, helicoidal o icosaedrica hasta estructuras más complejas
perteneciente a los virus de la serie T-par o el poxvirus.
Son 100 veces más pequeños que las bacterias y la mayoría de los virus estudiados
tienen un diámetro que ronda entre los 10-300 nm. Algunos Filovirus tienen un
tamaño total de hasta 1400 nm, sin embargo, solo miden unos 80 nm de diámetro.

Estructura de los virus

El virion, que es la forma extracelular del virus, puede presentar una estructura
simple, o ‘’desnuda’’, conformada por:

➢ Nucleocapside: El sitio donde se haya el ácido nucleico (ADN o ARN, ds o ss)

que se encuentra rodeado y protegido por la capside. Está compuesta por
ambos componentes.
➢ Capside: Es una cubierta proteica formada por subunidades llamados
capsomeros.

Existes virones, que infectan células animales, que presentan una estructura más
compleja ya que presentan una envoltura externa formada por los restos de la
membrana plasmática de la célula anteriormente infectada y por productos propios
del mismo virus como glicoproteínas, lípidos y enzimas.
Estos componentes se localizan en el exterior de la envoltura, recubriéndola en forma
de clavos o agujas y cumplirán un papel importante en la unión del virion a la célula
hospedadora.

Virus Herpes: Es esférico, con una Virus de la influenza: Es esférico y presenta

nucleocapside eicosaedrica rodeada en el interior una nucleocapside de forma
por una membrana gruesa con irregular rodeada por una membrana. La
estructuras superficiales débilmente envoltura contiene hemaglutinina y

99
visibles neuraminidasa

Capside

Tiene como función proporcionar protección al ácido nucleico del virus; siendo
resistente a la acción de las proteasas, y dar lugar a que se produzca la interacción
entre el virion y la célula a infectar.
Está formada por un numero constante capsomeros constituidos por pocos o solo
un tipo de proteína, dependiendo del tamaño del genoma viral; ya que si utilizaría
una gran cantidad de información para la síntesis de proteínas estructurales, no
quedaría más espacio en el genoma para las enzimas necesarias en la replicación.
Estas proteínas de los capsomeros determinaran la forma y disposición de la
nucleocapside debido a su propiedad de autoensamblaje, generando
ordenamiento simétrico.
La propiedad de autoensamblaje es fundamental para el ciclo de infección vírica.
Como la formación de cada una de las partes del virion se produce en un momento
diferente y al existir una maquinara o proceso que comande la unión de las mismas,
es importante que las proteínas tengan la capacidad de interaccionar unas con otras
y con otros componentes víricos para poder ensamblar el virion.

Simetría helicoidal: El virus del mosaico del tabaco

(TMV) es un virus a ARN de 6000 nucleótidos, del
cual únicamente 478 bases codifican para los
aminoácidos del capsomero. Estos presentan una
forma alargada, con un extremo angosto y otro más
acho y globoso. Los capsomeros se unirán al ARN
por el extremo angosto y, debido al impedimento
estérico que ofrece su extremo más ancho, la unión
de otra subunidad provocara que el ácido nucleico
gire. De esta manera, cada vez que un capsomero
se una al genoma, el ARN dará una nuevo giro lo
que terminara su forma particular de hélice con todos
los capsomeros rodeándolo.

Simetría Eicosaedrica: En el caso del Adenovirus, la

capaside forma una estructura pseudoesférica en donde
un número fijo de capsomeros formaran 20 caras
triangulares de una estructura eicosaedrica.

Existen virus, como los de la serie de colifagos T-par (2, 4,6), que alternan en su
estructura ambas simetrías y están constituidos por:

❖ Cabeza eicosaedrica: La cual contiene el ácido nucleico.

❖ Cuello: Que une la cabeza con la cola

100
 ❖ Cola contráctil: La que puede desplegarse como un resorte, gracias al
ordenamiento simétrico helicoidal de sus capsomeros.
❖ Placa basal: En donde se localizan las enzimas que digieren la pared celular
de la célula a infectar.
❖ Fibras de la cola: Las cuales realizan el reconocimiento de la célula
hospedadora.

La Vaccinia (virus de la viruela) tambien es un virus complejo formado por un

nucleoide, el cual contiene al material genetico en su interior, dos cuerpos elipticos y
una envoltura externa.
Presenta unas dimensiones de 240x400 nm.

Genoma viral

Los virus pueden tener como material genético:

101
Algunos virus presentan un genoma fragmentado o segmentado; el cual no está
formando una única molécula. Ej.: El reovirus que posee 10 a 12 segmentos en una
misma partícula viral.
Los genomas pueden contener bases inusuales. Ej.: La 5-hidroximetilcitosina unida
a una molécula de glucosa en el TMV. Dicha unión glucosidica brinda cierta
protección al genoma.

Existen virus de plantas y animales cuyo ARNm es similar al del hospedador, no en

la secuencia de bases nitrogenadas sino en su estructura, ya que presenta en el
extremos 5’ un casquete de 7-metilguanosina y en el 3’ una cola de poliadenina.
En otros casos, existen virus que presentan un extremo 3’ similar al ARNt del
hospedador. Ej.: TMV.
Existe cierta similitud entre el ácido nucleico del virus y del hospedador, siendo muy
importante en aquellos virus que requieren, para su ciclo de vida, insertarse en el
genoma del huésped.

Otros componentes del virion

Pueden contener una o más enzimas importantes como:

✓ Desoxiribonucleasas: Es una enzima que se encuentra incorporada en la

nucleocapside y se encarga de destruir el ADN de la célula hospedadora. Es
esencial para la replicación del virus dado que:
o Proveerá al virus de los nucleótidos necesarios para sintetizar su
propio material genético, ya que presenta un metabolismo nulo.
o Le permitirá al virus hacerse con el control de la maquinaria sintética
de la célula hospedadora.
✓ ARN polimerasa vírica: Responsable de la replicación y transcripción, en caso
de virus ARN. Ej.: Influenza.
✓ ADN polimerasa vírica dependiente de ARN o Transcriptasa inversa:
Encargada de la sintetizar ADN doble cadena usando como molde un ARN
monocatenario. Ej.: Retrovirus.
✓ Neuraminidasa: Se encuentra sobre las espinillas o estructuras que
sobresalen de la envoltura y disuelven (rompiendo los enlaces glicosidicos) la
capa de mocus que recubre el epitelio respiratorio permitiendo el ingreso del
virus a dichas células. Ej.: Virus de la influenza.
✓ Hemaglutinina: Se encuentra sobre las espinillas o estructuras que sobresalen
de la envoltura; produce la aglutinación de los glóbulos rojos y permite la
endocitosis del virion por parte de la célula. Ej.: En el virus de la influenza.
✓ Lisozimas: Enzimas líticas que digieren el PG de la pared celular y la
membrana plasmática de la célula hospedadora generando un poro por el cual
se producirá la infección por parte del virion.
También participa en la salida de las partículas virales sintetizadas dentro de
una célula infectada.

Clasificación de virus

Según el Comité Internacional de Taxonomía de Virus (2012); no existe un rango

taxonómico superior al Orden.

La clasificación de los virus tiene en cuenta:

102
 ✓ Tipo de hospedador que infecta: Vertebrado, invertebrado, planta, hongo,
alga, bacteria
✓ Diámetro del virión o nucleocapside
✓ Morfología: Simetría de la capside, número de capsómeros, presencia o no de
envoltura, sensibilidad a éter (dará una idea de la resistencia del virion siendo
los virus con envoltura los más sensibles).
✓ Propiedades inmunológicas: Si presenta Ag que son capaces de estimular al
sistema inmunológico)
✓ Genoma: Si es de tipo ADN/ARN, ss/ds, circular/lineal, si existe
segmentación, modo de replicación.
✓ Forma de liberación
✓ Enfermedad y transmisión

En 1971, Baltimore clasifico a los virus en 7 grupos de acuerdo a dos parámetros:

 El tipo de ácido nucleico.

 La estrategia del virus para sintetizar su ARNm e inicia la infección.

Grupo I ADN bicatenario (ds)

Grupo II ADN monocatenario positivo (ss +)
Grupo III ARN bicatenario (ds)
Grupo V ARN monocatenario negativo (ss -)
Grupo IV ARN monocatenario positivo (ss +)
Grupo VI ARN (ss +) con ADN intermediario
Grupo VII ADN (ds) con ARN intermediario

Características generales de la infección viral

La infección es el proceso por el cual el virus ingresa a una célula hospedadora y se

hace con el control de la maquinaria sintética del hospedador utilizándola para su
propio beneficio; provocando un perjuicio a este último.
La mayoría de los virus cumple un ciclo que se desarrolla en un máximo de 5 etapas:

1. Fijación, adsorción o adhesión

Comprende la adhesión del virion a la superficie de la celular a infectar gracias a

presencia de unas estructuras proteicas que se encuentran en la superficie del virus
que reconocer componentes específicos de la célula hospedadora llamados
receptores. Debido a la gran especificidad de la interacción virus-hospedador,
un virus de plantas no pueda afectar una célula animal o a ni siquiera a células que
pertenezcan a un género o especie diferentes.
Estos receptores son componentes normales de la superficie del hospedador como
ser:

• Proteínas, polisacáridos complejos o complejos lipoproteinas-polisacaridos.

• Transportadores proteicos
• Fimbrias o flagelos; en el caso de las bacterias.
• Porinas

Existe un tropismo por parte del virion caracterizado por el movimiento y la búsqueda
de sus células o tejido diana. Ej.: Virus de la influencia y otros virus de animales
superiores.
Es un proceso clave dado que en, ausencia del receptor, el virus no podrá adherirse
103
ni infectar a la célula. Ciertas bacterias pueden desarrollar resistencia a ciertos virus
al producir modificaciones en los receptores específicos por mutación.

2. Penetración

a. Para el caso del fago T4 que infecta bacterias Gram (-):

Una vez que se produjo la adhesión del fago a través del reconocimiento de los
receptores presentes de la membrana externa de LPS de la bacteria por medio de las
fibras de la cola del fago; estas se contraen con el fin de poner en contacto la placa
basal (que se encuentra en el centro del tallo) con la membrana externa. La placa
contiene lisozimas capaces de degradar los lípidos de membrana produciendo un
pequeño poro en la misma.
En este punto, las vainas de la cola se contraen, contrayéndola como un resorte
permitiendo que el material genético presente en la cabeza del fago pase a la célula
hospedadora a través del poro.
Tanto la nucleocapside como el resto de estructuras externas quedan fuera de la
bacteria, fijadas a la membrana externa de LPS.

b. Para el caso de virus con envoltura y que afectan a animales:

Al producirse el reconocimiento entre las espículas virales que recubren la envoltura

del virion y los receptores específicos en la membrana plasmática de la célula
hospedadora se pueden producir dos caminos:

• Debido a la similitud entre la envoltura viral y la membrana plasmática, ambas

se fusionan liberando la nucleocapside en el interior de la célula hospedadora,
la cual es digerida por las proteasas celulares liberando el material genómico
viral al citoplasma.

• Se produce el ingreso del virion encapsulado por parte de la membrana

plasmática del hospedador en por un proceso similar a la endocitosis. Se
formara una vesícula que será reconocida por un endosoma y se producirá la
fusión de sus membranas.
Finalmente se producirá la fusión entre la envoltura viral y la membrana
endosomal para liberar la nucleocapside al citoplasma celular.

104
 3. Síntesis proteica y Replicación

Una vez que el ácido nucleico viral infecto la célula hospedadora, el metabolismo
normal de esta se detiene y toda la maquinaria biosintetica estará dedicada a
sintetizar moléculas de ácido nucleico y proteínas virales.
Una vez que se produce el ARNm viral, comenzara la síntesis de las proteínas
virales.

a. Proteínas tempranas: Son las primeras proteínas específicas del virus que se
sintetizan a partir del primer ARNm viral o el ARNm temprano. Son las
encargadas de hacer que el virus tome posesión de la maquinaria sintética del
hospedador y deben estar presentes antes de la replicación. Ej.:
endonucleasas
b. Proteínas intermedias: Son proteínas que se encuentran codificadas en el
ARNm intermedio y son esenciales para el proceso de replicación viral. Ej.:
Polimerasas.
Debido a la acción de las endonucleasas, se genera una gran cantidad de
nucleótidos, los cuales son imprescindibles para la síntesis del ácido nucleico
viral durante la fase de replicación.
c. Proteínas tardías: Son proteínas estructurales que se encuentran codificadas
por el ARNm tardío y se sintetizan en grandes cantidades.
Ej.: Proteínas de los capsomeros, glicoproteínas que formaran las espículas
de le envoltura.

4. Ensamblaje

Al final de la síntesis de las proteínas tardías se produce el autoensamblaje de los

componentes del virion. En este proceso se produce el englobamiento del ácido
nucleico en las capside a la cual, luego, se le unirá el cuello, la cola, y las fibras de la
cola.
La producción de enzimas líticas se da un vez que se han formado los nuevos
viriones, son las ultimas proteínas tardías en sintetizarse.

5. Liberación

Debido a la acción de las enzimas líticas se digieren la pared o/y membrana celular
desde adentro hacia afuera para que se produzca la liberación de las partículas
virales.

105
Estrategias de síntesis del ARNm

Dichas estrategias dependerán del tipo de virus y de su genoma, y es la base de la

clasificación de Baltimore:

a. Grupo I: ADN ds (Herpesvirus → en animales. Fago λ y T4 → en bacterias)

Este tipo de virus utilizan la ARN polimerasa del hospedador, que se encuentra en
su núcleo, para realizar una copia de la banda (+); la cual presenta una secuencia
idéntica a la del ARNm, utilizando como molde la banda (-); la cual presenta una
secuencia complementaria a la del ARNm, y así generar el ARNm temprano.
El genoma viral se introduce en el núcleo del hospedador y utiliza las enzimas para
generar el ARNm el cual migra hacia el citoplasma y, a nivel de los ribosomas,
comenzara a sintetizar las proteínas víricas.
Dentro de las primeras proteínas sintetizadas, se haya una ADN polimerasa viral que
migra al núcleo y copia las bandas (+) y (-) replicando así el ADN viral.
Pasada la replicación, se sintetizara más ARNm viral, el cual codificara para las
proteínas tardías para producir luego el ensamblaje de las capsides junto con el
material genético replicado y la liberación de los viriones.

b. Grupo 2: ADN ss (+) (Virus de la anemia del pollo. Fago Ф X174 → en

bacterias)

El genoma viral ingresa al núcleo. Debido a que su genoma esta compuesto por ADN
ss formado por una banda ss (+); utiliza primero una ADN polimerasa del
hospedador para sintetizar la banda (-), complementaria, generando una molécula
de ADN intermediario ds.
La banda (+) de ADN se degrada y por acción de la ARN polimerasa del
hospedador, se sintetiza ARNm temprano utilizando como molde la banda (-).

c. Grupo 3: ARN ds (Reovirus → en animales. Fago Ф6 → en bacterias)

El virus presenta su propia ARN polimerasa viral dependiente de ARN incorporada en

la nucleocapside, la cual sintetiza el ARNm temprano utilizando como molde la banda
(-) de ARN de su genoma.
Los virus de este grupo que atacan células eucariotas, no necesitan alcanzar el
núcleo ya que la replicación del genoma vírico y la síntesis del ARNm y de sus
proteínas se producen en el mismo citoplasma de la célula hospedadora.

d. Grupo 5: ARN ss (-) (Influenza y Rabia → en animales)

También presenta su propia ARN polimerasa dependiente de ARN. Cuando ingresa

el virus a la célula sintetiza en el citoplasma su ARNm temprano utilizando como
molde la banda (-) de ARN ss de su genoma. El ARNm se dirigirá a los ribosomas
donde se sintetizaran proteínas como ARN polimerasa viral y capsomeros.
Las bandas (+) de ARNm podrán ser utilizadas como moldes para generar las bandas
(-) llevando a cabo el proceso de replicación en el citoplasma. Al final, se produce el
ensamblaje de los capsides junto con el material genético viral para formar los
virones.

106
 e. Grupo 4: ARN ss (+) (Poliovirus)

Este tipo de virus utiliza su propio genoma como ARNm temprano.

Una vez que ingreso el virus al hospedador, viaja hasta el ribosoma y, actuando como
ARNm, lidera la síntesis de enzimas virales, entre las cuales se haya una ARN
polimerasa que generara copia la banda (-) utilizando como molde la banda (+) de
ARN ss.
Esta banda ARN (-) que se genera, servirá tanto de molde para la transcripción como
para la replicación; originando copias de ARN ss (+) que codificaran para el resto de
las proteínas virales y a su vez conformaran el genoma de las nuevas partículas
virales.

f. Grupo 6: ARN ss (+) con ADN intermediario (Retrovirus)

El virus, una vez infectada la célula, migra al núcleo y por acción de su transcriptasa
reversa viral; incorporada en su nucleocapside, genera un intermediario ADN ss (+)
usando como molde ARN ss (+) genómico. Esta banda ADN ss (+) busca una zona
homologa dentro del genoma del hospedador y se incorpora a él formándose el
intermediario ADN ds; por acción de la ADN polimerasa del hospedador, que se
hallara incluido en el genoma de la célula hospedadora.
Quedar latente hasta que se copia, por acción de la ARN polimerasa del hospedador
utilizando como molde la banda (-) del ADN viral, la banda (+) del ADN viral formando
el ARNm temprano junto con otros ARNm propios de la célula huésped. En dicho
momento comienza la síntesis de proteínas tempranas y la replicación vírica a través
de más copia de ARN ss (+) o ARNm.

g. Grupo 7: ADN ds con ARN intermediario (Hepatitis B)

El virus ingresa al núcleo y por acción de la ARN polimerasa del hospedador,

realiza una copia de la banda (+) de ADN, usando de molde la banda (-), generando
un intermediario ARN ss (+) y ARNm temprano.
El ARNm se pone en contacto con los ribosomas y dirige la traducción de las proteína
víricas, entre las cuales se encuentra una transcriptasa reversa la cual, a través del
intermediario ARN ss (+) producirá el ADN ds correspondiente al genoma vírico.

Las diferentes estrategias no determinara la rapidez o la lentitud en la reproducción

del virus y solo dependerán del estado, el tipo y de los mecanismos de defensa que
presente el hospedador.

Defensas frente al ataque viral

Animales:

• Se defienden por mecanismo inmunológicos

Bacterias:

• Por la inexistencia, modificación o mutación de receptores específicos sobre la

superficie celular. Al no producirse el reconocimiento ni la adhesión, la infección
fracasa.

107
 • Por medio de fenómeno de restricción-modificación.
Frente a infecciones provocadas por virus con un genoma de tipo ADN ds, la
bacteria sintetiza endonucleasas de restricción que van a atacar y fragmentar el
ácido nucleico viral. La acción de estas enzimas también se puede extender hacia
el propio genoma de la célula, motivo por el cual, ella se protege metilando
ciertas bases púricas y pirimidínicas de su ADN.
A su vez ciertos virus; como los fagos T-par, pueden metilar o glucosilar las bases
de sus ácidos nucleicos para no ser reconocidos ni atacados por las
endonucleasas de restricción.

Existen ciertos virus que producen enzimas que inhiben el sistema de restricción,
protegiendo su ácido nucleico de la acción de las endonucleasas de restricción. Ej.:
Fagos T3 y T7.

Efecto de agentes químicos y físicos sobre los virus

Agentes químicos

 Éter: Efectivos contra virus envueltos que atacan a animales, ya que disuelve
la capa lipídica que envuelve al virion, eliminando las moléculas superficiales
que le permiten reconocer los receptores de la célula hospedadora.
 Fenol: Actúa sobre glicoproteínas y lípidos y tiene efectos sobre la envoltura y
las proteínas de la capside
 Colorante: Actúan sobre los ácidos nucleicos

Agentes físicos

 Temperatura: Inactiva la mayoría de los virus (50-70 °C por 1 hora o 121 °C

por 15 minutos en autoclave)
 Rayos X: Se liberan radicales tóxicos que actúan sobre el material genético
 Rayos UV: Producen dímeros de timina e impiden la replicación.

Drogas que actúan en la replicación

 Azidotimidia: Inhibe la transcriptasa reversa, impidiendo la generación del

intermediario ADN ss (+) en retrovirus.
 Interferon: Glicoproteína animal que se inyecta como respuesta a virus de baja
virulencia. Es inespecífica.

Efectos de los virus sobre las células animales

 Ciertos virus, al incorporar su material genético al genoma de la célula que

infectan, pueden provocar mutaciones que se trasmitirán a la descendencia de
la célula. Dichas mutaciones pueden terminar modificando el metabolismo
celular transformándolas en células cancerosas.
 En ciertos casos se producirá el ciclo de vida clásico del virus, el cual infecta
una célula del organismo, se multiplica y provoca la lisis de la misma liberando
partículas víricas que irán infectando más células.
 Ciertos virus pueden ocasionar una infección persistente; en la cual el virus
infecta una célula y se multiplica lentamente, produciendo una baja cantidad
de virones que abandonan la célula de forma permanente a través de poros o
pequeñas lesiones que la célula logra reparar. De este modo no se produce la
lisis de la célula infectada.

108
  Ciertos virus pueden ocasionar una infección latente; en la cual el virus
combinan su material genético con el de la célula anfitriona y entran en un
estado de latencia hasta que por algún factor; como una disminución de las
defensas inmunológicas, se induce la infección. Ej.: VIH o el virus de la
varicela.

Estudios de los virus

➢ Virus de animales o plantas: Se utilizan cultivos de tejido o cultivos celulares

➢ Virus bacterianos: Se utilizan cultivos bacterianos en medio líquido o
semisólido, a los que se infectan con el fago.

Para la obtención de los cultivos de células es necesario:

1. Tratar los tejidos con enzimas para disgregarlos o disociarlos.

2. Utilizar medios adecuados para el mantenimiento y multiplicación de las
células
3. Utilizar células que tengan buenas propiedades de adhesión a placas de
polietileno o de vidrio; lo que permitirá realizar las monocapas sobre las
cuales se estudia la capacidad de infección viral.

En general se pueden utilizar cultivos primarios, que se transfieren periódicamente, o

líneas celulares, que provienen de procesos tumorales, que tiene una capacidad de
multiplicación mayor y propiedades particulares de adhesión.

Cuantificación de los virus

Puede realizarse por métodos físicos y químicos o por su infectividad.

 Microscopía electrónica: Los viriones son demasiado pequeños para poder

ser vistos por microscopia óptica, pero se pueden alcanzar a observar por
microscopia electrónica. Sin embargo, la preparación de las muestras puede
ser demasiado tediosa como para usarse rutinariamente en la cuantificación
de virus; sin hablar del elevado costo de la misma.
 Hemaglutinación: Permite cuantificar suspensiones de virus que presenten la
hemoglutinina en su superficie, la cual les permitirá unir varios glóbulos rojos;
formando un red; y aglutinarlos.
Se realizan diluciones sucesivas de una suspensiones del virus y se la titula
con una cantidad fija de una suspensión de glóbulos rojos. La máxima
dilución que todavía produce aglutinación corresponde al título de la
suspensión del virus.
 Estudios de la infectividad: (síntomas de enfermedad o muerte): Como ciertos
virus producen síntomas de enfermedad o muerte en animales, se puede
determinar la dosis patológica o letal 50; la cual corresponde a la
concentración de virus que produce un síntoma patológico o la muerte en el
50% de los animales de la población bajo estudio.

En la cuantificación de bacteriófagos, se determina la cantidad de unidades

formadora de placa de lisis por ml de muestra (UFP/ml).
Si se diluye un filtrado del bacteriófago lo suficientemente como para que estos se
encuentren muy diluidos y separados entre sí; solamente un fago infectara una
bacteria produciendo su lisis. De esta forma, una unidad infectiva vírica es la unidad
más pequeña que causa un efecto detectable en un hospedador susceptible.

109
Para determinar el número de unidades infectivas víricas en el volumen de la
muestra, se recuenta el número de UFP/ml mediante la técnica de la doble capa de
agar.

1. Se realizan diluciones seriadas del filtrado del fago en solución fisiológica.

2. Se funde y se termoestabiliza a 45 °C los tubos que contienen el agar blando
y se agrega, a cada uno un volumen determinado de un cultivo bacteriano
sensible al fago; el cual debe hallarse en fase exponencial. Esto le permite a
las bacterias tener algún soporte.
3. Se agrega a cada tubo un volumen determinado de la dilución
correspondiente del fago.
4. Se homogeniza y se vierte sobre cajas de Petri que contienen un soporte
solido de agar nutritivo. Se deja solidificar y se incuba.

Si no hay ningún fago en la dilución, obtendremos un césped homogéneo de células y

una opalescencia en la superficie del medio; dado que las bacterias, al
multiplicándose, formaran colonias unas al lado de las otras
Si fagos en la dilución, cada uno infectara a una bacteria. Cumplirá su ciclo lítico
dentro de ella y provocara su lisis junto con la liberación de una gran cantidad de
nuevas partículas virales que infectaran a las bacterias vecinas. De esta forma
siempre se producirá la lisis en forma radial; generando zonas, en el césped, donde
no existen células ya que todas han sido lisadas. Cada una de estas zonas se conoce
como placas de lisis o calvas.
Haciendo un recuento de dichas placas, y conociendo el volumen del inoculo y la
dilución, se determina el título del fago.

110
Bacteriófagos

Son virus que infectan exclusivamente a las bacterias y el término ‘’fago’’ hace
referencia a la ‘’fagocitosis’’ derivo de su capacidad para lisar totalmente a las células
’’como si su las hubiesen comido’’.
Constituyen el grupo de virus más grande conocido y están distribuidos en todas las
partes de la biosfera, llegando incluso a colonizar hábitats inhóspitos; como aguas
termales volcánicas. Sus principales hábitats son los océanos y la tierra vegetal.
Presentan un genoma de tipo ADN o ARN, ss o ds, pero la gran mayoría son ADN
ds.
Los principales fagos se agrupan en 4 conjuntos:

• Fagos icosaedricos sin cola, Ej.: Cystoviridae (ARN ds) o Leviviridae (ARN ss)
• Fagos con cola contráctil Ej.: fago T4 (ADN ds)
• Fagos con cola no contráctil Ej.: Fago λ (ADN ds). Dentro de este grupo
pueden haber fagos con doble capside, y algunos presenta lípidos en su
cabeza.
• Virus filamentosos Ej.: Inoviridae (ADN ss)

Pueden presentar dos ciclos de vida:

• Lítico o virulento: La infección y la multiplicación del fago dentro de la bacteria

conduce a la inmediata destrucción y lisis de la misma. Los fagos que llevan a
cabo este ciclo se los denomina virulentos. Ej.: Virus de la serie T par
• Lisogenico: Incorporan su genoma al genoma bacteriano y quedan en un
estado de latencia, el cual termina a causa de algún factor externo, y da inicio
a una fase lítica. Los fagos que llevan a cabo este ciclo se los denomina
temperados. Ej.: Virus λ

Ciclo lítico para fagos virulentos (serie T par)

1. Fijación: Comprende la adhesión o adsorción a la superficie celular gracias a

las fibras de la cola que reconocer receptores altamente específicos en la
célula hospedadora.
2. Penetración: Las fibras del fago se contraen con el fin de poner en contacto la
placa basal con la membrana externa con el fin de producir un poro por el cual
ingresara el material genético viral a la bacteria.
3. Síntesis de enzimas virales y replicación del ácido nucleico: El fago necesita
hacerse del control de la maquinaria sintética del huésped, para ello sintetiza
un ARNm temprano el cual guiara la producción de diversas proteínas virales.
Esta etapa se divide en 3 estadios:
a. Proteínas tempranas: Son enzimas sintetizadas en bajas cantidades
inmediatamente después de la infección viral. Ayudan a tomar el
control de la célula; como las endonucleasas, o evitan la acción de las
enzimas de restricción de la bacteria sobre el genoma viral.
En esta etapa comienza la síntesis de ARNm intermedio.
b. Síntesis de Proteínas intermedias: Son proteínas que se encuentran
codificadas en el ARNm intermedio y son esenciales para el proceso
de replicación viral; como las polimerasas. Así mismo, la acción previa
de las endonucleasas resulta fundamental para dicho proceso.
En esta etapa comienza la síntesis de ARNm tardío.

111
 c. Síntesis de Proteínas tardías: Son proteínas estructurales, codificadas
en el ARNm tardío, y sintetizadas en grandes cantidades que formaran
parte de la capside o de la cola del fago.
Al final de esta etapa se produce el autoensamblaje de todos los
componentes del fago y la producción de enzimas líticas.
4. Liberación: Debido a la acción de las enzimas líticas se digieren la pared o/y
membrana celular desde adentro hacia afuera para producir la liberación de
las partículas virales.

Todo el proceso dura alrededor de 20 minutos, siendo muy rápido. La infección viral
en células animales presenta un ciclo que puede demora varias horas.
Las etapas de absorción y penetración ocurren relativamente rápido, en unos pocos
minutos, mientras que la síntesis de proteínas es la etapa de mayor duración.

Esta serie de etapas fueron descubiertas por Delbruck y Ellie mediante un

experimento que consistía en:

1. Poner en contacto, por un corto tiempo, una suspensión de [Link] y de fago

T4; mezclándolas.
2. Diluir inmediatamente la muestra y se separar las bacterias del sobrenadante.
3. Medir el número de UFP para cuantificar la cantidad de fago libre en dicho
sobrenadante.

De esta forma, ellos tenían la garantía de que el número de fagos que existía en el
sobrenadante correspondía solamente a los replicados dentro de células que habían
sido infectadas durante el contacto inicial o la primera infección. Al diluir la mezcla, la
diseminación de las células bacterianas sumado al hecho de que solamente el fago
se topa con estas de manera aleatoria; hacen que la probabilidad de que una célula
se infecte por un virion generado en la primera explosión, sea muy baja.

4. Graficar UFP/ml en función del Tiempo de incubación de la mezcla diluida.

Como resultado del experimento observaron que:

112
 • Solo se detectaba la presencia de fagos libre alrededor d los 20 minutos de
haber realizado la infección; mientras que los sobrenadantes que derivaban
de tiempos de incubación menores a 20 minutos no generaban ninguna placa
de lisis.
• Desde los 20 hasta los 30 minutos de incubación, existía un rápido aumento
del número de fagos libres en los sobrenadantes, reflejado en el aumento de
las UFP.

Esos 20 minutos corresponde al periodo de latencia, en el cual ocurre el ciclo de vida

del fago.

Nuevamente repitieron el experimento pero esta vez se concentraron en las células

bacterianas a las cuales lisaron con CHCl3 y midieron la cantidad de fagos que había
en el interior de las células.
Descubrieron que, aproximadamente antes de los 7 minutos, no existía ninguna
partícula viral pero, después de dicho tiempo, si se detectaron partículas virales
completas e infectivas que no habían sido liberadas, ya fuera por una baja
concentración de enzimas líticas o por la falta de algún componente del virion.

De esta forma establecieron dos etapas para el proceso de infección viral:

• Etapa de eclipse: Abarca desde la fijación hasta la terminación de la

replicación viral. En dicho periodo no se puede detectar la presencia de fago
ni en sobre nadante ni en la célula.
• Etapa de maduración: Abarca la síntesis de proteínas tardías y el ensamblaje
de las mismas; en las cuales el fago ya puede ser detectado pero únicamente
dentro de la célula, hasta la liberación; en la cual el fago ya es detectable en el
sobrenadante.

Existe un máximo de partículas virales que se puede ser detectado, llamado

rendimiento o tamaño de explosión, el cual dependerá del tamaño del genoma del
fago y el de la célula huésped; dado que los nucleótidos bacterianos necesarios para
la síntesis del genoma viral son limitados. Por lo tanto, el rendimiento tendrá un valor
constante para una relación fago-bacteria determinada.
Hoy en día, este procedimiento se continúa realizando para conocer la cantidad de
partículas virales que se producen por célula y así determinar la cantidad infectiva
de un fago.

Características del genoma viral

Genoma T4. Modelo de fago con ADN ds

La síntesis del ARNm temprano es sumamente rápida debido a la utilización de la

banda (-) de ADN como molde.
El genoma está conformado por una molécula lineal de ADN bicatenaria la cual
presenta:

• 5-metilcitosina, una base modificada que evita que sea reconocido por la
endonucleasas bacterianas.
• Extremos redundantes.

113
Cuando el bacteriófago infecta una célula hospedadora, su genoma se replica en
primer lugar como una unidad y después, debido a la hidrolizacion de los extremos
redundantes que darán origen a extremos cohesivos, se recombinaran varias
unidades genómicas para formar una larga molécula de DNA llamada concatémero.
Esto ofrece una mayor resistencia a las endonucleasas bacterianas y, durante el
empaquetamiento del ADN viral en las capasides, se cortaran segmentos de ADN
bicatenario del concatémero lo bastante largos para llenar la cabeza de un fago.

Genoma Ф X174. Modelo de fago con ADN ss con síntesis de ADN intermediario.

Como el ADN es ss (+) necesita de la ADN polimerasa bacteriana para sintetizar un

intermediario ADN ds el cual será la verdadera forma replicativa del fago.
La banda (-) de dicho intermediario se utilizara como molde tanto para la síntesis de
ARNm temprano; a través de la ARN polimerasa bacteriana, como para la de ADN
ss (+) durante la replicación del genoma viral.
El ciclo es de mayor duración debido a la formación del intermediario ADN ds.

Genoma MS2 y Qβ. Modelo ARN ss (+)

El genoma puede actuar como ARNm temprano, el cual codificara para varias
enzimas tempranas, entre ellas una replicasa la cual actuará sobre este mismo
originando un intermediario ARN ds el cual será la verdadera forma replicativa.
Utilizando como molde la banda (-) contenida en dicho intermediario, se generan
copias de la banda (+) necesarias para la síntesis de proteínas víricas y como
componente del genoma del fago.
Este tipo de fagos atacan a la [Link].

Genoma Ф 6. Único que se conoce con ARN ds

El fago tiene la particular de presentar una envoltura similar a la de los virus que
infectan células animales. En la replicación, la ARN polimerasa, que se encuentra
incorporada en la capside, transcribe 3 segmentos del genoma donde cada uno
transcribirá un tipo de ARNm. No se conocer aún el mecanismo exacto.
Este fago ataca a Pseudomonas phaseolicola

Todos estos fagos vistos hasta aquí son exclusivamente virulentos.

Ciclo de lisogenia para fagos temperados. Modelo Fago λ

Los fagos temperados son capaces de insertar, en el cromosoma bacteriano, su

propio ácido nucleico, el cual quedara en un estado quiescente y reprimido
prácticamente por tiempo indefinido. En este estado, al material genético viral se lo
conoce como profago; siendo avirulento pero con potencial para producir fagos.
Las bacterias que presentan un profago en su genoma se denominaran bacterias
lisogenizadas, y el proceso por el cual se generan se llama lisogenia.
En el ciclo lisogenico, el genoma viral se inserta en el cromosoma bacteriano por

114
medio de una recombinación reciproca única que se produce en una región
especifica de homología entre el ácido nucleico viral y el bacteriano; conocidas como
secuencias de inserción attP en el genoma fagico y attB en el bacteriano. Estas
secuencias tienen la característica de ocupar posiciones fijas dentro de ambos
genomas, permitiendo que la inserción viral se produzca siempre en una determinada
región del genoma hospedador.
Una vez que se ha incorporado, el profago se replicará conjuntamente lo haga el
genoma bacteriano; siendo transmitido a las sucesivas células hijas en cada
división.
En algún momento en la vida del profago, el proceso de inducción pondrá fin al
estado lisogenico. La inducción se produce por la exposición de la célula lisogenizada
a condiciones ambientales adversas provocándole diferentes tipos de stress como:

 Nutricional: Escasez de nutrientes.

 Físico: Temperatura, desecación, UV y radiaciones ionizantes
 Químico: Sustancias mutagenicos, pH.

Estos y más factores desencadenaran la acción del sistema SOS bacteriano; el cual
responde y repara los daños producidos a nivel del ácido nucleico bacteriano. El
accionar de este sistema le permitirá al profago abandonar el genoma bacteriano,
volviéndose virulento, y entrar en un ciclo lítico que llevara finalmente a la producción
de nuevas partículas virales y a la lisis celular.

Para el estudio del ciclo lisogenico se utiliza como modelo al fago λ, el cual:

• Contiene un genoma lineal de ADN ds el cual, una vez dentro de la bacteria,

se circularizara por unión de sus extremos cohesivos.
• Puede realizar un ciclo lítico o lisogenico.
• Dependiendo del ciclo que realice, el genoma se replicara de forma:
o Activa: Independiente de la replicación del cromosoma del hospedador
y se da a través del sistema de circulo rodantes, el cual genera
múltiples moléculas lineales de ADN. Se da en el ciclo lítico
o Pasiva: Es realizada por la replicación del cromosoma bacteriano en el
cual el genoma viral se haya integrado. Se da en el ciclo lisogenico.

Los procesos de fijación y penetración son similares a los producidos por los virus
virulentos, siendo necesaria la presencia de determinados receptores para que las
primeras etapas de la infección viral tengan éxito.
El desarrollo de un determinado tipo de ciclo, por parte del fago, estará finamente
controlado por una región principal reguladora de su genoma, la cual contiene genes
cuyos productos son los responsables moleculares de dicha regulación.
Independientemente del ciclo, inicialmente se produce la transcripción temprana, la
cual consiste en la producción de fragmentos de ARNm cortos por acción de la ARN
polimerasa bacteriana, a ambos lados del gen C1:

❖ La transcripción hacia la izquierda de C1 expresa el gen N, el cual codifica

para la proteína N. Esta cumple una función de antiterminador de la
transcripción.
❖ La transcripción hacia la derecha C1 expresa el gen Cro; el cual codifica para
la proteína Cro. Esta es una proteína represora cuya concentración
determinara el desarrollo de un ciclo lítico o lisogenico.

115
La transcripción temprana se extiende hasta alcanzar el terminador tL1; hacia la
izquierda, y tR2; hacia la derecha.

Desarrollo del ciclo lítico:

Durante la transcripción intermedia, la proteína N actuará sobre los terminadores de

la transcripción temprana (tL1 y tR1) permitiendo la transcripción del gen C3 y N a la
izquierda y del gen Cro, C2, O, P y Q a la derecha hasta alcanzar un terminador
un poco posterior al gen Q.
Esto permite aumentar enormemente la concentración de Cro que, junto a la
ausencia de la transcripción del gen C1, determinara el desarrollo indefectible de
un ciclo lítico.
Todo esto se debe a que:

 El gen C1 codifica para la proteína represora λ, la cual lleva al fago a

desarrollar un ciclo lisogenico.
 El gen C2 codifica para la proteína C2 fundamental para la transcripción de
C1; pero al encontrase en bajas concentraciones y al ser rápidamente
degrada por las peptidasas bacterianas no puede cumplir su objetivo.
 El gen C3 codifica para una proteína que protege a C2 de la acción de las
peptidasas bacterianas; pero al encontrase en tan bajas concentraciones no
puede evitar la degradación de C2.

La acción de las proteínas codificadas por los genes O y P darán lugar al proceso de
replicación del genoma viral necesario para la producción de las nuevas particular
virales.

Durante la transcripción tardía, las altas concentraciones de Cro bloquea los sitios
promotores pL y pR que se encuentran hacia la izquierda y derecha del gen C1,
respectivamente, impidiendo la transcripción y traducción de los genes C1, N, Cro,

116
C2, C3, O y P.
El gen Q codifica para un antiterminador el cual actúa sobre un promotor que se
encuentra a su derecha y permitirá la transcripción de los genes S y R que codifican
para proteínas virales estructurales y las enzimas líticas.

La liberación de las partículas virales de una bacteria Gram (-) requiere de la

formación de poros en la membrana interna. De esta forma, las endolisinas virales
escaparan al periplasma en donde degradaran el PG. La salida a través de la
membrana externa de LPS, aunque gruesa, es sencilla debido a la naturaleza de la
misma.

Desarrollo del ciclo lisogenico:

Si durante la transcripción intermedia hay una producción suficiente de C3 y C2; esta

última no podrá ser degradada por las peptidasas bacterianas al encontrarse
protegida por C3.
C2 se une a la ARN polimerasa permitiendo que encuentre identidad y se una con
una región promotora de establecimiento de lisogenia (pRE) que se encuentra a la
derecha e izquierda del gen Cro y C2, respectivamente. Al reconocer esa región, la
enzima puede transcribir en sentido inverso; es decir hacia la izquierda de C2,
pasando y transcribiendo el gen C1 que codifica para el represor λ, proteína que
determinara el desarrollo del ciclo lisogenico.
Esta se unirá a sitios operadores ubicados a ambos lados del gen C1; oL hacia la
izquierda y oR hacia la derecha, desde las regiones que presentan mayor afinidad
para el represor λ (1); siendo las más externas al gen C1, hacia las de menor afinidad
(3); siendo las más próximas al mismo.
De esta forma, impedirán la unión de la ARN polimerasa a los sitios promotores pR y
pL, bloqueando la transcripción de todos los genes que se encuentran tanto a la

117
derecha como a la izquierda del gen C1; incluido Cro, el determinante del ciclo lítico.
Por ende, desde que se sintetiza las primeras moléculas del represor λ queda
automáticamente bloqueado el ciclo lítico.

Para el mantenimiento de la lisogenia, existe un segundo promotor; el promotor de

mantenimiento (pRM), muy cercano al gen C1, el cual no se ve afectado por la falta
de proteína C2, originada por el cese casi total en la transcripción de los genes
reguladores.
Aunque las moléculas del represor λ ocupen los segmento intermedio (2) de los
operadores oL y oR, la transcripción de C1 podrá continua gracias a que la ARN
polimerasa será capaz de unirse al pRM sin necesitar la presencia de C2.
Cuando la concentración del represor λ es muy elevada, este podrá unirse a las
regiones de menor afinidad de oR y oL, impidiendo la asociación entre la ARN
polimerasa y pRM inhibiendo su propia transcripción; deteniéndose toda transcripción
(ya no ha habrá transcripción del gen C1 ni de los adyacentes a él).
Por la acción de las proteasas bacterias y al no haber transcripción del gen C1, la
concentración del represor λ cae, produciendo la disociación de las moléculas en la
región de menor afinidad de los operadores, permitiendo nuevamente la unión de la
ARN polimerasa y el pRM y la transcripción del gen C1.
De este modo, el gen C1 autoregula su transcripción; evitando una producción
descomunal de represor y un gasto desmedido e inútil de aminoácidos.

Con estos mecanismos celulares, el fago bloquea completamente la lisis y establece

un estado lisogenico. La bacteria sigue estando viva, siendo sus proteasas son las
encargadas de actuar sobre la concentración del represor λ.

Durante la inducción, una de las respuestas del sistema SOS constituye la acción de
endonucleasas que digieren el gen C1, desprendiéndolo de oR y oL. Así, se reanuda
la transcripción de los genes que se encontraban a la izquierda y, mayormente, a la
derecha del gen C1.

118
Esto provoca un aumento, principalmente, en la concentración de proteína Cro lo que,
sumado a la disminución progresiva del represor λ, desarrolla el ciclo lítico.

Consecuencia de una infección viral

En el caso de fagos virulentos, la consecuencia de la infección es la lisis celular.

En el caso de fagos temperados, cuando su genoma se inserta en el ácido nucleico
bacteriano, pueden ocurrir:

• Aporte información extra completa y codificada haciendo que en las divisiones

sucesivas de la bacteria, se pueda expresar una proteína codificada en el
genoma viral.
Ej.: Muchas de las toxinas producidas por bacterias como Conybacterium
diphteriae, Clostridyum botulinum y Vibrio cholerae son en realidad toxinas
virales producidas solamente en bacterias lisogenizadas.
• Transferencia de material genético entre bacterias mediada por fagos;
generando el fenómeno de transducción.

Otras consecuencias:

Ecológicas: En los océanos existen más fagos que bacterias; tanto herotrofas como
autótrofas. Por ende, estos virus:

• Controlaran la población de bacterias marinas que sirven de alimento para

animales y fitoplancton.
Por medio de su ciclo lítico, influyen en el ciclo del carbono y nitrógeno.
• Pueden alterar completamente la ecología de los mares

Diversidad: Debido a la transferencia de material genético entre bacterias mediada

por fagos, en los próximos años nos encontremos con bacterias totalmente diferentes
de las que hoy se pueden aislar.

La replicación en círculo rodante es un proceso de replicación unidireccional de

ácido nucleico que permite sintetizar rápidamente múltiples copias de moléculas
circulares de ADN o ARN.
Esta replicación es inducida por una proteína iniciadora la cual muesca una hebra de
la molécula de ADN bicatenaria circular en un sitio llamado origen de doble cadena.
La proteína continuará unida al extremo 5' fosfato de la cadena muescada mientras
que el extremo libre 3' hidroxilo servirá como cebador para la síntesis de ADN por
la ADN polimerasa, la cual utilizara la hebra continua como molde. De esta forma, la
replicación ocurre alrededor de la molécula circular de AND, desplazando la hebra
muescada como una molécula de ADN monocatenario gracias a la helicasa PcrA
Tras una continua repetición en tándem, la replicación producirá múltiples copias
lineales monocatenarias contenidas en un concatémero.

119
Hongos

Generalidades

• Son organismos eucariotas, con células que presentan un mayor tamaño que
las procariotas y organulos membranosos.
• Conforman un grupo muy diverso que abarcan tanto microorganismos
unicelulares como organismos pluricelulares
o Hongos levaduriformes o levaduras: Siempre unicelulares. No existe
distinción entre el cuerpo vegetativo y reproductivo del hongo.
o Hongos filamentosos: Son pluricelulares. Existe distinción entre el
cuerpo vegetativo (haploide) y reproductivo del hongo.
o Setas: Organismos pluricelulares que presentan un cuerpo fructífero.
• Se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza. Ej.: Encontrándose
mas comúnmente en el suelo, plantas, superficies sólidas, agua, animales,
etc.
• Pertenecen al reino Fungi.
• Presentan pared celular, producen esporas y no contienen clorofila.
• Son todos heterótrofos y su nutrición es por absorción. No existen hongos
autótrofos y son menos exigentes, nutricionalmente, que las bacterias.
• Algunos hongos son parásitos y atacan otros microorganismos, vegetales y
animales.

Ciclo de vida

Los hongos generan esporas que actúan como elementos de resistencia y

diseminación, por medio de las cuales el hongo se propaga; fundamentalmente los
hongos filamentosos.
El esporo germinara dando lugar a una célula vegetativa que iniciara un proceso de
crecimiento y producción de biomasa, para que nuevamente ocurra la
esporulación y la formación de nuevos elementos de propagación.

Los hongos son vitales en la biosfera ya que:

 Participan en el ciclo de la materia viva: Degradan la materia orgánica muerta

provocando la liberación y el retorno de nutrientes inorgánicos y orgánicos
hacia la biosfera. Esto se debe a su gran capacidad para producir enzimas
extracelulares hidrolíticas; como proteasas, lipasas, peptidas y glucosidadas.
 Importantes en la industria alimenticia: Para producir, pan, cerveza, lácteos.
 Importantes en la Agricultura: Pueden ser perjudiciales; como los
fitopatogenos, pero también beneficiosos.
 Son productores de agentes antimicrobianos: Como
o ATB como penicilina y cefalosporina
o Antifungicos como griseofulvina.

También pueden producir otras sustancias como hormonas esteroideas,

ácidos orgánicos y sustancias hipotensoras; como el ácido fusarico.

Pared celular

120
Presentan una pared celular distinta a la de las bacterias, conformada por material
fibrilar complejo inmerso en una matriz amorfa. Se la puede dividir en tres
estructuras:

I. Estructura cristalina o rígida:

Está conformada por fibrillas cuya naturaleza química puede ser de:

➢ Quitina (polímero de β 1,4 N-acetilglucosamina): Mas común en la mayoría de

los hongos
➢ Celulosa (polímero de glucosa): Abundante en los hongos inferiores como en
el filum Chytridium mycetes.
➢ Quitosano (polímero de glucosamina): Algunos hongos

Estos polímeros β 1,4 forman cadenas rectas que se unen en haces y los haces en
fibrillas.

II. Estructura amorfa:

Constituida principalmente por glucanos y polisacáridos pequeños los cuales

pueden unirse proteínas. También contiene lípidos y sales orgánicas.

La naturaleza química de la pared celular, además de poseer relevancia en la

investigación y propósitos industriales, presenta valor taxonómico ya que varía entre
los diferentes grupos taxonómico:

Capa externa de la pared Capa interna de la pared

Zygomycetes Glucano amorfo con uniones Microfibrillas de quitina
β 1,3 y β 1,6
Ascomycetes Glucano amorfo con uniones Contiene proteínas por arriba de
β 1,3 y β 1,6 las microfibrillas de quitina
Basidiomycetes Glucano amorfo con uniones Microfibrillas de quitina y proteínas
β 1,3 y β 1,6
Levaduras Glucano amorfo con uniones Microfibrillas de mananos, β-
β 1,3 y β 1,6; y proteínas glucanos y algo de quitina;
unidas. volviendo más plástica la pared
celular, permitiendo la forma
esférica más que tubular en las
células.
Chytridiomycetes Glucano amorfo con uniones Microfibrillas de celulosa
β 1,3 y β 1,6

Morfología

Los hongos pueden ser:

o Unicelulares y microscópicos; llamados levaduras u hongos levaduriformes.

o Pluricelular y de forma ramificada; llamados hongos filamentosos.

La unidad vegetativa básica se la conoce como talo, comprende todas las estructuras
de la célula eucariota y conformara el cuerpo del hongo. Es la estructura que
desempeña todas las funciones del hongo; como la nutrición, reproducción y

121
diseminación.
Sin importar el crecimiento o la diferenciación morfológica que experimente un hongo
en función de su género o especie, siempre habrá una estructura característica que
se repetirá constantemente; siendo esta la unidad vegetativa básica o el talo.
De esta forma, el talo puede clasificarse, morfológicamente, en:

Talo Unicelular

• Está representado por la misma célula del hongo levaduriforme que

presenta en su citoplasma un solo núcleo.
• Pueden tener distintas formas: esféricas, ovaladas, cilíndricas, triangular, de
limón.
• Generalmente de mayor tamaño que las bacterias; de 5 a 30 µm de largo y 1
a 5 µm de ancho
• Macroscópicamente, las colonias formadas por este tipo de talo presenta un
aspecto blancuzco, homogéneo, de consistencia mantecosa o cremosa.

