Universidad

Autónoma del Estado de Morelos

“REPORTE DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

(BACTERIAS) ”

Laboratorio de microbiología (bacterias)

Dra. Maria Eugenia Nuñez Valdez

P ROYECTO

QUE PARA ACREDITAR LA MATERIA DE:

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRESENTA

BAUTISTA RODRIGUEZ EDSON JAVIER

ENCARNACIÓN MOLINA MOISES GAEL
GÓMEZ SÁNCHEZ ANGELIA JARITZI
URIOSTEGUI TELLES ELIZABETH

Cuernavaca, Morelos. 2025

Licenciatura en Ciencias (Bioquímica y
Biología Molecular),Centro de
Investigación en Dinámica Celular,
Instituto de Investigación en Ciencias
Básicas y Aplicadas, Universidad
Autónoma del Estado de Morelos. Av.
Universidad No. 1001, Chamilpa,
62210 Cuernavaca, Mor.

2
 ÍNDICE

PRÁCTICA 1: TÉCNICAS DE ESTERILIZACIÓN _______________________________ 05

Introducción _______________________________________________________05

Antecedentes ______________________________________________________05

Objetivo general ____________________________________________________06

Metodología _______________________________________________________06

Resultados ________________________________________________________08

Discusión__________________________________________________________11

Conclusión ________________________________________________________12

PRÁCTICA 2: PREPARACIÓN DE MEDIOS DIFERENCIALES Y SELECTIVOS PARA EL

CULTIVO DE BACTERIAS__________________________________________________12

Introducción _______________________________________________________ 12
​ Antecedentes ______________________________________________________13
​ Objetivo general ____________________________________________________14
Metodología _______________________________________________________14
Resultados ________________________________________________________16
Discusión__________________________________________________________18
Conclusión ________________________________________________________ 20

PRÁCTICA 3 AISLAMIENTO DE BACTERIAS A PARTIR DE LA RIZOSFERA Y DEL

TALLO DE PLANTAS DE INTERÉS AGRÍCOLA________________________________22

3
 Introducción _______________________________________________________22
​ Antecedentes ______________________________________________________22
​ Objetivo general ____________________________________________________23
Metodología _______________________________________________________23
Resultados ________________________________________________________24
Discusión__________________________________________________________28
Conclusión ________________________________________________________ 29

PRÁCTICA 4: CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE LA BACTERIA Escherichia coli ____ 31

Introducción _______________________________________________________29
​ Antecedentes ______________________________________________________32
​ Objetivo general ____________________________________________________33
Metodología _______________________________________________________34
Resultados ________________________________________________________35
Discusión_________________________________________________________39
Conclusión ________________________________________________________40

PRÁCTICA 5: Antagonismo de hongo-bacteria ______________________________ 40

Introducción _______________________________________________________40
​ Antecedentes ______________________________________________________41
​ Objetivo general ____________________________________________________41
Metodología _______________________________________________________42
Resultados ________________________________________________________43
Discusión__________________________________________________________52
Conclusión ________________________________________________________ 53

4
Práctica 1: Técnicas de esterilización
Introducción
La esterilización representa un procedimiento esencial en el trabajo microbiológico, al
constituir la base para la obtención de cultivos puros, la prevención de contaminaciones
cruzadas y la integridad de los resultados experimentales. En un laboratorio de
microbiología, el dominio de los métodos de esterilización es una competencia básica para
garantizar condiciones asépticas y seguras durante el manejo de microorganismos. Este
proceso implica la eliminación total de formas vegetativas y esporuladas mediante agentes
físicos o químicos, cuyo mecanismo de acción varía según el tipo de material a tratar y la
naturaleza del agente biológico involucrado.

Entre los métodos físicos de esterilización, el calor húmedo mediante autoclave es uno de
los más eficientes, dado que permite la destrucción de esporas bacterianas a 121 °C, bajo
una presión de 15 libras durante 15 minutos. Por otra parte, el calor seco se emplea para
materiales que no toleran la humedad, utilizando hornos a temperaturas de 160–170 °C por
una hora. El flameo directo constituye una técnica rápida para la esterilización de asas
bacteriológicas, comúnmente utilizada en siembras y resiembras. Para sustancias
termo­lábiles, la filtración por membrana con poros de 0.22 µm ofrece una alternativa efectiva
para retener microorganismos sin alterar las propiedades del producto estéril.

El presente trabajo experimental evalúa y compara la eficacia de los métodos descritos,

utilizando como modelos biológicos a Escherichia coli (bacteria Gram-negativa no
productora de esporas) y Bacillus thuringiensis (bacteria Gram-positiva productora de
esporas). La comparación del crecimiento posterior a la esterilización permitirá verificar la
efectividad de cada técnica según la resistencia inherente de los microorganismos
evaluados.

Antecedentes:

Los procesos de esterilización han evolucionado como una respuesta crítica frente al
desafío de controlar el crecimiento microbiano, tanto en el ámbito clínico como en la
investigación microbiológica. Louis Pasteur, en el siglo XIX, sentó las bases de la asepsia
moderna al demostrar que el calor podía eliminar microorganismos responsables de la
descomposición de alimentos y de enfermedades infecciosas. Desde entonces, la
esterilización ha sido adoptada como una práctica indispensable en el ámbito científico,
sanitario e industrial (Brock et al., 2003).

5
La resistencia microbiana a las condiciones ambientales varía ampliamente según el tipo de
microorganismo. Las bacterias formadoras de esporas, como Bacillus thuringiensis,
presentan estructuras altamente resistentes a tratamientos térmicos, a diferencia de
bacterias no esporuladas como E. coli, cuya susceptibilidad al calor permite su eliminación
con métodos estándar. Este principio ha motivado el uso de indicadores biológicos en
protocolos de validación de esterilización, dado que la esporulación constituye una barrera
significativa para la inactivación microbiana.

El desarrollo y aplicación de filtros de membrana ha permitido extender la esterilización a

compuestos termosensibles, como soluciones vitamínicas, antibióticos o enzimas, cuyo
deterioro por calor imposibilitaba su uso posterior. Esta tecnología, junto con los avances en
equipos de autoclave y hornos de calor seco, han ampliado significativamente las opciones
disponibles para la esterilización según el tipo de muestra o material.

Objetivos:

General:​
Evaluar la eficacia de distintos métodos de esterilización aplicados en microbiología.

Específicos:

●​ Preparar materiales de laboratorio para su esterilización por métodos físicos.​

●​ Aplicar técnicas de esterilización (calor seco, calor húmedo, flameado y filtración).​

●​ Comparar el crecimiento microbiano tras la esterilización utilizando E. coli y B.

thuringiensis.

Metodología
●​ Preparar 100 ml de agar caldo nutritivo
1.​ Pesar 0.8 g de caldo nutritivo + 1.5 g de agar y medir 100 ml de agua destilada.
2.​ Agregar todo en un matraz erlenmeyer de 250 ml y homogeneizar.
3.​ Preparar el medio para esterilizar en autoclave, colocar tapón, capuchón y cinta
testigo.
4.​ Esterilizar en autoclave a 15 lb x 15 min a 121°C.
●​ Preparar 50 ml de caldo nutritivo
1.​ Pesar 0.4 g de caldo nutritivo y medir 50 ml de agua destilada.
2.​ Agregar todo en un matraz erlenmeyer de 250 ml y homogeneizar.

6
 3.​ Preparar el medio para esterilizar en autoclave, colocar tapón, capuchón y cinta
testigo.
4.​ Esterilizar en autoclave a 15 lb x 15 min a 121°C.
●​ Esterilización de materiales
1.​ Preparar 70 palillos por persona para esterilizar (en tubos falcon con cinta testigo).
2.​ Preparar 2 matraces erlenmeyer vacíos (colocar aluminio y cinta testigo).
3.​ Preparar perlas de cristal en recipientes con cinta testigo para esterilizar.
NOTA: Todo el material a esterilizar es en autoclave a 121°C por 15 min a 15 lb.
●​ Vaciado de medios
1.​ En 5 cajas de petri estériles agregar el medio agar caldo nutritivo ( aproximadamente
20 ml en cada una de las cajas).
2.​ Vaciado de caldo nutritivo:
​ Esterilizar 10 ml en un matraz erlenmeyer.
​ Agregar 10 ml en un matraz previamente esterilizado.
​ Agregar 10 ml en un matraz previamente esterilizado.
​ 20 ml se guardan en refrigeración.
●​ Tratamiento de cada medio
1.​ Caldo nutritivo:
​ Matraz A: Agregar 10 ml en un matraz previamente esterilizado (dejar a
temperatura ambiente).
​ Matraz B: Agregar 10 ml en un matraz previamente esterilizado (refrigerar a
4°C)
​ Matraz C: Esterilizar 10 ml en un matraz erlenmeyer (dejar a temperatura
ambiente).
​ Matraz D: 20 ml se guardan en refrigeración (filtrar por medio de un filtro de
0.20 micras y recuperar el filtrado en un matraz esteril).
Evaluar los resultados a las 24 horas después de su preparación.
Pasadas las 24 horas cambiar las condiciones de almacenamiento:
​ Matraz A: Agregar 10 ml en un matraz previamente esterilizado (dejar en
incubadora a 30 °C).
​ Matraz B: Agregar 10 ml en un matraz previamente esterilizado ( dejar en
incubadora a 30 °C)
​ Matraz C: Esterilizar 10 ml en un matraz erlenmeyer (dejar en incubadora a
30 °C).
Evaluar los resultados a las 48 horas después de su preparación.
2.​ Cajas petri con agar caldo nutritivo:

7
 ​ Caja petri con 20 ml de gara caldo nutritivo (agregar 50 μL de E. coli y tomar
una espátula flamear y espatular la caja y al final flamear la espátula).
​ Caja petri con 20 ml de gara caldo nutritivo (Tomar la espátula anteriormente
utilizada, flamear y espatular la caja y al final flamear la espátula).
​ Caja petri con 20 ml de gara caldo nutritivo (agregar 50 μL de B.
thuringiensis y tomar una espátula flamear y espatular la caja y al final
flamear la espátula).
​ Caja petri con 20 ml de gara caldo nutritivo (Tomar la espátula anteriormente
utilizada, flamear y espatular la caja y al final flamear la espátula).

