División de Ciencias Naturales y Exactas
Campus Guanajuato
Licenciatura en Químico Farmacéutico Biólogo
Laboratorio de Microbiología
Mtra. Cruz Eugenia Martínez Palacios
Práctica 7. AISLAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE BACTERIAS Y HONGOS
AISLAMIENTO Y CULTIVO DE HONGOS Y LEVADURAS
5 semestre
Grupo B
Kylie Arlene Durán González
05 – 03 – 2025
PRACTICA 6.
AISLAMIENTO Y CONSERVACIÓN DE BACTERIAS Y HONGOS
Aislamiento y cultivo de hongos y levaduras
OBJETIVO
El alumno aislará, cultivará y reconocerá la morfología colonial y microscópica de algunos
hongos y levaduras.
FUNDAMENTO
Los hongos son organismos eucarióticos unicelulares o pluricelulares heterótrofos,
quimiorganotróficos, aerobios o anaerobios facultativos que se nutren por absorción. Con
base en sus características morfológicas, forma de reproducción y modo de crecimiento,
los hongos se dividen en dos grandes grupos: hongos filamentosos y levaduras.
Los hongos filamentosos están constituidos por células cuyo diámetro puede variar de 1
mm a 30 mm, tienen una pared celular constituida por polisacáridos (quitina, glucana y
celulosa), y forman filamentos o hifas, las cuales son estructuras tubulares en cuyo interior
fluyen todos los organelos contenidos en el citoplasma. Estos filamentos muestran
crecimiento apical (por las puntas o ápices). El conjunto de hifas se ramifica y forma una red
denominada micelio. A lo largo de la hifa pueden presentarse invaginaciones, que se derivan
de la pared y forman tabiques con orificios centrales denominados poros. Cuando un
micelio presenta estos tabiques se dice que está septado; si las hifas no presentan
divisiones se dice que el micelio es cenocítico o continuo. En ambos tipos de micelio se
pueden encontrar células mono o multinucleadas. La presencia o ausencia de estos
tabiques es un criterio taxonómico.
Figura 2. Hifas no septadas de Rhizopus (izquierda), hifas
Figura [Link] somáticas de los hongos.
A. Hifas sin paredes
transversales (ficomicetos),
B. Hifas septadas de Aspergillus (derecha). (3)
septadas (eumicetos).
[Link] con estrechamientos por
estrangulaciones locales (oomiceto: ). (5)
Leptomitus lacteus
Algunos hongos son capaces de producir pigmentos que, cuando se acumulan al interior
de las hifas dan origen a un micelio coloreado. Estos pigmentos pueden ser de origen
carotenoide o bien fuliginoso (derivado de la melanina). El micelio hialino se pude observar
en los hongos que no producen ni acumulan pigmentos. Los hongos son inmóviles, aunque
algunas especies poseen zooesporas móviles. La reproducción puede ser asexual, por
fragmentación de las formas filamentosas, por gemación en las levaduriformes y por la
formación de esporas. En algunas especies se ha descrito la reproducción sexual por medio
de hifas homotálicas en hongos hermafroditas o con hifas heterotálicas de hongos dióicos
que inician la secuencia de la plasmogamia, cariogamia, meiosis y formación de esporas
sexuales.
Las esporas de los hongos, aunque son ligeramente más resistentes que el micelio
vegetativo a las condiciones de estrés (temperatura, desecación, radiaciones, etc.) no son
formas de resistencia como las endoesporas bacterianas, sino más bien formas de
propagación. Existe una clasificación de las esporas de los hongos basada en su origen
sexual o asexual y en la forma de las estructuras que las contienen.
Figura [Link]ón Asexual de algunos hongos.
A Por
gemación (levaduras);
B Por ruptura de las hifas en células
aisladas.5().
Figura [Link] deesporas en hongos
(1)
Los hongos son microorganismos ubicuos que viven como saprofitos, simbiontes, parásitos
e hiperparásitos. Cuando actúan como parásitos, causan enfermedades en el hombre,
plantas y animales denominadas micosis.
Desde el punto de vista morfológico y filogenético (según Woese) forman dos ramas
separadas: la myxomycota, que incluye a los hongos gelatinosos, y la eumicota, que
incorpora a la mayoría de los hongos y las levaduras. Algunos hongos presentan morfología
filamentosas y levadurifomes, por lo cual se les llama dimórficos; esta morfología
dependerá del ciclo de vida, el hábitat en el que se encuentran o las condiciones de cultivo.
