Escuela de Microbiología

Programa de Microbiología y Bioanálisis

Asignatura: Fisiología Microbiana
2025-1

Evaluación del efecto de variables fisicoquímicas sobre el crecimiento de

microorganismos: temperatura, pH y presión osmótica

INTEGRANTES:
Wilber Andrés Serrano García 2230862
David Andrés Sierra Meneses 2231289
Shirly Toro 2240857
Gabriela Vasco Duarte 2240866
Ojo shirly como se escribe el nombre en cursiva
OBJETIVOS
Objetivo general: Evaluar el crecimiento y viabilidad de Geobacillus stearothermophilus,
Enterococcus faecalis y Candida albicans frente a diferentes temperaturas, niveles de pH y
concentraciones de NaCl.
Objetivos específicos:
1. Analizar como las variables fisicoquímicas en un medio pueden afectar el crecimiento y la
viabilidad de distintos microorganismos, comprendiendo la capacidad metabólica que
estos tienen.
2. Fortalecer el manejo adecuado de la técnica de siembra y la utilización del mechero en un
ambiente de seguridad, haciendo uso de las normas y elementos de bioseguridad.

INTRODUCCIÓN

El estudio de los microorganismos permite analizar su comportamiento frente a diversas

variables fisicoquímicas presentes en el entorno. En el laboratorio, es posible simular estas
condiciones ambientales para observar de qué forma pueden afectar el crecimiento y la viabilidad
de las bacterias en función de los objetivos del estudio.

Entre las variables que regulan el crecimiento microbiano, hay cuatro factores principales:
la temperatura, el pH, la disponibilidad de agua y tensión de oxígeno [1]. En la presente práctica se
evaluarán 3 principales variables que son: temperatura, pH, y presión osmótica utilizando como
organismos modelo a Enterococcus faecalis, Cándida albicans y Geobacillus stearothermophilus
respectivamente.

Enterococcus faecalis hace parte de los microorganismos indicadores de la inocuidad de los

alimentos, debido a que cuentan con una amplia distribución para ser encontrados en estos
productos, especialmente los de origen natural. A diferencia de los coliformes, son muy resistentes
a condiciones adversas como congelación, desecación, logrando sobrevivir más que estos. E.
faecalis es considerado como un indicador de contaminación fecal de fuentes humanas que
pueden ser procedentes de contaminación de tipo directa o indirecta. Se ha comprobado que en
productos semiconservados, que han sido procesados por calor, pero no en esterilidad, al igual que
microorganismos esporulados, frecuentemente logran sobrevivir a estas temperaturas; es común
encontrar cifras muy altas de Enterococcus en productos que han sido conservados en el rango de
temperatura entre 10-45°C [2].

Por otra parte, Candida albicans, es un hongo dimórfico conocido por su capacidad de
desarrollarse de acuerdo a los estímulos ambientales. Lo cual, le permite evadir mecanismos de
defensa de inmunidad celular del huésped. [3] C. albicans, es un patógeno comúnmente asociado
con infecciones como la vulvovaginitis, que ocurre cuando hay un desequilibrio en la biota vaginal.
Uno de los factores críticos en este desequilibrio del pH vaginal, es la variación durante diferentes
etapas del ciclo menstrual, embarazo o debido a infecciones bacterianas. Niveles de pH vaginal
inferiores a 4.5 pueden aportar y facilitar a la proliferación de C. albicans, causando patologías de
interés y sumo cuidado. [4]

Escherichia coli tiene un comportamiento que varia de acuerdo a las condiciones

fisicoquímicas fundamentales para la supervivencia y adaptabilidad. A temperaturas elevadas,
entre 37 y 42°C, tiene un crecimiento óptimo, pero su viabilidad disminuye a temperaturas
extremas que superan este rango. En condiciones de pH tiene la capacidad de adaptarse a valores
cercanos a la neutralidad (pH=7), mientras que a condiciones acidas o alcalinas su crecimiento se
ve inhibido. Es importante tener en cuenta que E. coli puede tolerar concentraciones de NaCl de
hasta 6%, teniendo mayor resistencia a medios salinos que otros microorganismos. [5]

Finalmente, el comportamiento en condiciones de presión osmótica en la que se utilizan

diferentes porcentajes de concentración de un medio salino como lo es NaCl, permite analizar la
respuesta halófila que pueden presentar algunos microorganismos. En el caso de Geobacillus
stearothermophilus, una bacteria termófila, Gram positiva, esporulada, ha demostrado la
capacidad de resistir relativamente a ambientes con concentraciones variables de sal. Esto significa
que puede mantenerse viable en condiciones de estrés osmótico moderado, siendo un modelo útil
para el estudio de mecanismos de resistencia ambiental y validación de procesos térmicos en la
industria de alimentos [6]. Por medio de la presente práctica, se evaluará la respuesta ante el
estrés osmótico en cuatro concentraciones diferentes de NaCl, (0%, 4%,7% y 10%), con el fin de
comprender los limites fisiológicos de tolerancia salina y comprender los mecanismos de
adaptación asociados a la presión osmótica [7].

