1.
IDENTIFICACIÓN BACTERIANA MEDIANTE API (API 20 E)
1. FUNDAMENTO
La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia
Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram -. Básicamente consta de 21 tests bioquímicos estandarizados y
miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir
realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos
sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta. La prueba número 21, la oxidasa, se hace
de forma independiente a la tira.
2. OBJETIVO
Identificación bacteriana.
3. MATERIAL
Asa de siembra
Pipeta Pasteur
Micropipeta automática
Muestra bacteriana
Mechero Bunsen
Solución salina estéril
Tubo estéril de 10 ml
Parafina estéril
Agua destilada
Tira API
4. TÉCNICA.
1. A partir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una suspensión en 5 mL de solución salina o 5 mL
de agua estéril.
2. Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula (cada pocillo tiene un tubo y una cúpula, parte
aerobia), de todos los pocillos.
3. Llenar hasta la cúpula de los pocillos CIT, VP, GEL con la suspensión de bacterias.
4. Cubrir con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis.
5. Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara
para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación.
6. Incubar a 37 °C durante 18-24 h.
7. Tras la incubación se anotan los resultados inmediatos, es decir, los que no requieren ser revelados.
8. Determinadas pruebas requieren ser reveladas. Para el revelado se tienen que tener en cuenta dos criterios:
Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no hay que añadir reactivos.
Cuando esto ocurre, se hacen otros tipos de API como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver
determinados metabolismos especiales.
Si la glucosa es positiva y/o tres o más tests son positivos se revelan los test que requieren reactivos:
TDA: Añadir una gota de FeCl3 10 %. Si es marrón-rojizo es positivo.
VP: Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2 H5 OH). Esperar 10 minutos y si
es rosa o rojo es positivo. Si aparece el rosa después de 10 minutos es negativo.
IND: Añadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-cinamaldehido. Añadir 1 gota de reactivo James.
Si aparece un rosado difuminado es positivo.
Oxidasa: Colocar una colonia con el asa de siembra en la zona reactiva. Esperar 20-60 segundos y mirar el
patrón de color.
Reducción de nitratos a nitritos + nitrógeno: GLU + 1 gota de NIT-1 y NIT-2. Esperar 2-5 minutos, si vira a rojo
es positivo. Si aparecen burbujas y amarillo, es negativo. Si es amarillo es que hay producción de nitrógeno.
Agregar 2 a 3 mg de reactivo de Zinc y esperar 5 minutos. Si es amarillo es positivo a nitrógeno y si es naranja-
rosa es negativo.
5. RESULTADOS OBTENIDOS Y OBSERVACIONES
Interpretación de los resultados: La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de
cada pocillo con los de las tablas de lectura (ver tablas de lectura. No aprender de memoria), y anotando el
resultado como positivo o negativo.
Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. Los pocillos están separados
en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la
oxidasa).
Para obtener el perfil numérico de 7 cifras, a cada pocillo se le dará el valor 0, 1, 2 ó 4, de acuerdo a los
siguientes criterios:
Si la reacción es negativa se pone 0.
Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero.
Se suman los valores de cada triplete. Con las sumas de los siete tripletes se obtiene un código de 7 cifras.
Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata. Para realizar esta operación hay
programas informáticos.