“DETERMINACIÓN DE ALCALOIDES PRESENTES EN ORINA,
MEDIANTE TÉCNICAS CUALITATIVAS E INMUNOLÓGICAS”
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN
BIOQUÍMICA DIAGNÓSTICA
Flores, Juan. C, Gómez, J.A.
GRUPO: 2751. EQUIPO:6. FECHA:3 DE MAYO DE 2017.
RESUMEN
Los alcaloides son uno de los grupos de metabolitos secundarios más diversos
encontrados en los organismos biológicos. Éstas sustancias se han usado con fines
recreativos y como drogas de abuso, por lo que se ha vuelto importante el
identificarlos. En el presente trabajo se determinó la presencia de estas sustancias
en 5 muestras biológicas de orina proveniente de diferentes pacientes, a las cuales
se les realizaron pruebas presuntivas (Dragendorff, Mayer, Bouchardat, Mandelin),
así como la identificación mediante un inmunoensayo a 3 muestras, identificando la
presencia de cocaína en la muestra 3 y Mefedrona en la muestra 4 por medio de la
reacción de Mandelin, y en las 3 muestras restantes THC únicamente con el
inmunoensayo, demostrando así que todas las muestras son positivas a la
presencia de distintos alcaloides provenientes de drogas de abuso.
PALABRAS CLAVE : Alcaloides , THC , Mefedrona , Cocaína , Orina,
Inmunoensayo
ABSTRACT
Alkaloids are one of the most diverse groups of secondary metabolites found in
biological organisms. These substances have been used for recreational purposes
and as drug abuse, which has become important to identify them. In this essay the
presence of these substances in 5 biological urine samples from different patients
was determinated, which were performed by presumptive tests (Dragendorff, Mayer,
Bouchardat, Mandelin) and identification by an immunoassay was determined to 3
samples identifying the presence of cocaine in the sample 3 and Mephedrone in the
sample 4 by the reaction of Mandelin, and in the remaining 3 samples THC only by
the immunoassay, proving that all samples were positive for the presence of various
alkaloids from drug abuse.
KEYWORDS
Alkaloids , THC , Mefedrone , Cocaine , Urine, Immunoassay
INTRODUCCIÓN
Desde el punto de vista químico, todos completa absorción se produce de 4 -6
los alcaloides son compuestos horas de ser ingerida. El volumen de
nitrogenados, estando en la mayoría distribución normal es de 5 L/kg de
de los casos el nitrógeno formando peso corporal. Su distribución en el
parte de un heterociclo y en algunas organismo es total, atravesando muy
ocasiones formando parte de una bien la barrera hematoencefálica y
cadena abierta. Están constituidos produciéndose una cierta acumulación
además por carbono e hidrógeno, en el cerebro, riñón y pulmó[Link]
muchos llevan oxígeno, lo que les eliminacion se realiza por orina hasta
confiere una serie de propiedades un 80% ( Castillo 2005, p.p 152)
físicas (sólida, cristalizable), y
raramente suelen contener azufre. Se La mefedrona tienen un mecanismo
derivan del metabolismo de los de acción que involucra a varios
aminoácidos(Evans, 2000 pp 520). neurotransmisores como son la
dopamina, la serotonina, la adrenalina
Un alcaloide comúnmente conocido es y la noradrenalina. a) Incremento de la
la cocaína, que es un estimulante liberación de dopamina, . b) Inhibición
poderoso del sistema nervioso en la recaptación de serotonina, . c)
central .Incrementa la concentración Aumento de la liberación de
de la dopamina, una hormona noradrenalina
asociada con el placer. La cocaína
actúa previniendo el reciclaje de la El THC, otro alcaloide más, se
dopamina, causando que se acumule absorbe por inhalación. El
una cantidad excesiva del metabolismo es muy complejo, se han
neurotransmisor. detectado cientos de metabolitos
(productos de transformación de los
Según su vía de entrada, la cocaína cannabinoides).Los cannabinoides se
puede presentar una absorción más o transforman en otras sustancias
menos rápida (entre 30 seg y 90 min) menos tóxicas y más fáciles de
y su duración de acción oscila entre 23 eliminar en el hígado donde un tercio
y 180 min. Esta es rápidamente se elimina por orina (Castillo 2005, p.p
metabolizada, generalmente por 152).