Resultados
Técnicas de esterilización de medios de cultivo.

Muestra Condiciones Resultados Resultados Imagen de resultados

esperados obtenidos obtenidos

Temperatura -Turbidez. -Sin turbidez.

Matraz A ambiente a 24 -Posible -Sin contaminación
horas contaminación evidente.

-Sin turbidez. -Sin turbidez.

Matraz B Temperatura -Sin posible -Sin contaminación
4°C a 24 horas contaminación evidente.

8
 Temperatura -Sin turbidez. -Sin turbidez.
Matraz C ambiente a 24 -Sin posible -Sin contaminación
horas contaminación evidente.

Temperatura -Sin turbidez. -Sin turbidez.

Matraz D ambiente a 24 -Sin posible -Sin contaminación
horas contaminación evidente.

-Turbidez. -Turbidez.
En incubadora -Posible -Posible
Matraz A a 30°C por 48 contaminación contaminación
horas

9
 En incubadora -Turbidez. -Turbidez.
Matraz B a 30°C por 48 -Posible -Posible
horas contaminación contaminación

En incubadora -Sin turbidez. -Sin turbidez.

Matraz C a 30°C por 48 -Sin posible -Sin contaminación
horas contaminación evidente.

Cultivo de E. Coli y cultivo de B. Thuringiensis

Bacteria Condición Resultados Resultados Imagen

con o sin esperados obtenidos
bacteria

E. coli Con bacteria Crecimiento Crecimiento

+++ +++

10
 E. coli Sin bacteria Sin crecimiento Crecimiento
- +

B. Con bacteria Crecimiento Crecimiento

thuringiensi +++ +++
s

B. Sin bacteria Sin crecimiento Crecimiento

thuringiensi - ++
s

Discusión.

La elección del método de esterilización depende de múltiples factores, como la naturaleza

del material a esterilizar, la sensibilidad térmica de los componentes y el tipo de
microorganismo presente. En esta práctica se evidenció que la esterilización por autoclave
es uno de los métodos más eficaces, ya que elimina eficazmente una amplia gama de
microorganismos, incluidas algunas formas esporuladas. Sin embargo, su uso no es
adecuado para sustancias termosensibles, ya que las altas temperaturas pueden degradar
compuestos activos o nutrientes esenciales del medio.

En estos casos, la filtración estéril se presenta como una alternativa confiable,

especialmente útil para soluciones líquidas que no toleran el calor, como antibióticos o
sueros. Este método permite la retención física de microorganismos mediante el uso de
membranas con poros de tamaño controlado.

Otros métodos, como la refrigeración o el almacenamiento a bajas temperaturas, no

constituyen técnicas de esterilización, sino de conservación, ya que únicamente inhiben
temporalmente el crecimiento microbiano. Una vez que se restablecen las condiciones
favorables, los microorganismos pueden reactivarse y proliferar.

11
El flameado directo, aunque es práctico y rápido, tiene limitaciones importantes: es efectivo
principalmente contra bacterias no esporuladas, como Escherichia coli, pero resulta ineficaz
frente a microorganismos formadores de esporas, como Bacillus thuringiensis, debido a la
alta resistencia de estas estructuras.

También se observó que esterilizar únicamente el recipiente de almacenamiento no

garantiza la eliminación total de microorganismos si el contenido no ha sido tratado
adecuadamente. Por tanto, una esterilización efectiva requiere considerar tanto el contenido
como el recipiente.

Conclusión
Los distintos métodos de esterilización son eficientes en ciertos casos. Los podemos
clasificar por mejor eficiencia, requerimientos del medio, procesos, tipo de muestra, entre
otros.

Práctica 2: Preparación de medios diferenciales y selectivos para el cultivo de

bacterias.

Introducción
El cultivo de microorganismos en laboratorio es una técnica central en microbiología, ya que
permite observar, aislar, identificar y estudiar las características fisiológicas de diversas
especies. Para lograrlo, se emplean medios de cultivo, los cuales son mezclas de nutrientes
diseñadas para sostener el crecimiento microbiano en condiciones controladas. Estos
medios deben proporcionar fuentes adecuadas de carbono, nitrógeno, sales minerales,
agua y, en algunos casos, factores de crecimiento específicos como vitaminas o
aminoácidos esenciales.
Los medios de cultivo se clasifican según su composición, su función y su estado físico:
Según su composición:
Medios sintéticos: Están compuestos por sustancias químicamente definidas, lo que nos
permite conocer con exactitud la concentración de cada componente.
Medios complejos: Son aquellos en los que no se conoce con precisión la composición
química exacta de todos sus componentes.
Según su función:
Medios selectivos: Son medios que contienen sustancias que impiden el desarrollo de
algunos microorganismos. Estos medios permiten el aislamiento y recuperación de un
microorganismo o grupo de microorganismos de interés en una flora mixta.

12
Medios selectivos de enriquecimiento: Son medios líquidos que estimulan la
multiplicación de algún microorganismo determinado e impiden o inhiben la reproducción de
otros.
Medios diferenciales: Son aquellos que contienen indicadores de ácido base, redox o
sustancias que detectan cambios en el medio o en las características típicas de las
colonias.
Medios de enriquecimiento: Son medios que estimulan la multiplicación de algún
microorganismo.
Según su estado físico:
Medios líquidos: Este medio no contiene agar y se emplea para obtener grandes
cantidades de microorganismos o bien para la producción de algún metabolito.
Medios semisólidos: Contienen una baja concentración de agar y se utilizan para
determinar si un microorganismo tiene movilidad.
Medios sólidos: Contienen agar en mayor proporción, lo que permite la formación de
colonias individuales sobre la superficie, facilitando el aislamiento de especies.

En esta práctica, se elaboraron y utilizaron distintos medios selectivos y diferenciales con el

fin de estudiar su aplicación en el aislamiento e identificación de bacterias, evaluando cómo
su composición afecta el crecimiento microbiano y permite distinguir entre diferentes grupos
bacterianos.

Antecedentes
El aislamiento, identificación y caracterización de microorganismos en microbiología
dependen en gran medida del uso de medios de cultivo adecuados. Estos medios pueden
estar formulados para cumplir funciones específicas, como favorecer el crecimiento de
ciertos grupos bacterianos o permitir su diferenciación con base en características
bioquímicas. En este contexto, los medios selectivos contienen agentes que inhiben el
crecimiento de microorganismos no deseados, permitiendo el desarrollo de aquellos de
interés. Por su parte, los medios diferenciales permiten distinguir entre especies o grupos de
microorganismos mediante reacciones visibles, como cambios de color, producción de gas o
alteración del pH.

El diseño y preparación adecuada de estos medios son esenciales para realizar

diagnósticos microbiológicos, investigaciones clínicas, control de calidad en alimentos y
estudios ambientales. Comprender cómo funciona cada tipo de medio, su composición y su
aplicación práctica permite desarrollar habilidades fundamentales para el trabajo en el
laboratorio microbiológico.

13
Objetivos

General:

●​ Preparar y utilizar distintos tipos de medios de cultivo selectivos y diferenciales para

favorecer el aislamiento e identificación de bacterias.

Específicos:

●​ Comprender la función y los componentes de los medios selectivos y diferenciales.​

●​ Evaluar el crecimiento de diferentes bacterias en medios específicos para determinar

su capacidad de desarrollo, resistencia y diferenciación.​

●​ Aplicar técnicas adecuadas de siembra y esterilidad para asegurar resultados

confiables.​

●​ Interpretar los cambios visuales producidos por las bacterias en los medios
diferenciales como indicadores bioquímicos de su metabolismo.

