NEMÁTODOS

1.​ CARACTERÍSTICAS
Nematodos (“nema” hilo y “odos” aspecto de): filo (25.000 esp)
-​ Cuerpo alargado, cilíndrico y no segmentado, con simetría bilateral.
-​ Cutícula
-​ Vida libre y parásitos
-​ Reproduccion sexual, parteogensis o fragmentación
MORFOLÓGICAS
-​ No poseen el cuerpo segmentado en anillos (como los anélidos = lombrices).
-​ Diferencia: anélidos interactúan con los moluscos y los nemátodos con los insectos.
-​ Son animales microscópicos.
-​ El tamaño de los nematodos suele variar entre 2,5 mm y micras.
-​ En el suelo se encuentran nematodos de 7 mm - 5 cm
-​ En el océano alcanzan los 8 m.
-​ El macho suele suele ser de menor tamaño que la hembra.
-​ Tiene el extremo posterior curvado con espículas copulatorias.
-​ Extremo anterior del cuerpo
-​ Ganchillos orales, dientes o placas en la cápsula bucal - Sirven para unirse a los tejidos
-​ Proyecciones de la cutícula - cerdas o papilas de naturaleza sensitiva = anfidios, fasmidios
o deiridios
-​ Cutícula: superficie exterior muy resistente
-​ Composición escleroproteica: la esclerotina es un componente de la cutícula de los
artrópodos que forma el exoesqueleto de quitina.
-​ Función - resistir la presión hidrostática ejercida por el fluido del pseudocele (=
pseudoceloma)
-​ Bajo la cutícula
-​ Varias capas musculares
-​ Pseudocele: espacio compuesto de líquido que funciona como un esqueleto hidrostático
-​ Favorece tanto la distribución de nutrientes como la recolección de productos de
excreción.
-​ Todos los órganos flotan dentro de este líquido.
-​ Los órganos internos consisten en
-​ Un cordón nervioso: ganglios conectados alrededor del esófago
-​ Un sistema digestivo bien desarrollado: boca, faringe muscular, un intestino largo no
muscularizado, un recto corto y un ano.)
-​ Sistema excretor particular: Consiste en un conjunto de células (células rennette) que expulsan los
residuos de nitrógeno a través de la pared del cuerpo.
-​ No tienen sistema circulatorio ni respiratorio: para mover el líquido interno deben mover el
cuerpo para hacer presión hidrostática.

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SISTEMAS REPRODUCTIVO
-​ Tipo de reproducción
-​ Reproducción bisexual: dependiendo del grupo y de las condiciones.
-​ Partenogénesis: Los óvulos se desarrollan sin fecundación, siendo todos los descendientes
hembras .
-​ Fragmentación: se rompe y se generan 2 hijas donde las hembras tienen una espina hacia
afuera y los machos no tienen nada.
-​ La mayoría son dioicos (diformismo sexual).
-​ El macho es más pequeño que la hembra y tiene espinas copuladoras.
-​ La fecundación es interna y los huevos son retenidos en el útero hasta su puesta.

TIPO DE VIDA
- Presentes en todos los hábitats. Pueden ser de:
-​ Vida libre (marinos, agua dulce y terrestres)
-​ Ambientes húmedos, ya que viven en la película de agua que rodea los granos de arena
-​ Parásitos (de plantas y animales): metabólicamente dependientes de un hospedador
-​ Parásitos humanos: provocan enfermedades como la triquinosis, filariasis, etc
- Ciclo biológico:
-​ Directo: nemátodo de vida libre, su desarrollo ocurre en el huevo.
-​ Indirecto: se desarrolla en diferentes hospedadores hasta alcanzar el estado adulto. Es un
desarrollo secundario para adaptarse al parasitismo.

ADAPTACIONES ALIMENTARIAS
-​ Han desarrollado diversas adaptaciones alimentarias que pueden verse reflejadas en las
características anatómicas del área de la boca.
-​ Especies zooparásitas: varios mecanismos de parasitismo (aspiración, absorción de tejidos
destruidos, absorción de contenido intestinal y absorción de líquidos corporales).
-​ Especies fitoparásitos: tienen un órgano llamado estilete que punza el tejido vegetal
(normalmente la raíz, nutriéndose de ella).
-​ Especies depredadores de otros nemátodos poseen una boca o cavidad denominada
estoma que le permite sujetar a su presa y succionar el líquido interno.

