Cien. Inv. Agr. 34(3): 225-230.

2007
[Link]

NOTA DE INVESTIGACION

Efecto de la cobertura del suelo con cascarilla de arroz en el

crecimiento y rendimiento del tomate de ramillete

Gisela Rodríguez Rodríguez

Instituto de Investigaciones Hortícolas Liliana Dimítrova
Carretera Bejucal-Quivicán, km 33 ½. Quivicán, La Habana, Cuba. CP 33500

Abstract

G. Rodríguez Rodríguez. 2007. Effect of rice bran mulching on growth and yield of
cherry tomato. Cien. Inv. Agr. 34(3):225-230. From the spring to fall of 2005, in northern
Kanto, located in central Japan, an open field was prepared for cultivating cherry tomatoes
(Lycopersicon esculentum var. cerasiforme) with three types of mulch: 1. Rice straw with rice
bran, 2. Rice straw alone, and 3. Polyethylene film covering. The fruits were harvested from
June to the end of September. There were significant differences between the treatments in
both the total yield of fruit (p = 0.0379) as well as in the yield of normal fruit (p = 0.0458).
The highest total fruit production (3.4 kg·plant-1) was obtained with the rice straw and bran
treatment, followed by the other two treatments, with about 2.5 kg·plant-1. Other factors, such
as total fruit number and the weight of damaged fruit, were not significantly different. Forty
days after planting in the field, plant height and other vegetative characteristics were measured;
no statistically significant differences between the studied soil treatments were observed. These
results indicate that the application of rice bran on a field surface previously covered with rice
straw contributed to an increase in the yields of the tomato plants. The application of rice bran
also facilitated weed control management.

Key words: Cherry tomato, Lycopersicon esculentum, organic mulch, rice bran mulch, rice
straw mulch.

Introducción de ramillete (tomate cherry).

y El grupo de los
tomates de ramilletes ((L. esculentum var.
El tomate ((Lycopersicon esculentum Mill) cerasiforme (Dunal) A. Gray) es de frutos
es uno de los vegetales más importantes y pequeños que asemejan cerezas y se pueden
populares del mundo (Peralta y Spooner, hacer cosechas sucesivas desde la misma
2002). En Cuba, ocupa aproximadamente planta. El tomate cherry se considera ancestro
60.000 ha anualmente. También se considera la de los tomates actuales (Lorenz y Maynard,
especie hortícola más importante en Asia, con 1980). Recientemente, los tomates de pequeña
alrededor de 25 millones de toneladas métricas talla se popularizaron en el trópico. Estos
producidas anualmente en cerca de un millón tienen un gran potencial de cultivo, siendo
de hectáreas (Hanson y Chen, 1996). China es muy atractivos por su apariencia, sabor y como
el líder mundial en producción de tomate con fuente importante de vitaminas y minerales.
alrededor del 25% de la producción mundial Tienen bajo contenido en grasas y son altos en
(FAO, 2005). contenido de azúcares (Gómez et al., 2000).

Existen tres tipos de tomate, cultivares para Los factores más importantes que reducen
consumo fresco, para uso industrial y tomate la productividad del tomate son las altas
temperaturas, alta humedad, exceso de
precipitaciones, plagas y enfermedades (Opeña,
Recibido 18 abril 2007. Aceptado 31 agosto 2007.
1985). Por el contrario, la cobertura del suelo
1
Dirigir correspondencia a G. Rodríguez: grroguez@[Link] (
(mulchh) es un factor importante en el control
226 CIENCIA E INVESTIGACION AGRARIA

de malezas y conservación de la humedad, lo su calidad en estantería. El híbrido ‘Magnet’

