TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

Instituto Tecnológico de La Paz

Departamento de Ingenierías, Ingeniería Bioquímica
Enero – Junio, 2025

Recuento de organismos coliformes

[Microbiología]
[Dra. Reyna Romero Geraldo]
[Erick Saúl Arce Terán]
[21310716], [L21310716@[Link]], [Grupo E]
Fecha: 15-05-2025

Resumen
El agua es un recurso indispensable, esta debe pasar por una variedad de filtros para garantizar su
calidad y descontaminación. Una de las principales pruebas, es a la existencia de bacterias
coliformes, que fungen como organismos indicadores de contaminación en el agua. En particular,
los coliformes fecales están relacionados a una exposición en cierto grado a heces fecales, debido a
que estos organismos se caracterizan por proliferar en el colón de todos los animales de sangre
caliente. Entre las pruebas más destacadas para detectar coliformes, está el método del número más
probable (NMP), llevada a cabo mediante diluciones decimales, y de esta forma alcanzar un
estimado (NMP) de organismos coliformes por cada 100 ml de muestra. El objetivo general de esta
práctica fue conocer las características generales de los organismos coliformes, así como el método
del número más probable para su detección. Primeramente, se obtuvo una muestra de agua potable.
Luego, se realizó una serie de diluciones decimales seriadas. Posteriormente, se inoculó 1 ml de
cada dilución en tres tubos con 10 ml de caldo LST. Por último, se incubaron los tubos. Al no haber
resultados perceptibles en la prueba presuntiva, no se realizaron las demás pruebas consecuentes. La
no presencia de gas en las campanas, ni la turbidez en los caldos, son indicios de que no hubo
fermentación alguna y, por ende, no había presencia de organismos coliformes en las muestras. Por
lo que, cabe destacar que la no presencia de estos microorganismos, son indicio directo de unas
buenas prácticas de salubridad y control de la calidad del agua del pozo en particular. En
conclusión, no se cumplió la totalidad de los objetivos, de igual forma, cabe destacar que el método
del NMP es muy útil en el laboratorio, pero tiene sus límites y consideraciones al ejecutarse.

Palabras clave: Coliformes, Método NMP, E. Coli, Calidad del agua, Organismos indicadores.
agua se mide en función de las
concentraciones permisibles de determinadas
Introducción y objetivos
variables de calidad del agua, establecidas por
El agua es un recurso indispensable normas, estándares o concentraciones
para la vida, por lo que optar por agua limpia máximas permitidas. Los organismos
y purificada, es crucial para no contraer indicadores son microorganismos, tales como
bacterias patógenas al momento de su uso. bacterias y virus, que se emplean como
Por ende, el monitoreo de la calidad del agua alternativa para medir la existencia de agentes
se realiza para determinar la capacidad de un patógenos en un ambiente en particular. Hay
recurso hídrico para un uso en particular. una amplia variedad de organismos
Considerando lo anterior, la potabilidad del indicadores, que se pueden emplear para
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supervisar la calidad del agua. La eficacia en Estas especies de bacterias son

