Pestaña 1
Universidad México Americana del Norte
Microscopio óptico
2A MCP
Dileiny Michelle Alaniz Ortega
Marisa Arriaga Jaime
Monserrat Mayela Franquiz Sánchez
Angélica Miroslava Méndez Hernández
José Emmanuel Ojeda Contreras
Areli Abisag Ramos Francisco
Q.C Abel Calvillo Ramirez
Microbiología y Parasitología
Introducción
El microscopio es una herramienta esencial en la microbiología, ya que permite la
observación de estructuras microscópicas imposibles de ver a simple vista. Su
invención se atribuye a Zacharias Janssen, quien, a finales del siglo XVI, desarrolló
uno de los primeros modelos compuestos. Sin embargo, fue Antonie van
Leeuwenhoek, en el siglo XVII, quien perfeccionó las lentes y realizó las primeras
observaciones detalladas de microorganismos, sentando las bases de la
microbiología.
En esta práctica de laboratorio, nuestro equipo exploró el uso del microscopio,
identificando sus partes y comprendiendo su correcto manejo. Aplicamos estos
conocimientos en la observación de microorganismos, específicamente en el estudio
de la morfología de los cocos, un tipo de bacteria de forma esférica que puede
agruparse en diferentes configuraciones, como diplococos, estreptococos y
estafilococos. Mediante el ajuste de iluminación, enfoque y aumentos, logramos
visualizar estas estructuras con claridad, reforzando la importancia del microscopio
en el análisis microbiológico.
Objetivo
El objetivo de esta práctica fue aprender el uso y manipulación correcta del
microscopio, comenzando desde su acomodo hasta su enfoque, así como lugares
que no se deben y los que se pueden tocar para hacer los ajustes necesarios para
el enfoque correcto de la muestra.
Fundamento
El microscopio óptico se basa en ampliar la imagen de un objeto utilizando dos
conjuntos de lentes convergentes que modifican el trayecto de los rayos de luz entre
el “espécimen” y el observador. Estas lentes se encuentran en los extremos de un
tubo: el objetivo, ubicado cerca del objeto, capta la luz que atraviesa el “espécimen”
y forma una imagen real y ampliada dentro del tubo; y el ocular, situado junto al ojo
del observador, recoge esa imagen para transformarla en una representación virtual,
invertida y magnificada. Generalmente, los especímenes son transparentes o se
preparan en secciones extremadamente delgadas, y cuando es necesario resaltar
detalles específicos, se pueden aplicar colorantes que facilitan la observación de
sus estructuras.
Material
- Microscopio Óptico
- Portaobjetos con muestra de una pata de mosca
- Portaobjetos con muestra de epidermis de cebolla
- Portaobjetos con muestra de tallo de girasol
- Portaobjetos con muestra de tallo de algodón
- Portaobjetos con muestra de Tallo de pino
- Gasas
Procedimiento
1. Primero, tomamos el microscopio por el brazo y base para moverlo y lo
acomodamos sobre una superficie plana y cerca de un enchufe.
2. Una vez bien acomodado, retiramos la funda para proceder a conectarlo al
enchufe y encendimos el microscopio por su interruptor.
3. Con la muestra fijada lista para observación, encendimos la lámpara para
posicionar la muestra sobre la platina y centrar la muestra con ayuda de los
tornillos de esta.
4. Acomodamos los oculares a nuestra visión usando el objetivo 4x, hasta que
podemos ver un solo círculo con ambos ojos.
5. Ajustamos la intensidad de la lámpara con su tornillo para intensidad de luz y
haciendo uso del diafragma para regular su paso de luz.
6. Enfocamos la muestra con el objetivo 4x con el macrométrico y micrométrico
hasta que conseguimos apreciar la muestra de manera nítida.
7. Cambiamos al objetivo 10x para volver a enfocar la muestra con el
macrométrico y micrométrico hasta que la vista fue nítida.
8. Cambiamos al objetivo 40x para volver a enfocar la muestra con el
macrométrico y micrométrico hasta que la vista fue nítida.