Comparados con la mayoría de las bacterias, los hongos muestran un crecimiento lento, lo
que puede dificultar su aislamiento de fuentes naturales. Para evitar la contaminación con
bacterias se usan medios selectivos con elevadas concentraciones de azúcar (4% p/v), pH
ácido y con inhibidores del crecimiento bacteriano.
Las levaduras, a diferencia de los hongos filamentosos, muestran un crecimiento
isodiamétrico (uniformemente distribuido sobre toda la superficie celular) y tienen un tipo
de reproducción generalmente asexual por gemación, por el cual se originan dos células
desiguales, madre e hija. Esta forma de reproducción y crecimiento da como resultado la
formación de colonias con aspecto húmedo y consistencia cremosa. La morfología
microscópica y macroscópica de las levaduras es completamente diferente a la de los
hongos filamentosos, pero su ultraestructura es semejante.
Desde el punto de vista médico, los hongos son importantes porque producen una gran
diversidad de enfermedades cutáneas, subcutáneas y sistémicas. También hay especies
patógenas de plantas y animales. Algunas levaduras son usadas en la elaboración de
productos alimenticios (pan, cerveza, vino, quesos) y otros pueden producir micotoxinas y
aflatoxinas en algunos alimentos, lo que provoca, a su vez, intoxicaciones y cáncer. A nivel
industrial, se usan en la producción de ácidos orgánicos, cetonas, enzimas, vitaminas,
antibióticos, etc. También existe una gran variedad de especies comestibles, venenosos y
alucinógenos.
DESARROLLO
MATERIAL
• 5 Tubos de ensaye de 16 X 150 mm con 4.5 ml de agua destilada estéril;
• Micropipetas de 200 µl y 1000 µl;
• Puntas para micropipetas estériles;
• 5 Cajas de Petri con agar Sabouraud,
• 3 Cajas Petri con agar Rosa de Bengala,
• 1 agar Papa-dextrosa (PDA) grueso;
• 1 Tubo de ensaye de 16 X 150 mm con 10 ml de glicerol al 10% estéril;
• Varillas de vidrio y etanol;
• Asa en ángulo recto, pinzas, bisturí,
• cubreobjetos y portaobjetos estériles por separado;
• Puentes de coloración;
• Solución de azul de algodón-lactofenol;
• Solución de alcohol-ácido láctico;
• Solución de nigrosina;
• Barniz de uñas transparente;
• Microscopio; • Cepas problema.
METODOS
Aislamiento por diluciones
1. Haga una serie de diluciones decimales hasta 10-5 a partir de una muestra de alimento
en descomposición.
2. Siembre una alícuota de 0,1 ml en los medios de agar Sabouraud y agar Rosa de
Bengala a partir de las tres últimas diluciones y comenzando por las más alta.
3. Extienda la alícuota con varilla de vidrio acodada, previamente flameada.
4. Incube a 28º C por 48 h - 72h.
5. Calcule las UFC/ml o g de hongos filamentosos de la muestra de suelo, con los datos
obtenidos en los dos medios de cultivo.
6. Describa la morfología colonial y microscópica de tres colonias de hongos
filamentosos aislados.
7. Haga preparaciones en fresco de las tres colonias seleccionadas, colocando una gota
de azul de algodón-lactofenol sobre un portaobjetos y un poco de micelio de la
colonia y cubriéndola con un portaobjetos (morfología microscópica).
8. Examine las preparaciones con los objetivos seco débil (10X) y seco fuerte (40X).
9. Observe y describa las características del micelio: Diámetro de las hifas, micelio
septado o cenocítico, hifas pigmentadas o hialinas, tipo de esporas asexuales.
Preparación de microcultivos.
1. Utilizando unas pinzas esterilizadas por flameado con
alcohol, coloque un portaobjetos sobre una varilla de
vidrio doblada en ángulo de 45º que se encuentra en la
base de una caja de Petri estéril.
2. Con un bisturí, corte cubos de 1,5 cm de lado del
medio PDA grueso.
3. Con la ayuda de las pinzas estériles, coloque un cubo
de PDA sobre el portaobjetos.