Los medio más usados para hongos levaduriformes son el Agar Sabouraud, OGA o
YEPD.

Pseudomicelio (estructura intermedia entre talo uni y pluricelular)

Normalmente es producido por un hongo levaduriforme el cual empieza a dividirse

emitiendo un brote o mamelón.
Al producirse la cariocinesis; uno de los núcleos se traslada al mamelón el cual
empieza a crecer pero nunca termina de separarse de la célula madre.
De este frote surgirá otro y así sucesivamente generando una especie de micelio
filamentoso.

Talo pluricelular

• Presente en los hongos filamentosos

• Está representado por hifas multinucleados, tabicado o no.
• El aspecto macroscópico de este talo puede ser algodonoso, velloso, lanoso o
pulverulento y de colores variados; como rojo, rosa, verde, blanco, negro,
amarillo, anaranjado, etc.

El aspecto macroscópico de las colonias nos permite, a simple vista, diferenciar las
levaduras de los hongos filamentosos.
Las hifas son tubos cilíndricos de diámetro variable que conforman los filamentos y
ramificaciones de los hongos filamentosos. Se extienden en todas las direcciones
sobre y dentro del sustrato y pueden existir dos tipos:

➢ No tabicadas, cenocíticas o en sifón: No presentan tabiques pero si un

citoplasma multinucleado en donde los núcleos están distribuidos de una
manera relativamente uniforme. Característico de los Hongos inferiores
➢ Tabicadas o septadas: Las células se encuentran divididas por tabiques que
poseen poros; cuerpos de Woronin, a través de los cuales se produce la
comunicación celular y el desplazamiento de núcleos y elementos
citoplasmáticos. Característico de los Hongos superiores.

En Ascomycetes, los cuerpos de Woronin son estructuras oleosas y osmofílica,

que sella el septo cuando se requiera protegerlo.
122
En Basidiomycetes, presentan un poro de estructura más compleja llamado septo
doliporo.
Este consiste en un canal central estrecho situado en el centro de la pared septal,
formado por el engrosamiento o dilatación de la pared celular en forma de barril o
cilindro. Rodeando ambos extremos del canal, formando una especie de cúpula, se
haya el parentosoma, compuesto por retículo endoplásmico modificado.
Tiene como función controlar el paso de estructuras celulares y está relacionado con
la formación de basidiocarpos.

El conjunto o mata de hifas forman una trama o tejido que se denomina micelio; el
cual cumple diversas funciones, entre ellas la diseminación, nutrición, reproducción,
etc.

Nutrición

Son heterotróficos, no fotosintéticos y adquieren sus nutrientes por absorción. La

nutrición es llevada a cabo por filamentos delgados que penetran en el sustrato;
denominándose rizoides en los hongos saprofitos y haustorios en los hongos
parásitos; los cuales ingresan a la célula huésped por pequeños poros que practican
en la pared de la célula
Producen enzimas extracelulares que degradan macromoléculas orgánicas; siendo
muy importantes desde el punto de vista tecnológico y ambiental. Dicha producción
enzimática puede ser regulada por inducción por sustrato o inhibición por
producto.
Pueden ser:

I. Saprofitos
▪ Viven sobre materia orgánica; como ser célula, quitosanos, hemicelulosa,
lignina, quitina; la cual degrada gracias a su alta capacidad para liberar
enzimas extracelulares. Esto hace que se vuelvan de gran importancia
industrial.
▪ El metabolismo de carbohidratos se produce a través de la vía glicolítica o
TCA.
▪ No fijan N2 atmosférico pero pueden utilizar como fuente de nitrógeno:
o Nitrógeno inorgánico: NO3-, NH4
o Aminoácidos que se encuentre libres en el medio, por captación
directa.
o Fuentes de nitrógeno más complejas: Como proteínas y péptidos que
son degradadas por la acción de las proteasas extracelulares, lo que
provoca la liberación de sus aminoácidos.
• Parásitos: Obtiene sus nutrientes desde un huésped vivo
• Simbióticos: crecen junto con algas, plantas o insectos.

Crecen mejor en condiciones acidas (pH 5,6) con alta humedad y temperaturas entre
20 y 25°C. Si bien requieren macro y micronutrientes, por lo general son poco
exigentes. Algunos presentan otros requerimientos. Ej.: Tiamina, biotina, esteroles,
ácido fólico o nicotínico.
La nutrición es llevada a cabo por filamentos delgados que penetran en el sustrato;
denominándose rizoides en los hongos saprofitos y haustorios en los hongos
parásitos; los cuales ingresan a la célula huésped por pequeños poros que practican
en la pared de la célula.

123
Diseminación

Es llevada a cabo por medio de hifas aéreas no ramificadas; denominadas

estolones, que se extienden en línea recta sobre la superficie en la que se encuentra
el hongo

Crecimiento

El crecimiento de las hifas se da por elongación apical; es decir, por extensión en

longitud desde un extremo de la misma.
Después de la mitosis, comienzan a aparecer movimientos citoplasmáticos
caracterizados por la migración de vesículas del aparato de Golgi hacia el extremo
apical. Estas vesículas se encargan de captar las enzimas producidas en el RER y
transportarlas junto con los precursores de la pared celular. Así dicha maquinara
enzimática podrá comenzar a sintetizar nueva pared, entre otras estructuras, en el
extremo apical para producir el crecimiento apical.

Las vesículas podrán acomodarse de diversas formas, teniendo valor taxonómico:

➢ Se ubican en el extremo apical sin ningún orden particular o al azar,

característico del grupo Oomycete de la subdivisión Diplo-Mastigomicotina
➢ Se alinean formando una o más capas, característico del grupo Zygomycete
de la sub división Zygomicotina
➢ Forman un cuerpo apical, característico de los grupos Ascomycete y
Basidiomycete de la sub división Ascomicotina y Basidiomicotina,
respectivamente.

Reproducción

Pueden reproducirse de forma: sexual o asexual

A. Reproducción asexual

En este tipo de reproducción, la unidad reproductiva es el esporo llamado

genéricamente conidio. Se caracterizan principalmente por estar separados del
cuerpo del hongo, tener bajo contenido de agua y más sustancias de reserva que la
célula vegetativa, no presentan movimientos citoplasmáticos y muestran dormancia.
Constituyen una parte del hongo altamente especializado para la reproducción,
sobrevida y diseminación.
En hongos levaduriformes, la reproducción asexual y la producción de conidios suele
realizarse por:

I. Brotacion

124
Cuando el hongo se está por reproducir, concomitantemente aumenta la turgencia de
su citoplasma, se divide el núcleo y se forma un anillo de quitina. Debido a la
turgencia que experimenta el citoplasma, parte de él es expulsado a través del anillo
de quitina arrastrando consigo a uno de los núcleos. De esta manera se forma el
brote o mamelón, dando origen al blastoconidio. El prefijo ‘’blato’’ se debe a que el
conidio todavía sigue unido a la madre.
El brote se estrangula separando al conidio de la célula madre, la cual quedara con
una cicatriz de quitina de la cual no podrá volver a brotar otro conidio, pero si en
cualquier otra sección de la célula madre.

II. Fisión binaria

Dicho proceso es similar al que ocurre en procariotas.

En los hongos filamentosos, los conidios pueden formarse directamente de cualquier

parte del micelio o de estructuras especializadas. Aun así, ambos generaran
exosporos asexuales.

Del micelio:

III. Fragmentación

Puede producir:

1. Artroconidios: En un momento determinado, y previa división nuclear, se

producirá el tabicamiento (en el caso de hifas cenocitas), la condensación del
citoplasma y el engrosamiento intercalar de las paredes de las células que
conforman la hifa.
La fragmentación de la hifa a nivel del septo dará origen a los artroconidios.
Ej.: Geotrichum.
2. Clamidoconidios: Se forman por diferenciación celular, en la cual una célula
de la hifa aumenta de tamaño; debido a la acumulación de materias
alimenticias, y se rodea de una pared celular muy gruesa y se condensa su
citoplasma.
Se pueden hallar clamidoconidios tanto en hongos levaduriformes; como
Candida albicans, como en filamentosos. En estos últimos, el clamidioconidio
puede ser:
a. Terminal: Si se desarrolla a partir de una célula que se haya en el
extremo de la hifa.
b. Intercalar: Si se desarrolla a partir de una célula que se haya en una
región media de la hifa.

De estructuras especializadas:

IV. Conidioesporos

Estos exosporos asexuales se forman a partir de estructuras especializadas

denominadas conidióforos.
Los conidióforos se pueden encontrar:

i. Aislados

125
➢ En el género Aspergillus; la hifa fértil que dará origen al conidióforo crece y se
diferencia generando una célula pie que dará lugar al conidióforo; el cual nace
como una rama erecta, tipo tallo no septado. Este sufrirá un ensanchamiento para
formar la vesícula aspergilar sobre la cual se dispondrán células en forma de
botella llamadas fialides. Los coniosporos se formaran en el extremo de las
fialides en forma sucesiva disponiéndose en cadena.
En la generación del conidióforo y de los conidiosporos participa únicamente una
sola hifa que se ira diferenciando dando origen a todas las estructuras.
➢ En el género Penicillum, el conidióforo se ramifica en forma de escoba o pincel,
formando metulas, las cuales sostendrán grupos de fialides que llevaran en su
extremo la cadena de conidiosporos.

Como los conidióforos y conidiosporos se producen en gran abundancia, es su color

el que predomina sobre la colonia que cubre, de manera que estas pareciesen ser
negras, castañas o verdes, dependiendo de la especie del hongo y del medio en
donde crece.

ii. Reunidos:

➢ Coremios: Agrupación de hifas fértiles reunidas en una especie de haz o cuerda

que sostiene a los conidióforos, es parecida a un ramo de flores.
➢ Esporodoquios: Conjunto corto de conidióforos sumamente apretados entre si
formando un cuerpo maso o menos resistente, en forma de plancha.

iii. En cuerpos fructíferos:

126
Los cuerpos fructíferos se forman cuando el hongo está parasitando un tejido vegetal.

➢ Picnidios: Tiene forma de recipiente protector o de bolsa; la cual se encuentra

inserta en el tejido vegetal, en cuyo interior se hayan los conidióforos. Puede ser
completamente cerrado o presentar una abertura llamada ostiolo.
➢ Acervuli: Formada por una masa de hifas agrupadas en forma de plato. Presenta
una estructura similar a los esporodoquios, el cual se haya parasitando un tejido
vegetal.

V. Esporangiosporos

Son endosporos asexuales ya que se forman y se encuentran contenidos dentro de

una estructura especializada denominada esporangio.
El esporangio surge como una dilatación globosa del extremo de una hifa fértil
llamada esporgangioforo.
El esporangio crece y entra en una fase de constantes procesos mitóticos. Su
citoplasma se condensa alrededor de los núcleos y, conjuntamente con las vesículas
de Golgi, se forma la pared celular alrededor de los esporangiosporos. Estos serán
liberados a través de poros que se generan al destruir la delgada pared esporangial.
El género Rhizopus, mientras se produce el ensanchamiento del esporangio, la pared
apical del esporangioforo crece y se introduce dentro de él generando la columela.
Esta característica los diferencia de otros géneros, como el Aspergillus.
Otros géneros que generan esporangiosporos son Absidia y Mucor.

Tanto los esporangiosporos, conidiosporos y el resto de exoesporos son

INMOVILES.

VI. Zoosporos

Son endoesporos asexuales móviles debido a la presencia de 1 o 2 flagelos. Se

producen dentro de una estructura especial llamada zoosporangio. Se hallan
presentes en hongos inferiores y acuáticos como los de la subdivisión Diplo-

127
Mastigomicotina y
Haplo-Mastigomicotina.

B. Reproducción sexual

Involucra la unión de gametos móviles; los cuales son células sexuales, o hifas
vegetativas.
Particularmente, la reproducción sexual mediada por la fusión de células sexuales
abarca dos procesos:

✓ Plasmogamia: Se produce la fusión de la pared celular y la mezcla del

citoplasma de los progenitores compatibles.
✓ Cariogamia: Consiste en la fusión de los dos núcleos haploides (n) para
generar un zigote que constituye el periodo diploide (2n) del hongo.

La totalidad del proceso se denomina singamia.

El zigote, por medio de la meiosis, generara núcleos haploides los cuales se
rodearan de citoplasma y una pared celular constituyendo los esporos sexuales.
Los esporos sexuales pueden ser:

I. Internos

Ascoporos: Son esporos originados dentro de un saco o bolsa, llamado asco.

Por lo general, los ascosporos se encuentran en múltiplo de 4. Involucra la
plasmogamia y cariogamia de 2 células sexuales o gametos (n), lo cual
genera un zigote (2n). De este surgirá, por meiosis, 4 células haploides
encerradas en un asco, que luego reventara y liberara los ascoporos.
Puede ocurrir un proceso mitótico en el asco joven que lleve a la generación
de 8 ascosporos en vez de 4.
Los hongos productores de ascosporos pertenecen a la subdivisión
Ascomycotina; pudiendo ser:

a. Levaduras perfectas. Ej.: Saccharomyces y Schizosaccharomyces

b. Hongos filamentosos.

En las levaduras los ascos se encuentran libres, pero en los hongos

filamentosos, estos se encuentran incluido en un cuerpo que los contiene
llamado ascocarpo.
Existen diferentes tipos de ascocarpos:

➢ Cleistotecio: Estructura esférica que contiene en su interior a los ascos

➢ Peritecio: Estructura en forma de pera que contiene en su interior a los
ascos

128
 ➢ Apotecio: Estructura en forma de copa en donde los ascos se hayan
recubriendo su borde.

ii. Oosporos: Se forman por la unión de dos células sexuales o gametos.

Del micelio del hongo (2n) se diferencia un órgano sexual femenino y uno
masculino delgado que se encuentra en el interior del femenino que se
denominan oogonio y anteridio respectivamente. En ambos órganos se
producirá la meiosis que dará como resultado gametos sexuales (n).
El anteridio liberara anterozoides; gametos masculinos flagelados, que viajan
y fertilizan la oosfera; gameto femenino inmóvil, que se haya en el interior del
oogonio, generando así un zigote o oósporo (2n).
La oospora presenta una pared celular gruesa y actúa como un elemento de
resistencia y diseminación del hongo.
Cuando las condiciones son adecuadas, esta germinara produciendo hifas y
un nuevo micelio.

iii. Zigosporos: Se forman por la unión de una hifa (+) y (-). Ambas emitirán
prolongaciones o mamelones que se pondrán en contacto y formaran el
progametangio. La división entre ambas comenzara a perderse, dando lugar a
la plasmogamia y posteriormente a la cariogamia. Esto generara un zigote
diploide el cual se rodea de hifas protectoras y sufre un proceso de meiosis
generando 4 células haploides; los zigosporos (n).
Dichos esporos germinaran produciendo un esporfangioforo, que dará lugar al
esporangio y a la producción de esporangiosporos.

II. Externos

i. Basidiosporos: Su formación involucra el proceso de plasmogamia entre dos

hifas de polaridades opuestas; (+) y (-). Si bien existe fusión del citoplasma, no
se produce la cariogamia de ambos núcleos, de este modo, todas las hifas
son diploides pero por el hecho de poseer dos núcleos haploides.

Para evitar la presencia de dos núcleos iguales durante el crecimiento, la célula

terminal de la hifa emite un mamelón el cual, después de haberse producido la
mitosis en dicha célula, conducirá a una de las copias de uno de los núcleos a la
porción basal de la misma, sorteando el septo que se forma entre las futuras células
hijas.

Esto continúa hasta la formación de los esporos; en donde se produce la mitosis de

los núcleos y la diferenciación de la hifa terminal en basides, de las cuales se
formaran sacos que serán ocupados por los núcleos para dar lugar a los
basidioporos.

129
Clasificación

Los niveles taxonómicos con los que se clasifican a los hongos son Dominio, Reino,
Phylum o División, Clase, Orden, Familia, Género, Especie.
Antiguamente el reino Fungi se encontraba dividido en dos grandes phylums:

• MYXOMYCOTA (hongos mucilaginosos)

• EUMYCOTA (hongos verdaderos)

Si bien existen discrepancias, el phylum Eumycota fue desglosado en 6 nuevos

phylums:

• Deutoromycota
• Ascomycota
• Zygomycota
• Basidiomycota
• Glomeromycota
• Chytridiomycota

Hasta hace un tiempo se hablaba que esta clasificación era monofiletica; es decir
todos los hongos que se hayan incluidos en alguno de estos phylums o divisiones
evolucionaron a partir de una población ancestral común. Hoy en día existen dudas
sobre la base filogenética del phylum Deuteromycota y se cree que podrían derivar de
una rama ancestral diferente al resto de los demás phylums.

Morfológicamente, a los organismos que integran el reino fungi se los puede clasificar
en:

• Mohos: Como los géneros Aspergillus, Penicillum y Rhizopus.

• Setas: Aquellos hongos que presentan un cuerpo de fructificación
• Levaduras

Actualmente, según la clasificacion en base al ARN 18s, la division mastigomycota; la

cual contenia a la Chytridiomycota, se desglosara en dos sub-divisiones:

▪ Haplomastigomicotina
▪ Diplomastigomicotina

División Myxomycota

130
Tienen, como principal característica, la ausencia de pared celular.
Los myxomicetos pueden adoptar 2 formas distintas durante el resto de su vida:

 Forma ameboide unicelular que se mueve mediante pseudópodos o flagelos,

las cuales se denominan mixamebas.
 Bajo ciertas condiciones se transforman en plasmodios; grandes masas
citoplasmáticas multinucleadas en donde no existe una separación entre las
células, o en pseudoplasmodios, constituidos por la agregación de amebas
individuales.
Esta es la etapa que normalmente se observa como moho mucilaginoso.

Algunas clases de importantes son:

• Acrasiomycetes: hongos mucosos celulares, presentan plasmodios

• Mixomycetes: hongos mucosos acelulares, no presentan plasmodios
• Plasmodiophoromycetes: parásitos de las plantas
• Labyrinthulomycetes: parásitos de algas.

Ciclo asexual-Dimorfismo

Las mixamebas son células uninucleadas, haploides, que no presentan pared

celular y que se alimentan mediante la fagocitación, usualmente, de bacterias.
Cuando hay agua en el medio, la mixameba puede diferenciarse en una célula
biflagelada nadadora. Las mixamebas se reproducen asexualmente mediante mitosis,
proliferando de forma indefinida mientras haya nutrientes y el medio ambiente
continúe siendo favorable.
Bajo determinadas condiciones se desarrolla la etapa de agregación la cual varía
dependiendo del grupo concreto de mixomiceto:
• En Protostelea, las amebas dan directamente a los cuerpos fructíferos.
• En Dictyostelea se forman pseudoplasmodios
• En Myxogastrea, las mixamebas actúan como gametos fusionándose para dar
lugar a un zigoto, del cual se desarrollara un plasmodio.
En el caso particular de Dietyostellum discoideus, después de la agregación se
forma una especie de filamento que dará lugar a un saco o esporangio del cual se
originaran, por mitosis, los esporos. Estos son normalmente globosos, uninucleados,
haploides y carentes de pared celular.
La germinación de los mismos dará lugar a una mixameba completándose el ciclo.

División Eumycota

Sub-División Haplomastigomicotina

La clase Chytridiomycetes se caracteriza por tener una reproducción asexual en la

cual produce esporos móviles, los zoosporos. Presenta un talo muy primitivo
conformado por un saco, el cual contiene los zoosporos, carente de hifas y de
micelios.
Presenta rizoides, que le permiten sujetarse al sustrato y también nutrirse.
Habitan, principalmente ambientes acuáticos.

Sub-División Diplomastigomicotina

La clase Oomycetes presenta una reproducción sexual mediada por la producción de

oósporos.

131
Los oomycetes presentan hifas cenocíticas, mientras que los Chytridiomycetes, al ser
tan primitivos, no presentan hifas como tales.

Sub-División Zygomicotina

La reproducción asexual se da por medio de la producción de esporangiosporos.

La reproducción sexual se da por medio de la producción de zigosporos.

Sub-División Ascomicotina

En esta subdivisión podemos encontrar tanto hongos levaduriformes como

filamentosos.
Los levaduriformes pueden llegar a formar pseudomicelio y presentan:

• Un ciclo de reproducción asexual:

o Haploide; la cual se da por brotacion.
o Diploide.
• Un ciclo de reproducción sexual diploide; mediada por la formación de
ascosporos.

Los hongos filamentosos presentaran:

• Una reproducción sexual mediada por ascos

• Una reproducción asexual mediada por conidiosporos.

Sub-División Basidiomicotina

Esta sub división abarca los hongos de sombrero y las setas.

La reproducción sexual esta mediada por basidiosporos.

Sub-división Deutoromycotina

• Son llamados hongos imperfectos,

• No se les conoce reproducción sexual.
• Son generalmente patógenos oportunistas,
• Tienen otra base filogénica

Ej.: Levaduriformes →Candydas,

Filamentosos → Aspreguillus y Penicilluim.

132
Protozoos

Generalidades

• Microorganismos unicelulares eucariotas

• Son heterótrofos
• Incoloros
• Presentan un tamaño variable y mayor que las procariotas:
o Leishmania donovani: Mide entre 1 a 4 mm.
o Amoeba proteus: Puede medir 600 mm o más.
• Forman quistes, sobre todo aquellos protozoos parasitarios, dentro de los tejidos
animales.
• Carecen de clorofila, al igual que los hongos, pero a diferencia de ellos no poseen
pared celular ni cuerpo fructífero.
• Pueden encontrarse libres en agua dulce y marinas; como en el caso de un gran
número de parásitos de humanos que causan malaria, disenterías, leishmaniasis.
Otros se encuentran en el suelo o en hábitat aéreos sobre los árboles.
• Presentan un carácter distintivo y taxonómico que es la Movilidad. Pueden moverse
por medio de flagelos, cilias o pseudopodos. En este último caso, el protozoo
desarrollara un movimiento ameboide.

Si bien algunos pueden vivir en forma libre, la mayoría establece distintos tipos de
SIMBIOSIS con otros organismos:

• Comensalismo: Es una asociación en la cual el hospedador no se perjudica ni

beneficia, pero el comensal recibe beneficios. Dentro de esta relación
simbiótica, los protozoos desarrollaran:
o Ectocomensalismo: El protozoos que se prenden externamente al
cuerpo del hospedador.
o Endocomensalismo: El protozoo se localiza en el interior del cuerpo del
hospedador.
• Mutualismo: Es una asociación en la cual ambos organismo se benefician
mutuamente. Ej.: Ciertos flagelados, que se encuentran presentes en el
intestino de las termitas, digieren la celulosa de la madera; por medio de una
celulasa, haciendo que pueda ser asimilada y utilizada por el hospedador.
Privadas de esos flagelados, las termitas mueren.
Del mismo modo los flagelados fuera del intestino de las termitas mueren
dado que necesitan de las condiciones anaeróbicas del líquido del tubo
digestivo de la termita.
• Parasitismo: Es una asociación en la cual un organismo parasita y vive a
expensas del hospedador. Se alimenta de sus células, penetrando en ellas y
viviendo en el citoplasma o en el núcleo, o de los fragmentos celulares por
medio de pseudópodos o citóstomas (orificio para la ingestión de alimentos).
Es probable que, como resultado de dicha relación, el hospedador desarrolle
una condición patológicas.

Reproducción

133
Reproducción asexual

Puede darse por varias formas:

• Fisión binaria: Es la forma más común de reproducción asexual

• Germinación: Es la forma más raro de reproducción asexual.
• Fisión múltiple: Proceso en el cual el núcleo de replica y divide repetidamente
hasta producir aproximadamente 1000 copias del mismo. Estas se rodean de
pequeñas porción del citoplasma para luego dividiéndose generando 1000
células individuales mono nucleadas.
• Plasmotomía: Ocurre en protozoos multi-nucleados en donde la división de su
citoplasma es independientemente a la replicación y división de su núcleo.
Esta forma de reproducción asexual da como resultado células polinucleadas
con 2 o más núcleos.

Reproducción sexual

Salvo en el caso de protozoos parásitos, está influenciada por el medioambiente.

Existen 2 formas de reproducción sexual:

• Singamia: Consiste en la fusión de 2 gametos o células sexuales, que nadan

libremente, e involucra los procesos de plasmogamia y cariogamia. Dichos
gametos pueden ser, morfológicamente:
o Similares → Isogametos.
o Distintos → Anisogametos.
• Conjugación: Las células conjugantes opuestas se unen por la región anterior
y luego por la boca produciendo un puente que permite el flujo de citoplasma
entre los conjugantes y la fusión de los micronucleos. Se dan en protozoos
pertenecientes al grupo Ciliophora.

Formación de quistes

Un quiste es un estado de reposo o inactividad de un microorganismo, generalmente

protozoos o bacterias, en el cual los procesos metabólicos de la célula son
ralentizados y cesan actividades como la alimentación y locomoción.
Son similares a los esporos actuando como elementos de resistencia; que ayudan al
microorganismo a sobrevivir frente a condiciones ambientales adversas, y de
dispersión; facilitando el traslado del mismo desde de hospedador a otro o hacia un
ambiente más favorable.
Las condiciones ambientales desfavorables que dan lugar al enquistamiento son:

 Carencia de oxígeno o nutrientes

 Temperaturas extremas
 Falta de humedad
 Presencia de químicos tóxicos.
 Cambios de pH
 Exceso de células.
Estos factores iniciaran el enquistamiento con el propósito de proteger el material
genético.
Durante el enquistamiento se reduce el tamaño celular; por la eliminación de
desechos y agua, se almacena reservas y se desarrolla una cutícula que resulta del
engrosamiento de la membrana plasmática. Esta puede llegar a rodearse de una

134
sustancia gelatinosa o presentar, por debajo de ella, una estructura proteica las
cuales le otorgaran flexibilidad y protección.
En ciertos casos los quistes también cumplen funciones reproductivas.
Ej.: En el ciclo de vida del Plasmodium, el mosquito tomara esos quistes que se
hayan en la sangre de una persona infectada y en su aparato digestivo se
transforman en gametos que luego realizaran singamia.

Clasificación según su movilidad

Se pueden clasificar en 5 grupos:

Mastigophora

• Móviles por la acción de flagelos. Pueden tener un solo o varios flagelos;

como la Leishmania y la Giardia respectivamente.
• Pueden ser de vida libre o parásitos patógenos de animales o del hombre
• Habitan en aguas dulce
• Algunos géneros parasitan humano son: Giardia, Trichomonas, Leishmania
y Tripanosoma.

Ej.: Tripanosoma cruzi es el agente etiológico del mal de Chagas, siendo el Triatoma
infestans (la vinchuca) su vector.
Tripanosoma gambiense es el agente etiológico de la enfermedad del sueño. Se
transmite de sujeto a sujeto por la mosca tse-tse, las cuales son chupadoras de
sangre, que pican y defecan sobre el hospedador. El parásito crece en la sangre e
invade el sistema nervioso central, causando inflamación del cerebro y de la medula
espinal.

Euglenoides

• Móviles por la acción flagelos.

• Habitan en agua dulce estancada y agua marina. Ej.: Euglena
• Son utilizados como indicadores de contaminación de aguas

Los microorganismos incluidos en este grupo pueden comportarse como protozoos o

como algas, dado que:

✓ Presentan cloroplastos y son capaces, en presencia de la luz, de realizar la

fotosíntesis. Nutricionalmente, se convertirían en organismos autótrofos
capaces de utilizar la energía lumínica y compuestos inorgánicos como fuente
de energía y de carbono respectivamente. En este caso, podrían ser
considerados como siendo las únicas algas que no poseen pared celular.
✓ Cuando se encuentran en la oscuridad por mucho tiempo, nutricionalmente se
vuelven heterótrofos; ya sea porque sufren una intoxicación química o por
perdida de sus cloroplastos. En este caso, podrían ser considerados como
protozoos.

Sarcodina

• Se mueven por pseudópodos, generando un movimiento ameboide, por

medio de corrientes citoplasmáticas. En los bordes del citoplasma existen

135
 zonas densas, llamadas plasmagel, y en su centro zonas más fluidas,
denominadas plasmasol. El plasmagel presiona y empuja al plasmasol, el
cual se mueve hacia delante debido a que el extremo del plasmodio es menos
viscoso y el citoplasma toma el camino de menor resistencia; originando un
pseudoplasmodio. La formación de los mismos se ve enormemente favorecida
por la ausencia de pared celular.

• La pseudopodia producida es característica de cada ameba y se la puede

clasificar en:
o Lobopodia: Pseudopodos clásicos, bruscos y redondeados.
o Filopodia: Filamentos delgados y en forma de agujas
o Myxopodia: Pseudópodos muy delgados que se anastomosan
formando una malla.
o Axopodia: filamentos axiales por los que el citoplasma fluye
• Pertenecen al grupo algunos géneros como Amoebas y Entamoeba.
• El género Amoeba, presenta un estado vegetativo representado por células
vegetativas desnudas; sin pared celular, las cuales pueden formar
foraminíferos, en donde la misma célula vegetativa secreta una cubierta o
testa, generalmente compuesta de CaCO3, ornamentada que le confiere
dureza y protección. Está cubierta presenta orificios por los cuales saldrán los
pseudópodos, esenciales para el desplazamiento, y se producirá el
intercambio de compuestos con el medio.
• Parásitos del hombre y otros vertebrados. Ej.: Entoameba histolytica es una
amebas parasíticas que puede producir ulceración de las paredes intestinales
con cuadros de diarrea conocidos como disentería amebiana.

Ciliophora

• Presentan cilias cortas en algún momento de su ciclo celular. Estas se

mueven en forma de remo generando un movimiento concertado e influyendo
a su vez en la alimentación del organismo. También presentan tricocistos,
filamentos largos de naturaleza contráctil, que le permiten a la célula adherirse
a superficies.
• Pertenecen al grupo algunos géneros como Balantidium y Paramecium.
• Poseen dos núcleos, separándolos del resto de los protozoos:
o Micronúcleo: Implicado en la herencia y reproducción sexual. Es
diploide y contiene la información genética que puede intercambiar
durante la conjugación sexual.
o Macronúcleo: Implicado en la producción de ARNm y controla los
procesos metabólicos en la célula. Es poliploide.

136
 La reproducción sexual implica la conjugación de dos tipos opuestos de
protozoos con intercambio y fusión de los micronúcleos.
• En la alimentación del Paramecio, el movimiento de las cilias mueve el agua, y
los nutrientes disueltos en ella, hacia una depresión en su superficie
denominada surco oral o peritoma en cuya parte final se halla una estructura
llamada citóstoma; la "boca" de célula. De aquí, los nutrientes ingresaran a
una región denominada citofaringe; la cual se podría comparar al tracto
digestivo de los organismos superiores, en la cual el alimento es
definitivamente incorporado a través de vacuolas lisosomales formando una
vacuola alimentaria. Luego de la digestión y absorción de nutrientes, los
desechos son eliminados por un poro denominado citopígeo o citoprocto; el
poro anal.
• Presenta vacuolas contráctiles implicadas en la eliminación del exceso de
agua e, indirectamente, influyen en la motilidad.

Apicomplexa o Sporozoos

• Son inmóviles en estado de madurez

• Se nutren por absorción de sustancias disueltas en fase acuosa como los
hongos y procariotas.
• Forman estructuras análogas a los esporos, llamadas esporozoitos,
implicados en la transmisión al nuevo hospedador.
• Son todos parásitos obligados.
• Pertenecen al grupo algunos géneros como Coccidios, Plasmodios y
Toxoplasma.
Ej.: Los Coccidios son parásitos de pájaros y los plasmodios infectan
humanos, provocando la malaria.

El ciclo de vida de los sporozoos, como el Plasmodio, involucra 3 fases:

1. El esporozoito (n) invade el huésped a través de la picadura del mosquito

(vector). Estos se desarrollan en dicho insecto y se transmiten a humanos por
medio de la saliva del mismo.
Los esporozoitos pasan al torrente sanguíneo y llegan a los hepatocitos en
donde se multiplican y producen, tras la lisis celular, merozoito (4). Estos
pueden re infectar hepatocitos o invadir el torrente sanguíneo atacando a los
eritrocitos.

137
2. Los merozoitos (n) formados llegaran a la sangre y atacaran y lisaran los
glóbulos rojos, desencadenando la formación de mas merozoitos. Cuando un
mosquito pica y succiona la sangre de una persona infectada, estos
merozoitos ingresaran al tubo digestivo del insecto y se transformaran en
gametos (n); generando microgametos masculinos y macrogametos
femeninos.
3. Los gametos, tras realizar singamia, producen un zigote (2n), el cual se
diferenciara en un occisto móvil y alargado. Este invadirá las glándulas
salivales del mosquito y sufrirá procesos de meiosis y mitosis para generar
numerosos esporozoitos uninucleados.

138
Algas

Generalidades

• Son eucariotas
• Tienen pared celular, clorofila y realizan la fotosíntesis oxigénica. Contienen
uno o más cloroplastos, estructuras membranosas que albergan los pigmentos
fotosintéticos.
• No producen esporas.
• En general, son autótrofas, aunque existen grupos que pueden requerir
materia orgánica; como aminoácidos o vitaminas específicos, para poder
crecer.
• Se encuentran en medio ambientes acuáticos, aguas dulces, marinas,
estancadas y en el suelo húmedo.
• La mayoría son de vida libre, pero algunas exhiben simbiosis con plantas,
animales, protozoarios y hongos. Raramente son parásitos.
• Su tamaño varía desde microscópicos unicelulares, como las diatomeas,
hasta la formación de grandes agregados macroscópicos.
• Sirven como alimento para muchos organismos y para el hombre, como
resguardo para el desove de los peces humanos, como fertilizante y fuente de
alginato; un coloide hidrofílico usado para estabilizar y emulsificar los helados,
aderezo, etc.

La mayoría de las algas (99%) contienen clorofila y son de color verde. Algunas
presentan otros colores, como marrón o rojo, debido a que poseen pigmentos
carotenoides que enmascaran a la clorofila.

Pared celular

Debido a la composición y estructura variada que presenta la pared celular dentro de

los diferentes grupos de algas unicelulares, presenta valor taxonómico:

• Algas verdes (Chlorophita): Presentan una capa interna celulosa y una capa
externa de pectina. Algunas pueden contener polímeros de manosa.
• Diatomeas: Poseen una matriz de proteína, o de lípidos, sobre la que se
deposita dióxido de silicio (SiO2).
• Euglenophyta: No poseen pared celular. Su membrana celular se encuentra
engrosada y rodeada de una cubierta gelatinosa. Puede estar impregnada de
sustancias minerales, siliconas, CaCO3, hierro, celulosa y proteínas.

Pigmentos

Como las algas son eucariotas, además de presentar las organelas citoplasmaticas
típicas de dicho dominio; tienen cloroplastos que se encuentran libres en el
citoplasma. La membrana tilacoide de los mismos diferirá entre los diferentes grupos
de algas debido al contenido de diferentes pigmentos que dependerán de la especie;
adquiriendo de este modo valor taxonómico:

• Clorofila a, b y c
• Carotenoides; como xantófilas y fucoxantina.
• Ficobilinas

139
La mayor cantidad de carotenoides, en especial fucoxantina, es la responsable de
enmascarar la clorofila y de dar el típico color pardo en el caso de las Phaeophytas.

Sustancia de reserva

La naturaleza del polímero de reserva sintetizado como producto de la fotosíntesis es

una característica clave para la clasificación de las algas. Estos polímeros de reserva
se encuentran contenidos en una estructura proteica conocida como pirenoide, y
pueden ser:

• Almidón (α-1,4 glucano)

• Paramilón (β-1,2 glucano)
• Laminarína (β-1,3 glucano)

Movilidad

Lo más común es que las algas unicelulares presente un solo flagelo polar; como las
Euglenophytas, pero existen excepciones como las clorofitas; las cuales pueden
presentar de 2 a 4 flagelos polares, y los dinoflagelados; las cuales presenta 2
flagelos de diferente longitud y con diferentes puntos de inserción.

Reproducción

Se reproducen asexual y sexualmente, aunque en algunos grupos no se observa una

reproducción sexual aparente.

• Asexual: Normalmente, las algas unicelulares se reproducen por fisión

binaria y las multicelulares por fragmentación. En la fisión binaria de las
formas unicelulares, la división nuclear es seguida por una división longitudinal
del citoplasma.
• Sexual: Generalmente se da por la unión al azar de gametos móviles. En
dicho proceso se produce la aglutinación entre sus flagelos para después dar
lugar a una rápida fusión nuclear.
En algunos grupos solo es móvil el gameto masculino y es atraído por el
gameto femenino no móvil por mecanismos de quimiotaxis.

Estructura

En general, todas presentan una estructura relativamente simple que puede consistir
en:

• Una sola célula

• Un filamento celular: Las divisiones celulares en un plano producen un
filamento
• Una placa celular: Las divisiones celulares en dos planos producen una capa
unicelular
• Un cuerpo celular solido: Las divisiones celulares en tres planos producen un
cuerpo solido tridimensional.

Métodos de estudio

Recolección

140
Ambiente Hábitat Método de recolección
No acuático Hielo, nieve, rocas Raspado
Acuático de agua dulce Aguas abiertas, Redes o botellas, draga
(manantiales, ríos) sedimentos
Acuático de agua dulce Aguas abiertas, Redes o botellas, draga
lentico (lagos, pantanos, sedimentos
estanques)
Acuático marinos (arrecifes, Aguas abiertas, Redes o botellas, draga,
costas) sedimentos, rocas raspado
Las muestras recolectadas se colocan en frascos que contienen formol (4-5%) y se lo
considera como material vivo.

Los métodos de estudio dependerán del tamaño del alga:

• Algas microscopias: Se observan al microscopio en fresco o utilizando algún

liquido de contraste; como azul de metileno o lugol.
• Algas macroscópicas: Se realizan cortes a mano alzada o con micrótomos de
congelación o inclusión.

El aislamiento de cultivos puros algales se puede realizar por:

• Diluciones de la muestra, las cuales se siembran en medio de cultivos

apropiados, y al detectarse células algares se realizaran subcultivos hasta
obtener un cultivo puro unialgal.
• Método de filtrado

Anexo del cuadro

Clorofitas: Son usadas en el tratamiento de agua contaminada con materia inorgánica

ya que ayudan a la descomposición bacteriana aportando oxígeno y recuperan los
nutrientes minerales que podrían perderse en los efluentes. El fenómeno denominado
Bloom algal se produce por el ingreso de aguas residuales ricas en materia orgánica
a los sistemas acuáticos, que produce, en primera instancia, el aumento del número
de algas y cianobacterias. Como también habrá un aumento en el número de otras
bacterias, a final de cuentas disminuirá la [O2] del medio, provocando la muerte de
organismos y típico olor nauseabundo.
Por análisis genéticos, entrarían dentro de las Gram (-)
Phaeophyas: Las grandes algas son utilizadas como un estabilizador de emulsiones
en helados, fertilizantes y alimento rico en vitaminas.
Rhodophytas: Se deposita en su pared CaCO3 haciéndolas resistentes y
permitiéndoles, junto con su color, actuar como un escudo algar que absorbe las
radiaciones más energéticas del sol protegiendo a organismos delicados que habitan
los arrecifes.
Bacillariophyta: Importantes componentes del fitoplancton.
La frustula, compuesta casi en su totalidad por SiO2, rodea y cubre al protoplasto y a
su vez se divide en dos partes (valvas o tecas), parecidas a la caja de Petri. Según la
simetría de su pared celular, las diatomeas pueden tener simetría radial o bilateral, en
este último caso presentan una especie de conducto rafe que se extiende entre los
polos de la célula.

141
Son autótrofas, pero pueden volverse heterótrofas al perder su clorofila.
La forma primaria de reproducción es la asexual por división celular.

Dinophyta: Poseen una constricción transversal en la zona ecuatorial de la célula

llamada cíngulo a donde se insertan los flagelos. El flagelo transversal rodea la
célula y es chato y el flagelo longitudinal es más corto y se extiende a la parte inferior
de la hipoteca.
Las tecas presentan en su interior una capa de célula, y más internamente se
encuentra la membrana plasmática por debajo de la cual existe una serie de
vesículas que contienen celulosa que le da a la cubierta su estructura característica
muy ornamentadas.
Su nutrición varía desde autótrofas a heterótrofas pasando por mixótrofas (células
autótrofas que engloban otros organismos incluyendo otros dinoflagelados)

142
Genética bacteriana: Regulación Metabolismo
Los elementos genéticos que podemos encontrar en células bacterianas son:

• Cromosoma bacteriano: Es una única molécula de ADN autorreplicativa la

cual contiene la información genética esencial.
• Plásmidos: Molécula de ADN doble hélice, circular y cerrado. No están
relacionados con el metabolismo fundamental, que mantiene la viabilidad de la
célula, sino que le aportan funciones o beneficios adicionales. Pueden haber
uno o varios plásmidos en una célula y, si bien son estables, pueden perderse
bajo ciertas condiciones.
• Ácidos nucleicos de origen viral: En el caso de profagos incorporados al
genoma bacteriano.
• Elementos genéticos transponibles: Son segmentos de ADN ds que poseen
cientos o miles de bases y extremos cohesivos; secuencias repetidas e
invertidas que se hallan en los extremos del segmento. No son independientes
y saltan de un lugar a otro del cromosoma a baja frecuencia cambiando la
información genética que se puede expresar. Ej.: Transposones. (Tn)

Gen: Es una secuencia de ADN que codifica para un producto funcional. En la

mayoría de los casos, el producto funcional corresponde a proteínas las cuales son
traducidas del ARNm que se transcribe utilizando el gen ‘’como molde’’.

Genoma: Es la totalidad de la información genética de un organismo, que se haya

contenida en la célula y comanda todas sus funciones.

Mapa genético: Es la posición relativa que tiene cada uno de los genes con respecto
a los otros dentro del cromosoma.

Genotipo: Es la composición genética de un organismo que puede expresarse en una

característica o cualidad particular. Ej.: Un microorganismo que tenga el fenotipo lac
(+) significa que es capaz de sintetizar β-galactosidasa.

Fenotipo: Es una respuesta del genotipo que se expresa o se hace visible. Es

cualquier característica de un organismo que pueda ser detectada y medida en
términos de aspecto, estructura u otra propiedad.
Ej.: Un microorganismos que presente en su genoma la resistencia a un cierto
antibiótico, expresara fenotípicamente una resistencia a dicha sustancia.

Regulación del metabolismo microbiano

La información genética, contenida en el ácido nucleico, debe ser transcripta por

medio de la síntesis de un mensajero; una molécula de ARNm, y este a su vez debe
traducirse a nivel ribosomal para obtener los verdaderos efectores de la información
genética, las proteínas.
Dado que todos estos procesos involucran un gasto de energía, es imprescindible
regular la expresión genética adaptándola a las circunstancias ambientales siguiendo
el principio de economía celular; en el cual la célula solo expresa en su fenotipo las
proteínas cuyas actividades o funciones son realmente necesarias en un determinado
momento de su existencia para llevar a cabo el metabolismo fundamental.

La regulación es el control de los elementos y procesos celulares lo cual le permite al

microorganismo:

143
 • Una utilización eficiente de los nutrientes
• Generar respuestas rápidas frente a los cambios ambientales
• Una ventaja selectiva en su ambiente. Ej.: Un microorganismo capaz de
utilizar lactosa, o que presente una resistencia específica a un ATB, crecerá
más rápidamente y predominara sobre otros microorganismos en un medio
rico en lactosa o en dicho ATB.

De esta forma el microorganismo, teniendo su información disponible en el ácido

nucleico, la expresara en función de sus necesidades. Esto conlleva a que se
produzcan adaptaciones del microorganismo a las circunstancias del medio en donde
está creciendo.
Dichas adaptaciones al medio ambiente son sumamente rápidas y transitorias; lo
cual refleja la capacidad de la célula de regular su información genética disponible, y
no son transmisibles a la descendencia; por lo cual cada microorganismo debe
realizar su propio proceso adaptativo.

Niveles de regulación metabólica

La regulación metabólica se da a nivel de la:

A. Transcripción: Permitiendo o impidiendo la transcripción de determinados

genes.
B. Traducción: Haciendo que se exprese de diferente manera la información en
el ARNm

La regulación en dichos niveles, a largo plazo, producirá una modificación en la

cantidad de proteínas que se sintetizan.

C. Actividad o estructura de proteínas con actividad enzimática.

A corto plazo, los microorganismos puede regular la actividad de diversos

componentes celulares a través de modificaciones postraduccionales o
activación/inhibición de enzimas, lo cual no modifica la cantidad de proteínas.

Funcionando al mismo tiempo, estos mecanismos pueden controlar eficientemente el

metabolismo celular.

A. Regulación de la Transcripción

Los genes se pueden clasificar en:

• Genes constitutivos: Aquellos que se expresan de forma continua o

constitutiva y codifican para los sistemas enzimáticos constitutivos, es decir,
enzimas necesarias para el metabolismo básico celular; como el crecimiento y
la obtención de energía inmediatos, que se sintetizan durante toda la vida del
microorganismo.
• Genes adaptativos: Aquellos que se expresan cuando una célula intenta
adaptarse a una determinada situación ambiental. Son los genes que se
encuentran regulados y codifican para sistemas enzimáticos adaptativos.

Los operones organizan la información genética de los procariotas y consisten en

unidades genéticas funcionales que contienen:

144
 • Genes estructurales: Son los genes que codifican para las proteínas o
enzimas.
• Elementos de control:
o Promotor: Es una secuencia reconocida por y a la cual se une la ARN
polimerasa para dar inicio de la transcripción de los genes.
o Operador: Es una secuencia que antecede a los genes estructurales y
que es reconocida por la proteína reguladora, modulando así la
manera en que se expresan los genes estructurales.
• Gen regulador: Codifica para la proteína reguladora que pueden sintetizarse
de manera activa o inactiva, siendo muy importante en la regulación de la
expresión de los genes estructurales.
• Moléculas difusibles: Que actúan como efectores, inductores o corepresores.

Para la utilización máxima de sus recursos, la célula necesita controlar el nivel de

expresión de la información genética. Para ello existen tres mecanismos de
regulación a nivel transcripcional, en donde la expresión de cada uno de los
diferentes genes adaptativos se haya regulada de manera distinta siguiendo alguno
de estos mecanismos:

I. Global

Tomando como ejemplo el proceso de esporulación; dicha diferenciación se

encuentra comandada por factores σ, los cuales son polipéptidos necesarios para
que la ARN polimerasa pueda reconocer las secuencias promotoras del ADN y
comenzar la transcripción genética. De este modo, los genes que se encuentran
precedidos por una secuencia promotora similar, pueden ser co-regulados por la
expresión o activación de su correspondiente factor σ.
La célula sintetizara diferentes tipos de factores σ dependiendo del estado fisiológico
en que se encuentre. Ej.:
El factor σ70 se sintetiza en gran cantidad y se une a la ARN polimerasa durante el
crecimiento exponencial, permitiendo la transcripción simultanea de varios genes que
se encuentran en diferentes zonas del cromosoma y que codifican para diversas
funciones que ocurren durante la fase Log; como el transporte de nutrientes, la
enzimas metabólicas, sistemas de transporte para expulsar desechos celulares, etc.
Como no se produce la discriminación de ningún gen que participa en la fase
exponencial, dicho mecanismo de regulación global modula una serie de eventos que
ocurren globalmente en un momento determinado en la vida de la célula.
Cuando se concluye esa fase y el microorganismo ingresa a cualquier otra, los
promotores que anteceden a los genes estructurales de la nueva fase no serán los
mismo que los de la fase Log, de modo tal que el factor σ70 no facilitara la unión de
ARN polimerasa con dichas secuencias. De este modo, dicho factor pasara a ser
innecesario, degradado y en su lugar se sintetizara un nuevo factor σ, el cual será
específico para los promotores de todos los genes estructurales que deben
expresarse en la nueva fase.

145
Así, no todos los genes están activos al mismo tiempo ya que la bacteria está
regulando y ‘’eligiendo’’ permanentemente aquellos que se transcriben.

Existen otros factores σ que regularan globalmente la expresión de genes

relacionados con:

• Desequilibrios de N2 → Factor σ54

• Fase estacionaria→ Factor σ38
• A la respuesta por el shock de calor → Factor σ32 → Se sintetizaran
chaperonas que intentaran reparar los daños ocurridos por el calor.

II. Especifico

Esta regulación específica puede ser de dos tipos: inducción o represión.

• Sistema inducible o inducción: Cuando la presencia de un sustrato necesario

para una determinada enzima provoca la síntesis de esa enzima. Son
comunes en procesos catabólicos o de degradación.
Ej.: Operon lactosa, arabinosa, maltosa, etc.
• Sistema represible o represión: Cuando la acumulación del producto final de
una reacción enzimática impide la síntesis de la misma. Son comunes en
procesos anabólicos o de síntesis.
Ej.: El operon triptófano y el operon histidina. Dichos operones estarán siendo
transcriptos constantemente, ya que la célula necesita un suministro continuo
de aminoácidos para la síntesis proteica; pero en medios de cultivos ricos en
dichos aminoácidos, siguiendo el principio de economía celular, la bacteria
reprimirá dichos sistemas para evitar el gasto de energía que conlleva la
síntesis de esos aminoácidos.

En ambos tipos se produce cambios en la síntesis enzimática provocada por

alteraciones en la expresión de los genes que codifican para esas enzimas.

Por lo general, la inducción y la represión se encuentran sujetos a un control

negativo de transcripción; en el cual el producto activo del gen regulador del operon
tiene como función bloquear el paso de la ARN polimerasa a través de los genes
estructurales, impidiendo la transcripción de los mismos.