METODOLOGÍA
●​ Preparar 100 ml de agar caldo nutritivo
5.​ Pesar 0.8 g de caldo nutritivo + 1.5 g de agar y medir 100 ml de agua destilada.
6.​ Agregar todo en un matraz erlenmeyer de 250 ml y homogeneizar.
7.​ Preparar el medio para esterilizar en autoclave, colocar tapón, capuchón y cinta
testigo.
8.​ Esterilizar en autoclave a 15 lb x 15 min a 121°C.
●​ Preparar 50 ml de caldo nutritivo
5.​ Pesar 0.4 g de caldo nutritivo y medir 50 ml de agua destilada.
6.​ Agregar todo en un matraz erlenmeyer de 250 ml y homogeneizar.
7.​ Preparar el medio para esterilizar en autoclave, colocar tapón, capuchón y cinta
testigo.
8.​ Esterilizar en autoclave a 15 lb x 15 min a 121°C.
●​ Preparar dos matraces con 100 ml de medio TSA cada uno
1.​ Pesar 4.0 g de medio TSA y medir 100 ml (Para un matraz).
2.​ Agregar lo antes pesado y medido en cada matraz de 250 ml, homogeneizar y
calentar agitando a ebullición.
3.​ Preparar los matraces para esterilizar (tapón, capuchon y cinta testigo).

14
4.​ Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 min a 12 lb.
5.​ Servir el medio tibio en 10 cajas, cada caja con 20 ml de medio.
●​ Preparar 100 ml de medio agar Mac-Conkey
1.​ Pesar 5.0 g de medio Mac-Conkey y medir 100 ml de agua destilada.
2.​ Agregar lo antes pesado y medido en un matraz de 250 ml, homogeneizar, reposar
el medio por 10 min y calentar agitando a ebullición.
3.​ Preparar el matraz para esterilizar (tapón, capuchon y cinta testigo).
4.​ Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 min a 12 lb.
5.​ Servir el medio tibio en 5 cajas, cada caja con 20 ml de medio.
●​ Prepara 100 ml de medio agar King B
1.​ Pesar 3.3 g de medio agar KIng B y medir 100 ml de agua destilada.
2.​ Agregar lo antes pesado y medido en un matraz de 250 ml y homogeneizar.
3.​ Preparar el matraz para esterilizar (tapón, capuchon y cinta testigo).
4.​ Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 min a 12 lb.
5.​ Servir el medio tibio en 5 cajas, cada caja con 20 ml de medio.
●​ Preparar 100 ml de medio MSF
1.​ Pesar 0.2 g de extracto de levadura, 0.2 g de tricalcium phosphate (TCP), 2.0 g de
glucosa, 6.0 mg de actidiona*, 1.5 g de agar y medir 100 ml.
2.​ Agregar lo antes pesado y medido en un matraz de 250 ml, homogeneizar, reposar
el medio por 10 min y calentar agitando a ebullición.
3.​ Preparar el matraz para esterilizar (tapón, capuchon y cinta testigo).
4.​ Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 min a 12 lb.
5.​ Servir el medio tibio en 5 cajas, cada caja con 20 ml de medio.
●​ Preparar 100 ml de Jensen
1.​ Preparar soluciones 10x de cada uno de los siguientes:
●​ KH₂PO₄: 1 g​
MgSO₄·7H₂O: 0.5 g​
NaCl: 0.5 g​
FeSO₄·7H₂O: 0.1 g​
Disuelve en 100 mL agua destilada cada uno → usar 10 mL para el medio.
2.​ Solución 100X de Na₂MoO₄: Disolver 0.5 g de Na₂MoO₄ en 100 mL de agua destilada​
Usar 1 mL por cada 100 mL de medio final
3.​ Adicionar:
●​ Sacarosa 2.0 g en polvo, directamente,
●​ Carbonato de calcio (CaCo3) 0.2 g
●​ Agar 1.5 g
●​ Aforar con 59 mL de H2O destilada.

15
 ●​ Preparar 100 ml de LB
1.​ Pesar 2.5 g de medio LB, 1.5 g de agar y medir 100 ml.
2.​ Agregar lo antes pesado y medido en un matraz de 250 ml y homogeneizar.
3.​ Preparar el matraz para esterilizar (tapón, capuchon y cinta testigo).
4.​ Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 min a 12 lb.
5.​ Servir el medio tibio en 5 cajas, cada caja con 20 ml de medio.

RESULTADOS

Medio Observaciones Imagen del medio

●​ Tipo de medio:
Medio líquido no selectivo
●​ Crecimiento de
microorganismos:
caldo nutritivo. Ampliamente utilizado
para microorganismos no
exigentes

●​ Tipo de medio:
Sólido, al caldo nutritivo
se le agrega agar para hacer el
medio sólido.
●​ Crecimiento de
Agar Caldo microorganismos:
nutritivo. Ampliamente utilizado
para microorganismos no
exigentes

16
 ●​ Tipo de medio:
sólido
●​ Tipo de crecimiento de
microorganismos:
TSA (Agar Favorece el desarrollo y
Triptona-Soja). aislamiento de una gran
variedad de
microorganismos aerobios
y anaerobios facultativos y
estrictos

●​ Tipo de medio:
sólido
●​ tipo de crecimiento de
microorganismos:
se utiliza para el
Agar Mac-Conkey. aislamiento de bacilos
Gram negativas de fácil
desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos
●​ Nota: se nos cayó el
tapón en el matraz en
donde teníamos el medio
pero no se llegó a
contaminar el medio

●​ Tipo de medio:
sólido
●​ tipo de crecimiento de
microorganismos:
Agar King B. se utiliza para el
aislamiento, la detección y
la diferenciación de
especies de
pseudomonas en base a

17
 la producción de
fluorescencia

●​ Tipo de medio:
sólido
●​ tipo de crecimiento de
microorganismos:
MSF (Medio de se utiliza para el
solubilización de aislamiento de
fosfatos). microorganismos
solubilizadores de fosfato

●​ Tipo de medio:
sólido
●​ tipo de crecimiento de
microorganismos:
aísla principalmente bacterias
Jensen. fijadoras de nitrógeno de vida
libre

●​ Tipo de medio:
sólido
●​ tipo de crecimiento de
microorganismos:
Permite el crecimiento de
LB (medio diversas cepas
Luria-Bertani). bacterianas
especialmente
Escherichia coli.

Discusión
La preparación de medios de cultivo es una de las habilidades fundamentales en
microbiología, ya que la correcta elección y formulación del medio condiciona el crecimiento,
la identificación y el aislamiento de microorganismos. En esta práctica se prepararon
diferentes tipos de medios con finalidades diversas: generales, selectivos, diferenciales, y

18
funcionales, cada uno con características que permiten estudiar aspectos fisiológicos y
ecológicos de las bacterias.

El caldo nutritivo (CN) es un medio líquido que proporciona nutrientes básicos como fuentes
de carbono y nitrógeno. Es útil para el crecimiento masivo de bacterias no exigentes y para
pruebas bioquímicas. Al agregarle agar, se obtiene un medio sólido general (CN con agar),
ideal para observar crecimiento superficial y formación de colonias aisladas.

El TSA (Trypticase Soy Agar) es un medio rico y complejo que permite el crecimiento de una
amplia variedad de bacterias heterótrofas, tanto ambientales como patógenas. Se utiliza
ampliamente en microbiología clínica, ambiental e industrial por su capacidad de sostener
poblaciones mixtas sin ser selectivo.

El agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial, diseñado para el aislamiento de

bacterias gram negativas. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben a los gram
positivos, así como lactosa y un indicador de pH que permiten diferenciar bacterias
fermentadoras de lactosa (colonias rosadas) de no fermentadoras (colonias incoloras). Su
preparación permite comprender cómo ciertos compuestos químicos pueden modular el
crecimiento microbiano y facilitar la diferenciación fenotípica.

El agar King B es un medio semi selectivo utilizado principalmente para promover la

producción de pigmentos fluorescentes en bacterias del género Pseudomonas, como la
piocianina o fluoresceína. Su uso es relevante en la caracterización de bacterias con
actividad antagónica o con potencial de biocontrol, como se observa en prácticas
relacionadas con rizobacterias.

El medio MSF (Medio de Solubilización de Fosfato) es un medio funcional utilizado para

detectar bacterias capaces de solubilizar fosfatos inorgánicos insolubles mediante la
producción de ácidos orgánicos u otros compuestos. Estas bacterias, consideradas
promotoras del crecimiento vegetal, son capaces de liberar fósforo disponible para las
plantas. En este medio, la actividad se visualiza mediante halos claros alrededor de las
colonias, indicando una zona de solubilización.

El medio Jensen es un medio funcional carente de nitrógeno, que se emplea para

seleccionar y evidenciar bacterias capaces de fijar nitrógeno atmosférico. Su formulación es
útil para estudios ecológicos y biotecnológicos, ya que permite observar la autosuficiencia
metabólica de ciertos microorganismos en condiciones limitantes.

