Exámenes que se realizan en muestras de micción espontánea (más de 5
ml):
Examen parcial de orina, cituria, microalbuminuria, proteína de bence jones,
ácido vanil mandélico, pigmentos biliares, cuerpos cetónicos, urobilina y
urobilinógeno, hemoglobinuria, AMILASURIA.
AMILASURIA. METODO ENZIMÁTICO COLORIMÉTRICO AUTOMATIZADO.
- FASE PRE ANALITICA
INTRODUCCION:
La cuantificación de amilasa es una urgencia de laboratorio. La amilasa es una
enzima del páncreas y las glándulas salivales que convierte el almidón de los
alimentos en glucosa y que está presente en la orina en cantidades mínimas.
Cuando hay una infiltración severa de algunos de estos órganos pasan
cantidades mayores de esta enzima a la sangre y es eliminada por tanto mayor
cantidad en la orina. Niveles elevados de amilasa pueden encontrarse en:
• Las pancreatitis agudas. En este caso los valores de amilasa en orina se
elevan antes que en sangre y se mantienen elevados por dos días después de
la crisis.
• Parotiditis.
• Úlcera péptica penetrante en páncreas.
Objetivo: Cuantificar amilasa en muestras de orina de 24h y micción
espontánea. Fundamento: Las pruebas de laboratorio se basan en la medición
de la actividad enzimática sobre un sustrato de almidón que constituye el
reactivo con el cual se enfrenta la enzima presente en la muestra, el almidón es
degradado a glucosa y esa degradación es proporcional a la actividad de la
amilasa. Reactivo necesario:
- Reactivo diagnóstico para la determinación de amilasa en fluidos biológicos.
Aparatos, utensilios y medios de medición
Tubos plásticos de 10 ml graduados de centrífuga.
Tubo para ensayo de 13 x 100 ó 15 x 125 mm.
Gradilla para los tubos de ensayos.
Pipetas graduadas de 5 ml, 10 ml.
Probeta graduada de 2000 ml.
Centrífuga.
Fotocolorímetro.
Muestra: Orina de micción espontánea o muestras de orina de 24h. La prueba
se puede realizar en una micción aislada, pero los resultados son más
confiables si se emplea en orina de 2h. Por lo general se realiza conjuntamente
con la cuantificación de amilasa sanguínea con el objetivo de comparar los
resultados. En este examen en particular la orina de 24 h no debe e tener
conservantes, ya que la alfa amilasa es inestable en la orina ácida. Realizar el
test de inmediato o alcalinizar las muestras para su almacenamiento a pH 7.0.
Las muestras conteniendo precipitado deben centrifugarse antes de efectuar el
test.
- FASE ANALITICA
1. Medir volumen de orina de 24 previa homogenización.
2. Centrifugar 10ml de orina a 1500 rpm por 5 min ó filtrar la orina. No pipetear
con la boca, evitar el contacto de reactivo con la piel porque la saliva y el sudor
contienen alfa amilasa.
3. Llevar la muestra al departamento de bioquímica para procesarla en el
equipo Hitachi o fotocolorímetro.
4. Cálculos:
Resultado en mmol/l x Volumen de la muestra expresado en litros * (si la
actividad de la alfa amilasa es muy elevada se hace necesario diluir la muestra
para su proceder e incluir el factor de dilución (FD) para realizar los cálculos).
Resultado en mmol/l x Volumen de la muestra expresado en litros. FD.
- FASE POSTANALITICA
Informe de los resultados: Amilasa en orina de 24h: U/24h. Amilasa en
muestras de micción espontánea: U/l. VALORES DE REFERNCIA: Orina de
24h: Menor o igual que 410 U/24h. Orina espontánea: menor que 460 U/l.
Fuentes de Error
1. No homogenizar bien las muestras de orina
2. Nivel de adiestramiento del técnico
3. Limpieza de la cristalería (con restos de sangre).
4. Mala conservación de la muestra.
5. No realizar correctamente la dilución.
6. Error en los cálculos.
7. Mal manejo y calibración del equipo.
8. Reactivos vencidos.
Referencia
- Lic. Bioquímica Elisa Luis Ramírez. J. Dpto Lab Clínico. Prof. Auxiliar.
LBALPPS. Manual de procedimientos en urianálisis [Internet]. Lima - 2003.
Disponible en: [Link]
procedimientos-tecnicos-urianalisis/manual-procedimientos-tecnicos-
[Link].
Toma de muestra: AMILASA EN SANGRE
USO PREFERENTE DE LA PRUEBA: su determinación es útil en el
diagnóstico de pancreatitis aguda, elevándose sus niveles 2 horas después de
inicio de esta, alcanzando el máximo a las 24 horas y recuperando sus niveles
normales 2 a 3 días después. Aumentando también en edemas, cáncer
pancreático, pulmonar, cetoacidosis diabética, colecistitis aguda, embarazo,
entre otras.
RANGO DE REFERENCIA: 28-100 U/L (adultos)
MÉTODO: Enzimático colorimétrico
INSTRUCCIONES AL PACIENTE: Ayuno de 8 horas antes de la prueba. No
ingerir alcohol por lo menos 24 horas antes de la prueba.