Inducción:

El gen regulador (Reg) produce una proteína ``represora´´ la cual es activa desde el
momento en que se sintetiza y se une específicamente al operador. Así la ARN
polimerasa, que se une al promotor, no podrá transcribir los genes estructurales ya
que se encuentra bloqueado el paso. En condiciones fisiológicas no ocurre la
transcripción

146
Para que esta tengo lugar, es necesario la presencia de un efector; que en este caso
se denomina inductor, el cual al unirse a la proteína represora activa; el producto del
gen Reg, produce un cambio en la conformación de la misma impidiendo que pueda
unirse al operon; transformándola en una proteína represora inactiva. De esta forma,
permite el paso de la ARN polimerasa por los genes estructurales.

Represión:

El producto del gen Reg es una proteína inactiva; llamada aporepresor. En estas
condiciones, es incapaz de unirse al operador y por lo tanto no impedirá la acción de
la ARN polimerasa; la cual podrá transcribir los genes estructurales.

En presencia del efector; llamado co-represor, se forma un complejo entre este y el

aporepresor y, por cambios conformacionales, se transforma en una proteína
represora activa; la cual será capaz de interaccionar con el operador y evitara el
pasaje de la ARN polimerasa por los genes estructurales y la transcripción de los
mismos.

Ejemplos:

1) De inducción: Operon lactosa (por control negativo)

Presenta 3 genes estructurales los cuales son:

• LacZ; el cual codifica para la β-galactosidasa que cataliza la hidrolisis de la

lactosa generando glucosa y galactosa.
• LacY; el cual codifica para una permeasa que facilita el ingreso de lactosa a la
célula.

147
 • LacA; el cual codifica para una transacetilasa que no está relacionada con el
metabolismo de la lactosa.

Al tratarse de un control negativo, el gen LacI, cuyo promotor (Pi) permite el paso de
la ARN polimerasa en sentido inverso, se transcribe produciendo un ARNm cuya
traducción producirá una proteína efectora de carácter inhibitorio que, en condiciones
fisiológicas, se une al operador impidiendo así el paso de la ARN polimerasa a través
de los genes estructurales del operon Lac.
Esto ocurre:

• En medios que solamente contiene glucosa, ya que al metabolizarse

constitutivamente; es decir por medio de enzimas que se expresa de forma
constitutiva, los microorganismos podrán captarla directamente y utilizarla
para la obtención de energía. Así, la expresión de los genes estructurales
contenidos en el operon Lac supondría un gasto innecesario de energía para
el microorganismo, dado que en el medio no existe lactosa; sustrato sobre el
cual actuarían.

En medios de cultivo que contiene lactosa junto con otra fuente energética de
preferencia; como glucosa.
Al medir la actividad β-galactosidasa se puede advertir una pequeña cantidad de
dicha enzima. La síntesis`` constitutiva´´ de esta y las demás enzimas del operon Lac
es muy importante para que una pequeñísima cantidad de lactosa ingrese a la célula
permitiéndole responder rápidamente cuando haya una verdadera inversión.

148
Cuando el microorganismo es transferido a un medio que solamente presenta
lactosa, o se agota la glucosa en el mismo, no tendrá, inmediatamente, las enzimas
necesarias para iniciar la degradación del único sustrato disponible; por ende, para
volver a crecer necesitara una periodo de adaptación; en el cual ocurrirán cambios
en la expresión genética que le permitirán a la célula adaptarse a las nuevas
condiciones del medio.
Dicho periodo de adaptación se observa como una prolongada fase lag, en la cual se
produce la síntesis de enzimas necesarias para degradar la lactosa. A medida que
tiene lugar la síntesis, se observa un aumento en la actividad específica de la
β-galactosidasa hasta alcanzar un valor en el que se mantiene estable.
Mientras todo ese periodo, y mientras se mantenga la máxima cantidad de enzima, el
microorganismo será capaz de utilizar lactosa y crecer, hasta que agota dicho
sustrato e ingresa en fase estacionaria.

Durante el periodo de adaptación, a nivel del operon Lac, la pequeña cantidad

constitutiva de β-galactosidasa y demás enzimas del operon Lac permite el ingreso
de lactosa a la célula en donde sufrirá una serie de transformaciones para dar
alolactosa; el verdadero inductor, que permita modificar a la proteína inhibidora
(LacI). El inductor provoca un cambio conformacional en LacI disminuyendo su
afinidad por la región operadora del operon Lac. Bajo estas circunstancias, el paso de
la ARN polimerasa a través de los genes estructurales del operon Lac no se
encontrara bloqueado permitiendo la transcripción de los mismos y la síntesis de las
enzimas necesarias para comenzar nuevamente el crecimiento.

149
 2. De represión: Operon triptófano(por control negativo)

El producto de la expresión del gen regulador es un aporepresor el cual es incapaz de

unirse al operador como tal, por lo cual no evitara que la ARN polimerasa se una al
promotor y genere la transcripción de los genes necesarios para la síntesis del Trp.
Esto ocurrirá siempre y cuando la concentración de Trp en el medio sea baja.
En medios con una alta concentración de Trp, el aminoácido ingresara al
microorganismo y actuara como un co-represor, uniéndose al aporepresor y formando
un complejo; transformándolo en una proteína represora activo (o represor activo), la
cual podrá unirse a la secuencia operadora, bloqueando la transcripción de los genes
estructurales del operon y deteniendo la síntesis de enzimas que intervienen en la
biosíntesis del Trp.

Este proceso de regulación no es el único que participa en la modulación de la

síntesis de diferentes aminoácidos, debido a que frenar súbitamente y volver a poner
en marcha la síntesis de los mismos es bastante complejo para la célula.
Existe un segundo mecanismo de regulación:

Atenuación de la transcripción

Cuando el sistema deja de estar reprimido, el primer polipéptido que se genera como
consecuencia de la transcripción y traducción de los genes del operon Trp es muy
rico en Trp y se denomina péptido líder.
Este mecanismo puede ponerse en marcha gracias a una particularidad que poseen
las bacterias en la que la transcripción y la traducción se encuentran asociadas; es
decir, al mismo tiempo en que se está transcribiendo el ADN en una molécula de
ARNm, los ribosomas se unen al ARNm naciente para empezar a traducirlo. Esta
característica acelera la respuesta celular y permite una transcripción abundante de
los genes que están codificando.
Cuando se analiza las secuencias del ARNm se puede distinguir 4 regiones:

150
 • Región 1: Es la que codifica para el péptido líder.
• Región 2: Presenta secuencias complementarias invertidas particulares
haciendo que, en ciertas condiciones, pueda asociarse formando puentes con
la región 3, provocando el plegamiento de la molécula
• Región 3: Presentan secuencias complementarias invertidas que pueden
formar puentes entre las secuencias tanto de la región 2 como de la 4.
• Región 4: Presentan secuencias complementarias invertidas que, al
encontrarse cerca de la región 3, pueden formar puentes con las secuencias
de la región 3 y producir un plegamiento en la molécula.

En un medio rico en Trp; la síntesis a nivel ribosomal del péptido líder podrá darse sin
problemas debido a la elevada concentración de Trp. Al desplazarse la región 1, para
dar lugar a que ingrese la región 2 al ribosoma, las regiones 3 y 4 quedan muy
próximas y entre sus secuencias se formaran puentes hidrogeno, lo que plegara la
molécula y dará lugar a una señal de finalización de transcripción. Dicho
plegamiento detendrá, momentáneamente, tanto la traducción como la transcripción
del ARNm debido a la asociación que existe en las procariotas de dichos procesos.
En un medio pobre en Trp, la síntesis a nivel ribosomal del péptido líder no podrá
concluir debido a la escasez de Trp, quedando este incompleto. De esta forma, el
ARNm, queda estancado en el ribosoma, unido a este por la región 1, lo que permite
que la región 2 pueda combinarse con la región 3 formando puentes o argollas,
evitando así la asociación de la región 3 y 4 y la emisión de la señal de terminación
de la transcripción.
A muy bajas concentraciones de Trp, el microorganismo tiene necesidad de sintetizar
el aminoácido y el sistema de regulación le permite sintetizar las enzimas necesarias
para la producción del mismo.

Algunos procesos de inducción o represión pueden estar sujetos a un control

positivo; en el cual el producto activo del gen regulador; la proteína reguladora
activadora, favorece la unión de la ARN polimerasa con su sitio promotor,
estimulando la transcripción génica.

3. Operon maltosa (por control positivo)

Presenta 3 genes estructurales (MalE, MalF, MalG) que participan en el metabolismo

de la maltosa. El producto del gen regulador es una proteína activadora de

151
transcripción que necesita asociarse a un inductor; la maltosa, para formar un
complejo activado el cual podrá interactuar con una región que precede al promotor,
llamada región A o de activación. De este modo, la ARN polimerasa es capaz de
reconocer y unirse a la secuencia promotora para empezar a transcribir los genes
estructurales del operon.
En ausencia del complejo (proteína activadora + maltosa), la ARN polimerasa es
incapaz de encontrar y reconocer en el promotor la secuencia exacta que necesita
para unirse y generar la transcripción génica.

Este mecanismo se activa simultáneamente en varias regiones del cromosoma,

regulando diversos operones que están relacionados con el catabolismo de la
maltosa. A este conjunto se lo denomina regulon.

III. Inespecífico

A diferencia de los mecanismos de control específicos, en donde solamente el

sustrato o el producto final de una reacción enzimática específica era el responsable
de desencadenar todos los eventos de regulación, en los mecanismos de control
inespecíficos los productos o sustratos de varias reacciones enzimas diferentes
desencadenan los eventos de regulación, pudiendo actuar sobre distintos operones
sensibles a un mismo producto o sustrato.
La mayoría de estos mecanismos están sujetos a un control positivo.

1. Represión catabólica dependiente de AMPc

Ej.: En Operón maltosa y Operón lactosa.

La degradación de la glucosa bloquea la transcripción de genes que codifican para
enzimas cuyas reacciones enzimáticas darían como producto final glucosa; como ser
las enzimas necesarias para la degradación de la lactosa.
Las bajas concentraciones de glucosa estimulan la activada de la adenilato ciclasa
(AC), enzima encargada de sintetizar AMPc del ATP. El AMPc activa a la proteína
CAP inactiva la cual será capaz de interactuar con una región que antecede a la
región promotora, permitiendo que la ARN polimerasa reconozca y se una a la
secuencia promotora, y de esta manera se da lugar a la transcripción de diversos
genes.
Las elevadas concentraciones de glucosa inhiben la actividad de la AC con la
consiguiente reducción en la concentración de AMPc; el cual no será suficiente para
activar la proteína CAP inactiva, esencial para se produzca el reconocimiento y unión
entre la ARN polimerasa y la secuencia promotora.

152
Cuando un microorganismos se encuentra en un medio que contiene un sustrato de
degradación constitutiva; como glucosa, y uno de degradación inducida; como
lactosa, siguiendo el principio de economía celular, utilizara primero la glucosa, dado
que las enzimas necesarias para su metabolismo ya se encuentran presentes en la
célula al ser constitutivas, y solo cuando esta se agote comenzara a utilizar la lactosa.

Al comenzar el crecimiento se observara:

▪ Una muy pequeña fase lag, que puede ser incluso inexistente si el microorganismo
se hallaba en fase exponencial en un cultivo previo.
▪ Una primera fase de crecimiento exponencial en la que el microorganismo
desarrolla a expensas de la glucosa
▪ Una segunda fase lag, un poco más prolongada que la inicial, que se produce
cuando los niveles de glucosa caen prácticamente a cero. En este punto, el
microorganismo necesitara adaptarse a las nuevas condiciones para empezar a
utilizar la lactosa del medio y para ello comenzara a sintetizar las enzimas
contenidas en el operon Lac.
▪ Gracias a ese conjunto enzimático, se produce una segunda fase de crecimiento a
expensas de la lactosa, la cual se extiende hasta que dicho sustrato se agote,
haciendo que el microorganismo ingrese a la fase estacionaria.

A nivel del operon Lac:

Existirán dos mecanismos que están actuando simultáneamente.

Cuando la concentración de glucosa es muy elevada:

➢ La lactosa presente en el medio intenta inducir la expresión de los genes que

codifican para las enzimas que la degradan, pero la glucosa, que es un
producto de la hidrolisis de la lactosa, reprime la expresión. Debido a la
elevada cantidad de glucosa, se produce una inhibición de la AC y una
disminución en [AMPc], el cual es necesario para transformar la CAP inactiva
en CAP activa. De esta forma, la ARN polimerasa no será capaz de reconocer
ni unirse al promotor y no habrá transcripción de los genes estructurales del
operon.
➢ Si bien la presencia de la lactosa (específicamente la alolactosa) producirá un
efecto inductor sobre la proteína represora LacI, la cual sufre un cambio
conformacional que le impide reconocer y unirse al operador dejando libre el
camino para que la ARN polimerasa transcriba los genes del operon, la
transcripción no se produce debido al efecto de la represión catabólica de la
glucosa.

153
 Cuando la concentración de glucosa es muy baja:

➢ Habrá una mayor producción de AMPc, debido a la estimulación de la AC, el

cual se unirá la forma inactiva de CAP activándola. La proteína CAP activada
será capaz de interactuar con una región que antecede a la región
promotora, permitiendo que la ARN polimerasa reconozca y se una a la
secuencia promotora, dando lugar a la transcripción de los genes del operon.
➢ El efecto inductor que provoca la alolactosa sobre la proteína represora LacI
la vuelve incapaz de reconocer y unirse al operador, dejando libre el camino
para que la ARN polimerasa transcriba los genes del operon.

El funcionamiento simultáneo de ambos mecanismos en relación a la concentración

de la glucosa, establecerán una curva de crecimiento característica llamada diaxia.

2. Represión catabólica independiente de AMPc

Existen varios mecanismos independientes del AMPc. En uno de ellos participa la

proteína Cra, la cual puede actuar como una proteína activadora o represora de
catabolitos en Enterobacterias.
Su actividad dependerá de la posición relativa de la secuencia operadora con
respecto de la secuencia promotora:

I. Cuando Cra se une a una secuencia operadora que se encuentra precediendo a la

secuencia promotora, la ARN polimerasa podrá reconocer y unirse al promotor
provocando la transcripción de los genes estructurales. Se habla de una
Transcripción activada por Cra.
II. Cuando Cra se une a una secuencia operadora que se encuentra precedida por la
secuencia promotora, Cra bloqueara el paso de la ARN polimerasa a través de los
genes estructurales evitando la transcripción de los mismos. Se habla de una
Transcripción reprimida por Cra.

Cuando los catabolitos o productos de las reacciones de las enzimas implicadas se

unen a Cra, generaran cambios conformacionales que modificaran su acción:

I. Cuando la transcripción era activada por Cra, se producirá una desactivación;

ya que al no poder unirse al operador, la ARN polimerasa será incapaz de reconocer
y unirse a la secuencia promotora y de transcribir los genes del operon.
II. Cuando la transcripción era reprimida por Cra, se producirá una derepresion o
una represión más leve, ya que al no poder unirse al operador, no se bloqueara el
paso de la ARN polimerasa a través de los genes lográndose la transcripción de los
mismos.

154
 B. Regulación de la Traducción

Hay diferentes formas de regular la traducción o la expresión de la información

contenida en el ARNm. Si bien existen vario ejemplos y mecanismos de esta
regulación, se tomara como ejemplo el operon Lac.

Dicho operon presenta tres genes estructurales que codifican para tres enzimas, las
cuales se sintetizan en diferentes proporciones (10/5/2):

• LacZ para la β-galactosidasa

• LacY para la permeasa
• LacA para la transacetilasa

La producción de las distintas cantidades de enzimas que se hallan codificadas por

genes pertenecientes a un mismo operon dependerá de varios factores como:

✓ La presencia de secuencias intercistronicas entre genes estructurales: Son

secuencias que se hallan intercaladas entre los genes estructurales o
sincrones y que no codifican para ningún producto, pudiendo llegar a cortar la
traducción del mensaje.
De todas maneras, el primer gen estructural siempre se traducirá de manera
completa, mientras que el resto lo hará de forma aleatoria y en menor cantidad
dependiendo de la disociación entre el ARNm y el ribosoma.
✓ Codones diferentes para el mismo aminoácido en distintos genes: Ej.:
o El codón para Leu en LacZ → CUC
o El codón para Leu en LacY → CUA

Si es que se genera una mayor cantidad de ARNt-Leu cuyo anticodon se

complementario con el codón del gen LacZ, habrá una mayor síntesis de la
enzima codificada por dicho gen que la codificada por LacY.

C. Regulación de la actividad o estructura de proteínas con actividad enzimática.

Al producirse la traducción del ARNm se generan proteínas las cuales se pueden

dividir en dos grupos:

• Proteínas estructurales: Necesarias para cubrir daños en la estructura celular.

• Proteínas con actividad enzimática o enzimas: Las cuales son las verdaderas
efectoras del metabolismo celular.

La actividad de estas enzimas estará regulada por la misma información genética.

Algunas sufrirán modificaciones postraduccionales para adquirir o modificar su

155
actividad y en otras, su actividad se verá modificada por la misma presencia de los
productos de las reacciones que cataliza.

Regulación post-traduccional por modificación

I. Modificación covalente

Es la más frecuente y ocurre cuando se agregan pequeños grupos; como AMP, ADP,
PO4-2,
-CH3, a una enzima. Ej.:
La glutamina sintetasa (GS) es una enzima encargada de transformar el glutamato en
glutamina y es regulada por la concentración de glutamina en el medio. Cuando esta
es elevada, se produce la transferencia del AMP, perteneciente a un ATP, hacia la
enzima junto con la liberación de PPi. La GS-AMP no es activa deteniéndose la
síntesis de glutamina.
Este proceso es reversible ya que en presencia de Pi la GS-AMP puede ceder el
grupo AMP, liberándolo como ADP, volviendo a su forma activa.

II. Modificación por eliminación de fragmentos polipeptidicos

Ciertas enzimas no se sintetizan como un polipéptido listo para sufrir un plegamiento

y adquirir actividad enzimática; sino que necesitan eliminar ciertos fragmentos para
que el plegamiento y la activación tengan lugar. De este modo, los microorganismos
pueden producir grandes cantidades enzimas sin ser inmediatamente activas,
permitiéndoles acumularlas y responder rápidamente a un requerimiento de la misma.
Ej.:
Síntesis de la subunidad A de la ADN girasa, en la cual se produce un fragmento
mucho más largo de lo que es realmente la subunidad A, por ende debe eliminarse
pequeños fragmentos intermedios para que la enzima se vuelva activa.

Regulación post-traduccional a nivel de la actividad de enzimas

Esta regulación se produce, generalmente, a nivel de enzimas alostericas (aquellas

que presentan un sitio de unión al sustrato y otro sitio de unión a efectores los cuales
pueden ser aminoácidos, intermediarios del TCA o glicolítica, ATP, ADP, etc.) que
catalizan reacciones que se encuentran al inicio de una vía o luego de un punto de
ramificación.
Por lo general son inhibiciones de tipo final; en donde el efector de la regulación es el
producto final de una vía metabólica.
Este tipo de regulación es muy importante en procesos anabólicos; como la síntesis
de aminoácidos, los cuales son vías de síntesis muy ramificada. Aunque también
puede producirse en enzimas alostericas de vías lineales; como en el catabolismo de
hidratos de carbono por la vía de la glucolisis:

156
Ambas enzimas son constitutivas.

En el caso de las vías ramificadas, si bien la inhibición por parte del producto final
puede darse por distintos mecanismos, estos siempre actuaran a nivel de la primera
enzima de la vía o aquellas posteriores a un punto de ramificación de la vía.

Inhibición acumulativa: Habiéndose producido el producto Y y el producto Q, la

inhibición producida por ambos productos se aditiva y da como resultado una
inhibición total de E1 idéntica a la que se tendría si se analizara y se sumaran la
inhibiciones parciales de los productos Q y Y por separado.

Como se haría:

1. En un tubo colocamos un extracto enzimático (el cual se lo obtiene después de

romper la célula) junto con su sustrato y se lo incuba a una temperatura y tiempo
adecuado. Luego se mide la actividad enzimática correspondiente a dicho proceso
metabólico y se obtiene la actividad enzimática total, en la cual no hay influencia
alguna de los inhibidores.
2. Se repite la experiencia pero esta vez se agrega al tubo una cierta cantidad de
producto Y junto con el sustrato. Al medir luego la actividad enzimática y al
compararla con la actividad enzimática total se puede obtener el porcentaje de
inhibición del producto Y.
3. Se repite nuevamente la experiencia pero esta vez utilizando el producto Q y se
determina el porcentaje de inhibición del producto Q.
4. La sumatoria de los porcentajes de inhibición de los productos será igual al
porcentaje de inhibición que habrá si se repite la experiencia pero colocando,
conjuntamente con el sustrato, las mismas cantidades usadas en los ensayos
anteriores tanto de los productos Q y Y.

Inhibición cooperativa: Se produce cuando la inhibición total producida por dos

productos es mayor a la inhibición que se obtendría de sumar las inhibiciones
parciales de los productos por separado. Existe una cooperación entre los
productos durante la inhibición.

157
Inhibición secuencial: Ej.: En la síntesis de Trp, Phe y Tyr en Bacillus subtilis. Al
acumularse el Trp, inhibirá a la primera enzima posterior a la ramificación de su línea
de síntesis (E4), ocurriendo lo mismo con el Phe y la Try; los cuales inhibirán E8 y E7
respectivamente. Esto conlleva la acumulación de los productos D (corismato) y P
(prefenato) provocando, especialmente por parte del corsimato, la inhibición de la
primera enzima de la vía (E1).
Existe una secuencia en la inhibición de las enzimas.

Inhibición de isoenzimas: Común en procesos pertenecientes a microorganismos

como E. coli o Salmonella en los cuales la primera reacción de la vía esta catalizada
por varias isoenzimas Las isoenzimas catalizan la misma reacción pero se regulan de
manera diferente. Una de ellas, Ey es inhibida por el producto Y (Trp), Ez por el
producto Z (Phe) y Eq por el producto Q (Tyr); de modo tal que cada uno de los
productos inhibe de forma específica a una isoenzima y solamente la acumulación de
todos ellos llevaría a una inhibición total de la vía.

Inhibición concertada: Es aquella en la que la acción de los dos productos de un

camino metabólico es necesaria simultáneamente para que se produzca la inhibición
de la E1. Si solo uno de ellos se acumula mientras que el otro está siendo utilizado
por otro mecanismo metabólico, la inhibición no ocurre. Ej.: Glutamina sintetasa.

158
159
Genética bacteriana: Información Genética

La información contenida en el ácido nucleico se organiza en base a 4 bases

nitrogenadas:

• 2 purinas: Adenina (A)y Guanina (G)

• 2 pirimídicas: Citosina (C) y Timina (T); la cual es reemplazada por Uracilo (U)
en el caso del ARN.

Entre estas bases se produce un apareamiento específico entre A-T y G-C.

El código genético reside en la secuencia de dichas bases nitrogenadas cuya lectura

y traducción se realizara siempre en tripletes o codones a nivel ribosomal.
De las 64 combinaciones posibles de codones (43), solamente 61 codifican para
aminoácidos y las 3 restantes funcionan como señales de terminación de la
traducción; como ser UAA, UAG y UGA. En el caso de las bacterias, el codón AUG
codifica tanto para la formil-metionina, en el inicio de la traducción, como para la
metionina; cuando se haya en el medio de una secuencia mensajera.
El código genético es degenerado o redundante ya que existe un mayor número
de codones (61) que de aminoácidos utilizados en la síntesis proteica (20);
implicando que varios tripletes distintos codifiquen para un mismo aminoácido.
La diferencia que existe entre codones que codifican para un mismo aminoácido se
encuentra siempre a nivel de la 3ra base nitrogenada. Durante el apareamiento entre
el anti-codón del ARNt y el codón del ARNm, solo las 1ra y 2da bases son claves
para dicho proceso. En cambio, la unión que se genera a nivel de las terceras bases
es mucho más lábil proporcionando una mayor flexibilidad y el apareamiento entre
diferentes bases nitrogenadas.
Esto evita que la célula tenga que sintetizar un gran número de distintos ARNt, en
donde cada uno respondería a un codón específico, por ejemplo:

En el apareamiento del ARNt-Gly con tres codones (GGU, GGC, GGA) diferentes
debido al balanceo de la tercera base. El anti-codón (CCI) presenta inosina (I), la cual
se forma por desaminacion de la adenina, capaz de aparearse con U, C, A.

El código genético es esencialmente universal; en todos los organismos los

tripletes se traducen en los mismos aminoácidos. Si bien son pocas, existen
excepciones a esta universalidad. Ej.:

• UGA: Presente en todos los organismos; con ADN cromosómico, y actúa

como codón de terminación, pero en el caso del ácido nucleico mitocondrial
codifica para triptófano.
• CUA: Presente en las levaduras y codifica para leucina y en el ácido
nucleico mitocondrial codifica para treonina.

160
 • UAA y AUG: Presentes en todos los organismos y actúan como codones de
terminación. En el caso del Paramecium codifican para el glutamato.

Variaciones fenotípicas

El fenotipo abarca todas aquellas características visibles y medibles que el

microorganismo puede expresar durante su crecimiento y que reflejan la composición
de su genotipo.
En la expresión de las características fenotípicas; como ser el crecimiento,
características metabólicas o formato celular, estarán involucrados varios genes
dependiendo de las condiciones ambientales en donde se esté desarrollando el
microorganismo. Ej.: Un microorganismo que crece en un medio rico en glucosa, no
sintetizara el sistema enzimático necesario para metabolizar la lactosa; a menos que
se consuma totalmente el sustrato y se agregue lactosa.
Así, las variaciones fenotípicas le permiten a la célula, utilizando la información
disponible en el genoma, generar una respuesta rápida a un determinado ambiente o
cambio ambiental.
Algunas características de las variaciones fenotípicas:

✓ No son heredables sino que son adaptaciones a diversas situaciones ambientales

✓ Son transitorias y se revierten cuando cambian las condiciones ambientales
✓ Afectan a la mayoría o un gran número de microorganismos de una población.

Las variaciones pueden ser de carácter:

• Morfológico: La morfología de los microorganismos cambia con la edad del

cultivo. Cuando una población alcanza la fase estacionaria de su crecimiento,
las células se volverán más cortas, reduciendo así la relación
superficie/volumen y disminuyendo la difusión hacia la célula de desechos y
compuestos tóxicos.
Existe el caso de otros microorganismos en donde, al detenerse su
crecimiento por la falta de nutrientes, se alargan aumentando la relación
superficie/volumen e incrementando la cantidad de nutrientes que pueden
ingresar a la célula.
• Fisiológicos y bioquímicos: Ej.: Microorganismo, como del genero
Streptococcus, que son capaces de resistir la acción de la penicilina
(bacteriolítico) debido a la producción de penicilinasas. La síntesis de dichas
enzimas es una respuesta adaptativa de la célula, la cual presentan en su
genoma la información necesaria para expresar dicha enzima solamente
cuando el inductor, la penicilina, se halle en el medio.

Todas estas variaciones fenotípicas están controladas mediante los diferentes

mecanismos y niveles de regulación de la expresión genética (vistos anteriormente).

Variaciones genotípicas

Son aquellas que se producen a nivel del genoma del microorganismo, produciendo
cambios en su genotipo y en la expresión del mismo; es decir el fenotipo.
Existen dos grupos de variaciones genotípicas que se producen por:

• Mutaciones
• Transferencia e incorporación de material genético exógeno.

161
Mutaciones

Son aquellas modificaciones del genotipo no relacionadas con la trasferencia de

material genético exógeno.
Si se compara sus características con las de las variaciones fenotípicas, se observa
que:

✓ Son heredables; una mutación que afecte a una célula se transferirá a su

descendencia.
✓ Pueden ocurrir con o sin un cambio fenotípico observable; una mutación puede
estar presente en un gen que no se esté expresando y por ende será indetectable.
✓ Son irreversibles; son cambios que no se revierten ni aun cuando las condiciones
ambientales que las originaron ya hayan desaparecido.
✓ Afectan a una pequeña fracción de una población microbiana.

Las mutaciones pueden ser:

A. Espontaneas: Cuando ocurren de manera natural en un medio ambiente.

B. Inducidas: Cuando son generadas por agentes químicos o físicos.

Y a su vez, pueden ser:

 Selectivas
 No selectivas

A. Mutaciones espontaneas

Son fenómenos naturales que consisten en errores en la replicación, reparación o

recombinación del ADN cromosómico de una bacteria; siendo el resultado de la
actividad normal de la célula y de sus interacciones con el medio.
Estas mutaciones están íntimamente relacionadas con la selección natural y han ido
provocando, a lo larga de los siglos, la evolución de los microorganismo.
Los cambios ambientales exigieron una constante adaptación de los organismos a las
diferentes situaciones de su entorno, solamente sobreviviendo, y seleccionándose
así, poblaciones en las que ciertos genes específicos han mutado.
Estas mutaciones son selectivas. Ej.: La capacidad de los microorganismos del
genero Streptococcus de sintetizar penicilinasas permitiéndoles convivir con hongos
del genero Penicillum, productores de este antibiótico que beneficia su crecimiento al
eliminar ciertas bacterias que compiten con él por los nutrientes del medio.

Estas mutaciones se clasifican en:

 Mutaciones puntuales

Consiste en la sustitución de un par de bases nitrogenadas en la secuencia de un

gen. Estas pueden clasificarse a su vez en:

• Transiciones: Es el cambio de un nucleótido de base purica por otro de base

purica y de uno de base pirimídica por otro de base pirimídica
simultáneamente. Es la mutación más frecuente.
• Transversiones: Es el cambio de un nucleótido de base purica por uno de
base pirimídica o viceversa.

162
En la transición; debido a la mutación de las bases C y A por T y G respectivamente,
al producirse la replicación del ácido nucleico, se incorporaran bases nitrogenadas
diferentes; A y C en vez de las originales G y T, modificándose así pares completos
de bases.
En la transversion; se produce la inversión de los pares de bases nitrogenados. No se
conoce bien su mecanismo molecular pero para que se produzca debe intervenir
ciertas formas tautoméricas de las moléculas.

Base molecular de la transición

Las transiciones se dan por la formación de estructuras tautoméricas de las bases

nitrogenadas durante la replicación. Los desplazamientos tautoméricos de los
protones producirán variaciones en la capacidad de las bases para formar puentes
hidrogeno y aparearse con otras bases nitrogenadas.

La A, al presentar un grupo amino, es capaz de aparearse con la T. Pero si se

produce una tautomerizacion en dicha base nitrogenada; un cambio del grupo amino
a imino, esta se comportara como una G, apareándose ya no con T sino con C.
Similar ocurre para el resto de las bases nitrogenadas en donde, dependiendo de la
tautomería que sufran, se comportaran y aparearan como diferentes bases.

Forma tautomerica Se comporta como Emparejamiento

A* (imino) G A* : C
G* (enol) A G* : T
C* (imino) T C* : A
T* (enol) C T* : G

163
En las bases pirimidicas se produce la tautomerizacion del grupo ceto a enol.

Ej.:

Durante la replicación del ADN parental puede ocurrir que una G sufra una
tautomerizacion, pase de su forma cetónica a su forma enolica, y sea incapaz de
aparearse con una C pero si con una T. De esta manera se obtiene 2 células hijas, en
donde solo una de ellas presenta un par de bases erróneo en su ácido nucleico. En
esta 1ra generación todavía no se habla de una mutación.
En la 2da generación, al producirse la replicación del ADN de la célula portadora del
par erróneo; la G presente en una de las cadenas vuelve a su forma cetónica y se
aparea con una C, generando así una molécula de ADN idéntico al parental. La otra
cadena de ADN, que presentan en la misma posición una T, generara una molécula
de ADN mutante en donde se ha cambiado el par G-C parental por T-A.
Por ende, de 4 células hijas solo una será mutante en la 2da generación.

Consecuencias de las mutaciones puntuales

Estas mutaciones afectaran de diferente manera según donde ocurran:

• Si ocurren en la secuencia promotor; esta al ser el sitio reconocido y por

donde se une la ARN polimerasa para iniciar la transcripción genética, evitan
la unión de la enzima y bloquean completamente la transcripción de todo el
operon.
• Si ocurren en la secuencia operador; la cual se combina con moléculas
reguladoras producidas por genes o secuencias reguladoras, puede
producirse diferentes respuestas.
Ej.: Cuando se producen mutaciones en el operador de los operones lactosa,
la afinidad entre este y la molécula represora disminuye, haciéndola incapaz
de evitar la transcripción y síntesis de permeasas y β-galactosidasa. Estas
enzimas se estarán sintetizando todo el tiempo y en condiciones en donde su
presencia no es necesaria. Dicha mutación se realiza experimentalmente
cuando se desea obtener cepas súper productoras de determinadas enzimas.
• Si ocurre en regiones codificantes o en genes estructurales pueden ocurrir
diferentes fenómenos. Ej.:

 Traducción o mutación con sentido erróneo:

164
 Ej.:
En una secuencia normal de ADN, el triplete GAG se
trancribe en CUC en el ARNm el cual codifica para el
aminoacido leucina. Si se produce una transversion de
la segunda base A por T, el triplete GTG se trascribira
en CAC el cual codificara para otro aminoacido,
histidina.
De esta forma, se pueden obtener proteínas que
presentan varianciones respescto a unos cuantos
aminoacidos. Las mutacion pueden inactivar o no las
enzimas dependiendo si ocurren en regiones que
influyen sobre la actividad catalitica de la misma o en
su sitio activo.

 Traducción o mutación silenciosa:

Ej.:
Se produce una transición de la tercera base C por T,
de modo tal que los segmentos de ADN TCC y TCT se
transcribirán en AGG y AGA respectivamente.
Como el código genético esta degenerado, una
modificación en la tercera base del codón no produce
un cambio en el tipo de aminoácido que debe
incorporarse; arginina, y por ende, el polipéptido
obtenido será igual al parental.
La mutación es silenciosa ya que no se evidencia en el
fenotipo.

 Traducción o mutación sin sentido:

Ej.:
El triplete ACC se transcribe a UGG el cual codifica para
el Triptófano. Al producirse una transición de la
segunda base C por T, el triplete ATC se transcribirá en
UAG el cual es un codón de terminación; por lo tanto, se
obtendrá un polipéptido más corto que quizás no sea
capaz de cumplir ninguna función en la célula y se
termine degradando.

 Mutaciones por desplazamiento de marco de lectura (frameshift)

Se producen por pérdida o ganancia de un pequeño número de nucleótidos. Las

microdeleciones o microinserciones que sufre el genoma se producen durante la
replicación del ácido nucleico debido a un deslizamiento por parte de una de las
cadenas parentales o molde o un corrimiento en la nueva cadena de ADN que se

165
está sintetizando.
Esto provoca que la ADN polimerasa:

 No lea un pequeño número de bases de la cadena parental y las saltee;

provocando un corrimiento por delecion.
 Lea 2 veces una misma base, generando un corrimiento por inserción.

Este tipo de mutaciones ocurre normalmente en ácidos nucleicos que tienen

secuencias repetidas.
Cuando el ácido nucleico mutado se transcribe en el ARNm, el marco de lectura se
encontrara corrido en +1 o -1; según sea el número de bases implicadas,
dependiendo de si se produjo un corrimiento por inserción o por delecion
respectivamente.
Al producirse cualquier desplazamiento en el marco de lectura, desde el punto en
donde se encuentra la mutación, la lectura del mensajero será distinta a una normal.
Al variar el número de las bases parentales, los codones del ARNm no serán los
mismos que en una célula normal y codificaran para otro tipo de aminoácido. De este
modo, las proteínas contendrán distintos aminoácidos los cuales influirán sobre su
función.

 Mutaciones por grandes deleciones o borraduras

Son mutaciones irreversibles y se produce

por eliminación de cientos o miles de
nucleótidos. Ocurre en grandes segmentos
del ácido nucleico que se encuentran
flanqueados por secuencias repetidas
(abc) que tiene exactamente el mismo
sentido u orientación.
Este gran segmento sufre una torsión y
forma un bucle intercatenario, haciendo
que las dos secuencias repetidas queden
emparejadas y orientadas una al lado de la
otra y en el mismo sentido. En estas
condiciones puede haber una

166
recombinación a nivel de la porción terminal de las secuencias repetidas o
recombinantes. Al finalizar el proceso; se desprende el segmento que se encontraba
flanqueado llevándose consigo una de las secuencias repetidas recombinada
mientras que la otra queda contenida en el resto del ácido nucleico.
Cuando este tipo de mutación ocurre en un gen se produce la perdida de una
actividad expresada por dicho gen.

 Inversiones

Son mutaciones reversibles y ocurren en

regiones de ácido nucleico que se encuentran
flanqueadas por secuencias inversamente
repetidas (abc y cba). Al producirse la torsión de
la región de interés se formara una argolla y
ambas secuencias recombinantes quedaran
paralelas entre sí, lo que dará lugar a que se
produzca una recombinación entre ellas.
No se producirá el corte y expulsión de la región
flanqueada, sino que esta girara cambiando el
sentido de la lectura con respecto a la molécula
original.
Como el orden queda invertido, la transcripción
será errónea.

 Mutaciones insercionales

Son ocasionadas por elementos génicos transponibles los cuales son secuencia de
ADN que puede moverse de manera autosuficiente a diferentes partes del genoma de
una célula.
Dichos elementos génicos transponibles se pueden clasificar, según su contenido en:

a. Transposon simple o secuencia de inserción (IS): Presentan 2 secuencias

repetidas e invertidas localizadas en los extremos y una región interna en
donde se alojan al gen que codifica para la transposasa, enzima necesaria
para la transposición.
b. Transposon compuesto (Tn): Presentan un IS en cada extremo y en la región
central pueden llevar un gen codificante.

La inserción de un IS o Tn; de cualquier origen, en un gen estructural producirá una

inactivación insercional; provocando un desplazamiento de la pauta de lectura que
generara, frecuentemente, señales de finalización de la traducción y pérdida de
alguna actividad original de la célula.
Pero si el transposon lleva un gen especifico y completo; como un gen de resistencia
a un antimicrobiano, la célula podrá expresarlo como una nueva actividad.

Según el mecanismo, se puede dar una transposición conservativa o no

conservativa.

 Translocaciones

Es el traslado o salto de un segmento del genoma a otro lugar del mismo.

Tasa de mutación o frecuencia de mutación (T)

167
Es la probabilidad de que en una población dada se produzca una mutación en un
tiempo determinado.
Se calcula como el número de mutaciones que se producen por división celular.

En el caso bacterias, como el número de microorganismo que componen las

poblaciones es muy grande, N0 se desprecia y por ende d=N.
Ej.:
Teniendo una población de bacterias de 108 y si un gen en una célula sufre una
mutación:

N= 108 = d m= 1 T= 1x10-8

Esto quiere decir que existe la probabilidad de 10-8 de que haya una mutación en esa
población.

A mayor ramificación o a un mayor número de pasos y de enzimas involucrados en

un proceso metabólico, mayor será la probabilidad de encontrar mutantes en dicho
proceso. Ej.:

Los caminos metabólicos que llevan a la síntesis de Histidina o a la resistencia a la

estreptomicina son distintos.
Las rutas sintéticas de los aminoácidos son, por lo general, ramificadas y en ella
intervienen un gran número de enzimas. Para que un microorganismo exprese la
característica de ser
His (-) (histidina negativo) basta con que se haya modificado o dejado de sintetizar
cualquiera de las enzimas del proceso metabólico. Por ende, la probabilidad de que
una mutación vuelva His (-) una célula es alta debido a que existe un mayor número
de secuencias que codificaran para las diversas enzimas del proceso.
Dado que el camino que lleva a la resistencia a estreptomicina es corto; ya que
depende únicamente de la alteración del gen de la proteína ribosómica 12s, la
probabilidad de que ocurra una mutación en dicho gen que dé lugar a la resistencia al
ATB es muy baja.

Frecuencia de mutantes

168
Es la frecuencia con la que se observa un tipo particular de mutación; o mutantes, en
una población de células.

Aislamiento de mutantes auxotróficos

Las mutaciones pueden darse en distintos niveles como ser genes que codifican para
la resistencia a un ATB, operones involucrados en la síntesis de aminoácidos y en
demás caminos anabólicos y catabólicos.
En microbiología, las mutaciones de mayor importancia son aquellas que se dan en
genes que intervienen en la síntesis de aminoácidos, purinas o vitaminas; las cuales
originaran microorganismos auxótrofos.
Ej.: Partiendo de una cepa parental capaz de sintetizar vitamina B12, las células hijas
auxótrofas perderán la capacidad de sintetizar vitamina B12 debido a una mutación.
Estos microrganismos necesitaran indefectiblemente la disponibilidad en el medio del
factor de crecimiento al cual son auxótrofos para crecer.

Existen diferentes métodos para su aislación:

Aislamiento sin enriquecimiento

Este método se utiliza cuando la frecuencia de mutantes (F) es alta; ya que si F es

baja se corre el riego que la alícuota que se utiliza para sembrar, no contenga
ninguna célula mutante.

1. A partir de un cultivo del cual se sospecha una determinada auxotropia, se siembra

una alícuota en un medio complejo el cual aportara todos los nutrientes necesarios
para que tanto las células parenterales; también llamadas normales o prototrofas;
como las auxótrofas puedan desarrollarse.
Se obtiene una determinada cantidad de colonias; la cual será la máxima cantidad
de colonias que se pueden generar en ciertas condiciones y medio específicos.
2. Se apoya un filtro estéril sobre las colonias, impregnándolo de células y
obteniéndose así un molde de la placa; el cual será la imagen invertida de la placa.
A continuación, se lo pone en contacto con dos medios de cultivos diferentes:
a. En un medio de cultivo complejo: Se observara la misma cantidad de
colonias, las cuales conservaran la posición relativa que ocupaban en
el medio del cultivo inicial.
b. En un medio de cultivo definido carente del nutriente del cual se
sospecha la auxotropia: Se observara únicamente las colonias
formadas por células que no han sufrido mutaciones y son idénticas a
las parenterales, dado que las células auxotróficas no serán capaces
de crecer en dichas condiciones.

169
3. Guiándonos de ambos cultivos y de la placa del medio complejo inicial, podemos
llegar a aislar una colonia y obtener un cultivo puro de células auxótrofas.

Aislamiento por enriquecimiento por penicilina

Este método se utiliza cuando F es baja, y además permite reducir el número de

experimentos. Se utiliza la penicilina salvo en el caso de que el microorganismo sea
un productor de penicilinas o sea resistente a la misma.

1. Se siembra una alícuota del cultivo del cual se sospecha auxotropia en un medio
definido que contiene penicilina.
Como la penicilina es capaz de actúa solamente sobre las células con crecimiento
activo, la cepa parenteral salvaje, al ser capaz de crecer en un medio de cultivo
definido, será sensible a ella y morirá. En cambio, las células mutantes al
encontrarse en un medio definido el cual no contiene el nutriente al cual son
auxótrofas, no se hallaran en división activa y son resistentes a la penicilina.
2. De este cultivo se toma una porción y se lo siembra en un medio complejo, en cual
solo desarrollaran colonias de células auxótrofas dado que las prototrofas salvajes
murieron por acción de la penicilina anteriormente.

Reversibilidad de las mutaciones

Al no existir una verdadera reversibilidad las mutaciones puntuales producidas sobre

determinados genes son fenómenos irreversibles, pero el cambio en sí que ha sufrido
el gen podrá revertirse por:

 Retromodulacion: Se da cuando ocurre una nueva mutación en el mismo sitio de la

mutación inicial y es capaz de revertir o restaurar el genotipo. Es poco frecuente.
 Supresión: Se da cuando una mutación suprime el efecto de la mutación inicial
pero esta ocurre en un sitio diferente al de la mutación original y tienen la
particularidad de no restaurar el genotipo. Es más frecuente.
Existen dos tipos de supresión:
• Indirecta: La 2da mutación permite que surja una nueva actividad en la célula
que reemplaza a la actividad del gen mutado, anulando las consecuencias

170
 fenotípicas y permitiendo al microorganismo realizar las mismas funciones
antes de la 1ra mutación pero su genotipo seguirá siendo distinto al parental.
Ej.: Apertura de una nueva vía para la síntesis de un producto afectado en la
1ra mutación.
• Directa: La 2da mutación corrige el producto del primer gen mutado.
Ej.: Una 1ra mutación producirá un desplazamiento del marco de lectura; ya
sea por microinsercion o microdelecion, a nivel del péptido líder de ciertas
enzimas. La 2da mutación, la cual se producirá en la misma región del gen que
codifica para el péptido líder, volverá a generar un desplazamiento del marco
de lectura pero en el sentido inverso, corrigiéndolo y obteniendo un producto
funcional.

B. Mutaciones inducidas

Son provocadas por alteración experimental del ADN por agentes ambientales físicos
o químicos denominados mutágenos.
Estas mutaciones pueden dañar el ADN de forma irreversible; llevando
inevitablemente a la muerte celular, o interferir con la maquinaria replicativa
provocando una mayor frecuencia de aparición de mutaciones (T).

Agentes físicos

a. Radiaciones UV: Generan dímeros intracatenarios en donde los más abundantes

son los dímeros T-T (50%); también se pueden producir dímeros T-C (40%) o C-C
(10%) pero en menor proporción.
La célula posee un mecanismo post-replicativo de reparación propenso a error
llamado sistema SOS, el cual se encargara de corregir dichas alteraciones.
Los dímeros T-T desencadenan la actividad de la proteína Rec A la cual, al actuar
sobre un grupo de genes que se encontraban reprimidos, permite que se expresen
dando lugar a un grupo de enzimas encargadas de eliminar la alteración. Estas
enzimas realizaran el corte de la sección del ácido nucleico que contiene el
dímero y permitirán el ingreso de la ADN polimerasa, la cual sintetizara la porción
simple banda que se ha escindido. Finalmente, una ligasa unirá las cadenas.
El Sistema SOS se encuentra sujeto a error debido que, al estar conformado por
varias enzimas y al tener que realizar una lectura de lo que debe corregir y
transcribir prácticamente a ciegas, a veces incorpora bases nitrogenadas que no
son las correspondientes. Por lo tanto, una vez que el sistema elimino un dímero,
puede generarse una nueva mutación en la misma región.

Agentes químicos

a. Análogos de bases: Son sustancias con una estructura en anillo, similar a las
bases nitrogenadas de los ácidos nucleicos, pero con propiedades químicas
diferentes. Son los más comunes y solo actúan en células en activa división en
donde la replicación del ácido nucleico se produce activamente.
i. 5-BrU (5-bromouracilo): Es un análogo de la T. Presenta un grupo –Br en
lugar del -CH3 en la posición 5 y puede sufrir frecuentes tautomerizaciones
entre su forma cetónica y enolica.

171
La mutación ocurre por transiciones de los pares T-A a G-C debido a los cambios
tautoméricos que sufre el 5-BrU.

Durante la primera replicación ingresa, en vez de T, un molécula de 5-BrU en su

forma cetónica el cual es capaz de aparearse con la A del ácido nucleico. Pero luego,
el 5-BrU se tautomeríza y pasa a su forma enolica y durante la segunda replicación
se apareara con G en vez de A. Ya, en la tercera replicación, la G; que no debería
haber ingresado, se apareara con C de modo tal que se necesitó de 3 generaciones
para producirse el cambio del par A-T por
G-C.

ii. 2-aminopurina (2-AP): Es un análogo de la adenina y puede sufrir frecuentes

tautomerizaciones entre su forma amina e imino.

Las mutaciones también se producen por transiciones de los pares A-T a G-C debido
a los cambios tautoméricos que sufre la 2-AP.

172
Durante la primera replicación ingresa, en vez de A, una molécula de 2-AP en su
forma amino el cual es capaz de aparearse con la T del ácido nucleico. Pero luego, el
2-AP se tautomeríza y pasa a su forma imino y durante la segunda replicación se
apareara con C en vez de T. Ya, en la tercera replicación, la C; que no debería haber
ingresado, se apareara con G de modo tal que se necesitó de 3 generaciones para
producirse el cambio del par A-T por G-C.

b. Agentes desaminantes o hidroxilantes: No requieren que el ácido nucleico se esté

replicando para actuar.
i. Acido nitroso (HNO2): Provoca una desaminacion oxidativa; en donde se
reemplaza el grupo amino por un grupo ceto, sobre ciertas bases
nitrogenadas como A y C transformándolas en hipoxantinas (HX) y uracilo
(U) respectivamente; lo que origina transiciones durante la replicación.

HNO2 actúa sobre Origina Se aparean con

A HX C
C U A

Antes de que comience la replicación del ADN, el ácido

nitroso actúa sobre la A o C transformándolas en HX y
U. Durante la primera replicación, la HX y U formadas
se aparearan con sus correspondientes bases; C y A.
Al producirse la segunda replicación, las bases que no
deberían haber ingresado (C y A) se aparean con sus
bases complementarias produciendo transiciones del
par A-T a G-C, mediada por la HX, y del par C-G a T-
A, mediado por el U.

ii. Hidroxilamina (NH2OH): Actúa específicamente sobre el grupo amino de la

C, incorporándole un grupo –OH, formando la hidroxicitocina. Esta base es
capaz de aparearse con la A provocando una transición de los pares C-G a
T-A en la segunda replicación del ácido nucleico.

c. Agentes alquilantes: Sustancias químicas que introducen radicales alquílicos en

las moléculas de ADN provocando efectos mutagenicos y letales. Se los puede
dividir en:
i. Monofuncionales: Introducen los radicales alquílicos en una sola
cadena.
ii. Bifuncionales: Introducen los radicales alquílicos en las dos cadena.

Ej.: metil-metano-sulfonato, etil-metano-sulfonato y nitrosoguanidina (NTG)

173
d. Sustancias intercalantes: Sustancias que se intercalan entre las cadenas de ácido
nucleico e interfieren en la replicación. Pueden dar origen a la pérdida o ganancia
de nucleótidos, lo que origina desplazamientos en el marco de lectura.

