Analisis fisiologico de Phaseolus vulgaris mediante prueba de tetrazolio
Edison Alexander Pinilla Barbosa - 20211140056
Angie Lorena Valderrama Pérez- 20211140065
Objetivo general.
Determinar la capacidad germinativa de las semillas de Phaseolus vulgaris, con la prueba de
tetrazolio.
Introducción
El frijol (Phaseolus vulgaris) es una especie de importancia por su altos valores nutritivos
relacionados a la obtención de proteína aprovechable para el ser humano. La producción de este
alimento se basa a partir de la determinación de semillas de alta calidad. El frijol Phaseolus vulgaris,
es una importante leguminosa de alimentación humana es un alimento de bajo costo, contiene
vitaminas como folato, B12, es alto en antioxidantes, alto en carbohidratos de liberación lenta,
contiene minerales importantes como el hierro y el zinc, es alto en proteína y contenido de fibra, es
amigables con el ambiente con el Rhizobium, que fija nitrógeno del aire, tiene una amplia diversidad
genética para ambientes diferentes y un uso eficiente del agua. Se produce en áreas marginales, es un
grano muy nutritivo, energético y saludable. Sin embargo su producción depende de variables
climáticas , tipo y variedad de semilla utilizada y el manejo agronómico determinan la productividad
y rentabilidad del cultivo. (Cruz et al 2021) Es por esto que, en el laboratorio se evaluó la aplicación
del test de tetrazolio como método para determinar la viabilidad en semillas Phaseolus vulgaris.
La prueba de tetrazolio es un identificador que determina la viabilidad de las semillas, en cómo actúan
las hidrolasas, específicamente las hidrolazas del acido malico, que reduce las sales de tetrazolio a
trifenilformazan en los tejidos que son vitales en la semillas. El tetrazolio de la semilla viva le da al
tejido un color rojizo por reproducción, es decir que la semilla es viable y el tejido muerto no
reacciona manteniendo su color natural. Esta prueba permite estimar de manera rápida y precisa la
factibilidad de las semillas. En los antecedentes presentados por Olaya, 2021 utilizaron semillas de
forma aleatoria por variedad, dando como resultado la determinación de un 20% de alguna semillas
no es apta para la siembra , pero el resto de semillas presentó una buena viabilidad, por lo tanto la
prueba de tetrazolio es importante para conocer la viabilidad de las semillas.
Marco teórico
La prueba de tetrazolio es importante para los recursos fitogenéticos, pues permite una viabilidad en
las producción agrícolas, tal y como lo señala Romero, E. et al (2020). Además, es importante tener
una trazabilidad en el tiempo de variedades que sean la base genética de los cultivos uniformados,
dado que con la pérdida de diversidad agrícola por los monocultivos, la obtención de alimentos en el
tiempo se ha reducido a unos pocos granos.
La prueba de tetrazolio es importante para determinar la capacidad germinativa de las semillas, siendo
exitosa en gran cantidades de especies cultivables. Esta prueba es una importante herramienta en la
viabilidad y vigor de las semillas. Este análisis consiste en la difusión que la enzima deshidrogenasa
emite en la sal de los tejidos vivos, causando la aparición de un compuesto soluble de color rojizo
llamado Formazan, el cual indica la actividad respiratoria en las mitocondrias, haciendo posible la
observación de que la semilla es viable; y los tejidos que no presentan alguna coloración son los no
viables, tal como manfiiesta Salazar, S. et al (2020).
Metodología
Se realizó la prueba de tetrazona con semillas de Phaseolus vulgaris, obtenidas en la plaza de
mercado de Paloquemao. Para la prueba, se utilizaron tres repeticiones en placas petri, con dos
semillas cada una tomadas al azar. Luego, se llenó las placas petri hasta la mitad de cada una, y
pinchando hasta 4 veces la semilla para que pudiera absorber el reactivo; se tomo la solución de
tetrazolio (cloruro de 2, 3 y 5 trifenil tetrazolio).
Las semillas se colocaron en las cajas petri, (figura, 1) cubriendo estas con la solución al 0,1%. El
tiempo de exposición bajo condiciones de oscuridad fue de 3 a 4 horas en incubadora. Al finalizar el
tiempo de exposición se realizó un enjuague con agua corriente para remover el tetrazolio.
Inmediatamente se abrieron con ayuda de un escalpelo para el reconocimiento de la coloración del
embrión y de las zonas meristemáticas, tomando como viabilidad de las mismas la coloración intensa
del embrión, debido a la actividad respiratoria de las células vegetales.