que permite mantener un ambiente favorable tiene resistencia a la marchitez bacteriana
para el desarrollo de raíces, manteniendo ((Ralstonia solanacearum m), nematodo agallador
la temperatura uniforme. Esto acelera la ((Meloidogyne incognita), al virus del mosaico
maduración de los frutos (Saijapongese et al., del tabaco (TMV) y tolerancia a la podredumbre
1989). La distribución de la humedad en la capa blanda ((Erwinia carotovora subs. carotovora)
arable de un suelo cubierto es más uniforme, (Katsumi, 1995).
comparada con un suelo descubierto. En
un suelo cubierto se promueve el desarrollo La fertilización se realizó de forma basal con
de raíces en la capa arable, estrato rico en 20 t·ha-1 de compost, 1,5 t·ha-1 de dolomita y 6,75
nutrientes y donde abundan microorganismos g·planta-1 de Bokashi (mezcla descompuesta
beneficiosos (Lippert y Takatori, 1964). y fermentada de compost, cascarilla de arroz
molida, harina de pescado y agua). Se hizo una
La cobertura orgánica, con residuos de plantas segunda aplicación de Bokashi, 18 g·hilera-1, y
como paja y hierbas, mejora los rendimientos de cascarilla de arroz molida (4 kg por parcela)
en tomates y además incorpora materia en el tratamiento de salvado y paja (T1), a los
orgánica al suelo, lo que mejora la calidad del 50 días de transplantado en el campo.
mismo (Wilson, 1979). Los altos rendimientos
bajo cobertura se deben al incremento en el En el transcurso del experimento hubo una
número de racimos, flores, frutos por planta y infestación con moscas blancas ((Bemisia tabaci)
rendimientos precoces (Gómez et al., 1997). y trips (Thrips palmi) en los estados tempranos
Este trabajo tuvo por objetivo evaluar el efecto del desarrollo del cultivo, pero posterior a la
de diferentes tipos de cobertura del suelo formación del primer racimo. Estas plagas se
sobre el rendimiento y calidad del tomate de controlaron con vinagre de madera (2 mL·L-1
ramillete. de agua), leche entera diluida al 50% y extracto
líquido de ají picante (3,4 mL·L-1 de agua).
Materiales y métodos
La temperatura del aire y precipitaciones se
Cultivo registraron en el lugar de ensayo (Tsukuba
Meteorological Centre, febrero-octubre, 2005).
El experimento se realizó en condiciones
de campo en el Centro Internacional de Tratamientos
Entrenamientos de Tsukuba, Tsukuba, Japón,
entre febrero y septiembre de 2005. Se usó Se evaluaron los siguientes materiales vegetales
tomate cv. Sweet Chelsea (Sakata Seeds. Co. como cobertores del suelo: 1. Cobertura con
Ltd. 2000, Tokio, Japón), híbrido F1 de tomate de salvado y paja de arroz (T1, Salvado y paja).
tipo indeterminado. Se injertó sobre el híbrido 2. Cobertura con paja de arroz (T2, Paja) y
F1 ‘Magnet’ (Sakata Seeds. Co. Ltd.). Se usaron 3. Cobertura plástica consistente en un film de
dos tipos de injerto, el Super-With e injerto en polietileno, blanco por encima y negro por dentro
aguja (injerto pin) (Sakata Seed Co, Ltd., 2001- (T3, Control de plástico). La cobertura con paja
2002). El primero consistió en cortar el tallo de de arroz y la cobertura plástica se aplicaron
la plántula sobre las hojas cotiledonales en un nueve días antes de transplante (18 de abril).
ángulo de 25 a 30o, cortar el material a injertar
en el mismo ángulo y con una presilla pegar Evaluación
ambos cortes hasta conseguir su cicatrización.
El injerto de aguja consistió en cortar el porta El efecto de cada tratamiento se evaluó en 108
injerto en ángulo recto e introducir la aguja plantas en total, por medio de los siguientes
dentro del tallo en el material a injertar (Takii parámetros: 1. Altura de la planta a los 40 días
Seed Co. Ltd., 2003, Kyoto, Japón). después de trasplantado. 2. Número de racimos,
clasificados estructuralmente en racimos con
El híbrido ‘Sweet Chelsea’ tiene alta botones, con flores, con flores y frutos y con
tolerancia a craqueo y rajadura y mantiene solamente frutos. 3. Tamaño de los frutos en
 VOL 34 N˚3 SEPTIEMBRE - DICIEMBRE 2007 227

el primer racimo, clasificados de acuerdo con cm. El área total usada en el ensayo fue 97,2
estándares de 22,5 y 26,5 cm de diámetro. 4. Se m2. Los tratamientos se distribuyeron conforme
cosechó dos veces por semana, desde el 13 de con un diseño de bloques completos al azar, con
junio hasta el 26 de septiembre. Se determinó tres repeticiones. Se realizó análisis de varianza
el peso de los frutos comercializables y no y los promedios se separaron por la prueba de
comercializables, debido a la presencia de comparación múltiple de Bonferroni.
daños o malformaciones.
Resultados y discusión
Diseño y análisis estadísticos
Altura de la planta
Las parcelas experimentales fueron de 3,6 x 1,2
m (4,32 m2), compuestas por dos hileras de seis Las plantas del tratamiento T1, con salvado
plantas cada una con 36 plantas por tratamiento. y paja, fueron ligeramente más altas (96,75
La distancia entre plantas y entre hileras fue 60 cm), seguido del tratamiento T3 (plástico) con