METODOLOGÍA

RESULTADOS

Verificación de pureza a partir de coloración de Gram

Tabla 1. Resultados de la verificación de pureza de los microorganismos en cada caldo de cultivo a

partir de coloración de Gram. Ojo shirly como se escribe el nombre en cursiva
Microorganismo Tinción Forma Fotografía
 E. faecalis Gram positiva Cocos

C. albicans Levadura (se tiñe de Ovalada, con

color violeta) gemaciones.

E. coli Gram negativo Bacilos

G. stearothermophilus Gram positiva Bacilos

Variable fisicoquímica: temperatura

A partir de cultivos de cuatro diferentes microorganismos sometidos a distintos tratamientos

térmicos, según se indica en la metodología anteriormente descrita, se obtuvieron los siguientes
resultados para evaluar la primera variable fisicoquímica:

Tabla 2. Resultados del crecimiento de diferentes microorganismos a 4 temperaturas distintas.

Variable
Microorganismo Temperatura ambiente Autoclave 121 °C 100 °C 15’ Baño maría 45°C 15’
15’
Escherichia coli Hubo crecimiento (cuadrantes No hubo No hubo crecimiento de Hubo crecimiento
1 y 2) crecimiento E. coli. (cuadrantes 1 y 2,
mayor que tubo #1)
Colonias puntiformes y Colonias con morfología
medianas; forma circular, distinta Se mantiene las
bordes enteros, superficie características
brillante, translúcidas, color morfológicas.
blanco-grisáceo, textura
mucoide Gamma hemólisis

Gamma hemólisis

Una colonia hemolítica

(posible contaminante)
Enterococcus faecalis Hubo crecimiento (cuadrantes No hubo No hubo crecimiento No hubo crecimiento
1, 2 y 3) crecimiento

Colonias puntiformes,
pequeñas, forma circular,
 bordes bien definidos; algunas
traslúcidas, otras opacas,
color blanquecino, textura
mucoide.

Gamma hemólisis
Geobacillus Crecimiento moderado No hubo Crecimiento moderado Crecimiento limitado
stearothermophilus (cuadrante 1 y 2 incompleto) crecimiento (cuadrante 1 y 2) (cuadrante 1
incompleto)
Colonias puntiformes, Se mantienen
pequeñas, circulares, bordes características Se mantienen
enteros, traslúcidas, blanco- morfológicas. características
grisáceas, textura mucoide. morfológicas.
Cándida albicans Crecimiento moderado Crecimiento No hubo crecimiento Crecimiento de dos
(cuadrantes 1 y 2) moderado colonias
(Cuadrantes 1 y 2,
Colonias blanquecinas, mayor al tubo #1)
traslúcidas, puntiformes a
pequeñas, redondeadas, Se mantienen
bordes regulares, elevadas, características
superficie ligeramente morfológicas.
brillante, textura cremosa

Escherichia coli

a b c d
Figura 1. De izquierda a derecha: cultivo en agar sangre para tubo #1 sin tratamiento (imagen a), cultivo en
agar sangre para tubo #2 autoclavado (imagen b), cultivo en agar sangre para tubo #3 en baño maría a 100°C
(imagen c), cultivo en agar sangre para tubo #4 en baño maría a 45°C (imagen d).

Enterococcus faecalis

a b c d
 Figura 2. De izquierda a derecha: cultivo en agar sangre para tubo #1 sin tratamiento (imagen a), para
tubos #2 Autoclavado (imagen b), para tubo #3 Baño maría a 100 °C (imagen c) y para tubo #4
a 45 °C (imagen d).

Geobacillus sterotermophilus

a b c d
Figura 3. De izquierda a derecha: cultivo en agar nutritivo para tubo #1 sin tratamiento (imagen a), para tubo
#2 autoclavado (imagen b), para tubo #3 en baño maría a 100 °C (imagen c) y para tubo #4 en baño
maría a 45°C (imagen d).

Candida albicans

a b c d
Figura 4. De derecha a izquierda: Cultivo en agar sangre para tubo #1 sin tratamiento (imagen a), para tubo
#2 autoclavado (imagen b), para tubo #3 Baño maría a 100 °C (imagen c) y para tubo #4 a 45°C (imagen d)

Variable fisicoquímica: pH
A partir de cultivos de cuatro diferentes microorganismos sembrados por agotamiento a tres
diferentes valores de pH, según se indica en la metodología anteriormente descrita, se obtuvieron
los siguientes resultados para evaluar la segunda variable fisicoquímica:

Geobacillus stearothermophilus
 a b c
Figura 5. Crecimiento de Geobacillus stearothermophilus en tres cajas de Petri con agar LB
ajustados a pH 5 (imagen a), pH 7 (imagen b) y pH 10 (imagen c).

