PRÁCTICA 3: MANEJO DEL AUTOCLAVE
1. Introducción
1.1 Fundamento teórico
La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo que asegura la
ausencia absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilización deficiente o manipulación
incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a contaminaciones, resultados erróneos o
pérdida del material biológico. Por ello, se requieren buenas prácticas de laboratorio para su
adecuado manejo. La esterilización por calor seco o húmedo son los métodos que se utilizan con
mayor frecuencia en el Laboratorio de Microbiología. El calor seco destruye a los
microorganismos por oxidación, por ejemplo, al exponerlos directamente a la flama de un
mechero o en horno a 150-180°C durante 2 horas. Estos métodos se aplican en la esterilización
de asas de inoculación y para todo tipo de material de vidrio y quirúrgico. Los procesos con calor
húmedo afectan la estabilidad de estructuras celulares y proteínas; se aplican para esterilizar
medios de cultivo, soluciones termoestables, materiales de vidrio y cultivos bacterianos que se
desechan. El equipo de uso común es la autoclave, que utiliza vapor de agua a presión (2 atm);
con esta presión el material alcanza una temperatura de 121 °C y si se mantiene durante 20
minutos se asegurará la inactivación de endosporas, que son las estructuras bacterianas más
resistentes al calor.
❖ Programa del autoclave (ciclo corto):
- Temperatura: 121ºC
- Tiempo: 15-20 minutos
- Presión: 2 atm
Estas condiciones garantizan que se va a llevar a cabo la esterilización de los materiales y por
tanto, la muerte de los microorganismos de dichos materiales.
❖ ¿Cómo funciona?
- Para llevar a cabo la esterilización, el autoclave somete a los aparatos a una alta
presión y temperatura. El agua se empieza a calentar, y una vez llega a 121ºC la temperatura
permanece constante. Al aumentar la temperatura aumenta la presión.
- Cuando pase el tiempo programado, comenzará a bajar la temperatura y por tanto
también lo hará la presión.
- El autoclave se podrá abrir cuando la presión alcance la ambiental, es decir, 1 atm.
- Tiempo total: 1h-1:30h
❖ ¿Qué materiales se puede esterilizar?
✓ Vidrio
✓ Medios de cultivo
X Plástico (sí se pueden las puntas de micropipetas excepto las de filtro o desplazamiento
positivo)
X Metal (excepto si es de acero inoxidable o acero quirúrgico)
Todos los materiales que se introducen en el autoclave deben estar cerrados (para evitar su
contaminación al abrir el autoclave). Sin embargo, no debe estar herméticamente cerrado, ya
que el vapor no entraría dentro evitando así la esterilización del material.
❖ Control de esterilización.
Es necesario tener en cuenta unos controles de esterilización para comprobar que los
materiales se han esterilizado adecuadamente.
Control físico → que los parámetros hayan llegado a los valores adecuados. Lo lleva
incorporado el propio autoclave.
- Termómetro para la temperatura
- Barómetro para la presión
- Cronómetro para el tiempo
Control químico: Se utilizan productos químicos o papeles indicadores que a una
determinada temperatura cambian de color
- Cinta de autoclave: debe cambiar de color.
- Bolsa de esterilización: El color amarillo debe cambiar a marrón.
- Tiras de control: (es necesario situarlo cerca del material para comprobar que el vapor
ha llegado hasta ese lugar)
Biológico: Consiste en tubos que contienen esporas de bacterias cuya resistencia al
calor es conocida y un medio de cultivo, tras la esterilización estos tubos se incuban
comprobándose si existe crecimiento o no.
1.2 Objetivos
Que el alumno conozca los principios generales de las técnicas de esterilización de materiales
de vidrio y medios de cultivo de uso común en biología molecular y el efecto de las condiciones
de asepsia en el control de la contaminación microbiana.
Aprender el funcionamiento del autoclave. Para ello se llevará a cabo una práctica para
esterilizar diferentes materiales y se comprobará mediante los controles de esterilización que
se ha realizado correctamente.
2. Procedimiento
2.1 Material general
Lista de materiales
- Autoclave
- Puntas de micropipeta de diferentes tamaños
- Bolsa de esterilización
- Selladora
- Cinta de autoclave
- Controles de esterilización (tiras de control)
2.2 Procedimiento
- Bolsa con las micropipetas
1. Introducir las puntas de micropipeta en la bolsa
2. Sellar la bolsa con una selladora
- Autoclave:
1. Comprobar que las válvulas de vapor y agua estén correctamente cerradas
2. Llenar con agua del grifo hasta el nivel de la gradilla con agujeros
3. Meter los utensilios o materiales preparados anteriormente (con o sin cesta, se debe
llenar sin bloquear las válvulas de arriba)
4. Cerrar la autoclave (girando en el sentido de las agujas del reloj al máximo, y un cuarto
de vuelta más)
5. Encenderlo con las programaciones adecuadas. (Es recomendable que detrás del
autoclave haya un desagüe o bandeja para evitar derrame de agua)
6. Cuando pase el tiempo (1h-1:30), la temperatura bajará y por tanto también la presión.
El autoclave se abre cuando llega a 1 Atm de presión.
7. Se sacan los materiales esterilizados y se comprueba que se ha llevado a cabo
correctamente el proceso mediante los controles de esterilización.
3. Resultados
4. Conclusiones