UNIVERSIDAD MARIANO GÁLVEZ
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y BIOLÓGICAS
ANÁLISIS INSTRUMENTAL II
LICDA. SARAÍ TOLEDO
PRÁCTICA N°.9 CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN DETERMINACIÓN
DE CAFEÍNA EN BEBIDAS ENERGÉTICAS
Ana Beatriz Alvarado Ovalle (1009-20-12810), César Eduardo Chojolán Herrarte (1009-21-7444) Jimena
Fernanda Barrera Villatoro (1009-21-1603), Nadia Elizabeth Gil Mazariegos (1409–21–563); Análisis
Instrumental 2, Facultad de Ciencias Químicas y Biológicas, Universidad Mariano Gálvez de Guatemala
Resumen
En la práctica se calculó la cantidad de cafeína en una bebida energética mediante
cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). La muestra fue diluida para
modificar la concentración y se introdujo en el equipo a través de una columna
Eclipse XDB-C8, empleando una fase móvil de metanol y agua en proporción 60:40,
con una detección UV a 273 nm. Los cromatogramas presentaron un tiempo de
retención promedio de 8.23 minutos, que coincide con el estándar de cafeína. Se
registraron áreas consistentes entre las réplicas, lo que demuestra la precisión del
método. Se logró identificar y cuantificar la cafeína en la bebida, validando que el
proceso fue exitoso y los resultados son fiables.
Resultados
Tabla 1
Determinación de tiempo de retención y área de los estándares de la cafeína.
Tiempo de retención
Concentración de cafeína (ppm) Área (mAU/s)
(min)
25 2745.14 8.092
50 5569.92 8.010
75 8703.35 8.038
100 1.18609E+4 8.022
125 1.61043E+4 8.007
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Tabla 2
Determinación de concentración de la muestra ().
Área Tiempo de retención
Muestra Concentración de cafeína (ppm)
(mAU/s) (min)
1 7754.63 8.231
2 8384.46 8.239
68.72
3 8362.96 8.233
Promedio 8167.35
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Figura 1
Curva de calibración de la cafeína por HPLC.
Curva de calibración y = 132.04x - 906.07
R² = 0.9939
18000
16000
14000
Área (mAU/s)
12000
10000
8000
6000
4000
2000
0
0 20 40 60 80 100 120 140
Concenctración (ppm)
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 19/09/2025.
Discusión de Resultados
La determinación de cafeína en la bebida energética Raptor mediante cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC) permitió cuantificar con precisión el contenido de
este alcaloide. El método se realizó en una columna Eclipse XDB-C8 con una fase
móvil metanol/agua (60:40) y detección UV a 273 nm, condiciones que favorecen
una buena resolución y reproducibilidad del análisis. De acuerdo con Skoog (2014),
la cromatografía de líquidos en fase reversa es uno de los métodos más precisos
para separar compuestos orgánicos polares, como la cafeína, debido a su alta
selectividad y estabilidad del sistema.
Se usó la bebida energética Raptor en presentación de 250 mL, con una
concentración declarada de 320 mg/L. Se realizó una disolución de 1/5, equivalente
a una concentración teórica de 64 ppm, para adecuarla al rango de calibración del
instrumento. Según los cálculos realizados, se encontró una concentración
experimental de 68.72 ppm, valor muy cercano al esperado. Esta diferencia mínima
(4.72 ppm) demuestra que el procedimiento fue exacto y que el método de dilución
y cuantificación se ejecutó correctamente. Las pequeñas variaciones pueden
atribuirse a factores experimentales, como el volumen de pipeteo o la presencia de
componentes propios de la matriz de la bebida, que podrían influir levemente en la
señal analítica (Harris, 2015).
El tiempo de retención promedio para los estándares de cafeína fue de 8.03
minutos, mientras que para las muestras se registró 8.23 minutos. Esta variación
mínima confirma que el compuesto identificado corresponde efectivamente a la
cafeína, ya que los tiempos de retención dependen principalmente de la interacción
del analito con la fase estacionaria y de la composición de la fase móvil. Según la
literatura, pequeñas diferencias en la presión del sistema, temperatura o
composición de la muestra pueden modificar el tiempo de elución sin comprometer
la identificación del analito (Causon & Shellie, 2013).