Tabla 3. Resultados obtenidos para cada pH.

pH del medio Crecimiento observado
5 (ácido) Mayor crecimiento
7 (neutro) Crecimiento moderado
10 (básico) Nulo crecimiento

La primera caja corresponde al pH 5 en la que se observan colonias de Geobacillus

stearothermophilus con crecimiento en el cuadrante 1 y 2 del agar, por lo que es la caja con más
colonias visibles a simple vista, lo que indicaría un crecimiento favorable en condiciones ácidas (ver
figura 5.a); estas colonias tienen forma circular, con un borde entero, superficie lisa y brillante, con
una elevación convexa o ligeramente elevada, color blanco cremoso, de tamaño pequeño y una
consistencia seca. Para la segunda caja, que corresponde a un pH 7, se observa menor crecimiento
en el cuadrante 1, además de no presentar crecimiento en los demás cuadrantes (ver figura 5.b);
las características de las colonias se mantienen. Por otro lado, para la tercera caja, con un pH 10
(básico), no hubo crecimiento de ninguna colonia, lo que indicaría que las condiciones alcalinas
resultaron inhibidoras para el crecimiento de G. stearothermophilus (ver figura 5.c).

Escherichia coli

a b c
Figura 6. Crecimiento de Escherichia coli en tres cajas de Petri con agar LB ajustados a pH 5
(imagen a), pH 7 (imagen b) y pH 10 (imagen c).

Tabla 4. Resultados obtenidos para cada pH.

pH del medio Crecimiento observado
 5 (ácido) Crecimiento moderado
7 (neutro) Crecimiento moderado
10 (básico) Mayor crecimiento

La primera caja corresponde al pH 5 en la que se observan colonias de Escherichia coli con

crecimiento en los 3 cuadrantes hechos (ver figura 6.a); estas colonias tienen forma circular, con un
borde entero, superficie lisa y brillante, con una elevación plana, color beige, de tamaño mediano y
consistencia viscosa. Para la segunda caja, que corresponde a un pH 7, se observa menor
crecimiento en el primer cuadrante y se obtuvieron menos colonias aisladas que en la primera y
tercera caja (ver figura 6.b); las colonias aisladas tienen un tamaño ligeramente mayor a los de la
siembra a pH 5. Por otro lado, para la tercera caja, con un pH 10, se observa una mayor cantidad de
colonias aisladas en comparación con las otras siembras, las cuales tienen un tamaño similar al de
las que crecieron a pH 7; lo anterior indicaría un crecimiento favorable en condiciones básicas (ver
figuta 6.c).

Enterococcus faecalis

a b c
Figura 7. Crecimiento de Enterococcus faecalis en tres cajas de Petri con agar LB ajustados a pH 5
(imagen a), pH 7 (imagen b) y pH 10 (imagen c).

Tabla 5. Resultados obtenidos para cada pH.

pH del medio Crecimiento observado
5 (ácido) Crecimiento limitado
7 (neutro) Crecimiento moderado
10 (básico) Mayor crecimiento

La primera caja corresponde al pH 5 en la que se observan colonias de Enterococcus faecalis con

crecimiento solo en los cuadrantes 1 y 2 (ver figura 7.a); estas colonias tienen forma circular, con
un borde entero, superficie lisa y brillante, con una elevación ligeramente convexa, color blanco, de
tamaño puntiforme y consistencia cremosa. Para la segunda caja, que corresponde a un pH 7,
también se observa crecimiento solo en los cuadrantes 1 y 2; sin embargo, se nota una mayor
cantidad de colonias a comparación de la caja anterior lo que indicaría que las condiciones ácidas
resultaron inhibidoras para el crecimiento de E. faecalis, además de un leve aumento de tamaño
de dichas colonias (ver figura 7.b). Por otro lado, para la tercera caja, con un pH 10, es visible el
mayor crecimiento de entre las tres siembras realizadas puesto que se observan colonias en los
tres cuadrantes hechos y, nuevamente, se nota un leve cambio de tamaño en las colonias aisladas,
lo que indicaría un crecimiento favorable en condiciones básicas (ver figura 7.c).
Cándida albicans

a b c
Figura 8. Crecimiento de Cándida albicans en tres cajas de Petri con agar LB ajustados a pH 5
(imagen a), pH 7 (imagen b) y pH 10 (imagen c).

Tabla 6. Resultados obtenidos para cada pH.

pH del medio Crecimiento observado
5 (ácido) Mayor crecimiento
7 (neutro) Crecimiento limitado
10 (básico) Nulo crecimiento

La primera caja corresponde al pH 5, en la que se observan colonias de Candida albicans

distribuidas a lo largo de las estrías de siembra (ver figura 8.a); estas colonias presentan forma
circular, bordes enteros, superficie lisa y brillante, con una elevación ligeramente convexa, color
blanco-crema, de tamaño pequeño a mediano y con una textura cremosa, lo que indicaría un
crecimiento favorable en condiciones ácidas. Para la segunda caja, correspondiente al pH 7,
también se observa crecimiento, aunque en menor cantidad; las colonias son más escasas y de
menor tamaño comparado con la caja anterior, aunque mantienen características similares en
cuanto a forma, textura y coloración (ver figura 8.b). Por otro lado, en la tercera caja, ajustada a pH
10, no se observa desarrollo de colonias, lo que indicaría que las condiciones alcalinas resultaron
inhibidoras para el crecimiento de C. albicans (ver figura 8.c).

