ENZIMAS
Las amilasas son enzimas del tipo hidrolasa, producidas, en menor cantidad en las
glándulas salivales, y en mayor cantidad, en el pán-creas; que tienen como función
catalizar las reacciones de hidróli-sis del almidón para formar azúcares digeribles e incluso
glucosa libre.
Cuando alguna las glándulas secretoras de amilasas se inflama, como en la parotiditis o en
la pancreatitis; como consecuencia, au-menta la producción de amilasas y aparece elevado
su nivel en san-gre (amilasemia). La insuficiencia renal también puede contribuir con el
aumento de la amilasa en sangre, ya que se reduce su excreción por este órgano.
La amilasa se considera un marcador importante de la función pan-creática, ya que se eleva
o disminuye con la hipertrofia de este, o con la disminución de sus funciones. Así, por
ejemplo, la función exocrina del páncreas suele disminuir con la fibrosis quística y por el
contrario, aumenta debido a las pancreatitis crónicas causadas por el hábito del
alcoholismo. El adenocarcinoma de páncreas, es la enfermedad malig-na de esta glándula
(43). Suele ser de mal pronóstico. Con esta condi-ción los niveles de amilasa se elevan
dramáticamente.
Fotografía 15. La Docente Magdalena Aray Andrade prepara el espectrofotóme-tro previo a
la clase práctica de Bioquími-ca correspondiente la cuantificación de la amilasa.
Tomada por Jean Pool Jinez Sorroza. Cor-tesía Laboratorio de Bioquímica, Facultad de
Ciencias Médicas UEES.
Objetivos 1. Propósito preventivo: A individuos con antecedentes familiares de
adenocarcinoma de páncreas.
2. Propósito reactivo: Pacientes diabéticos, pacientes con pre-sunta parotiditis y trastornos
recurrentes del sistema digestivo.
3. Propósito de control: Pacientes con parotiditis en tratamiento, pacientes con
adenocarcinoma bajo tratamiento.
Método 1: Enzimático/colorimétrico Fundamentos La α-amilasa hidroliza el
2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriósido (CNPG3) a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) y forma
2-cloro-4-nitrofenil-α-Dmaltoside (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G), según la
siguiente reacción:
ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA CNP-G3 α-Amilasa CNP + Maltotriosa
Condiciones • Suero recolectado de la manera estándar.
• Es recomendable procesar la muestra a las pocas horas de ha-ber sido tomada. Sin
embargo, pueden conservarse hasta por una semana bajo 2-10 °C.
• Los anticoagulantes citratos y oxalatos inhiben la actividad de la amilasa.
• Orina, el sujeto descarta la primera micción del día, y toma la siguiente 2 horas después
de la primera. Esta muestra, que co-rresponde a 2 horas de diuresis, se diluye a 200 ml con
agua. La determinación se efectúa con 20 ul de esta dilución, obteniéndo-se el resultado
directamente en Unidades Amilolíticas/hora (44).
Valores de referencia • Suero: < 120 UA/dL • Orina: < 260 UA/hora Diagnóstico La
pancreatitis aguda ofrece valores entre 300-12000 unidades amilo-líticas/dL en sangre, en
tanto que en orina muestra más de 900 Unida-des amilolíticas/hora. La pancreatitis crónica
por su parte, arroja valores en sangre de hasta 200 UA/dL y en orina más de 300
UA/HORA.
La parotiditis exhibe valores séricos de más de 350 UA/dL y en orina más de 750 UA/hora
(19).
La lipasa La lipasa es una enzima, producida por el páncreas, cuya función es separar las
grandes moléculas de grasa que se ingieren en la dieta, de tal forma que se puedan
absorber con facilidad. Esto lo hace, catalizando la hidrólisis de los triglicéridos para
llevarlos a glicerol y ácidos grasos libres.
La cuantificación de la actividad de la lipasa se usa para diagnosticar enfermedades como
pancreatitis aguda y la obstrucción del conducto pancreático. El diagnóstico debe
consolidarse con la clínica del pa-ciente y otras pruebas de laboratorio. Otras afecciones en
las cuales se incrementa la actividad de lipasa incluyen intoxicación aguda con alcohol y
traumatismos accidentales o quirúrgicos del abdomen (31). Objetivos 1. Propósito
preventivo: A individuos con antecedentes familiares de adenocarcinoma de páncreas.