4. Con el asa doblada en ángulo recto, inocule el hongo proporcionado por los cuatro
costados del cubo de PDA.
5. Coloque el cubreobjetos estéril sobre el cubo de PDA inoculado.
6. Agregue glicerol al 10% en el fondo de la base de la caja de Petri (ver esquema).
7. Tape la caja e incube a 28º C durante 72 h - 96 h.
8. Extraiga el glicerol con una pipeta Pasteur y deséchelo en un tubo de ensaye.
9. Inactive los hongos con formaldehído al 10% durante 1 h.
10. Desprenda cuidadosamente el cubreobjetos y colóquelo sobre un portaobjetos al
que previamente se ha colocado una gota de azul de algodón-lactofenol. Con el
portaobjetos se puede hacer otra preparación similar, colocando una gota de
colorante y un cubreobjetos limpio.
11. Elimine el exceso de colorante y selle las preparaciones con barniz de uñas
transparente.
12. Observe las preparaciones con los objetivos seco débil (10X) y seco fuerte (40X).
13. Describa las características de la morfología microscópica de los hongos.
Cultivo y descripción de la morfología colonial de levaduras.
En las levaduras se describen las 10 características usadas para las colonias
bacterianas.
1. Siembre las levaduras que le proporcione el instructor, por estría cruzada, en una
caja con medio agar Sabouraud.
2. Incube a 28º C durante 24 h a 48 h.
3. Observe el crecimiento y describa la morfología colonial.
Descripción de la morfología de hongos filamentosos
Para la descripción de la morfología colonial de los hongos se toman en cuenta las
siguientes características:
Textura: Superficie: Color:
Algodonosa o lanosa Plana Anverso
Vellosa Acuminada Reverso
Aterciopelada Plegada Pigmento difusible
Granulosa Cerebriforme
Pulvurenta Crateriforme
Cremosa Umbilicada
Algodonosa o lanosa Aterciopelada
Pulvurulenta
Aspergillus fumigatus Cladosporium cladosporioides
Penicillium sp
Figura [Link] texturas
observables en la morfología colonial de hongos filamentosos (2)
RESULTADOS
1. Calcule para cada medio de cultivo el UFC/g de muestra
Dilución Colonias/ml UFC/mL Rosa Colonias/ml UFC/mL
Rosa de de bengala Saboraud Saboraud
bengala
10-3 >300 -------- >300 --------
10-4 2870 2.87x10-7 >300 --------
10-5 1150 1.15x10-8 2180 2.18x10-8
¿existen diferencias? Explique su respuesta.
Sí existen diferencias entre el agar rosa de bengala y el agar Sabouraud. En el agar rosa de
bengala las colonias tuvieron una coloración rosada y fueron en menor proporción y de
menor tamaño en comparación con el agar Sabouraud en las colonias fueron más grandes
y en mayor proporción.
2. Describa la morfología macroscópica de tres colonias de hongos filamentosos
aislados de la muestra de suelo.
Característica colonial Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3
Textura Cremosa Cremosa Cremosa
Superficie Plana Plana Plana
Anverso Blanco Rosa Rosa
Reverso Blanco Rosa Rosa
Color
Pigmento difusible ------------------- ------------------- -------------------
3. Describa la morfología microscópica haciendo esquemas de los microcultivos
observados y ponga nombre a las estructuras que pueda identificar, así como las
características de las hifas y el micelio.
Ilustración 1. Muestra del hongo Muccor
Ilustración 2. Muestra del hongo Muccor
circillenoide que se encontraba aislado en
circillenoide que se encontraba aislado
el cubreobjetos del microcultivo, vista con
en el portaobjetos del microcultivo, vista
una microscopia de campo claro con un
con una microscopia de campo claro
objetivo de 40x, teñida con colorante azul
con un objetivo de 40x, teñida con
de algodón lactofenol. En la micrografía se
colorante azul de algodón lactofenol. En
visualizan algunos estrechamientos y
la micrografía se visualizan algunos
esporas.
estrechamientos.