A B frutos flores + frutos

6 flores botones
100
Altura de la planta, cm

5
80 Racimos, no.
4
60
3
40
2

20 1

0 0
Salvado Paja Plástico Salvado Paja Plástico

8 C > 26.5 mm 22.5 - 26.5 mm <22.5 mm

6
Frutos, no.

0
Salvado Paja Plástico

Figura 1. Comportamiento de diferentes parámetros en plantas de tomate de ramillete (tomate cherry) (Lycopersicon
esculentum var. cerasiforme) cv. Sweet Chelsea injertadas sobre tomate cv. Magnet, determinado 40 días después de la
plantación. Diferencias no significativas a p < 0,05. Barras verticales indican error estándar. A. Altura de la planta.
B. Número de racimos por planta. C. Número y tamaño de frutos. Salvado, cobertura con salvado y paja de arroz. Paja,
cobertura con paja de arroz. Plástico, cobertura plástica consistente en un film de polietileno, blanco por encima y negro
por dentro (tratamiento control).
Figure 1. Behavior of different parameters in cv. Sweet Chelsea cherry tomato plants (Lycopersicon esculentum var.
cerasiforme)
e grafted onto cv. Magnet tomato plants, determined 40 days after planting. Differences not significant at p <
0.05. Vertical bars indicate standard error. A. Plant height. B. Number of clusters per plant. C. Number and size of fruit.
Bran, rice straw and bran mulch. Straw, rice straw mulch. Plastic, plastic covering consisting of a polyethylene film, white
on top and black underneath (treatment control).
228 CIENCIA E INVESTIGACION AGRARIA

89,92 cm y el tratamiento T2 (paja) con 87,97 grandes en el tratamiento T1 (salvado y paja)

cm (Figura 1A). Sin embargo, los resultados del que los otros tratamientos (Figura 1C).
análisis estadístico no mostraron diferencias
significativas entre tratamientos (p = 0,24). Rendimiento

Racimos Se efectuaron 27 cosechas en total, dos veces

por semana entre el 13 de junio y el 26 de
En el número de racimos clasificados según su septiembre, con una duración de 106 días. El
estado, el tratamiento T1 con salvado y paja fue peso promedio de frutos normales y dañados
ligeramente superior con 5,47 racimos totales, se presenta en la Figura 5. Hubo un efecto
seguido de los tratamientos T3 (plástico) y T2 estadísticamente significativo (p = 0,038) de los
(paja), con 5,14 y 4,89 racimos respectivamente. tratamientos de cobertura sobre el peso total
Sin embargo, el análisis de varianza no fue (frutos normales + dañados), siendo también
significativo (Figura 1B). Resultados similares significativos (p = 0,046) el efecto cobertura
reportaron Vandenberge y Tiessen (1973), sobre en el peso de frutos normales.
indicando el efecto positivo que ejercen las
coberturas con polietileno y papel sobre el El tratamiento T1 con salvado de arroz fue
crecimiento y floración del tomate. significativamente superior a los otros dos tra-
tamientos de cobertura estudiados (Figura 2).
Tamaño de los frutos El rendimiento de frutos normales en el trata-
miento T1 fue de 3,35 kg·planta-1. Los rendimien-
La medida del tamaño de los frutos del híbrido tos en los tratamientos con paja de arroz y cober-
Sweet Chelsea fue ligeramente mayor que la tura plástica fueron similares con alrededor de
moneda de 500 yenes (26,5 mm), empleada como 2,6 kg·planta-1. Los frutos dañados fueron obser-
referencia. No hubo diferencias significativas vados fundamentalmente después de las lluvias y
entre los tratamientos para el total de frutos el principal síntoma fue craqueo y partiduras.
cosechados (p = 0,81); pero éstos, fueron más

