Agron. Mesoam. 26(2):355-364.

2015
ISSN 2215-3608 DOI: [Link]

NOTA TÉCNICA

ACONDICIONAMIENTO DE LA COCHINILLA HARINOSA

(HEMIPTERA: PSEUDOCOCCIDAE) POR MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA DE BARRIDO1

Melissa Palma-Jiménez2, Mónica Blanco-Meneses3

RESUMEN ABSTRACT
Acondicionamiento de la cochinilla harinosa Conditioning of mealybug (Hemiptera:
(Hemiptera: Pseudococcidae) por Microscopía Pseudococcidae) by Scanning Electron Microscopy. The
Electrónica de Barrido. El objetivo del presente trabajo fue aim of this work was to determine the methodology for
determinar la metodología de acondicionamiento adecuada an adequate conditioning for the cleaning of mealybugs
para la limpieza de los especímenes de cochinilla harinosa specimens and its correct observation. This work was done
y su correcta observación. La investigación se llevó acabo in the laboratory of the Research Center in Microscopic
en el laboratorio del Centro de Investigación en Estructuras Structures (CIEMIC) of the University of Costa Rica, in
Microscópicas (CIEMIC) de la Universidad de Costa 2012. Four types of methodologies were implemented, which
Rica durante el año 2012. Se implementaron cuatro tipos evidenced a gradual improvement of the observation of the
de metodología, con los cuales se evidenció una mejora ultrastructures through the Scanning Electron Microscopy.
gradual para la observación de las ultraestructuras a través Every process was described in detail. The best results were
del microscopio electrónico de barrido. Cada proceso fue showed with 10% xylene (in some cases it was feasible
descrito detalladamente, el que mostró mejores resultados using 95-100% ethanol). It allowed to remove the wax from
fue en el que se incorporó xilol al 10% (en algunos casos the body of the insect, avoiding its collapse, and observing
resultó viable utilizando etanol al 95-100%), ya que se logró the specific ultrastructures of the individual. This approach
eliminar la cera del cuerpo del insecto, evitar el colapso del will reduce the time and cost of future taxonomic research
mismo y observar ultraestructuras específicas del individuo. of mealybugs.
Esta metodología permitirá reducir el tiempo y los costos
en futuras investigaciones taxonómicas de la cochinilla Keywords: scanning electron microscope, specimen
harinosa. conditioning, ultrastructures.

Palabras claves: microscopio electrónico de barrido,

acondicionamiento de especímenes, ultraestructuras.

1
Recibido: 23 setiembre, 2014. Aceptado: 3 de febrero, 2015. Parte de la tesis de Maestría de la primera autora, Universidad de Costa Rica,
Escuela de Agronomía, Laboratorio de Técnicas Moleculares de Fitopatología del Centro de Investigaciones en Protección de Cultivos (CI-
PROC).
2
Universidad de Costa Rica, Escuela de Agronomía, Programa de Maestría. Apartado postal 21001. melissapal@[Link]
3
Universidad de Costa Rica, Escuela de Agronomía, Coordinadora del Laboratorio de Técnica Moleculares de Fitopatología del CIPROC. San
José, Costa Rica. Apartado postal 2060. [Link]@[Link]

© 2015 Agronomía Mesoamericana es desarrollada en la Universidad de Costa Rica y se encuentra licenciada con Creative
Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 Costa Rica. Para más información escríbanos a pccmca@[Link]
 PALMA Y BLANCO: Acondicionado de la cochinilla harinosa para su clasificación