hidrólisis enzimática, para producir
benzoilecgonina (BE), ecgonina metil La Marihuana, un cannabinoide muy
ester y posteriormente ecgonina. En importante, es un depresor del sistema
un 1-5% se excreta por la orina sin nervioso. THC actúa en sistema
cambios. Ninguno de los metabólicos cerebral produciendo liberación de
poseen actividad biológica significativa dopamina en el núcleo accumbens.
en humanos.(Pomilio 2006)
Las técnicas de reconocimiento son
basadas en la capacidad que tienen
También se encuentra como alcaloide los alcaloides en estado de sal
a la mefedrona. Esta se absorbe de (extractos ácidos), de combinarse con
manera rápida por todas las vías. Su el yodo y metales pesados como
bismuto, mercurio, vanadio y iones I2 RESULTADOS
formando precipitados; estos ensayos
preliminares se pueden realizar en el La identificación de alcaloides
laboratorio o en el campo (Cortés, mediante las pruebas cuantitativa
2007, 153). (tabla 1.0 ) demostró que solo 2
muestras tenían la presencia de
En el presente estudio se emplearon 5 alcaloides la muestra 3 , siendo
muestras de orina provenientes de positiva en la reacción de Bouchardat
diferentes pacientes para determinar en el segundo extracto de
la presencia de alcaloides éter ,mientras que la muestra 4 fue
principalmente aquellos conocidos positiva en la prueba de Dragendorff
como drogas de abuso, mediante las en el segundo extracto de éter.
pruebas presuntivas de Dragendorff,
Mayer, Bouchardat, Mandelin así A estas dos extractos se realizó la
como en inmunoensayo para prueba de Mandelin para identificar el
corroboración y comparación de alcaloide presenta (tabla 1.1)
resultados. demostrando que para la muestra 3 se
trataba de cocaína, mientras que en
su caso la muestra 4 se trata de
Mefedrona.
MATERIAL Y MÉTODOS
A las 3 muestras restantes se realizó
La extracción de alcaloides a partir de la prueba de inmunoensayo (tabla 2.0)
la muestra de orina se realizó identificando la presencia de THC en
mediante el establecimiento del pH de las muestras analizadas .
la muestra a 4, posteriormente
realizando 3 extracciones orgánicas
con éter etílico, de las cuales se
recolectó la fase acuosa y se guardó.
A la fase orgánica se alcalinizó y se le
realizaron 3 extracciones más con éter
etílico. Las fases acuosas se
recolectaron, mientras que a la
orgánica se le realizaron 3
extracciones con cloroformo .
Las extracciones se concentraron
llevando a la evaporación casi
completa del solvente, y se le
realizaron las pruebas presuntivas de
Dragendorff, Mayer, Bouchardat,
Mandelin; mientras que el
inmunoensayo se hizo a partir de la
orina sin procesar.
ANÁLISIS DE RESULTADOS
El consumo de drogas se ha
intensificado en varios países en los
últimos años, aumentando también su
accesibilidad, sus implicancias en el Figura. Metabolitos del THC
comportamiento social y la importancia
de su determinación clínica y forense. Puesto que los alcaloides son
Por esta razón, resulta de interés compuestos de carácter básico, su
tratar el tema de los métodos rápidos solubilidad en los diferentes solventes
de análisis de estos compuestos en varía en función del pH, es decir
fluidos biológicos, en combinación con según se encuentre en estado de base
procedimientos simples de o de sal( Pendell, 2002 , p.p 321). En
preparación de muestras y de forma de base, son solubles en
interpretación de datos. solventes orgánicos no polares como
benceno, éter etílico, cloroformo,
De una muestra de orina se realizaron diclorometano, acetato de etilo
extracciones con diferentes solventes (Pendell, 2002). En forma de sales,
y reactivos para obtener los alcaloides son solubles en solventes polares
de manera libre y posteriormente agua, soluciones ácidas e
poder identificarlos. hidroalcohólicas (Pendell, 2002 p.p
La marihuana, tiene muchísimos 323). Por lo anterior para la primera
metabolitos. En la siguiente figura se extracción del alcaloide se utilizó un
muestran los metabolitos de la medio ácido, empleando como
marihuana más representativos y los solvente éter etílico ya que al
que generalmente son detectados encontrarse en este pH se comportan
mediante las pruebas presuntivas. como una base. Con esta extracción
se eliminan las proteínas del medio,
los alcaloides quedan solubles en la
fase etérea.
