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Actividad Practica 9: Cromosomas
Curso 013SB102 – Biología Molecular y Celular
Facultad MEDICINA
Programa de estudios MEDICINA HUMANA
Departamento MEDICINA HUMANA Y TECNOLOGIA MEDICA
académico
Docente Dra. Luiza de Campos Reis Semestr 2025-I
Mg. Marcos Daniel García Rodriguez e
Práctica 9 - Identificación de la cromatina sexual en un frotis de sangre periférica y
Identificación de los cromosomas y ensamblaje del cariotipo (idiograma)
Grupo:
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1. Introducción
La cromatina, a su vez, es un complejo formado por proteínas (histonas y no histonas) y material
genético (ADN) en diversos grados de condensación, lo que refleja la actividad génica. Así, la
cromatina más laxa (eucromatina) denota regiones de mayor actividad génica, mientras que la
cromatina más condensada (heterocromatina) representa regiones de menor actividad.
El ADN fue descubierto recién a finales de la década de 1860 por Friedrich Miescher, quien se
interesó en esta molécula diferenciada, que estaba compuesta por un elemento que no se
encuentra en otras macromoléculas: el fósforo. Durante el proceso de división celular, la
cromatina se enrolla hasta el grado máximo de condensación, revelando estructuras en forma de
bastón llamadas cromosomas.
Un cariotipo humano normal de una célula somática consta de 46 cromosomas, 44 de los cuales
son cromosomas autosómicos y 2 cromosomas sexuales, siendo estos últimos XX para las
mujeres y XY para los hombres. Para estudiar este importante compartimento celular y/o sus
constituyentes, se emplean métodos de investigación sencillos, tradicionales y eficientes, así
como otros más modernos.
Esta actividad constará de dos ejercicios prácticos: visualización de la cromatina sexual en el
núcleo de neutrófilos de sangre periférica y observación de cromosomas mediante el ensamblaje
de cariotipos humanos.
2. Objetivos
Visualización de la cromatina sexual en el núcleo de neutrófilos de sangre periférica
Mejorar la técnica de frotis sanguíneo y su tinción con colorantes específicos.
Observación de cromosomas mediante el ensamblaje de cariotipos humanos.
Comprender la importancia de un diagnóstico citogenético.
3. Fundamento Teórico
Identificación de la cromatina sexual en el frotis de sangre periférica
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La cromatina sexual, también conocida como corpúsculo de Barr (identificada en 1949 por Barr y
Bertram), corresponde a uno de los cromosomas X en las hembras de mamíferos, con una
estructura cromosómica XX normal, que aparece condensada y genéticamente inactiva en los
núcleos de las células somáticas.
El comportamiento diferencial de los cromosomas X fue correctamente interpretado por Mary
Lyon, quien, en la década de 1960, propuso la teoría de la inactivación como mecanismo para
compensar la dosis del producto de los genes localizados en el cromosoma X, ya que las mujeres
tienen dos cromosomas X y los hombres solo uno.
En las mujeres, el material más utilizado para visualizar la cromatina sexual han sido las células
epiteliales de la mucosa oral y los neutrófilos de sangre periférica. Si bien el fenómeno de la
compensación de dosis se ha demostrado citológica, genética y bioquímicamente, la frecuencia
de la cromatina sexual en muestras de ambos tipos de células no alcanza el 100 % de los núcleos.
En las células epiteliales de la mucosa oral, la cromatina sexual puede visualizarse como un
corpúsculo ligeramente ovalado adherido a la cara interna de la envoltura nuclear.
En la extensión hematológica (frotis de sangre), la cromatina se visualiza con mayor facilidad en
los neutrófilos polimorfonucleares en forma de corpúsculo redondeado, adherido a uno de los
lóbulos del núcleo mediante un pedúnculo.