9. Una vez enfocamos la muestra con los 3 objetivos (4x, 10x y 40x) cambiamos
la muestra para repetir el proceso de enfoque.
Evidencias
Imagen 1. Muestra de Pata de mosca apreciada en el microscopio, enfocada a 4x.
Imagen 2. Muestra de Epidermis de cebolla apreciada en el microscopio, enfocada
a 10x.
Imagen 3. Muestra de Tallo de Pino apreciada en el microscopio, enfocada a 40x.
Imagen 4. Muestra de tallo de algodón apreciada en el microscopio, enfocada a 40x.
Imagen 5. Muestra de Tallo de girasol apreciada en el microscopio, enfocada a 40x.
Imagen 6. Análisis en Microscopio de la muestra de tallo de pino.
Observaciones
Al usar el microscopio debemos de tomar medidas de precaución ya que podemos
cometer algunos errores como:
•Tocar otras partes del microscopio que no sean el brazo y la base, ya que solo de
ahí podemos agarrarlo para moverlo de un lugar a otro si no, podemos dañarlo.
•No limpiar el microscopio, puede afectar su funcionamiento y precisión.
•No seleccionar el objetivo adecuado puede afectar la resolución y la calidad de la
imagen.
•No ajustar correctamente la lámpara puede afectar la calidad de la imagen.
•Usar el objetivo de 100x y después regresar a usar los otros objetivos puede
ocasionarles daño.
Conclusión
En conclusión, esta práctica fue de gran utilidad para aprender cómo funciona el
microscopio, familiarizarnos con los nombres y funciones de cada una de sus partes
y comprender su propósito. Tuvimos la oportunidad de observar objetos fascinantes
como la pata de una mosca, epidermis de cebolla, tallos de girasol, algodón y pino,
lo que nos permitió examinar detalles diminutos que no podríamos ver a simple
vista. La experiencia de observar estos objetos de cerca fue impresionante, y en el
reporte se pueden apreciar las imágenes que capturamos.
Bibliografía
•Brock, T. D., Madigan, M. T., Martinko, J. M., & Parker, J. (2008). Biología de los
microorganismos. Pearson Educación.
• Tortora, G. J., Funke, B. R., & Case, C. L. (2021). Microbiología. Pearson.
• Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (2019). Microbiología. McGraw-Hill.
• Gest, H. (2004). The discovery of microorganisms by Robert Hooke and Antonie
van Leeuwenhoek, Fellows of the Royal Society. Notes and Records of the Royal
Society of London, 58(2), 187-201.
• Singleton, P. (1999). Bacteria in Biology, Biotechnology and Medicine. Wiley.
Universidad México Americana del Norte
Tinción simple y Técnica Húmeda
Dileiny Michelle Alaniz Ortega
Marisa Arriaga Jaime
Monserrat Mayela Franquiz Sánchez
Angélica Miroslava Méndez Hernández
José Emmanuel Ojeda Contreras
Areli Abisag Ramos Francisco
Q.C Abel Calvillo Ramirez
Microbiología y
Parasitología
2A MCP
Introducción
En microbiología, la observación de microorganismos es un proceso esencial para
su identificación y estudio. Para mejorar la visibilidad de estas estructuras al
microscopio, se emplean técnicas de tinción, entre las cuales destacan la tinción
simple y la preparación en fresco (tinción húmeda).
Húmeda, su origen proviene gracias a Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723) quien
en siglo XVII observó por primera vez organismos vivos mediante gotas de agua
usando microscopios de su propia fabricación.
Tinción simple, (1843-1910) Robert Koch pionero en la microbiología utilizó
colorantes como el azul de metileno, observando bacterias, facilitando el estudio y
diferenciación.
Se utiliza un solo colorante para resaltar la morfología y disposición de las bacterias,
facilitando su análisis microscópico. En contraste, la preparación en fresco permite
observar microorganismos vivos sin alterar su estructura, lo que posibilita el estudio
de su movilidad y comportamiento en un medio líquido.