ADAPTACIONES FILOPARÁSITAS
-​ Adaptaciones evolutivas para el parasitismo vegetal:
-​ Desarrollo de un estilete protrusible
-​ Marcadas modificaciones morfológicas y fisiológicas del esófago.
-​ Las células de la glándula secretora en el esófago son la principal fuente de secreción involucrada
en el parasitismo vegetal
-​ Estas células han sido ampliadas a medida que los nematodos han ido evolucionando desde
nematodos de vida libre hasta nematodos fitopatógenos.
El nematodo se pone en contacto con la pared celular y a partir de las glándulas secretoras de su estómago,
secreta estímulos que son captados por los receptores celulares. Estimula la producción de señales de
traducción de genes en el núcleo, dando lugar a la expresión de proteínas dañinas.

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 2.​ CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA DEL FILO NEMATODA
●​ Clasificación por sus características morfológicas y biológicas:
○​ Clase Adenophorea
-​ Carecen de fasmidios, anfidios en forma de sacos bien desarrollados, tienen 5 o más
glándulas esofágicas. Viven en el medio marino y en el terrestre.
○​ Clase Secernentea
-​ Poseen tanto fasmidios como anfidios y sólo tienen 3 glándulas esofágicas. La
mayoría de las especies son parásitas aunque también incluyen especies de vida
libre en el medio terrestre.
●​ Clasificación molecular: criterios de clasificación basados en el análisis molecular de genes
○​ Clase Enoplea: incluye nemátodos de vida libre y parásitos de plantas.
○​ Clase Chromadorea: incluye individuos de hábitat muy diversos (fondos marinos, suelos
criogenizados o terrestres).

CLASE ADENOPHOREA
Subclase Enoplida
-​ Orden Enoplida
-​ Ciclo de vida directo
-​ Todos los estadios son de vida libre en ambientes marinos.
-​ Son carnívoros o consumidores de diatomeas y algas.
-​ Son el alimento idóneo para gran cantidad de organismos marinos.
-​ Menor interés biotecnológico.
-​ Orden Dorylaimida:
-​ Son organismos de vida libre en suelos húmedos.
-​ La mayoría son de vida libre - se alimentan de bacterias, hongos y algas del suelo.
-​ Otros muchos son depredadores.
-​ Algunos son parásitos fúngicos o vegetales con estiletes (adaptados para perforar hifas de
hongos y células vegetales).
-​ Otros pueden ser utilizados como bioindicadores de la calidad de los suelos o el agua del
medio en el que viven - midiendo diversidad y abundancia en ambientes contaminados.

CLASE SECERNENTEA
Subclase Rhabditia
-​ Orden Rhabditida
-​ Bacteriófagos (y entomopatógenos)
-​ Organismo modelo: C. elegans
-​ Patógenos de insectos: Steinernematidae y Herorhabditidae
-​ Orden Strongylida
-​ Parásitos de equinos, porcinos, perros y gatos, transmitidos por mosquitos.

Subclase: Spirurida
-​ Orden Spirurida
-​ Parásitos animales transmitidos por artrópodos
-​ Transmiten la filariasis linfática (alteraciones en el sistema linfático).
-​ El proceso se divide en dos etapas en función del huésped.

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HUMANOS: el mosquito pica al humano para alimentarse y la larva L3 se introduce en la piel. Las larvas
adultas crecen dentro del sistema linfático, producen microfilarias encapsuladas que viajan por los vasos
linfáticos y sanguíneos.
MOSQUITO: Cuando otro mosquito pica al humano, ingiere estas microfilarias. Las filarias se desprenden
de la cápsula y penetran en el estómago medio del mosquito y migran a sus músculos torácicos. Estas
filarias se desarrollan hasta que la larva L3 emigra a la cabeza y probóscide del mosquito listo para otra
infección.

-​ Orden Ascaridida
-​ Parásitos intestinales
-​ Ascaridae (Ascaris lumbricoides)
-​ Toxocaridae (Toxocara canis): se acumulan en el sistema circulatorio y en el corazón
generando la muerte del huésped - no afecta a humanos
-​ Anisakidae (Anisakis simplex) : No es un parásito humano pero cuando lo ingerimos en el
pescado, se altera ya que necesita un huésped mamífero marino.