Técnica del frotis sanguíneo
El frotis sanguíneo es una técnica de laboratorio utilizada para estudiar la morfología celular. Se
realiza extendiendo una gota de sangre en un portaobjetos, fijándola y tiñéndola con colorantes
como Wright o Giemsa, que diferencian estructuras celulares mediante la afinidad por
componentes ácidos o básicos (Rodak et al., 2020).
Este análisis es fundamental en la identificación de anemias, leucemias, infecciones y otras
enfermedades hematológicas.
4. Materiales y Reactivos
Microscopio óptico compuesto
Portaobjetos y cubreobjetos
Lancetas estériles
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Alcohol al 70%
Algodón o torundas estériles
Colorante de Wright o Giemsa
Agua destilada o buffer fosfato pH 7.2
Pipetas Pasteur
Guantes de nitrilo
5. Procedimiento
Práctica 1: Identificación de la cromatina sexual en el frotis de sangre periférica
A. Obtención de la muestra sanguínea
Desinfectar el dedo anular con alcohol al 70%
Realizar una punción con una lanceta estéril.
Desechar la primera gota de sangre con una torunda estéril.
Depositar una pequeña gota de sangre en un portaobjetos limpio.
B. Preparación del frotis sanguíneo
Usar otro portaobjetos como esparcidor, colocándolo en un ángulo de 45°.
Deslizar el esparcidor hacia adelante con un movimiento suave y continuo para extender la
sangre en una capa delgada.
Dejar secar el frotis al aire.
C. Tinción con Wright o Giemsa
Fijar la muestra con metanol durante 1 minuto.
Cubrir el frotis con colorante de Wright o Giemsa durante 5 minutos.
Enjuagar con agua destilada o buffer fosfato pH 7.2.
Dejar secar y observar bajo el microscopio.
D. Observación microscópica
Observe e identifique la cromatina sexual en un neutrófilo utilizando un objetivo de 100x.
Práctica 2: Práctica: Identificación de cromosomas y construcción del cariotipo
(idiograma)
A) Siga las instrucciones 1 a 12 para identificar los cromosomas. En algunos casos, deberá
medirlos con una regla milimétrica para facilitar su identificación, ya que deben ordenarse
en orden decreciente de tamaño. Recorte los cromosomas con tijeras y colóquelos en la
plantilla. Es preferible pegarlos solo en el extremo para evitar errores.
B) Al recortar los cromosomas de la hoja de dibujo, deje un pequeño margen a los lados,
como se sugiere para el cromosoma 1.
C) Pegue cada cromosoma recortado en el lugar correspondiente a su número en la hoja de
cariotipo, haciendo coincidir el centrómero con la línea discontinua. Por ejemplo, uno de
los homólogos del par de cromosomas 1 ya se ha aplicado a la plantilla. Oriente cada
cromosoma con el brazo más largo debajo de la línea discontinua.
Lea atentamente las instrucciones de práctica general.
1. Cuente el número de cromosomas en el campo visual.
2. Localice los tres pares de cromosomas más grandes, que conforman el grupo A. Los
cromosomas de los pares 1 y 3 son metacéntricos, y los del par 2 son submetacéntricos. El
brazo largo del cromosoma 1 tiene una banda clara grande, al igual que el brazo corto del
cromosoma 3.
3. De los cromosomas restantes, identifique dos pares más grandes, que conforman el grupo
B. Use una regla milimétrica para comparar el tamaño de los cromosomas. Estos
cromosomas son grandes, submetacéntricos y ligeramente más pequeños que el
cromosoma 4. El que tiene una banda clara grande en el brazo largo es el cromosoma 5.
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4. Ahora localice los pares de cromosomas 21 y 22, que conforman el grupo G. Son los más
pequeños del conjunto y son acrocéntricos. El cromosoma con la banda negra más ancha
es el 21.