INTRODUCCIÓN Dicyphococcus bigibbus Borchsenius es húmeda en

las primeras glándulas desarrolladas tanto en ninfa
Algunos autores reportan que la clasificación como en adultas y que posteriormente se coagula
de las especies de la cochinilla harinosa hembra formando la cera seca y cristalina sobre la superficie
(Hemiptera: Pseudococcidae) resulta un trabajo difícil del cuerpo. La cera estudiada es dura y se compone
principalmente por tratarse de un insecto de tamaño de una combinación de capas verticales y horizontales
pequeño (aproximadamente 2,5 x 1,5 cm) y que posee que protege a los individuos de factores ambientales
una gran cantidad de estructuras morfológicas muy (Ying-Ping et al., 2004).
similares entre las especies (Malausa et al., 2011). Los trabajos realizados en insectos de cuerpo
Hardy et al. (2008), explican que históricamente suave que secretan cera, señalan que la forma de
las especies de similar morfología procedentes de limpieza depende del estado de desarrollo, equipo
diferentes regiones geográficas se han colocado en utilizado y los reactivos utilizados para ello. Algunos
el mismo género, debido en gran parte a la falta de autores han utilizado solo etanol al 70%-100% para
características propias para crear nuevos géneros los primeros estados de desarrollo (Lucchi y Mazzoni,
puesto que muchas tienden a converger en apariencia. 2004; Ammar et al., 2013), otros mencionan que para
El uso de técnicas tradicionales como el remover la cera se puede utilizar tetrahidrofurano
microscopio de luz, ha permitido el estudio de estructuras y cloroformo, así también se mencionan trabajos
translúcidas para la clasificación de las cochinillas donde emplearon la solución fijadora de Karnovsky
harinosas principalmente para la identificación de y el equipo de secado de punto crítico (Zhang et al.,
poros alrededor del cuerpo, para clasificar las secciones 2012). Se ha empleado el xilol para remover la cera de
de las patas posteriores (coxa, trocánter, fémur y tibia) Ceroplastes pseudoceriferus (Homoptera: Coccidae)
y del contorno de los ojos, para identificar la presencia (Tamaki et al., 1969) y para disolver la cera de
o ausencia de la barra anal y los ductos del collar oral Tettigonia viridissima (Ortoptera) (Jiao et al., 2000).
(Ramos y Serna, 2004; Miller et al., 2007; Hardy Debido a las capas de cera y al cuerpo suave
et al., 2008). Actualmente una de las técnicas más que caracteriza a la cochinilla harinosa, muchos
utilizadas para la clasificación de la cochinilla harinosa de los insectos procesados son desechados porque
corresponde al uso de la técnica en laminilla de vidrio su cuerpo resulta difícil de limpiar o tiende a
(Granara de Willink, 2004). colapsarse, imposibilitando la correcta observación
En particular, las cochinillas Pseudococcus de las estructuras morfológicas para la identificación
longispinus y Pseudococcus nr. microadonidum, y clasificación, e induciendo a la pérdida de material.
Planococcus minor y Planococcus citri, así como El objetivo del presente trabajo fue determinar la
Pseudococcus maritimus referida como Pseudococcus metodología de acondicionamiento adecuada para la
nr. maritimus pertenecen a taxones estrechamente limpieza de los especímenes de cochinilla harinosa y
relacionados que son difíciles de distinguir su correcta observación.
morfológicamente mediante el uso de la técnica en
lámina y que han provocado una reexaminación de
los caracteres. Estas especies fueron colectadas de MATERIALES Y MÉTODOS
diversos cultivos agrícolas y plantas ornamentales
procedentes de Francia y Brazil (Malausa et al., 2011). Sitios de colecta del material
Una alternativa para la correcta clasificación de
estos insectos es el uso del microscopio electrónico Se colectaron cochinillas femeninas en estadío
de barrido (MEB), lo que ha permitido estudiar la adulto pertenecientes al orden Hemiptera, familia
morfología de algunas estructuras que conforman Pseudococcidae del cultivo de banano de doce fincas
el cuerpo de la cochinilla (Kumar et al., 1997) y ubicadas a lo largo de la zona Atlántica en Costa Rica
especialmente comprender el patrón de secreción de (Agrotubérculos, Aproveco, Bristol, CATIE, Corsega,
cera (Lucchi y Mazzoni, 2004; Ying-Ping et al., 2004; Kopemaz, Laboratorio de Biocontrol, Manu, Rebusca,
Zhang et al., 2012). Siquirreña, Zent, Zorsales). La colecta se realizó
Se ha demostrado mediante el uso del MEB, durante visitas a las fincas entre los años 2010 y 2012
que la cera secretada por la cochinilla harinosa y la ubicación de los sitios se identificó según las