Figura 1. montaje de 3 pruebas de semillas de Phaseolus vulgaris, con tetrazolio.
Para este laboratorio de utilizaron los materiales como:
1. Solución de tetrazolio al 0,1%.
2. Cajas petri.
3. Pinzas.
4. Bisturí.
5. Papel aluminio.
6. Agujas de disección recta.
Resultados
En torno a la valoración de la tinción de semillas de Phaseolus vulgaris, se pueden ver (figura 2)
como algunas semillas conservan mayor coloración que otras al realizar el corte histológico en el
dicotiledon, siendo a causa de la exposición de 3 horas a la sal de tetrazolio. Se clasificó la viabilidad
según la pigmentación de los embriones, como viable con vigor bajo y no viables, dado que las
semillas desde un inicio presentaban un estado de descomposición tenue, lo que condujo a que tal vez
la prueba no tuviera los resultados óptimos para determinar el porcentaje adecuado de viabilidad.
Figura. 2. Corte de dicotiledóneas después de 3 horas en la incubadora, con una solución de tetrazolio
al 0,1%
Figura 3. viabilidad de las semillas de acuerdo a dos niveles, vigor bajo y ausencia de vigor.
En este laboratorio, la prueba de tetrazolio arrojó que las semillas no son viables para la germinación
de futuros procesos productivos, con respecto a las 3 repeticiones realizadas. (Figura 3).
Discusión de resultados
La determinación de la germinación, como se mencionó anteriormente, tiene gran importancia en la
germinación de semillas. En este estudio no se puede determinar dicho porcentaje, pero sí constatar
que semillas son viables para siembra de las mismas en la unidades experimentales de los proyectos
de Fisiología Vegetal 2024-03.
La obtención de colores rosa pálidos o falta de coloración indican poca viabilidad o la muerte del
embrión. Debido al número bajo de pruebas no se pudo cuantificar el porcentaje de viabilidad de las
semillas. (Figura. 3)
Figura 4. semilla a la derecha con su embrión y meristemos de color rojizo, con una media escala de
viabilidad, y la izquierda casi blanca, presencia de celulas muertas que no reaccióna al tetrazolio.
Solamente dos semillas alcanzaron un grado de viabilidad mediano, en cambio la presencia de
semillas viables fue notaría, obedeciendo a la degradación de las membranas celulares por
peroxidación de lípidos y peroxidación no enzimática, factores que contribuyen a la degradación de
las semillas, señala Espitia, M. et al (2017)
Conclusiones
La prueba de tetrazolio es importante para conocer el potencial germinativo de las semillas,
reconociendo partes meristemáticas de las semillas que deben presentar actividad enzimática para
saber si son viables o no para las unidades productivas, ofreciendo una alternativa rápida para la
evaluación de su viabilidad.
Así mismo, la concentración de tetrazolio al 0,1% durante 3 horas se mostró con un grado de
efectividad alto, que permite obtener resultados a futuro de forma rápida con semillas de Phaseolus
vulgaris.
Finalmente, es recomendable para futuros experimentos seleccionar el mejor material posible respecto
a (tamaño, coloraciones vivas y fecha de recolección) con el fin de incrementar la viabilidad de las
semillas ante pruebas como esta.
Bibliografía
Olaya Leon, A.S. (2021) Viabilidad de semillas de seis variedades de frejol (phaseolus vulgaris l.)
mediante pruebas de tetrazolio (trabajo de titulación). UTMACH, Unidad Académica de Ciencias
Agropecuarias, Machala, Ecuador.
Acosta, E., Cruz, E., Cueto,J., (2021)Variedades de frijol (phaseolus vulgaris) del inifap. Instituto
Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias Ciudad de México.
Espitia, M. Araméndiz, H. Cardona, C., (2017) Características morfométricas, anatómicas y viabilidad
de semillas de Cedrela odorata L. y Cariniana pyriformis Miers. Universidad de Costa Rica.
Agronomía Mesoamericana, vol. 28, núm. 3, pp. 605-617.
Salazar Mercado, S. A., Quintero Caleño, J. D., & Bustos Urbano, V. J. (2020). Implementación de la
prueba de tetrazolio en las semillas de Raphanus sativus L. Revista Facultad De Ciencias Básicas,
15(2), 7–15. [Link]
Romero Pintor, E., Pelayo Robelto, W., Otalora Cristancho, A., & Ortiz Villota, M. (2020).
Evaluación de la calidad de semillas de fríjol común (Phaseolus vulgaris L.) variedad Palicero en el
banco de semillas de la Universidad Libre. Avances: Investigación En Ingeniería, 17(1).
[Link]