19
Finalmente, el medio LB (Luria-Bertani) es un medio complejo ampliamente utilizado en
microbiología, ya que favorece el crecimiento rápido de bacterias como Escherichia coli y es
útil en procesos de clonación, producción de proteínas recombinantes o crecimiento
experimental en cultivos líquidos.
En conjunto, esta práctica permitió observar la diversidad de formulaciones y funciones que
tienen los medios de cultivo. Además, resaltó la importancia de conocer su composición
química y objetivo biológico, lo cual es esencial para diseñar estrategias experimentales
adecuadas al tipo de microorganismo que se desea estudiar, aislar o utilizar con fines
específicos.
Conclusión
La preparación de distintos tipos de medios de cultivo permite comprender su función en el
crecimiento, aislamiento o caracterización de bacterias. Cada medio tiene una finalidad
específica, ya sea favorecer el crecimiento general, diferenciar o seleccionar
microorganismos, o evidenciar actividades funcionales como la solubilización de fosfato. Su
correcta elaboración es esencial para estudios microbiológicos aplicados en salud,
agricultura y biotecnología.
Cuestionario:
¿Qué cuidados deben tenerse al preparar un medio de cultivo sólido en caja de
Petri?
●​ No llenar las placas de petri en un lugar no esteril para evitar contaminación
●​ Dejar enfriar el medio aproximadamente 45-50 °C antes de verterlo en las placas
para evitar que el calor dañe la caja o el agar no solidifique correctamente.
●​ Verter el medio cubriendo completamente la superficie de la placa sin que quede
demasiado grueso ni demasiado delgado
●​ Dejar solidificar el agar sin tapar para evitar condensación y empañamiento en la
tapa
●​ Rotular las placas por la parte inferior con marcador permanente para identificar el
medio y la muestra
De los siguientes medios, mencionar en qué consiste su capacidad diferencial o
selectiva y qué tipos de microorganismos crecen en ellos? Agar Rosa de Bengala y
Agar Papa Dextrosa.

Medio Capacidad selectiva o diferencial Microorganismos que

crecen

Agar Rosa de Este medio inhibe el crecimiento Hongos

20
 Bengala bacteriano y limita el tamaño y altura
de hongos de crecimiento rápido,
facilitando el aislamiento selectivo
de hongos y levaduras

Agar papa Es un medio nutritivo enriquecido Hongos incluyendo

Dextrosa con infusión de papa y dextrosa, dermatofitos y hongos clínicos
este favorece el crecimiento y
esporulación de hongos y levaduras.
Puede ajustarse a pH ácido para
inhibir bacterias.

¿Cuál es la función de los colorantes e indicadores en los medios de cultivo?

Los colorantes e indicadores nos permiten diferenciqar microorganismos mediante cambios
de color que llegan a resulltar de reacciones bioquimicas durante el crecimiento microbiano.
También llega a facilitar la identificación y distinción de microorganismos en medios
diferenciales, ya que reflejan actividades metabólicas específicas. En lo que son tinciones,
los colorantes como la safranina, cristal violeta ayudan a visualizar estructuras celulares y
diferenciar tipos de microorganismos bajo el microscopio.
De los medios usados indica cuáles son específicos para mohos y cuáles para
bacterias y ¿por qué?

Tipo de medio Específico para Razón

Agar Rosa de Bengala Moho y levaduras contiene agentes que

inhiben bacterias y limitan el
crecimiento de hongos
rápidos, favorece hongos de
crecimiento lento y
levaduras

Agar papa Dextrosa Mohos y levaduras Medio nutritivo con pH

ajustable y posible adición
de antibióticos para inhibir
bacterias, favorece
crecimiento y esporulación
fúngica

Agar nutritivo o sangre Bacterias Medios generalmente que

contienen nutrientes para
bacterias, sin inhibidores
selectivos para hongos

21
Práctica 3: Aislamiento de bacterias a partir de la rizosfera y del tallo de plantas de
interés agrícola.
Introducción
El aislamiento de microorganismos a partir de ambientes específicos es una técnica central
en microbiología, especialmente cuando se busca estudiar comunidades microbianas
asociadas a organismos superiores como las plantas. En particular, la rizosfera zona del
suelo influenciada directamente por las raíces y el interior de los tejidos vegetales
(endosfera) representan nichos ecológicos ricos en microorganismos, muchos de los cuales
establecen relaciones benéficas con las plantas.

Diversas bacterias presentes en estos ambientes tienen la capacidad de promover el

crecimiento vegetal mediante mecanismos directos e indirectos, como la solubilización de
fosfato, la fijación de nitrógeno, la producción de fitohormonas, la síntesis de sideróforos o
incluso el control biológico de fitopatógenos. Estas bacterias, denominadas promotoras del
crecimiento vegetal, se consideran una alternativa sustentable al uso de agroquímicos en la
agricultura moderna. El maíz (Zea mays L.) es uno de los cultivos más importantes en
México, tanto por su valor económico como por su relevancia cultural. Se ha observado que
las variedades criollas de maíz mantienen interacciones únicas con bacterias nativas del
suelo, muchas de las cuales poseen potencial biotecnológico como biofertilizantes o
agentes de biocontrol (4).

En esta práctica, se lleva a cabo el aislamiento de bacterias a partir de la rizosfera y del tallo
de una planta de interés agrícola, mediante técnicas clásicas de microbiología como
diluciones seriadas, siembra por estría cruzada y vaciado en placa. El objetivo es obtener
cultivos puros de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, incluyendo potenciales
solubilizadoras de fosfato del género Pseudomonas, para su posterior caracterización.
Estas bacterias podrían representar una fuente importante de microorganismos benéficos
aplicables en estrategias de agricultura sustentable.

Antecedentes

La rizosfera y los tejidos internos de las plantas albergan comunidades microbianas

complejas que influyen de manera directa en el crecimiento, desarrollo y salud de los
cultivos. Las bacterias asociadas a estos nichos pueden desempeñar múltiples funciones
benéficas: algunas movilizan nutrientes del suelo (como el fósforo y el nitrógeno), otras
producen fitohormonas que estimulan el crecimiento radicular, o bien generan metabolitos
antimicrobianos que protegen a las plantas contra patógenos.

22
Diversos estudios han reportado que bacterias nativas del suelo y endófitas del maíz
presentan un alto potencial como agentes biofertilizantes y biocontroladores. En particular,
los géneros Pseudomonas, Bacillus, Azospirillum y Enterobacter han sido identificados por
su capacidad para solubilizar fosfatos insolubles, producir sideróforos y favorecer la
absorción de nutrientes esenciales.

El aislamiento e identificación de estas bacterias a partir de cultivos de interés agrícola

constituye un paso clave para su aprovechamiento en estrategias de manejo sustentable.
Este tipo de investigaciones resulta especialmente importante en regiones como México,
donde los sistemas agrícolas tradicionales aún dependen en gran medida de variedades
criollas y suelos no tratados con fertilizantes químicos.

Objetivos

Objetivo general:

●​ Aislar bacterias a partir de muestras de rizósfera y tallo de una planta de interés

agrícola, con el fin de obtener cultivos puros que puedan ser caracterizados
morfológica y funcionalmente.​

Objetivos específicos:

●​ Obtener muestras del suelo rizosférico y del tejido del tallo mediante procedimientos
asépticos.
●​ Realizar diluciones seriadas y aplicar técnicas de siembra (estría cruzada y vaciado
en placa) para el aislamiento de bacterias.
●​ Observar las características morfológicas de las colonias y seleccionar cultivos
bacterianos distintos.
●​ Evaluar la presencia de bacterias Gram-positivas, Gram-negativas y potenciales
solubilizadoras de fosfato.
●​ Conservar las cepas aisladas para su posterior análisis e identificación.

Metodología
En frente del mechero:
​ Tomar 1 g de raíz o rizosfera
​ Colocarlo en 10 ml de Solución salina estéril o H2O destilada estéril
​ Colocarlo en agitación 10 min
​ Hacer diluciones seriadas hasta 10-6 en tubo eppendorf

23
 ​ Platear 100 µl de la dilución 4,5 y 6 en cajas de Caldo Nutritivo
​ Incubar los tubos de la dilución 4,5 y 6 a 80°C, 30 min
​ Platear 100 µl en cajas de TSA (Agar-Triptona-Soya)
Incubar 24-96 hrs Seleccionar colonias con características diferentes y resembrar 160
colonias en cajas de TSA, Agar-MacConkey, Medio MSF2, y Agar King B, de manera
ordenada como se indica en el diagrama de la Fig. 3.4, de manera que cada aislado quede
con el mismo número en las dos cajas.
​ Incubar 24-96 hrs
​ Se realizó una tinción de gram de los controles usados en cada caja.