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 PALMA Y BLANCO: Acondicionado de la cochinilla harinosa para su clasificación

coordenadas geográficas. Para la colecta se utilizó un eliminaron las sustancias de prefijación y postfijación,
tubo eppendorf de 1,5 ml con etanol al 95% (Cuadro 1). y se utilizó el sonicador como equipo alternativo para
la limpieza del insecto, y se definió como Método de
Lugar de estudio acondicionamiento 2. Como su rendimiento tampoco
fue óptimo, se eliminó el uso del sonicador y se
El estudio se realizó en el Centro de Investigación utilizó solamente etanol, se definió como Método de
en Estructuras Microscópicas (CIEMIC) de la acondicionamiento 3. En esta metodología se eliminó
Universidad de Costa Rica, San Pedro de Montes de el colapso del tejido del insecto, sin embargo, los
Oca, durante el año 2012. especímenes todavía quedaban cubiertos de cera, por
Para cada método de acondicionamiento se esta razón se utilizó el xilol al 10% diluido en etanol
emplearon veinte insectos de los cuales se recuperó al 95%; con esta metodología se limpió la cera y se
la mitad. Esto debido a pérdidas durante el trabajo definió como Método de acondicionamiento 4. A
realizado en cada metodología, principalmente posterior continuación se describe en detalle cada metodología.
al uso de las soluciones de prefijación y postfijación,
así como el empleo del sonicador. Se utilizó el MEB, Método de acondicionamiento 1: uso de las
modelos HITACHI S-2360 y S-570 con un voltaje de soluciones de prefijación y postfijación para el
aceleración a 15kv. Para determinar las ultraestructuras acondicionado de la cochinilla harinosa
características de las cochinillas en estudio, se colocaron
en posición lateral, esternal y tergal, y para determinar Se realizó la prefijación de todos los especímenes
el método de acondicionamiento de limpieza adecuado por un periodo de cuatro minutos en la solución de
de los especímenes, se trabajó con cuatro metodologías, Karnovsky (glutaraldehído 2,5%, paraformaldehído
en las cuales se evidenció una mejora gradual a través 2%, amortiguador fosfato 0,1M y H2O destilada) a pH
de la observación de las ultraestructuras por medio 7,4, la cual se almacenó previamente en refrigeración
del MEB. Se inició con el uso de las soluciones una semana. Seguidamente se realizaron tres lavados
de prefijación y postfijación, las cuales se utilizan de quince minutos con el amortiguador fosfato 0,1M.
comúnmente en los trabajos de MEB, y se definió como Se continuó con una posfijación con la solución de
Método de acondicionamiento 1. Debido a que con tetraóxido de osmio al 1% por un periodo de una
este protocolo hubo colapso del tejido del insecto se hora o a 4% por media hora, y se realizaron tres

Cuadro 1. Cochinillas harinosas del cultivo de banano colectadas en distintas regiones geográficas de la zona Atlántica de Costa
Rica. 2010-2012.
Table 1. Mealybugs from banana crop collected in different geographical regions from the Atlantic zone of Costa Rica. 2010-2012.

Localidad Año de colecta Coordenadas geográficas

Latitud Longitud
Finca Agrotubérculos, Cahuita, Limón 2011 9° 40’00.00’’N 82° 47’59,99’’O
Finca Aproveco, Batán, Limón 2012 10° 05’04’’N 83° 20’ 28’’O
Finca Bristol, Limón 2012 10° 01’44’’N 83° 18’14’’O
Finca CATIE, Turrialba 2010 9° 53’23.06’’N 83° 39’11,59’’O
Corsega, San Carlos de Pacuarito, Limón 2012 10° 10’25’’N 83° 46’ 76’’O
Finca Kopemaz, Matina, Limón 2012 10° 02’54’’N 83° 27’ 78’’O
Finca Lab Biocontrol, Turrialba 2010 9° 53’23.06’’N 83° 39’11,59’’O
Finca Manu, Guápiles, Limón 2011 9° 51’23.85’’N 82° 58’36,45’’O
Finca Zent, Matina, Limón 2012 10° 02’54’’N 83° 27’78’’O
Finca Zorsales, Carrandi, Limón 2012 10° 03’49’’N 83° 16’ 43’’O