INSTRUCCIONES AL PERSONAL DE TOMA DE MUESTRA: Evitar la
hemólisis de la muestra.
TIPO DE MUESTRA: Sangre.
TIPO DE TUBO:
Tubo tapa roja (sin anticoagulante)
Tubo tapa verde (Heparina de Litio), lleno hasta la marca para los servicios de
UPC, Diálisis y trasplante renal adulto y pediátrico.
VOLUMEN MÍNIMO NECESARIO: 2 mL para pacientes pediátricos (tubo tapa
roja) ,2 a 8 mL para pacientes adultos (tubo tapa roja) ,4mL (tubo tapa verde)
para servicios de UPC, Diálisis y trasplante renal adulto y pediátrico.
CONDICIONES DE TRANSPORTE: Los tubos se deben transportar tapados,
en posición vertical, en un recipiente o gradilla, dentro de un contenedor sólido
a prueba de derrames y a temperatura ambiente. Evitar la agitación para
prevenir la hemólisis.
TIEMPO DE TRANSPORTE: Máximo 4 horas desde la obtención de la
muestra.
TIEMPO DE ENTREGA DE RESULTADOS: Pabellón: 30 minutos, 1 hora para
pacientes de los servicios críticos y Urgencia, 2 horas para pacientes
hospitalizados, 6 horas para pacientes ambulatorios.
LIMITACIONES: Muestras lipémicas y muy hemolizadas invalidan la prueba.
Fármacos que interfieren:
Captopril, cimetidinas, corticosteroides, estrógenos, furosemida, ibuprofeno,
indometacina, ácido mefenámico, metildopa, nitrofurantoína, anticonceptivos
orales, sulfonamidas, tetraciclinas, ácido valproico, producen un aumento de la
amilasa sérica.
Toma de muestra: AMILASA URINARIA MUESTRA AISLADA
USO PREFERENTE DE LA PRUEBA: Su determinación es útil en el
diagnóstico y tratamiento de pancreatitis aguda. La actividad enzimática puede
mantenerse elevada hasta dos semanas después de un episodio de
pancreatitis aguda. La actividad puede estar normal o disminuida en la falla
renal y macroamilasemia.
Considerando las fluctuaciones a las que está sujeta la amilasa en orina, se
recomienda determinar el cociente entre amilasa y creatinina en suero/orina.
RANGOS DE REFERENCIA: Hombres : 16-491 U/L
Mujeres : 21-447 U/L
MÉTODO: Enzimático colorimétrico.
INSTRUCCIONES AL PACIENTE: Para la correcta interpretación de los
resultados es muy importante su colaboración y es fundamental que usted
recolecte la primera orina de la mañana.
Antes de la recolección de la muestra, el paciente se debe realizar un
cuidadoso aseo de la zona genital con abundante agua y jabón:
Paciente mujer: Lavar los genitales, separando cuidadosamente los labios
mayores, con un algodón embebido en agua jabonosa y limpiar de adelante
hacia atrás una sola vez. Elimine el algodón y repita el procedimiento con otro
algodón. Enjuagar con agua eliminando totalmente el jabón y secar la zona con
un paño seco y limpio.
En lo posible evitar recolectar la muestra si la paciente está en su período
menstrual, en caso contrario cubrir la zona vaginal con un tapón de algodón
para evitar que la orina se contamine.
Paciente hombre: Retraer la piel anterior del pene (prepucio) y lavar la zona
con algodón embebido en agua jabonosa. Enjuagar con agua eliminada
totalmente el jabón y secar la zona con un paño seco y limpio.
Luego del aseo genital, eliminar el primer chorro de orina y sin cortar la micción
recolectar el segundo chorro de orina en un frasco o tubo (estériles para
Urocultivo).llene hasta la mitad, tape el frasco o tubo y rotule con su nombre y
dos apellidos.
Lleve la muestra entes de 2 horas de recolectada a la toma de muestra
correspondiente.
INSTRUCCIONES AL PERSONAL DE TOMA DE MUESTRA: Verifique la
correcta rotulación de la muestra antes del envío al laboratorio.
TIPO DE MUIESTRA: Orina segundo chorro.
CONTENEDOR: Recipiente limpio, tubo de orina proporcionado por el
laboratorio o bolsa colectora (lactantes sin control de esfínter).
VOLUMEN MÍNIMO NECESARIO: 10mL
CONDICIONES DE TRANSPORTE: Temperatura ambiental.
TIEMPO DE TRANSPORTE: Máximo 4 horas desde la toma de muestra.
TIEMPOI DE ENTREGA DE RESULTADOS: 1hora para pacientes de los
servicios críticos hospitalizados, 6 horas para pacientes ambulatorios.
LIMITACIONES:
El consumo de alcohol etílico, los anticonceptivos orales y algunos diuréticos
podrían elevar falsamente los resultados de la prueba. La contaminación por
fecas o fluido vaginal invalida la prueba.
Referencia
- Claudia Soto R. Ximena Pozo F. Eduardo Espejo D. MANUAL DE TOMA DE
MUESTRA UNIDAD DE LABORATORIO CLINICO -COMPLEJO AISTENCIAL
DR. SOTELO DEL RIO. 2013.