la detección de patógenos se basa en su límite microflora autóctona y habitan en el sistema
cuantificable, su resistencia al estrés intestinal de los animales de sangre caliente,
ambiental y otras contaminaciones. La y su aparición en aguas dulces y marinas se
existencia de bacterias coliformes en el agua relaciona con la existencia de agentes
sugiere que la contaminación del agua puede patógenos bacterianos. Se han desarrollado
haber sido causada por materia fecal cuatro evaluadores de contaminación fecal:
(Motlagh, et al., 2019; Some S., et al., 2021). los coliformes totales, los coliformes fecales,
E. coli y Enterococcus. No obstante, se
Los atributos óptimos de un indicador
considera a E. coli como una bacteria
de salud incluyen: estar confinado al hábitat
indicadora de coliformes fecales más
intestinal; ser identificados en la muestra
particular que los coliformes totales y fecales,
cuando los patógenos fecales se encuentran;
dado que el examen para coliformes totales y
exhibir una mayor resistencia que los
fecales también puede identificar bacterias
patógenos ante desinfectantes y condiciones
coliformes no fecales termotolerantes
desfavorables en el entorno; no tener la
(Motlagh, et al., 2019).
capacidad de propagarse en el entorno; de
identificación sencilla, ágil y económica; y la El examen más habitual para
densidad del indicador debe estar relacionada identificar organismos indicadores implica
con el nivel de contaminación fecal o grado detectar la presencia de Escherichia coli, lo
de contamina. Las bacterias coliformes que únicamente señala la probabilidad de
señalan la contaminación de las heces y, en contaminación por heces, no la existencia
consecuencia, la posible existencia de otros auténtica de patógenos, ni la manifestación de
patógenos como virus, bacterias, protozoos y enfermedades. No obstante, para la
fases enquistadas de metazoarios. Se identificación inmediata de organismos
presupone que estos indicadores y las señalizadores en agua potable, se podría
bacterias patógenas pueden tener una relación tomar en cuenta el método del número más
mutua, aunque no siempre se percibe una probable (NMP), el cual, tiene un uso muy
relación con la presencia de patógenos convencional en los laboratorios. Este se
(Barrera, G., et al, 2013). caracteriza por ser un examen cualitativo, no
cuantitativo, que solo señala la existencia de
Los organismos coliformes se
coliformes, no su representación numérica.
caracterizan por ser bacterias Gram negativas,
Esta prueba se lleva a cabo en tres fases:
no esporuladas, con formología bacilar,
prueba presuntiva, prueba confirmada y
fermentadoras de lactosa, por lo cual, generan
prueba completa, donde se identifica y
ácido y gas al incubarse a temperaturas que
corrobora la existencia del organismo
oscilan entre los 32 y 35 °C. Inicialmente,
señalizador E. coli. En general, a pesar de la
este grupo comprendía principalmente
escasez de enumeración microbiana, el
especies de los géneros Citrobacter,
método NMP para la detección de la calidad
Enterobacter, Escherichia y Klebsiella, pero
del agua es rentable y rápido, además de
con el progreso en los métodos taxonómicos
permitir determinar la calidad del agua
se ha descubierto que comprende una
(Ahmed, T., et al., 2015).
variedad más extensa, abarcando hoy en día
hasta 19 géneros, la mayoría pertenecientes a Los procedimientos del NMP se han
la familia Enterobacteriaceae (Martin, N. H., empleado para calcular la cantidad de
et al., 2016). microorganismos presentes en alimentos,
aguas residuales y otras muestras donde se
realiza una evaluación constante de la
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cantidad de células. Se puede realizar un incubación a 35ºC de la muestra diluida en un