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lavados con H2O destilada de quince minutos cada posteriormente 100% por diez minutos cada uno. Para
uno. El material se deshidrató en una batería de el último tiempo, la muestra se colocó en el refrigerador
etanol con concentración ascendente (30%, 50%, a una temperatura de 0 °C, que fue cuando congeló;
70%, 80%, 90%, 95% y 100%), diez minutos en cada esto con el fin de generar el ambiente propicio durante
uno. Seguidamente los especímenes se colocaron el proceso de secado del insecto. Seguidamente los
en Terbutanol por cuatro tiempos de diez minutos especímenes se colocaron en Terbutanol por cuatro
cada uno. Para el último tiempo la muestra se colocó tiempos de diez minutos cada uno, tras lo cual se
en el refrigerador a una temperatura de 0 °C, que congeló la muestra. Posteriormente estas se secaron por
fue cuando congeló; esto con el fin de generar el sublimación por veinte minutos en el equipo modelo
ambiente propicio durante el proceso de secado del Freeze dryer VFD-20, seguido del montaje en bases
insecto. Posteriormente las muestras se secaron por de aluminio, y finalmente se cubrieron con el metal
sublimación durante veinte minutos en el equipo platino-paladio por siete minutos utilizando el equipo
modelo Freeze dryer VFD-20. Se realizó el montaje en modelo Giko IB-3; posteriormente se observaron y
bases de aluminio para especímenes y se cubrió con el fotografiaron las ultraestructuras pertinentes bajo el
metal platino-paladio por siete minutos utilizando el microscopio electrónico de barrido.
equipo modelo Giko IB-3, por último, se observaron
y fotografiaron las ultraestructuras pertinentes bajo el Método de acondicionamiento 4: limpieza de las
microscopio electrónico de barrido. cochinillas harinosas con xilol al 10%

Método de acondicionamiento 2: limpieza de las Las cochinillas harinosas se sumergieron en xilol

cochinillas harinosas empleando el sonicador al 10% por treinta segundos, el cual se diluyó con
etanol al 95%. Se continuó con una deshidratación
Las cochinillas harinosas se sumergieron a una en etanol a una concentración ascendente: 30%, 50%,
concentración ascendente de etanol: 30%, 50%, 70%, 70%, 80%, 90%, 95% y 100% por diez minutos en
80%, 90%, 95% y 100% por periodos de quince cada uno. Seguidamente los especímenes se colocaron
minutos en cada uno. Seguidamente se empleó un en Terbutanol por cuatro periodos de diez minutos
sonicador durante cinco minutos. Posteriormente los cada uno. Para el último periodo la muestra se colocó
especímenes se colocaron en Terbutanol por cuatro en el refrigerador a una temperatura de 0 °C, que
periodos de diez minutos cada uno. La muestra se fue cuando congeló; esto con el fin de generar el
colocó en el refrigerador a una temperatura de 0 °C, ambiente propicio durante el proceso de secado del
que fue cuando congeló; esto con el fin de generar insecto. Posteriormente las muestras se secaron por
el ambiente propicio durante el proceso de secado sublimación por veinte minutos en el equipo modelo
del insecto. Seguido, las muestras se secaron por Freeze dryer VFD-20. Se realizó el montaje de los
sublimación por veinticinco minutos en el equipo especímenes en bases de aluminio y se cubrieron con
modelo Freeze dryer VFD-20. Se realizó el montaje de el metal platino-paladio por siete minutos utilizando el
los especímenes en bases de aluminio y se cubrieron con equipo modelo Giko IB-3, y finalmente se observaron
el metal platino-paladio por siete minutos utilizando el y fotografiaron las ultraestructuras pertinentes bajo el
equipo modelo Giko IB-3 y finalmente se observaron microscopio electrónico de barrido.
y fotografiaron las ultraestructuras pertinentes bajo el
microscopio electrónico de barrido.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Método de acondicionamiento 3: limpieza de las
cochinillas harinosas con etanol al 95% y 100% Los principales problemas que se presentaron para el
acondicionamiento de los individuos fue la eliminación
Se trabajó directamente con el proceso de de la cera que cubre el cuerpo, y el colapso de este por
deshidratación utilizando etanol a 95% (concentración presentar tejido suave, aspectos muy importantes que
en la que se encontraban los especímenes) y impedían observar las ultraestructuras presentes.