Resultados
Crecimiento microbiano en TSA

Caja TSA Resultados Resultados Imagen

esperados obtenidos

D- 4 pasteurizada Crecimiento ++ Crecimiento +++

D -5 pasteurizada Crecimiento + Crecimiento +

D - 6 pasteurizada Crecimiento - Crecimiento ++

colonias pequeñas

24
D- 4 sin Crecimiento +++ Crecimiento ++++
pasteurizada

D -5 sin Crecimiento ++ Crecimiento ++

pasteurizada

D - 6 sin Crecimiento + Crecimiento +

pasteurizada

Resiembra de colonias seleccionadas en medios TSA y Mac Conkey

Imagen TSA Mac Conkey Imagen

D- 5 Pasteurizada 1.​ + 1.​ ++ D - 5 pasteurizada

2.​ ++ 2.​ ++
3.​ ++ 3.​ +
4.​ ++ 4.​ -
5.​ ++ 5.​ -
6.​ ++ 6.​ -
7.​ + 7.​ -
8.​ + 8.​ -
9.​ ++ 9.​ -
10.​++ 10.​-
11.​+ 11.​-
12.​+ 12.​-
13.​++ 13.​-
14.​+ 14.​-
15.​+ 15.​-
16.​++ 16.​-
17.​+ 17.​-
18.​++ 18.​-
19.​+ 19.​-
20.​++ 20.​-

25
D-5 sin pasteurizar TSA Mac Conkey D-5 sin pasteurizar

1.​ + 1.​ +
2.​ + 2.​ +
3.​ + 3.​ +
4.​ + 4.​ -
5.​ + 5.​ -
6.​ + 6.​ -
7.​ + 7.​ -
8.​ + 8.​ -
9.​ + 9.​ -
10.​++ 10.​-
11.​+ 11.​-
12.​+ 12.​-
13.​+ 13.​-
14.​+ 14.​-
15.​+ 15.​-
16.​++ 16.​-
17.​+ 17.​-
18.​+ 18.​-
19.​++ 19.​-
20.​+ 20.​-

D-6 pasteurizar TSA Mac Conkey D-6 pasteurizar

1.​ + 1.​ +
2.​ + 2.​ +
3.​ + 3.​ +
4.​ + 4.​ -
5.​ + 5.​ +
6.​ + 6.​ +
7.​ + 7.​ +
8.​ + 8.​ +
9.​ + 9.​ +
10.​+ 10.​+
11.​+ 11.​+
12.​+ 12.​+
13.​+ 13.​+
14.​+ 14.​+
15.​+ 15.​+
16.​- 16.​+
17.​+ 17.​+
18.​+ 18.​+
19.​+ 19.​+
20.​+ 20.​+

D-6 sin pasteurizar TSA Mac Conkey D-6 sin pasteurizar

26
 1.​ + 1.​ +
2.​ + 2.​ +
3.​ + 3.​ +
4.​ + 4.​ -
5.​ - 5.​ -
6.​ - 6.​ -
7.​ + 7.​ -
8.​ + 8.​ -
9.​ + 9.​ -
10.​+ 10.​-
11.​+ 11.​-
12.​+ 12.​-
13.​+ 13.​-
14.​+ 14.​-
15.​+ 15.​-
16.​+ 16.​-
17.​+ 17.​–
18.​+ 18.​-
19.​+ 19.​-
20.​+ 20.​-

Cajas con agar King B y MSF

MSF Observaciones Agar King B Observaciones

24 h Las bacterias 2 y 3 24 h La bacteria número

comienzan a 2 comienza a
producir halo de mostrar pigmento
solubilización de posible
fosfato. pseudomona .

48-72 h Bacterias 2 y 3 48 - 72 h Bacteria número 2

solubilizan fosfato. pseudomona .

27
Tinción de gram de los controles

Control 1: [Link] Control 2: Control 3: Serratia Control 4: B.

Pseudomona thuringiensis

Discusión

El aislamiento de bacterias desde la rizosfera de plantas de interés agrícola permitió

observar una diversidad significativa de morfotipos bacterianos, influida tanto por la
condición del tratamiento térmico (pasteurización) como por el grado de dilución aplicado.
En general, las muestras sin pasteurizar presentaron un mayor número y diversidad de
colonias bacterianas, lo que confirma que la pasteurización reduce la población microbiana
viable, eliminando principalmente a las bacterias no esporuladas o sensibles al calor. No
obstante, en las muestras pasteurizadas también se logró aislar bacterias viables,
posiblemente esporulantes o resistentes al calor, que persisten en ambientes rizosféricos
desafiantes.

Uno de los hallazgos destacables fue la presencia de bacterias filamentosas con expansión
radial en el medio TSA. Estas colonias no crecieron en el medio MacConkey, lo que, junto
con su morfología y su capacidad de sobrevivir a la pasteurización, sugiere que pertenecen
probablemente al género Bacillus, un grupo de bacterias Gram positivas común en el suelo
y conocido por su papel como promotor del crecimiento vegetal y agente de biocontrol.
Según el artículo sobre bacterias nativas asociadas a Zea mays L., estos microorganismos
cumplen funciones clave como la solubilización de fósforo, la producción de sideróforos y
compuestos antimicrobianos, contribuyendo así a una agricultura más sustentable al reducir
la necesidad del uso de agroquímicos.

La resiembra en medios TSA y MacConkey, junto con los controles (E. coli, Pseudomonas,
Serratia (Gram negativas) y Bacillus thuringiensis (Gram positivo), permitió realizar una
diferenciación preliminar de las bacterias aisladas. En TSA crecieron todas las bacterias
sembradas, incluyendo los controles. En MacConkey, como era esperado, sólo crecieron las
bacterias Gram negativas, y B. thuringiensis no mostró crecimiento, validando la función
selectiva del medio.

28
Una excepción relevante se presentó en la placa D-6 pasteurizada, donde todas las
bacterias sembradas crecieron en MacConkey, lo cual contrasta con lo observado en otras
muestras. Este resultado podría explicarse por el hecho de que esta placa contenía muchas
colonias pequeñas, y durante la toma de muestra para resiembra es posible que se hayan
arrastrado varias colonias simultáneamente, incluyendo bacterias Gram negativas. Este
arrastre múltiple habría generado crecimiento visible en MacConkey, incluso si parte del
inóculo correspondía a bacterias Gram positivas. Cabe señalar que el control de Bacillus
thuringiensis en esa misma caja no creció, lo cual confirma que el medio sí funcionó
adecuadamente y refuerza la hipótesis de una contaminación cruzada accidental en la
selección de colonias.

En los ensayos realizados en medio MSF, se observó la formación de halos claros alrededor
de las colonias de las muestras 2 y 3, lo que indica capacidad de solubilización de fosfato,
una propiedad deseable en bacterias promotoras del crecimiento vegetal. Por otro lado, en
medio King B, la muestra 2 mostró fluorescencia bajo luz UV, característica típica de
algunas especies del género Pseudomonas, que están asociadas con la producción de
sideróforos.

Respecto a las tinciones de Gram, aunque morfológicamente las colonias observadas

corresponden con los controles esperados (es decir, Gram positivos y negativos), todas las
muestras mostraron una coloración morada bajo el microscopio. Este resultado, atípico para
las Gram negativas, esto podría deberse a una sobreexposición al cristal violeta durante la
tinción o a errores en el decolorado con alcohol, lo que afectó la diferenciación de la pared
celular. Sin embargo, el patrón de crecimiento en los medios diferenciales, junto con la
morfología colonial, permite confirmar que se trataba de las bacterias esperadas.

Estos resultados son consistentes con lo reportado en estudios recientes sobre microbiota
rizosférica en cultivos de maíz criollo mexicano, donde se documenta una alta riqueza
bacteriana con potencial biofertilizante y bioprotector (4). La diversidad observada en esta
práctica, sumada a la presencia de bacterias filamentosas, Gram negativas fluorescentes y
cepas solubilizadoras de fosfato, ofrece una base valiosa para la futura selección de cepas
funcionales que podrían utilizarse en estrategias de agricultura sustentable.

Conclusión

El aislamiento bacteriano a partir de la rizosfera permitió recuperar una diversidad de

bacterias Gram positivas y Gram negativas, observándose mayor crecimiento en muestras
sin pasteurizar. Las técnicas de dilución y uso de medios diferenciales como TSA y

29
MacConkey facilitaron la caracterización preliminar de las bacterias, destacando la
presencia de posibles Bacillus y otras cepas con potencial agrícola.

Cuestionario
1)​ ¿Cuál fue el número de bacterias en la dilución 5 y 6?
Como en los resultados se observó crecimiento visible pero incontable en las placas
de dilución 5 y 6, debido a que no se reportó conteo de colonias individuales ni
cálculo de UFC/mL, no es posible dar un número exacto.
2)​ ¿Cuántas bacterias se estima que hay por gramo de peso de la rizosfera de la
planta evaluada? Basado en la metodología (1 g de rizosfera en 10 mL, seguido de
diluciones hasta 10⁻⁶), y observando crecimiento desde la dilución 10⁻⁶, se puede
estimar que hay más de 10^6 bacterias por gramo de suelo rizosférico. Esta es una
estimación común para suelos agrícolas ricos en microbiota.
3)​ ¿Qué tipo de bacterias crecen en el medio TSA (Agar-Triptona-Soya)?
TSA es un medio general no selectivo que permite el crecimiento de una amplia
variedad de bacterias, incluyendo Gram positivas, Gram negativas, aerobias y
anaerobias facultativas. Es ideal para bacterias heterótrofas.
4)​ ¿Qué son los organismos Gram + o Gram-?
Son bacterias que se diferencian por la estructura de su pared celular, que se puede
evidenciar por la tinción de Gram. Las bacterias que son Gram+ tienen una pared
celular gruesa de peptidoglicano que tiene el colorante violeta durante la tinción
mientras que las Gram- tienen una pared más delgada de peptidoglicano y una
membrana externa adicional que no retiene el colorante violeta y por lo tanto se tiñe
de un color rosa por la safranina
5)​ ¿Qué importancia tienen los microorganismos en la rizosfera de una planta?
Estos organismos son cruciales para el crecimiento y desarrollo de las plantas, ya
que estos tipos de organismos como son:bacterias, hongos, actinomicetos, algas y
protozoarios que interaccionan con las raíces. Algunas de estas pueden fijar el
nitrógeno, solubilizar nutrientes, producir sustancias reguladoras de crecimiento,
controlar fitopatógenos… aumentando así la salud y productividad de la planta.
6)​ ¿Qué características de las membranas bacterianas diferencias las bacterias
Gram + y Gram-?
Gram +: posee una pared gruesa que está compuesta por peptidoglicano, no tiene
membrana externa.
Gram-: esta tiene una pared celular más delgada de peptidoglicano y una membrana
externa adicional que contiene lipopolisacáridos, lo que hace que esta sea mas
resistente a ciertos antibióticos.