Para la realización de estas técnicas, se obtuvieron muestras a partir de un cultivo
microbiológico, siguiendo los procedimientos adecuados para garantizar su calidad
y representatividad. Mediante el uso de medios de cultivo apropiados, las bacterias
fueron recolectadas, fijadas en portaobjetos y posteriormente teñidas para su
observación. Este proceso permite comprender la relevancia de la tinción en el
análisis microbiológico y su aplicación en diversas áreas de estudio.
Objetivo
En esta práctica, nuestro objetivo fue apreciar la morfología al realizar la tinción
simple y su movimiento con el procedimiento de montaje húmedo, para una mejor
identificación de la bacteria y posterior diagnóstico para recetar un eficaz tratamiento
y evitar generar mayor resistencia a largo plazo.
Fundamento
El estudio de los microorganismos requiere enfoques complementarios que permitan
tanto la visualización detallada de su morfología como su aislamiento para un
análisis más profundo. En este sentido, la tinción simple y la técnica húmeda
constituyen herramientas fundamentales en el laboratorio de microbiología.
La tinción simple se basa en el uso de un único colorante que tiñe uniformemente
toda la muestra. Al aplicar este método, se resaltan las características morfológicas
del microorganismo, tales como la forma, el tamaño y la estructura celular. Este
procedimiento es esencial para identificar rápidamente elementos clave en la célula,
facilitando la clasificación y el diagnóstico preliminar de diversos patógenos.
Por otro lado, la técnica húmeda se fundamenta en el agotamiento progresivo de
un inóculo sobre un medio sólido, como una placa de Petri. Esta dilución controlada
permite que las bacterias se dispersen de manera individual en la superficie del
medio, dando lugar a colonias aisladas. El aislamiento de estas colonias es crucial
para estudios posteriores, ya que posibilita la evaluación de características
específicas de crecimiento, la realización de pruebas bioquímicas y la determinación
de la sensibilidad a distintos antimicrobianos.
La tinción simple permite apreciar rápidamente la morfología del microorganismo
mediante la aplicación de un único colorante, mientras que la técnica húmeda se
utiliza para aislar colonias en un medio sólido, facilitando su análisis detallado. Cada
método cumple un propósito específico en la investigación microbiológica.
Material para tinción simple
- Microscopio Óptico
- Asa/ Aplicador de madera
- Gasas
- Portaobjetos
- Papel Estraza
- Torundas con alcohol
- Pinzas Kelly Curvas
- Azul de metileno
- Pipeta
- Encendedor
- Canasta o recipiente
- Puente
- Aceite de inmersión
Material para Montaje húmedo
- Microscopio Óptico
- Gasas
- Asa
- Cubreobjetos
- Portaobjetos
- Papel Estraza
- Agua destilada
- Azul de metileno
- Canasta o recipiente
- Puente
Procedimiento para la tinción simple
1. Sobre el área a trabajar colocamos un pedazo de papel estraza.
2. Limpiamos el portaobjetos, abrimos la caja petri y con el aplicador tomamos
un poco de muestra del cultivo.
3. Con la muestra en el aplicador la trataremos sobre el portaobjetos de forma
ovalada y dejamos secar durante 5 minutos, cerramos la caja petri.
4. Transcurridos los 5 minutos, encendimos un algodón empapado en
alcohoI-acetona que sostuvimos con las pinzas con un encendedor, ya que
sobre la llama pasaremos el portaobjetos con la muestra unas 3-4 veces,
hasta que esté tibio, revisamos la temperatura con el dorso de la mano,
evitando sobrecalentamientos, lo dejamos enfriar.
5. Una vez frío, colocamos la muestra sobre el puente previamente posicionado
sobre un recipiente, donde aplicamos gotas de colorante suficientes para
cubrir la muestra y se deja reposar por 4 min.