4.- Describa la morfología colonial de las levaduras
Saccharomyces
Característica colonial Yarrowia lipolytica
cerevisiae
Tamaño 7mm 5mm
Color Blanco Blanco
Forma Redonda Rugosa
Elevación Convexa plana Elevada
Superficie Lisa Rugosa
Bordes Suave Erosionado
Luz reflejada Brillante Brillante
Luz trasmitida Opaca y traslucida Traslucida
Aspecto Humedo Seco
Consistencia Mucoide Suave
5. Describa la morfología colonial de los hongos filamentosos:
Mucor Fusarium Aspergillus
Característica colonial
circinelloides oxysporum niger
Granulosa y
Textura Algodonosa Aterciopelada
vellosa
Superficie Plana Acuminada Plana
Negro y Morado y
Anverso Blanco
blanco blanco
Morado y
Color Reverso Blanco Naranja
blanco
Pigmento Negro y Morado y
Blanco
difusible blanco blanco
OBSERVACIONES
• Para la parte 2 se utilizaron muestras de alimentos en descomposición en
lugar de muestras de suelo. La muestra se obtuvo de un jitomate en
descomposición.
• Es importante seleccionar medios de cultivo adecuados para cada
microorganismo, considerando factores como el pH, la temperatura y la
composición del medio. En el caso de los hongos filamentosos, su
crecimiento puede verse influenciado por la competencia con otros
microorganismos presentes en la muestra.
• Las esporas de algunos hongos les confieren una mayor resistencia
ambiental, lo que facilita su conservación en comparación con bacterias que
pueden ser más sensibles a ciertos cambios ambientales.
• Se deben emplear técnicas estériles para evitar contaminaciones y
garantizar que las bacterias y hongos aislados sean los deseados.
CONCLUSIONES
El aislamiento y conservación de bacterias y hongos son procesos fundamentales
en microbiología, ya que permiten su estudio, identificación y aplicación en
diferentes campos como la medicina, la industria y la agricultura. Tanto las bacterias
como los hongos presentan características estructurales y funcionales distintas, lo
que influye en sus métodos de aislamiento y conservación. Las bacterias, por ser
organismos procariotas, pueden aislarse mediante técnicas como el cultivo en
medios selectivos, mientras que los hongos y levaduras, al ser eucariotas,
requieren medios específicos que favorezcan su crecimiento. Además, las
diferencias en la reproducción y la estructura de las esporas fúngicas y las
endoesporas bacterianas influyen en su resistencia y viabilidad a largo plazo. La
correcta conservación de estos microorganismos es crucial para su estudio y
aplicación, empleando técnicas como la criopreservación o el mantenimiento en
medios sólidos para garantizar su estabilidad y viabilidad.
CUESTIONARIO No. 6
Investigue las respuestas para las preguntas siguientes y con la información obtenida
(respuestas) redacte un texto con sentido a manera de discusión. Escríbalo a mano con letra
de molde legible. No olvide anotar la bibliografía consultada.
1. Mencione 5 semejanzas y 5 diferencias entre hongos y bacterias.
2. Mencione tres diferencias entre las esporas de los hongos y las endoesporas
bacterianas.
3. Mencione dos ejemplos de hongos (género y especie) que tengan:
Importancia médica: Patógenos del hombre
Importancia agrícola: a) Patógenos de plantas, b) Formadores de micorrizas
Importancia alimenticia: a) Comestibles, b) venenosos, c) alucinógenos
Importancia industrial: a) Productores de ácidos orgánicos b) Productores de antibióticos
4. Analice y discuta las dificultades e inconvenientes (no debidas a la realización de la
técnica de diluciones) que estén para contar hongos a partir de suelo. Dicho de otro
modo ¿Pueden contarse en forma confiable los hongos filamentosos, provenientes
de una muestra de suelo?
5. ¿Qué es una micorriza? ¿Qué es un liquen? Mencione sus semejanzas y sus
diferencias.
DISCUSIÓN (texto con las respuestas del cuestionario)
Los hongos y las bacterias comparten algunas semejanzas, ya que ambos pueden
observarse al microscopio debido a su tamaño microscópico y poseen una pared celular
que les proporciona forma y protección. Además, pueden reproducirse de manera
asexual y habitar en una gran variedad de ambientes, desde el suelo hasta el agua, e
incluso dentro de otros organismos. También desempeñan un papel ecológico crucial al
participar en la descomposición de materia orgánica y en los ciclos biogeoquímicos. Sin
embargo, presentan diferencias importantes. En cuanto a su estructura celular, los
hongos son eucariotas, con núcleo definido y organelos membranosos, mientras que las
bacterias son procariotas y carecen de un núcleo definido. Además, las células fúngicas
suelen ser más grandes que las bacterianas. Otra diferencia clave es la reproducción, ya
que los hongos pueden reproducirse sexualmente, mientras que las bacterias no poseen
una reproducción sexual verdadera. En cuanto a su pared celular, la de los hongos está
compuesta por quitina, mientras que la de las bacterias contiene peptidoglicano.