Ej.: derivados de acridina (naranja de acridina), bromuro de etidio y derivados de

flavina (proflavina).

e. Agentes bloqueantes del emparejamiento de bases: Compuestos que modifican

purinas, como a través de la formación de dímeros, provocando grandes lesiones
en el ADN e induciendo al sistema SOS de reparación que está sujeto a error.

Ej.: Benzo-a-pireno y Aflatoxina-B1 (una micotoxina).

174
Mecanismos de transferencia genética

Las variaciones genotípicas que se producen mediante los mecanismos de

transferencia genética se pueden llegar a expresar, en un microorganismo,
información genética perteneciente a otro microorganismo que ha sido transferida.
Dicha alteración del genoma no es el resultado de un cambio por una mutación
(puntual o no) sobre un determinado gen.

Por ende, como ya se ha visto, las modificaciones en el fenotipo pueden ocurrir por:

• Modificación en la expresión de genes; generando adaptaciones fenotípicas.

• Modificaciones del genotipo; generando variaciones genotípicas.
o Por mutaciones.
o Por recombinación genética

Dentro de los procesos de recombina genética encontramos la reproducción sexual;

en eucariotas, y la transferencia horizontal o lateral; en procariotas.
La transferencia horizontal o lateral les permite a los procariotas adquirir nuevas
capacidades que están presentes en otros microorganismos con los cuales
comparten el medio ambiente
Para que la información genética que se transfiere pueda expresarse hace falta que
se recombine; es decir, que se introduzca dentro de la célula receptora y se
complemente con el material genético de la misma.

Características de la transferencia genética bacteriana

• Es unidireccional; ocurre desde una célula dadora a una receptora.

• Presenta nombres específicos de modo que; la porción de genoma de la
célula dadora que se transfiere se denomina exogenote y el genoma de la
célula receptora es el endogenote.
• Es parcial; solo se transmiten algunos genes pero no el genoma completo.
Aunque, desde el punto de vista teórico, podría existir una transferencia total.
Ej.: En la teoría de la endosimbiosis, en donde una célula fagocita e incorpora
la totalidad de otra siendo capaz de expresar parte del genoma de esta
última. Esta teoría explicaría el origen de los cloroplastos y mitocondrias; en
eucariotas, pero también podría aplicarse a procariotas.
• El destino del material es diverso y puede ocurrir una:
o Recombinación: Permitirá que la información genética se exprese en
la célula receptora, determinando así el excito de la transferencia.
o Destrucción: Se da por la acción de endonucleasas de restricción
presentes en la célula receptora que degradan el material genético
exógeno.
o Perdida: Si no se produce la replicación del exogenote, durante la
primera división celular, solamente estaría contenido en una de las
dos hijas.
En la siguiente división, solo estaría presente en 1 de cada 4 células
hijas y así sucesivamente, hasta que dicho evento de transferencia, en
una población, pasa inadvertido.

175
Mecanismos de recombinación

Se pueden clasificar en:

1. Recombinación homóloga o general: Ocurre en cualquier lugar del genoma y debe

existir un reconocimiento y apareamiento entre fragmentos significativos o
secuencias con homología suficientemente extensa presentes en el endo y
exogenote. Depende de la intervención de la proteína RecA; encargada de ubicar
adecuadamente el fragmento de material genético en el lugar donde se encuentra
la homología.
2. Recombinación no homóloga o específica: Es un mecanismo independiente de la
RecA y puede clasificarse en:
A. Legítima-conservativa: Se produce cuando las secuencias de homología; o
"específica de sitio", son cortas y son reconocidas por proteínas específicas.
Ej.: La integración de ADN fágico en sitios concretos del genoma de una
bacteria se produce a través de secuencias de inserción; las cuales se
encuentran en el genoma viral y en el bacteriano, que al ser reconocida por
determinadas proteínas de la célula receptora, producirán la inserción del
material viral en un sitio especifico.
B. Ilegítima: Se da en los fenómenos de transposición; en donde se incorpora
un transposon mediante la acción de la enzima codificada por un gen
contenido en el mismo transposon; la transposasa. No depende de
homologías.
Algunos elementos transponibles dejan copia en el sitio original, dando lugar
a una recombinación específica duplicativa.

Mecanismos de transferencia genética

Son los mecanismos por los cuales se produce el pasaje del exogenote hacia el
endogenote y, conjuntamente con la recombinación de los mismos, determinaran el
éxito de la incorporación de nueva información genética. Se pueden clasificar en:

1. Transducción: Esta mediada por partículas transductoras víricas; es decir

fragmentos de ácido nucleico que son llevados de una célula a través de una
capside vírica.
2. Transformación bacteriana: Captación del ambiente de ácido nucleico
desnudo, en estado libre.
3. Conjugación: Transferencia promovida por plásmidos conjugativos
4. Transposición: Transferencia mediada por elementos transponibles que
pueden “saltan" de un lugar a otro de los genomas de diferentes bacterias.

1. Transducción

Es un proceso de transferencia que involucra partículas transductoras víricas las

cuales contienen ADN genómico (exogenote) de una célula dadora encerrado dentro
de una capside. Para que exista transducción debe producirse una infección viral
previa sobre la célula dadora, provocada tanto por un fago lítico o lisogenico.
Las partículas transductoras víricas resultantes de una infección se denominaran de
diferente manera según su origen:

▪ De un ciclo lítico → Partícula transductora generalizada (PTG); y el

mecanismo de transferencia será una Transducción generalizada.

176
 ▪ De un ciclo lisogenico → Partícula transductora especializada (PTE); y el
mecanismo de transferencia será una Transducción especializada.

Transducción generalizada:

I. Después de que el virion realizo los procesos de fijación y penetración; se produce

el ingreso del material viral a la bacteria, el cual, mediante la síntesis de proteínas
virales tempranas, desencadenara todos los procesos del ciclo lítico; incluyendo la
degradación del propio ácido nucleico bacteriano.
Pero, aun después de la síntesis de proteínas tardías y durante el
empaquetamiento de los componentes virales, es posible encontrar fragmentos de
ADN bacteriano que no ha sido totalmente degradados.
II. Como el autoensamblaje se produce sin ningún tipo de control siendo guiado
solamente por la estructura de las proteínas de la capside; de forma totalmente
aleatoria se podrá incorporar a dichas partículas genoma viral o fragmentos de
ADN bacteriano de tamaño adecuado.
III. Al producirse la lisis de la célula infectada se obtendrán verdaderos viriones y
PTG; conformadas por una capside viral que no contiene, en su interior, el genoma
viral sino fragmentos de ADN bacteriano.
IV. Como el bacteriófago ataca una determinada población bacteriana sensible; cuyas
células expresan los mismos receptores de superficie necesarios para que se
produzca la adhesión del fago, algunas células serán infectadas por las PTG
debido a la presencia de ‘’recetores para el reconocimiento de la superficie
celular’’, existentes en las capsides de los viriones y de las PTG, que median el
proceso de adhesión.
Las células infectadas por los viriones desarrollaran un nuevo ciclo lítico.
V. De esta forma, las PTG infectaran una bacteria; ahora célula receptora,
provocando el ingreso de un exogenote el cual puede seguir distintos destinos:
a. Si se da la oportunidad y el exogenote presenta suficiente homología con
alguna región, puede recombinarse y parte de la información que contiene
se incorpora al genoma de la célula receptora. Se generara una célula
transducida y existirá transferencia de material genético.
Si el exogenote corresponde a un gen completo, es posible que este se

177
 exprese en la célula receptora. Así, la célula obtiene información que le
puede ser útil o no.
b. La mayoría de las veces, el exogenote es un fragmento pequeño no
codificante, y al insertarse en una determinada región, es más probable que
inactive esa región.
c. El exogenote se pierde dado que no encuentra los sitios de homología
necesarios para la recombinación y es degradado por exo y
endonucleasas del citoplasma.
d. El exogenote puede perderse en las siguientes divisiones celulares ya que
persiste en la célula sin replicarse, proceso llamado transducción
abortiva. Cuando la célula que originalmente recibió el exogenote se
divida, lo pasara solo a una de las dos hijas y así sucesivamente, haciendo
que este se vaya diluyendo por transmisión unilateral.

El éxito de una transducción generalizada es muy bajo.

Puede transferir cualquier fragmento del genoma de la célula infectada, por eso es
generalizada.

Transducción especializada:

I. En el ciclo lisogenico; como en el fago λ, después de la etapa de adsorción a la

superficie e inyección del material genético, este se inserta dentro del cromosoma
bacteriano hospedador y permanecerá latente hasta que, por un proceso de
inducción, se pondrán en marcha todos los mecanismos necesarios para dar inicio
a la etapa lítica del ciclo; a través de la cual pasaría a infectar otras células de la
población.
En el proceso de inducción, se genera una torcion en el acido nucleico de la
bacteria infectada para producirse la salida y liberacion del profago, necesario para
tenga lugar la replicacion del genoma viral.
II. Durante la induccion pueden ocurrir errores. En uno de ellos, durante la torcion del
acido nucleico se genera un corrimiento expulsandose, en vez del genoma viral

178
 completo, parte de este genoma junto a porciones del genoma bacteriano.
El fragmento de acido nucleico liberado, para que pueda caver dentro de las
capsides virales, debe tener un tamaño adecuado; es por eso que el genoma viral
deja algunos genes propios en el cromosoma bacteriano.
III. Al continuar y producirse la etapa litica del ciclo; con replicacion de dicho
fragmento de acido nucleico, sistensis de proteínas de la capside y ensamblaje de
ambas partes, se obtendran fagos defectivos o PTE; mayoritariamente, que son
híbridos de ácido nucleico viral y bacteriano y tienen la particularidad de poder
haber arrastrado algún gen bacteriano que se encuentre adyacente al lugar donde
se ha insertado el profago.
Ej.: La inserción del genoma del fago λ se produce cerca de los genes que
codifican para la β-galactosidasa; por ende los fagos defectivos originados por este
virus llevaran información para la síntesis de dicha enzima (partícula λ gal+) y al ser
incorporados por una bacteria β-galactosidasa negativa (gal-), adquirirá la
capacidad para degradar y utilizar la lactosa.
IV. Las PTE infectaran nuevas células de la población y el ADN lineal hibrido que
transportaban ingresara al citoplasma en donde se circularizara. Al ser un genoma
viral defectivo, presenta un sitio att anormal o habrá perdido el gen int; de modo tal
que la única posibilidad de integración es la recombinación homóloga o general,
dependiendo de la proteína RecA de la bacteria receptora.
V. El ácido nucleico hibrido que se insertan en el genoma bacteriano no podrán
desencadenar una etapa lítica, por más que las condiciones para la inducción sean
adecuadas. Esto se debe a que el genoma viral ha cedido parte de sus genes,
para dar lugar a los genes bacterianos. que son esenciales para la vida libre y el
ciclo lítico del fago.

El éxito de la transducción especializada es mayor y es bastante fácil de detectar ya

que al arrastrarse un gen completo, la célula receptora adquiere una nueva propiedad
detectable o medible.

2. Transformación bacteriana

Es una forma de transferencia genética que provoca una variación hereditaria de una
célula bacteriana susceptible por captación de ADN desnudo y libre en el medio; el
cual se genera naturalmente cuando una célula muere, se lisa y libera su genoma.
Bajo determinadas condiciones se producirá la incorporación de este exogenote y la
posterior recombinación con el endogenote de la célula receptora.
No todas las bacterias serán capaces de ser transformadas; por más abundante en
ácidos nucleicos libres que sea el medio, siendo necesario que la célula sufra ciertos
cambios:

Debe encontrarse en un estado de competencia el cual es un estado fisiológico que

involucra una serie de cambios que le permite a la célula captar ADN del medio y
producir la recombinación. El establecimiento de dicho estado depende de la especie
bacteriana y, dentro de cada especie, está influido por la densidad celular, pH,
temperatura, nutrientes (fuentes de C y N).
El estado de competencia:

• Es la capacidad de la célula de expresar determinados receptores en su

superficie a donde se unirá el ácido nucleico libre del medio.
• Es la capacidad de sintetizar enzimas que degraden la dobles hebras del
ácido nucleico y transformarlas en hebras simples.

179
 • Es la capacidad de sintetizar proteínas que ayudan a incorporar dichas hebras
simples de ácido nucleico y llevarlas hasta el sitio en donde debe producirse la
recombinación.

Todos estos cambios están codificados en el genoma bacteriano y se expresan en

determinadas ocasiones. Cuando los genes que participan en este proceso se
expresan, la célula entra en estado de competencia y puede ser transformada.

Características generales de la transformación bacteriana natural

Según sea el microorganismo del que se trate, la transformación puede presentar

sutiles diferencias pero sigue una línea general:

• El ADN, para que sea capaz de transformar, ha de ser de cadena doble.

• Para cada evento de transformación basta la interacción de una sola
molécula de ADN con la célula receptor. Por otro lado, el número de
moléculas de ADN que puede tomar una misma célula es limitado, y presenta
una cinética de saturación. A partir de cierta concentración de ADN
transformante, se da la meseta de saturación y no aumenta el nº de colonias
transformadas.

El fenómeno se da en una serie de fases comunes; tomando como ejemplo el

Streptococus pneumoniae (Gram (+)):

I. Estado de competencia: Se da al final del crecimiento exponencial y afecta a

casi todas las células. Conforme las células van creciendo y multiplicándose, van
sintetizando y excretando al medio un factor activador de la competencia (FAC).
Al alcanzar una determinada concentración extracelular, este se une a un receptor
especifico de la superficie el cual induce la expresión de genes que codifican para
las proteínas (12); dentro de las cuales se hayan las proteínas de reconocimiento y
de unión al ácido nucleico y una autolisina, que hacen al estado de competencia.
II. Unión y entrada del ADN exógeno a la célula: El ácido nucleico transformante es
reconocido por las proteínas de unión a ácido nucleico que se expresan solamente
durante el estado de competencia. Durante este proceso se produce la degradación

180
 controlada de la pared celular para exponer los sitios de unión.
Externamente existen exonucleasas que degradaran una de las cadenas de ácido
nucleico transformándolo en ADN monocatenario. Esta cadena intacta ingresa al
interior de la célula gracias a la energía liberada durante la hidrolisis.
III. Fase de eclipse: Conforme la cadena ingresa, ira siendo recubierta por monómeros
de una proteína específica formarse el complejo de eclipse. Dicho complejo
protege al exogenote del ataque de las endonucleasas citoplasmáticas y lo prepara
para la ulterior fase de recombinación.
IV. Recombinación con el endogenote (destinos del exogenote): Se da a través de una
recombinación homóloga de la cadena sencilla del exogenote con la zona
complementaria del endogenote. El proceso es dependiente de RecA, previamente
inducida por la competencia, la cual realiza los cortes y abre las cadenas del ADN
del genoma bacteriano en donde se insertara el exogenote y de enzimas
encargadas de desplazar y degradar la cadena homologa sobrante del endogenote.
Como resultado de esta integración se forma un heterodúplex, el cual si este
posee malos emparejamientos de bases actúa un sistema de reparación,
denominado sistema Hex.

Así, con la subsiguiente replicación del genoma bacteriano, se producirá una copia
del exogenote provocando la variación en el genotipo de la célula hija.

El proceso de transformación puede ocurrir tanto en bacterias Gram (+) como Gram (-
); tales como Neisseria gonorrheae y Haemophilus influenzae.
La transformación bacteriana presenta ciertas diferencias en bacterias Gram (-):
• La competencia se da en fase estacionaria y afecta al 100% de las células
del cultivo.
• La competencia se induce internamente, no se produce FAC.
• Solo capta ADN de especies del mismo género. Esta selectividad se debe a
la presencia de receptores de superficie (3 o 4) que en conjunto reciben el
nombre de transformosomas.
• El ADN ingresa a la célula como ADN doble cadena.
• No existe complejo de eclipse entre ADN y proteínas.

3. Conjugación

Es la transferencia de información genética desde una célula dadora a una receptora

mediada por plásmidos conjugativos capaces de autoreplicarse y transferirse a otras
células.
Para que exista conjugación, además de existir el plásmido, debe haber un contacto
directo entre ambas células. Este contacto pueden o no estar involucradas
estructuras superficiales especializadas y de funciones específicas; como los pelos
sexuales.

Plásmidos

Son elementos genéticos extracromosómicos con replicación autónoma y pueden ser

de diferentes tipos.

181
 • Son circulares, covalentemente cerrados superenrrollados.
• Pueden ser pequeños (2 kb), grandes (500 kb) o megaplasmidos (1600 kb en
Rhizobium).
• Codifican para distintas funciones; como ser:
o Resistencia a ATB o metales pesados
o Virulencia; desarrollando la producción de toxinas y la adherencia a los
tejidos del hospedador.
o Producción de bacteriocinas.
o Utilización de determinados carbohidratos.
• Los plásmido críptico son aquellos en los cuales no se tiene evidencia del tipo
de función realizan los genes que lleva.

Los plásmidos autotransmisibles se denominan conjugativos, mientras que los que

no se transmiten se denominan no conjugativos.
Algunos plásmidos son capaces de insertarse en el cromosoma bacteriano y se
denomina episomas.

Uno de los plásmido más conocido y utilizado es el plásmido F de la E. coli estudiado

de la cepa K12, el cual presenta:

❖ Región Tra: Contiene genes que participan en formación de un pelo sexual. Las
bacterias que presenta el plásmido con dicha región se denominan cepas fértiles
(F+) y serán dadoras de material genético. Las células que no presentan esta
región; o el plásmido en sí, se denominan células infértiles (F-) o receptoras.
❖ Punto OriT: Es el punto por donde se produce un corte durante la replicación del
plásmido.
❖ Genes que regulan la transcripción: Se encuentran a continuación del punto OriT.

Por lo tanto, durante la replicación del plásmido por medio del círculo rodante, los
primeros genes en replicarse serán los próximos a OriT y por último los genes Tra.

Genes tra

182
Cuando una célula F+ se pone en contacto con una célula F- se induce, a partir de la
información contenida en la región Tra, la formación de un pelo sexual y el contacto.
Los genes Tra, también:

• Estabiliza a la célula.
• Codifican para un endonucleasa específica que realizaran el corte en el punto
OriT para iniciar la transferencia.
• Codifica para una helicasa que separa y desplaza la cadena que ha sufrido el
corte en el punto oriT, la cual será transferida a la célula receptora.
• Codifica para proteínas que se mantiene ancladas a los extremos de la
cadena del plásmido cortada y facilitan la transferencia de la misma. Una vez
que esta ingreso totalmente a la célula receptora, dichas proteínas unirán los
extremos de la cadena.

Por lo tanto, estarían involucrados en todo el circuito completo que consiste en:

1. Contacto
2. Acercamiento por retracción del
pelo.
3. Apertura o unión de la superficie
de ambas células.
4. Corte en el plásmido en la región
del OriT para que inicie el proceso de
replicación asimétrica por el círculo
rodante.
5. Pasaje de la cadena cortada del
plásmido a la célula receptora.
6. Conforme ingresa la cadena
transferida, se producirá la síntesis de
la cadena complementaria para la
generación de un plásmido completo.
7. Separación de las células.

La síntesis de ADN es necesaria para la conjugación ya que a medida que se

produce la transferencia de una de las cadenas parentales del plásmido, la cadena
sobrante es utilizada como molde, por el mecanismo del círculo rodante, para
sintetizar y reemplaza la cadena transferida en el donador. En la célula receptora
ocurrirá un proceso similar.
De este modo que al final del proceso conjugativo ambas células adquirirán
plásmidos completos bicatenarios y el carácter F+.

➢ La ssíntesis de la cadena de reemplazo en el donador es continua, se inicia a

partir de un ARN cebador y sería equivalente a la síntesis de la cadena
adelantada de la replicación normal.

183
 ➢ La síntesis de la cadena complementaria en el receptor es discontinua, a
base de fragmentos de Okazaki y sería equivalente a la síntesis de la cadena
retrasada de la replicación normal.

Investigaciones sobre la conjugación

Lederberg y Tatum: En 1946 realizaron un experimento de conjugación en el que

utilizaban 2 microorganismos auxótrofos con distintos marcadores genéticos:
• Uno con la capacidad de sintetizar treonina (Tre) y leucina (Leu) pero no
metionina (Met) ni biotina (Bio).
• Uno con la capacidad de sintetizar metionina (Met) y biotina (Bio) pero no
treonina (Tre) ni leucina (Leu).

Su experimento consistió en:

I. Mezclar ambos auxótrofos plaqueadolos en medios de cultivo libres de
metionina, leucina, treonina y biotina.
II. Utilizando medios de cultivo del mismo tipo, plaquearon por separado los
cultivos puros de ambas.
III. Después del tiempo de incubación, observaron que tanto la cepa original Met-
Bio (-) como la cepa Tre-Leu (-) plaqueadas individualmente no eran capaces
de desarrollar en el medio. Únicamente la mezcla de ambos auxótrofos podía
desarrollarse en esas condiciones.
De alguna manera, las características positivas de una de las cepas se habían
transferido a la otra permitiendo que se obtuviera un prototrofo.

Existía la posibilidad de que en dicha mezcla hubiera habido ácido nucleico libre el
cual podría haber sido el responsable de la transformación sufrida por las cepas.
Para determinar esto se planteó un experimento utilizando:
• Un tubo en U separado por una membrana en el cual, en uno de sus lados se
colocó una suspensión de una cepa tratada con ADNasa y del otro lado la otra
cepa sin el tratamiento.
De esta manera, ambas cepas compartirían el medio de cultivo pero no estarían en
contacto. El ADN libre podría pasar por el filtro y llegar hasta el otro lado del tubo en
U, encontrarse con las células receptoras y producir una transformación bacteriana
obteniéndose los prototrofos o recombinantes. Pero al realizar el experimento no

184
 obtuvieron recombinantes, desechando la posibilidad del fenómeno de
transformación.

Cuando analizaron el hecho de que:

➢ En una mezcla de cepas F+ y F- (producto F+ x F-), casi la totalidad de las
células infértiles (F-) se volvían fértiles (F+).
➢ En el producto F+ x F- aparecían recombinantes pero a una frecuencia baja;
alrededor de 10-5.
➢ En una mezcla de 2 cepas F- (producto F- x F-) no dan recombinantes.

Llegaron a la conclusión de que en las células F+ debía de existir un factor sexual o

factor de fertilidad; que hoy sabemos que es el plásmido, el cual de alguna manera
debía de tener la doble capacidad de transferirse con alta frecuencia; casi un 100%, a
las células F- y de dar origen en ellas a recombinantes, pero con mucha menor
frecuencia (10--5).
De modo tal que los procesos de conjugación y transferencia del plásmido eran
independientes de la recombinación y la aparición de los nuevos caracteres que se
expresaban como parte del cromosoma bacteriano.

Lederberg y Hayes: En 1950 utilizaron las recombinantes que se obtenían del

producto F+ x F-, las cuales denominaron células Hfr (alta frecuencia de
recombinación), para hacer una nueva transferencia a células F-.
Observaron que la frecuencia de recombinación era mayor comparada con la
frecuencia de recombinación para una mezcla de cepas F+ y F- aunque el producto
Hfr x F- no generaba cepas fértiles (F+)

Alan Cambell: En 1962 planteo un modelo hipotético que resultaría ser correcto:
• En las células F+, el factor de fertilidad (F) se encuentra en forma de plásmido de
replicación autónoma, independiente del cromosoma. En este estado, el factor F
sólo puede provocar su propia transferencia conjugativa; a través del contacto
directo, a las células F- las cuales adquirirán el carácter F+ y serán capaces de
transferirlo; sin embargo la frecuencia de recombinación en estas células es muy
baja.
• Dentro de una población de células F+; con una frecuencia de 10-5, el factor F
interacciona y se integra al cromosoma bacteriano; por recombinación homóloga a
través de secuencias de inserción, obteniéndose un episoma el cual se replica
conjuntamente con el genoma bacteriano y no como un plásmido de replicación
autónoma.
Este fenómeno se da en el caso de las células Hfr, las cuales se puede detectar la
aparición de nuevos caracteres codificados en los genes presentes en dicho
episoma; siempre y cuando dicho plásmido no sea críptico, y son las responsables
de la baja frecuencia de recombinantes que provocan los cultivos F+.

Desde este punto, para explicar el proceso de transferencia de genes y la aparición

de nuevos caracteres:
I. Una vez que el plásmido se ha integrado al genoma de una célula Hfr dejara de
controlar su propia replicación, pero como la región tra continua funcionando con
normalidad, la célula podrá sintetizar pelos sexuales y desencadenar la
conjugación como si se tratara de una célula F+.
II. La transferencia y replicación del episoma, por medio del circulo rodante, desde
una célula Hfn hacia una F- se inicia con un corte en el punto OriT.

185
 Debido al sentido que adopta la replicación por el circulo rodante y la posición
relativa que adquiere el plásmido al integrarse al cromosoma, se transfería un
hebra; cuyo extremo estaría dado por el punto OriT, que se extiende hacia la
derecha de dicho punto transmitiendo inmediatamente todos aquellos genes que
se hayan en aquella posición. De manera que lo último que se transferiría a las
células F-, incorporado en la hebra, sería la porción del plásmido que se encuentra
hacia el lado izquierdo de oriT; es decir la región tra.

III. Sin embargo, como el plásmido forma parte del cromosoma de la célula, al
terminarse de transferir parte de los genes del ADN plasmídico, comenzara la
transferencia de genes pertenecientes a la célula dadora que se hallan contenidos
en el genoma de la misma. De esta manera se producirá el pasaje de información
genética entre dos células.
IV. La hebra ingresara a la célula en donde se sintetizara su cadena complementaria.
El fragmento transferido no tiene capacidad de replicación autónoma y su destino
será perderse a no ser que se produzca recombinación.
V. Si bien el contacto entre las células es imprescindible para el proceso de
conjugación, dura pocos minutos siendo insuficiente para que todo el cromosoma
bacteriano sea transferido a la otra célula, por ende:
o Existe una mayor probabilidad de transferir aquellos genes que se
encuentran a la derecha de Orit y una menor posibilidad de transferirse
aquellos próximos a Tra o a la izquierda de OriT.
o Al no producirse la transferencia completa del cromosoma; y por ende la del
plásmido, el fragmento corto que se recombinara con el genoma de la célula
receptora no presentara la región tra; esencial para la formación del pelo
sexual y el contacto celular, procesos necesario para la conjugación.

Por lo tanto…

✓ Una vez realizada la transferencia, la cepa Hfr seguirá siendo Hfr porque
retiene una copia del plásmido F integrado. Sin embargo, la célula receptora
no se convierte en Hfr porque sólo se ha transferido parte del plásmido F
integrado
✓ Las cepas Hfr tienen la capacidad de transferir porciones de su cromosoma.
✓ Al no producirse una transferencia completa del plásmido, los cruces Hfr x F-
no suelen conferir el carácter F+ a las células receptoras, pero si suelen

186
 originar celular F- que sufren una recombinación y presentan un nuevo
genotipo.

Jacob y Wollman: Realizaron experiencias con células Hfr y F-, las cuales expresaban
diferentes genes, con el fin de poder analizar el sentido de la transferencia genética
cuando se ponían en contacto ambas células:

• La cepa Hfr tenía 6 caracteres: 4(+) y 2(-).

• La cepa F- tenia 6 caracteres: 4(-) y 2(+).

I. Pusieron en contacto ambas cepas por diferentes tiempos.

II. Tomaron alícuotas y las agitaron fuertemente con objeto de deshacer el
contacto entre parejas de células e interrumpir la conjugación.
III. Sembraron la suspensión en un medio mínimo, el cual contenía los factores
ABCD pero no F y G. En dichas condiciones, las únicas células capaces de
desarrollar seria las F-, dado que serían capaces de sintetizar los factores
faltantes.
Tras incubar las placas, pudieron obtener colonias que derivaban únicamente
de las células F-; ya que el resto de las células Hfr habían padecido en dichas
condiciones.

Habiendo seleccionando la población con que iba a trabajar, repitieron el experimento

pero eliminando, de una a la vez, los factores ABCD mediante el uso de medios
mínimos que carecían de alguno de ellos.

Ej.: Medio A-, B+, C+, D+ Medio A+, B-, C+, D+

Al cuantificar el número de colonias que obtuvieron en cada uno de los medios

pudieron determinar el número o porcentaje de recombinantes que se obtuvieron para
cada uno de los caracteres individualizados.
Al graficar el porcentaje de cada uno de los caracteres en función del tiempo en que
se interrumpió el cruce conjugativo, observaron que:

Para el carácter:
A) Obtenían rápidamente
recombinantes y en altos
números
B) Aparecían recombinantes
pero en menor proporción y
después de un mayor tiempo
contacto entre las células.
C) y D) Aparecían
recombinantes pero en mucho
menor proporción y después de
un mayor tiempo de contacto
entre las células.

187
Cada gen tiene un tiempo de entrada inicial característico; que se manifiesta por el
punto del eje de abscisas cortado por la curva.
Cada gen da una curva con una pendiente característica, lo que implica que cada
marcador no entra a la población de bacterias receptoras “de un tirón”, sino que
algunas células lo reciben antes y otras después.
La existencia de una meseta final significa que a partir de un determinado punto ya no
entra más marcador; es decir, ya se ha producido toda la transferencia de ese gen.
Como consecuencia del experimento se estableció que:

• La transferencia genética ocurre en una sola dirección, presenta una

orientación determinada, de modo que los genes entran ordenada y
secuencialmente.
• El gen que se encuentra más cerca del punto de inicio, en este caso A, es el
que se va a transferir con mayor frecuencia, por lo que habrá mayor
recombinantes con el carácter A.
• La correlación entre tiempo de aparición y frecuencia final del marcador
sugiere que las parejas de cruce donador-receptor se separan
espontáneamente en algún momento de la conjugación.

Si se analiza el porcentaje de las recombinantes con cada uno de los caracteres se

puede determinar la ubicación de los genes en el cromosoma bacteriano, siendo la
base para la elaboración de mapas genéticos.

4. Transposición

Cuando un elemento transponible se inserta en el cromosoma, puede insertarse

dentro de un gen codificante y por lo tanto inactivarlo; pero cuando el transposon
contiene en su interior un gen que es codificante, el endogenote va a poder
expresarlo.
La transposición de elementos génicos transponibles puede producirse por dos
mecanismos; pudiendo clasificarla en:

• Transposición conservativa: No aumenta el número de copias del transposón

en el interior de la célula.
Se expresa la transposasa; la cual se haya codificada en la región media del
transposon, la cual realizara dos cortes a la misma altura en cada una de las
cadenas del ácido nucleico del genoma donante, dejando aislado el
transposón.
A continuación localiza una secuencia diana en el genoma aceptor y realiza
un corte cohesivo para que luego dichos extremos puedan ser unidos a los del
transposon aislado por medio de la acción de una ligasa.
Finalmente, la ADN polimerasa completara las zonas de simple cadena
generadas por el corte cohesivo finalizando la incorporación del transposon al
ácido nucleico. Quedará un hueco en el genoma donante, que puede ser letal
si no se repara.

188
• Transposición no conservativa: En este caso la transposasa realizara cortes
cohesivos tanto en la secuencia diana como en el genoma donante pero no se
producirá la expulsión inmediata del transposon. De esta forma, se integrara
todo el genoma donante con el aceptor mediante la formación de un
intermediario denominada estructura entrecruzada.
Dicho intermediario será resuelta por una resolvasa la cual, según su modo de
acción, dará lugar a una:
o Transposición no replicativa: El genoma donante se libera, dejando el
transposon en el genoma receptor. Al igual que en la transposición
conservativa, queda un hueco en el genoma donante, que puede ser
letal si no se repara.
o Transposición replicativa: Se produce una replicación desde los
extremos 3’ del genoma aceptor, lo que acaba duplicando el
transposón y produciendo un genoma mixto llamado cointegrado. La
resolvasa rompe el cointegrado mediante una recombinación recíproca
que unirá los extremos del ADN aceptor original y liberara el genoma
donante con su transposón.

189
Ecología microbiana

En la Naturaleza, tanto los organismos como los microorganismos, interactúan entre

sí, con otros seres vivos; como animales y plantas, y con su ambiente. Muy
raramente se encuentran aislados.
La ecología es la rama de la biología que estudia los ecosistemas, los cuales son
sistemas funcionales donde aparecen involucradas cuestiones bióticas; los seres
vivos, y abióticas; las condiciones ambientales.
La ecología microbiana estudia los ecosistemas que están constituidos en su
totalidad por microorganismos y que son influenciados profundamente por estos; y
también la estructura, composición y fisiología de las comunidades en su medio
ambiente.

Niveles de organización o jerarquía ecológica

Está conformada por diferentes estratos:

Individuo: Las células microbianas se
reproducen y originan poblaciones

Población: Es un grupo de individuos

con características, no iguales, pero
similares. Las poblaciones
relacionadas metabólicamente
conforman gremios.

Comunidad: Es un conjunto de
gremios.

Ecosistema: Está constituido por la

suma de los factores biótico y
abióticos de una región determinada.
Las comunidades interaccionaran y
reaccionaran ante las condiciones
ambientales característicos de un medio.

Dinámica de las comunidades bacterianas

Una comunidad bacteriana es un grupo de poblaciones que viven en un mismo

lugar:

• Las poblaciones de una comunidad interaccionan entre sí de manera

integrada en un espacio físico, el habitad.
• El papel funcional especializado de las poblaciones de una comunidad en
un habitad se lo llama nicho.
• Existe competencia entre las poblaciones por ocupar los nichos disponibles
que mantiene la comunidad.
• En algunos casos, los primeros organismos que colonizaron el nicho
presentan ventajas selectivas frente a otros, pero existen casos en donde se
produce una sucesión de poblaciones, en la cual una población mejor
adaptada desplaza a la que ocupaba, originalmente, el nicho.

190
Principio de selección natural

Los ecosistemas y comunidades microbianas pueden ser muy estables.

Las comunidades presentar características y composiciones determinadas y
constantes las cuales varían al interactuar con el ambiente. Este seleccionara, por
diversos factores o agentes, ciertas comunidades; que serán capaces de
establecerse y proliferar, y eliminara otras. Este principio se denomina principio de
selección natural y se refiere a la supervivencia del más apto.

La acción selectiva es posible gracias a la gran diversidad fisiológica y metabólica

de los microorganismos originada en las diferentes constituciones genéticas. Con
la aparición y el avance de la genética, ecología se pasó a definir como la interacción
del genoma de cada organismo con el ambiente, estableciendo que la capacidad de
adaptarse es hereditaria.

Como el medio ambiente siempre es variable, dichos cambios influirán sobre los
microorganismos produciendo:
• Una adaptación genotípica: Cuando el genoma es fijo.
• Una adaptación evolutiva: Cuando el genoma es variable.

Agentes de selección natural

Son aquellos factores que mediaran el proceso de selección natural y se clasifican

en:

• Factores físico-químicos.
• Concentración de nutrientes.
• Cadena alimentaria.
• Barreras de colonización: mecánicas y químicas

I. Factores físico-químicos

Son aquellas condiciones ambientales que influirán en la distribución de los

microorganismos. Estas pueden ser:
• pH
• Temperatura
• Concentración de CO2 u otros agentes químicos.
Estos factores también dependerán de los seres superiores que interactúen con los
microorganismos.

II. Concentración de nutrientes

Tanto el agua de lagos, océanos y ríos; como la mayoría de los suelos presenta una
baja concentración de nutrientes, siendo ambientes oligotróficos para los
microorganismos.

Ej.: En el caso general del agua; [Materia orgánica total]= 1- 25 mg/ml

[Materia orgánica aprovechable]= mucho menor

Producida por diversas actividades antrópicas, la polución de los diferentes

ambientes provoco un gran aumento en su concentración de nutrientes inorgánicos,

191
transformándolos en ambientes eutrofos. Este aumento de fertilidad del ambiente;
denominada eutrofización, también puede provocarse por procesos o fuetes
naturales.
En el caso de lagos, la eutrofización se determina midiendo los niveles de:
• Nitrógeno; el cual deriva en gran medida de los fertilizantes.
• Fosforo; el cual deriva en gran medida de los detergentes.
Además de la concentración de nutrientes, también influirá mucho la calidad o el tipo
de nutrientes que exista en el medio.

III. Cadena alimentaria

La selección natural también dependerá del nivel trófico del microorganismo.

Se denomina nivel trófico a las categorías en donde se agrupan los conjuntos de
organismos pertenecientes a un ecosistema, que ocupan el mismo lugar respecto al
flujo de energía y nutrientes de su hábitat, es decir, que ocupan un lugar equivalente
en la cadena alimentaria.

Nivel trófico Orden en la cadena Ejemplos

alimentaria
1er Nivel trófico Productores primarios Bacterias fotosintéticas y
quimioautotrofas, cianobacterias,
algas y vegetales.
2do Nivel Consumidores Herbívoros y carnívoros
trófico
3er Nivel trófico Parásitos y Hongos y microorganismos
descomponedores

Productores primarios: Son autótrofos y sintetizaran materia orgánica a partir de CO2,

siendo la base de la cadena alimentaria. Pueden ser organismos fotoautotrofos; los
cuales utilizaran la energía lumínica como fuente de energía, o quimioautorofos; los
cuales utilizaran compuestos inorgánicos como fuente de energía.
Consumidores: Son heterótrofos y fabrican su materia orgánica partiendo de aquella
que obtienen de otros seres vivos.
• Los consumidores primarios o herbívoros: Son organismos que se alimentan
directamente de los productores primarios. Ej.: Oveja.
• Consumidores secundarios o Carnívoros: Son los organismos que se
alimentan de los consumidores primarios. Ej.: Lobo
• Consumidores terciaros: Son los organismos que se alimentan de los
consumidores secundarios. Ej.: El hombre.
Descomponedores: Son aquellos organismos que utilizan como fuente de energía y
carbono la materia orgánica que se encuentra presente en los restos de todos los
demás organismos de los niveles tróficos o de sus excreciones.
Los saprófitos son organismos heterótrofos que absorben nutrientes por ósmosis,
como en el caso de las bacterias y los hongos.
Son los responsables del reciclado de los nutrientes permitiendo que la materia que
ha ido pasando de unos organismos a otros pueda ser utilizada de nuevo por los
productores primarios, cerrando el ciclo de la materia en el ecosistema.
Todos los organismos en un ecosistema se interrelacionan entre sí,
independientemente del nivel trófico que ocupen.

192
IV. Barreras de colonización

Es la propiedad o condiciones de ciertos ambientes que restringen el tamaño y la

actividad de las poblaciones de determinados organismos. De este modo, los
microorganismos que llega a un nuevo ambiente deben vencerlas para colonizarlo y
establecerse.
A su vez, dichas barreras protegerán aquellas poblaciones que ya se han establecido
en el ambiente, en determinados casos.

Barrera física o Barrera química

mecánica
Piel Acidez del estómago, vagina, alimentos ácidos y Ácidos
grasos (en la piel)
Mucosa Lisozima ( en lágrimas y secreciones nasales)
Cascara de fruta Peroxidasas y aglutininas (en la leche y saliva)
Cornea de las raíces Anticuerpos, interferón, fagocitos ( en la sangre)
Taninos, glucósidos, compuestos fenólicos (tejidos
vegetales)

Ambientes inicialmente libre de gérmenes son:

• Niño recién nacido
• Planta que emerge de la semilla
• Jugo del prensado de frutas
• Alimentos enlatados

Ambiente inicialmente con pocos microorganismos: Superficie de una roca recién

expuesta lava de un volcán.

Cualquiera sea el ambiente, rápidamente es invadidos y se inicia la colonización.

Generalmente los tejidos y humores de un organismo sano se encuentran libres de
gérmenes, y la aparición de diferentes infecciones o estados patológicos está
asociada a la presencia de los mismos.

Las primeras bacterias que colonizan un ambiente se denominan bacterias pioneras

y son determinadas casi exclusivamente por el ambiente. Al interactuar con el mismo,
su desarrollo puede verse favorecido; estableciendo una verdadera colonización, o
inhibido, lo cual repercutirá en su establecimiento. Esto depende, en parte, del
tamaño y actividad de la población bacteriana.
Con el tiempo, puede producirse el fenómeno de sucesión por el cual se genera un
reemplazo de las poblaciones bacterianas. Algunas poblaciones pioneros son
eliminados y nuevas especies se vuelven dominantes debido a cambios en las
condiciones ambientales, en la actividad e interacciones de los microorganismos, etc.
Estos eventos no son abruptos y pueden demorar años.

Biodiversidad

Aun en ambientes deficientes en nutrientes coexiste una gran diversidad de especies.

Algunos factores que permiten la coexistencia son:

193
 • Diversidad fisiológica
• Gradientes de estrés
• Gradientes nutricionales
• Cadenas Alimentarias
• Interacciones
La biodiversidad:
➢ Incrementa durante la sucesión microbiana
➢ Disminuye durante las perturbaciones
➢ Disminuye normalmente bajo condiciones de estrés medioambiental
➢ Puede estimarse mediante el análisis de genes.

Microambiente

Debido al diminuto tamaño de los microorganismos (3 µm), una pequeña porción de

un ambiente macroscópico tendrá varios microambientes. Cada uno de estos
presentara diferentes valores con respecto a los gradientes fisico-quimicos; como
[CO2] o aw, y demás variables; como la temperatura.
Para que dos o más especies, que coexisten en el mismo lugar, no se vean afectadas
mutuamente entre sí, dependerá de que exista una baja densidad de población y
de que logren satisfacen sus requerimientos de desarrollo y nutrición.

La estabilidad de una comunidad no implica, necesariamente, la existencia de

condiciones ambientales estáticas; ya que presentan mecanismos regulatorios de
compensación de las perturbaciones, llamado homeostasis. Por ende, las
comunidades interactúan con su ambiente, buscando siempre la manera de
estabilizarse.

Interacciones microbianas

Debido a los procesos de homeostasis de las comunidades, cuando se producen

modificaciones en el ambiente las especies comienzan a interactuar.
Las interacciones microbianas contribuyen a la diversidad y coexistencia de los
microorganismos en un determinado ambiente y determina la constancia y
composición de la comunidad.
El balance ecológico; con base en las interacciones positivas (+) o negativas (-) que
ocurren entre los diversos organismos de un ecosistema, sean estos
microorganismos u organismos superiores, trata de alcanzar el climax o comunidad
en equilibrio.

A. Interacciones dentro de una misma población microbiana.

Depende de la densidad de población:

194
 • Cuando la densidad de población es baja: Existe cooperación (+) lo que
incrementa el grado de crecimiento de la población.
• Cuando la densidad de población es alta: Existe competencia (-) lo que
disminuye el grado de crecimiento de la población.

B. Interacciones entre poblaciones microbianas diversas.

Las interacciones entre poblaciones microbianas diversas pueden ser:

 Benéficas o sinérgicas: Son importantes para:

a) Búsqueda de nuevas fuentes de alimento
b) Dispersión frente a la carencia de alimento
c) Mayor eficacia de recursos disponibles
d) Mecanismos protector frente a factores ambientales hostiles
e) Intercambio genético; como ser la resistencia a antibióticos o a metales
pesados.
Dentro de estas se encuentra:
Comensalismo (A0/B+): Interacción en la cual una población se beneficia y otra no se
ve afecta o es indiferente. Son relaciones generalmente casuales y comunes en el
suelo. Algunos tipos de relaciones comensaliticas son:

I. Modificación del sustrato; una población convierte un sustrato, que no está

disponible para otra población, en un producto que puede ser asimilado como
nutriente. Muy común en los ciclos biogeoquímicos.
II. Liberación de sustancias bióticas; algunos microorganismos sintetizan y
excretan factores de crecimiento que son utilizados por otros nutricionalmente
exigentes.
III. Remoción de factores inhibidores; organismos de una especie destruyen o
remueven ciertas sustancias presentes en el medio ocasionando el beneficio y
multiplicación de otra población comensal.
IV. Superficies adecuadas para la proliferación de microorganismos
comensales; ciertos microorganismos que colonizan y viven sobre la
superficie de otros. Ej.: bacterias sobre algas.
V. Provisión de nutrientes, protección o albergue; estas relaciones pueden
derivar en parasitismo.
Ej.: La población B se beneficia de algún producto del metabolismo de A o ese
metabolito modifica el ambiente en beneficio de otra.
Mutualismo o protocooperacion (A+/B+): Interacción en la cual ambas poblaciones se
benefician pero dicha interacción no es de carácter obligatorio.
Presenta carácter laxo; la existencia de cada integrante de la asociación requiere la
presencia de la especie compañera que le brinde los nutrientes o factores de
crecimiento necesarios u otras características.
Este carácter laxo:
• Se requiere proximidad física
• Es altamente específica
• Un miembro de la población no puede ser sustituido por otra especie
relacionada.

Un tipo de relación mutualista es el:

I. Sintrofismo:
Ej.: Si se grafica el crecimiento en función del tiempo de cultivos aislados de
Lactobasilus plantarum y Streptococcus faecalis, se observa que la curva de
195
 crecimiento para ambos es baja, pero si se
los incuba juntos, tanto la amplitud como la
pendiente de la curva aumentan. Esto se
debe a que el L. plantarum produce, en su
metabolismo, acido fólico el cual es usado
por el S. faecalis; y este a su vez este
produce, por su metabolismo, fenilalanina la
cual es requerida por el L. plantarum.
Otro ejemplo de este tipo de asociación se
observa en L. bulgaricus, el cual es
proteolítico y genera los aminoácidos
requeridos por el S. thermophilus el cual a su vez produce adenina la cual beneficia
el crecimiento del L. bulgaricus.

Simbiosis propiamente dicha (A+/B+): Interacción en la cual ambas especies se

benefician y dicha asociación entre los organismos es de carácter obligatorio.
Un ejemplo típico en la naturaleza es el liquen; el cual es una asociación entre un
micobionte; el hongo, y un fotobionte, el organismo fotosintético.
El hongo, de dicha asociación, obtiene el carbono orgánico directamente mediante
proyecciones de hifas fúngicas que penetran la pared del alga o cianobacteria; y el
alga recibe sustrato firme, agua (evitando la desecación), y minerales del hongo.

 Antagónicas: Abarca todas aquellas relaciones en donde existe perjuicio de

alguna de las poblaciones.

Competición (A-/B-): Interacción en la cual dos poblaciones compiten por los

nutrientes, el espacio, la luz, etc. siendo de carácter negativa para ambas especies.
En el suelo, el factor limitante es el carbono, por ende habrá competencia por este
elemento.
La capacidad de un organismo para competir está gobernada por:
❖ Alta velocidad de crecimiento: Las especies que prolifera más rápido,
utilizan con mayor velocidad los nutrientes limitantes y obtienen una ventaja
sobre aquellos microorganismos de crecimiento más lento.
❖ Tolerancia a factores abióticos: Tienen ventajas ecológicas las especies
capaces de crecer en condiciones ambientales extremas.
❖ Capacidad de crecer a bajas concentraciones del nutriente limitante: Ej.:
Existen algas que crecen bien a concentraciones muy bajas de NO3- y PO4-2.
❖ Eficiencia en el uso de nutrientes limitantes: Ciertos organismos se
impondrá sobre aquellos que no tengan un uso tan eficiente de los nutrientes
o que sean, nutricionalmente, más exigentes.
❖ Requerimiento de factores de crecimiento: En ambientes pobres, los
prototrofos poseerán ventaja frente a un auxótrofos para estas sustancias.
❖ Capacidad para sintetizar y almacenar sustancias de reserva: Se emplea
dichas sustancias cuando el aporte de nutrientes disminuye.
❖ Capacidad de desplazarse hacia áreas en donde hay mayor nivel de
nutrientes en el menor tiempo posible. Ej.: Las bacterias que presenten
flagelos tendrán mayor motilidad, y por ende una ventaja, sobre aquellas
procariotas inmóviles o que presenten únicamente cilias.
Este tipo de asociación también puede darse entre microorganismos y seres
superiores como plantas y animales.

196
Ej.: En el caso de E. coli y Staphylococcus aureus, la capacidad para competir está
determinada, fundamentalmente, por la velocidad de crecimiento. Como la E. coli
presenta una velocidad de crecimiento más elevada (g=20 min) que la del
Staphylococcus aureus (g= 12 horas), se logra imponer, captar los nutrientes
más rápidamente y eliminando de la competencia al otro microorganismo.

Amensalismo (A+,0/B-): Interacción en la cual una población se ve favorecida o

indiferente mientras que otra se perjudica. Ej.: Una especie microbiana produce
sustancias inhibidoras o tóxicas para otras especies próximas, pero inocua para sí
misma. De esta forma, al hacer desaparecer la población microbiana sensible,
obtendrá ventaja por sobre dicha especie con respecto a la lucha biológica y a la
ocupación de un ambiente.
Estas sustancias inhibidoras pueden ser microbiostático o microbiocida; y según
su especificidad, pueden ser:
• Poco específicas: ácidos, alcoholes, bases. Actúan a altas dosis
• Muy específicas: toxinas, enzimas, sulfas, antibióticos, bacteriocinas. Actúan a
bajas dosis, alta toxicidad.
Según su naturaleza química, pueden ser:
• Inhibidores inorgánicos: Como NO2-, Cl-, acido cianhídrico u ácidos derivados
de su metabolismo.
• Inhibidores orgánicos: Como etanol o ácidos grasos.
• Inhibidores orgánicos específicos: ATB.
Estas sustancias son producidas naturalmente y son inocuas para la especia
productora, no así para el resto de la mayoría de los microorganismos.

Predacion (A+/B-): Interacción que consiste en el ataque directo de una especie

(depredador) sobre otra (presa) con muerte e ingesta de esta última. Normalmente,
las interacciones depredador-presa son de corta duración y el depredador es de
mayor tamaño que la presa.
En el suelo, las bacterias son las más expuestas a la depredación debido a la
abundante existencia de protozoos, algas y hongos.
Por lo general, el predador es fagotrofo el cual lisa la presa y asimilan solo los
constituyentes solubles.
La mayoría de los protozoarios se alimentan de bacterias pero también pueden
depredar pequeñas algas y hongos, a pesar del mayor tamaño de la presa. Ej.:
Amoeba (predador) y Microcystis o cianobacterias (presas).
Los protozoos ciliados son grandes depredadores de bacterias debido a la presencia
de sus cilios. El movimiento de las cilias mueve el agua circundante que facilita la
penetración de las bacterias hacia el surco oral donde son digeridas.