CLASE SECERNENTEA
Subclase: Diploasteria
-​ Orden Tylenchida
-​ Parásitos de plantas (endoparásito: se encuentra dentro del huésped)
-​ Principales géneros: Heterodera, Globodera (formadores de quistes) Meloidogyne ( parásito
formador de agallas y deforman las raíces)
-​ Ciclo de nematodos formadores de quistes:
El nematodo adulto entra en la raíz (endoparásito) y forma los sincitios (células gigantes formadas por
agrupación de dos o más células). Este sincitio es una deformación de la raíz que sirve de nutriente para la
larva. Tanto la larva masculina como femenina se introducen en el sincitio y a medida que pasa el tiempo,
el sincitio masculino comienza a degenerar mientras que dentro del femenino comienzan a producirse
huevos.
Estos huevos pueden seguir dos caminos: pueden ser depositados por la larva madre sobre una masa
gelatinosa e infectar raíces jóvenes, o pueden permanecer en el interior del sincitio hibernando hasta que
sean secretadas de forma libre al suelo y comiencen a buscar un nuevo huésped.

3.​ ORGANISMO MODELO: C Elegans

BIOLOGÍA
-​ Vida libre, habita en suelos de regiones templadas, se alimenta de bacteria y materia orgánica en
descomposición.
-​ Adulto: 1mm, y cuerpo transparente (nos permite observación al microscopio de cualquier cambio
o mutación)
-​ En laboratorio los adultos son cultivados sobre placas de agar y alimentados con E. coli.
-​ Resistente a la congelación: crioconservación por largos periodos.
-​ Ciclo de 3-4 días; vida total de 12-20 días
-​ Progenie de 300 individuos.
-​ Fases:
-​ L1 = siempre 550 células de las cuales, conocemos la función de cada una de ellas.
-​ En etapas adultas (L2, L3) el número de células aumenta hasta 959 – 1031
-​ Etapa DAUER es muy importante porque es una etapa de supervivencia. Cuando la L2 no se
encuentra en condiciones favorables ( no alimento, mucha densidad de nemátodos, variaciones de
T), nos saltamos la fase L3 y se forma Dauer, a partir de la cual se desarrolla L4.

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 -​ La etapa Dauer nos permite congelar las larvas y preservarlas durante largos periodos de tiempo,
ya que esta formación es mucho más resistente a ambientes desventajosos
-​ Dos formas sexuales que difieren en aspecto y estructuras:
-​ Un hermafrodita (autofecundación)
-​ Un macho que puede fertilizar a los hermafroditas (fertilización cruzada - 0.3 %) - solo
para obtener diversidad genética de la población que les permite sobrevivir.
-​ Sus aplicaciones están relacionadas con el estudio de variaciones en determinados genes en
enfermedades y su respuesta a determinados medicamentos para curar enfermedades asociadas
con estas mutaciones.
No obstante, no se puede utilizar ningún organismo modelo para responder a todas las preguntas de
investigación, y trabajar con C. elegans tiene algunas limitaciones (tamaño, etc).

GENÉTICA
-​ Primera propuesta como organismos modelo: Brenner (1974)
-​ Posee capacidad de autofecundación, de forma que las mutaciones son transmitidas a la
descendencia. Además, es muy fácil su mutagénesis usando metilsulfonato de etano.
-​ Fue el primer organismo eucariota multicelular secuenciado (1998)
-​ Genoma: 100 Mpb, 20.444 genes (de 3 kb; se conoce la función de todos ellos) y 5 cromosomas +1
cromosomas (X)
-​ Base para estudios de genética molecular en animales: transcripción, traducción, remodelación de
la cromatina y modificaciones postranscripcionales (ubiquitinación, fosforilación, metilación de
histonas y glicosilación)