La segunda extracción de igual tetrayodo-bismutato potásico conocido
manera se realizó con éter etílico pero como reactivo de Dragendorff y se
esta vez de carácter básico en esta se detecta el alcaloide al producirse una
encuentran los alcaloides en fase sal, coloración naranja-rojiza (Marcano,
por lo cual quedaron en la fase 2002)
acuosa. Lo anterior se fundamenta en
el hecho que los alcaloides son Pueden dar Reacciones (+) con
compuestos de carácter básico, su Dragendorff:
solubilidad en los diferentes solventes · Proteínas
varía en función del pH, es decir se · α - Pironas
encuentre en estado base o sal. Las · Cumarinas
bases se encuentran solubilizadas en · Hidroxiflavonas
éter etílico y cloroformo(Arango,2002). · lignanos
Obtuvimos un precipitado de éstas
Finalmente se realizó una purificación características en el extracto 2 de la
de la fase orgánica con la finalidad de muestra 4, lo que indica que puede ser
eliminar todas las partículas que morfina, anfetaminas y papaverina
pudieran interferir con los resultados (entre otros) en el paciente (Wagner,
en las pruebas de precipitación, se 2009).
llevó a cabo la extracción con
cloroformo y lo que se obtuvo de la
fase acuosa.
A los 3 extractos se les agregó sulfato
de sodio anhidro ya que este tiene
propiedades higroscópicas y por lo
tanto es utilizado como desecante ya
que absorbe la humedad del medio y
de esta manera se garantizo que no En la reacción de Mayer precipitan los
se encontrase presencia de agua en el alcaloides (los clorhidratos) en forma
medio y se pudo llevar a cabo la de sales en medio básico. El yoduro
concentración de los extractos por de potasio y el bicloruro de mercurio
evaporación de los solventes junto con el alcaloide forman un
precipitado blanco que es soluble en
Para la identificación de alcaloides se
ácido acético y etanol (Marcano,
utilizaron 3 pruebas de precipitación
2002).
con los extractos etéreos 1 y 2, y con
Para los tres extractos de las 5
la fase clorofórmica evaporados .
muestras el resultado fue negativo; la
prueba de Mayer se realiza para
El reactivo de Dragendorff es una
identificar morfina, heroína, entre otros
mezcla de Yoduro de potasio y de
(Burgot, 2012).
nitrato de bismuto. El producto de
mezclar ambas soluciones es
El ión triyoduro presente en el reactivo las distintas drogas y sus metabolitos
de Bouchardart reacciona con los (principios activos) obteniendo un
alcaloides formando un precipitado resultado con un alto grado de
color rojo-naranja en medio ácido. sensibilidad. Esta técnica únicamente
proporciona un resultado analítico
Nuevamente obtuvimos un resultado preliminar cualitativo. Para obtener la
positivo al presenciar la formación de confirmación de un resultado, debe
éste precipitado en la muestra 3 emplearse un método químico
segundo extracto por lo cual se puede alternativo más específico. El método
tratar de morfina, cocaína. preferido para confirmación, es el
GC/MS (Cromatografía
Finalmente se sometieron los gaseosa/Espectrometría de masas).