Variable fisicoquímica: presión osmótica

A partir de cultivos de cuatro diferentes microorganismos se inoculan tres tubos con caldo de
tioglicolato a diferentes concentraciones de NaCl, según se indica en la metodología anteriormente
descrita, se obtuvieron los siguientes resultados para evaluar la tercera variable fisicoquímica:

Tabla 7. Caldo de tioglicolato a diferentes concentraciones de NaCl para diferentes

microorganismos.
Concentración de NaCl
Microorganismo 0% 4% 7% 10%
Candida albicans Mayor cantidad Sedimentación Sedimentación Ausencia de
de sedimentación presente, aunque tenue sedimentación
visible reducida
Enterococcus faecalis Turbidez marcada Turbidez con Turbidez reducida; Presencia de
 con presencia de sedimento visible sedimento débil. sedimento; sin
sedimento. turbidez clara.
Geobacillus Alta turbidez Sin turbidez (no Sin turbidez (no Sin turbidez (no
stearothermophilus (crecimiento hubo hubo hubo
evidente). crecimiento). crecimiento). crecimiento).
Escherichia coli Alta turbidez Alta turbidez Baja turbidez Sin turbidez (no
(crecimiento (crecimiento (crecimiento hubo
evidente). evidente). reducido). crecimiento).

Candida albicans

Figura 9. De izquierda a derecha: Tubos con caldo de tioglicolato e inoculados con C. albicans a
10%, 7%, 4% y 0% de NaCl.
Enterococcus faecalis

Figura 10. De izquierda a derecha: Tubos con caldo de tioglicolato e inoculados con E. faecalis a
0%,4%,7% y 10% de NaCl.

Geobacillus stearothermophilus

Figura 11. De izquierda a derecha: Tubos con caldo de tioglicolato e inoculados con G.
stearothermophilus a 0%, 7%, 4% y 10 % de NaCl.
Escherichia coli

Figura 12. De izquierda a derecha: Tubos con caldo de tioglicolato e inoculados con E. coli a
0%,4%,7% y 10 % de NaCl.

DISCUSIÓN
La tinción de Gram actúa como control de calidad inicial, asegurando que los resultados
de las pruebas de variabilidad fisicoquimica reflejen el comportamiento real de la cepa
objetivo y no de contaminantes.

Para Enterococcus faecalis, se observa al microscopio como cocos Gram positivos que forman
cadenas cortas. Al no tener membrana externa, el cristal violeta penetra fácilmente y queda
atrapado en su gruesa capa de peptidoglicano, lo que le da su característico color morado en la
tinción de Gram. Esta propiedad diferencia claramente a las bacterias Gram positivas como E.
faecalis de las Gram negativas.

C. albicans es un hongo dimorfico, lo que significa que puede existir en dos formas, levadura e
[Link] su forma de levadura, aparece como células individuales de forma ovalada. Cuando pasa a
su forma de hifa, desarrolla estructuras largas y filamentosas conocidas como hifas.
Al evaluar microscopicamente la tincion de gram, tanto su forma de levadura como hifa, dan una
apariencia Gram positiva debido a la ausencia de una membrana externa, es capaz de retener
fácilmente el cristal violeta en su pared celular[8].

Así mismo, al analizar [Link] bajo el microscopio confirma la característica de ser una bacteria gram
negativa y se observa como bacilos rosados o rojos. Esta bacteria al tener una pared celular que
consta de una fina capa de peptidoglicano y una membrana externa rica en lipopolisacáridos, no
retiene el colorante cristal violeta y solo puede fijar el colorante de contraste como la safranina[9].

F‌ inalmente, la bacteria G. stearothermophilus es una bacteria gram positiva, al analizar su

morfología en el microscopio se observa bacilos que se tiñen de color violeta, gracias a su pared
gruesa y baja concentración de lípidos puede retener el complejo cristal violeta-yodo[10].

Es recomendable realizar una tinción de gram a partir de cultivos crecidos 18-24 horas antes, cuya
pared bacteriana se encuentra intacta. Las bacterias presentes en cultivos más viejos pueden
presentar rupturas en la pared celular por lo que la pared celular de las bacterias gram positivas
pueden teñirse como gram negativas. Para una observación microscópica precisa, el frotis debe ser
fino, homogéneo y bien distribuido, logrando la visualización de la forma y disposición bacteriana.
también es importante tener en cuenta los tiempos ya estandarizados a los cuales debe añadir
cada colorante en la tinción de gram[11].

Con esto hecho, es fundamental evaluar la viabilidad de estas bacterias bajo distintas condiciones
fisicoquímicas, como variaciones de temperatura, pH y presión osmótica.

La variabilidad en los resultados en el crecimiento de e. faecalis en agar sangre, se debe a una

exposicion previa de los caldos bacterianos a diferentes temperaturas.
En el caso del tubo 1, que no presenta ninguna exposicion termica, y luego utilizado para la
siembra en agar sangre, fue posible observar crecimiento bacteriano en el agar debido a que no
hubo alteraciones en el caldo nutritivo logrando la conservacion y estabilidad bacteriana.
La siembra realizada en agar sangre del cultivo E. faecalis proveniente del tubo 2, no fue exitosa
debido a la falta de crecimiento bacteriano. La esterilización a 121°C durante 15 min del tubo 2,
genera daños en la pared bacteriana generando la muerte celular[12].