Asimismo, las bacterias son sensibles a los antibióticos, mientras que los hongos
generalmente no se ven afectados por estos medicamentos.
Por otro lado, las esporas de los hongos y las endoesporas bacterianas presentan
diferencias fundamentales. Las esporas fúngicas tienen una función reproductiva,
mientras que las endoesporas bacterianas son estructuras de resistencia diseñadas para
soportar condiciones adversas. En cuanto a su formación, las esporas de los hongos se
generan en estructuras especializadas como esporangios o conidióforos, mientras que
las endoesporas bacterianas se forman dentro de la célula y poseen una estructura más
compleja y resistente. Además, las endoesporas bacterianas son extremadamente
resistentes a factores como el calor, la radiación y los desinfectantes, mientras que las
esporas fúngicas presentan una resistencia menor.
Los hongos tienen diversas aplicaciones e impactos en distintos ámbitos. En el campo
médico, algunos pueden ser patógenos para los humanos, como Candida albicans,
causante de la candidiasis, o Aspergillus fumigatus, responsable de la aspergilosis. En
la agricultura, ciertos hongos afectan a las plantas, como Fusarium oxysporum, que
causa fusariosis, o Puccinia graminis, que provoca la roya del tallo en cereales; sin
embargo, otros hongos, como Glomus intraradices y Rhizophagus irregularis, forman
micorrizas beneficiosas para las plantas. En el ámbito alimenticio, existen hongos
comestibles como Agaricus bisporus (champiñón común) y Pleurotus ostreatus (seta de
ostra), mientras que otros, como Amanita phalloides y Amanita muscaria, son venenosos.
También hay hongos alucinógenos como Psilocybe cubensis y Psilocybe semilanceata.
En la industria, se emplean hongos como Aspergillus niger, que produce ácido cítrico, y
Penicillium chrysogenum, utilizado en la producción de penicilina.
La cuantificación de hongos en muestras de suelo presenta diversas dificultades. La alta
diversidad y abundancia de hongos en el suelo complican la identificación y
cuantificación precisa. Además, no todos los hongos crecen bien en medios de cultivo
estándar, lo que puede llevar a una subestimación de su presencia. Las interacciones
con otros microorganismos del suelo también pueden influir en su crecimiento en
laboratorio, afectando la representatividad de los conteos. Asimismo, algunos hongos
pueden encontrarse en estado de esporulación o latencia, dificultando su detección. Por
ello, los métodos tradicionales de cultivo pueden no ser completamente fiables, y es
necesario complementar con técnicas moleculares para obtener una estimación más
precisa de la comunidad fúngica.
Finalmente, las micorrizas y los líquenes son asociaciones simbióticas, no obstante,
presentan diferencias clave. Las micorrizas son la interacción entre las raíces de las
plantas y ciertos hongos del suelo, beneficiando a la planta al mejorar la absorción de
nutrientes y agua, mientras que el hongo obtiene carbohidratos de la planta. Por otro
lado, los líquenes son asociaciones entre un hongo (micobionte) y un organismo
fotosintético, como un alga o una cianobacteria (fotobionte), donde ambos organismos
colaboran para sobrevivir en condiciones extremas.
BIBLIOGRAFÍA
Murray, P. R., Rosenthal, K. S., & Pfaller, M. A. (2017). Microbiología médica. Elsevier
Health Sciences.
Leboffe, M. J., & Pierce, B. E. (2012). A photographic atlas for the microbiology laboratory.
Morton Publishing Company
Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2007a). Introducción a la microbiología. Ed.
Médica Panamericana.
Pérez, A. G. (2025, 8 enero). Medios de cultivo en microbiología. Euroinnova International
Online Education. [Link]
de-cultivo-microbiologia