VENTAJAS
-​ Cuerpo transparente, nos permite observar al microscopio cambio fenotípicos no observables
desde fuera y además, el desarrollo de sus órganos.
-​ Pequeño tamaño que nos permite cultivar en una placa petri y obtener millones de individuos.
-​ Ciclo biológico muy corto, 2-4 días, obtenemos con facilidad las posteriores generaciones que nos
permite observar las modificaciones sufridas a los largo de las generaciones
-​ Fácil de criar, barato, no es nocivo para los operadores
-​ Gran fecundidad: 300 huevos cada 20 minutos
-​ Tiene reproducción hermafrodita pero existen machos lo cual hace que se puedan producir
mutaciones singulares en el macho y ver el efecto fenotípico en los individuos hermafroditas.
-​ Pueden ser criopreservados gracias a su forma dauer: mantener su viabilidad a largo plazo.
-​ Número y desarrollo de células invariables, conocer el número de células en cada estadío larval.
-​ Inofensivos para los humanos, ya que sobreviven en un rango de temperatura de 15 -25ºC por lo
que cuando se ponen en contacto con nuestra piel mueren.
-​ Gran cantidad de información en bases de datos sobre:
-​ Cada uno de sus genes
-​ Todos los mutantes en los que se han hecho estudios
-​ Toda la investigación que se hace con estos organismos

ENSAYOS DE TOXICIDAD
-​ Se realizan ensayos de toxicidad en [Link] como modelo, para medir la toxicidad de distintos
compuestos, como pesticidas, y observar posibles cambios derivados.
-​ Posee diferentes órganos diana:
-​ Primarios, como el digestivo
-​ Secundarios: reproductivo y nervioso

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 -​ La toxicidad se puede medir
-​ A nivel biológico: en crecimiento, letalidad, reproducción, fertilidad…
-​ A nivel molecular: en la expresión de genes por causa del estrés oxidativo
-​ Se emplea como modelo de estudio de enfermedades como el Alzheimer, Parkinson, obesidad,
estrés de distintos tipos - el 44 % de genes descritos están presentes también en el hombre.

4.​ NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS

CARACTERÍSTICAS
-​ Nematodos que están asociados con bacterias simbiontes, conjuntamente matan al insecto
hospedante.
-​ Todos los estadios del nematodo, excepto el tercer estadio juvenil infectivo (“dauer”), se encuentran
dentro del insecto.
-​ Producen una enfermedad letal en los insectos. No es el nematodo en sí, sino unas bacterias
asociadas al tubo digestivo del nematodo, del género Photorhabdus y Xenorhabdus. El insecto es
colonizado por un estado juvenil 3 que busca nuevos huéspedes cuando ya han agotado los
recursos del huésped anterior.

CICLO BIOLÓGICO
-​ El estado infectivo del nematodo es el tercer estadio juvenil (J3), que vive libre en el suelo
-​ Tienen un tamaño de 500-800 micras y llevan la bacteria simbionte en su tubo digestivo
-​ Los J3 buscan activamente sus huéspedes siguiendo gradientes de concentración de CO2 o
kairomonas presentes en los excrementos.
-​ Los J3 entran al huésped por las aberturas naturales (boca, espiráculos, ano, etc.). Los
Heterorhabditis también pueden atravesar el tegumento
-​ Una vez en el hemocele, los J3 liberan las bacterias simbiontes
-​ Se inicia una batalla entre el sistema inmune del huésped, el nematodo y la bacteria simbionte y
otros microorganismos oportunistas
-​ El nematodo secreta metabolitos que reprimen el sistema inmune del huésped facilitando el
desarrollo de Xenorhabdus y Photorhabdus
-​ La bacteria simbionte secreta toxinas que matan al huésped en 1-2 días y producen antibióticos que
reprimen y matan otros microorganismos que invaden el hemocele.
-​ En la mayoría de los casos los simbiontes colonizan todo el huésped y el nematodo se desarrolla
alimentándose de la sopa de bacterias
-​ En 2-3 semanas la totalidad del huésped es consumido y en este tiempo se producen 2-3
generaciones de NE y rompen el tegumento de la larva
-​ Las larvas J3 se desplazan por el ambiente en busca de nuevos huéspedes para repetir el ciclo.
-​ Un huésped puede producir 105 J3/larva que portan la bacteria simbionte
-​ Cada especie de NE está asociada con una bacteria simbionte específica