Tampoco fue posible observar crecimiento bacteriano del cultivo proveniente del tubo 3.
El tubo 3 al estar expusesto previamente a un baño de Maria a 100°C durante 15 min, genera
daños en la membrana celular del cultivo bacteriano llevando a la muerte celular. El limite termico
de supervivencia de esta bacteria es 60-65°C. La falta de crecimiento en agar sangre es por la
presencia de poblacion bacteriana muerta en los tubos 2 y 3[13].

El tubo 4 al ser expuesto a baño de Maria por 15 min a 45°C, presenta una suspension bacteriana
viable para el crecimiento en agar sangre. La exposicion a esta temperatura no afecta el
crecimiento bacteriano y tampoco causa una disminucion en la poblacion. Sin embargo no fue
posible el crecimiento bacteriano del inoculo tomado de este tubo. Uno de las causas puede ser la
falta de nuteientes en el caldo nutritivo antes de realizar el baño de Maria, lo que genera una
mayor cantidad de poblacion bacteriana muerta y la pequeña poblacion de bacterias viables que
pueden ser inoculadas en agar sangre, no lograron sobrevivir al ser expuestas a un temperatura
mas alta. Otra de las causas puede ser un error en la tecnica de siembra por agotamiento[14].

Escherichia coli es una bacteria mesófila que crece en temperaturas moderadas, con un rango de
crecimiento entre 7°C y 50°C y una temperatura óptima de 37°C (similar a la temperatura corporal
humana).
Al evaluar la tolerancia térmica de las suspensiones bacterianas en los cuatro tubos expuestos a
diferentes temperaturas, se observaron los siguientes resultados:
1. Tubo control (sin calentamiento):
a. Al sembrarse en agar sangre, mostró un crecimiento óptimo sin provocar
hemólisis, lo que indica que las condiciones fueron adecuadas para su
desarrollo[13].
2. Tubo 4 (45°C en baño María):
a. Esta temperatura se encuentra dentro del rango tolerable para E. coli[13].
 b. La siembra en agar sangre permitió la formación de colonias sin hemólisis,
evidenciado por la ausencia de cambios de coloración alrededor de las
colonias[13].
3. Tubos 2 y 3 (121°C en autoclave y 100°C en baño María, respectivamente):
a. No hubo supervivencia bacteriana debido a la desnaturalización de proteínas y
destrucción de la membrana citoplasmatica[13].
b. Estos tratamientos térmicos provocaron la fase de muerte irreversible de las
bacterias, eliminando su capacidad de reproducirse[13].
La mayoría de las cepas de Escherichia coli no son hemolíticas. Sin embargo, cepas patógenas
asociadas a infecciones extraintestinales y del tracto urinario producen α-hemolisina, una
exotoxina que causa lisis de eritrocitos y daña otros tipos de celulas como leucocitos. Esta
capacidad hemolítica está directamente relacionada con el factor de virulencia bacteriano, siendo
un marcador importante de patogenicidad[14].

Geobacillus stearothermophilus es una bacteria termófila estricta, con una temperatura optima de
crecimiento a 50-75ºC.
Una exposición a una temperatura a 45° C se observa un crecimiento limitado debido a que esta
exposición térmica no es la adecuada para una fase de crecimiento y división bacteriana para esta
bacteria termófila estricta. En la exposición a temperatura ambiente G. bacillus se observa también
un un crecimiento leve, siendo un crecimiento atípico que puede deberse a la capacidad
metabólica de unas cepas específicas[15][16].
Se ha reportado que G. sthermophilus presenta una alta resistencia a temperaturas cercanas a
100°C, creando una habilidad de formas endosposras bajo estas condiciones para lograr su
supervivencia. Las endosporas de G. stearothermophilus son tan resistentes que se usan como
indicadores biológicos para validar procesos de esterilización por autoclave (121°C), ya que solo
mueren cuando se alcanzan esta condición de esterilidad[15][16].

Candida albicans es un hongo levaduriforme perteneciente al filo Ascomycota (familia

Saccharomycetaceae). Su temperatura óptima de crecimiento es de 35-37°C, pero puede
desarrollarse en un rango amplio (25-45°C), aunque con eficiencia menor. Esto explica el
crecimiento bacteriano en el tubo que fue sometido a temperatura ambiente. El tubo expuesto a
45°C mostro solo dos colonias al sembrarse, relacionandose con un inóculo incial bajo por causa de
una mayor exposicion de la suspension bacteriana a baño de Maria, generando lisis de la
membrana celular y logrando la supervivencia de unas pocas celulas. La presencia de crecimiento
después de un tratamiento en autoclave (121°C) no debería ocurrir, ya que este hongo no forma
esporas termorresistentes como las bacterias del género Bacillus. las causas de este crecimiento
pueden deberse a una contaminacion del medio por manipulacion de la suspension en
condiciones no esteriles[17].

Las condiciones de acidosis o alcalosis en el medio tambien intervienen en el crecimiento de las

microorganismos y para comprobarlo se usó El medio Luria-Bertani (LB), un medio de
enriquecimiento principalmente para bacterias. Aunque en este medio no es posible el
crecimiento de la levadura Candida albicans, el medio tiene un pH aceptable para esta levadura.
Las colonias de Candida crecen "in vitro" en condiciones de aerobiosis en medios de cultivo a pH
con rango entre 2,5 y 7,5 y temperatura que oscila entre 20°C y 38°C. El crecimiento de colonias se
puede detectar entre 48 y 72 horas después de la siembra, y los subcultivos pueden crecer más
rápidamente.