extractos obtenidos a la prueba de La consideración clínica y el buen
Mandelin para detectar anfetaminas juicio profesional deben aplicarse a
(entre otras sustancias como la cualquier resultado de prueba de
cocaína, heroína, codeína, quinina, drogas de abuso, en particular cuando
etcétera), es una reacción óxido- se utilizan resultados preliminares
reducción que se da en medio ácido positivos.
con vanadato de amonio (vanadio), el
color que se revele al agregar el ácido La droga que puede estar presente en
es para diferenciar los alcaloides (Bell, la muestra de orina compite frente al
2004). conjugado de la misma en los puntos
de unión al anticuerpo. (BISHOP,
La coloración en el extracto 2 de la 2006)
muestra 3 indico un color amarillo el Durante la prueba, la muestra de orina
cual es característico de migra hacia arriba por acción capilar.
cocaína ,mientras que el extracto 2 de Si la Marihuana se encuentra presente
la muestra 4 indico un color marrón en la orina en concentración inferior a
característico de la mefedrona 50 ng/ml, no saturará los puntos de
(PMMA) unión de las partículas recubiertas de
anticuerpo en la placa de la prueba.
Como proceso comparativo se empleó Las partículas recubiertas de
el inmunoensayo. Es un test personal anticuerpo serán capturadas por el
para la detección de consumo de conjugado inmovilizado de THC y una
drogas el cual permite, con una línea visible de color aparecerá en la
pequeña muestra de orina sin tratar, zona de la prueba. Esta línea de color
detectar en 5 minutos, con una no se formará en la zona de la prueba
precisión del 99%, el consumo de las si el nivel de Marihuana está por
distintas drogas, siempre que se encima de 50 ng/ml porque saturará
realice en el periodo de tiempo todos los puntos de unión de los
adecuado. anticuerpos de anti-Marihuana.
El método consiste en el uso de una Los resultados obtenidos de este
mezcla de anticuerpos selectivos para inmunoensayo no corresponden a los
obtenidos mediante las pruebas
presuntivas, esto puede ser atribuible
a que la concentración no era REFERENCIAS
suficiente en las muestras para dar
una reacción positiva tras formar el ● Arango, G. (2008). Alcaloides y
precipitado. Se descarta la posibilidad compuestos nitrogenados [en
de un fallo en los reactivos porque línea].Universidad de Antoquia,
hubo muestras que dieron positivas Medellín<<[Link]
bajo estos métodos. [Link]/~ff/[Link]>>.
● Bishop (2006) Fundamentos de
química clínica. 11° ed. Mc
CONCLUSIONES Graw-Hill. México. 567pp.
● Cortes D. (2007).
Se demostró que las pruebas “Farmacoquímica Natural” Ed.
presuntivas de Dragendorff, Mayer y Moliner-40, Valencia España,
Bouchardat no son tan sensibles ante ● Evans, W.C. (2000). “Trease
la presencia de los diversos alcaloides and Evans -Pharmacognosy“,
que pudiese haber en las muestras, 15TH ed. Ed. Saundders,
pues en el inmunoensayo se observó Edinburgh,
un resultado positivo. Esto ayudó ● Fernández, P. (2009).
muchísimo para corroboración y Drofodependencias:
comparación de resultados. farmacología, patología,
América Latina es un conocido legislación. 3 ed. Médica
productor y consumidor de drogas de Panamericana. Buenos Aires
abuso, por lo que es importante contar ● Guinaudeau, H, [Link] y A.
con la capacidad de procesar una Cavé.(2005).
muestra para detección de drogas de “AporphineAlcaloids” Lloydia,
abuso, de forma correcta y no dar 38,
resultados como falsos positivos o ● Pendell, Dale.(2002).
negativos. Phytochemistry and
Es necesario tomar en cuenta el país Pharmakodynamis: Stimulating
en el que se está efectuando la prueba Plants, Potions and Herbcraft:
de detección para drogas de abuso, Excitantia and Empathogenica.
pues las normas varían dependiendo San Francisco: Mercury House.
de la concentración de metabolitos
hallada en la muestra.