b Frutos dañados
5 Frutos normales
Rendimiento, kg·planta-1

4 a
a

0
Salvado Paja Plástico

Figura 2. Efecto de la cobertura con salvado de arroz (salvado), paja de arroz (paja) y polietileno blanco y negro (plástico)
sobe el rendimiento de los frutos de tomate de ramillete (tomate cherry) (Lycopersicon esculentum var. cerasiforme) cv.
Sweet Chelsea injertados sobre Magnet. Letras diferentes indican diferencias estadísticamente significativas según la
prueba de comparación múltiple de Bonferoni (p = 0,05). Barras = desviación estándar.
Figure 2. Effect of mulching with rice bran (bran), rice straw (straw), and white and black polyethylene (plastic) on
the yield of fruit in cv. Sweet Chelsea cherry tomatoes (Lycopersicon esculentum var. cerasiforme) e grafted on Magnet.
Different letters indicate statistically significant differences according to Bonferoni’s multiple comparison test (p = 0.05).
Bars = standard deviation.
 VOL 34 N˚3 SEPTIEMBRE - DICIEMBRE 2007 229

Número de frutos de Kanto, localizado en el centro de Japón se

preparó un área de campo para cultivar tomate
En el número total de frutos normales y dañados de ramillete (tomate cherry) y (Lycopersicon
por planta durante el tiempo de cosecha, no hubo esculentum var. cerasiforme) con tres tipos de
diferencias estadísticamente significativas entre cobertura: 1. Paja de arroz con salvado de arroz,
los tratamientos de cobertura en estudio. La 2. Paja de arroz solamente y 3. Cobertura con
cantidad de frutos normales en el tratamiento T1 polietileno. La cosecha de los frutos se realizó
(salvado paja) fue levemente mayor en cantidad desde junio hasta finales de septiembre. Hubo
de frutos (132 frutos totales por planta) que los diferencias significativas entre los tratamientos,
obtenidos en los tratamientos (108 y 116 frutos, en el rendimiento total de los frutos (p =
respectivamente). También el número de frutos 0,0379) y el de frutos normales (p = 0,0458).
dañados fue mayor en el tratamiento con salvado Las mayores producciones de frutos totales (3,4
(T1)(50 frutos). Esto coincidió con lo planteado kg·planta-1) se obtuvieron con el tratamiento de
por Siborlabane (2000) donde apuntó que el paja de arroz con salvado de arroz, seguido por
rendimiento y la calidad de los frutos de tomate los otros dos tratamientos con alrededor de 2,5
para el mercado fresco varían en función del tipo kg·planta-1. Los otros factores como el total de
de cobertera que se use en la plantación. frutos y el peso de frutos dañados no fueron
significativamente diferentes. Después de 40
Se observó que los frutos más grandes fueron días de sembrado en el campo, se midió la
más susceptibles al craqueo que los pequeños. altura de la planta y otros caracteres vegetativos
Esto concuerda con Snapp (2004) quien plantea sin obtener diferencias estadísticamente
que el craqueo de los frutos aparece usualmente significativas entre los tratamientos del suelo
en frutos maduros de gran tamaño. Según estudiados. Los resultados indican que la
Snapp (2004), la máxima calidad de los frutos aplicación de salvado de arroz en la superficie
de tomate para el mercado fresco depende de del campo previamente cubierto con paja de
las condiciones de producción de este cultivo. arroz, para las plantas de tomate, contribuyen al
incremento de los rendimientos. La aplicación
Según Gómez et al. (1997), el empleo de de salvado de arroz, también redujo el manejo
coberturas del suelo ((mulch in situ) constituye para el control de malezas.
un método promisorio para la producción
temprana de tomate a campo abierto en Palabras claves: Cobertura orgánica,
Cuba. El establecimiento del mismo favorece Lycopersicon esculentum, mulch de paja de
el control de malezas, disminuye los daños arroz, mulch de salvado de arroz, tomate
por bacteriosis en los frutos ((Xanthomonas cherry, tomate enano.
campestris pv. vesicatoria) e incrementa el
rendimiento comercial hasta 33 t·ha-1. Literatura citada