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 -​ Formas infectivas: son las larvas J3. Se forman por el desprendimiento de la segunda cutícula
propia de las larvas J2, deja expuesta al exterior la tercera cutícula
-​ Simbiosis: Si el nematodo no llevara asociadas las bacterias simbiontes que se encuentran en el
tubo digestivo, no será capaz de llevar a cabo la infección, (no completaría su ciclo biológico)
-​ Bacteria Xenorhabdus asociado a la familia Steinernematidae
-​ Bacteria Photorhabdus asociado a la familia Heterorhabditidae
-​ Entrada: En la parte intersegmental del abdomen de la larva, la cutícula es más débil y delgada, de
forma que el nematodo puede romper y entrar en la larva, aunque lo normal es que entren por las
aperturas laterales.
-​ Entrada a la cavidad hemofélica
-​ Liberación de la bacteria
-​ La larva huésped muere como consecuencia de la septicemia inducida por la bacteria.
-​ Desarrollo del nematodos primera generación segunda generación
-​ Salida de la tercera generación o forma infectiva
-​ Traslado en busca de nuevos huéspedes.
-​ ENDOTROPIA MATRICIDA: la hembra en vez de liberar huevos, los retiene en su interior. Dentro de
ellos se produce el desarrollo embrionario para generar larvas que atacan a la madre y salen
-​ La diferencia entre género es el género Steinernema y el género Heterorhabditis
-​ Steinernema: es dioico, poseen individuos machos y hembras - tiene que entrar ambos géneros
-​ Heterorhabditis: es hermafrodita, es decir, posee capacidad de autofecundación (un individuo
produce gametos tanto femeninos como masculinos) - factor favorable (un único individuo)

CARACTERÍSTICAS INSECTICIDAS
-​ Bioseguridad: Ser inocuos para el hombres, plantas y animales
-​ No contaminar el medio (no liberar al medio sustancias que puedan producir desequilibrios
biológicos de la poblaciones existentes en esos ecosistemas)
-​ Se pueden aplicar dentro de cultivos utilizando los mismo equipos para los insecticidas (no hay
coste adicional)
-​ Son compatibles con la mayoría de los agentes de control de plagas, compatibles con los enemigos
naturales y plaguicidas químicos
-​ Encuentran al insecto activamente en hábitats ocultos gracias a su capacidad de traslado, son
interesantes para combatir plagas en sitios con difícil acceso
-​ Efecto multiplicativo: entrando pocos nematodos en un huésped obtenemos millones de larvas en
ese huésped. Un efecto multiplicativo del ingrediente infectivo que nos permite obtener un
aumento considerable de las formas infectivas.

FACTORES LIMITANTES
-​ Entrada en el insecto
-​ Espiráculos: barreras mecánicas
-​ Boca: pueden vomitarlos o mandíbula puede matarlos
-​ Ano: defecando, fluidos del intestino
-​ Interacción con el sist inmune del insecto
-​ Comportamiento en la búsqueda: 2 estrategias
-​ Emboscada: el nematodo parado y espera que pase cerca el huésped
-​ Búsqueda activa: en la superficie líquida, con concentración de CO2 u hormonas de
excrementos del insecto

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Ejemplos de nematodos entomopatógenos
Gen. Steinernema: (31 especies)
1. Steinernema carpocapsae
-​ Es el nematodo más empleado como modelo biotecnológico.
-​ Estrategia de infección: emboscada
-​ Se emplea contra los siguientes tipos de insectos: Lepidópteros, Coleópteros, Dictiópteros
-​ Habitan en insectos muy activos en la superficies del suelo
-​ Rango de temperatura óptimo: 22 – 28ºC
2. Steinernema feltiae
-​ Comportamiento de búsqueda: intermedio entre emboscada y navegante, se trasladan y
permanecen en emboscada. Si no hay huésped vuelven a trasladarse.
-​ Contra insectos dípteros (sciaridae, fóridos, tipúlidos)
-​ Temperatura óptima: bajas, hasta los 10ºC
3. Steinernema glaseri
-​ Comportamiento de búsqueda: navegante
-​ Contra insectos coleópteros (escarabeidos) Habitan en insectos con baja movilidad en las capas
inferiores del suelo.
4. Steinernema riobravis
-​ Comportamiento de búsqueda: combina características entre emboscada y navegante.
-​ Contra gran variedad de insectos
-​ Temperatura óptima: superiores a 35ºC, condiciones semiáridas
5. Steinernema scapterisci
-​ Comportamiento de búsqueda: emboscada
-​ Contra insectos grillo Topo (Gryllotalpidae)