Esta informacion facilita entender la causa por la cual hubo crecimiento en el medio A y B, los
cuales se encuentran a un pH~5 y un pH~7. Tambien es importante tener en cuenta que en los
medios de enrequecimiento para levaduras, como el medio YDP, es necesario la presencia del
nutriente extracto de levaduras, nutriente que tiene en comun con el medio LB. Otro nutriente
fundamental en los medios de enriquecimiento para levaduras es la glucosa, nutriente que no se
encuentra presente en el medio LB. en base a este analisis se relaciona como favorece esta
variable fisicoquimica el crecimiento microbiano. Algunas consideraciones sobre Candida Albicans
como agente etiológico de candidiasis bucal[18].

G. stearothermophilus es una bacteria termófila neutrofila que puede tolerar una amplia gama de
condiciones de pH, su pH óptimo es entre 6-8, aunque su pH mínimo de crecimiento es 5.2.
Aunque la presencia de un mayor crecimiento en un medio con pH 5 con respecto al medio con un
pH 7, puede estar relacionado con una disminución en la acidez del medio, después de realizar la
esterilización en autoclave o errores en la técnica de siembra del inóculo. Los resultados en un
medio con pH 10 están acordes a lo esperado[19][20].

El crecimiento de Escherichia coli puede darse en un rango de pH de 4.4 a 9, aunque su pH óptimo

se encuentra entre 6 y 7. El crecimiento moderado observado en el medio con pH 5 concuerda con
los valores aceptables para este microorganismo. En el medio con pH neutro se esperaba un mayor
crecimiento, considerando la compatibilidad de esta bacteria con dicho entorno. Una posible causa
de este resultado inesperado podría ser una adaptación inusual del microorganismo al medio,
debido a una deficiencia de nutrientes o a la falta de agitación (vortex), lo que habría provocado
sedimentación bacteriana y, en consecuencia, una menor concentración celular al momento de la
siembra[21].

En el medio con pH 10 no se esperaba observar crecimiento bacteriano, ya que E. coli no suele

desarrollarse en condiciones tan alcalinas. Sin embargo, se observó un crecimiento atípico, lo cual
podría deberse a una alta concentración del inóculo o E. coli puede generar metabolitos acido que
bajan el pH local, permitiéndole sobrevivir en entornos inicialmente alcalinos[22.

Finalmente se analiza la tolerancia y crecimiento de E. faecalis en unos medios ajustados a pH 5, pH

7 y pH 10. E. faecalis crece en un rango de pH de 5 a 9.6. E. faecalis puede vivir en ambientes
altamente alcalinos tolerando un pH maximo de hasta 11.6 pero no es una bacteria alcalofila
obligada[23].

En un medio con pH acido se espera un crecimiento limitado debido a que presenta poca
tolerancia en ambientes acidos, para lograr su supervivencia E. faecalis produce metabolitos que le
ayudan a neutralizar la acidez del medio[24].
‌Enterococcus faecalis se adapta fácilmente a un pH neutro, lo que le permite mantener un
equilibrio fisiológico. Esta capacidad se debe a que, en condiciones naturales, este microorganismo
habita como comensal en el intestino humano, donde el pH es neutro. El crecimiento en el medio
con pH 10, es gracias a la habilidad de E. faecalis de tolerar medios alcalinos regulando su pH
interno mediante ATPasas[25].
La tolerancia al NaCl depende en gran medida de la capacidad del microorganismo para mantener
el equilibrio osmótico interno. Los halotolerantes pueden acumular solutos compatibles
(osmoprotectores) como prolina, glicina-betaína o trehalosa para contrarrestar la pérdida de agua
en medios hiperosmóticos [26]. Además, la presencia de proteínas de choque osmótico y
transportadores de iones específicos también contribuyen a esta capacidad adaptativa.

Los resultados obtenidos muestran diferencias significativas en la capacidad de crecimiento de las

especies analizadas ante incrementos en la concentración salina, revelando así adaptaciones
fisiológicas específicas.

Candida albicans, una levadura patógena oportunista, presentó crecimiento en concentraciones

bajas de NaCl (0% y 4%), evidenciado por sedimentación visible. Sin embargo, a concentraciones
mayores (7% y 10%) su crecimiento fue prácticamente nulo, clasificándola como no halófila o
halotolerante débil. Esta sensibilidad puede atribuirse a la falta de mecanismos eficientes para
contrarrestar el estrés osmótico, como la acumulación de solutos compatibles o bombas de
eflujo[27].

Enterococcus faecalis, una bacteria grampositiva comensal del intestino humano, mostró
crecimiento incluso en 10% de NaCl, aunque con una turbidez menos intensa y sin sedimentación
clara, lo que indica una halotolerancia moderada a alta. Esta especie es conocida por su capacidad
de adaptación a ambientes hiperosmóticos, mediante la acumulación de solutos compatibles como
prolina y glicina-betaína [28].