AMILASA MEDIANTE ENSAYO AUTOMATIZADO CON PRUEBA
COLORIMÉTRICA CINÉTICA.
METODOLOGÍA.
En el contexto de un estudio observacional, transversal y longitudinal, sobre
muestras de saliva matutinas (recogidas al despertar) de pacientes voluntarias
en tratamiento en salud mental y que han firmado un consentimiento informado
de investigación, desarrollamos conjuntamente un método mediante la
utilización de la prueba colorimétrica cinética para la cuantificación de la α-
Amilasa, número de catálogo OSR6182 de Beckman Coulter, como método
fiable para la determinación in vitro de este metabolito en saliva humana. Este
proyecto obtuvo la aprobación del Comité de Ética y de la Comisión de
Investigación del Consorcio Hospital General Universitario de Valencia.
Criterios de inclusión: Mujeres, entre 30 y 60 años, que presentaban un
diagnóstico clínico de trastorno de la esfera ansioso y/o depresivo. Criterios de
exclusión: No firmar el consentimiento. Antecedentes de enfermedad coronaria
o cáncer, enfermedad neurológica o neurodegenerativa o insuficiencia renal
crónica, o tratamiento esteroideo en los últimos meses. Mujeres embarazadas.
Enolismo o Toxicomanía en activo.
PROCEDIMIENTO.
A todas las participantes se les solicitó la recogida de saliva en un colector
Salivette nada más levantarse (al despertar) y en ayunas. Se les proporciono
un kit compuesto de: Bolsa de plástico contenedora, tubo Salivette Sarsterd
para recogida de saliva, papel con código de Investigación y con las siguientes
instrucciones: Recoja las muestras a primera hora de la mañana (al despertar),
puede enjuagarse previamente la boca con agua pero no limpiarse los dientes.
Después mantenga el algodón en la boca sobre un minuto y medio, y cuando lo
note suficientemente humedecido reintroducirlo en el tubo. Llevar las muestras
esa mañana al Laboratorio del Servicio de Análisis Clínicos del CHGUV. Las
muestras fueron codificadas numéricamente en la USM por lo que ambos
Laboratorios desconocían su pertenencia. Una vez recibidas en el SAC-
CHGUV fueron grafiados los tubos con el código y almacenadas a -40 º C. El
objetivo de congelar directamente el tubo, reside en la necesidad de
cristalización de la posible mucosidad de la muestra, para su ruptura y evitar la
posibilidad de embozo en el analizador. Una vez descongelada y centrifugadas
las muestras aparecen totalmente líquidas y su contenido homogeneizado. Se
utilizó la prueba colorimétrica cinética para cuantificar la α-amilasa, [1,4-α-D-
glucan 4glucanohidrolasa, EC [Link]], en el analizador Beckman Coulter, del
Laboratorio del SAC-CHGUV. Este método está basado en las
recomendaciones de la IFCC (International Federation of Clinical Chemistry).
En la prueba colorimétrica de α-amylasa, se utiliza como sustrato 4,6-
etilideno(G7)-pnitrofenil(G1)-α-D-maltoheptaosida (etilideno-G7PNP). Dicho
sustrato reacciona con α-amylasa y los fragmentos con α-glucosidasa
provocando una liberación al 100% p-Nitrofenol (PNP). El aumento de la
absorbancia a 410 nm es directamente proporcional a la actividad de α-amilasa
en la muestra.
ANÁLISIS DEFINITIVO.
En el Laboratorio del Servicio de Análisis Clínicos, se escogieron y
descongelaron al azar 75 muestras en tandas, después de descongelar y
centrifugar las muestras, tras comprobar las que contenían una cantidad
suficiente de saliva, se procedió a la separación la cantidad necesaria para el
analizador, la cantidad restante de saliva de cada una de las muestras fue
introducida en viales Eppendorf codificados y vuelta a congelar a -40º C. Se
determinaron 56 muestras, siendo el resto descartadas para este estudio por
presentar una cantidad insuficiente de saliva para realizar la doble
determinación.
Referencia
- de Lamo ac, Julia M. Sánchez a, Alicia Salvador d, Goitzane Marcaida c,
Vanesa Hidalgo d, Gema Peiró ae, Juan Pretel f, Rafael Torregrosa c, Marta
García d, Antonio J. Sánchez f, Purificación Peña c, Teresa Montoliu d, Roberto
Bataller f, Amparo Salvador c, Angelina Sanz b, Araceli Carbonell c, Cristina
Corbellas ab, Vicente Monzó c., Pedro T Sánchez Ab, Miguel.
DETERMINACIÓN DE LOS NIVELES SALIVARES DE LA ALFA-AMILASA
MEDIANTE ENSAYO AUTOMATIZADO CON PRUEBA COLORIMÉTRICA
CINÉTICA VERSUS KIT COMERCIAL SALIMETRIC: CORRELACIÓN Y
CONCORDANCIA [Internet]. 2015. Disponible en:
[Link] miscelaneo_2.htm