Los resultados obtenidos en este trabajo indican FAO. 2005. FAOSTAT. [Link]
(Consultado el 14 de enero, 2007).
que el uso de cascarilla de arroz (salvado) tuvo
Gómez, O., A. Casanova, L. Martínez, J.C. Hernández,
un efecto significativo sobre los rendimientos G. de Armas, R. Santos y A. Hernández. 1997.
de tomate de ramillete cv. Sweet Chelsea. Principales resultados científicos en Hortalizas
Es importante destacar que a excepción del y papa. Cultivo del tomate. Memorias 25
rendimiento, este tratamiento fue similar al uso Aniversario del Instituto de Investigaciones
de polietileno como cobertura, tratamiento del Hortícolas “Liliana Dimitrova”. Cuba. p. 11-19.
suelo comúnmente empleado. No obstante, a Gómez, O., A. Casanova, H. Laterrot y G. Anaïs.
diferencia del uso de polietileno las coberturas 2000. Mejora genética y manejo del cultivo
orgánicas tiene como ventaja el aporte de del tomate para la producción en el Caribe.
Instituto de Investigaciones Hortícolas “Liliana
materia orgánica al suelo.
Dimitrova”, La Habana. 159 p.
Hanson, P.M., and J. Chen. 1996. AVRDC´s
Resumen Tomato Improvement Project. AVRDC (Asian
Vegetable Research Development Centre)
En la primavera al otoño del año 2005, en el norte Newsletter 1: 5-8.
230 CIENCIA E INVESTIGACION AGRARIA

Katsumi, O. 1995. Diseases of tropical vegetable tomatoes at AVRDC. Pages 349-357. In: T.D.
crops. MAFF. Association for International Griggs (ed.). Tomato and Pepper Production
Cooperation of Agriculture and Forestry. Japan. in the Tropic. Proceeding of the International
pp 2-17. Symposium on Integrated Management
Lippert, L.F., and F.H. Takotori. 1964. Soil moisture Practices. Asian Vegetable Research and
under bands of petroleum and polyethylene Development Centre, Shanhua, Tainan,
mulches. Journal of the American Society for Taiwan.
Horticultural Science 67:541-546. Siborlabane, Ch. 2000. Effect of Mulching on Yield
Lorenz, O.A., and D.N. Maynard. 1980. Knott’s and Quality on Fresh Market Tomato. Pages 1-
Handbook for Vegetable Growers Second ed. 5. In: Training Report 2000. Training Course
John Wiley and Sons. NY, USA. p. 390. in Vegetable Production and Research. ARC-
Opeña, R.T. 1985. Development of tomato and AVRDC. Nakhon Pathom, Thailand.
Chinese cabbage cultivars adapted to the hot Snapp, S. 2004. Maximizing fruit quality in fresh
and humid tropics. Acta Horticulturae 153:521- market tomatoes. Department of Horticulture,
536. Michigan State University, Minnesota Fruit and
Peralta, I.E., Spooner, D.M. 2007. History, origin Vegetable. IPM News 1 (14):sn.
and early cultivation of tomato (Solanaceae). Wilson, G.F. 1979. The effects of in situ mulch
In: Razdan, M. K. and Mattoo, A. K. editors. on tomato production. Pages 182-184. In: R.
Genetic Improvement of Solanaceous Crops, Cowell (ed.). Proceeding of the 1st International
Vol. 2. Enfield, USA: Science Publishers. p. 1-27. Symposium on Tropical Tomato. Asian
Saijapongese, A.Y., Y.C. Roam Ota, and C.L. Wu. Vegetable Research and Development Centre.
1989. Some aspects of cultural management in Shanhua, Tainan, Taiwan.
 Cien. Inv. Agr. 34(3): 231-236. 2006
[Link]

NOTA DE INVESTIGACION

Desinfección de cariopses y regeneración de plantas de

Spartina argentinensis
Mirian S. Bueno1, Susana R. Feldman 1,2 y Juan P. Ortiz3
1
Cátedra de Biología, Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Rosario, C.C. 14, s2125zaa
Zavalla, Argentina. 2Consejo de Investigaciones de la Universidad Nacional de Rosario (CIUNR). 3Cátedra
de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).