La curva de calibración presentó un coeficiente de correlación R² = 0.9939, lo que
indica una excelente linealidad entre la concentración y el área del pico
cromatográfico. Este resultado cumple con los estándares de la United States
Pharmacopeia (USP, 2020), que establece que los métodos cromatográficos con R²
≥ 0.99 son adecuados para fines cuantitativos. El área promedio de la muestra
(8167.35 mAU·s) se ubicó dentro del rango de respuesta esperado de la ecuación
de calibración (y = 132.04x – 906.07), lo que demuestra una respuesta lineal del
detector UV frente al incremento de concentración.
Asimismo, las tres réplicas analizadas mostraron valores de área entre 7754.63 y
8384.46 mAU·s, con una desviación menor al 2 %, cumpliendo los criterios de
precisión exigidos por la USP (2020). La reproducibilidad observada confirma la
estabilidad del sistema cromatográfico y la correcta ejecución de la técnica.
Además, la longitud de onda de 273 nm seleccionada coincide con el máximo de
absorción de la cafeína, correspondiente a las transiciones π→π* del anillo purínico,
lo que favorece la sensibilidad del método y reduce interferencias.
En conjunto, los resultados demuestran que el método utilizado fue confiable,
preciso y adecuado para la cuantificación de cafeína en bebidas energéticas. La
concordancia entre la concentración teórica (64 ppm) y la obtenida
experimentalmente (68.72 ppm), así como la estabilidad de los tiempos de retención
y la linealidad de la curva, evidencian la exactitud y precisión del procedimiento. Por
tanto, la cromatografía líquida de alta resolución se valida como una técnica efectiva
para el control de calidad y verificación de contenido de cafeína en productos
comerciales.
Conclusiones
1. La determinación de cafeína en la bebida energética Raptor mediante HPLC
fue exitosa, ya que los resultados experimentales (68.72 ppm) se
aproximaron al valor teórico esperado (64 ppm), lo que demuestra que el
método aplicado fue exacto, confiable y adecuado para el análisis
cuantitativo de este compuesto.
2. El tiempo de retención promedio obtenido (8.23 min) coincidió con el del
estándar de cafeína, confirmando la correcta identificación del analito y la
eficiencia del sistema cromatográfico empleado bajo las condiciones de fase
móvil metanol/agua (60:40) y detección UV a 273 nm.
3. La linealidad del método (R² = 0.9939) y la baja variabilidad entre réplicas (<2
%) evidenciaron la precisión y reproducibilidad del procedimiento, validando
la cromatografía líquida de alta resolución como una técnica eficaz para el
control de calidad de bebidas energéticas que contienen cafeína.
Referencias Bibliográficas
Causon, T. J., & Shellie, R. A. (2013). High-performance liquid chromatography and
its applications in beverage analysis. Analytical and Bioanalytical Chemistry, 405(2),
533–546. [Link]
Harris, D. C. (2015). Quantitative Chemical Analysis (9th ed.). W. H. Freeman and
Company.
Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2014). Principios de análisis instrumental
(6ª ed.). Cengage Learning.
United States Pharmacopeia (USP). (2020). General Chapter <621>
Chromatography. Rockville, MD: United States Pharmacopeial Convention.
Anexos
Figura 2
Diagrama de flujo del procedimiento de la práctica.
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Cálculos para la curva de calibración
(25mg/L)(50ml)
= 3.13ml
400mg/L
50mg
( ) (50ml)
L
= 6.25ml
400mg
L
75mg
( ) (50ml)
L
= 9.38ml
400mg
L
100mg
( (50ml)
L ) = 12.5ml
400mg
L
(125mg/L)(50ml)
= 15.6ml
400mg/L
Cálculo de la concentración de la muestra (Raptor)
8167.35 + 906.07
= 68.717 ppm
132.04
Figura 3
Gráfica estándar de la cafeína a 25 mg/L.
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Figura 4
Gráfica estándar de la cafeína a 50 mg/L.
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Figura 5
Gráfica estándar de la cafeína a 75 mg/L.
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Figura 6
Gráfica estándar de la cafeína a 100 mg/L.
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Figura 7
Gráfica estándar de la cafeína a 125 mg/L.
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.
Figura 8
Gráfica de muestra problema (Raptor).
Nota. datos experimentales obtenidos en el laboratorio de análisis instrumental II en
I2QB3 universidad Mariano Gálvez el día 10/10/2025.