30
 7)​ ¿Qué tipo de bacterias crecen en cada uno de los medios utilizados en esta
práctica?
TSA: bacterias no exigentes (Gram + y Gram-).
MacConkey: bacterias Gram-.
MSF: bacterias solubilizadoras de fosfato.
King B: Pseudomonas fluorescentes.
8)​ ¿Qué características generales tienen las bacterias del género pseudomonas y
Bacillus?
Pseudomonas: estas bacterias son Gram- aerobias, con metabolismo versátil,
capaces de sobrevivir en ambientes diversos y producir compuestos que pueden
promover el crecimiento vegetal a actuar como agentes de control biológico.
Bacillus: por otra parte las bacterias del género Bacillus son bacterias Gram+
formadoras de endosporas, aerobias o anaerobias facultativas, conocidas por su
resistencia ambiental y capacidad de producir enzimas y antibióticos que beneficien
a la planta a controlar patógenos
9)​ ¿ En 5 oraciones describe qué aprendiste de esta práctica?
Aprendimos a realizar el aislamiento de bacterias desde la rizósfera y tejido vegetal
usando técnicas asépticas. Observamos cómo la pasteurización afecta la diversidad
microbiana. Comprendimos el uso de medios selectivos y diferenciales para
caracterizar bacterias. Identificamos morfotipos bacterianos que podrían tener
aplicación agrícola. También reforzamos la importancia de las bacterias benéficas
en el crecimiento de plantas.
10)​Menciona tres perspectivas que puedas mencionar para utilizar las bacterias
aisladas en esta práctica.
Estos se pueden ocupar como biofertilizantes para promover el crecimiento vegetal
mediante la fijación de nitrógeno y solubilización de nutrientes
Se puede aplicar como agente de control biológico para combatir fitopatógenos y
reducir el uso de pesticidas químicos.
Emplearlos como biorremediación para degradar contaminantes en el suelo,
mejorando así la calidad ambiental y aumentando salud del ecosistema rizosférico

Práctica 4: Cinética de crecimiento de la bacteria escherichia coli

Introducción
El crecimiento microbiano es un fenómeno clave en microbiología, definido como el
aumento en el número de células dentro de una población. En bacterias, este proceso
ocurre principalmente por fisión binaria, mecanismo mediante el cual una célula progenitora
da origen a dos células hijas genéticamente idénticas. Este patrón de crecimiento, bajo

31
condiciones óptimas, genera poblaciones que se duplican a intervalos regulares, descritos
como tiempos de generación o tiempos de duplicación, que pueden variar entre especies, y
también dependiendo del medio y las condiciones ambientales.

El estudio de la cinética de crecimiento bacteriano permite conocer cómo evoluciona una

población microbiana en el tiempo, y se representa comúnmente mediante una curva de
crecimiento con cuatro fases características: lag (adaptación), log (crecimiento exponencial),
estacionaria y de muerte. La fase lag corresponde al periodo de adaptación del
microorganismo al medio, la fase log representa un crecimiento acelerado con máxima
actividad metabólica, en la fase estacionaria el crecimiento se detiene por agotamiento de
nutrientes y acumulación de desechos, y finalmente en la fase de muerte la población
celular disminuye progresivamente.

Escherichia coli es un modelo biológico ampliamente utilizado por su rápido crecimiento,

fácil manipulación y relevancia tanto clínica como industrial. Para estudiar su crecimiento en
laboratorio se emplean cultivos líquidos en condiciones controladas, con agitación y
temperatura constante, lo que simula un sistema de fermentación a pequeña escala.

La cuantificación del crecimiento puede realizarse mediante diferentes métodos. En esta

práctica se aplican tres de los más importantes:

1.​ Recuento de células viables mediante diluciones seriadas y vaciado en placa,

expresado como unidades formadoras de colonias (UFC/mL).​

2.​ Medición indirecta del crecimiento por turbidimetría, que determina la densidad
óptica (DO) del cultivo a 540 nm como indicativo de biomasa.​

3.​ Conteo directo de células vivas y totales mediante el uso de una cámara de
Neubauer bajo el microscopio.

Comprender y modelar la cinética de crecimiento bacteriano permite predecir el

comportamiento de poblaciones microbianas en distintas condiciones y aplicar estrategias
para optimizar, controlar o inhibir su desarrollo, dependiendo del contexto biotecnológico,
clínico o ambiental.

Antecedentes
El estudio de la cinética de crecimiento bacteriano permite analizar cómo una población
microbiana aumenta en número a lo largo del tiempo, bajo condiciones definidas. Este
crecimiento sigue un patrón característico que puede dividirse en cuatro fases: fase lag

32
(adaptación), fase logarítmica o exponencial, fase estacionaria y fase de muerte. Cada una
de estas etapas refleja un comportamiento fisiológico distinto de la población y está
influenciada por factores como la disponibilidad de nutrientes, el pH, la temperatura y la
oxigenación.

Escherichia coli es una bacteria gramnegativa que se ha consolidado como modelo

experimental en microbiología por su rápido tiempo de duplicación, facilidad de
manipulación y amplia caracterización genética. Su estudio es fundamental para
comprender la fisiología microbiana básica y para el desarrollo de aplicaciones en
investigación, medicina y biotecnología.

Para evaluar cuantitativamente el crecimiento bacteriano, se emplean distintas técnicas.

Entre los métodos directos, destacan el recuento de células viables por diluciones seriadas
y vaciado en placa (UFC/mL) y el conteo en cámara de Neubauer, que permite observar
células vivas y muertas bajo el microscopio. Por otro lado, los métodos indirectos, como la
turbidimetría, estiman la concentración celular midiendo la densidad óptica (DO) de la
suspensión bacteriana. Estas herramientas permiten construir curvas de crecimiento y
calcular parámetros importantes como la velocidad de crecimiento o el tiempo de
duplicación.

Objetivos
General:

●​ Evaluar la cinética de crecimiento de Escherichia coli mediante técnicas

microbiológicas que permitan cuantificar su crecimiento poblacional y describir sus
fases bajo condiciones controladas.

Específicos:

●​ Realizar un cultivo de Escherichia coli y cuantificar el número de células viables

utilizando el método de diluciones seriadas y vaciado en placa (UFC/mL).

Metodología
ACTIVIDAD 1. ENSAYO DE LOS MÉTODOS
Sesión 1.
1. TURBIDIMETRÍA. Para este primer ensayo no es necesario trabajar en condiciones de
esterilidad
​ Colocar en el espectrofotómetro una portacelda y bloquear el paso de luz

33
 ​ Encender el espectrofotómetro y dejarlo calentar por 5 minutos, seleccionar la
longitud de onda (540 nm) y la región visible
​ Colocar en una celda espectrofotométrica 1 ml de caldo Luria, este tubo será el
blanco
​ En la otra celda colocar aproximadamente 1 ml de la suspensión a leer
​ Limpiar con papel sanitario la celda, tomarlo con los dedos por la boca del tubo y
colocar el blanco en el portacelda. Acomodar la portacelda para dejar pasar la luz y
ajustar a cero de absorbencia.
​ Una vez ajustado a cero, bloquear el paso de luz e insertar la celda de la suspensión
a leer, previamente limpiada con papel sanitario.
​ Cuando la lectura se estabilice más o menos 3 segundos, tome la lectura.
​ Bloquear el paso de luz y retirar la celda, vaciar el contenido en un recipiente con
cloro 1% y enjuagar la celda dos o tres veces con cloro 1%.
​ Una vez leída la muestra, apagar el espectro y retirar la portacelda. Nota: Las celdas
nunca se lavan con escobillón, no se colocan en una gradilla para que no se rallen,
para ello se entregarán en un vaso o recipiente de unicel
2. CUENTA DIRECTA EN CÁMARA DE NEUBAUER
​ Tomar la cámara y limpiarla con una torunda impregnada con alcohol, con mucho
cuidado, ya que el cuadriculado al frotarlo bruscamente se puede borrar.
​ Depositar la torunda sucia en una bolsa de plástico para su posterior esterilización.
Limpiar el cubreobjetos (cubre-hematocímetro) y colocarlo sobre la cámara.
​ Colocar con la micropipeta de 20 µl la muestra de E. coli, entre la cámara y el
portaobjetos, para que por cohesión se llene la cámara. La cámara de Neubauer es
una cámara de conteo. Se trata de un portaobjetos con una depresión en el centro,
en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula
como la que se ve en la imagen. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación
entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. El área sombreada y marcada
corresponde a un mm2. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm
respecto a la superficie, por lo que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista
de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen es de 0.1 mm3, es decir 0.1 μl.
​ Colocar la cámara en la platina y enfocar con 10 y 40 X
Resultados
●​ Tasa de crecimiento específica (μ), mediante turbidimetría.