6. Posterior a los 4 minutos, decantamos el excedente de colorante para luego
enjuagar el exceso a chorro indirecto de agua hasta que el agua es incolora,
se deja secar sobre una gasa.
7. Al tener la muestra seca, procedemos a ponerla sobre la platina para, con los
conocimientos de la práctica anterior, hacer uso del microscopio y observar la
morfología de la bacteria.
Procedimiento para montaje húmedo
1. Sobre el área a trabajar colocamos un pedazo de papel estraza.
2. En un portaobjetos limpio pusimos una gota de agua destilada en el centro,
abrimos la caja petri y con el aplicador tomamos un poco de muestra del
cultivo.
3. La muestra que tomamos la mezclamos de forma homogénea con la gota de
agua destilada.
4. Sobre la mezcla homogénea colocamos el cubreobjetos de manera suave y
sin hacer presión.
5. Ahora está listo para ser colocado sobre la platina en el microscopio para
enfocar y visualizar su movilidad en el medio acuoso.
Evidencias
Imagen 1. Toma de una parte de la colonia de bacilos con un aplicador de madera
de un Agar EMB (Eosina Azul de Metileno).
Imagen 2. Toma de una parte de la colonia de cocos con un aplicador de madera de
un Agar sal y Manitol.
Imagen 3. Tinción del frotis de cocos y bacilos con colorante Azul de metileno
apoyados por una pipeta para su aplicación.
Imagen 4. Muestra de una colonia de Bacilos , enfocada a 100x posterior a la tinción
simple.
Imagen 5. Muestra de colonia de Cocos apreciada en el microscopio posterior a la
tinción simple, enfocada a 100x.
Imagen 6. Muestra de Cocos apreciada en el microscopio posterior a la técnica de
Montaje Húmedo, enfocada a 40x.
Observaciones
Al trabajar con la tinción simple por primera vez, pudimos observar algunos errores
o problemas que podemos tener como:
•No limpiar el portaobjetos
•Asegurarnos de tener gas para prender el mechero. En caso de no contar con
alguno de estos dos, podemos sostener con algunas tijeras torunda con alcohol y
prenderle fuego con un encendedor.
•No debemos de regresar a los objetivos de 40x, 10x o 4x después de haber usado
el aceite de inmersión en el 100x.
•Lavar bien la muestra sin que el chorro de agua caiga directamente, ya que si no lo
hacemos pueden quedar residuos del colorante que afectará nuestra tinción.
•Asegurarse bien de qué lado del portaobjetos estamos trabajando, no descuidarnos
porque al moverlo podemos colocarlo hacia abajo.
En el caso de trabajar con la técnica de montaje húmedo hay que limpiar bien los
materiales que vamos a ocupar igual que en la tinción simple.
Hay que usar agua destilada esteril para no introducir otros microorganismos en
nuestro montaje.
En caso de no usar buena cantidad de muestra nos será difícil interpretarla.
No debemos olvidar colocarle aceite de inmersión a la muestra para poder observar
a 100x y tenemos que recordar que una vez usando este objetivo no podremos
regresarnos a los otros.
Conclusión
En conclusión, la práctica de tinción simple y técnica húmeda fue muy útil para
comprender cómo se realizan y para qué sirven, aprendimos paso a paso el
procedimiento de cada una y los materiales que se requieren para llevarlas a cabo.
Fue interesante ver cómo las muestras, especialmente las bacterias, se visualizan
en el microscopio después de aplicar estas técnicas. Trabajamos en equipo, lo que
facilitó el aprendizaje y la ejecución de las pruebas, y nos dio una mejor
comprensión del proceso. Además, es importante el uso de guantes para garantizar
la seguridad al manipular las muestras.
Bibliografía
Barer, M. R. (1997). “Microscopy and the single cell”. Journal of Applied
Microbiology, 83(1), 35S-45S.
Benson, H. J. (2012). Microbiological Applications: Laboratory Manual in General
Microbiology. McGraw-Hill.
Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). (s.f.). “Técnicas de tinción en
microbiología”. Disponible en: [Link]