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Los insectos sometidos al Método de lo que el tratamiento de prefijación con la solución de

acondicionamiento 1 mostraron tejidos completamente Karnovsky y posfijación con la solución de tetraóxido
colapsados, sin ninguna posibilidad de analizar la de osmio al 1% resultaron ser excesivos. Nieto (2010),
ultraestructura de la cochinilla, ya que fue claro explica que estos fijadores (Karnovsky y tetraóxido de
observar el daño de forma generalizada en el cuerpo osmio), tienen la capacidad de impregnar los tejidos
del insecto. Hubo desgarre en el esterno como en el biológicos internos y aumentar la conductividad de las
tergo, así como deformación del tejido de la epidermis muestras para la posterior observación superficial. A
en la cabeza y abdomen esternal (Figura 1.A-1.D), por su vez, el mismo autor explica que Karnovsky es una

Figura 1. Método de acondicionamiento 1 de la cochinilla harinosa con base en soluciones de prefijación y postfijació[Link]-
tructuras: A. Región esternal del cuerpo con tejido colapsado y desgarre de la antena, estructura bucal y patas. B. Región
tergal del cuerpo con tejido colapsado. C. Cabeza de la cochinilla harinosa con tejido colapsado. D. Región del pigidio con
ruptura y colapso del tejido. Muestras colectadas del cultivo de banano de la región Atlántica de Costa Rica. 2010-2012.
Escala: 142 µm (A); 250 µm (B); 75 µm (C); 52,63 µm (D).
Figure 1. Conditioning method 1 for mealybugs based on prefixation and postfixation solutions. Ultrastructures: A. Sternal region
of the body with collapsed tissue and tear of the antenna, mouth structure and legs. B. Tergal region of the body with
collapsed tissue. C. Head of mealybug with collapsed tissue. D. Region of pygidium with ruptured and collapsed tissue.
Samples collected from banana crop from the Atlantic region, Costa Rica. 2010-2012.
Scale: 142 µm (A); 250 µm (B); 75 µm (C); 52.63 µm (D).