Parasitismo(A+/B-): Interacción en la cual un organismo se alimenta o utiliza otro,

generalmente de mayor tamaño, causándole algún daño o perjuicio el cual puede ser
muy pequeño o la muerte.
La relación hospedador-parasito se caracteriza por:
➢ Ser bastante especifica
➢ Se produce por un periodo de contacto relativamente largo, que puede ser
directamente físico o metabólico,
➢ Parásito generalmente más pequeño que el huésped.
Muy pocos organismos están libres del ataque de parásitos microbianos. La mayoría
son parásitos obligados y solo logran desarrollarse y vivir a expensas de otro ser vivo.
Pueden ser:

197
 • Parásitos intracelulares: Como bacteriófagos y actinófagos
• Ectoparásitos: se localizan en la parte externa del hospedante. Raramente se
produce entre microorganismos.

Los hongos sufren el ataque de numerosos parásitos, sobre todo de otros hongos los
cuales pueden penetrar en líquenes, afectando a los componentes de la asociación.
Los fagos son los más conocidos parásitos de las bacterias, pueden causar lisis de
las células o formar asociaciones lisógenas estables.
Los protozoos también pueden ser parasitados por varios tipos de bacterias. Ej.: El
Vampirococcus sp el cual se adhiere a la superficie de la presa y secreta enzimas
para liberar el contenido celular.

El Bdellovibrio es el único caso de una bacteria que actúa como parasito de otras
bacterias, siendo estudiada en E. coli y Spirillum. Se trata de un vibroide con
un flagelo polar que vive en aguas de todo tipo. Su ciclo de vida presenta dos fases:

i. Fase 1: La bacteria colisiona con la célula hospedadora, por el extremo

opuesto al flagelo, y gira produciendo un poro en la pared por el cual penetra
e ingresa al protoplasma. Una vez adentro, se instala y libera enzimas que
digieren la pared celular, formando así el bdelloblasto; el cual carece de pared
salvo en algunas regiones que lo hacen resistente al choque osmótico.
ii. Fase 2: Durante la fase reproductiva intracelular, el material citoplasmático de
la bacteria parasitada se usa como nutrientes. El bdelloblasto se alarga y se
divide por fisión múltiple generando varias células hijas vibroides con flagelo
polar. Estas romperán la membrana plasmática, escapando al exterior y
comenzando un nuevo ciclo.

 Neutra o indiferente: Las relaciones de neutralidad (A0/B0) prácticamente no

existen ya que, para que tengan lugar, las poblaciones no deber tener oportunidad
de interactuar. Para que no se produzca interacción entre dos poblaciones, estas
deben:
▪ Presentar capacidades metabólicas totalmente diferentes
▪ Estar separadas en espacio y tiempo
▪ Encontrarse fuera de sus hábitats natural
▪ Estar en condiciones de no crecimiento
▪ Estar en estado de reposo; ya sea en estado de quistes o esporas.
También se verán favorecidas cuando:
 Exista una baja densidad de población; lo cual hará que las diferentes
poblaciones no lleguen a percibirse mutuamente.
 Diferentes fases de crecimiento. Ej.: Una población en estado de latencia y
otra en fase exponencial
 Exista condiciones que impiden el crecimiento activo:
• Condiciones de stress; las cuales darán lugar a la formación de
esporas y quistes.
• Crecimiento en alimentos congelados o masas de hielo.

C. Interacciones entre microorganismo y plantas.

Las interacciones entre los microorganismos del suelo y las raíces de las plantas
satisfacen requerimientos nutricionales básicos para las plantas y para las
comunidades microbianas asociadas a ellas.
La raíz es la principal órgano vegetal en donde se desenvuelve la actividad

198
microbiana, y en el caso de bacterias u hongos simbióticos o beneficiosos para el
vegeta, favorecerá el establecimiento de los mismos. Específicamente, se denomina
rizosfera a la zona de interacción única y dinámica entre la raíz de plantas y los
microorganismos del suelo.
Las poblaciones bacterianas de la rizosfera presentan requerimientos nutritivos
distintos de las poblaciones en suelo sin raíces y la exudación de atrayentes es
especialmente intensa durante los primeros estadios de la vida del vegetal, de forma
que se colonicen sus raíces rápidamente.
Las interacciones entre poblaciones microbianas y las plantas pueden ser:

i. Favorables o benéficas:
 Producción de compuestos que son promotores del crecimiento vegetal
o Mineralización de materia orgánica
o Solubilización de minerales
o Reacciones de quelación
o Absorción y translocación de nutrientes
 Micorrizas
 Fijación biológica de nitrógeno (FBN)
 Agregado y estabilidad del suelo, con respecto a su pH, temperatura, aw, etc.
 Producción de enzimas, vitaminas y cofactores
 Control de fitopatógenos
 Crecimiento y morfología de raíces

ii. Perjudiciales:
 Enfermedades y fitotoxicidad de la planta
 Competencia por sustratos
 Inmovilización de la planta.
 Favorecer la reducción de sulfatos (H2S)
 Desnitrificación (N2, N2O)
 Producción de compuestos inhibitorios como fenoles.

iii. Variables o indiferentes: Tanto como para cualquiera de los dos organismos:
• Liberación de enzimas
• Alelopatías
• Flujo de nutrientes

Los efectos de las plantas sobre los microorganismos pueden ser de carácter:
➢ Directo: Como el aporte de sustancias energéticas, estimulantes o inhibitorias.
➢ Indirecto: La interacción modifica condiciones del medio físico, como la
humedad, el pH, etc.

Interacciones entre plantas y hongos. Micorriza

Es una asociación simbiótica mutualista entre las raíces de la mayoría de las plantas;
tanto cultivadas como silvestres, y ciertos hongos del suelo en donde ambos se
benefician. Es prácticamente universal, pudiéndose generar y estar presente en la
mayoría de las especies vegetales y hábitat naturales.
Difiere de la asociación rizosférica por presentar una mayor especificidad y

199
organización con respecto a la relación hongo-planta.
En esta interacción el hongo coloniza la raíz de la planta y le proporciona nutrientes,
minerales y agua que extrae del suelo por medio de su red externa de hifas, mientras
que la planta suministra al hongo sustratos energéticos y carbohidratos que elabora a
través de la fotosíntesis.
La micorriza, dependiendo de la relación espacial del hongo y la planta, puede ser:

❖ Exo o Ectomicorriza (por fuera): Se produce una vaina pseudoparenquimatosa

sobre la capa externa de la raíz. No hay penetración celular ya que las hifas
del hongo se ubican sobre y entre las separaciones de las células corticales
de la raíz.

El hongo produce factores de crecimiento que inducen cambios en la conformación

de la raíz haciendo que tome una forma de Y. Al mismo tiempo, el micelio del hongo
genera un manto hifal el cual, al absorber minerales y agua que luego serán
translocados a la raíz, incrementan la superficie de está provocando una absorción
más eficiente.
La producción de ácidos solubilizaran distintos cationes; como Ca, N, P, Zn, Cu y K,
que se encuentran bloqueados en el humus, permitiendo su captación por parte de la
planta. También puede generar una acción protectora contra patógenos.
Ej.: Basidiomycotina (setas) y Ascomycotina (trufas) en robles y coníferas.

❖ Endomicorriza (por dentro): El micelio del hongo se encuentra embebido en el

tejido de la raíz y forma canales para la absorción.
Ej.: En las orquídeas, azaleas y laurel; la endomicorriza mejora la absorción de la
planta a la vez que el hongo; de la subdivisión Zigomycotina, se alimenta de la
secreción de esta.

Interacciones entre plantas y bacterias

Tanto las leguminosas (poroto, lenteja y soja) como las no leguminosas (alisos, maíz,
arroz, sorgo) presentan un tipo específico y preferido de microorganismo con el cual
establecen interacciones simbióticas. Ej.:
• Alisos → Actinomicetes: Forma nódulos o branquias.
• Maíz y sorgo → Azospirillum
• Arroz → Cianobacterias

Las simbiosis más importantes se dan entre microorganismos aerobios del suelo,
generalmente Gram (-), del genero Rhizobium, Bradyrhizobium, Azorhizobium; siendo
el más importante el primero.
El Rhizobium presenta una asociación específica con las leguminosas.
La planta aporta una gran cantidad de metabolitos; como flavonoides,
lipopolisacaridos, homoserinas, triptófano, y compuestos orgánicos al Rhizobium y
este a su vez produce tejido capaz de fijar nitrógeno atmosférico, proporcionándole
compuestos nitrogenados inorgánicos capaces de ser asimilados por la planta.
El aspecto fundamental de la simbiosis consiste en el continuo intercambio
metabólico entre la planta y la bacteria, y para que se produzca adecuadamente es
imprescindible la formación de nódulos.

Proceso de Formación del nódulo

200
 1. Comunicación química: Los flavonoides exudados por la raíz inducen la
expresión de genes de nodulación (nod), los que provocan la curvatura de los
pelos radicales y la división de células meristemáticas.
2. Formación del canal de infección: Los rizobios (las bacterias) producen
poligalacturonasa que despolimeriza la pared del vegetal y permiten la
invasión. Se desarrolla un tubo de infección el cual penetra y atraviesa el
córtex de la raíz.
3. Maduración del nódulo: El Rhizobium produce tejido capaz de fijar nitrógeno y
las células vegetales no infectadas interviene en la transferencia de
metabolitos entre la planta y el microorganismo.
Los nitratos y nitritos inhiben la formación del nódulo
Los nódulos son importantísimos para la fijación de nitrógeno ya que disminuyen la
tensión de O2 en su interior generando un ambiente microaerofilo adecuando para la
actividad de la nitrogenasa, la cual se ve inhibida a elevadas concentración del O2,
del Rhizobium permitiéndole transformar el N2 en NH4-. Dicha disminución en la
concentración de O2 se logra gracias a la leghemoglobina, una sustancia que se
produce en los nódulos sanos, la cual es muy sensible a la presencia del gas pero
deja, sin embargo, O2 libre suficiente para que tenga lugar la respiración celular.
El rhizobium, sin el nódulo de la planta, no puede fijar el nitrógeno atmosférico.

D. Interacciones entre microorganismo y animales.

En dichas interacciones pueden existir:

❖ Ectosimbiosis: El simbionte vive sobre el cuerpo del organismo anfitrión, ya

sea en el exterior o en el interior del intestino o en el conducto de glándulas
exocrinas.
Ej.: Las hormigas, cortan hojas y defecan sobre ellas. Dichas excreciones, al
presentar sustancias proteolíticas, liberaran y solubilizaran los aminoácidos presentes
en el material vegetal para que puedan ser absorbidos por una clase particular de
hongo. Este a su vez crece y desarrollara un micelio el cual es la ‘’cosecha’’ y
alimento de las hormigas.
En el caso de las termitas, presentan en su intestino protozoarios y bacterias
anaerobias, los cuales producen sustancias celulolíticos necesarias para que el
insecto puede digerir la madera. A su vez, el insecto le provee al microorganismo un
ambiente adecuado para vivir.

❖ Endosimbiosis: El simbionte vive en el interior de las células del anfitrión, o

bien en el espacio entre éstas.
Estas interacciones puede ocurrir en:

1. Insectos; como las cucaracha, cigarra y chiche.

Bacteriocitos: Cuando es una bacteria la que se introduce dentro del organismo
Micetocitos: Cuando es un hongo el que se introduce dentro del organismo.

Dichas interacciones son importantes para ambos organismos.

2. Protozoo:
Endosimbiontes protozoo/alga: El protozoo le otorga protección, movilidad, CO2 y
nutrientes, mientras que el alga le otorga materia orgánica y O2. Ej.: Paramecium
(protozoo) y Chlorella (alga) o Amoeba (protozoo) y Cianelas (alga).

201
 Endosimbiontes protozoos/ bacterias: Paramecium aurelia y Caedibacter
cariophyla.

3. Animales superiores:
Un huésped está siempre en contacto con diferentes tipos de microorganismos, los
cuales pueden ejercen funciones beneficiosas o perjudiciales.
El hospedador proporciona un entorno favorable; como ser nutrientes, pH y
temperaturas constantes y altas, para el microorganismo, ya sea patógeno o no.

Ectosimbiosis en el Rumen:
Los rumiantes, al carecen de las enzimas necesarias para digerir la celulosa,
necesitan establecer un interacción simbiótica con diferentes microorganismos para
nutrirse.
La simbiosis se produce, por lo general en el rumen del animal, el cual junto con la
comida introduce bacteria, hongos y protozoos los cuales secretan enzimas
celuloliticas.
En el rumen, el alimento llega mezclado con la saliva y se produce movimientos que
trituran la celulosa y permite la adherencia y fermentación microbiana. Al hidrolizarse
la celulosa se obtiene celubiosa y glucosa libre que son absorbidas por los
microorganismos. Los productos de la fermentación bacteriana (ácidos orgánicos y
grasos) son absorbidos por el animal, y los gases; como el metano, son eliminados.
Así, los rumiantes proporciona un aporte de minerales continuo; dado que su saliva
contiene amonio, bicarbonato y fosfato, y una temperatura y pH constante al
microorganismo y estos, además de los productos de la fermentación, también
producen diferentes aminoácidos y vitaminas que son esenciales para el animal.
Los microorganismos del rumen pueden ser:
➢ Bacterias anaerobias estrictas:
o Fibrobacter, Ruminococcus y Clostridium: Degradan celulosa.
o Ruminobacter, Bacteroide, Succinomonas: Degradan almidón.
o Methanomicrobium: Una arqueobacteria metanógena.
➢ Protistas anaerobios: Ciliados principalmente.
➢ Hongos anaerobios: Degradan la lignina.

Los microorganismos se encuentran, generalmente, en las zonas del cuerpo

expuestas al mundo exterior; como la piel, cavidad oral, tracto respiratorio, intestinal,
genitourinario.
En órganos más internos suelen indicar patología; como en la sangre o en el sistema
linfático.

Microbiota de la piel:
La microbiota normal de la piel es:
• Gram (+): Staphylococcus, Propionibacterium acnes.
• Gram (-): [Link] (presente contaminantes fecales) y Acinetobacter (residente
frecuente).
La epidermis no es medio favorable para crecimiento bacteriano (debido a su
sequedad) pero en el cuero cabelludo, los folículos pilosos, las glándulas sebáceas,
orejas, axilas, zona genitourinaria, anal y dedos de los pies, las condiciones de
humedad y calor favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos residentes.
La actividad bacteriana produce el mal olor en zonas como axilas y ombligo, donde
los microorganismos se asocian a las glándulas sudoríparas.

202
Microbiota de cavidad oral:
Es un hábitat muy heterogéneo y, a pesar de que la saliva contiene componentes
antibacterianos (lisozima), el exceso de restos de nutrientes convierte a la boca en un
medio favorable para los microorganismos.
Mediante microcolonias, las bacterias pueden agarrarse y crecer en la superficie del
diente.
Sólo algunas pueden anclarse; como el Streptococcus sobrinus, S. mutans, los
cuales forman una zona bacteriana espesa denominada placa. A medida que la placa
crece, van desarrollándose bacterias filamentosas (como el Fusobacterium) siendo
en su mayoría anaerobias debido al poco acceso de oxígeno.
El crecimiento bacteriano en los dientes puede derivar en caries dentales. Los
microorganismos implicados son S. sobrinus y S. mutants.

Microbiota de tracto intestinal:

El bajo pH que existe en el estómago, es una barrera antibacteriana pero algunos
microorganismos, como el Lactobacilos y Streptococcus, tolerantes al ácido
pueden colonizar el estómago. A lo largo del intestino, el pH es menos ácido y la
microbiota cambia y aumenta. En el intestino grueso abundan las bacterias
fermentativas. Algunas, como [Link] consumen el
O2 y dejando un ambiente anaerobio en donde crecen bacterias del genero
Bacteroides, Clostridium y Enterococcus.
La microbiota intestinal realiza reacciones metabólicas que pueden afectar al animal
en caso de que esta se modifique. El abuso de antibióticos puede desaparecer la
microbiota habitual y promover la aparición de organismos oportunistas como
Staphylococcus, Proteus o la levadura Candida albicans.
Las bacterias constituyen cerca de un tercio del peso de la materia fecal. Otros
productos de la fermentación bacteriana son sustancias odoríferas y gases; un adulto
normal expele diariamente de sus intestinos varios cientos de ml de gas (CH4, CO2,
H2 procedentes de la acción fermentativa bacteriana).

Microbiota de tracto respiratorio:

Los organismos más frecuentes son Staphylococcus, Streptococcus y algunos
cocos Gram (-) (menos corrientes).
También pueden coexistir, pero con crecimiento limitado por la microbiota normal,
organismos potencialmente patógenos como Staphylococcus aureus, Streptococcus
pneumoniae, S. pyogenes y Corynebacterium diphteriae (el sistema inmune local
delimita su crecimiento).
Las bacterias pueden penetrar con el aire durante la respiración y viven en áreas
bañadas con las secreciones de las membranas mucosas.
El tracto respiratorio inferior (tráqueas, bronquios y pulmones) son bastante estériles,
debido a que el flujo de aire va disminuyendo y el epitelio ciliado de las paredes
empuja a las bacterias hasta que son expulsadas en la saliva o secreciones nasales.

Microbiota de tracto urogenital:

Tanto en el hombre como en la mujer, la vejiga suele ser estéril, pero la uretra puede
estar colonizada por E. coli y Proteus mirabilis; bacilos Gram (-) aerobios
facultativos. Normalmente no son patógenos, pero por diferentes causas (como una
inmunosupresión) pueden producir infección.
La vagina de la mujer adulta es ligeramente ácida y puede contener Lactobacillus
acidophilus que fermenta glucógeno y produce ácido.

203
Quorum-sensing

Quorum-sensing o la percepción del quorum es un mecanismo de regulación de

la expresión genética en respuesta a la densidad de población celular. Las células
producen, excretan y detectan la concentración de sustancias denominadas
autoinductores, ya que incluso pueden actuar sobre la célula que las liberó. Esto les
da información acerca de la densidad de células en el ambiente y, cuanto mayor sea
la población mayor será la concentración de estas señales. Cuando se alcanza una
concentración umbral, la población ha llegado al quorum y se empiezan a expresar
una serie de genes, lo que desata acciones poblacionales concertadas, como
ataques a organismos al que hospedan; en el caso de Salmonella, o liberación
de tóxicos que matan a peces, como en el caso de Pfiesteria.
Es importante en relaciones simbióticas o patogénicas, en donde diferentes
comunidades bacterianas se comunican percibiendo la concentración de algunos
metabolitos.
Muchos procesos fisiológicos son regulados por este sistema de comunicación célula-
célula, el cual genera un comportamiento ‘’multicelular de organismos unicelulares’’;
como ser la regulación de la producción de ATB, la bioluminiscencia, factores de
virulencia, conjugación.

Términos:
▪ Microbiota: Organismos que han establecido una íntima relación con el
huésped.
▪ Gnotobiótico: Aquel del que se conoce su microbiota.
▪ Axénico: Es un organismo, anfitrión en potencia, pero que se haya libre de
gérmenes; como puede ser un feto humano dentro del útero.
▪ Parásito: Organismo que vive a expensas del hospedador. No siempre el
parásito produce una patología. Si esto ocurriera, el parásito pasaría a
llamarse PATÓGENO.
▪ Virulencia: grado de patogenicidad que presenta un parásito.

204
Biogeoquímica

Es el estudio de las transformaciones químicas mediadas por procesos biológicos,

los cuales abarcan:

• La actividad del microorganismo y organismos en general, en el suelo y en el

agua
• Las transformaciones químicas que sufren compuestos de carbono,
nitrógeno, fosforo y azufre como resultado de la actividad metabólica de los
mismos.

Estas transformaciones químicas no son exclusivamente mediadas por

microorganismos ya que los organismos superiores también contribuyen a dichos
procesos biológicos.
Se denomina biosfera a la región del planeta donde hay vida y está conformada por
varios ecosistemas; los cuales son sistema complejo en el que interactúan los seres
vivos entre sí; factores bióticos, y con el conjunto de factores no vivos o abióticos
que forman el ambiente como ser la temperatura, sustancias químicas presentes, el
clima, características geológicas, etc.

Las interacciones de los diferentes organismos con el ambiente son las responsables
de los cambios biogeoquímicos que ocurren dentro de un ecosistema y que lo
modifican.
Los microorganismos son esenciales para la vida en el planeta ya que son los
principales responsables de estos cambios biogeoquímicos.

La importancia de los microorganismos radica en:

• Alto poder catalítico

• Elevada relación superficie-volumen: En comparación a los organismos
superiores.
• Alta velocidad de crecimiento: Crecen en 20 a 30 minutos, sumamente rápido
a comparación de la velocidad de crecimiento de los organismos superiores.
• Capacidad de adaptación y supervivencia: Existen microorganismos que se
adaptan rápidamente a diferentes ambientes, pudiendo crecer y sobrevivir en
condiciones extremas; como en el caso de los acidofilos o termófilos.

Los microorganismos producirán cambios, a distintos niveles del planeta, sobre la

química de la atmósfera, agua de océanos y ríos, sedimentos marinos y suelos.
Dichos cambios se generan en forma cíclica.
Un ciclo biogeoquímico se define como aquel en el cual un elemento químico
experimenta cambios en su estado de oxidación al moverse dentro del ecosistema.
Al experimentar estos cambios, el elemento químico estará disponible de distintas
formas para ser aprovechado por diversas especies. Así, una determinada especie
será capaz de utilizarlo en un cierto estado de oxidación y otra especie en otro
estado; permitiendo la vida y la diversidad de especies en un ecosistema.
Los microorganismos son fundamentales en el reciclado de los elementos
químicos. Cuando estos elementos no se reciclan, se altera el ecosistema, la
biosfera y al vida.

Los elementos que son transformados microbiológicamente pueden ser:

205
 • Importantes en reacciones metabólicas de la célula microbiana: La actividad
metabólica de las células provocaran los cambios y el reciclado de los
elementos químicos:
o Mayoritarios: C, H, O, N, P, S, K.
o Minoritarios: Fe, Mg y otros.
o Importantes para algunos microorganismos: Si, Mn, Ca, Na, Mo, B, V,
Cl, Se, Ni.
• No importantes biológicamente pero si estructuralmente: El reciclado de los
elementos químicos no se produce como consecuencia de reacciones
metabólica:
o Al, As, Hg, Pb.

En muchos casos, los microorganismos son lo únicos agentes biológicos capaces de

regenerar los elementos en la forma que necesitan otros organismos; especialmente
las plantas, por lo tanto el equilibrio en estos ciclos es muy importante para que el
ecosistema se mantengan sano.

Interés del estudio de los ciclos biogeoquímicos.

a) Críticos para la producción de alimentos:

• Las etapas del ciclo del nitrógeno influirán y pueden llegar a limitar el
crecimiento de las plantas lo que influye en la producción de carne.
• Las etapas del ciclo del fosforo en el agua influirán y pueden llegar a limitar
el crecimiento de algas lo que influye en la acuicultura (producción de peces)

b) Permite predecir las consecuencias regionales o globales de una nueva

tecnología:

• Poluentes del nitrógeno que se descargan en ciudades y por la agricultura

• Descarga de azufre en operación de minas.

Ambos pueden tener consecuencias catastróficas

c) Permite conocer las razones que producen anomalías en la cantidad de

ciertos poluentes en la atmósfera:

Las comunidades microbianas pueden ser:

• Fuente de poluentes en la atmósfera, como óxidos de nitrógeno.

• Activos para prevenir la acumulación de otros poluentes en la atmósfera

Ambas funciones se dan por las actividades de los mismos en el suelo o en el agua
pero no en el aire. Ej.: presencia de azufre cíclico, monóxido de carbono (CO),
hidrocarburos.

Procesos microbianos en biogeoquímica

1. Mineralización

Proceso que consiste en la degradación de la materia orgánica en inorgánica. Los

microorganismos que llevan a cabo este proceso actúa en la cadena alimentaria

206
como descomponedores o mineralizadores.
La mineralización:

• Disminuye la complejidad de la materia orgánica en el ecosistema y evita la

acumulación de la misma en suelos y agua.
• Es llevada a cabo y proporciona energía a heterótrofos, los cuales utilizan los
compuestos orgánicos como fuente de energía y carbono.
• De compuestos orgánicos que poseen C, N y S proporcionan alimentos a
plantas superiores y microorganismos autótrofos; los cuales utilizan compuestos
inorgánicos como fuente de carbono.
• De compuestos orgánicos de P proporciona nutrientes inorgánicos requerido
por muchas algas acuáticas.

2. Oxido-reducción

Es un proceso que está relacionado con la liberación y obtención de energía; la cual

se acumula generalmente en forma de ATP, y de compuestos reducidos.
Dicho proceso es característico de microorganismos que se encuentran en aguas y
suelos e involucra:

La formación de agua se da en las poblaciones aeróbicas a través de la respiración

aeróbica, en donde el O2 actúa como aceptor final de electrones.

3. Metilación

Es un proceso, geoquímicamente, poco importante.

• Aumenta la concentración de compuestos metilados derivados del azufre en la

atmosfera.
• Ciertos procesos de metilación pueden ser perjudicial. Ej.: En la
transformación de un elemento químico en otro compuesto metil derivado
toxico.

(Hg, As, S, Fe) + 4 -CH3 → metil derivados

Ciclos biogeoquímicos

207
Es el ciclamiento de los nutrientes que van desde el ambiente no vivo; como ser los
depósitos presentes en la atmósfera, en la hidrosfera y en la corteza terrestre, hasta
los organismos vivos, y de regreso al ambiente no vivo.
Estos ciclos son activados directa o indirectamente por la energía del sol, la cual
fluye a través de la biosfera en un solo sentido:

1. Sara interceptada y asimilada, en forma de compuestos orgánicos, por parte

de los productores primarios
2. Después de experimentar las transformaciones que mantienen vivos tanto a
estos organismos como a los consumidores y descomponedores, retorna al
espacio exterior en forma de calor.

De esta manera no hay "ciclo de energía", cumpliendo con la Primera y Segunda Ley
de la Termodinámica

Ciclo del carbono

Es este ciclo intervienen tanto microorganismos como macroorganismos; entre ellos

plantas y animales.

❖ Fuentes o depósitos de carbono naturales: Atmosfera, océanos, sedimentos,

rocas, biosfera terrestre y acuática, combustible fósil, hidratos de metano y
biomasa.
La manera más rápida de transferencia global de carbono es a través del CO2
atmosférico, el cual no es la fuente de carbono más abundante pero si la forma
más rápida en el que se transfiere carbono al ciclo.

Los procesos más importantes que ocurren en este ciclo son:

Fijación: El carbono atmosférico, en forma de CO2, será fijado por:

A. Microorganismos y organismos (plantas) fototroficos o fotosintéticos a través

del proceso de fotosíntesis.

Estos son capaces de transforman la energía lumínica del sol en energía química,
que luego utilizaran para fijar el CO2 obteniendo, como resultado, compuestos
orgánicos reducidos que surgen de la transformación o ‘’fijación’’ de dicho
compuestos inorgánico.
Los organismos fototroficos pueden llevar a cabo distintos tipos de fotosíntesis,
dependiendo de los diferentes dadores de electrones que utilicen:

• Fotosíntesis oxigenica: A nivel terrestre, los organismos más importantes que

realizan la fotosíntesis oxigenica son las plantas, mientras que los
microorganismos lo son a nivel acuático, como las cianobacterias y algas.
La fijación se da en su etapa oscura o no dependiente de la luz solar y
necesita la presencia de agua como dadora de electrones.
• Fotosíntesis anoxigenica: Es llevada a cabo por microorganismos que también
serán capaces de fijar CO2 atmosférico pero en condiciones anoxigenicas y
utilizando, como dadores de electrones, sustancias distintas del agua; como
ser H2 molecular.

Los organismos fototroficos también pueden generar el proceso de respiración; en el

cual degradan la materia orgánica con el fin de obtener energía.

208
A través de la respiración aeróbica, puntualmente, la oxidación de dichos
compuestos orgánicos en presencia de O2, el cual actúa como aceptor final de
electrones, provocando la liberación de energía y CO2 a la atmosfera. Como en el
CO2, el carbono se encuentra en su mayor estado de oxidación, dicho proceso
produce una gran cantidad de energía.

Por lo tanto, debe haber un balance neto positivo entre los procesos de respiración
y fijación en favor de este último dado que, los compuestos orgánicos generado a
partir de la fijación son requeridos tanto para la síntesis de material y crecimiento
celular como para el suministro energético del organismo mediante la respiración.

B. Microorganismos quimiolitotrofos o quimioautotrofos.

Al igual que los fotoautótrofos, estos microorganismos pueden fijar y utilizar el

CO2 como fuente principal de carbono pero, a diferencia de ellos, no utilizan la luz
como fuente de energía sino que la obtienen por oxidación de compuestos
inorgánicos reducidos.

Mineralización: El CO2 que se fijó y transformo en compuestos orgánicos formara

parte del material celular y estará contenido en los diversos polisacáridos, proteínas y
ácidos grasos presentes en las células de los distintos organismos fototroficos.
Sobre esta materia orgánica se producirá la mineralización, llevada a cabo tanto por
los mismos autótrofos como por los heterótrofos; organismos que utilizan compuestos
orgánicos como fuente de energía y carbono y solo crecen en ambientes en donde
exista dicha materia orgánica, mediante la respiración aeróbica. Por este proceso,
el carbono contenido en los compuestos orgánicos volverá a las reservas de CO2
atmosférico.

Dentro de estos organismos heterótrofos mineralizadores podemos hallar:

• Consumidores primarios, secundarios o terciarios: Utilizan la materia orgánica

presente en los productores primarios o en consumidores.
• Descomponedores o desintegradores: Utilizan la materia orgánica ‘’externa’’
presente en el ecosistema. Los principales descomponedores en medios
acuáticos son las bacterias, mientras que en el suelo son los hongos.

Los diversos compuestos orgánicos, especialmente los polímeros, deben sufrir una
serie de pasos líticos antes de que sus monómeros puedan ser empleados en los
procesos de obtención de energía:

• Celulosa: En el caso de hongos y bacterias, este polímero es degradado en

unidades de celobiosa la cual, por medio de enzimas hidrolíticas β-
glucosidasa, se hidroliza a glucosa. Esta es capaz de ingresar, por la vía
glicolitica, al ciclo de Krebs con la consiguiente formación de energía y
liberación de CO2.
• Proteínas: Son degradadas a péptidos, por proteinasas, y estos a su vez en
aminoácidos, por peptidasas. Los aminoácidos serán degradados, a través
de procesos de descarboxilacion, con consiguiente formación de energía y
liberación de CO2.
• Lípidos: Son degradados a ácidos grasos, a través de las enzimas líticas
correspondientes, y estos sufrirán descarxilaciones produciendo energía y
liberando CO2.

209
Entonces…

A nivel oxico:

La fijación del CO2 (a) se lleva a cabo por la actividad de los productores primarios
(fotoautotrofos o quimiolitotrofos), los cuales incorporan el carbono inorgánico a
compuestos orgánicos, generalmente azucares.

Estos compuestos serán degradados (b) a CO2 por medio de la respiración aeróbica
de los mismos productores primarios, los consumidores y los degradadores.
El CH4 puede ser utilizado como fuente de energía y ser oxidado a CO2 (c) por la
acción de microorganismos metanotrofos.

A nivel anoxico:

La fijación del CO2 (a’) se lleva a cabo por la actividad de microorganismos

fototroficos anoxigenicas, los cuales incorporan el carbono inorgánico a
compuestos orgánicos.
Aquí también pueden participan microorganismos homoacetogenos (c’) que tiene
la capacidad de transforman el CO2 en acetato para luego dar un compuesto
orgánico. Dicho CO2 puede provenir del metabolismo de microorganismos
metanogenicos.

Los compuestos orgánicos serán degradados o mineralizados (b’) a CO2 por medio
de la respiración anaeróbica o de la fermentación de las mismas bacterias
fototroficas o de microorganismos anaeróbicos facultativo o estrictos.
En la respiración anaeróbica, la célula utiliza compuestos, diferentes al O2, como
aceptor final de electrones.
En la fermentación, el mismo compuesto orgánico es en parte oxidado y parte
reducido, produciendo como resultado un compuesto orgánico diferente que es
liberado al medio; como ácidos orgánicos.
Los anaerobios facultativos pueden actuar en la parte oxica o anoxica del ciclo.

210
Los compuestos orgánicos también pueden ser degradados hasta CH4, proceso
conocido como metanogenesis, el cual es mediado por microorganismos
metanogenicos; que por lo general son Archaeas, estrictamente anaeróbicos. Estas
bacterias reducen el CO2 a CH4 al utilizarlo como aceptor final de electrones,
efectuando así una respiración anaeróbica; es por esto que las altas tensiones de O2
inhiben la metanogenesis.
La metanogenesis muchas veces se da en ambientes ácidos y no se produce
directamente a partir de la materia orgánica sino del CO2.
Si bien los sustratos carbonados que pueden generar CH4 son muy pocos; como CO2
o acetato, existen diversos compuestos orgánicos complejos que serán capaces de
producirlo.
Esto ocurre debido a un proceso denominado sintrofia, en el cual diferentes
microorganismos se unen para degradar una sustancia que no podrían degradar por
separado. Dicha relación es una simbiosis obligada.
Ej.: La fermentación del butirato a acetato e H2; llevada a cabo por un fermentador
secundario aislado como Syntrophomonas wolfei, es energéticamente desfavorable.
Sin embargo, cuando un metanógeno hidrogenotrofo está presente, la concentración
del H2 molecular desciende debido a que el proceso de metanogenesis necesita de
H2 como dador de electrones; favoreciendo y volviendo negativa la ΔG de la
fermentación del butirato.
A su vez, la fermentación llevada a cabo por el microorganismo sintrofico liberara
CO2, H2 y acetato los cuales sirven de sustrato para que bacterias metanogenicas
produzcan metano.

211
 1) Los polímeros complejos;
como celulosas, polisacáridos,
proteínas, lípidos y ácidos nucleicos,
son hidrolizados y degradados por
bacterias hidrolíticas para obtener
energía. Debido a este proceso, dichos
microorganismos liberaran los
monómeros que conformaban dichos
polímeros.
2) Los fermentadores primarios
degradaran dichos monómeros para
obtener energía produciendo en el
proceso ácidos grasos de cadena
corta; como acetato, propionato y
butirato, alcoholes, H2 y CO2.
Si bien el H2 y el acetato son retirados
rápidamente por los microorganismos
metanógenicos, la mayor parte del
carbono orgánico aún permanece en
forma de ácidos grasos y alcoholes, los
cuales no pueden ser catabolizados
directamente por dichos
microorganismos.
3) Los fermentadores
secundarios o sintrofos serán los
responsables de transformar los
productos orgánicos de la fermentación
primaria en H2, CO2 y acetato, principalmente.

Cuando hay una elevada cantidad de materia orgánica, se observa una producción
alta de metano.

El H2 producido en los procesos fermentativos primarios es consumido

inmediatamente por consumidores de H2, como:

• Homoacetógenos, los cuales generan acetato a partir de H2 y CO2 por medio

de la acetogenesis.
• Bacterias sulfato reductoras
• Los metanógenos.

Compuestos orgánicos no degradables

Existen compuestos orgánicos que no son degradables o que lo hacen muy

lentamente, conocidos como recalcitrantes, los cuales llevaran a la contaminación
del ambiente.
Se los pueden clasificar en:

❖ Recalcitrantes naturales: Lignina, humus, compuestos esporos de bacterias y

hongos difícil de degradar.
❖ Recalcitrantes sintéticos: Organoclorados, nylon, PVC (policloruro de vinilo) y
detergentes.
o No tóxicos: Se acumulan indefinidamente en el ambiente.

212
 o Tóxicos: Además de acumularse, son tóxicos aun a niveles muy bajos.

Estos contaminantes, especialmente los sintéticos, generan un proceso de

biomagnilizacion por el cual tienden a aumentar su concentrarse en los niveles
tróficos sucesivos al acumularse en las células de los organismos vivos lo que
potencia su efectos nocivos.
Ej.: La concentración de DDT (diclorodifenil- tricloroetano) en agua 0,3 ppb, en
plankton 30 ppb, en peces pequeños 0,3 ppm y en un águila 30 ppm.
Se define como biorremediación a cualquier proceso que utilice microorganismos
para retornar un medio ambiente alterado por contaminantes a su condición natural.
Algunos de estas acciones pueden ser:

• Inocular ambientes con microorganismos que degraden recalcificantes.

• Construir microorganismos con propiedades degradativas, por medio de la
ingeniería genética
• No contaminar con recalcitrantes.

Ciclo del Nitrógeno

❖ Fuentes o depósitos de nitrógeno naturales: El 70% del nitrógeno se encuentra

como N2 molecular atmosférico. El nitrato (NO3-) puede hallarse en rocas y agua
de lluvia; y el amoniaco (NH3) en agua de lluvia.
El NO3, al ser muy soluble, tiene muy poca tendencia a acumularse en los suelos,
mientras que el NH3 presenta una tendencia mayor; pero aun así se encuentran en
bajas proporciones.
El N2 molecular es la forma más abundante, estable y difícil de degradar del
nitrógeno. Debido a su falta de reactividad, es difícil transformarlo en otros
productos o compuestos químicos, sin embargo existe una pequeña minoría de
microorganismos capaces de fijar el N2 atmosférico.
Estos pueden interactúan simbióticamente con las raíces de las plantas formando
micorrizas, proporcionándoles compuestos nitrogenados asimilables, siendo
importantes en dicho ciclo biogeoquímico debido a la baja disponibilidad de nitrato
y amoniaco, los cuales pueden ser captados directamente por las plantas, en los
suelos.
La acción de estos microorganismos es importantísima debido a q sin su acción
para fijar N2, las plantas serían incapaces de incorporarlo al ciclo, solo pueden fijar
NO3 y NH3.

Los procesos más importantes que ocurren en este ciclo son:

Fijación: La fijación del nitrógeno es llevada a cabo por procariotas:

• De vida libre en el suelo: Cianobacterias, Azobacter, Clostridium, bacterias

purpuras y verdes.
• Simbiontes con plantas: Rizobium-leguminosas, Agnobacterium, Frankia-no
leguminosas.

Durante la reacción de fijación, el N2 molecular se transformara en NH3 catalizado por

la nitrogenasa. Se necesitara también el aporte de energía (4 ATP); debido a la
estabilidad y fuerza del triple enlace N-N, y la presencia de ferredoxina como dadora
de electrones.

213
Nitrificación: Necesita de condiciones aeróbicas y se da en suelos bien aireados con
alta concentración de O2. El NH3 que se ha fijado y se encuentra disponible en el
suelo, será oxidado a nitrito (NO2-) y luego a NO3- por un grupo de microorganismos;
nitrosomas y nitrobacter respectivamente.

Estos procesos de oxidación le permiten a las bacterias nitrificantes obtener

energía, siendo bacterias quimiolitotrofas. Utilizaran el NH3 como dador de electrones
y al O2 como aceptor final de electrones.
También pueden intervenir organismos autótrofos, heterótrofos u hongos pero su
acción será más lenta.

Denitrificacion: Se dan en condiciones de anaerobiosis y en suelos ácidos, ricos en

materia orgánica y con baja concentración de O2.
En este proceso el NO3- actuara como aceptor final de electrones y se reducirá hasta
N2 molecular; pasando por sus estados de oxidación intermedios.

Pueden intervenir bacterias:

• Autótrofas: Thiobacillus denitrificans

• Heterótrofas: Micrococcus denitrificans

Durante este proceso se pueden forman gases tóxicos, que serán liberados a la
atmosfera, siendo perjudiciales para el ambiente y el hombre, como:

❖ Óxido nitroso (N2O): Puede reaccionar con el O3 y destruir la capa de ozono.

❖ NO: Reacciona con O2 y se oxida a dióxido de nitrógeno (NO2)

Estos tres gases representan una desventaja del proceso de denitrificacion.

Reducción de nitrato: Es llevado a cabo por bacterias heterótrofas que utilizan NO3-
como aceptor final de electrones y lo reducen hasta NH3.

Proteólisis: Es un proceso de mineralización o desasimilación de proteínas, que

puede darse tanto en ambientes oxicos como anoxicos. Intervienen bacterias como
Proteus, Clostridium, Pseudomonas, Bacillus y hongos como Actynomices.
Las proteínas se degradan a péptidos, por la acción de las proteasas, y estos a su
vez en aminoácidos, por las peptidasas. Sobre estos aminoácidos actúa la
desaminasa, provocando la amonificacion o formación de NH3.

214
Entonces…

A nivel oxico:

Se produce la fijación del N2 molecular atmosférico. El N2 fijado, en forma de NH3,

junto con el NH3 que se encuentre en el suelo, puede seguir distintos caminos:

a) Puede ser oxidado por bacterias para obtener energía, en un proceso de

nitrificación, generando NO2- y NO3-.
b) Puede ser asimilado por microorganismos heterótrofos y será utilizado para la
síntesis de material celular.

El NH3 también puede derivar de la descomposición o mineralización (c) de la materia

orgánica presente en el medio por medio del proceso de amonificacion.
El NO3- también puede ser asimilado (d) dando lugar a la formación de materia
orgánica, como proteínas.

A nivel anoxico:

Existen bacterias que puede utilizar el NO3- como aceptor final de electrones
generando el proceso de denitrificacion (a’), siguiendo una vía desasimilativa que
dará lugar a distintos productos intermedios, con diferentes estados de oxidación,
hasta llegar a N2 molecular.
Se produce la fijación del N2 molecular producto de los procesos de denitrificaion (b’)
del suelo.
También habrá un proceso de asimilación del NH3 (d’) y amonificacion (c’) en dichas
condiciones anoxigenas.

215
Si bien el NO3- puede ser fácilmente asimilable por las plantas, el proceso de
nitrificación no es favorable para la agricultura ya que empobrece el suelo debido a la
alta solubilidad del NO3- haciendo que este se ‘’llave’’ por el agua de las lluvia. Es por
eso que la mayoría de los fertilizantes contiene NH3 o compuestos relacionados, los
cuales suelen quedar más retenido en el suelo, e inhibidores de las bacterias
nitrificantes.
El proceso de denitrificacion, además de generar gases tóxicos, también perjudica y
empobrece al suelo.

Ciclo del azufre

❖ Fuentes o depósitos de azufre naturales: Puede hallarse como sulfato (SO4-2) en

rocas y agua de lluvia, dióxido de azufre (SO2) en el aire o S elemental.
El SO4-2 puede ser usado por plantas y microorganismos pero en cambio el S
elemental, al ser químicamente muy estable, solo puede ser utilizado por un cierto
grupo de microorganismos capaces de oxidarlo y transformarlo en SO4-2;
volviéndolo, de esta forma, asimilable para las plantas.

Los procesos más importantes que ocurren en este ciclo son:

Oxidación del H2S y del S elemental: Hay bacterias capaces de oxidar y transformar
el sulfuro de hidrogeno (H2S) en S elemental y este ser oxidado a su vez a SO4-2,
proceso llamado sulfooxidación. Puede producirse en:

• En ambientes aerobios: En donde el H2S es usado como fuente de

energía por microorganismos quimiolitotrofos, no fotosintéticos. El S
resultante se acumula intracelularmente pudiendo oxidarse
posteriormente a SO4-2.
Ej.: Beggiatoa, Thiovulum, Thiothrix y Thiobacillus thioxidans. Algunos
microorganismos, como del genero Thiobacillus o Sulfolobus, pueden

216
 oxidar compuestos azufrados reducidos generando directamente SO4-2,
creando así su propio ambiente ácido.
• En ambientes anaerobios: En donde microorganismos fototroficos
fotorreducen el CO2 mientras oxidan el H2S a S, y en caso necesario el S
a SO4-2. El pH neutro establece condiciones para una oxidación
espontánea del H2S.
Ej.: Chromatium y Chlorabium.
Son dependientes de la luz solar.

Para acidificar el suelo se puede agregar directamente S, dado que estas

sulfobacterias los oxidaran a SO4-2 el cual queda retenido en el mismo.

Uso compuestos orgánicos del azufre: Existen bacterias, que en condiciones

anaeróbicas, pueden oxidar el H2S a compuestos orgánicos del azufre como el
dimetilsulfuro (DMS), el cual es un osmoregulador y fuente de energía y carbono.
Este puede ser usado como:

❖ Sustrato para metanogenesis por parte de ciertos microorganismos;

generando H2S y CH4.
❖ Dador de electrones para fijación fotosintética de CO2, produciéndose
dimetilsulfoxido (DMSO).
❖ Dador de electrones en microorganismos quimioorganotrofos o
quimiolitotrofos, produciéndose DMSO.
❖ En ausencia de O2 el DMSO actúa como aceptor de electrones en la
respiración anaeróbica.

Reducción asimilativa de sulfatos: Hay microorganismos que asimilan SO4-2, el cual

es necesario para la formación de aminoácidos azufrados; como cisteina y metionina,
proteínas y otros constituyentes celulares.

Reducción de SO4-2: Por este procese se produce la transformación del SO4-2 en H2S.
Se da en condiciones anaerobias en la cual intervienen bacterias del género
Desulfovibrio y Desulfotomaculum.

Desasimilación: Es un proceso de mineralización de la materia orgánica, en el cual

intervienen microorganismos heterótrofos.
Las proteínas son degradadas para obtener los aminoácidos azufrados a partir de los
cuales, por acción de la desulfatasa, se obtendrá azufre inorgánico, en forma de
H2S, junto a otros productos.

217
Entonces…

A nivel oxico:

El H2S puede ser oxidado a S elemental y luego a SO4-2 por un proceso de oxidación
quimiolitotrofica dependiente de O2 (a). El SO4-2 formado puede seguir varios
caminos:

b) Ser asimilado, a través de una reducción asimilativa, por múltiples

microorganismos para la síntesis de material celular.
c) A partir de la materia orgánica de estos microorganismos, o de la que se haya
en el ambiente, puede sufrir un proceso de desulfurilacion para liberar
nuevamente H2S. Esta mineralización puede ser mediada por bacterias del
género Rhizobium o Frankia.
d) En condiciones oxicas, puede ser reducido a H2S da en forma espontánea.

A nivel anoxico:

El H2S puede ser oxidado a S elemental y luego a SO4-2 por un proceso de oxidación
fototrófica independiente de O2 (a’). El SO4-2 formado puede seguir varios caminos:

b) Ser asimilado, a través de una reducción asimilativa, por múltiples

microorganismos para la síntesis de material celular.
c) A partir de la materia orgánica de estos microorganismos o de la que se haya
en el ambiente, puede sufrir un proceso de desulfurilacion para liberar
nuevamente H2S.
d) En condiciones anoxicas, podrá reducirse a H2S siempre y cuando actúen las
bacterias reductoras de azufre. Estas compiten con las bacterias
metanogenicas ya que para reducir el SO4-2 necesitan H2 molecular; el cual
actúa como dador de electrones. También serán dependientes de la
fermentación de compuestos orgánicos por parte de otras bacterias, cuyo
metabolismo suministra el H2 molecular.

En estas condiciones se da el proceso de desproporción del azufre, el cual consiste

en el desdoblamiento de un compuesto en dos nuevos compuestos, uno más oxidado
y otro más reducido. Algunas bacterias sulfatorreductoras, como Desulfovibrio
sulfodismutans, pueden utilizar compuestos del azufre en estados intermedios de
óxido-reducción, dando dos nuevos compuestos uno más oxidado y otro más
reducido que el sustrato original.

El S elemental también puede ser reducido a H2S, participando en una forma de

respiración anaerobia (e’).
A su vez, se generan reaccione de óxido-reducción entre los compuestos orgánicos
del azufre, como ser entre DMS-DMSO. Ej.: Clostridium.

218
Ciclos del hierro

El hierro es uno de los elementos más importantes en la corteza terrestre, pero de

menor importancia en ambientes acuáticos debido a su relativa insolubilidad en agua.
Se encuentra, en la superficie terrestre, en forma de:

❖ Fe+2 (ferroso)
❖ Fe+3(férrico)

El Fe puede ser oxidación o reducción por bacterias oxidantes o reductoras de

hierro, respectivamente.

1. Oxidación: Es el paso de Fe+2 a Fe+3, volviéndose mas soluble. Es el principal

medio de solubilizacion de este elemento en la naturaleza.
Es un proceso geoquímico muy importantes mediante el cual las bacterias
oxidantes del hierro producen energía ya que el ion Fe+2 actúa como dador de
electrones.
A pH ácido, la oxidación química del hierro es lenta.

2. Reducción: El Fe+3 se reduce a Fe+2 y puede combinarse con H2S; si es que hay
producción en el medio, formando sulfuro ferroso (FeS), un sedimento anoxico
de color naranja característico. En este caso el Fe+3 actúa como aceptor de
electrones.
Tanto el FeS como el trioxidoferrico (Fe(OH)3), tienden a precipitar formado
sedimentos en suelos, lagos, tuberías, etc.

219
Las acciones de estos microorganismos son importantes para la lixiviación
microbiana de los metales.
Si bien la oxidación química del hierro a pH ácido es lenta, hay microorganismos
quimiolitotrofos acidofilos, como el Thiobacillus ferroxidans, los cuales tienen la
capacidad para oxidar el Fe+2 y obtener energía en medio acido. El ion Fe+3
precipitara formado un complejo sulfatado mineral, llamado jorosita.

Ciclo del fosforo

El fósforo se encuentra presente en las células formando parte de las moléculas de

ATP y de los ácidos nucleicos. Debido a que es un elemento requerido y limitante en
ambientes acuáticos, el ciclo del fósforo es importante para el mantenimiento de la
productividad de un ecosistema.

❖ Fuentes o depósitos de azufre naturales: Se haya en rocas y sedimentos en forma

de fosfatos insolubles de aluminio, calcio y hierro que en medio acido se vuelven
solubles.