Gen. Heterorhabditis: (9 especies)

6. Heterorhabditis bacteriophora
-​ Comportamiento de búsqueda: navegante
-​ Contra insectos lepidópteros y coleópteros (otiorrincos)
-​ Habitan en insectos con baja movilidad en las capas inferiores del suelo
-​ Temperatura óptima: cálidas, reducción de la eficacia por debajo de 20ºC

5.​ PRODUCCIÓN
-​ Producción masiva: in vivo o in vitro
-​ Recurso ilimitado: existen en todos lo habitats
-​ Ecosistemas distintos, extremos e intentar aislar nematodos y estudiar su validad con
agentes de plagas
-​ Estudio de una plaga: capturas la larva, la entierras, recoges y en placa de petri húmeda
TRAMPA DE GALLERIA
-​ Ingrediente activo: molécula que tiene actividad (la suma de materia viva)
-​ Larvas J3 ingrediente activo del insecticida
-​ Materia activa (p1 + p2 + p3)​
-​ Fórmula: Ingrediente activo + adyuvante
-​ Producto técnico.: ingrediente activo producido a nivel industrial, puede contener algún
contaminante

Publicación: la mejor manera de multiplicar nematodos era primero desarrollar un cultivo celular de la
bacteria que va en simbiosis (biorreactores) y luego darla de comer al nematodo.

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BIORREACTORES DE MEDIO LÍQUIDO
-​ La forma industrial que predomina es biorreactores en medio líquido.
-​ El ciclo biológico de las larvas - tras la infección se convertían en una sopa de bacterias.
-​ En el biorreactor se realiza el cultivo de la bacteria del género correspondiente
-​ Una vez que tenemos el cultivo de bacterias bien establecido, se inocula con el nematodo para
producirlo en grandes cantidades
-​ El cultivo de nematodos en biorreactores ha tenido ciertos problemas:
-​ No disponer de formulaciones adecuadas para mantenerlos en el biorreactor hasta su uso,
es decir, el nematodo tras su producción se almacena hasta su posterior uso.
-​ Si existe una demora de tiempo de varias semanas los nematodos morirán. Encontrar
nematodos que pueden ser criopreservados como C. elegans solucionó este problema.

DETERMINAR LA EFICACIA
-​ Hay que saber en qué condiciones está el insecticida
-​ Agitar un poco la botella, echar a placa petri 1 ml, mirar microscopio (si no ves nada
cambiar al contraste negro), hacer conteo vivas / muertas (tiesas)
-​ Capacidad infectiva de las vivas (que estén vivos no signific que tengan capacidad insecticida)
-​ Vaso precipitados lo llenas de arena y en un agujero la larva, mojar laterales y vas sacando la
larva para ver si la están colonizando o no. Número mínimo de larvas: por lo menos 5 o 6
-​ Determinar el número de larvas mínimo para una mortalidad concreta
-​ Distintos ensayos (dif número de nematodos) y calcular porcentaje de mortalidad, hacer
recta crec log y sacar concentraciones letales
-​ valor letal 50% diferente entre especies, mejor que sea menos
-​ El nemátodo que tiene menor concentración letal se produce peor en un biorreactor
-​ Cálculos para saber como puedo componer la dosis para que sea lo más barato
-​ juveniles productos en biorreactor y dividir por hectáreas para obtener el número de dosis

Aplicaciones de los nematodos para combatir ciertas plagas.

-​ Larva GORTYNA XANTHENES: larva de un helicóptero que afecta a la alcachofa. Esta plaga se
combate con nematodos entomopatógenos , de forma que entra en la galería y genera la muerte de
la larva.
-​ ZEUZERA PYRINA: plaga para especies leñosas
-​ SPODOPTERA : especies con ciclo biológico de tres estadios de desarrollo (adulto, huevo, larva) y en
la tierra forman la hupa (presa fácil para el nematodo)
-​ CAPNODIS TENEBRIONIS : plaga que produce galerías en los troncos de árboles frutales
-​ CUCARACHAS Y TERMITAS: nematodos para combatir este tipo de insectos