conteo del NMP de una muestra natural medio líquido selectivo. Este método puede
utilizando medios y condiciones de ser aplicable asegurar la calidad y
incubación altamente selectivos enfocados a purificación del agua potable, agua
un organismo, un grupo reducido de estos o a purificada, hielo y/o variedad de alimentos
un patógeno específico. En cambio, también procesados térmicamente (SSA, 1994).
es posible realizar un conteo utilizando
Objetivo general:
medios complejos para lograr una estimación
global del número de células viables. La Conocer las características generales
aplicación de duplicados de los tubos en cada de los organismos coliformes, como grupo
dilución incrementa la exactitud del NMP indicador, así como el método del número
final (Madigan, et al., 2021). más probable para su detección.
El método del NMP, consiste en Objetivos específicos:
inocular una serie de tubos, de caldo de
lactosa, con las diluciones decimales de la 1. Conocer y distinguir a los organismos
muestra de agua. La generación de gas, la coliformes como grupos indicadores
acidificación o una proliferación significativa 2. Utilizar el método del número más
en los tubos de ensayo después de 48 horas de probable para detectar la presencia de
incubación a 35 °C representan una reacción coliformes en muestras convencionales
presuntiva positiva. Tanto los caldos de de agua potable
lactosa como los de lauril triptosa pueden 3. Establecer los estándares permitidos de
emplearse como medios presuntivos. Todos coliformes en las muestras obtenidas
los tubos que presentan una reacción supuesta según la NOM.
positiva son posteriormente sometidos a un 4. Explicar las causas que determinan la o
examen de confirmación. El examen de la no presencia de coliformes en una
coliformes fecales (mediante el uso de un muestra.
medio EC) puede realizarse para identificar Materiales y métodos
los CT que son FC: la generación de gas
después de 24 horas de incubación a 44,5 °C A. Preparación de la muestra.
en un medio de caldo EC se estima como un
Se recolectó una muestra de agua
resultado positivo a la presencia de
potable, proveniente de la llave de la tarja del
organismos fecales. Los resultados del
laboratorio de bioquímica, se mantuvo en un
método MTF se exponen en relación al
recipiente estéril a temperatura ambiente y se
número más probable (NMP) de
resguardo. Posteriormente, se realizaron
microorganismos existentes. Este número
diluciones seriadas de la muestra, en solución
representa una proyección estadística del
salina, llegando de la dilución 10-1 hasta llegar
número medio de coliformes presentes en la
a la 10-5.
muestra (Rompre, A., et al., 2002).
En particular, todas estas técnicas se
rigen por medio de la Norma Oficial B. Microorganismos coliformes por
Mexicana NOM-112-SSA1-1994, la cual número más probable (NMP).
establece el método microbiológico para la
estimación del número de coliformes De las diluciones decimales de 10-1 a
-5
presentes en muestras provenientes de 10 , se inoculó 1 ml de cada dilución en cada
productos de consumo humano (alimentos), uno de los tres tubos con 10 ml de caldo lauril
realizando el cálculo del NMP después de la sulfato de triptosa, esto se realizó por
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duplicado. Luego, se incubaron los tubos a para asegurar la esterilidad del ambiente de la
35°C durante 48 horas, en la incubadora zona de muestreo es importante (Bronzatti et
marca VWR. Para finalizar, se examinaron al., 2024).
los tubos a las 24 horas y a las 48 horas para
Al momento de realizar
observar si hay producción de gas en la
procedimientos para analizar la presencia de
campana de fermentación. La presencia de
coliformes en la prueba presuntiva, es
gas, en cualquier cantidad dentro del tiempo
necesario hacer uso de las tablas establecidas
de incubación hace positiva a la prueba.
por la Norma Mexicana, que estipulan el
rango de valores del Número Más Probable
de acuerdo a la cantidad de tubos que
Resultados
presenten gas formado. Entre más valores
En términos generales, no hubo tengan los tres dígitos en la Norma Mexicana
presencia de gas en las campanas de (producto de la cantidad de diluciones por
fermentación, ni turbidez en ninguno de los 6 triplicado de la muestra), existirá un mayor
tubos de la prueba presuntiva, esto al término número de microorganismos coliformes
de las 48 horas de incubación. Por ende, no se fecales (Secretaria de Salud,1994).
llevaron a cabo las demás pruebas: La
La resolución matemática del NMP
confirmativa general y la confirmativa a
se fundamenta en dos premisas
coliformes fecales.
fundamentales. Se asume que los organismos
en la primera dilución y en todas las
diluciones subsiguientes se reparten de
manera aleatoria. Para satisfacer este
supuesto, es necesario que el sustrato de
prueba se distribuya adecuadamente en las
diluciones iniciales y posteriores. En
segundo lugar, se asume que uno o varios
seres vivos presentes en un volumen de
inóculo tienen la habilidad de generar un
resultado favorable. El incumplimiento del
segundo supuesto tiende a generar patrones
inusuales de resultados positivos y negativos,
como diluciones inferiores que presentan
Figura 1. Visualización de los caldos LTS
ciertos resultados negativos en las réplicas, y
con campana de Durham, una vez pasadas las 48 horas luego diluciones superiores que resultan
de incubación de la prueba presuntiva. totalmente positivas. Una conjetura adicional
que respalda la técnica NMP es que todos los
organismos de prueba tienen un volumen
Discusión parecido (Woomer, P. L., 1994).