La producción de ácidos orgánicos; provenientes de la fermentación, y demás

productos metabólicos, como HNO3, H2SO4 y H2S, por parte de los microorganismos
heterótrofos; favorecen la solubilizacion de los fosfatos, dejándolos disponibles para
que sean asimilados por las plantas y otros organismos.
La solubilidad de los fosfatos también puede deberse a la acción de microorganismos
quimiolitotrofos, en presencia de un medio anoxico.

Así, por acción de plantas algas y bacterias fotosintéticas, estos fosfatos solubles se
transforman en fosfatos orgánicos al ser incorporados a material celular.
Cuando estos organismos mueren, el fosfato orgánico insoluble, por medio de la
degradación microbiana, se volverá fosfato orgánico soluble; el cual por un proceso
de mineralización microbiana generara fosfato inorgánico soluble.

Microorganismos y polución

Los microorganismos son importantes ya que intervienen en los distintos ciclos y así
permiten el reciclaje y la disponibilidad de los elementos químicos para que sean
usados por otros organismos.
Son los microorganismos los agentes más efectivos parar prevenir el deterioro del
ambiente.
Intervienen:

❖ En la Mineralización de materia orgánica

❖ En la Descomposición de sustratos que pueden ser tóxicos
❖ También pueden producir compuestos tóxicos.

La polución es la contaminación del medio ambiente que genera un impacto sobre los
procesos microbianos y sobre el poluente; o contaminante.
De este modo…

220
 a) La polución del agua y del suelo actúan sobre los microorganismos, y al hacerlo
sobre estos, influye sobre todo el ecosistema:
• Reduciendo la velocidad de procesos microbianos.
• Afecta comunidades indígenas eliminando especies.
• Actúa sobre algas y cianobacterias, afectando a los peces y a toda la cadena
alimenticia, mediante:
o Inhiben la fotosíntesis y disminuyen el crecimiento de toda la cadena.
o Inhiben la mineralización o fijación del N2.
o Inhiben crecimiento de microorganismos autótrofos, plantas, etc.

b) El microorganismo actúa sobre el poluentes por medio de:

• La detoxificacion; la cual consiste en la destrucción, mineralización o

modificación del poluente de manera tal que pierda su actividad.
Ej.: CO atmosférico transformado por microorganismos a CO2.
• La activación; la cual es mucho menos frecuentes; y consiste en la
generación de un compuesto altamente toxico a partir de un compuesto de
una toxicidad menor.

c) El microorganismo genera poluentes como es el caso de:

• Oxido de nitrógeno.
• Compuestos volátiles; como sulfuro de carbono
• Compuestos metilados de Hg, As y Fe.

El papel de los microorganismos en la polución abarca los procesos de

bioremediacion, que buscan restaurar ambientes afectados por poluentes como ser:

 Petróleo
 Compuestos xenobioticos; los cuales son compuesto sintetizados
quimicamentente que no han existido en forma natural; como ser los
pesticidas.
 Polímeros sintéticos

221
Taxonomía

Origen de la vida

La tierra presenta una antigüedad de 4600 millones de años aproximadamente.

Por mucho tiempo, las condiciones que preponderaban en ella no eran compatibles
con la vida:

• Existía una elevada concentración atmosférica de CH4, CO2, N2, NH3 y muy
poco O2; lo que generaba un ambiente reductor.
• Trazas de FeS y H2S.
• Temperatura mayores a 100°C

Sin embargo, a medida que fueron pasando los milenios, la temperatura fue
descendiendo y las condiciones químicas fueron cambiando.
Las radiaciones solares que incidieron sobre los compuestos inorgánicos permitiendo
la formación de las primeras moléculas orgánicas que dieron origen a las primeras
protocelulas primitivas que aparecieron en los océanos hace aproximadamente 3500
millones de años.
Estas protocelulas consistían en la agregación de moléculas en tres etapas:

 Las primeras moléculas en aparecer fueron polímeros de ARN; con una

capacidad autoreplicativa y para transcribir y sintetizar proteínas a partir de su
secuencia.
 Las segundas moléculas en aparecer fueron las proteínas; las cuales se
sintetizaban del ARN.
 Tanto las moléculas de ARN como las proteínas eran englobadas en una
membrana lipídica; gracias a la propiedad que tienen los lípidos en medios
acuosos para formar micelas.

Dichas protocelulas eran muchísimo más rudimentarias y poco comparables con las
células actuales pero es probable que ya cumpliesen alguna función y sean capaces
de mantener aislada, de alguna manera, su información genética de modo que esta
no sufra daños.
A lo largo de la evolución, el ARN se ira transformando en ADN; como la principal
molécula que conserva y contiene los caracteres que se irán transmitiendo hacia la
progenie.

Con respecto a las protocelulas, se puede establecer ciertas conjeturas:

➢ Al haberse originado en la profundidad de los mares, en el cual hay una ausencia

de O2, serían anaerobios y heterótrofos; capaces de consumir la materia
orgánica que se producía por la acción de las radiaciones solares sobre ese
caldo primitivo; siendo este el único sustrato disponible hasta entonces.
➢ A medida que dicha materia orgánica se empezase a agotar, empezaría la
selección de aquellas protocelulas que fuesen capaces de sintetizar su propios
nutrientes y la muerte y extinción del resto de ellas. Así, las protocelulas
dominantes serian autótrofas dentro de las cuales se hubiese podido encontrar:
o Protocelulas capaces de utilizar los compuestos inorgánicos; es decir
quimiolitotrofos.
o Protocelulas capaces de utilizar las radiaciones solares como fuente de
energía; es decir fotoautotrofos. Estas fueron sumamente importantes ya

222
 que al ser capaces de realizar una fotosíntesis oxigenica, comenzaron a
generar el O2 molecular atmosférico; permitiendo la aparición y el
desarrollo de organismos aerobios y la extinción de aquellos que no
estaban preparados para afrontar la presencia de este nuevo compuesto;
poluente en un principio.

De esta forma, todos los organismos actuales presentan un único ancestro común;
derivando todos de una única célula primitiva u originaria teórica; ya que no se la
puedo encontrar, denominada LUCA (último antepasado común universal).

Hace 1500 millones de años surgieron las células eucariotas. Algunas teorías
establecen que el surgimiento de estas se debió a la incorporación o fagocitosis de
células más pequeñas por parte de la célula eucariota; pero actualmente se piensa
más en una relación simbiótica que depredativa.
Esta endosimbiosis pudo haber ocurrido entre dos células (a las cuales les podríamos
llamar ‘’procariotas’’) en la cual una de ellas tenía la capacidad de:

• Utilizar oxigeno; dando origen a las mitocondrias.

• Realizar fotosíntesis; al poseer los fotosistemas necesarios en su membrana,
dando origen a los cloroplastos.

La asociación de distintas células, las cuales se hallaban aisladas en un ambiente

agresivo, les permitió defenderse de los depredadores, aprovechar mejor los
nutrientes y protegerse de los factores ambientas, dando origen a los primeros
organismos pluricelulares.
Estos organismos, con las retracción de los mares, empezaron a colonizar la tierra lo
cual significo, para las células organizarse en estructuras más complejas; con la
subsiguiente aparición de los organismos superiores (plantas y animales) con tejidos
responsables de realizar distintas funciones para poder afrontar aquellas nuevas
condiciones atmosféricas; como la falta de agua.

Historia de la taxonomía

Debido a la gran diversidad de organismos (plantas, animales, microorganismos) que

existen en la tierra, es necesario clasificarlos.
Las primeras clasificaciones fueron naturales o filogenéticas, en donde se agrupaba a
los organismos de forma que exprese mejor su parentesco; es decir quien dio origen
a quien, quien está emparentado con quien:

✓ 1866: Heckel crea el reino Protista el cual contenía a las bacterias, algas,
hongos y protozoarios; pero hace una distinción entre protistas eucariotas y
procariotas.
✓ 1978: Whittaker y Margulis dividen a los organismos en:

223
 ✓ 1984: Murray hacer desaparecer el reino Monera y lleva a los Prokariotae a la
categoría de reino, conteniendo a las Bacterias y Cianobacteriasa, pero
distinguiendo 2 tipos de células procariotas; arqueas y bacterias.
✓ 1978: Carl R. Woese eleva los tres tipos de células que se conocían hasta el
momento (arquea, bacteria y eucariotas) a la categoría de dominio (un nivel
por encima del de reino) surgiendo así la clasificación que está en vigencia
actualmente;. Así, todos los organismos conocidos se pueden clasificaran
solo en 3 dominios:

Existen una gran cantidad de diferencias entre los 3 dominios como ser:

Con respecto Característica Bacteri Archae Eukary

a a a
Al material -ADN circular SI SI NO
genético -Histonas NO SI SI
-Núcleo NO NO SI
A su - Pared peptidoglicano SI NO NO
envoltura - Tipo de enlace en lípidos de Ester Éter Ester
membrana 70s 70s 80s
- Ribosomas
- Plásmidos SI SI Raro
- Ribosoma sensible a toxina diftérica NO SI SI
A su - Metalogénesis NO SI NO
metabolismo - Nitrificación SI NO NO
- Desnitrificación SI SI NO
A su - Fijación de nitrógeno SI SI NO
nutrición - Fotosíntesis oxigénica SI NO SI
- Quimiolitotrofía SI SI NO
- Presencia de β-hidroxialcanoatos SI SI NO
- Crecimiento a más de 80º C SI SI NO

224
Esto permite establecer un árbol filogenético que reúne en tres dominios a todos los
seres vivos partiendo siempre de un ancestro común.

La distancia, desde el
ancestro común, a donde
aparecen los dominios
Bacteria y Arquea son
similares, pero en el caso
del dominio Eukarya es
mucho más extensa
indicando una posición
más elevada en la escala
evolutiva.

Taxonomía

Es la ciencia que se ocupa de la clasificación de organismos que han sido estudiados

de manera exhaustiva. Cumple con 3 objetivos:

 Clasificación: La cual estructura los organismos en grupos o taxones en base

a su similitud o parentesco.
Dependiendo del tipo de característica que se vaya a analizar, se producirá
una:
o Clasificación fenotípica; cuando se analizan características culturales,
morfológicas, fisiológicas, etc.
o Clasificacion filogenética; basada en las relaciones de proximidad
evolutiva entre las distintas especies, actuales o extintos.
 Nomenclatura: Asigna nombres a los taxones u organismos que se van
descubriendo y caracterizando siguiendo códigos internacionales de
nomenclatura que establecen exactamente de qué manera se deben nombrar.
 Identificación: Determinar para un organismo nuevo que se está aislando a
que taxón pertenece.

Entre clasificación e identificación hay una enorme diferencia.

La clasificación requiere que se haga una caracterización exhaustiva de distintas

propiedades o características de los organismos. Para ello es necesario utilizar
técnicas específicas y métodos de clasificación basados en diferentes conceptos
teóricos para así poder formar los grupos taxonómicos o taxones.
De esta caracterización surge la sistemática dado que todas las características que
se vayan registrando; a su vez se irán documentando y reuniendo en manuales de
sistemática, los cuales contiene:

• La descripción de los caracteres de cada taxón y las características de todos

los organismos que están presentes en cada uno de los taxones
• La filiación, o relaciones filogenéticas, que puede existir entre taxones.

La sistemática es la base sobre la cual después se puede hacer la

identificación.

La identificación, de un organismo aislado, consiste en su caracterización por

número limitado de pruebas, con el fin de determinar ciertas características que
han sido previamente seleccionadas como claves o elementales para luego realizar

225
una comparación de las mismas con las de otros organismos conocidos para
así poder ubicar el asilado dentro de un taxón ya existente asignándole una especio o
género.
Si las características que se han utilizado para su identificación son insuficientes para
ubicarlo en algún taxón, se puede ampliar el número de ensayos pero si estos
continúan sin arrojan ningún resultado esclarecedor, se debe realizar un estudio
taxonómico profundo ya que es posible que el aislado sea un organismo nuevo el
cual no ha sido previamente clasificado.
En este caso, se le otorgaría un nombre; siguiendo las pautas de la nomenclatura.

Clasificacion

En un sistema de clasificación se agrupa a todos los organismos que se conocen

en grupos homogéneos los cuales tienen características muy similares entre sí, que a
su vez pertenecen a otro grupo más extenso siguiendo una estructura jerárquica
sin superposiciones.
Ej.: Los organismos que forman un primer grupo tienen muchas características
similares y que a su vez difieren de las de otro grupo o taxón. Así, más de un grupo
pueden compartir ciertas características que permite ubicarlos en un mismo taxón
superior y estos a su vez reúnen características comunes que permiten ir a uno más
elevado.

En la taxonomía bacteriana los niveles o rangos utilizados son los siguientes:

Dominio, Phylum, Clase, Orden, Familia, Genero y Especie.

El grupo taxonómico básico o la categoría más baja es

la especie; la cual es la base de la clasificación, por
ende es importarte poder definirla.

En las clasificaciones originales, el aislamiento en

medio solido de microorganismos presentes en una
muestra por medio del método de las diluciones
sucesivas permite obtener colonias separadas (las
cuales se habían formado por una sola célula la cual
se había adherido a la superficie del agar y
multiplicado dando origen a una comunidad) y, por
transferencias sucesivas, un cultivo puro de ese
microorganismo. Si se transfiere ese cultivo puro a un
medio líquido adecuado para que prolifere
obtendremos una cepa. Al analizar sus características
se puede observar que son muy similares a las de
otras cepas, que fueron aisladas por otros métodos o
cuyo origen es distinto.
Por ende, para estas clasificaciones, especie se define
como ‘’el conjunto o colección de cepas que comparten
muchos caracteres en común; por no decir todos, sin
importar el origen y que difieren considerablemente de
otras cepas. ‘’

Cepa se podría definir como una población de microorganismos que desciende de un

único organismo o de un aislamiento en cultivo puro.

226
Si al estudiar las características de un aislado se cae en cuentas de que es un
organismo nuevo, es necesariamente entonces:

• Denominar la especie: Siguiendo las pautas de la nomenclatura

• Designar la cepa tipo: De todas las cepas que comparten las mismas
características del aislado, solo una de ellas es designada como cepa tipo de
la especie, la cual es conservada en organizaciones especiales,
generalmente empresas. Un conjunto de varias cepas tipos constituyen
colecciones de cultivos, las cuales pueden ser pedidas, por cualquier
investigador, y usadas como referencia frente a organismos que se vayan
aislando.

También se puede conservar cepas que presentan pequeñas diferencias con la cepa
tipo que las hace particulares. Esto permite ampliar el patrón de referencia para
una especie dada, en el cual ciertas características pueden ser diferentes sin que eso
llegue a afectar la clasificación de la cepa dentro de la especie.
Dichas características serian todas aquellas que permiten hacer una clasificación por
debajo de la especie, denominándose rangos infraespecíficos. Algunos de estos
pueden ser:

 Morfovariedad: Son diferencias morfológicas y son muy comunes. Ej.: Las

bifidobacteras tienen la particularidad de desarrollar una forma celular bifurcada
(en forma de Y), pero dentro de este mismo grupo existen algunos individuos que
no presentan esta forma bífida pero sin embargo el resto de sus características
culturales, metabólicas, etc. son idénticas.
 Biovariedad: Son diferencias bioquímicas o fisiológicas pequeñas. Ej.: Una
diferencia fisiológica en la temperatura optima de crecimiento de dos mesofilos;
uno a 35 °C y otro, de la misma especie, a 35.5 C. Esta diferencia en su fisiología
es tan pequeña que no hace a la caracterización de la especie.
 Patovariedad: Es la patogenicidad que presenta un microorganismo que no
comparte con otro individuo, aunque sean de la misma especie. La capacidad
para invadir y producir una enfermedad puede estar determinada por un factor de
superficie que le permite incorporarse, adherirse y penetrar en el hospedador.
 Fagovariedad: Es la tipificación de organismos de una misma especie mediante
pruebas en donde se utilizan bacteriófagos.
La infección con fagos genera una reacción altamente específica ya que deben
estar presentes ciertos determinantes en la superficie de la célula hospedadora
para que el fago puede adherirse e incorporarse.
Así se podrá tipificar distintas variedades bacterianas que pertenecen a una
misma especie en donde, un determinado fago lisara solamente aquellas células
que conserven el receptor especifico, mientras que las células que hayan perdido
o mutado, a lo largo de la evolución, dicho receptor serán resistentes al mismo.
 Serovariedad: Es la presencia de distintos determinantes antigénicos en la
superficie de microorganismo que pertenecen a una misma especie. Un
determinante antigénico, al igual que los receptores para el fago, pueden estar
presente, atrofiados, mutados o haberse perdiendo a lo largo de la evolución.
Utilizando anticuerpos (Ac) específicos para los mismos, se pueden distinguir
distintas serovariedades de microorganismos en donde algunos todavía
conservaran el antígeno específico, dando una reacción antigénica diferentes a
los que no lo conservan.
Esta serovaridad también puede producirse a nivel de moléculas en el interior de

227
 las células. Ej.: Proteínas que cumplen funciones y presentan actividades
enzimáticas idénticas pero que poseen aminoácidos o tamaños diferentes con
respecto a la proteína ‘’estándar’’ de la especie. Si bien estas moléculas se las
podrá detectar como antígenos (Ag) específicos, algunas son generadas por un
error durante de la síntesis proteica que, a lo largo del tiempo, se perderá.

Los rangos infraespecificos contribuyen al diagnóstico y a la epidemiología.

Nomenclatura

Consiste en determinar o atribuir nombres a los grupos taxonómicos o a organismos

nuevo que diferente del resto.

La nomenclatura de los organismos puede presentar dos categorías:

▪ Informal → colibacilo
▪ Científico →Escherichia co

Todos los organismos deben tener un nombre científico, en cambio pueden carecer
de uno informal.

El nombre científico está reglamentado y tiene que cumplir una serie de pautas:

✓ Ser estable: El nombre no debe cambiar, relativamente, a lo largo del tiempo.

Para que este se modifique, es necesario que la sugerencia de cambio este
bastante bien fundamentada.
✓ Desprovisto de ambigüedad: El nombre de un organismo no debe confundirse
con el de otro.
✓ Ser necesario: Evitar colocar característica o propiedades innecesarias en el
nombre.

Finalmente se debe publicar el nombre para que toda la comunidad científica se

familiarice con él y sepa de su existencia. La publicación está sujeta a 3 principios:

✓ Cada nuevo taxón debe tener nombre no homónimo ni sinónimo de otro ya

publicado
✓ Debe darse una descripción detallada de todas las caracteres de diagnóstico
que se estudiaron en el organismo nuevo.
✓ Debe designarse la cepa tipo de manera que pueda ser colocada en una
colección de cultivo.

Con respecto al nombre científico en sí:

• Sigue las reglas de la gramática latina. Está en latín

• Es binomial y se escribe en cursiva:
o El primer nombre, escrito con mayúscula, es el nombre del género y
es un sustantivo. Puede abreviarse con una letra mayúscula, Ej.:
[Link].
o El segundo nombre, en minúscula, es el epíteto o nombre de la
especie. Puede ser un sustantivo, un nombre propio de alguna
persona o derivación, o un adjetivo latinizado Ej.: Propionibacterium
shermanii por el apellido de su descubridor (Sherman) o
Propionibacterium pentosaceus porque utiliza pentosa.

228
Al igual que la cepa tipo que necesitamos para poder caracterizar una especies,
habrá una especie tipo que caracterice al género y así sucesivamente. Siempre
existirá algo que se considerara representativo del taxón.

Actualmente se ha clasificado dentro del dominio Archaea a solo 2 Phylum; mientras

que el dominio Bacteria hay 23 Phylum.

Todo el registro de las características de todos los microorganismos pertenecientes a

todos estos taxones incluidos en estos phylums, se encuentran en los manuales de
sistemática que sirven de referencia para todo el ámbito científico.
El primero en utilizarse fue el manual de bacteriología determinativa de Bergey
(1923); para luego comenzar a usarse los manuales de bacteriología sistemática. La
diferencia en el año de las ediciones de sistemática se debe a una gran cantidad de
microorganismos y a una incluso mayor cantidad de pruebas para determinar y
confirmar las características de los mismos antes de incluirlos en los manuales. Todo
esto hace que sea una tarea muy emborrosa y tediosa.
En cada volumen de sistemática se agrupa a distintos microorganismos.

Taxonomía clásica

Así como los organismos han ido evolucionando, los métodos de taxonomía también
lo hicieron. Lo primero en surgir fue la taxonomía clásica.
En el caso de los microorganismos, esta abarca características fenotípicas y
algunas genotípicas.

A. Las características fenotípicas son las más abundantes y engloban

caracteres:

Morfológicos: Aquellos que pueden detectarse con una observación a través del
microscopio o directa.

• Forma celular • Tinción

• Tamaño de las células • Cilios y flagelos
• Morfología de las colonias • Endoesporas
• Ultraestructura • Inclusiones celulares

Fisiológicas y metabólicas:

229
 • Fuentes de carbono y nitrógeno • Movilidad
• Componentes de la pared • Tolerancia osmótica
celular • Relaciones con el oxígeno
• Fuentes de energía • pH óptimo de crecimiento
• Productos de fermentación • Pigmentos fotosintéticos
• Tipo nutricional • Necesidad y tolerancia a la sal
• Temperatura de crecimiento • Metabolitos secundarios
• Luminiscencia • Sensibilidad a antibióticos
• Conversión de energía

Ecológicas:

• Ciclo vital.
• Relaciones simbióticas.
• Patogenicidad.
• Preferencia de hábitat (suelo, agua, material en putrefacción).

B. Las características genotípicas son menos abundantes y engloban

características como:

• Tamaño del genoma

• Porcentaje de Guanina-Citosina (% GC) o Coeficiente de Chargraff

Con esto se observa infinidad de pruebas que se debe hacer y registrar antes de
poder decir que se ha clasificado un organismo.
El método de clasificación de la taxonomía clásica tuvo varias etapas:

I. En una primera etapa, era prácticamente, o en su totalidad fenotípica en

donde se analizaban las características morfológicas, culturales, ecológicas
del microorganismo. Se aplicó la técnica de taxonomía numérica que
consistía en reunir a las distintas cepas en grupos de similitud o fenones.
Para poder realizar esta técnica hacía falta contar con una gran cantidad de
cepas (100-200) para poder llegar a una clasificación que tuviese valor.
II. En una segunda etapa; se empezó a dar un poco más de peso y a incluir
características genotípicas. Con esto se empezó a investigar si la
similitud de caracteres fenotípicos se confirma con similitud del genoma.
Las técnicas que permitían esa clasificación genotípica eran muy
rudimentarias.
III. En una tercer etapa; se comenzó a seleccionar los caracteres más
relevantes que serían utilizados como referencia para la identificación de
nuevos aislados. De acuerdo a todo ese análisis, se vio realmente cuales eran
los caracteres más frecuentes, y de mayor peso, dentro de un mismo taxón,
que serían considerados de referencia a la hora de la identificación.

La clasificación basada en caracteres fenotípicos; como morfológicos y fisiológicos,

presenta un inconveniente y es el dar mayor peso a unos caracteres que a otros.
Como el grado de subjetividad, a la hora de analizar estos caracteres, influirá
significativamente sobre los resultados, es necesario una gran cantidad de
caracteres para que la clasificación en si tenga valor.

230
En 1763, Adanson propuso asignar un mismo peso a todos los caracteres. Para ello,
al realizar los ensayos de los mismos, expreso solamente su presencia; es decir la
positividad o negatividad del carácter, sin cuantificarlo.

Este nuevo método, que en un principio se aplicó a plantas, fue implementado en

bacterias por Sneath en 1950. El mismo se basa en un gran número de caracteres
(60 a 100) en donde cada uno de ellos tiene el mismo peso y en donde la similitud
entre dos microorganismos es función de la proporción de caracteres comunes.

Ej.: Para conocer la similitud entre dos microorganismos (A y B) se busca el

Coeficiente de Similitud de Sneath (SAB) que determina:

El cociente entre el número de caracteres que están presentes en ambos

microorganismos (nS+) y el número de caracteres totales, es decir los positivos (nS+)
y negativos (nd).

Dos microorganismos idénticos no tendrán ningún carácter diferente y el máximo

valor de (SAB) es 1, el cual ira disminuyendo a medida que disminuya la similitud entre
los microorganismos.
Usando este valor de similitud se puede determinar la distancia taxonómica (D) entre
los organismos; la cual está dada por la diferencia entre 1 y el coeficiente de similitud:

De manera que:

• D=0; (SAB)= 1. Es decir, A y B son cepas que pertenecen a la misma especie.

• D=1; (SAB)= 0. Los organismos serán completamente diferentes.

Con D se puede armar representaciones gráficas,

que son matrices de doble entrada o dendogramas,
en las cuales se hallan representados los grupos o
fenonas y nos permite saber a quién se parecen un
determinado microorganismos y dentro de que otro
grupo se encuentran.

231
La clasificación que se basada en caracteres genéticos utiliza principalmente el %
GC; ya que la determinación del tamaño del genoma no aparta información
sustanciosa en la taxonomía clásica. Actualmente, el %GC se sigue utilizando en la
clasificación de los organismos.

Cuando se registra la absorbancia

del ácido nucleico (ADN) doble
banda de un microorganismos a 260
nm, se observa que esta es menor
que la del mismo ácido nucleico
cuando se encuentra como simple
banda, debido a que la estructura de
doble hélice oculta a los nucleótidos
en el interior de la molécula.

Si se grafica la absorbancia a 260 nm de un

ácido nucleico purificado en función de la
temperatura se observa que a medida que la
temperatura aumenta también aumenta la
absorbancia, debido a que el ADN doble banda
se ira desnaturalizando y convirtiéndose en
simple banda exponiendo cada vez un número
mayor de nucleótidos. Esto continúa hasta
alcanzar un punto en donde se obtiene la
absorbancia máxima posible dado que la
molécula se ha desnaturalizado completamente
y toda la cadena estará separada.

A una determinada temperatura se produce un punto de inflexión en la cuerva. Dicho

punto de inflexión se denomina punto medio del perfil de desnaturalización
térmica del ADN (Tm). Este valor de Tm es característico para cada ácido nucleico y
es lo que permite determina el coeficiente de Chargraff o %GC que es lo que en
realidad se utiliza en la comparación de dos microorganismos.
Existe una relación entre la cantidad de adenina-timina y guanina-citosina (AT/GC)
que se expresa comúnmente como %GC, el cual varía con el género y la especie del
microorganismo
%GC se lo puede obtener por:

✓ Centrifugación en gradiente de densidad de ClCs (cloruro de cesio).

✓ Aplicando una fórmula que relaciona Tm y %GC

232
 Como criterio de exclusión se considera que:

▪ %GC > 3%, indicaría que probablemente los organismos portadores de esos
ácidos nucleicos son especies diferentes.
▪ %GC > 10, %, indicaría que probablemente los organismos portadores de
esos ácidos nucleicos son géneros diferentes.

Al considera que lo que se está midiendo es la cantidad de GC que está presente en

un ácido nucleico; %GC tiende un determinado valor en la clasificación de
microorganismos:

➢ Dos especies que presenten coeficientes muy distintos no tienen comunidad

genética, y se puede reafirmar que ambos pertenecen a especies diferentes.
➢ Dos bacterias con una idéntica secuencia nucleotídica tendrán un valor
idéntico de coeficiente %GC. tienen igual coeficiente

Pero dos bacterias con idéntico %GC pueden estar genéticamente alejadas dado que
sus secuencias nucleotidicas no son las mismas, siendo estas imposibles de ser
determinadas por este método, constituyendo una limitación del mismo.
Por ende, el coeficiente de Chargraff tiene valor para discriminar dos
microorganismos de diferentes especies pero NO para afirmar que dos
microorganismos pertenecen al mismo taxón.

Metodología de la clasificación moderna. Taxonomía polifásica

El progreso de ciencia ha llevado a métodos de clasificación mucho más moderno,

siendo la base de la taxonomía polifásica. La identificación polifásica integra a la
vez caracteres:

I. Fenotípicos:

➢ Clásicos: Aquellos que pertenecen a la taxonomía clásica como morfología,

nutrición, etc.
➢ Nuevos: Basados principalmente en la detección de ciertos componentes o
moléculas, presentes en los organismos, que no se modifique con el tiempo ni
con las condiciones de cultivo y que tengan relevancia dentro de la
clasificación o caracterización.
o Marcadores quimiotaxonómicos e inmunológicos
o Perfil de proteínas totales y enzimas.

II. Genotípicos:

➢ Clásicos: % GC; siendo rápido y útil para discriminar dos organismos que no
pertenecen al mismo taxón.
➢ Nuevos: Se utilizan para poder determinar genotípicamente si dos organismo
pertenecen a un mismo taxón.
o Hibridación DNA-DNA
o Perfiles moleculares por restricción o amplificación de ADN

233
III. Filogenéticos: Basados actualmente en:

➢ El gen del ARNr 16S

➢ Secuencias signature o firma en el ARNr

Caracteres fenotípicos

1. Marcadores quimiotaxonómicos

Estos caracteres no son universales, pero son muy útiles dentro de ciertos grupos. Su
análisis químico se realiza con equipamiento especializado. Tiene un alto grado de
discriminación y están presentes en distintas estructuras celulares. Ej.:

 A nivel de la pared celular:

o El PG estaría presente en todas las procariotas pero no en los
Mycoplasmas
o Ciertos aminoácidos y azúcares de valor taxonómico en Gram (+).
 A nivel de la membrana externa:
o La presencia de lipopolisacáridos en Gram (-).
 A nivel de la membrana citoplasmática:
o Ácidos grasos, identificados como metil éter de ácidos grasos por
cromatografía gaseosa.
o La presencia de ácidos grasos cíclicos; poco comunes.
o La presencia de ácidos micolicos en el grupo Actinomicetes, el cual
pertenece a las Gram (+).
o Pigmentos carotenoides en bacterias fotótrofas anoxigénicas.
 A nivel de la cadena transportadora de electrones:
o El tipo de citocromos y quinonas presentes.
 A nivel del sistema fotosintético:
o La presencia de Clorofila a, b o bacterioclorofila.
 A nivel del citoplasma:
o Poliaminas en metanogénicas y Gram (-).

Estos compuestos químicos son de valor taxonómico ya que no son universales

estando presentes solo en algunos grupos; a veces muy reducidos.
No son característicos de todos los organismos; lo que les da la capacidad para
discriminar.

2. Caracteres inmunológicos

Las bacterias son mosaicos antigénicos ya que están formadas por una gran cantidad
de moléculas de las cuales muchas se expresan en la superficie y son de naturaleza
proteica.
Muchas de ellas actuaran como inmunogenos; como flagelos, pili, capsula, pared y
membrana celular, capaces de desencadenar una respuesta inmunológica con
formación de Ac.
Si bien, gracias a estos Ag se puede discriminar entre dos microorganismos, solo
marca una diferencia a nivel infraespecifico y no tiene relevancia para la clasificación
genética de los organismos; permitiendo determinar serotipos o serovariedades.

Presentan mayor utilidad en el estudio inmunológico con finalidad filogenética en

donde se busca la existencia de homología inmunológica entre proteínas de
diferentes microorganismos. Se utilizan, generalmente, enzimas isofuncionales las

234
cuales presentan la misma función pero distintas estructura debido a las fuerzas de la
evolución.

Los métodos inmunológicos pueden ser:

➢ Cualitativos: El método de Orchetlony consiste en realizar pocillos (siguiendo

un determinado patrón) en una placa de agar en donde se coloca, por
separado, el Ag de una bacteria a identificar, el Ag de bacteria conocida y se
las enfrenta con un suero que contendrá Ac que reaccionaran con el Ag
conocido. Al difundir radialmente de los pocillos, tanto los Ag como el Ac se
pondrán en contacto formando una banda de precipitación claramente visible.
De acuerda a la forma de la banda; si hay cruzamiento o no, se puede
determinar si existe una identidad total, parcial o no identidad entre los dos Ag
que se están evaluando.
➢ Cuantitativo: Microfijación de complemento. El sistema del complemento es
uno de los componentes fundamentales de la respuesta inmunitaria defensiva
ante un agente hostil.

Caracteres genotípicos

Desde la taxonomía clásica hasta la actualidad se ha avanzo tanto que ya no solo se

estudia el %GC sino que también la homología genética mediante ensayos de
Hibridación con DNA marcado. Este ensayo consiste en:

1. Marcar, con P radiactivo, el ácido nucleico de un organismo conocido de

forma tal de contar con una molécula con la cual se va a trabajar y comparar
con el ácido nucleico no marcado de otros microorganismos.
2. Se calienta las soluciones de ácido nucleico marcado y la del
microorganismos a comparar para desnaturalizarlo y obtenerlo como ADN
simple banda.
a. Cuando se combinan la solución desnaturalizada de ADN marcado con
otra de ADN desnaturalizado pero del mismo microorganismo, se
observara 100% de renaturalizacion o de hibridación; y no quedara
ninguna molécula ADN sin hibridar.
b. Pero cuando se combina la solución desnaturalizada de ADN marcado
con una solución de ADN desnaturalizado que pertenece a otros
microorganismo, puede ocurrir que algunas secuencias se aparen y
otras no, debido a que no existe una total identidad entre ambas
cadenas, quedando una cierta cantidad de ácido nucleico sin hibridar.
3. Determinando el porcentaje de hibridación que hubo en cada caso se puede
saber si estamos en presencia de organismos iguales, o diferentes.
Dicho porcentaje de hibridación establece la relación que existe entre el
número de secuencias complementarias entre las distintas cadenas y el de las
secuencias totales.

Cuando dicho porcentaje se encuentra en un rango de:

✓ 70-100%; ambos microorganismos pertenecen a la misma especie.

✓ 25-70%; ambos microorganismos pertenecen al mismo género pero no a
la misma especie.
✓ < 25 %; ambos microorganismos pertenecen a géneros diferentes.

235
La homología genética no compara el contenido de GC sino las secuencias en la que
estos nucleótidos se encuentran, pudiendo determinarse la identidad.

Otra cosa que se estudia es la estabilidad de los híbridos.

Si se calienta progresivamente y se mide la absorbancia a 260 nm de una solución de
ácido nucleico hibrido, se obtendrán diferentes valores de Tm dependiendo del grado
de homología que tienen las dos cadenas que lo conforman:

• Cuanto más se acerque Tm del ADN hibrido al valor de Tm del ADN nativo del
microorganismo conocido, más parecido serán ambos microorganismos.

Se calcula entonces:

✓ Si ΔTm se encuentra entre 1 - 5 °C; se puede decir que ambas cepas

pertenecen a la misma especie.

Cada grado equivale es un 1% de bases no apareadas, por lo tanto pequeñas

variaciones en Tm hibrido; y por ende en ΔTm, indicaran diferencia realmente grande
entre los microorganismos.

Caracteres filogenéticos

Los últimos avances han llevado a agregar los caracteres filogenéticos a la

caracterización para transformarla en una caracterización polifásica. Estos
caracteres permiten plantean hipótesis de evolución y determinar relaciones de
parentesco entre las especies.
Para ello, es necesario contar con moléculas que actúen como cronómetros
evolutivos en donde se pueda comparar sus secuencias y establece la relación
entre ellas. De esta manera podrán indicar a que distancia se encuentran de un
determinado ancestro o la distancia evolutiva que existe entre dos organismos
actualmente presentes.
La secuencia de las moléculas es el registro histórico de la evolución.

Para que una molécula sea apta para funcionar como cronometro evolutivo debe
cumplir con ciertas características:

• Tener distribución universal: Deber estar presente en todos los organismos

para que pueda estudiarse en la totalidad de los organismos existentes.
• Tener una función homóloga en todos los organismos
• Tener en su secuencias zonas altamente conservadas de manera que se la
pueda seguir detectando aun a distancias evolutivas grandes (alineamiento) y
algunas zonas variables; las cuales permitirán distinguir los organismos
actualmente presentes.
• Ausencia de transferencia horizontal; ya que estaría adquiriendo fragmentos
de ácido nucleico que le pertenece a otro organismo y alteraría los resultados.
• Tenga una cantidad de información suficiente.

Algunas moléculas que se utilizan como cronómetros evolutivos son:

236
 • ARNr 5s, 16s y 23s
• Factor de Elongación Tu de la síntesis proteica
• Subunidad β-ATPasa
• RecA
• Genes funcionales

ARNr 16s

El ARNr 16s es la principal molécula usada como cronometro evolutivo.

Cuando se analiza su estructura primaria se observa:

✓ Dominios altamente conservados y universales.

✓ Regiones altamente variables que permiten la distinción entre los organismos.
✓ Dominios con un nivel intermedio de conservación con cambios a nivel de la
secuencia o estructura primaria pero que aún conservan la estructura
secundaria.

Estas variabilidades permiten hacer una diferenciación entre las especies actuales.
Con respecto a su estructura secundaria:

✓ Es similar en todos los organismos

✓ Cumple; en todos los organismos, la misma función relacionada a la síntesis
de proteínas (función ancestral).

Región Gris: regiones o estructuras estable

Región Roja: Regiones variables entre
bacterias y arqueas. Señalan las posiciones
en donde ambos microorganismos suelen
diferir.

Uso del ARNr 16s en el estudio de las

relaciones filogenéticas

1. Se obtiene el ácido nucleico total del

microorganismo.
2. Se lo calienta para desnaturalizarlo y
obtenerlo como ADN simple banda.

237
 3. De este ácido nucleico se amplifica únicamente la región correspondiente al
gen del ARNr 16s mediante varios ciclos de PCR; la cual involucra la acción
cíclica, dependiente de la temperatura, de primers específicos para dicha
región y de la ADN polimerasa. Al final de estos ciclos se obtendrán varias
copias del gen ARNr 16s.
4. Se hace correr los ampliaciones sobre un gel de agarosa para determinar el
tamaño de los fragmentos amplificados y verificar que coincidan con el tamaño
adecuado para un gen ARNr 16s estándar.
5. Se purifica el producto por PCR y se secuencia; es decir, determinar la
secuencia de nucleótidos dentro de ese fragmento amplificado para poder
comparar las secuencias obtenidas de la misma manera de distintos
organismos.

Ej.:

En una secuencia de 12 nucleótidos; el organismo A presenta 3 nucleótidos

diferentes con respecto al organismo B. El cociente (3/12) nos da un valor de 0,25, el
cual se considera la distancia evolutiva entre A y B.
Se calcula las distancia evolutivas entre todos los microorganismos que se están
comparando y se realiza una corrección de la misma.
Con estos obtenidos se puede elaborar arboles filogenéticos que son
representaciones graficas de la comparación de las secuencias. Cuanto más
diferente sea la secuencia de un microorganismo con respecto a la de otro organismo
que se está empleando como patrón de comparación, mayor será la distancia
evolucionaria y se encontrara más alejado del patrón en el árbol filogenético;
originando una rama cerca de la base de la línea filogenética patrón.

La secuenciación se realiza con programas informáticos los cuales presentan, en su

base de datos, una gran cantidad de secuencias registradas de microorganismos que
han sido estudiados y ‘’subidos’’ en todo el mundo. El mismo programa tiene la
capacidad de comparan, encontrar diferentes coeficientes y de elaborar un árbol
filogenético.

238
Árbol filogenético de los principales linajes de Bacteria basado en la comparación de
secuencias de ARNr 16S

Se observa que los géneros Aquifex y Thermodesulfobacterium se encuentra

bastante emparentados con las archaeas, encontrándose en la parte inferior del
árbol; las bacterias no sulfurosas verdes ocupan una posición central del mismo y los
microorganismos más nuevos ocupan las ramas superiores.

La secuencia del gen del ARNr 16S permite además otras aplicaciones como:

• Completar identificación de cultivos puros: para aquellos laboratorios que

tienen un equipamiento adecuado como equipos de PCR, secuenciador, etc.
debido a que el empleo de ARNr 16s, si bien es caro, esta menos sujeto al
factor humano y es más rápido.
• Análisis de comunidades sin cultivo: Las especies no cultivables no son
microorganismos que no sean capaces de crecer en los medios de cultivo sino
que, hasta el presente, no se conocen los requerimientos nutricionales de los
mismo y es imposible elaborar un medio de cultivo que permita el crecimiento
de absolutamente todo microorganismo.
Otra problemática son las comunidades microbianas; como la comunidad
intestinal. Los microorganismos que integran las mismas son muy difíciles de
aislar ya que solamente sobreviven cuando se encuentran dentro de la
comunidad, debido a que son incapaces de realizar alguna actividad
metabólica o de obtener algún nutriente esencial requiriendo de otros
microorganismos que se hallan presentes en la misma comunidad. Debido a
estas relaciones simbióticas tan intrincadas se hace difícil cultivarlos por
separado.
Para conocer los microorganismos que se encuentran presentes en una
comunidad se obtiene el ácido nucleico total de la comunidad y se lo estudia
mediante técnicas de amplificación, secuenciación y PRC.

2. Secuencias signature o firma en el ARNr

Dentro de un ácido nucleico determinado se puede encontrar pequeñas secuencias

que ocupan siempre la misma posición en ciertos grupos de organismos. A estos

239
oligonucleótidos se los denomina secuencias signature o firma.
Ej.:

• AAACUCAAA (siempre en posición 910) en Bacteria.

• CACACACCG (posición 1400) en Archaea.
• Citosina (posición 47) en gamma-Protebacteria, Cianobacteria, Bacteroides y
Gram (+)

Definición genética de especie bacteriana

Gracias a todos los avances científicos se ha podido llegar a cuantificar ciertos

caracteres sin que se vean influenciados por el factor humano; pudiendo generar una
definición de especie bacteriana más arbitraria.
Esa clasificación se basa en el análisis de las características genotípicas de los
organismos, permitido definir genéticamente a la especie.

En esta definición genética de especie existen tres características genéticas son las
que debe cumplir una cepa para pertenecer a una determinada especie:

➢ El porcentaje de hibridación entre dos ácidos nucleicos tiene que ser

mayor al 70%
➢ ΔTm: 1 -5 °C
➢ La secuencia del gen del ARNr 16s tiene que diferir en menos de 3% con
secuencias conocidas.

240
Trabajos prácticos

Autoclave

Modo de uso del autoclave:

1. Abrir la tapa y colocar agua en la caldera hasta el nivel de la rejilla

2. Cargar el autoclave con los elementos a esterilizar.
3. Asegurar a manolos tornillos de la tapa, dos a dos en cruz.
4. Abrir la espita para dar salida al aire del autoclave.
5. Asegurarse del funcionamiento de la válvula de seguridad, levantando el brazo
de la palanca del contrapeso y haciendo girar 2 o 3 veces la válvula.
6. Encender el gas de los mecheros.
7. Al cabo de un tiempo, comenzara a escapar vapor por la espita. Al principio en
forma débil y discontinua y luego en forma chorro continuo y silbante.
En este momento se está trabajando a vapor fluente o sin presión.
8. Para trabajar con vapor a presión, se cierra la espita cuando la salida de vapor es
neta y constante. De esta forma se realizara el purgado del autoclave.
9. Cerrada la espita y utilizando el manómetro, se controla la presión. Cuando esta
alcanza el valor deseado (1 atm) recién entonces se comenzara a contar el
tiempo de esterilización, el cual no debe ser menor a 20 minutos.
Para mantener el valor de presión deseado, se modificara el calentamiento.
10. Cumplido el tiempo de esterilización, se apaga el gas y se deja enfriar el
aparato hasta que las agujas del manómetro vuelvan a 0.
En dicho momento, se abre la espita para que escape el vapor sobrante y la tapa
para retirar los elementos esterilizados. Se utilizan estufas para secar los
elementos que salieron demasiado húmedos.

No debe jamás abrirse la tapa del autoclave antes del descenso completo de la
aguja del manómetro. La descompresión brusca puede producir la ebullición
tumultuosa de los líquidos; haciendo estallar los recipientes que los contienen o
mojando y haciendo saltar los tapones comprometiendo la asepsia.
Control del purgado del autoclave

Se coloca, junto con el material a esterilizar, un tubo con líquido y una campanita
invertida. Si se elimina todo el aire del autoclave, la cámara de aire que se
encontraba en la parte inferior de la campanita habrá sido reemplazada totalmente
por el líquido.

Control de esterilidad del autoclave

Consiste en incubar, durante 24 horas a 37 °C, los medios de cultivos que se han
esterilizado en el autoclave y observar si hay desarrollo por aparición de turbidez o de
colonias.
Un medio esta estéril solamente si se puede demostrar que no existe vida en él.

Control de la eficacia de un proceso de esterilización

Los medios más importantes para llevar a cabo dicho control son de naturaleza
biológica. Se utilizan tiras de papel con esporos de Bacillus subtilis o
stearothermophilus. Los esporos no desarrollaran en medios apropiados si
previamente fueron autoclavados a 121 °C durante 20 minutos.
Dichos microorganismos son de elección a la hora de determinar la eficiencia en el

241
método de vapor bajo presión dado que son los microorganismos más resistentes al
calor que se conocen.

Control de la temperatura de esterilización

Se utilizan pequeños tubos capilares que contienen una sustancia química pura no
alterable por el calor, finamente pulverizada y mezclada con un colorante. Cuando se
alcanza la temperatura de fusión, el colorante se disuelve y colorea el tubo.
Solamente indica que se ha alcanzado una determinada temperatura pero nada
respecto al tiempo.

Esterilizador de aire caliente de convención por gravedad

El aire circula por las diferencias de temperatura que existen en las diferentes
porciones de la cámara. Cuando este se calienta, se expande, disminuye su densidad
y asciende. AL enfriarse, se comprime y desciende, pasando por los elementos de
calefacción para volver a calentarse.

Uso correcto del horno de aire caliente

• Realizar una regulación precisa de la temperatura; para evitar una

exposición excesiva de los materiales inestables al calor y prevenir una
subexposicion que impediría una correcta esterilización
• No llenar la cámara hasta su capacidad máxima. Debe dejarse espacios
entre los elementos a esterilizar y mantenerlos separados de las paredes
laterales; con el fin de facilitar la libre circulación del aire en toda la cámara.
• El termómetro debe estar correctamente colocado en la parte superior del
horno.
• Se regula el tiempo de exposición recién cuando el termómetro alcanza los
160-180 °C.
• Evitar la apertura de la puerta durante la esterilización

Medios de cultivo

Control del pH

La fermentación de hidratos de carbono generara ácidos orgánicos que disminuirán

el pH del medio. A su vez, el catabolismo o descomposición de componentes
anionicos, aminoácidos y proteínas tendera a elevar el pH del medio.
Para evitar cambios excesivos en el ph de los medios de cultivo, provocado por el
mismo metabolismo microbiano, se añaden a estos buffers o tampones. Se utiliza
frecuentemente:

• Tampones Fosfato monopotasico-bipotasico: Se utiliza a pH cercanos a la

neutralidad. El fosfato monopotasico es una sal débilmente acida mientras que
el fosfato bipotasico es débilmente básica.
• Carbonato de calcio: Se utiliza a pH inferiores a 7. Esta sustancia se
descompone desprendiendo CO2, el cual actúa como agente neutralizante de
cualquier acido que aparezca en un medio de cultivo convirtiéndolo en sus
sales calcicas.

Se utilizan dos tipos de métodos para medir el pH en los medios de cultivo:

242
 ➢ Colorimétricos: Se emplean indicadores acido-base las cuales son sustancias
coloreadas que en solución acuosa presentan diferentes colores dependiendo
de la acidez o alcalinidad del medio.
➢ Potenciómetros: Es el método mas rápido y exacto. Consiste en sumergir en
el líquido un electrodo de potencial fijo (calomel) y uno de vidrio; los cuales se
hayan unidos a través de un galvanómetro.
Se establecerá una diferencia de potencial, cuya intensidad dependerá de la
concentración de H+ en la solución, la cual producirá una corriente eléctrica
débil, la cual es amplificada y registrada por el pHchimetro.

Preparación de medios de cultivo

Extracto de carne: Es un concentrado de la maceración de carne; siendo fuente de

carbono y nitrógeno orgánico. También aporta sales, vitaminas hidrosolubles y otros
factores de crecimiento.
Extracto de levadura: Se la obtiene por autolisis a 37 °C seguida de filtración o
estallando levaduras en el autoclave. Es fuente de carbono, nitrógeno orgánico,
vitaminas del grupo B y otros factores de crecimiento.
Peptona: Es el producto de la degradación acida o enzimática de proteínas y se
encuentra formada por polipéptidos que presentan un peso molecular dado por el
cual no son coagulables por calor. Es fuente principal de nitrógeno orgánico,
aminoácidos, azufre y fosforo. Se emplea para enriquecer medios de cultivos que
posteriormente serán autoclavados.
Glucosa: Este y otros hidratos de carbono mejoran las cualidades nutritivas de los
medios y constituyen fuentes de carbono más fácilmente utilizables.
La glucosa enriquece un medio y permite un rápido crecimiento de microorganismos
exigentes.

Caldo común y caldo agarizado

Son medios de cultivos que difieren de los medios enriquecidos debido a la falta de
hidratos de carbono o alguna otra sustancia que actúa como fuente de carbono
fácilmente utilizable.

Preparación:

De caldo común:

1. Se disuelven los componentes en agua destilada calentando hasta disolución

total.
2. Se ajusta el pH hasta un valor establecido.
3. Si se observan floculos o precipitados (generalmente debido a la presencia de
fosfatos amorfos), se filtra en caliente para obtener un líquido límpido.
4. Se fracciona el medio en recipientes adecuados y se esteriliza en autoclave.

De caldo agarizado:

1. Se agrega agar en polvo (2 %), junto con los demás compontes del medio, al
agua destilada.
2. Se calienta hasta que se fundan los granos de agar. Se omite la filtración.
3. Se ajusta el pH.
4. Se fracciona el medio, aun en caliente, en recipientes adecuados y se
esteriliza en autoclave.

243
Caldo sangre y agar sangre

Los medios de cultivo que contienen sangre son importantes para:

▪ Ciertas especies microbianas las cuales necesitan la presencia de sangre

para desarrollarse
▪ Ciertas especies microbianas; bacilo tuberculoso, Neumococo y
Streptococcus, en las cuales la sangre estimula su crecimiento.
▪ Estudiar el poder hemolítico de las bacterias.