Muestra. Tiempo (horas) D.O a 540 nm. Limpieza de datos

34
Blanco 0 0.000 ✓︎

0 0 0.003 ✓︎

1 1 0.038 ✓︎

2 2 0.098 ✓︎

3 3 0.177 ✓︎

4 4 0.263 ✓︎

5 5 0.404 ✓︎

6 6 0.443 X

7 7 0.444 ✓︎

8 8 0.531 X

9 9 0.490 ✓︎

10 24 0.449 ✓︎

11 28 0.525 ✓︎

35
> # Mostrar tasa de crecimiento específica
> cat("La tasa de crecimiento específica (μ) en la fase logarítmica es:", round(mu, 4),
"h^-1\n")
La tasa de crecimiento específica (μ) en la fase logarítmica es: 0.4223 h^-1

●​ Recuento viable por dilución en diferentes tiempos de incubación

Tiempo (h) Diluciones Observaciones Imágenes

usadas

0 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

1 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

36
2 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a
10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

3 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

4 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

5 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

6 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

37
 7 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a
10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

8 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

9 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

10 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

11 10⁻², 10⁻⁴, - sin resultados a

10⁻⁶, 10⁻⁷ observar
- Posiblemente se
hicieron mal las
diluciones

Discusión
●​ Tasa de crecimiento específica (μ), mediante turbidimetría:

Fase de adaptación (0 – 2.2 h): En este periodo, la D.O. aumentó ligeramente de 0.003 a
0.098. Esto indica que las células estaban ajustándose al nuevo medio de cultivo. Esta
duración (alrededor de 2 horas) es coherente con lo esperado para E. coli en medios ricos.

38
Fase exponencial (2.2 – 5.5 h): Durante esta fase se observó un rápido incremento en la
D.O. aumentando de 0.098 a 0.404. Al ajustar los datos de esta etapa a una regresión lineal
de ln(D.O.) vs tiempo, se obtuvo una tasa de crecimiento específica μ = 0.4223 h^-1, lo que
refleja un crecimiento activo. Está pendiente representa la velocidad con la que la población
celular se duplica bajo estas condiciones
Fase estacionaria (después de 5.5 h): A partir de las 5.5 horas, el crecimiento disminuye y
la D.O. se estabiliza (~0.49 -- 0.52), indicando que se ha alcanzado el límite de nutrientes,
espacio o acumulación de desechos. Las células entran en equilibrio entre división y muerte
celular.

Una cinética de crecimiento estándar de E. coli en condiciones óptimas (37 °C, medio LB,
buena aireación) muestra lo siguiente:

Parámetro Valor estándar esperado Observado

Duración de fase lag 0.5 – 2 h ~2.2 h

μ (h⁻¹) en fase log 0.6 – 1.0 h⁻¹ 0.4223 h^-1

D.O. en fase estacionaria 0.5 – 0.6 ~0.52

El crecimiento observado es ligeramente más lento que lo reportado en condiciones

ideales, lo cual puede atribuirse a: Diferencias en el medio de cultivo, limitaciones en
aireación o temperatura o condiciones iniciales del inóculo.​
La tasa μ = 0.4223 h^-1 es aceptable y esperada en condiciones no completamente
óptimas, indicando un crecimiento saludable pero no al máximo potencial.

●​ Recuento viable por dilución en diferentes tiempos de incubación

No se pudo completar un recuento viable al no tener colonia en las diluciones y por dicho
motivo no podemos hacer los cálculos necesarios para el recuento viable.

Conclusión
La curva de crecimiento obtenida refleja adecuadamente la dinámica fisiológica de E. coli.
La tasa de crecimiento específica calculada permite caracterizar cuantitativamente el
comportamiento de la cepa bajo las condiciones dadas. La comparación con una cinética
estándar sugiere que, aunque el crecimiento no es el máximo posible, es consistente y
reproducible, lo cual valida la metodología empleada.
Cuestionario
¿Es posible diferenciar células muertas de las vivas?

39
sí, es posible diferenciar entre células vivas y muertas y esto se puede hacer mediante
diversos métodos. Las células vivas mantienen la integridad de su membrana plasmática,
mientras que las células muertas presentan membranas dañadas que permiten la entrada
de ciertos colorantes. un ejemplo de estos es el ensayo de exclusión con azul de tripán que
es uno de los métodos más sencillos ya que se puede observar que las células muertas
presentan membranas dañadas eso permite que lleguen a entrar ciertos colorantes
¿Por qué es importante la cinética microbiana?
Es importante porque permite entender cómo se desarrollan los microorganismos en
productos alimentarios o procesos fermentativos, lo que facilita el diseño de métodos para el
control de su crecimiento, prevenir alteraciones o maximizar la producción de compuestos
de interés. La cinética describe las fases de crecimiento microbiano: fase de latencia, fase
exponencial, fase estacionaria y fase de muerte.
Práctica 5: Evaluación de la actividad antagónica bacteria-hongo
Introducción

En los ecosistemas naturales, los microorganismos interactúan entre sí a través de diversas

relaciones ecológicas, incluyendo la competencia y el antagonismo. En el caso de los
microorganismos del suelo, estas interacciones resultan fundamentales para la dinámica
microbiana, especialmente en ambientes agrícolas donde la presencia de fitopatógenos
puede afectar significativamente la productividad de los cultivos. Dentro de estas
interacciones, el antagonismo microbiano es particularmente relevante, ya que implica la
capacidad de un microorganismo para inhibir el desarrollo de otro mediante distintos
mecanismos. El control biológico se basa precisamente en esta capacidad natural, y se
define como el uso de microorganismos benéficos para suprimir poblaciones de plagas o
patógenos, reduciendo así los daños a los cultivos. Este enfoque representa una alternativa
sustentable frente al uso intensivo de agroquímicos, con beneficios tanto para la salud
humana como para el ambiente.

Bacterias de géneros como Pseudomonas, Serratia, Bacillus y otros microorganismos

nativos del suelo han demostrado poseer propiedades antagónicas mediante la producción
de compuestos antimicrobianos, enzimas líticas, sideróforos o metabolitos secundarios.
Además, muchas de estas bacterias promueven el crecimiento vegetal, lo que amplía su
potencial uso en la agricultura como agentes de biocontrol.

En esta práctica se evalúa el potencial antagónico in vitro de diversas bacterias del suelo
algunas identificadas como pertenecientes a los géneros Serratia y Pseudomonas, y otras
no caracterizadas frente al hongo fitopatógeno Aspergillus flavus, un organismo de
relevancia agrícola por su capacidad de contaminar cultivos y producir micotoxinas

40
peligrosas para humanos y animales. La evaluación se realiza mediante el método de
enfrentamiento directo en medio sólido, observando el grado de inhibición del crecimiento
radial del hongo en presencia de las bacterias.

Antecedentes

El uso de microorganismos benéficos como estrategia de control biológico ha cobrado gran

relevancia en la agricultura moderna, debido a la necesidad de reducir el uso de
agroquímicos y mitigar su impacto en la salud humana y ambiental. Entre estos
microorganismos, destacan ciertas bacterias del suelo que actúan como antagonistas frente
a hongos fitopatógenos, limitando su crecimiento mediante diversos mecanismos
bioquímicos y fisiológicos.

El hongo Aspergillus flavus es un fitopatógeno de importancia económica, ya que infecta

granos como el maíz, maní y otros cultivos de almacenamiento, además de producir
micotoxinas como la aflatoxina, que representan un riesgo grave para la salud pública. Por
ello, encontrar alternativas microbianas capaces de inhibir su desarrollo representa un
objetivo prioritario en programas de manejo biológico de enfermedades.

Bacterias pertenecientes a géneros como Pseudomonas, Serratia, Bacillus y otros no

identificados han mostrado capacidad antagónica contra hongos patógenos mediante la
secreción de antibióticos, enzimas hidrolíticas, sideróforos o compuestos volátiles. La
evaluación de esta actividad en laboratorio mediante métodos in vitro, como el
enfrentamiento directo en medio sólido, permite identificar cepas con potencial para ser
utilizadas como agentes de biocontrol en sistemas agrícolas.

Objetivos

General:

●​ Evaluar la actividad antagónica de bacterias del suelo frente al hongo fitopatógeno

Aspergillus flavus mediante el método de enfrentamiento directo en medio de cultivo
sólido.

Específicos:

●​ Inocular ambos microorganismos en placas con medio de cultivo (TSA) siguiendo el

esquema de enfrentamiento directo.
●​ Observar e identificar visualmente posibles zonas de inhibición del crecimiento
fúngico.

41
 ●​ Medir el crecimiento radial del hongo Aspergillus flavus en presencia y ausencia de
la bacteria.
●​ Analizar los resultados para determinar si la bacteria presenta efecto antagónico y
en qué magnitud.