5. Busca los pares de cromosomas 19 y 20, que conforman el grupo F. Son ligeramente más
grandes que los del grupo G y son submetacéntricos. La diferencia de tamaño entre los
dos brazos es muy leve. Usa la regla milimétrica para identificar cada brazo. El cromosoma
19 tiene una banda negra en el brazo largo, cerca del centrómero. El cromosoma 20 tiene
dos bandas negras más estrechas en el brazo largo.
6. Localiza los pares de cromosomas 13, 14 y 15, que conforman el grupo D. Pertenecen al
grupo acrocéntrico. El que tiene las bandas negras más anchas es el cromosoma 13. El que
no tiene antenas en el brazo corto es el cromosoma 15.
7. Identifica los pares de cromosomas 6 y 7, los primeros del grupo C. Son los más grandes
de los cromosomas restantes y son del tipo submetacéntrico. El más pequeño de los dos
tiene una banda negra más ancha en el brazo largo, correspondiente al cromosoma 7.
8. De los cromosomas restantes, encuentra ahora los tres pares más pequeños, del tipo
submetacéntrico. Son los cromosomas 16, 17 y 18, que conforman el grupo E. El
cromosoma 18 se identifica fácilmente por tener una banda oscura al final del brazo
menor. El cromosoma 17 solo tiene una banda negra en el centro del brazo menor.
9. Selecciona el más pequeño de los cromosomas restantes. Este es el cromosoma sexual Y.
Además de no tener un homólogo, presenta una banda negra muy ancha en el brazo
mayor.
10. De los once cromosomas restantes, identifica el cromosoma sexual X. Tiene solo cinco
bandas negras en el brazo mayor, una de las cuales está muy cerca del centrómero.
11. Selecciona, de los cromosomas restantes, el par que tiene una banda grande y una banda
más estrecha en el brazo corto: este es el cromosoma 9. Ahora busca el par que solo tiene
una banda negra ancha en el brazo menor: este es el cromosoma 12.
12. Solo quedan tres pares de cromosomas por identificar. El que no tiene una banda negra
cerca del centrómero es el cromosoma 8. De los dos pares restantes, el que tiene bandas
negras más anchas en el brazo mayor es el cromosoma 10.
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D) Resultados Esperados
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Visualización de la cromatina sexual en el núcleo de neutrófilos de sangre periférica
Diferenciación de células mediante la tinción de Wright o Giemsa.
Observación de cromosomas mediante el ensamblaje de cariotipos humanos.
Comprender la importancia de un diagnóstico citogenético.
E) Análisis de Resultados
Comparar la morfología de los distintos tipos de células sanguíneas.
Evaluar si la tinción fue adecuada para resaltar estructuras celulares.
Analizar la importancia del frotis sanguíneo en el diagnóstico hematológico.
Comprender la importancia de un diagnóstico citogenético.
F) Conclusiones
G) Cuestionario de Evaluación
1. ¿Hay algún diagnóstico citogenético del paciente?
2. ¿Qué son las anomalías cromosómicas?
3. ¿Cómo suceden las anomalías cromosómicas?
4. Mencione cualquier alteración cromosómica y su importancia clínica.
5. ¿Cuáles son los principales mecanismos implicados en la aparición de la alteración
cromosómica en un cariotipo?
H) Lectura Recomendada
Se recomienda el siguiente artículo:
Alteraciones cromosómicas diagnosticadas en sangre periférica.
[Link]
I) Referencias Bibliográficas
GARDNER, R. J. M.; SUTHERLAND, G. R.; SHAFFER, L. G. Chromosome abnormalities and
genetic counseling. 4th edition. Oxford Monographs on Medical Genetics, n. 61, 2012.
LYON, M. F. X-chromosome inactivation. Current Biology, v. 9, n. 7, p. R235-237, 1999.
MIGEON, B. R. Females are mosaics: X inactivation and sex differences in disease. 2th
edition. Oxford University Press, 2014.
Why females are mosaics, X-chromosome inactivation, and sex differences in disease.
Gender Medicine, v. 4, n. 2, p. 97-105, 2007.