Abstract

M.S. Bueno, S.R. Feldman, and J.P. Ortiz. 2007. Cariopsis disinfection and plant
regeneration of Spartina argentinensis. Cien. Inv. Agr. 34(3): 231-236. A protocol for
disinfection and in vitro regeneration of Spartina argentinensis was developed. The lowest
percentage of contamination was obtained after treating caryopses with 90° ethanol for 60 s
and 20 min immersion in 2.5% sodium hypochlorite (NaOCl) plus 0.1% Tween 20. Murashige
and Skoog (MS) media was used for callus induction, supplemented with 0.5 mg·L-1 of 2,
4 dichlorophenoxy acetic (2,4-D) and 1 mg·L-1 of indole-3-acetic acid (IAA). The highest
proportion (20%) of shoot regeneration was achieved with MS media plus 0.25 mg·L-1 of
bencyl aminopurine (BAP), whereas 0.5 mg·L-1 naphtalenacetic acid (NAA) was used for root
induction. Plants were regenerated via organogenesis. To our knowledge, this is the first report
of a protocol for in vitro plant regeneration of S. argentinensis, and it is the initial stage required
for obtaining somaclonal variations.

Key words: In vitro regeneration, organogenesis, Spartina.

Introducción
Estudios previos (Larkin y Scowcroft, 1981)
El espartillo, Spartina argentinensis Parodi demostraron que durante las sucesivas mitosis
((Poaceae: Chloridaeae), es una de las especies que se producen en cultivo in vitro pueden
dominantes de las comunidades halófilas de ocurrir importantes modificaciones genéticas
distintas áreas de Argentina. Forma matas de en las células. Algunas se manifiestan como
altura variable, de 0,5 - 1,4 m de altura. Aunque mutaciones heredables, generando variaciones
produce abundantes panojas durante el verano, somaclonales. Por consiguiente, el cultivo
se reproduce principalmente en forma agámica de tejidos es una herramienta útil para el
por rizomas (Feldman, 2003). mejoramiento de especies vegetales y se
ha utilizado en especies forrajeras nativas
Los espartillares se utilizan para cría de ganado (Echenique et al., 2001; Kothari et al., 2005).
vacuno, a pesar del alto grado de lignificación
de sus hojas, lo que reduce la digestibilidad. La La elección del explante es fundamental
obtención de líneas de espartillo caracterizadas para el establecimiento de un cultivo in vitro
por un menor contenido de lignina es una de (Roca y Mroginsky, 1991). En gramíneas se
las alternativas para mejorar la digestibilidad ha regenerado plantas utilizando embriones
del forraje y al mismo tiempo mejorar la oferta inmaduros, inflorescencias inmaduras y
forrajera en las áreas dónde esta especie se cariopses maduros (Dutta Grupta et al., 1999;
encuentra presente. Echenique et al., 2001). Sin embargo, algunos
de estos explantes sólo se pueden obtener en
determinadas épocas del año. En el género
Recibido 13 junio 2007. Aceptado 05 septiembre 2007. Spartina, se ha logrado regenerar plantas a
1
Dirigir correspondencia a M. S. Bueno: mbueno@[Link] partir de cultivo in vitro de cariopses maduros
232 CIENCIA E INVESTIGACION AGRARIA