Preparación:

De caldo sangre:

1. La sangre se extrae asépticamente y se recoge con un anticoagulante

2. Se agrega 1 ml de sangre por cada 10 ml de caldo común estéril.

De agar sangre:

1. Se funde, a baño maría, 10 ml de caldo agarizado estéril.

2. Se deja enfriar hasta aproximadamente 42 °C y se agrega, asépticamente, 1
ml de sangre estéril.
3. Se mezcla y se vuelca sobre cajas de Petri estériles.
4. Se deja enfriar y se hace un control de esterilidad.

A veces es necesario destruir por calentamiento sustancias antibacterianas que

contiene la sangre. Para ello, el medio agar sangre fundido se lleva a un baño de 80
°C durante 10 minutos antes de volcarlo en la caja de Petri estéril. Debido a este
proceso, el medio pasa a llamarse agar chocolate debido al color que adopta la
sangre por la cocción.
En bacteriología se incluyen glúcidos en los medios de cultivo para estudiar la
capacidad de las bacterias para fermentarlos. Los más usados son:

▪ Hexosas → Glucosa
▪ Disacáridos → Lactosa y sacarosa
▪ Polialcoholes → Glicerol

Todas las soluciones de estas sustancias deben ser esterilizadas por filtración y ser
adicionadas asépticamente, a los medios que fueron esterilizados por autoclave.

El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH acido favorecen el

crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.
En los medios de cultivos sintéticos para algas, una vez esterilizados, se mezcla de
forma aséptica una solución estéril que contiene una mezcla de metales, llamada
solución A-5.

Siembra y aislamiento

Siembra: Consiste en colocar un microorganismo en un medio de cultivo, elegido de

acuerdo a sus exigencias vitales, que permita su desarrollo y multiplicación al ser
incubado a una temperatura adecuada.
Las técnicas de siembra deben efectuarse bajo normas de asepsia rigurosa para
impedir que desarrollen, a la par de las bacterias en estudio, otros microorganismos
presentes en el ambiente. Para ello:
244
 ✓ Todas las operaciones deben realizarse al abrigo de las corrientes de aire;
utilizando cabinas con sistema de flujo laminar.
✓ Esterilizar el ambiente de trabajo de manera previa; mediante radiaciones UV
utilizando esterilamp.
✓ Efectuar las siembras utilizando siembre medios de cultivos e instrumental
estériles.
✓ Los movimientos del operador deben ser pausados y sin brusquedad.
✓ De ser posible, trabajar en habitaciones pequeñas con paredes de vidrio.

Estas medidas contribuyen también a evitar que el operador se contamine con

microorganismos posiblemente patógenos.

En la siembra micológica se debe tratar de mantener la mayor asepsia posible

puesto que al tomar el material, generalmente se pone en suspensión una gran
cantidad de esporos, lo que incrementa los riesgos de contaminación.
La finalidad con la que se realiza una siembra puede para:

• Trasplantar o repicar: Consiste en la siembra, en medios de cultivos nuevos,

de microorganismos que se desarrollaron en otro medio de cultivo.
A través de este procedimiento se logra renovar el medio, en el cual los
nutrientes se han agotado durante el crecimiento microbiano, permitiendo la
perpetuación de la especie de estudio.
Para realizar el trasplante, el material a sembrar debe contener sola una
especie microbiana.
• Aislar: Consiste en separar una clase de microorganismo, a partir de una
población mixta, y mantenerlo asilado como un cultivo puro.
Para llevar a cabo este procedimiento se utilizan medios sólidos, en donde
una célula individual se separan de una población celular y luego la colonia
que surgen de la multiplicación de esa célula se trasplanta para mantenerla
separada.

Técnicas de siembra

Las técnicas de siembra, así como los instrumentos, diferirán dependiendo del tipo de
microorganismo en estudio y del medio de cultivo.

 Para la siembra de bacterias se puede utilizar pipetas, ansas, agujas o

espátulas.
 Para la siembra de hongos levaduriformes de desarrollo cremoso se emplean
ansas.
 Para la siembra de hongos filamentosos se utilizan ganchos; con el cual se
extrae un trozo del micelio.

Trasplante

Medio inicial Medio final Instrumental

Liquido Liquido Con ansas, pipeta graduada o pipeta

245
 Pasteur
Solido en tubos Por estría (ansa o aguja) o por picadura
(aguja)
Solido en cajas de Por estría o por diseminación (espátula)
Petri
Solidos Liquido Con ansas o agujas
Solido en tubos Por estría o por picadura
Solido en cajas de Por estría
Petri

Siembra de medio líquido a liquido

1. Con la mano derecha se toma el ansa y se esteriliza a la llama hasta el rojo

vivo.
2. El tubo que contiene la muestra se toma con la mano izquierda y se lo
destapa utilizando la mano derecha.
La tapa o corcho no debe ser depositada sobre la mesada o entrar en
contacto con la piel u otros objetos, con el fin de evitar posibles
contaminaciones.
3. Se flamea a la llama la boca del tubo y se introduce el ansa; una vez que
esta se haya enfriando lo suficiente, para cargarla con la muestra. Se debe
tratar de no tocar las paredes del tubo.
Al finalizar, se coloca nuevamente el tapón.
4. Se destapa el tubo con el medio de cultivo fresco. Se flamea la baca del tubo
y se descarga el ansa.
5. Se retira el ansa, se flamea nuevamente la boca del tubo, se lo tapa y se
esteriliza el ansa.
6. Se mezcla el material sembrado girando el tubo entre las palmas.

La siembra con pipetas graduadas y pipetas Pasteur estériles se realiza de manera

similar.

Siembra de medio líquido a solido

Siembra en tubo por estrías:

1. Se preparan medios sólidos en bisel, los cuales se hayan contenidos en

tubos.
2. Una vez extraído el material, se introduce el ansa hasta el fondo del tubo,
diluyendo en el agua de condensación.
3. Con movimientos en zig-zag, desde el fondo del tubo, se siembra toda la
superficie del medio agarizado evitando romperlo.

Siembra en tubos por picadura:

1. Se extrae el material a sembrar utilizando una aguja de platino en lugar de

ansa.
2. Se introduce la aguja cargada en el seno del medio agarizado solidificado en
posición vertical.
3. Se retira la aguja rápidamente, se flamea la boca del tubo y se lo tapa.
4. Luego de incubar los tubos, se observa el desarrollo a lo largo de la picadura.

246
Esta técnica sirve para detectar si un microorganismo es móvil o no; cuando se
utilizan medios semi-solidos (0,3-0,5 % de agar).

Siembra en cajas de Petri por estría:

1. Se extrae el material a sembrar utilizando una ansa y se la deposita en el

borde más alejado del operador de la placa de agar.
2. Realizando movimientos en zig-zag hacia el operador, se extiende el cultivo
de borde a borde. Esto permite que los microorganismos se distribuyan a lo
largo de las estrías.
Cuando se alcanza el centro de la placa, se la gira 180° para poder continuar
con el estriado y sortear el obstáculo que resulta ser el borde de la caja de
Petri.

Esta técnica permite la separación de los microorganismos, que componen la

muestra, sobre la superficie del medio solido en donde cada célula quedara
inmovilizada y originara una colonia al multiplicarse.
Deben realizarse movimientos suaves, progresivos y repetitivos con el ansa; con el fin
de obtener estrías muy juntas sin ocasionar la ruptura de la superficie del medio de
cultivo.
El medio agarizado debe estar lo suficientemente seco para permitir una buena
distribución de la muestra.

Siembra en cajas de Petri por diseminación:

1. Sobre la placa de agar se coloca una gota del material a sembrar.

2. Con una espátula de Drigalsky estéril, se extiende el material cubriendo toda
la superficie
3. Se tapa la caja y se esteriliza la espátula introduciéndola en alcohol y
flameándola rápidamente.

Las cajas de Petri se incuban en posición invertida

Aislamiento

Como generalmente en un mismo hábitat coexisten simultáneamente muchas

especies microbianas, para obtener cultivos puros se recurren a técnicas de
aislamiento.
Estas técnicas pueden ser agrupadas en:

• Aislamiento en medios solidos

o Método cualitativo:
▪ Agotamiento en superficie por diseminación
▪ Agotamiento por estriado en placas o en tubos.
o Método cuantitativo:
▪ Diluciones sucesivas
• Métodos especiales
o Empleo de propiedades biológicas
o Empleo de organismos receptivos
o Cultivos monocelulares

Métodos cualitativos

247
 Se utilizan cuando se quiere aislar células existentes en una mezcla de diferentes
microorganismos sin determinar el número de células presentes en la muestra.

I. Agotamiento en superficie por diseminación

1. Se prepara varias cajas de Petri con el medio de cultivo agarizado

2. Sobre la primera placa de agar se deposita una gota de la muestra y se la
disemina por toda la superficie utilizando una espátula estéril.
3. Sin cargar ni esterilizar la espátula, se disemina sobre la superficie de las
subsiguientes placas hasta agotarla.
4. Las placas se enumeran y se incuban invertidamente.

El número de colonias que desarrollaran en los medios ira disminuyendo desde la

primera hasta la última placa.
De una colonia bien aislada es posible obtener un cultivo puro trasplantando, con
aguja o ansa, una porción de la misma a un medio apropiado.

II. Agotamiento por estriado en placas o tubos

1. Se prepara varias cajas de Petri con el medio de cultivo agarizado o tubos que
contenga un medio agarizado en bisel
2. Utilizando un ansa cargada con la muestra, se siembra por estriaciones la
superficie de los medios de forma consecutiva sin esterilizar el ansa.

Si bien los medios sólidos en bisel presentan una menor superficie para obtener
colonias separadas, comparadas con la de las placas de agar, cuando hay pocos
gérmenes los tubos presentan la ventaja ser manipulados más fácilmente reduciendo
el riesgo de contaminación.
Cuando los tubos presentan agua de condensación, el ansa cargada con la muestra
se deposita en el fondo y se agita en la misma. Al terminar la siembra de todos los
tubos, se los inclina de tal forma que el agua de condensación se extienda por toda la
superficie del medio y recién se esteriliza el ansa.

Método cuantitativo

Se emplean para determinar el número de microorganismos presentes en una

muestra.

I. Diluciones sucesivas

Es un método que permite realizar un recuento y aislar microorganismos.

1. Se realizan diluciones seriadas de la muestra:

a. Con una pipeta estéril se toman asépticamente 0,5 ml de la muestra.
b. Se la coloca en un tubo al cual se agrega 4,5 ml de solución fisiológica
(SF) estéril para obtener una dilución 1/10. Se homogeniza.
c. De dicha dilución se vuelve a tomar 0,5 ml y se repite los pasos
anteriores para generar diluciones 1/100, 1/1000, etc.
d. Se rotula cada tubo con la dilución correspondiente
2. Se siembra un volumen determinado de cada una de las diluciones por:

248
 a. Diseminación en superficie de placas de agar; utilizando la espátula de
Drigalsky.
b. Inclusión en un medio agarizado mantenido a 45°C

Para realizar el recuento se eligen las cajas que contengan entre 30 y 300 colonias y
se puede invertir las cajas para facilitar la operación.
El número de colonias contadas corresponde al número de UFC (unidades
formadoras de colonias) en dicho volumen sembrado.

Volumen de dilución sembrado ------ X colonias contadas = UFC

1 ml ----- X/ Volumen sembrado = Y UFC/ml

Dilución sembrada ----- Y UFC/ml

Muestra, cuya dilución es ‘’1’’----- Y/Dilución sembrada = Z UFC/ml de la muestra

Los resultados del recuento deben expresarse usando notación científica.

Métodos especiales

I. Empleo de propiedades biológicas

Persigue la obtención de cultivos puros basados en las propiedades biológicas de los

microorganismos; como ser la termoresistencia de los esporos frente a temperaturas
que resultan letales para las formas vegetativas.
Para aislar un microorganismo que se haya en forma de esporo:

1. Se calienta la muestra a temperaturas superiores a 80°C por 10 minutos.

2. Se trasplanta a un medio apropiado en donde desarrollara únicamente la
bacteria que se hallaba en forma de esporos.

Los esporos de los hongos, a diferencia de lo de las bacterias, son resistentes a la

acción de ácidos orgánicos; como el ácido cítrico, lo que permite aislar especies de
hongos contaminadas con especies bacterianas. Para ello se suspende el material en
ácido cítrico al 20% durante 3 a 6 horas y luego se siembra en medios especiales
para hongos.

II. Empleo de organismos receptivos

Emplea las propiedades patógenas que poseen muchos microorganismos sobre

animales y vegetales.
El material se inyecta en un organismo receptivo y se espera que se produzcan las
lesiones características. Al tomar material de los órganos enfermos, es posible aislar
la especie patógena al estado puro.
En fundamental utilizar el organismo receptivo particular para cada uno de los
distintos microorganismos patógenos.
Se puede emplear para obtener cultivos puros de parásitos obligados como virus y
rickettsias.

III. Cultivos monocelulares

Consiste en el aislamiento de una sola célula y se emplea en problemas especiales

de investigación.
Para ello se efectúan diluciones de la muestra sobre portaobjetos estériles y,
mediante el uso del microscopio, se intenta localizar gotas monociticas; es decir

249
aquellas que contengan una sola célula.
La gota monocitica es inmediatamente transferida a un medio de cultivo apropiado.

Siembra de anaerobios

Precauciones generales:

• Preparar soluciones stock libres de O2

• Prevenir la excesiva exposición de los medios y de los microorganismos al O2

Precauciones relacionadas con la preparación de los medios:

• Preparar los medios en recipientes que presenten una pequeña relación

superficie/volumen. Utilizar tubos a tapa rosca.
• No conservar los medios y menos a aun a bajas temperaturas; ya que
aumenta la solubilidad del O2.
• Si es posible, trabajar con medios semi-sólidos para reducir las corrientes de
convección.
• Incorporar agentes reductores; como cisteina o tioglicolato, con el fin de
reducir el rH2.
El ajuste del rH2 se puede realizar inmediatamente antes de la siembra
eliminando el aire disuelto en los medios por calentamiento durante 20
minutos, a baño maría, y enfriamiento rápido para evitar la redisolución del O2.
Para evitar que el O2 vuelva a penetrar, se puede cubrir la superficie del medio
con gotas de vaselina o parafina estéril, las cuales formaran una capa
impermeable (método de Legros).

Si bien estas precauciones no impiden por completo la entrada de O2, la tensión del
mismo es lo suficientemente baja como que se inicie el desarrollo bacteriano. Una
vez que este ha comenzado, las condiciones para que este se siga produciendo
mejoraran debido a la producción de CO2 del mismo metabolismo celular.

Precauciones relacionadas con la toma de muestra:

• Tomar las muestras en recipientes cerrados, al abrigo del aire o en corriente

de gases inertes para evitar su contaminación con el O2 atmosférico.
• Se puede tomar las muestras e inocularlas en medio pre-reducidos o en
recipientes completamente cerrados (ampollas o jeringas) a los que se les
puede generar una atmosfera reducida

Precauciones relacionadas con la siembra:

Se utiliza el método de siembra en agar en profundidad, el cual emplea tubos

largos y de poco diámetro para que el medio agarizado forme columnas de 15 a 18
cm.

1. Se produce la inclusión del material en un medio agarizado fundido y enfriado

a 50°C.
2. Se mezcla por rotación suave y se lo deja solidificar en posición vertical
cubriendo la superficie con gotas de vaselina o parafina estéril.

250
Técnicas de incubación

Aerobios estrictos

Como la [O2] en los medios líquidos disminuye progresivamente desde la superficie

hasta el fondo del tubo, el desarrollo de microorganismo aerobios estrictos cubrirá la
superficie del medio dejando una gran parte del mismo sin aprovechar, consumiendo
rápidamente los nutrientes de dicha región y generando un gradiente de
concentración que los mantiene en una permanente limitación nutricional.
Para evitar este efecto:

• Los medio de cultivo se preparan en Erlenmeyeres, los cuales aumentan la

superficie de contacto con el aire.
• Los medios se incuban en baños con agitación.
• La incubación de placas de agar sembradas se realiza directamente en
estufas
• Si es posible, se hace burbujear aire u O2 estéril directamente dentro de los
medios de cultivo, a través del uso de filtro especiales.

Microaerofilos

Dentro de un recipiente cerrado, el cual contiene las placas y tubos a incubar, se

enciende una vela que ardera hasta que el nivel de O2 descienda por debajo del
necesario para mantener una combustión continua. Al extinguirse la llama, la tensión
de O2 en dicha atmosfera será de 7% aproximadamente.
Este método es inapropiado para la incubación de microorganismos anaerobios
estrictos, pero da óptimos resultados para el desarrollo de microarofilos.

Anaerobios estrictos

Los medios deben incubarse en ambientes anaerobios, los cuales puede generarse
por:

• Combustión del O2 del aire por H2: Dentro de una jarra de anaerobiosis; el cual
es un recipiente con cierre hermético, se coloca sobres; que contiene pastillas
de borohidrato de sodio, bicarbonato de sodio y ácido cítrico, que liberan H2 y
CO2 al añadirles agua. El H2 se combinara con el O2 del recipiente, por medio
de la acción de un catalizador de paladio, para formar agua.
Debido a esto deben envolverse las placas y tubos con papel absorbente.
El CO2 liberado sirve para compensar la atmosfera y favorece la
anaerobiosis.
También se puede utilizar granallas de Zn impurificado con CuSO4 y H2SO4.
• Sustitución del aire por gases inertes: Las placas y tubos a incubar se colocan
dentro de un recipiente de cierre hermético que consta de una boca de
entrada de H2, N2 o CO2 y una de salida de aire.
Cuando el aire fue expulsado por los gases inertes, se cierran ambas bocas
generando así una atmosfera libre de O2 en el interior del recipiente.
Para controlar las condiciones de anaerobiosis se coloca dentro del recipiente
un tubo con caldo y azul de metileno; un indicador redox que se decolorara
cuando se alcance la anaerobiosis.
• Cámaras de anaerobiosis: Constan de una pre-cámara que permite el
intercambio de material con la cámara propiamente dicha, mediante un

251
 sistema de compuertas. La pre-cámara permite la incorporación o extracción
de material de la cámara sin perder las condiciones anaeróbicas de esta.

El crecimiento bacteriano en medio líquido puede manifestarse de diferentes formas:

 Enturbiamiento: Opacidad más o menos densa y homogénea en todo el

líquido. Es la forma de desarrollo típica de los aerobios facultativos.
 Formación de velo: Pequeña masa de células que flotan en la parte superior
del cultivo. Es la forma de desarrollo típica de los aerobios estrictos.
El velo desaparece cuando se incuba con agitación o burbujeo de aire.
 Sedimento: Deposito de células que aparece en la parte inferior del cultivo. Al
agitar suavemente, estas se ponen en suspensión. Es la forma de desarrollo
típica de los microaerofilos dado que en el fondo de los tubos la [O2] disuelto
es menor.

El crecimiento en medio solio se manifiesta por la aparición de colonias.

Técnicas de conservación

Un método de conservación debe poder conservar todos los caracteres de la especie

como tal. No todas las especies responden de igual manera a un mismo proceso, por
lo tanto lo que es aplicable para un cultivo puede no serlo para otro.

• Transferencia periódica a un medio fresco: Permite conservar y mantener

viables por semanas o meses diferentes microorganismos.
Se debe tener en cuenta 3 condiciones:
o El medio de cultivo debe ser el adecuado para cada especie
microbiana.
o La temperatura de incubación y de almacenamiento.
o La duración de los intervalos entre una y otra transferencia; el cual
varia con cada microorganismo.

Generalmente, se mantiene los medios de cultivos frescos a 4°C.

• Congelación: Incluso en microorganismos que pueden soportar la

congelación, se produce la muerte de algunas células cuando se congela el
cultivo; debido probablemente a la formación de cristales de hielo en el
protoplasma lo que conlleva a la destrucción de la integridad celular. Las
células grandes y desprovistas de pared celular son las más sensibles a la
congelación.
Las células que logren sobrevivir a la congelación inicial podrán mantenerse
viables durante largos periodos de tiempo. Durante este lapso, las funciones
celulares se hayan completamente interrumpidas y solo cuando se produzca
el deshielo del cultivo, la célula retomara su metabolismo.
Cuanto menor sea la temperatura de congelación, mejor será la preservación
del cultivo.
Existen bacterias muy fácil de conservar por este método; como [Link], y otras
no tanto; como los Gonococos los cuales son sumamente sensibles al frio y
sus células deben ser congeladas utilizando un agente protector como glicerol
o dimetil sulfoxido.
Permite conservar especímenes que no pueden ser mantenidos por
liofilización.

252
 • Liofilización: Es el procedimiento más eficaz que permite mantener viables
muchas clases de bacterias durante más de 20 años.
Consiste en desecar rápidamente las células, mantenidas en estado de
congelación, por acción de un vacío elevado.
Se coloca la suspensión de células en pequeños viales y se los introduce en
una mezcla de hielo seco y alcohol. Se conecta el recipiente que contiene los
viales a una bomba de alto vacío y, después de la completa desecación, se
cierran los viales a la llama conservando el vacío.
Esta técnica presenta varias ventajas:
o El largo plazo de supervivencia.
o Menor probabilidad de alteración de algunas de los caracteres del
cultivo
o Pequeño volumen de los viales; permite almacenar una gran cantidad
de cultivos liofilizados.

Conservación de hongos

Por transplantes sucesivos: Generalmente se efectúa cada 4 a 6 meses,

dependiendo de la vitalidad de la cepa. Es conveniente mantener un tubo con la cepa
a 4°C y otro a temperatura ambiente.

Liofilización: Da muy buenos resultados. Si bien se realizan los mismos pasos que en
una liofilización bacteriana, se utiliza esporos suspendidos en suero o leche estéril,
para formar una película proteica que protegerá la pared celular del microorganismos.

Conservación en tierra estéril: Permite conservar hongos por muchos años. Se

humecta la tierra con agua y se la coloca en tubos de ensayo. Los tubos se taponan y
se esterilizan durante 3 horas a 120 °C varias veces. Luego se coloca dentro de ellos
una suspensión abundante del hongo y se lo almacena a temperatura ambiente.

Conservación en parafina liquida: El desarrollo se cubre con una capa de 1 o 2 cm de

vaselina o parafina liquida estéril. Es recomendable efectuar un trasplante cada año.

Conservación en agua destilada estéril o método de Castellani: Permite conservar

cepas de hongos durante 5 años. Consiste en suspender, en agua destilada estéril,
una buena cantidad del desarrollo del hongo. Los tubos que contienen la suspensión
se cierran herméticamente con tapones de caucho estériles para evitar
evaporaciones.
El agua debe tener pH neutro y se debe evitar, en lo posible, arrastrar medio de
cultivo al extraer el hongo.

Conservación en silica gel anhidra: Permite conservar cepas de hongos hasta 4 años.
En tubos de hemolisis con tapa de goma hermética se coloca silica gel anhidra hasta
la mitad y se esteriliza en el horno a 170 °C por 1 hora. Los tubos con el material se
conservar a temperatura ambiente.

Coloraciones

La percepción de una célula microbiana al microscopio dependerá del contraste que

ofrezca con respecto al medio acuoso que la rodea como resultado de una menor
transmisión de la luz. Esta disminución en la transmisión es causada por dos factores:

• La luz absorbida por la célula

253
 • La diferencia entre el índice de refracción de la célula y del medio que la
rodea.

A excepción de ciertas estructuras coloreadas, como los cloroplastos, las células

absorben muy poca luz en la región visible del espectro, por lo tanto el contraste que
genera una célula viva es atribuido casi completamente a la luz refractada.
El contraste puede ser aumentado mediante procedimientos de coloración, los
cuales producen un aumento en la absorción de la luz incidente.

Para que una sustancia actue como colorante debe:

• Tener color apropiado

• Poder fijarse por sí mismo o ser fijado al objeto a colorear
• Ser persisten. Una vez fijada debe ser estable a la luz, resistente al agua y, en
cierta extensión, a los ácidos y álcalis diluidos.

Los primero colorantes en usarse fueron de origen animal o vegetal. Gradualmente

con el tiempo, fueron reemplazados por colorantes artificiales o de alquitrán, los
cuales son derivados de compuestos cíclico; como benceno o benzol.

Colorantes naturales

➢ Carmín (extraído de la ➢ Orceina

cochinilla) ➢ Tornasol
➢ Hematoxilina (amarilla, extraída
del Campeche)

Colorantes artificiales

i. Básicos:

➢ Azul de metileno ➢ Fucsina básica

➢ Cristal violeta ➢ Violeta de metilo
➢ Violeta de genciana

ii. Ácidos:

➢ Ácido pícrico ➢ Fucsina acida ➢ Eosina

iii. Neutros:

➢ Picrato de azul de metileno ➢ Eosinato de azul de metileno

Los colorante son sustancias orgánicas que presentan una estructura fundamental
formada por uno o más anillos bencénicos, los cuales se encuentran ligados a grupos
cromoforos y auxocromos.
Si bien el benceno es una sustancia incolora, los cromoforos ligados a el
introducirán nuevas posibilidades de resonancia provocando desplazamientos
electrónicos y una mayor separación de cargas. Esto estabiliza el estado excitado del
compuesto, disminuyendo la energía mínima del mismo, permitiéndole absorber a
longitudes de onda mayores.

254
Este compuesto se denomina cromógeno.
Presenta color; ya que absorbe en la región visible del espectro, pero no es capaz de
colorear dado que carece de la capacidad para unirse a las fibras o tejidos.

Cromoforo Grupo químico Colorante

Básico Azo (-N=N-) Anaranjado de metilo
Acina (-N-N=) Rojo neutro y safranina
Indaminico (-N=) Azul de metileno
Acido Nitro (-NO2) Ácido pícrico
Núcleo quinonico Fucsina y Violeta de genciana
Para que una sustancia sea colorante necesita de un grupo auxocromo. Su
presencia:

 Intensifica notablemente el color debido a que permite una absorción a

longitudes de onda mayores al introducir nuevas formas de resonancia que
suponen una mayor separación de cargar.
 Le confiere a la molécula la propiedad de disociación electrolítica,
permitiéndole al colorante formar sales y unirse a las sustancias a colorear.

Si la ionización del auxocromo genera un anión en la molécula colorante, tanto este

como el colorante serán ácidos. Ej.: -OH
Si la ionización del auxocromo genera un catión en la molécula colorante, tanto este
como el colorante serán básicos. Ej.: -NH3.
Cuanto mayor sea el numero de una de estos grupos en un compuesto, más fuerte
será el ácido o base que formen. Como el grupo amino es más fuerte como base que
el grupo oxidrilo como acido, si ambos se encuentran en igual número en el colorante,
predominara el carácter básico del grupo amino.

Teorías de la coloración

Teoría física: Un proceso o reacción física es aquella que involucra dos sustancias
pero no existe formación de un nuevo compuesto. Al colorearse una bacteria, no hay
indicios de que el colorante sufra algún cambio químico dado que, por lo general, es
posible recuperar todo o casi todo el colorante de la célula por medio de una
inmersión prolongada en algún disolvente.
Todas las reacciones de tinción pueden explicarse como fenómenos de capilaridad,
osmosis, absorción o adsorción.
Teoría química: Explica la coloración a través del fenómeno de atracción de cargas
reafirmando la propiedad de disociación electrolítica de los colorantes.
Los colorantes catiónicos o básicos se unen a los componentes ácidos de la célula,
como el núcleo o la cromatina, mientras que los colorantes anionicos o ácidos
reaccionan con las porciones alcalinas de la misma; como el citoplasma.
En condiciones normales, las bacterias poseen una carga neta (-) en su superficie, lo
que atrae a las partículas con carga (+). Si se las coloca en una solución cuyo pH sea
inferior al punto isoeléctrico (valor de pH al cual la mayor parte de los compuestos se
encuentran no ionizados) se carga positivamente y atrae colorantes de carga (-)

Es muy probable que la coloración no sea un proceso totalmente físico o químico,

sino de naturaleza mixta.

Metodología de la coloración
255
 I. Preparación del extendido

Tiene como finalidad obtener una película delgada y homogénea de la muestra del
cultivo o de cualquier otro material biológico que permita luego una clara observación.
Si el extendido se hará a partir de un cultivo en medio líquido:

1. Se toma el material con el ansa; previamente flameada y enfriada, o con una

pipeta estéril y se la deposita sobre el portaobjeto extendiéndolo en forma
pareja

Si el extendido se hará a partir de un cultivo en medio solido:

1. Se coloca sobre el portaobjeto una gota de agua o SF estéril.

2. Con un ansa o aguja flameada; previamente flameada y enfriada, se saca una
pequeña porción del cultivo y se la diluyen en el portaobjeto.
3. Con el ansa se hace un extendido lo suficientemente grande como para que
las células no queden aglomeradas.

La cantidad de líquido debe ser pequeña para que se evapore al terminar el

extendido. La desecación se produce espontáneamente o por un desplazamiento
rápido del portaobjeto sobre la llama del mechero.
Es indispensable el uso de portaobjetos perfectamente desengrasados, limpios y
secos.

II. Fijación del preparado

Tiene como objeto matar las bacterias para que la membrana plasmática se vuelva
permeable a los colorantes. Permite, además, fijar la estructura citológica
adhiriéndola al portaobjeto. Dicha fijación consiste en una precipitación de las
proteínas y sus complejos que forman la materia viva y adhieren las bacterias al
vidrio.
La fijación puede realizarse por:

• Calor: Consiste en hacer pasar por la llama del mechero la superficie del
portaobjeto opuesta a la que contiene el extendido; evitando el
sobrecalentamiento.
• Inmersión: Consiste en sumergir el portaobjeto con el extendido en alcohol
metílico, formol u otro fijador. La preparación debe lavarse antes de aplicar el
colorante.
• Alcohol-éter: Consiste en cubrir el extendido con una mezcla de partes iguales
de alcohol 96° y éter. Luego de 2-3 minutos, se elimina el exceso de líquido y
se deja secar.

III. Coloración propiamente dicha

Esta puede clasificarse según:

A. El número de colorantes que se empleen:

a. Simple: Actúa un solo colorante y sirve para apreciar forma,
disposición y tamaño relativo. Las coloración simples pueden ser:
i. Monocromaticas: Confiere a todos los elementos el mismo color

256
 ii. Metacromatica: Confiere distintos colores a ciertos elementos.
b. Doble o compuesta: Actúan dos soluciones colorantes con el objetivo
de obtener un neto efecto de contraste.
B. La finalidad:
a. Específica o selectiva: Sirve para poner de manifiesto determinadas
estructuras celulares.
b. Diferencial: Contribuye a identificar taxonómicamente a las bacterias.
C. La técnica aplicada:
a. Directa: Se pone directamente en contacto el colorante con el objeto a
colorear. No requiere un mordiente.
b. Indirecta: Se necesita un intermediario o mordiente el cual favorece la
unión del colorante y el objeto a colorear. Ej.: Tanino, iodo, fenol,
alumbre.
c. Progresiva: Se impregna el extendido lentamente con una solución
diluida del colorante y se repite varias veces la operación eliminando el
colorante viejo y adicionando colorante nuevo.
d. Regresiva: Consiste en hacer actuar primero una solución concentrada
de colorante durante un corto tiempo y luego se quita el exceso con un
agente decolorante llamado diferenciador. Ej.: agua, alcohol, alcohol-
acetona, ácidos diluidos.

Coloración simple - Azul alcalino de Loeffler

Es un colorante básico formado por azul de metileno el cual impregna uniformemente

a todas las bacterias presentes en un extendido.
Su conservación, en medio alcalino, transforma parte del colorante en derivados con
propiedades metacromaticas.

1. El extendido, secado y fijado, se lava con gotas de agua destilada para

eliminar sales minerales y otras sustancias solubles.
2. Se vierte el colorante recubriendo todo el extendido.
3. Después de 2 a 5 minutos de acción, se elimina el exceso de colorante y el
extendido se lava con agua; la cual actúa como un diferenciador, hasta que
este no ceda más colorante.
Las bacterias se colorean de azul oscuro. Si se tratase de un producto patológico,
las proteínas del extendido y las células se colorearan de un azul más pálido.
Otros colorantes que se utilizan en la coloración simple son: Fucsina básica, violeta
de genciana, rojo neutro, entro otros.

Método de Gram

Es un método de tinción doble de tipo diferencial el cual:

• Utiliza sucesivamente dos colorantes con el fin de obtener un neto efecto de

contraste.
• Permite visualizar la forma, tamaño y otros detalles estructurales de los
microorganismos.
• Permite agrupar a los microorganismos en dos grupos de gran importancia
taxonómica: Gram (+) y Gram (-)

257
A menos que se quiera demostrar alguna característica morfológica especifica que
dependa de la edad del cultivo; tanto para este método como para el resto de los
colorantes, se aconseja utilizar cultivos jóvenes. Las células envejecidas pierden
afinidad por la mayoría de los colorantes, probablemente debido a una autolisis de la
pared celular.
Específicamente en la coloración de Gram:
➢ Bacterias anaerobias Gram (+) después de 18-72 horas se vuelven fácilmente
Gram (-)
➢ Cultivos viejos de Bacillus subtilis pierden fácilmente su gram-positividad.
➢ Algunas bacterias normalmente Gram (-) son Gram (+) en las primeras horas
del cultivo.

Técnica

1. El extendido, secado y fijado, se recubre con la solución Gram I, se deja

actuar por 2 minutos y luego se elimina el exceso del colorante con agua.
La solución Gram I contiene el colorante primario; el cual puede ser violeta de
genciana o cristal violeta. Generalmente se utiliza Cristal violeta oxalatado, cuyo
pH alcalino contribuye a dar preparaciones más netas y es más fácil realizar la
decoloración subsiguiente.

2. Se lava el extendido con la solución Gram II y se lo cubre al preparado

dejándola actuar por 1 minuto. Pasado el tiempo se escurre el portaobjeto.
La solución Gram II es el mordiente iodado; el cual consiste en una solución de
Iodo-Ioduro de potasio. Después de este paso, todas las células del preparado
se teñirán de violeta.

3. Se inclina el portaobjeto y se deja caer, gota a gota, el diferenciador hasta que

se derrame incoloro por el extremo inferior.
La decoloración es el paso crítico de la coloración de Gram. Una decoloración
demasiado fuerte o insuficiente producirá serios errores. Como diferenciador se
puede utilizar alcoholes etílicos superiores a 85°, acetona (su acción decolorante es
más rápida y potente que la del alcohol) o una mezcla de ambas sustancias.

4. Detener la diferenciación lavando con abundante agua

En este paso, todas las bacterias Gram (-) se decoloraran completamente mientras
que las Gram (+) no se ven afectadas permaneciendo de color violeta.

5. Se cubre el preparado con la solución Gram III, dejándola actuar por 2

minutos.
La solución Gram III contiene el contracolorante, siendo Fucsina fenicada de Ziehl
el más usado. Dicha sustancia, además de colorear el fondo del preparado, tiene el
poder de reemplazar al primer colorante dentro de condiciones y límites estrictos. La
tendencia al reemplazo del primer colorante es proporcional a la concentración y a la
duración de la aplicación del contracolorante.
Resulta importante definir ambos factores para no aumentar, por un artificio de la
técnica, el número de bacterias Gram (-). Si no se emplea el contracolorante, las
bacterias Gram (-) quedaran decoloradas.

6. Se lava con agua. Se deja secar y se observa al microscopio por inmersión.

258
Las bacterias que han conservado la primera coloración, tomando y reteniendo el
color violeta son Gram (+), mientras que aquellas que han sido decoloradas por el
diferenciador y re coloreadas por el contracolorante, adquiriendo un color rojo son
Gram (-).

Fundamento

La gram-positividad o gran-negatividad dependerá de la ultraestructura de la pared

celular de los microorganismos y no de la composición química de la misma.
Ej.: Las levaduras, las cuales presentan una gruesa pared celular, pero de
composición química diferentes a las bacterias, son Gram (+).
En bacterias Gram (+), el peptidoglucano constituye el 90% de la pared celular,
mientras que en las Gram (-) solo representa el 5 a 20%. La pared celular de las
Gram (-) contiene además una capa externa de lipopolisacaridos, fosfolípidos y
proteínas.
Cuando se adiciona el mordiente a un extendido tratado con solución Gram I, se
forma el complejo insoluble Cristal violeta-iodo en el interior de todas las células.
Dichos complejo puede ser solubilizado y extraído, por el diferenciador, de las
Gram
(-) pero no de las Gram (+), debido a que estas últimas presentan una gruesa pared
celular conformada por varias capa de peptidoglucano.
a. Por acción del diferenciador, la pared celular de las Gram (+) comenzara a
deshidratarse, haciendo que los poros de la misma se cierren, impidiendo que
complejo cristal violeta-iodo abandone la célula quedando este teñida de
violeta.
b. En las bacterias Gram (-), el diferenciador disuelve rápidamente la capa
externa de lipopolisacaridos y, al no poder ser detenido por la delgada capa
de peptidoglucano, arrastra del interior de la célula el complejo Crista violeta-
iodo; decolorándola.
En el paso posterior, la célula se teñirá de rojo por acción del contracolorante.

Coloración de bacilos acido-alcohol resistentes (AAR)

El género Mycobacterium se caracteriza por presentar una pared celular

completamente diferentes a las restantes Eubacteria. Estas presentan un complejo
lípido-polisacárido-peptidoglucano que le confiere un carácter hidrofóbico a la
superficie celular, volviéndola impermeable a los agentes hidrofilicos, siendo
imposibles de colorear o clasificar por el método de Gram.
Sin embargo, se pueden teñir si son tratadas con soluciones concentradas de
colorantes y en caliente. Una vez teñidas, resisten la decoloración aun utilizando
mezclas de alcohol con ácidos diluidos; de ahí el término acido-alcohol resistentes.
Cuando se destruye la integridad celular se pierde la acido-alcohol resistencia.
El género Mycobacterium presenta:
• Una membrana plasmática similar al resto de las Eubacteria.
• Por encima se haya un rígido peptidoglucano (PG) conformado por
N-acetilglucosamina y N-glucolilmuramico en lugar de N-acetilmuramico.
• El PG se une covalentemente, por uniones fosfodiester, al arabinogalactano;
un polímero de arabinosa y galactosa.
• En la porción más externa y distal de los arabinogalactanos se hallan fijados
los ácidos micolicos, los cuales se creen que son los responsables de la
acido-resistencia.

259
Si bien la acido-resistencia varía entre las distintas especies del género, no puede ser
utilizada para distinguirlos entre sí.
Ej.: Mycobacterium tuberculosis es el agente etiológico de la tuberculosis.
Mycobacterium bovis también puede causar tuberculosis.
Mycobacterium leprae es un parasito intracelular obligado y es el causante de la
lepra.

Coloración de Ziehl Neelsen

1. Se prepara, se seca y se fija por calor, un extendido a partir de pus, ganglios o

esputo.
2. Se cubre el extendido con el colorante primario durante 3 a 5 minutos,
calentando con un hisopo ardiente embebido en alcohol hasta
desprendimiento de humos blancos. No dejar que hierva o se seque el
colorante.
El colorante primario contiene Fucsina fenicada de Ziehl. Este colorante contiene
fenol (5%) el cual actúa como transportador de la fucsina facilitando su solubilidad en
lípidos.

3. Lavar con abundante agua

4. Decolorar el extendido utilizando el diferenciador hasta obtener un color rosa
pálido. Es esencial la correcta diferenciación con el fin de evitar falsos
positivos.
El diferenciador contiene HCl y alcohol etílico.

5. Lavar con agua y cubrir el preparado con el colorante de contraste, dejándolo

actuar por 20 a 30 segundos.
El colorante de contraste puede ser azul de metileno, verde brillante o una solución
saturada de ácido pícrico. Este último es pálido y no tiñe selectivamente el material
celular

6. Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio por inmersión.

Los organismos acido-alcohol resistentes aparecerán como pequeños
bastoncitos rojos sobre un fondo azul.

Fundamento

El método se basa en:

✓ El mayor coeficiente de solubilidad del fenol para lípidos que para medios
acuosos. Debido a esta característica:
o El fenol, junto con el calentamiento, facilita la penetración de la fucsina
dentro de la célula.
✓ La resistencia del complejo lípido-polisacárido-peptidoglucano a la penetración
del diferenciador. Por ello, es muy importante la integridad de la pared celular.
El fenol y la fucsina forman un complejo fenol-colorante que atraviesa la pared
celular y llega al citoplasma bacteriano. Como este es un medio acuoso, solo una
pequeña cantidad del complejo ingresara a la célula debido el bajo coeficiente de
solubilidad que presenta el fenol para medios acuosos.
La mayor parte del complejo se fijara fuertemente a la pared celular al reaccionar los
grupos amino de la fucsina con los grupos carboxilos libres de los ácidos micolicos,
coloreando de rojo las bacterias AAR.

260
Cuando se emplea el diferenciador, el complejo lípido-polisacárido-peptidoglucano de
la pared impide la acción del mismo. A pesar de ello, algo del solvente penetra en la
pared en donde se encuentra fijado el complejo fenol-colorante pero, como el fenol
presenta una mayor solubilidad en lípidos que en medios acuosos, la mayor parte del
complejo quedara retenido en la célula y solo una pequeña proporción será eliminada
en la decoloración.

Coloración de kinjoun

Esta técnica es similar a la de Ziehl Neelsen. Se basa en la supresión del

calentamiento mediante el aumento de la concentración de fucsina y fenol.

Coloraciones especiales

Son utilizadas para poner de manifiesto estructuras especiales de los

microorganismos; como esporos, flagelos y capsulas.

Coloración de esporos - Técnica de Shaeffer y Fulton

La compleja estructura multilaminar y la naturaleza de las endosporas hacen que

estas sean bastante impermeables a la mayoría de los colorantes. Por ello, su tinción
requiere técnicas especiales con exposiciones prolongadas al colorante y
temperaturas elevadas.

1. El extendido, secado y fijado por calor, se cubre con Verde de malaquita,

calentando hasta emisión e vapores durante 10 minutos pero evitando secar
el colorante.
Este colorante tiene la propiedad de atravesar, en caliente, la cubierta de la espora y
colorear selectivamente la sustancia que la constituye.

2. Lavar con abundante agua.

El agua actúa como un diferenciador, eliminando el colorante de la porción
protoplasmática de la célula madre, quedando coloreada solamente la endospora.

3. Cubrir el preparado con fucsina básica durante 3 minutos.

La solución de fucsina básica en frio no colorea la espora, sino el citoplasma de la
célula madres vegetativa.

4. Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio por inmersión.

Las esporas se coloran de verde y las formas vegetativas de rojo.

Las endosporas son fácilmente visibles al microscopio óptico sin necesitad de

tinciones especificas debido a su elevada refringencia. Esta propiedad es debido a la
acumulación en el core de la espora de dipicolinato de calcio.

Visualización de flagelos – Impregnación argentica

La técnica Fontana-Tribondeau o impregnación argentica sirve para poner en

evidencia los flagelos bacterianos y las espiroquetas; bacterias que presentan una
morfología característica: delgada, flexuosa, de forma helicoidal. Ej.: Treponema
pallidum, el agente causal de la sífilis.

261
Esta técnica no es una coloración sino una impregnación donde, mediante el uso de
un mordiente reductor, se produce el depósito de plata reducida sobre la estructura
bacteriana, lo que engrosa notablemente su aspecto haciendo posible observar los
flagelos (20 nm).

1. Si el material a examinar es sanguinolento, se cubre el extendido con el

líquido de Rouge para lisar los hematíes. Si el material no contiene sangre se
omite el paso.
2. Se fija el extendido por calor.
3. Cubrir el extendido con gotas de solución de tanino y calentar con un hisopo
ardiente embebido en alcohol hasta desprendimiento de vapores blancos.
4. Lavar abundantemente con agua corriente y luego con agua destilada para
evitar que los cloruros del agua corriente precipiten con el impregnador (nitrato
de plata) formando AgCl que impediría la posterior observación.
5. Cubrir el preparado con una solución de nitrato de plata amoniacal, dejar
actuar por 1 minuto y calentar hasta emisión de vapores blancos.
6. Lavar con agua destilada para evitar la precipitación de cloruros. Dejar secar y
observar al microscopio por inmersión.
Los flagelos bacterianos y los treponemas aparecerán de color pardo negruzco.

Coloración de capsulas – Método de Burri

Es una coloración negativa.

1. En un extremo del portaobjeto desengrasado, se coloca una gota de tinta

china especial para bacteriología y una gota de un cultivo liquido o de una
emulsión de un cultivo sólido.
2. Mezclar con el ansa y, con el borde de un porta objeto, extender el líquido
formando una película delgada.
3. Dejar secar y observar por inmersión, bajando el condensador del microscopio
para reducir la luz.
Las capsulas se observaran como un halo claro alrededor de los microorganismos
sobre un fondo oscuro; dado que esta desplazara las partículas de carbono coloidal
de la tinta china.

Observación microscópica de las coloraciones

El microscopio óptica se usa para observar células intactas, mientras que el

microscopio electrónico se utiliza para observar estructuras internas o detalles de la
superficie celular.
En el microscopio óptico, el límite de resolución (LR) o poder resolutivo de un
objetivo o lente se define como la mínima distancia que debe existir entre dos puntos
del objeto para que la lente alcance a distinguirlos como dos puntos diferentes.
El LR del microscopio óptico es de 0,2 µm.

λ= Longitud de onda de la luz incidente

AN= Apertura numérica
La apertura numérica es la capacidad
que tiene una lente de emplear una
mayor o menor cantidad de rayos en la
formación de las imágenes.

262
Las imágenes son formadas por el objetivo utilizando los rayos directos que
atraviesan el objeto y los rayos secundarios difractados por los pequeños detalles del
mismo.
Cuanto mayor sea la cantidad de rayos secundarios que puedan ser aprovechados
por la lente, con más claridad se advertirán los detalles debido a un fenómeno de
interferencia.

AN también puede definirse como el

producto del índice de refracción del medio
(n), interpuesto entre el objeto y la lente,
por el seno del semiangulo de apertura α.
Para disminuir LR se puede:

• Emplear menores longitudes de onda: Reemplazando la luz policromatica

blanca (λ=0,66 µm) por luz monocromática azul (λ=0,48 µm) o luz UV (λ=0,17
µm).
• Aumentando AN:
o Interponiendo entre el preparado y la lente medios transparentes de
índice de refracción superior a la del aire (n=1). Ej.: Aceite de cedro
(n=1,515).
Esto hace que el camino de los rayos desde el objeto hacia la lente se
haga ópticamente más homogéneo, evitando la refracción de los
mismos al atravesar el medio y aumentando el número de rayos que
pasaran por el Angulo de apertura α y contribuirán a la formación de la
imagen.
El portaobjeto con el extendido coloreado debe estar absolutamente seco antes de
usar el aceite de cedrón para el examen de inmersión
Incrementado sen α o el ángulo de apertura. Los objetivos apocromáticos modernos
más poderosos ya poseen el máximo posible.

Actividad bioquímica de los microorganismos

El metabolismo está constituido por un conjunto de reacciones enzimáticas

secuenciales biodegradativas y biosinteticas; las cuales son las responsables del
mantenimiento, desarrollo, movilidad y reproducción celular, e involucra el
intercambio de materia y energía entre las células y su medio ambiente en virtud de
dos procesos:

• Degradativo: Las reacciones catabólicas suministran la energía necesaria

para las funciones celulares. Las fuentes energéticas del medio son
convertidas en productos de desecho; como ácidos orgánicos y CO2.
• Asimilativo: Las reacciones biosinteticas o anabólicas involucran la síntesis de
componentes celulares a partir de los nutrientes que se encuentran en el
medio.

Las pruebas o ensayos bioquímicos son pruebas simples que se han desarrollado
únicamente para demostrar, de forma clara, una determinada característica
bioquímica; es decir la presencia de una determinada actividad enzimática o vía
metabólica.
Las pruebas se selecciones en función del tipo de microorganismo a estudiar y la
finalidad de la investigación. Las mismas deben realizarse a partir de cultivos puros y

263
frescos.
Como las características metabólicas de los microorganismos pueden varían
dependiendo de distintos factores, las pruebas deben realizarse siguiendo métodos
estandarizados internacionalmente.

Metabolismo de hidratos de carbono

Los hidratos de carbono son las principales fuentes de energía de las células.
Mediante su degradación, la célula puede producir energía por dos procesos:

➢ Respiración: Se produce la oxidación del piruvato de manera cíclica a través

del ciclo de los ácidos tricarboxilicos o de Krebbs. Dicha ruta es la principal
productora de ATP, a través de la fosforilación oxidativa, por medio del
transporte de electrones desde el NADH2 y el FADH2 hasta el aceptor final
generando CO2 y H2O.
➢ Fermentación: Se produce la oxidación del piruvato por diversos caminos,
dando lugar a varios productos finales. Ningún proceso fermentativo produce,
por sí solo, toda la gama de productos finales.

i. Prueba de oxidación/fermentación (O/F)

Permite determinar si se produce un metabolismo oxidativo o fermentativo sobre un
determinado hidrato de carbono.
El medio O/F contiene:
✓ Baja [peptona]: De esta forma, la pequeña reacción acida, que pueda
producirse debido al CO2 desprendido durante la respiración, no sea
neutralizada por los productos alcalinos del metabolismo nitrogenado
✓ Agar blando: Para disminuir la mezcla del medio por convección durante la
incubación.
✓ Indicador: Azul de bromo timol
Color del medio inicial: En medio alcalino: Azul En medio acido: Amarillo
Azul

Para cada hidrato de carbono se inoculan, por punción, 2 tubos O/F y uno solo se
sella con un tapón de parafina o con aceite mineral. Ambos son incubados a 37 °C. El
inoculo debe ser poco denso

Resultados:
• Microorganismo oxidativo (O): Pseudomonas
o Tubo cerrado sin cambios; color azul.
o Tubo expuesto al O2, viraje de azul→amarillo solo en la parte superior;
debido a una reacción acida producida solamente en condiciones
aerobias.
• Microorganismo fermentativo (F): Enterobacterias
o Tubo cerrado, viraje de azul→amarillo. El ácido producido por la
fermentación en anaerobiosis difunde en todo el medio y puede haber
resquebrajamiento del medio por la producción de gas.
o Tubo expuesto al O2, viraje de azul→amarillo.
• Microorganismos fermentativo y oxidativo:
o Mismos cambios que el caso anterior.