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solución hipertónica para la mayoría de las células 2010), evitando el daño provocado por los procesos
biológicas, razón que lo hace un buen fijador, pero en el anteriores. A pesar de que con este acondicionado se
material de estudio pudo ser excesivamente hipertónica notaron mejoras, se observaron cúmulos de cera en el
para fijar los tejidos provocando que la ultraestructura cuerpo de los insectos. La cera secretada por los poros
colapsara por completo (Burón et al., 2010), por lo multiloculares alrededor de la vulva de las cochinillas
que este acondicionado no resultó ser adecuado. En fue difícil de limpiar, ya que se presentó de forma
este caso las células del cuerpo del insecto requerían abundante en el abdomen esternal. Esta cera presenta
osmolaridades bajas y para las cochinillas harinosas un rol en la adhesión de los huevos al cuerpo del
la deshidratación fue relativamente alta, es por ello insecto en la etapa adulta, por lo tanto, tiende a estar
que Özen y Ceylan (2013), explican que si la solución presente como mecanismo de protección (Kumar et al.
de fijación es hipertónica, las células y orgánulos 1997) (Método de acondicionamiento 3, Figura 3.E).
pierden agua y se contraen, hasta el punto de provocar En el Método de acondicionamiento 4 los
plasmólisis, tal como ocurrió en las cochinillas de la insectos se limpiaron con la batería de alcoholes, para
presente metodología. Estos autores recomiendan que reemplazar el medio acuoso del tejido del insecto (Xie
la presión osmótica de una solución de fijación debe et al., 2014) y a además con el xilol al 10% como
ser igual o muy cercana al tejido que va a ser fijado. disolvente orgánico, se logró remover las trazas de
Los especímenes tratados con el Método de cera de la superficie del cuerpo sin provocar colapso
acondicionamiento 2 en el cual se empleó el sonicador en el tejido epidermal, permitiendo el análisis de las
como herramienta complementaria, logró eliminar las ultraestructuras que fueron difíciles de observar en los
capas de cera en algunos especímenes tratados, con el métodos de acondicionamiento anteriores, como por
inconveniente de que el tejido colapsó, observándose ejemplo, la ultraestructura de la región tergal, poros
claramente en la ultraestructura de la región bucal, secretores de cera como los de tipo multilocular, del
cerario, poros multiloculares y abdomen (Figura ducto con anillo oral y del cerario, por lo que resultó
2.A-2.D). En algunos individuos, además del colapso ser el mejor proceso de los cuatro realizados (Método
de tejidos no se observaron mejoras en la limpieza de de acondicionamiento 4, Figura 4.A-4.D). Este es poco
la cera, como lo fue en la ultraestructura de los poros utilizado en MEB, por lo general se utiliza en insectos
multiloculares (Figura 2.E), similar al Método de en microscopía de luz (Xie et al., 2014).
acondicionamiento 1 (Figura 1.A-1.D). Esta cera fue En trabajos de MEB como el de Tamaki et al. (1969),
secretada por los poros en forma de cintas cilíndricas se discute que la cera de C. pseudoceriferus (Homoptera:
compactas (Figura 2.E; Figura 3.D y 3.E) y para su Coccidae) está compuesta principalmente de ésteres de
limpieza el sonicador actuó agitando las partículas del cadenas de ácidos grasos y alcoholes, los cuales fueron
etanol a 95% en las cuales la cochinilla se encontraba lavados exhaustivamente con xilol como compuesto
sumergida, sin embargo hizo que el tejido colapsara químico. En el estudio de Jiao et al. (2000), disolvieron
provocando la ruptura de las membranas celulares y una sustancia cerosa compuesta por lípidos de secreción
con ello dañando la ultraestructura delicada de este adhesiva de la superficie de las almohadillas del insecto
insecto de tejido suave (Vargas et al., 2007). Tettigonia viridissima (Ortoptera) con xilol. En el caso
Siguiendo el Método de acondicionamiento 3 de las cochinillas harinosas, Boucot y Poinar (2011)
basado en el uso de etanol de 95% y 100% se evitó explican que la cera de la cochinilla está compuesta por
el colapso del tejido, sin embargo, se presentó el alcoholes, ácidos grasos y parafina, la cual se secreta
inconveniente de que no se eliminaba la cera del cuerpo en forma de filamentos. De la misma forma, Ammar
de forma apropiada, por lo que fue imposible analizar et al. (2013) menciona la presencia de ésteres de cera
las ultraestructuras del cuerpo (Figura 3.A-3.E), poros que contienen ácidos grasos saturados y alcoholes. Por
secretores de la cera, como cerarios y multiloculares medio de la comprensión de los constituyentes orgánicos
en la región cercana al pigidio (Figura 3.D y 3.E). de la cera de los insectos anteriores, así como los
El etanol es un fijador que tiene alta capacidad de presentes en la cochinilla harinosa, fue posible utilizar
penetración y lo hace de forma lenta (Murillo et al., el xilol como compuestos químico diluyente de la cera
2013), además de mantener la tonicidad y osmolaridad del cuerpo de la cochinilla harinosa y simultáneamente
de las células y evitar que estas colapsaran (Nieto, evitar el colapso del tejido.