(Li et al., 1995, Li and Gallager, 1996; Wang et 25° C, con un fotoperíodo de 16 h (Cuadro 1).
al., 2003). Sin embargo, en S. argentinensis, la Los vástagos obtenidos se separaron y la
contaminación de sus cariopses por Alternaria regeneración de raíces se obtuvo en medio con
alternata, Fusarium graminearum y Bipolaris ácido naftalen acético (ANA) (Cuadro 1).
sorokiniana y otros hongos dificulta la
utilización de los mismos para iniciar los Las frecuencias de formación de callos y
cultivos. Algunos de estos hongos se han vástagos para los distintos medios ensayados, se
descrito como endógenos (Feldman et al., compararon mediante prueba de homogeneidad
2004). Este trabajo tuvo como objetivo estudiar con aplicación de Chi cuadrado (λ2) (SAS
diferentes tratamientos de desinfección de Institute, Cary, NC, EUA).
cariopses de espartillo (S. argentinensis) s y
evaluar su potencial de regeneración in vitro. Se realizaron estudios histológicos para
determinar la vía de regeneración de los
Materiales y métodos explantes. Las muestras se fijaron en FAA
(10% formol, 5% ácido acético, 50% etanol y
Se trabajó con cariopses maduros de S. 35% agua) y posteriormente se deshidrataron
argentinensis, sin pálea ni lemma, extraídos de en concentraciones ascendente de etanol (1
panojas cosechadas en un espartillar ubicado en h en cada una de las siguientes soluciones de
Pérez, provincia de Santa Fe, Argentina (32º 45’ etanol: 70°; 80°; 90°, 96° y 30 min en 100°).
S; 60º 35’ W). Se realizaron dos experimentos Previo a la inclusión en parafina, las muestras se
de desinfección de cariopses: 1. Inmersión clarificaron con xilol, realizando un paulatino
durante 20 min en hipoclorito de sodio NaOCl desplazamiento del etanol 100° por el xilol. Se
al 1,5 y 2,5% (v/v) (Cloro Argentina S.A., realizaron cortes con micrótomo tipo Minot (18-
5,5 g·L-1 de cloro) con o sin el agregado de 20 μm de espesor) y se colorearon con safranina
Tween 20 (0,1%). 2. Inmersión en NaOCl 2,5% (30 min) y fast-green (60 s), que tiñe de color
con Tween 20 (0,1%) durante 20 o 30 min a azul-verdoso las zonas celulósicas y de color
temperatura ambiente con o sin inmersión fucsia a las zonas lignificadas (Johansen, 1940,
en etanol 90° por 60 s. Se utilizaron cinco Dizeo de Strittmater, 1979). Los preparados
repeticiones por tratamiento, con 20 cariopses montados con bálsamo de Canadá, se observaron
por repetición. Luego de cada tratamiento, los y se fotografiaron con microscopio óptico.
cariopses se lavaron con abundante agua estéril
y se los sembró en placas de Petri con medio
Murashigue Skoog (MS 1962), sin hormonas, Cuadro 1. Composición de los medios de cultivo utilizados
suplementados con 30 g·L-1 de sacarosa, 7 g·L-1 para inducción de callos (M), inducción de vástagos (V) y
de agar, pH 5,8. Los cultivos se incubaron en enraizamiento (R) de Spartina argentinensis.
oscuridad a 23 ± 2°C durante 30 días. Table 1. Composition of the media used for callus
induction (M), shoot (V) and root (R) regeneration of
Spartina argentinensis.
La proporción de cariopses contaminados a los
7 días de la siembra in vitro se evaluó mediante Medios Reguladores de crecimiento1, mg·L-1
análisis de varianza (ANDEVA) y los promedios 2,4-D BAP ANA AIA
se separaron según Duncan (Statistica 5.0).
Previo a los análisis, los valores porcentuales Inducción de callos:
M1 0,5 0,05 1,00
se transformaron en arcoseno √x. M2 0,5 1,00
M3 0,5 0,05
Los cariopses libres de contaminación se
transfirieron a tubos de ensayo de 20 ml con Inducción de vástagos:
V1 0,25
diferentes medios para la inducción de callos V2 0,50
(Cuadro 1) y se mantuvieron en oscuridad a
25° C, durante 30 días. Los callos producidos Enraizamiento:
se repicaron a medios para la inducción de R 0,50
vástagos con diferentes concentraciones de 1
BAP, 6-bencil amino purina; ANA, ácido naftalén acético; AIA,
bencil amino purina (BAP) y se incubaron a ácido indol acético; 2,4-D, ácido dicloro fenoxi acético.
 VOL 34 N˚3 SEPTIEMBRE - DICIEMBRE 2007 233

Resultados y discusión La presencia de callos se observó a los 7 días

de incubación de los explantes en los medios
La desinfección de los explantes con NaOCl de inducción. En la Figura 3 se observa la
más 0.1% de Tween 20 como humectante evolución porcentual de producción de callos
disminuyó significativamente (p = 0,001) la durante los primeros cuarenta días de cultivo.
contaminación a los 7 días de incubación. No La obtención de callos fue máxima a los 30
hubo respuesta diferencial a las concentraciones días de iniciado el cultivo, estabilizándose
de NaOCl, posiblemente debido al marcado posteriormente. No se detectaron diferencias
efecto del humectante que permitió una eficiente estadísticas significativas en las frecuencias
desinfección aún con la menor concentración de inducción de callos entre los medios M1 y
de NaOCl (Figura 1). M2 (68,8 y 62,5% respectivamente), respuesta
coincidente con los resultados obtenidos
La contaminación disminuyó significativamente previamente para S. alterniflora (Wang et al.,
(p < 0,05) en función del tiempo de inmersión 2003). La inducción de callos sólo alcanzó a
en NaOCl y con el tratamiento con etanol, sin 37,5% en el medio 3, que incluyó 0,5 mg·L-1
manifestarse interacción entre las variables de 2,4-D y 0,05 mg·L-1 de BAP, debido a la
analizadas (Figura 2). A diferencia de reportes ausencia de ANA o AIA.
previos, los mejores resultados se obtuvieron
utilizando una mayor concentración de etanol Los estudios histológicos mostraron que
90° (Li y Gallagher, 1996). Posiblemente esto la regeneración de vástagos ocurrió vía
se debió a que los cariopses de S. argentinensis organogénesis, donde se observa la formación
presentan mayor contaminación fúngica de dos vástagos dentro de la masa del callo, sin
(Feldman et al., 2004). zonas embriogénicas ni proembriones (Figura 5).