Metodología
Preparación del inóculo del hongo:
●​ Se tomó una porción de Aspergillus flavus en cultivo activo y se transfirió a un medio
líquido estéril.
●​ El tubo con el hongo se agitó vigorosamente en un vórtex para dispersar las esporas
y fragmentos miceliales.
●​ De esta suspensión, se depositó una gota (~20–30 µL) en el centro de cada caja
Petri con medio sólido (PDA o TSA), y se dejó absorber unos minutos.

Preparación de las bacterias:

●​ Se prepararon 12 tubos con caldo nutritivo (CN), cada uno conteniendo una mezcla
distinta de bacterias, inoculadas con una asada de cada cepa correspondiente.
●​ Entre las 12 mezclas se incluyen bacterias control (como [Link], B. thuringiensis,
Serratia y Pseudomonas) y otras bacterias en estudio, no identificadas.

Siembra de bacterias:
●​ De cada uno de los 12 tubos bacterianos se tomó 100 µL y se depositó a un costado
del punto donde se sembró el hongo en placas de Petri previamente preparadas.
●​ En total se sembraron 12 cajas, una por cada mezcla bacteriana.

Incubación:

●​ Las cajas se incubaron durante algunos días.

●​ Se realizaron observaciones diarias para registrar el crecimiento del hongo y
cualquier indicio de actividad antagónica por parte de las bacterias.

Evaluación de la actividad antagónica:

●​ Se midió el diámetro del crecimiento radial del hongo en dirección a la bacteria.

●​ Se observaron zonas de inhibición, cambios en la morfología micelial o la aparición
de halos claros.
●​ Los resultados se compararon contra la placa de control del hongo sin bacterias para
verificar la efectividad de la inhibición.

42
Resultados
Antagonismo

Hongo control Radio a 24 horas: 1.2 cm

(Aspergillus flavus) Radio a 48 horas: 1.2 cm

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 24 bacteria en
horas (CM) 24 horas(CM)

1.2 cm Control 1: 0.6 ((1.2-1.2)/1.2)*100= 0%

1.5 cm Control 2: 1.1 ((1.2-1.5)/1.2)*100=-25%

43
 1.5 cm Control 3: 0.8 ((1.2-1.5)/1.2)*100=-25%

1.2 cm Control 4: 1.6 ((1.2-1.2)/1.2)*100=0%

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 48 bacteria en 48
horas (CM) horas(CM)

1.9 Control 1: 0.6 ((1.2-1.9)/1.2)*100= -58.3%

1.5 Control 2: 1.1 ((1.2-1.5)/1.2)*100=-25%

44
 1.5 Control 3: 0.8 ((1.2-1.5)/1.2)*100=-25%

1.9 Control 4: 1.6 ((1.2-1.9)/1.2)*100= -58.3%

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 24 bacteria en
horas (CM) 24 horas(CM)

1.1 Muestra 11: ((1.2-1.1)/1.2)*100= -8.3%

1.4

1.1 Muestra 7: ((1.2-1.1)/1.2)*100= -8.3%

1.1

45
 1.1 Muestra 6: ((1.2-1.1)/1.2)*100= -8.3%
0.4

1.1 Muestra 14: ((1.2-1.1)/1.2)*100= -8.3%

1.2

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 48 bacteria en 48
horas (CM) horas(CM)

1.8 Muestra 11: 1.5 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

1.8 Muestra 7: 1.4 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

46
 1.8 Muestra 6: 0.1 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

1.8 Muestra 14: 1.5 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 24 bacteria en 24
horas (CM) horas(CM)

1.2 Muestra 12: 0.9 ((1.2-1.2)/1.2)*100= 0%

1.2 Muestra 15: 0.9 ((1.2-1.2)/1.2)*100= 0%

47
 1.2 Muestra 6: 1.0 ((1.2-1.2)/1.2)*100= 0%

1.2 Muestra 7: 0.9 ((1.2-1.2)/1.2)*100= 0%

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 48 bacteria en 48
horas (CM) horas(CM)

1.8 Muestra 12: 1.0 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

1.8 Muestra 15: 1.0 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

48
 1.8 Muestra 6: 1.1 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

1.8 Muestra 7: 1.2 ((1.2-1.8)/1.2)*100= -50%

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 24 bacteria en 24
horas (CM) horas(CM)

0.9 Muestra 18:1.4 ((1.2-0.9)/1.2)*100=25%

0.9 Muestra 19: 1.2 ((1.2-0.9)/1.2)*100=25%

49
 0.9 Muestra 10: 1.3 ((1.2-0.9)/1.2)*100=25%

0.9 Muestra 11: 1.4 ((1.2-0.9)/1.2)*100=25%

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 48 bacteria en 48
horas (CM) horas(CM)

1.6 Muestra 18: 1.5 ((1.2-1.6)/1.2)*100= -33.3%

1.6 Muestra 19: 1.4 ((1.2-1.6)/1.2)*100= -33.3%

50
 1.6 Muestra 10: 1.7 ((1.2-1.6)/1.2)*100= -33.3%

1.6 Muestra 11:1.6 ((1.2-1.6)/1.2)*100= -33.3%

Hongo control Radio a 24 horas: 1.2 cm

(Aspergillus flavus) en Radio a 48 horas: 2.5 cm
MSF

Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen

hongo en 24 bacteria en 24
horas (CM) horas(CM)

1.6 Muestra 10: 1.2 ((1.2-1.6)/1.2)*100= -33.3%

1.6 Muestra 16: 0.9 ((1.2-1.6)/1.2)*100= -33.3%

51
 Radio de Radio de Porcentaje de inhibición Imagen
hongo en 48 bacteria en 48
horas (CM) horas(CM)

2.2 Muestra 10: 2.2 ((2.5-2.2)/2.5)*100= 12%

2.2 Muestra 16: 2.1 ((2.5-2.2)/2.5)*100= 12%

Discusión

Durante la evaluación de la actividad antagónica entre bacterias y Aspergillus flavus, se

observaron distintos comportamientos entre las cepas. En la mayoría de los casos, el
crecimiento del hongo fue similar o incluso mayor al control, lo que sugiere que estas
bacterias no ejercen un efecto antifúngico evidente, y en algunos casos podrían incluso
estar favoreciendo el crecimiento del hongo a través de interacciones metabólicas o
competencia débil.

Sin embargo, destacan las muestras bacterianas etiquetadas como Muestra 10 y Muestra
16, las cuales presentaron menor crecimiento del hongo en comparación con el control.
Estas diferencias, aunque sutiles, indican una posible inhibición parcial del crecimiento
radial del micelio, probablemente a través de la producción de metabolitos secundarios o
competencia por nutrientes.

Otro hallazgo relevante fue que algunas bacterias , no solo no inhibieron al hongo, sino que
incluso parecieron incrementar su tasa de crecimiento. Esto podría deberse a la producción
de compuestos bacterianos que son aprovechados por el hongo, o a la falta de producción
de sustancias antagónicas.

52
La heterogeneidad de los resultados refleja la importancia de identificar taxonómicamente
las cepas más efectivas, y sugiere que solo algunas bacterias de la rizosfera poseen
verdadero potencial antagonista frente a A. flavus. Esto es coherente con lo reportado en
estudios previos sobre control biológico, donde sólo ciertas especies de Pseudomonas,
Bacillus o Serratia muestran producción efectiva de antifúngicos.

Conclusión
Las bacterias correspondientes a las muestras 10 y 16 mostraron un efecto inhibitorio
moderado sobre el crecimiento de Aspergillus flavus después de 48 horas, en comparación
con el control sin bacterias. Estos resultados sugieren que dichas cepas podrían poseer un
potencial biotecnológico como agentes de control biológico de hongos fitopatógenos. Se
recomienda su identificación y evaluación más detallada para determinar su aplicabilidad en
estrategias agrícolas sustentables.

Cuestionario
¿Por qué debe estar todo el material estéril?
El material debe de estar esteril para eliminar todos los microorganismos, bacterias, esporas
y agentes contaminantes que puedan alterar los resultados experimentales que causan
reacciones no deseadas. La esterilización previene la contaminación cruzada entre
diferentes experimentos y garantiza la seguridad, precisión y validez de los resultados.
¿Por qué los cultivos deben mezclarse con vortex?
El vortex se utiliza para mezclar uniformemente los cultivos con el medio o reactivos,
asegurando una distribución homogénea de las células o microorganismos presentes en la
muestra. Esto es crucial para tener resultados consistentes y confiables en los
experimentos, ya que evita la sedimentación.
¿Por qué se deben sellar las cajas Petri con Parafilm?
se sellaron con parafilm para mantener la esterilidad y evitar contaminación externa durante
el crecimiento de los cultivos. El sellado con parafilm impide la entrada de aire contaminado
y microorganismos no deseados.

Referencias Bibliográficas
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ed.). Pearson Educación.
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4.​ Sánchez-Ceja, Monica Guadalupe, Loeza-Lara, Pedro Damián,
Carballar-Hernández, Santos, Jiménez-Mejía, Rafael, & Medina-Estrada, Ricardo
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the rhizo- and endosphere of plants: Their role, colonization, mechanisms involved
and prospects for utilization. Soil Biology and Biochemistry, 42(5), 669–678.

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