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Figura 2. Método de acondicionamiento 2 de la cochinilla harinosa empleando el sonicador. Ultraestructuras: A. Ultraestrutural del
aparato bucal con desprendimiento del segmento del labio. B. Ultraestructura de cerario con el tejido circundante colap-
sado. C. Ultraestructura de poros multiloculares con el tejido circundante colapsado. D. Región del pigidio con el tejido
limpio, pero colapsado. E. Ultraestructura de poros multiloculares cubiertos de cera. Muestras colectadas en el cultivo de
banano de la región Atlántica de Costa Rica. 2010-2012.
Escala: 27,4 µm (A); 3,45 µm (B); 1,69 µm (C); 60 µm (D); 25 µm (E).
Figure 2. Conditioning method 2 mealybugs utilizing the sonicator. Ultrastructures: A. Ultrastructure of mouth parts with tear on
the lip segment. B. Ultrastructure of cerarius with the surrounding collapsed tissue. C. Ultrastructure of multilocular pores
with the surrounding collapsed tissue. D. Region of pygidium with clean tissue but collapsed. E. Ultrastructure of multi-
locular pores covered with wax. Samples collected from banana crop from the Atlantic region, Costa Rica. 2010-2012.
Scale: 27.4 µm (A); 3.45 µm (B); 1.69 µm (C); 60 µm (D); 25 µm (E).

Después de analizar los resultados para de acondicionamiento 4) y en algunos casos en que

la manipulación de la cochinilla harinosa con la se utilizó etanol (Método de acondicionamiento 3),
técnica de MEB se concluyó que el tratamiento más mientras que los tratamientos menos recomendables
recomendable fue en el que se utilizó xilol (Método fueron el Método de acondicionamiento 1 (Karnovsky

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 PALMA Y BLANCO: Acondicionado de la cochinilla harinosa para su clasificación

Figura 3. Método de acondicionamiento 3 de la cochinilla harinosa empleando etanol al 95% y 100%. Ultraestructuras: A. Región
esternal del cuerpo cubierto de cera. B. Región de la cabeza con un gran bloque compacto de cera. C. Ultraestructura de las
partes bucales con presencia de cera. D. Ultraestructura del cerario que corresponde a uno de los poros secretores de cera
con gran cantidad de la misma a su alrededor. E. Región del pigidio con cera dispersa a su alrededor. Muestras colectadas
del cultivo de banano de la región Atlántica de Costa Rica. 2010-2012.
Escala: 360 µm (A); 30 µm (B); 34 µm (C); 4,4 µm (D); 11 µm (E).
Figure 3. Conditioning method 3 for mealybugs utilizing 95% and 100% ethanol. Ultraestructures: A. Sternal region of the body
covered with wax. B. Region of head covered with a large compact block of wax. C. Ultrastructure of mouth parts with
wax around. D. Ultrastructure of cerarius covered with traces of wax around. E. Region of pygidium with traces of wax.
Samples collected from banana crop from the Atlantic region, Costa Rica. 2010-2012.
Scale: 360 µm (A); 30 µm (B); 34 µm (C); 4,4 µm (D); 11 µm (E).

y tetraóxido de osmio), así como el Método de AGRADECIMIENTOS

acondicionamiento 2 (sonicador). De esta forma,
la correcta elección de la técnica permite reducir el A la Vicerrectoría de Investigación de la
tiempo de acondicionamiento, así como costos en el Universidad de Costa Rica por el financiamiento
uso de reactivos. para el desarrollo del Proyecto código 810-B2-232, al

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 PALMA Y BLANCO: Acondicionado de la cochinilla harinosa para su clasificación

CIEMIC por la disponibilidad de las instalaciones y a

la MSc. Ethel Sánchez de este centro de investigación
por la revisión y valiosos comentarios para este trabajo.

LITERATURA CITADA

Ammar, E.D., R. Alessandro, R.G. Shatters, and D.G. Hall.

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Boucot, A.J., y G.O. Poinar. 2011. Compendio
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Villalba. 2010. Técnicas básicas en microscopía
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Hardy, N.B., P.J. Gullan, y C.J. Hodgson. 2008. Una
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Figura 4. Método de acondicionamiento 4 de la cochinilla
harinosa (Hemiptera: Pseudococcidae) basada en
harinosa empleando xilol al 10%, como disol-
vente orgánico que removió las trazas de cera datos moleculares y morfológicos integrados. (En
sin provocar colapso de la superficie del cuerpo. inglés) System. Entomol. 33:51-71.
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