2. Propósito reactivo: Pacientes diabéticos, pacientes trastornos recurrentes del sistema
digestivo e intolerantes a la grasa (es-
teatorrea).
3. Propósito de control: Pacientes con adenocarcinoma de pán-creas bajo tratamiento.
Fundamentos Método Cinético La lipasa, presente en la muestra, hidroliza el sustrato
1,2-O-dilauril-ra-cglicerol-3-glutárico-(6’-metilresorufina)-éster para generar ácido
glu-tárico-metilresorufina éster, compuesto inestable que se descompone espontáneamente,
liberando un compuesto coloreado (metilresorufina) que se mide a 570 nm. La velocidad de
aparición de color es directa-mente proporcional a la actividad enzimática (45).
Condiciones • Suero o plasma heparinizado obtenido de la manera usual. Se-parar del taco
lo más pronto posible después de la extracción.
• La lipasa en suero o plasma es estable 8 días bajo 2-10°C y hasta 12 meses a -20°C.
Valores de referencia Adultos: 13 - 60 U/l (37°C) Diagnóstico Altos niveles de actividad de la
lipasa pueden estar ocasionados, entre otras causas, por una obstrucción intestinal, por la
condición celíaca, por úlceras duodenales, adenocarcinoma pancreático y pancreatitis.
Fosfatasa ácida total y prostática Las fosfatasas ácidas están presentes en gran parte de
los tejidos del organismo, siendo particularmente altas en la próstata, el estómago, el
hígado, los músculos, el bazo, los eritrocitos y las plaquetas. Su princi-pal función consiste
en escindir los grupos fosfatos ligados a diferen-tes moléculas. Se encuentra almacenada
en los lisosomas y se activa cuando estos se unen a los endosomas, los cuales tienen un
pH ácido.
Es por esto que su óptima actividad se desarrolle en medios ácidos.
La fosfatasa ácida prostática constituye es un indicador precoz impor-tante para
diagnosticar el cáncer de próstata. De allí el interés clínico principal de esta prueba.
Altas concentraciones de Fosfatasa ácida total se asocian a algunas enfermedades
hematológicas como leucemia mielocítica, trombocito-penia idiopática; y óseas como
enfermedad de Paget, carcinoma óseo;
así como en algunos tipos de cáncer, enfermedades hepáticas (hepa-titis, ictericia
obstructiva), etc (46).
Objetivos 1. Propósito preventivo: A hombres mayores de 45 años de edad, con
antecedentes familiares con cáncer de próstata.
2. Propósito reactivo: Hombres con diagnóstico de prostatitis o hiperplasia prostática.
3. Propósito de control: Pacientes bajo tratamiento prostático.
Fundamentos Método Cinético La fosfatasa ácida hidroliza el α-naftil fosfato en un medio
ácido, con la liberación del fosfato y el α-naftol. El naftol reacciona posteriormente con un
diazorreactivo incorporado en el sistema generando un Cromó-geno azoico (pigmento
amarillo) que es proporcional a la actividad de fosfatasa ácida total presente en la muestra.
Cuando se mide la acti-vidad en presencia de tartrato, se inhibe la actividad de la isoenzima
prostática. La fracción prostática corresponde a la diferencia entre las actividades de
fosfatasa ácida total y de la resistente al tartrato (Fosfa-tasa Acida no Prostática/ACP-NP)
(47).
ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA α-naftil fosfato + H2O FAC α-naftol + Pi α-naftol +
Fast Red TR Cromógeno azoico Condiciones • Suero obtenido de la manera usual. No
utilizar plasma. Separar el suero del plasma lo más pronto posible y refrigerar hasta el
momento de su procesamiento. Para prevenir la inactivación de la enzima, puede agregarse
al suero, 50 µl de acético 0,7 mol/l por cada mililitro de suero. En estas condiciones puede
perma-necer viable durante varios días bajo 2-10 °C.
• Deben rechazarse sueros francamente ictéricos.
• No usar anticoagulantes.
Valores de referencia • Fosfatasa Acida Total (ACP): < 9 U/L (a 37o C) • Fosfatasa Acida
Prostática (PAP): < 3,5 U/L (a 37o C) Diagnóstico No se puede usar la fosfatasa ácida para
fines de diagnóstico por sí sola, es necesario cotejar con la clínica del paciente y otras
evaluacio-nes de laboratorio.