Geobacillus stearothermophilus, un termófilo estricto, no mostró crecimiento en ninguna

concentración de NaCl, indicando una sensibilidad extrema al estrés osmótico. Este
comportamiento podría explicarse por su adaptación a ambientes de alta temperatura, pero baja
osmolaridad, como fuentes termales, lo que lo convierte en un organismo poco versátil en cuanto
a estrés salino [29].

Escherichia coli, bacteria gramnegativa modelo, mostró un crecimiento robusto a 0% y 4% de NaCl,

con una disminución notable a 7%, y ausencia total a 10%, lo que la clasifica como halotolerante
débil. Esta respuesta concuerda con estudios previos que señalan que E. coli puede tolerar
condiciones moderadamente salinas pero carece de mecanismos altamente eficientes para
sobrevivir en ambientes hipersalinos [30].

‌
CONCLUSIONES
A través de la práctica se evidenció que las condiciones experimentales proporcionadas a los
microorganismos fueron adecuadas para evidenciar las respuestas fisiológicas de estos ante
diferentes variables fisicoquímicas.

Se logró establecer diferencias en los patrones de crecimiento y viabilidad según los cambios en
temperatura, pH y presión osmótica, comprendiendo así el comportamiento adaptativo de las
especies analizadas. Así mismo, pudo aplicar correctamente las técnicas microbiológicas
requeridas como los procedimientos de siembra, el manejo del material estéril y el uso del
mechero bajo condiciones seguras y controladas.

En cuanto a los resultados, estos mostraron coherencia con los fundamentos teóricos previos,
permitiendo validar las metodologías empleadas y reforzar el análisis de los resultados.
Finalmente, el análisis conjunto de las tres variables permitió no solo evaluar la tolerancia
microbiana en condiciones específicas, sino también identificar los límites fisiológicos
característicos para cada organismo.

Los resultados evidenciaron que cada microorganismo posee límites fisiológicos específicos y
diferentes niveles de tolerancia ante las condiciones impuestas. Por ejemplo, Geobacillus
stearothermophilus demostró una preferencia por ambientes ácidos, pero incapacidad de crecer
en condiciones alcalinas y hiperosmóticas, mientras que Escherichia coli presentó un crecimiento
óptimo tanto en ambientes básicos como a bajas concentraciones de sal. Enterococcus faecalis
mostró ser resistente a ambientes alcalinos y moderadamente salinos, y finalmente, Candida
albicans tuvo un crecimiento favorable a pH ácido, con una disminución progresiva a medida que
aumentaba la concentración de NaCl.

PREGUNTAS DE PROFUNDIZACIÓN
Variable fisicoquímica: temperatura
1. ¿Cuáles son los componentes del agar sangre?
- El agar sangre está compuesto por infusión de músculo de corazón 375,0 g/L; peptona 10,0 g/L;
cloruro de sodio 5,0 g/L; y agar 15.0 g/L con un pH final de 7.3 ± 0.2.

2. ¿Cuáles son los componentes del agar nutritivo?

- El agar nutritivo está compuesto por pluripeptona 5,0 g/L; extracto de carne 3,0 g/L; cloruro de
sodio 8,0 g/L; y agar 15,0 g/L, con un pH final de 7.3 ± 0.2.

3. Cuáles son las condiciones de trabajo en el autoclave?

- Las condiciones estándar de trabajo en un autoclave para esterilización son:
o Temperatura: 121 °C
o Presión: 15 psi (libras por pulgada cuadrada) o 1 atm adicional
o Tiempo: 15 a 20 minutos (dependiendo del volumen del material)
Estas condiciones permiten la destrucción de esporas bacterianas y otros microorganismos
resistentes. Para materiales más densos o cargas grandes, el tiempo puede extenderse hasta 30
minutos [].

4. ¿Qué control de calidad se utiliza para verificar la efectividad en el autoclave?

- La efectividad del proceso de esterilización en el autoclave se verifica mediante controles de
calidad que incluyen principalmente indicadores biológicos. El más confiable y ampliamente
utilizado es el que emplea esporas de Geobacillus stearothermophilus, un microorganismo
termorresistente cuya destrucción garantiza que se han alcanzado las condiciones necesarias para
una esterilización completa. Otros controles incluyen Indicadores químicos (tiras o cintas que
cambian de color al alcanzar temperatura y presión adecuadas), o también controles mecánicos
(lectura de manómetros, termómetros y temporizadores del autoclave).
5. ¿Qué morfología y tinción tienen los diferentes microorganismos evaluados?

Variable fisicoquímica: pH
1. ¿Cómo afecta el pH al crecimiento y metabolismo microbiano?
- El pH es un factor fisicoquímico fundamental que influye directamente en el crecimiento y
metabolismo microbiano, ya que afecta la actividad enzimática, la estabilidad de las proteínas, la
integridad de la membrana celular y la disponibilidad de nutrientes. Cada microorganismo tiene un
rango de pH en el cual puede desarrollarse, así como un pH óptimo donde su actividad metabólica
es máxima. Valores de pH extremos pueden alterar la estructura tridimensional de las enzimas,
inhibiendo rutas metabólicas esenciales y provocando la muerte celular. Además, el pH influye en
el transporte de sustancias a través de la membrana y en la expresión de genes relacionados con
mecanismos de defensa o adaptación al estrés ácido o alcalino. En medios artificiales, el control del
pH es esencial para asegurar condiciones favorables de crecimiento.