Cuando se requieren hacer exámenes Teniendo en cuenta lo anterior, el no

microbiológicos, un correcto muestreo del contar con presencia de gas ni turbidez en las
agua es esencial para no interferir en los pruebas presuntivas, es significado de una
resultados reales del experimento. En el caso prueba negativa, lo cual, implica la no
de la determinación de coliformes en agua, se presencia de organismos coliformes en la
busca la presencia principalmente de E. coli, muestra (como E. Coli), o una presencia muy
por lo que utilizar equipos e instrumentos diluida, no perceptible para el método del
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NMP, el cual tiene un límite de detección, procedimientos normalizados que, implicaron

que en particular es de 2 NMP/100 mL, esto la siembra en tubos con caldo de lácteo. Los
implica que existe un correcto saneamiento, resultados logrados se interpretaron
cuidado de la distribución y almacenamiento basándose en regulaciones como las de la
de agua potable en el pozo que abastece de OMS y las leyes locales, como la NOM-112-
este líquido al lugar proveniente de la zona de SSA1-1994, lo que facilitó la evaluación del
muestreo (Secretaria de Salud,1994). nivel de contaminación microbiana y, en
consecuencia, la calidad del agua examinada.
Entre los principales errores que
pueden llegar a ocurrir utilizando el método Esta metodología demostró ser un
del NMP, es la mala preparación de las recurso efectivo para el seguimiento de
diluciones seriadas, en la que un cálculo microorganismos señalizadores de
incorrecto o una técnica inadecuada puede contaminación por desechos fecales,
conducir a rangos de dilución excesivamente subrayando su importancia en la salvaguarda
altos o bajos, poniendo en riesgo la de la salud pública, dado que la presencia de
sensibilidad del procedimiento. Este es un estos organismos puede indicar posibles
factor necesario a tener cuenta, cuando riesgos de patologías de carácter
analizamos la proveniencia de nuestra gastrointestinal. Además, se destacó la
muestra, lo cual puede conllevar a muestras relevancia de llevar a cabo inspecciones
no representativos, o muestras no del todo regulares en los sistemas de suministro de
heterogéneas. De la misma forma, al agua para asegurar su seguridad y acatar las
momento de la recolección de la muestra, es normas de salud.
necesario obtenerla mediante un
Para finalizar, el método del NMP es
procedimiento aséptico, así como su
esencial en el estudio microbiológico del
resguardo en un contenedor estéril, para su
agua, ofreciendo datos útiles para la toma de
análisis en el laboratorio, el cual solo tiene un
decisiones en áreas de gestión ambiental y
rango de 6 horas una vez obtenida la muestra
salud pública. La experiencia subrayó la
(Rompre, A., et al., 2002).
importancia de seguir protocolos estrictos en
el estudio del agua, garantizando su calidad y
reduciendo los peligros para la población.
Conclusiones
Los coliformes son un grupo diverso
de microorganismos, los cuales, son de Referencias bibliográficas
importancia en ciertos casos de estudios y
Ahmed, T., Baidya, S., Acharjee, M., &
análisis en particular, como en la certificación
Rahman, T. (2015). Qualitative
en la calidad de los alimentos, donde fungen
analysis of drinking water through the
como un indicador importante de
most probable number (MPN) method.
contaminación si están en una alta presencia
Stamford Journal of Microbiology,
en una muestra. De no estar presentes,
3(1), 9–16.
indican buenas prácticas de salubridad en
[Link]
general.
Barrera, G., Fernández, C. L., Wong, I., &
La práctica de laboratorio facilitó la
Ramírez, P. (2013). La sensibilidad del
aplicación del método del Número Más
grupo coliforme como indicador de la
Probable (NMP) para establecer la no
presencia de enterobacterias patógenas
existencia de coliformes totales y fecales en
en cuatro cuerpos acuáticos de
una muestra de agua potable, a través de
México. Hidrobiológica, 23(1), 87-96.
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