El medio también permite detectar la movilidad de un microorganismo:

264
 • Microorganismo móvil: El crecimiento se aleja de la línea de punción.
• Microorganismo no móvil: El crecimiento se limita a la línea de punción.

ii. Fermentación de hidratos de carbono en medio liquido

La fermentación de azucares por parte de los microorganismos puede originar ácidos
orgánicos y gas o únicamente ácidos; los cuales disminuirán el pH del medio.
El medio líquido es complejo y contiene:
✓ Extracto de carne, peptona, NaCl.
✓ Un tubo de Durham invertido
✓ Indicador: Purpura de bromo cresol
Color del medio inicial: A pH 7: Purpura A pH 5,1: Amarillo
Purpura

El medio puede autoclavarse, pero la solución del azúcar debe esterilizarse por
filtración y adicionarse asépticamente al medio estéril.
La siembra se realiza:
• Con ansa; a partir de un medio solido
• De una suspensión de células en SF estéril; a partir de un medio liquido (para
evitar arrastrar azucares residuales).

Resultados:
• Bacteria no fermentadora del azúcar: Color purpura
• Bacteria fermentadora del azúcar sin producción de gas: Color amarillo
• Bacteria fermentadora del azúcar con producción de gas: Color amarillo y
burbujas en el tubo de Durham.
Los resultados negativos se descartan luego de 7 días de incubación adecuada.

Sistema API

Debido a que el estudio de la fermentación de una gran numero de azucares implica

el empleo de muchos tubos y espacio físico, se emplean microtecnicas las cuales, a
su vez, acortan los tiempos de lectura de los resultados.
El sistema API permite estudiar entre 20 a 50 fuentes de carbono por ensayo. El
mismo consiste en un tira plástica con galerías de microtubulos y una cámara de
incubación con tapa no hermética. Cada compartimiento contiene una fuente de
carbono deshidratada; salvo el primero el cual es usado como control negativo.
Para la siembra, se utiliza una suspensión de células en un medio base de
fermentación el cual:
✓ No presenta ningún azúcar.
✓ Presenta una concentración 10 veces mayor de indicador.
En cada compartimiento sembrado, se adicionan gotas de vaselina estéril para crear
ambientes con una baja tensión de O2.

Las lecturas pueden efectuarse desde las 3-48 horas de incubación; mediante el
viraje del indicador. Con dichos resultados y utilizando cartas o tablas provistas por el
fabricante, es posible identificar al microorganismo bajo estudio.
El acortamiento del tiempo de lectura se debe a la elevada concentración del
indicador; permitiendo detectar los cambios con mayor nitidez, y la elevada densidad
celular de la suspensión del microorganismo usado.
Es un método muy confiable pero caro.

265
 iii. Prueba TSI (triple sugar iron)
El agar TSI es un medio nutritivo y diferencial que permite estudiar la capacidad de
producción de ácido y gas a partir de glucosa, lactosa y sacarosa en un único medio.
También permite la detectar la producción de H2S. Útil para la identificación de
enterobacterias.
El medio contiene:
✓ Peptona, sulfato doble de hierro y amonio.
✓ Agar. Se prepara en forma de pico de flauta
✓ Glucosa (0,1%), lactosa (1%) y sacarosa (1%)
✓ Indicador: Rojo fenol
Color del medio inicial: Rojo A pH 8,5: Rojo A pH 6,9: Amarillo
caramelo
El rango de pH en el cual vira el indicar es alto debido a que la producción de ácidos
y productos alcalinos origina una acidez más suave que en las pruebas de
fermentación de azucares en medio líquido.

Presenta dos cámaras de ración dentro de un mismo tubo:

➢ Aerobia: Conformada por la superficie expuesta del pico al O2 atmosférico.
➢ Anaerobia: Conformada por la porción interna o fondo del medio la cual se
halla, relativamente, protegida del O2.

Para inocular los tubos TSI, se introduce una aguja cargada hasta el fondo del tubo.
Se la retira e inmediatamente se estría el pico con movimientos de zig-zag. Se incuba
a 35 °C por una día.

Resultados:
• Microorganismos no fermentadores (que puedan crecer en presencia de O2):
o Pico: Se alcaliniza y vira a rojo; debido a la producción de aminas a
partir de la utilización aeróbica de las fuentes nitrogenadas; como
peptona.
o Fondo: Virara a rojo; debido a la producción de aminas desde el pico y
a la no producción de ácidos por ausencia de la fermentación de
hidratos de carbono
• Microorganismos fermentadores de glucosa (pero no de lactosa ni sacarosa):
o Pico: Se alcaliniza y vira a rojo; debido a la degradación aerobia de la
peptona.
o Fondo: Virara a amarillo; debido a la fermentación de la glucosa
únicamente.
Como la glucosa se encuentra en una proporción 10 veces menor a los otros
dos azucares, la cantidad de ácidos producida en la cámara anaeróbica será
suficiente únicamente para producir el viraje del indicador en el fondo del tubo
y no en el pico.
• Microorganismos fermentadores de glucosa, lactosa y/o sacarosa:
o Pico y Fondo: Se acidifica y vira a amarillo.
Como la concentración de lactosa o sacarosa es 10 veces mayor a la de
glucosa, la fermentación de las mismas producirá una cantidad de ácido tan
alta que difundirá desde el fondo hasta el pico y no podrá ser neutralizada por
la producción de aminas de la degradación aerobia de la peptona.

266
 • La producción de H2S, a partir de tiosulfato, se evidencia por un precipitado
negro de sulfato ferroso. Como esta reacción solo tiene lugar en medio acido,
un ennegrecimiento del fondo se puede leer como fermentación de algunos de
los azucares del medio. También se puede detectar la producción de gas por
agrietamiento del medio agarizado.

iv. Fermentación acido mixta o butilenglicolica a partir de la glucosa

La prueba permite diferenciar dos tipos de fermentación mediante el empleo de caldo
MR-VP o agua-peptona-glucosa-fosfato.
Los microorganismos capaces de desarrollar una fermentación acido mixta
producirán, a partir de la glucosa, distintos ácidos; como ácido láctico, acético,
propionico o fórmico) y en elevada concentración lo que reducirá el pH del medio a
valores menores a 4,2.
Los microorganismos capaces de desarrollar una fermentación butilenglicolica
producirán, a partir de la glucosa, compuestos ácidos en menor concentración
acompañados de una gran cantidad de productos neutros; como el diacetilo y la
acetoina. Si bien el pH del medio disminuirá, no descenderá hasta valores menores
de 4,2.
El caldo MR-VP se puede esterilizar en el autoclave y presenta un pH final de 6,9.
Se lo siembra e incuba por 2 días a 37 °C. Pasado ese tiempo, y manteniendo la
pureza del cultivo, se separa 1 ml para realizar la reacción de Voves Proskauer. El
cultivo original se lo sigue incubando por 3 días más y al finalizar el tiempo, se extrae
1 ml para realizar la prueba de rojo de metilo.

a. Reacción de Voves Proskauer:

Permite evidenciar si el microorganismo lleva a cabo una fermentación
butilenglicolica.
1. Se agrega α-naftol y KOH a un tubo limpio que contiene el ml del caldo MP-
VP incubado por 2 días.
2. Agitar el tubo cuidadosamente para exponerlo al O2 atmosférico y dejar
reposar 15 minutos.
La aparición de un color rojo-fucsia luego de 15 minutos indica la presencia de
diacetilo y una prueba VP (+).
La acetoina o acetil-metil-carbinol es un producto intermediario en la producción de
butanodiol. En medio alcalino y en presencia de 02, la acetoina se oxida a diacetilo; el
cual se revela y adquiere el color rojo-fucsia en presencia de α-naftol.

b. Prueba de Rojo de metilo:

Permite evidenciar si el microorganismo lleva a cabo una fermentación acido mixta.
i. Se agrega rojo de metilo a un tubo limpio que contiene el ml del caldo MP-VP
incubado por 5 días.
Si se desarrolla un color rojo estable, indica un prueba MR (+). Un color anaranjado,
intermediario entre el rojo y amarillo, no es considerado como positivo.
El rojo de metilo es un indicador de pH cuyo intervalo es:
A pH 6,0: Amarillo A pH 4,4: Rojo
El color rojo estable indica que la producción de ácidos fue lo suficientemente elevada
como para poder generar el viraje del indicador, siendo la fermentación acido mixta la
única capaz de generar dicha cantidad de productos ácidos.

Controles: MR (+), VP (-)→ E. coli

MR (-), VP (+)→Enterobacter aerogenes.

267
En el caso de que se quiera estudiar Bacillus se debe reemplazar el fosfato del
medio por NaCl.

v. Fermentación homo o heterlactica de hidratos de carbono

Las bacterias lácticas constituyen un grupo muy heterogéneo cuya característica
distintiva es la formación de ácido láctico como principal producto de la fermentación
de carbohidratos. Dependiendo de la vía metabólica que utilicen para dicha
fermentación, se las puede dividir en:
➢ Homofermentativas: Producen casi exclusivamente ácido láctico por medio de
la vía de Embden-Meyerhoff-Parnas o glicolitica.
➢ Heterofermentativas: Producen ácido láctica, CO2, etanol y/o ácido acético por
medio de la vía 6-fosfogluconato/fosfocetolasa o de las pentosa fosfato.

Para la prueba se utiliza el medio de cultivo Gibson; un medio complejo que

contiene:
✓ Extracto de levadura, glucosa
✓ Leche descremada
✓ Agar nutritivo
Se esteriliza en autoclave durante 10 minutos, ya que un exceso de calor puede
caramelizar la glucosa.
La siembra del medio, fundido y mantenido a 45 °C, se realiza a partir de una
suspensión de células en SF estéril para evitar arrastrar azucares residuales del
medio en el cual se estaban desarrollando previamente. Se incuba por 7 días a 30 °C.

Resultados:
• Bacterias heterofementativas o heterolacticas: Resquebrajamiento del medio
agarizado; como consecuencia de la formación de CO2.
• Bacterias homofementativas o homolacticas: No hay resquebrajamiento del
medio agarizado. No hay formación de CO2.

vi. Utilización de lactosa de leche

La prueba permite determinar la presencia de la β-galactosidasa, la cual es utilizada
por los microorganismos para desdoblar la lactosa en galactosa y glucosa para un
fermentación ulterior.
Se utiliza, como medio de cultivo, leche descremada reconstituida con gotas de
Purpura de bromo cresol:
Color del medio inicial: Purpura suave (debido A pH 7: A pH 5,1:
al pH 6,8 inicial de la leche) Purpura Amarillo
Se esteriliza en autoclave durante 10 minutos, ya que un exceso de calor puede
caramelizar la lactosa.
La siembra se realiza:
• Con ansa; a partir de un medio solido
• De una suspensión de células en SF estéril; a partir de un medio liquido (para
evitar arrastrar azucares residuales).
Se incuba de 2 a 5 días.

Resultados:
• β-galactosidasa (+): Se produce el viraje del medio de purpura suave
→amarillo y la formación reversible de un coagulo acido blando.

268
 • β-galactosidasa (-): No se produce cambios en el color del medio ni aparición
de coágulos ácidos.
La leche contiene como principal azúcar a la lactosa y como principal proteína a la
caseína.
La molécula de caseína está formada por tres fracciones: α, β y κ.
Las fracciones α y β son hidrofóbicas, sensibles al calor y ocupan la región interna de
la molécula mientras que la caseína κ es hidrofilica y ocupa la región externa de la
misma, impidiendo que las fracciones α y β reacciones con el calcio.
Como la región hidrofilica posee abundantes residuos de serina-fosfato, la superficie
de la molécula se encuentra cargada negativamente, reaccionando con el calcio libre
de la leche generando caseinato de calcio. En la leche fresca la caseína se mantiene
en suspensión debido a la formación de puentes de fosfato de calcio amorfos entre
las moléculas de caseinato y los fosfatos de la fase acuosa. La compleja estructura
resultante se denomina micela de caseína.
La producción de ácidos, por parte de los microorganismos fermentadores de lactosa,
desestabiliza la caseína conduciendo a la formación de un coagulo acido, dado que
los H+ desplazaran los Ca+2 de los puentes de fosfato amorfo, desestabilizando la
estructura miceliar y provocando la precipitación de la caseína como caseinato de
calcio.
La formación del coagulo acido no está relacionada con la degradación de la caseína
por el microorganismo.

Utilización de ácidos orgánicos

i. Utilización de citrato
Un microorganismo que utilice el citrato como única fuente de carbono y energía debe
presentar la citrato permeasa como una enzima constitutiva; la cual le permitirá
incorporar el ácido orgánico desde el medio externo.
Para estudiar esta propiedad se utiliza el medio sintético Citrato de Simmons que
contiene:
✓ Citrato de sodio
✓ Fosfato monoamonico, NaCl, MgSO4.
✓ Agar
✓ Indicador: Azul de bromo timol
Color del medio inicial: Verde (el pH final se A Ph 7,7: A Ph 6,1:
ajusta a 6,9) Azul Amarillo
Se esteriliza en autoclave y se deja solidificar en bisel
Se siembra por estrías y punción a partir de un suspensión de células lavadas en SF
estéril.
Se incuba por 7 días.

Resultados:
• Citrato permeasa (+): Se produce el viraje del medio de verde →azul.
La utilización del citrato permite la liberación de Na+ los cuales desplazaran a los
iones amino del fosfato monoamonico. Una parte de los iones amonio son utilizados
como fuente de N2 y el resto se combina con el agua del medio para formar NH4OH lo
que incrementara el pH y hará virar al indicador.
Prueba (+)→Citrobacter y Enterobacter aerogenes
Prueba (+ )→ Shigella

269
En algunos microorganismos; como ciertas especies de Lactobacillus, la citrato
permeasa es un enzima inducible, siendo capaces de utilizar el citrato pero no como
única fuente de carbono. Para dichas bacterias, la prueba en Citrato de Simmons es
(-); ya que para inducir la expresión de la citrato permeasa hace falta
concentraciones muy bajas de glucosa.
En este caso, se utiliza el medio de Christensen, un medio complejo que contiene:
✓ Citrato de sodio y glucosa
✓ Extracto de levadura, citrato doble de hierro y amonio, fosfato monopotasico
✓ Agar
✓ Indicador: Rojo fenol

Color del medio inicial: Pardo amarillento ( El pH A pH 8,5: A pH 6,9:

final 6,9) Rojo Amarillo
En este medio se utilizara un indicador cuyo rango de viraje es más alcalino debido a
la mayor concentración de citrato y a la mejor utilización del mismo por tratarse de un
medio más rico.

La utilización de citrato por parte de ciertas especies de Lactobacillus puede

observarse utilizando leche con azul de tornasol.
La utilización del ácido se manifiesta por la aparición de color azul en el fondo del
tubo luego de incubar el microorganismo.

Metabolismo de compuestos nitrogenados

Degradación de proteínas

Ciertos microorganismos pueden producir preteinasas extracelulares, las cuales

degradaran proteínas produciendo péptidos; los cuales a su vez serán transformados
a aminoácidos por la acción de peptidasas intracelulares. Ej.: Ciertas especies de
los géneros Clostridium, Proteus, Pseudomona y Bacillus.

i. Degradación de la caseína de leche

Algunos microorganismos podrán desarrollarse en la leche degradando la caseína
por medio de una enzima denominada quimosina; provocando un coagulo
enzimático en la misma.
La formación del mismo consta de tres etapas:
• Reacción primaria: La quimosina ataca la fracción κ de la caseína, dejando
expuestas las fracciones α y β.
• Reacción secundaria: Dichas fracciones reaccionaran con el calcio
generando; por medio de puentes de sales de calcio, una red tridimensional
de paracaseinato de calcio, constituyendo el coagulo enzimático.
Una vez formado, se retrae exudando suero; proceso denominado sineresis.
• Reacción terciaria: Si no existe una acidez marcada en el medio, las enzimas
proteolíticas continuaran disolviendo el coagulo; proceso denominado
peptonizacion.
Dichas enzimas actúan preferentemente sobre la fracción α, liberando
péptidos y generando zonas translucidas en el medio.

ii. Hidrolisis de gelatina

La gelatina o colágeno desnaturalizado forma un gel cuando se disuelve en agua
caliente y podrá ser hidrolizada, por microorganismos, perdiendo su poder gelificante.

270
Ej.: Proteus vulgaris.
La enzima responsable de la licuefacción es una diastasa denominada gelatinasa,
que en presencia de hidratos de carbono no se sintetiza o lo hace en cantidades
imperceptibles.
Para determinar la presencia de dicha enzima se utiliza el caldo gelatinado, el cual
es similar al caldo común:
✓ Contiene peptona, extracto de carne
✓ Carece de hidratos de carbono
✓ Contiene gelatina
Se esteriliza a vapor fluente por 20 minutos. La siembra se realiza por punción y a
partir de una suspensión concentrada de células.

Resultados:
• Gelatinasa (+): Se produce un cambio en la consistencia del medio, el cual
pasa de un estado de gel a sol.
La lectura de los resultados debe hacerse previa refrigeración de los tubos incubados,
dado que a temperaturas mayores a 25 °C se producirán falsos positivos debido a
que se alcanza el punto de fusión de la gelatina.
Los resultados negativos no pueden descartarse hasta las 6 semanas

Otro método, más seguro y rápido, consiste en sembrar el microorganismo en un

medio base agar al cual se le adiciona gelatina pero en una concentración mucho
menor.
Luego de 2 a 3 días de incubación, se le agrega un reactivo precipitante de
gelatina. La aparición de zonas claras alrededor de las colonias indica positividad.

Degradación de aminoácidos

i. Amonificacion
La utilización de aminoácidos, por los microorganismos, lleva a la liberación de NH3;
proceso conocido como amonificacion.
Esta se estudia a través del caldo arginina, un medio complejo que contiene:
✓ L-arginina
✓ Triptona, extracto de levadura, NaCl
La producción de NH3, luego de la incubación, se revela con el reactivo de Nessler.
El color ladrillo en el medio indica un resultado (+).
Se emplea para identificación de bacterias lácticas:
Prueba (+): Lactobacillus brevis
Prueba (-): Lactobacillus plantarum

ii. Formación de indol a partir de triptófano

El indol es uno de los productos de degradación metabólica del triptófano el cual es
generado por bacterias que poseen triptofanasa; enzima encargada de hidrolizar y
desaminar el triptófano. En la degradación del mismo también se genera ácido
pirúvico y NH3.
Para esta prueba se utiliza un caldo:
✓ Libre de nitritos (NO2-): Su presencia puede bloquear la detección del indol
✓ Libre de carbohidratos: Su presencia puede reprimir la expresión de la
triptofanasa.
✓ Contiene una fuente peptonada rica en triptófano: Triptona o peptona de
caseína.

271
Se siembra e incuba por 18-24 horas a 35 °C. Se toma 1 ml del cultivo y se le
agregan 4 gotas del reactivo de Kovacs o bien 2 gotas de Gracian I y 2 gotas de
Gracias II.

Resultados:
En ambos métodos
• Triptofanasa (+): Aparición de un color rojo suave en la interface del reactivo y
del caldo
Cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehido,
presente en los reactivos, se forma un complejo rojo.
Controles: (+) E. coli
(-) Klebsiella pneumoniae

Metabolismo de nitrógeno inorgánico

i. Nitrificación
La nitrificación es llevada a cabo por bacterias autótrofas que, por oxidaciones
sucesivas del NH3, forman NO2- y NO3-. Actúan en el ciclo biológico del nitrógeno.
Se utiliza un medio base conocido como medio de nitrificación; un medio sintético el
cual se puede esterilizar en autoclave.
a. Si se estudia la oxidación del NH3 a NO2-: Se agrega una solución estéril de
sulfato de amonio; la cual es una sustancia termolábil y debe esterilizarse por
filtración.
Ej.: Nitrosamona
b. Se estudia la oxidación del NO2- a NO3-: Se agrega NaNO2 antes de esterilizar
en el autoclave. Ej.: Nitrobacter.

ii. Reducción de nitratos

Esta puede tener lugar mediante un proceso de:
➢ Asimilación: El NH3 formado, a partir del NO3-, se incorpora a aminoácidos y
otros componentes nitrogenados de la célula.
➢ Desasimilación: Mediante una respiración anaeróbica, los microorganismos
usaran el NO3- como aceptor final de electrones; reduciéndolo a NO2-. En
algunas especies, el NO2- podrá continuar reduciéndose a NH3 mientras que
en otras el NO2- formara óxido nitroso (N2O) y N2; proceso conocido como
denitrificacion.

Para esta prueba se utiliza el caldo nitrato; el cual es un medio líquido, nutritivo, de
color amarillo:
✓ Contiene KNO3.
✓ Un tubo de Durham invertido
Se esteriliza en el autoclave, se siembra y se incuba por 7 días.

Resultados:
• Producción de gases (N2 y N2O): Se manifiesta por la aparición de burbujas en
el tubo de Durham. La introducción de pipetas para los revelados siguientes

272
 puede alterar la presencia de las burbujas por eso se lee este resultado
primero.
• Producción de NH3: Se toma 1 ml del cultivo original y se agrega reactivo de
Meller. La aparición de un color rojo ladrillo indica positividad en la producción
de NH3.
Si la producción de gases y NH3 resultaron (-), es probable que el microorganismo
haya asimilado el NO3-.
• Presencia de NO2-: Se toma 1 ml del cultivo y se le agrega una solución de
ácido sulfanilico, se mezcla y luego se agrega dimetil α-naftil amina.
La aparición de color rojo-purpura indica positividad.
Se produce una diazotacion, entre el ácido sulfanilico y el NO2-, responsable
de la coloración.
• NO3- residual: En el mismo tubo que dio presencia de NO2- (-), se añada polvo
de Zn que en medio acido reduce el NO3- a NO2-.
Si hay NO3-, se producirá la diazotacion del NO2-, apareciendo el color rojo-
purpura.
Si no hay coloración, el microorganismo redujo todo el NO3- a través de una
asimilación o una denitrificacion.

iii. Hidrolisis de la urea

Algunas bacterias sintetizan ureasa; una enzima hidrolítica que desdobla la urea en
NH3, CO2 y agua.
Para esta prueba se utiliza el agar urea de Christensen, un medio complejo que
contiene:
✓ Peptona, glucosa
✓ Agar
✓ Indicador: Rojo fenol
Color del medio inicial: Pardo amarillento ( El pH A pH 8,5: A pH 6,9:
final 6,9) Rojo Amarillo
El medio se estiliza en autoclave, se la adiciona urea esterilizada por filtración y se lo
fracciona en tubos dejándolo solidificar en bisel. La siembra se realiza por punción y
estriado con aguja. Se incuba por 1 día.

Resultados:
• Ureasa (+): Se produce un viraje del indicador de amarillo→rojo
La bacteria, al utilizar una fuentes nitrogenada como fuente de energía, alcaliniza el
medio.

Metabolismo de fuentes de azufre

i. Producción de H2S a partir de aminoácidos azufrados

Por acción enzimática, algunas bacterias heterótrofas liberan H2S a partir de la
degradación de cisteina o metionina. Este proceso se puede evidenciar utilizando un
medio TSI

ii. Reducción desasimilativa de SO4-2 a H2S

Ciertos microorganismos realizan una respiración anaeróbica y utilizan el SO4-2 como
aceptor final de electrones; reduciéndolo a H2S, en presencia de compuestos
orgánicos que actúan como dadores de electrones; como el lactato.

273
La prueba se realiza empleando el medio lactato. La aparición de color negro, por la
formación de FeS, indica reacción una positiva.
Ej.: ciertos miembros del géneros Desulfovibrio y la mayoría de las especies del
genero Desulfotomaculum.

iii. Reducción desasimilativa de S elemental a H2S

Ciertos microorganismos realizan una respiración anaeróbica y utilizan el S elemental
como aceptor final de electrones; reduciéndolo a H2S, en presencia de compuestos
orgánicos que actúan como dadores de electrones; como acetato o etanol.
La prueba se realiza empleando el medio Pfenning y Bieb. El fuerte olor fétido del H2S
indica una reacción positiva.

Metabolismo del oxigeno

i. Caldo tioglicolato
Este caldo permite el crecimiento de casi todas las bacterias heterótrofas no
exigentes y, de acuerdo al tipo de crecimiento que desarrollen, se determinara la
relación del microorganismo con el O2 y su capacidad para respirar y/o fermentar
El caldo contiene:
✓ Extracto de carne, glucosa, peptona, NaCl
✓ Agar
✓ Tioglicolato de sodio: El compuesto disminuye el potencial redox del medio
✓ Rasazurina: Es un indicador de oxidación, en aerobiosis.
Los tubos se inoculan por picadura y se incuban por 2 días a 35 °C.

Resultados:
• Anaerobios aerotolerantes: Crecerán a lo largo de todo el tubo. Son
indiferentes al O2 y tienen un metabolismo estrictamente fermentativo.
• Aerobios facultativos: Crecerán a lo largo de todo el tubo pero habrá un mayor
desarrollo en la superficie del medio.
• Aerobios estrictos: Crecerán únicamente en la superficie del medio. No
fermentan.

ii. Prueba de la citocromo oxidasa

El sistema citocromo oxidasa esta construido por hemoproteinas capaces de catalizar
la oxidación, provocada por el oxígeno molecular, de un citocromo reducido. Las
bacterias que realizan una respiran aeróbica, y utilizan al O2 como aceptor final de
electrones, contiene diferentes sistemas de citocromos oxidasas, mientras que las
bacterias anaerobias estrictas carecen de tales sistemas.
La prueba se puede realizar por dos métodos:
➢ Técnica directa en placas: Se añade directamente gotas de reactivo a las
colonias aisladas que se desarrollan en placas. Se debe partir siempre de
cultivos de 24 horas en un medio libre de colorantes (Mac Conkey)
➢ Técnica indirecta en tiras o discos de papel: Se añaden gotas del reactivo al
papel y se extiende un ansa con las colonias aisladas. Se debe realizar un
control negativo previo del ansa.

Resultados:
• Si se utiliza como reactivo el diclorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina: Se
considera Citocromo oxidasa (+) si aparece una coloración rosada-fucsia en
aproximadamente 2 minutos.

274
 • Si se utiliza como reactivo el clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina: Se
considera
o Citocromo oxidasa (+) si aparece una coloración azul profundo en un
tiempo menor a 10 segundo.
o Citocromo oxidasa (+) lento si el color aparece entre 10-60 segundos.
o Citocromo oxidasa (-) si no hay color o aparece luego de 60 segundos.
El ensayo permite detectar la presencia de ciertas enzimas del sistema citocromo
oxidasa, capaces de catalizar el transporte de electrones entre un dador, presente en
la bacteria, y el colorante redox.
Control: (+) Pseudomonas aureginosa
(-) E. coli
El ensayo es útil para evidenciar la presencia de los géneros Neisseria, Aeromonas,
Vibrio, Campylobacter y Pseudomonas y excluir a las Enterobacterias.

iii. Prueba de catalasa

Para realizar la prueba se utiliza un medio agar nutritivo que:
✓ No contenga sangre: Los eritrocitos poseen una fuerte actividad catalasa,
pudiendo generar falsos positivos.
✓ Contenga 1% de glucosa: Existen bacterias, como el Lactobacillus plantarum,
que pueden expresar una pseudocatalasa no heminica en medios con baja
concentración de glucosa, originando falsos positivos.
Después de la incubación, se agrega sobre cada colonia gotas de H2O2. Si el
microorganismo proviene de un medio de cultivo líquido, se centrifuga y luego se
coloca; sobre un portaobjeto, una muestra concentrada de células a la cual se le
agrega el H2O2.
Resultados:
✓ Catalasa (+): Se observa desprendimiento de burbujas.
La catalasa desdoble el H2O2 con liberación de O2.
Esta prueba permite distinguir microorganismos aerobios estrictos y facultativos de
microaerofilos, anaerobios estrictos y aerotolerantes.
Controles: (+) Straphylococcus
(-) Streptococcus

Pruebas especiales – Actividad hemolítica

Ciertos microorganismos produce hemolisinas; enzimas capaces de dañar la

membrana de los eritrocitos de animales superiores provocando el fenómeno de
hemolisis.
Para evidenciar la capacidad hemolítica se utiliza el medio agar sangre, un medio
complejo que:
✓ Se prepara a partir de TSA (Trypticase Soy Agar)
✓ Contiene peptona de soja, de caseína, agar
Al medio autoclavado, fundido y mantenido a 45 °C, se le adiciona asépticamente
sangre desfibrinada estéril de oveja o conejo preferentemente.
La sangre humana contiene:
➢ Citrato; capaz de inhibir el desarrollo de ciertas bacterias
➢ Glucosa; capaz de enverdecer el medio pudiendo llegar a confundirse con
una α-hemolisis.

Como algunas hemolisinas son sensibles al O2, se recomienda sembrar el

microorganismo en medio base TSA y luego se lo cubre con agar sangre fundido y

275
mantenido a 45 °C. La hemolisis, en este caso, será más pronunciada debido a que
las colonias desarrollaran en la interface, en donde sus hemolisinas se encuentran
protegidas del O2 atmosférico.

Resultados:
Existen tres tipos de hemolisis:
• β-Hemolisis: Luego de la incubación, se observan una zona clara e incolora
alrededor de las colonias debido a la lisis total de los eritrocitos; lo que
contrasta con la opacidad del medio.
• α-Hemolisis: Luego de la incubación, se observan alrededor de las colonias
una zona con destrucción parcial de los eritrocitos caracterizada por un color
verde amarronado posiblemente debido a una reducción de la hemoglobina.
• α’-Hemolisis: Luego de la incubación, las colonias se encontraran rodeadas de
una zona pequeña y adyacente de glóbulos rojos intactos o parcialmente
lisados y una zona externa con lisis completa.
Para evitar confundir una α’-hemolisis con una β-hemolisis, la observación debe
realizarse con la ayuda de una lupa.
Motilidad

i. Prueba de la gota suspendida

Con un ansa se coloca sobre un portaobjetos un poco de la muestra y se agrega una
gota de agua destilada. Se coloca un cubreobjetos y se observa al microscopio.
Se puede observar el movimiento rectilíneo o curvo y la dirección del mismo de las
bacterias flageladas.
Ej.: Motilidad (+) Pseudomonas aeruginosa
Motilidad (-) Pasteurella multocida
Motilidad (-) Bacterias lácticas

ii. Prueba en agar blando

Se preparan tubos con agar semisólido, blando o medio movilidad. Se siembra por
picadura y se incuba a 31 °C.
Se observa la movilidad por el desplazamiento con respecto al eje sembrado.

Perfil de proteínas totales

Consiste en:
1. Realizar una hidrolisis total y extraer las proteínas hidrosolubles de un
microorganismo.
2. Realizar una corrida electroforética en gel del poliacrilamida y se tiñe el gel
para revelar las bandas correspondientes a las proteínas
Las cepas de una misma especie presentaran perfiles similares pero no idénticos; en
donde las proteínas principales ocuparan siempre la misma posición en el gel pero
pueden haber variaciones en el tamaño de las bandas. También es probable detectar
bandas adicionales. Dichas diferencias no modifican la identificación de la especie
bajo estudio.

Perfil de lisinas

Esta técnica se centra en un tipo particular de proteína, las enzimas líticas o

autolisinas, involucradas en el crecimiento de la pared celular. Como cada especie

276
presenta varias lisinas diferentes, el perfil de lisinas permite la identificación de las
mismas.
La técnica consiste en:
1. Extraer solamente las enzimas líticas que se encuentran ligadas a la pared
celular.
2. Se realiza una electroforesis en gel de poliacrilamida que contiene una
concentración elevada de células muertas sensibles a las lisinas extraídas.
Es necesario que las lisinas no se encuentren activas durante la corrida
electroforética, para evitar que actúen sobre las células contenidas en el gel
antes de alcanzar su posición definitiva. Para ello se incluye en el gel un
agente desnaturalizante de las proteínas, el dodecilsulfato de sodio.
3. Una vez que la corrida ha terminado, se sumerge el gel en una solución
renaturalizante que vuelve a activar a las lisinas, las cuales hidrolizaran la
pared celular de las bacterias incluidas en el gel.
Aparecerán bandas translucidas sobre el fondo opaco del gel en la posición ocupada
por las lisinas. Como cada lisina ocupa una posición característica en el gel, se
obtendrán bandas que constituirán el perfil de la especie bacteriana.

Hibridación con sondas de ácidos nucleicos

Usualmente le ADN se encuentra en forma de doble hélice en donde las hebras

polinucleotidicas se encuentran asociadas por medio de puentes hidrogeno entre las
bases nitrogenadas. Dicha asociación se conoce como apareamiento de bases y los
pares de bases se denominan complementarios.
Los puentes hidrógenos que estabilizan las dobles hélices pueden escindirse por
calentamiento o exposición a altas concentraciones de ácidos o álcalis que ioniza las
bases.
El proceso de separación de las bandas se denomina desnaturalización o fusión
del ADN y se produce en un estrecho rango de temperatura. Produce cambios en
muchas propiedades físicas del ADN, entre ellas la densidad óptica.
La capacidad de dos hebras complementarias de ADN de re asociarse (annealing) y
formar una doble hélice cuando la temperatura desciende por debajo de Tm, se
denomina renaturalizacion. Si los ácidos nucleico involucrados en la renaturalizacion
provienen de diferentes fuentes, el proceso se denominara hibridación.

La hibridación permite:
➢ Construir artificialmente híbridos doble cadena de ADN, ARN o ADN-ARN; por
el apareamiento de las bases complementarias, a partir de dos moléculas
simple banda de diferentes orígenes.
➢ Evaluar el grado de complementariedad de dos moléculas de ácidos
nucleicos y detectar secuencias específicas en ella.
➢ Identificar un microorganismo por hibridación;

Identificación por hibridación

Es necesario disponer de una sonda específica para el microorganismo.

El ADN de las células de una muestra que presente una secuencia complementaria
(blanco) a la sonda, podrá hibridar con ella. Para detectar que al reacción ha ocurrido,
la sonda debe estar marcada con una molécula reporter que puede ser medida en
pequeñas cantidades luego de la reacción.
Sonda: Población homogénea de moléculas de ácido nucleico simple banda que

277
presentan una secuencia conocida e identificada.
La técnica consiste en exponer dos preparaciones de ácidos nucleicos simple banda
(sonda y blanco) en contacto y medir la cantidad de heteroduplex formado.
Al mismo tiempo, tanto la sonda como las moléculas blanco podrán re asociarse entre
sí formando homoduplex. Si se dispone de un método para eliminar la sonda que no
se ha unido a la molécula blanco, los heteroduplex pueden ser fácilmente
identificados por métodos que detecten el marcado de la sonda

La reacción de hibridación puede desarrollarse:

a. En solución: Las dos preparaciones de ácidos nucleicos simple banda se
mezclan.
Cuando están involucradas grandes cantidades de reactivos, la reacción se
puede controlar midiendo los cambios en la densidad óptica.
Cuando están involucradas pequeñas cantidades de reactivos, la sonda
puede ser marcada con un isotopo radiactivo, determinándose la cantidad de
moléculas doble banda que contiene la marca.
b. En filtros: Se vuelca la solución que contiene las moléculas blanco sobre un
filtro de membrana, en el cual los ácidos nucleicos simple banda quedaran
absorbidos. Al agregar la segunda solución que contiene la sonda, solo el
material capaz de aparear sus bases con las moléculas blanco será retenido
en el filtro.
El grado de hibridación se mide por exposición de la membrana a un film de
rayos X.

Las sondas pueden ser marcas utilizando isotopos radiactivos como 32P o 35S.
Desventaja Ventaja
Tiempo de vida medio corto Ofrecen una elevada sensibilidad
Existen métodos de marcación alternativos como:
• Fluorescencia
• Quimioluminiscencia
• Colorimetría
Ej.: Se puede marcar una sonda con un nucleótido al que se le incorpora un hapteno
(biotina). Después de la hibridación, el hapteno es reconocido por una avidina o una
estreptoavidina a la cual se la ha incorporado un compuesto que determinara el
sistema de detección; como:
➢ Fluoresceína; la cual emite fluorescencia.
➢ Fosfatasa alcalina, la cual permite la detección por quimioluminiscencia
Estos métodos resultan más versátiles que introducir un cromoforo directamente en
un sonda especifica.

Las sondas de ácidos nucleicos son capaces de detectar secuencias blancos en:
✓ Moléculas de ADN o ARN en preparaciones citológicas: Hibridación in situ
✓ Moléculas de ADN o ARN fijadas a una membrana:
o Dot blot: Moléculas de ADN o ARN no fragmentadas
o Southern blot: Moléculas de ADN fragmentadas en un gel y luego
transferidas a una membrana
o Norther blot: Moléculas de ARN fragmentadas en un gel y luego
transferidas a una membrana
✓ Lisados de colonias de células bacterianas inmovilizadas en una membrana:
Hibridación de colonias
✓ Placas de lisis de virus inmovilizadas en una membrana: Hibridación de placas
278
 ✓ Moléculas de ARNr: Hibridación fluorescente in situ (FISH)

Existen numerosas sondas de ácidos nucleicos para identificar microorganismos

patógenos como Mycobacterium tuberculosis, Neisseria gonorrhoeae, Salmonella,
Staphylococcus y el virus Papilloma.

Metodología para la identificación de bacterias por hibridación de colonias

1. Transferencia de las colonias y fijación del material (ADN) a la membrana de

nitrocelulosa.
2. Pre hibridación para eliminar reacciones inespecíficas e hibridación con sonda
especifica marcada
3. Se lava para eliminar la sonda que no se ha apareado específicamente a la
secuencia blanco.
4. Revelado y visualización. Para realizar el revela se sigue el protocolo
correspondiente al marcado de la sonda. Para sondas biotiniladas se emplea
el Phototpo Star Detection System.

Identificación de bacterias por FISH

En este método se utilizan como sondas fragmentos de ADN de unos 20-28

nucleótidos, cuya secuencia será complementaria a un región específica del ARNr 16
s. Las sondas son marcadas con fluorocromos.

1. Se prepara y gelatiniza portaobjetos utilizando una solución de gelatina a 70

°C.
2. Se coloca 1-2 µl de la suspensión celular proveniente de un cultivo activo en
fase exponencial sobre el portaobjeto y se fijan las células por deshidratación
a través de inmersiones seriadas en 50, 80, 96 y 100 de etanol. Luego se deja
secar a temperatura ambiente.
3. Dependiendo del microorganismo y si corresponde, se trata el preparado con
lisozimas para luego eliminarlas con agua. Se deja secar y se deshidrata
nuevamente.
4. Se agrega la sonda especifica marcada sobre cada pocillo+
5. Se coloca el portaobjeto dentro de una cámara húmeda a levada temperatura,
el tiempo necesario para que ocurra la reacción de hibridación
6. Se realizan los lavados correspondientes.
7. Se visualiza al microscopio de fluorescencia.
Esta técnica permite la detección, identificación y el recuento de bacterias.

Reacción de polimerización en cadena (PCR)

Es una reacción enzimática que permite la amplificación in vitro de una secuencia de

ADN específica, a través de ciclos repetitivos, que producirán millones de copias de
dicha secuencia de manera rápida, eficiente y sin recurrir al clonado. Utiliza la ADN
polimerasa.
Dicha amplificación incrementa la sensibilidad en la detección de secuencias de ADN
específicas presentes en la muestra.

279
La PCR utiliza secuencias cortas de nucleótidos, u oligonucleótidos, sintéticos
llamados cebadores o primers; los cuales se unirán de forma específica a las dos
hebras del ADN flanqueando la región de interés.
Un ciclo de PCR consta de:

Al final de n ciclos, se obtendrá un máximo teórico de 2n moléculas de ADN doble

banda que resultaran ser copias de la secuencia de interés.
La técnica nos permite:
• Detectar microorganismos específicos en un muestra
• Estimar la diversidad microbiana
• Estudiar la actividad enzimática.

PCR especifica

Consiste en el uso de un par de primers específicos generando un producto de

amplificación único, específico para un microorganismo.
La elección de los primers es crítica para la amplificación exitosa. Los mismos
pueden ser elegidos:
✓ Investigando en la literatura
✓ A partir de librerías genómicas
✓ Por secuencias conocidas de ADN en la bacteria de interés
Normalmente, están conformados por 20-22 nucleótidos.
Ej.: Para detectar E. coli se utilizan primers específicos diseñados a partir del gen lam
B; que codifica para un proteína de la membrana externa.
Es relativamente fácil de implementar en cultivos puros pero adquiere demasiada
dificultad en mezclas complejas. Se emplea en la identificación de microorganismos
viables pero no cultivables; como patógenos.

1. Se extrae el ADN de la muestra

2. Se realiza una PCR especifica; de ser posible trabajar siempre con un control
(+) y (-)
3. Los producción de amplificación son trasferidos a un gel de agarosa en donde
se efectuara una electroforesis.
4. Al finalizar la corrida, se revelan las bandas contenidas en el gel por tinción.
Marcador de talla: Se emplea para verificar el correcto tamaño del producto de
amplificación

La PCR también se emplea en la identificación de virus. Para un virus ARN ss, se

emplea la PCR-transcriptasa reversa mediante la cual se obtiene una molécula de

280
ADN que resulta ser la copia del genoma viral y se procede de igual manera que en
una reacción de PCR convencional.

PCR múltiple

Utiliza un juego de primers específicos los cuales, en condiciones adecuadas,

producirán múltiples productos de amplificación. De esta forma, al contar con más
productos de amplificación diagnósticos, la identificación de una especie microbiana
en particular se vuelve más precisa y segura.

RAPD (Ramdom amplified polymorphic DNA)

Es un método de PCR basado en la utilización de un único primer de secuencia

aleatoria, conformado por 10 nucleótidos, y una temperatura de annealing
suficientemente baja como para que el cebador hibride con el ADN blanco en un
número elevado de regiones. De esta forma se obtendrán productos de amplificación
de diferentes tamaños, los que proporcionaran un perfil de bandas característico.

PCR-ARDRA (Análisis de fragmentos de restricción del ADNr amplificado)

Consiste en la amplificación del gen, que codifica para el ARNr 16s, y posterior
digestión del amplificado con endonucleasas de restricción. Estas enzimas actuaran
sobre el ADNr amplificado en sitos específicos, llamados puntos de restricción que
aparecen de forma aleatoria, produciendo fragmentos.
Dichos fragmentos, luego de ser separados por electroforesis y revelados, originaran
un perfil de bandas que puede ser comparado con los perfiles de microorganismos
patrones con el fin de identificar el organismo bajo estudio.

Técnicas de observación de hongos

El estudio y la taxonomía de los hongos se hacen en base a los caracteres

morfológicos:
I. Macroscópicos
II. Microscópicos

Caracteres macroscópicos: Se refieren a la morfología del cuerpo del hongo o al

aspecto de la colonia. Incluye todas las características que se pueden observar a
simple vista como:
• Forma • Consistencia • Reverso del
• Aspecto • Tamaño crecimiento
• Color • Estructura

Caracteres microscópicos: Se estudian empleando técnicas de observación.

➢ Observación con lupa: Permite observar hongos de grandes dimensiones sin
necesidad de recurrir a técnicas más complejas.
➢ Observación microscópicas directas: Se efectúan observando el material al
microscopio óptico, junto con gotas de agua destilada o SF, entre un porta y
cubre objeto. También puede usarse gotas de colorantes virales; como rojo
neutro, azul de metileno o azul nitro. Las preparaciones para las
observaciones microscópicas directas pueden realizarse por:

281
 o Disociación: Se realiza cuando el hongo es filamentoso. Se coloca en
un portaobjeto una gota de agua destilada o SF y con el gancho se
toma una pequeña porción del desarrollo del hongo. Se deposita sobre
la gota y se disgrega con agujas de disección. Una mes que el material
se encuentra más o menos homogenizado, se coloca el cubreobjetos.
o Impresión: Se utiliza para montar y disgregar materiales clínicos donde
se visualizara el hongo luego de una coloración. Se coloca una
pequeña cantidad de material; como esputo, entre dos portaobjetos
colocados en cruz y se hace una ligera presión a fin de disgregar el
material.
Para realizar observaciones en fresco se utiliza:

Liquido de montar de Patterson: ´Para aquellos casos en donde se necesite aclarar la

preparación sin modificar la morfología o el color de los elementos
✓ Solución de Acetato de potasio ✓ Alcohol 96°
✓ Glicerina ✓ CuSO4
Colorante de Gueguen: Con este colorante, algunos elementos del hongo aparecen
bien diferenciados y coloreados.
✓ Ácido láctico: Aclararte y fijador.
✓ Sudan III: Colora las grasas de rosa o rojo
✓ Azul cotton: Da color al fondo y es tomado por el protoplasma joven y la pared
celular.
✓ Solución iodo alcohólica: Colorea el glucógeno de caoba y el almidón de azul

Efectos del medio ambiente sobre el crecimiento de microorganismos

Temperatura

Para determinar las temperaturas cardinales:

1. Se siembra una alícuota medida de un cultivo puro en una serie de tubos que
contiene un medio apropiado
2. Se mide la densidad óptica (DO), por un método turbidimetrico, al tiempo cero
y se incuba cada tubo a una temperatura diferente, de manera de cubrir un
amplio rango de valores a los cuales es probable observar crecimiento, por un
día.
3. Se determina el crecimiento en cada tubo midiendo la DO.
4. Se grafica DO en función de la temperatura de incubación pudiéndose
determinar las temperaturas cardinales.

Para determinarla tasa de muerte térmica:

1. Se transfiere una alícuota medida de un cultivo puro a una serie de tubos

estériles.
2. Se coloca cada tubo en baños de agua de diferentes temperaturas durante 10
minutos. Las temperaturas empleadas deben ser superiores a la Tmax
tolerada por el microorganismo.

282
 3. Al finalizar el tiempo, se toma una ansada (con ansa calibrada) de cultivo de
cada tubo y se lo siembra por estrías en una placa de un medio agarizado
adecuado.
4. Se incuba a temperatura optima y se observa el desarrollo luego de un tiempo
adecuado.

La tasa de muerte térmica se define como la menor temperatura que mata toda la
población en 10 minutos.

ph

Para determinar el rango de pH en el que crece un microorganismo:

1. Se prepara una serie de tubos con medios de cultivo apropiados en los cuales
se ha ajustado previamente diferentes valores de Ph utilizando cantidades
diferentes de:
a. K2HPO4 – Ácido cítrico para cubrir el rango de pH que va de 3 a 8.
b. Ácido borico – NaOH para cubrir el rango de pH que va de 8,5 a 10.
2. Se siembra, cada tubo, con una alícuota medida de un cultivo puro y se mide
DO a tiempo cero
3. Se incuba a temperatura óptima por un tiempo adecuado. Al finalizar el
mismo, se determina el crecimiento midiendo nuevamente DO.
4. Se grafica DO en función del pH del medio pudiéndose determinar el rango de
pH al que crece el microorganismos asignado los valores mínimos, máximos y
óptimos.

Presión osmótica

Para determinar el efecto de la presión osmótica:

1. Se siembra alícuotas idénticas y medidas de un cultivo puro en 3 tubos que

contienen un medio adecuado pero con sacarosa al 0,4 , 4 y 40 %
respectivamente. Inmediatamente, de cada tubo se toma una ansada (con
ansa calibrada) de la suspensión de células y se la siembra por estriación en
un tercio de una placa de un medio de cultivo agarizado y adecuado. La caja
se rotula como tiempo cero.
2. Luego de una hora de contacto de las células con las soluciones de sacarosa,
se repite las operaciones anteriores y se rotula la caja. El procedimiento se
repite hasta pasar las 24 horas.
3. Cuando todas las placas estén sembradas, se las incuban a un tiempo y
temperatura óptimos. Se observe el desarrollo de colonias en cada uno de las
sectores de las cajas.

También se puede determinar el efecto del NaCl a concentraciones de 0,3, 3 y 30 %.

Tensión superficial

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Para determinar el efecto del Tween 80:

1. En tubos que contienen un medio de cultivo adecuado se agrega distintas

concentraciones del detergente.
2. Se siembra, en cada tubo, una alícuota idéntica y medida de un cultivo puro y
se incuba por un tiempo y temperatura óptima.
3. Se observa, en cada tubo, la densidad del crecimiento y la forma en que este
se manifiesta; siendo superficial, en forma de película o distribuido en todo el
tubo.

Radiaciones UV

Para determinar el efecto de las radiaciones UV:

1. A partir de un cultivo puro, se siembra cinco placas de un medio agarizado

adecuado de modo que:
a. Una se usara como control negativo.
b. Una se irradiara con luz UV de forma directa por 10 minutos.
c. Una se irradiara con luz UV de forma directa por 30 minutos.
d. Una se irradiara con luz UV pero colocando entre el haz de luz y la
superficie de la placa un disco de cartón estéril.
e. Una se irradiara con luz UV pero con la tapa de vidrio puesta.
2. Luego de la irradiación, se cubren las cajas con sus respectivas tapas y se
incuban por un tiempo y temperatura adecuados.
3. Al finalizar la incubación, se determina el número de colonias y se compara
con la placa control.

Fagos en la industria láctica fermentativa

Los fagos que infectan las bacterias que pertenecen a los cultivos iniciadores
representan una de las principales causas de los problemas de acidificación en la
industria láctica.
La actividad acidificante y proteolítica de las bacterias lácticas permite orientar la
selección de los fermentos de acuerdo a las características deseadas para el
producto final. Estos parámetros se ven afectados por la presencia de bacteriófagos,
los cuales pueden ingresar vehiculizados por el aire, insumos, personal o la leche.
La vía de mayor peso, responsable de la contaminación de bacteriófagos, es el uso
de cultivos con cepas lisógenas y la presencia de bacterias lácticas salvajes en la
leche cruda. En cualquiera de los dos casos y bajo ciertas condiciones, se liberaran
profagos que se encontraba contenidos en los genomas de las cepas infectando a las
cepas sensibles del cultivo iniciador.

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