2. ¿Qué medios de cultivo se pueden usar para evaluar el efecto del pH en el crecimiento
microbiano?
- Para evaluar la influencia del pH en el crecimiento microbiano se pueden utilizar medios de
cultivo líquidos o sólidos cuyo pH puede ajustarse con precisión antes de la esterilización. Uno de
los más comunes es el medio LB (Luria-Bertani), ya que permite un amplio rango de ajuste de pH
sin interferir con los nutrientes básicos. También se utilizan el caldo nutritivo, el caldo tripticasa-
soya, y en el caso de hongos, medios como el agar Sabouraud. Para estudios específicos, se
preparan medios tamponados con soluciones como fosfato, acetato o Tris-HCl, que ayudan a
mantener el pH constante durante la incubación. Estas formulaciones permiten observar el
crecimiento, morfología y velocidad de desarrollo de las colonias o turbidez en función del pH del
medio.

3. ¿Cuáles son los pH de crecimiento óptimo de cada una de los microorganismos analizados?
- Cada microorganismo tiene un rango y un pH óptimo específico de crecimiento, relacionado con
su hábitat natural y su fisiología:
Escherichia coli: Su pH óptimo de crecimiento se encuentra entre 6.5 y 7.5, ya que es una bacteria
neutrófila que habita el intestino humano.

Enterococcus faecalis: Tiene un pH óptimo entre 6.0 y 7.5, pero puede crecer en un rango más
amplio, desde pH 4.5 hasta 9.6, lo que lo clasifica como tolerante a condiciones ácidas y alcalinas
[].

Geobacillus stearothermophilus: Su crecimiento óptimo ocurre en pH 6.0 a 7.5, aunque puede

tolerar condiciones ligeramente más alcalinas.

Candida albicans: Esta levadura tiene un pH óptimo de crecimiento entre 4.0 y 6.5, lo que refleja su
preferencia por ambientes ligeramente ácidos, como mucosas humanas.

Variable fisicoquímica: presión osmótica

1. ¿En cuál se obtuvo mayor turbidez entre los microorganismos en las diferentes condiciones?
- La mayor turbidez se observó en el cultivo de Escherichia coli, seguido por el de Enterococcus
faecalis a concentraciones de NaCl del 0% y 4%; E. coli mostró alta turbidez en ambas
concentraciones mencionadas, mientras que E. faecalis presentó una turbidez ligeramente menor
pero aún significativa. En contraste, Candida albicans mostró únicamente sedimentación sin
turbidez, obteniendo la mayor cantidad de sedimento al 0%; y Geobacillus stearothermophilus solo
presentó turbidez en la condición de 0% de NaCl.

2. ¿Son coherentes los resultados que se obtuvo con respecto a la teoría? Justifica su respuesta.
- Sí, los resultados obtenidos son coherentes con lo que establece la teoría microbiológica.
Escherichia coli es una bacteria neutrófila y moderadamente halotolerante, por lo que su
crecimiento óptimo se da en ambientes con baja o nula concentración de NaCl, como se evidenció
en el laboratorio. Enterococcus faecalis, por su parte, es reconocido por su alta halotolerancia y
capacidad de crecer en concentraciones elevadas de sal, lo que se confirmó al observar
crecimiento incluso al 10% de NaCl. Candida albicans, aunque es moderadamente halotolerante,
presentó crecimiento decreciente a medida que aumentaba la salinidad, coherente con su
preferencia por ambientes ligeramente ácidos y poco salinos. Finalmente, Geobacillus
stearothermophilus no mostró crecimiento en condiciones salinas, lo cual también concuerda con
la teoría que lo describe como no halotolerante. En conjunto, los resultados reflejan un
comportamiento esperado según las características fisiológicas conocidas de cada microorganismo.

3. ¿Qué contiene el caldo tioglicolato y para qué sirve?

- El caldo tioglicolato es un medio de cultivo enriquecido y diferencial, diseñado para favorecer el
crecimiento de bacterias en función de su requerimiento de oxígeno. Contiene ingredientes
esenciales como tripticaseína (fuente de nitrógeno y aminoácidos), glucosa (fuente de energía),
extracto de levadura (vitaminas y factores de crecimiento), cloruro de sodio, y el componente más
importante: tioglicolato de sodio, que actúa como agente reductor al absorber el oxígeno disuelto,
creando un gradiente de oxígeno desde la superficie (aeróbica) hasta el fondo (anaeróbico) del
tubo. Además, contiene frecuentemente un indicador redox como azul de metileno o resazurina,
que cambia de color en presencia de oxígeno. Este medio es útil para el cultivo de
microorganismos anaerobios, facultativos y aerotolerantes, y permite determinar su tipo de
respiración según su posición de crecimiento en el tubo

COEVALUACIÓN

Wilber Serrano Shirly Toro Gabriela Vasco David Sierra

Wilber Serrano X 5 5 5
Shirly Toro 5 X 5 5
Gabriela Vasco 5 5 X 5
David Sierra 5 5 5 X

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