100 c

80
Contaminación, %

60
a
a

40

20

0
A B C D

Tratamientos

Figura 1. Efecto de la concentración de hipoclorito de sodio y de Tween 20 empleado como tensoactivo en la desinfección
superficial de cariopses de Spartina argentinensis. A. Hipoclorito de sodio 1,5% mas Tween 20. B. Hipoclorito de sodio
1,5% sin Tween 20. C. Hipoclorito de sodio 2,5% con Tween 20. D. Hipoclorito de sodio 2,5% sin Tween 20. (n=5).
Promedios seguidos por igual letra no son estadísticamente diferentes entre si según Duncan (p < 0,05).
Figure 1. Effect of sodium hypochlorite concentrations and Tween 20 as humectant on superficial disinfection of caryopses
of Spartina argentinensis. A. 1.5% sodium hypochlorite plus Tween 20. B. 1.5% sodium hypochlorite. C. 2.5% sodium
hypochlorite plus Tween 20. D. 2.5% sodium hypochlorite. Means followed by the same letter are not statistically different
according to Duncan (p < 0.05).
234 CIENCIA E INVESTIGACION AGRARIA

70 a

Contaminación, %
60 a a
50
40 b
30
20
10
0
E F G H

Tratamientos

Figura 2. Efecto de los diferentes tratamientos sobre el porcentaje de contaminación de cariopses de Spartina argentinensis.
E. 1 min en etanol 90° y 20 min de inmersión en hipoclorito de sodio 2,5% con Tween 20. F. Igual a E sin etanol. G. 1 min en
etanol 90° y 30 min de inmersión en hipoclorito de sodio 2.5% con Tween 20. H. ídem G, sin etanol. Promedios seguidos por
igual letra no son estadísticamente diferentes entre si según Duncan (p < 0,05).
Figure 2. Effect of different treatments on surface contamination of caryopses of Spartina argentinensis. E. Ethanol 90º
for 60 s and 20 min in 2.5% sodium hypochlorite plus Tween 20. F. Similar to E, but without ethanol. G. Ethanol 90º for
60 s and 30 min in 2.5% sodium hypochlorite plus Tween 20. H. Similar to G, but without ethanol. Means followed by the
same letter are not statistically different according to Duncan (p < 0.05).

La misma vía de regeneración de vástagos fue 80

previamente informada para S. alterniflora, S. M1
cynosuroides y S. patens (Wang et al., 2003; M2
60 M3
Li et al., 1995, 1996). En otras especies, ej.
Eragrostis curvula, y utilizando el mismo
Callos, %

explante, la regeneración de vástagos ocurrió 40

vía embriogénica (Echenique et al., 2001) y en
Bouteloua gracilis, la regeneración de vástagos 20
se produjo tanto por vía organogénica como
embriogénica (Agudo-Santacruz et al., 2000).
0
0 10 20 30 40
De las concentraciones hormonales utilizadas
Tiempo, días
para la regeneración de vástagos, el medio V2 con
0,5 mg.L-1 de BAP favoreció la mayor respuesta
de los explantes, puesto que 20% de los callos
regeneraron vástagos. En el medio V1, con 0,25 Figura 3. Efecto de distintos medios de cultivo sobre
el porcentaje de producción de callos de Spartina
mg·L-1 de BAP, los porcentajes de respuestas
argentinensis. M1 = 0,5 mg·L-1 de 2,4-D; 0,05 mg·L-1
fueron inferiores a 12%. Si bien el porcentaje de de BAP y 1 mg·L-1 de ANA. M2 = 0,5 mg·L-1 de 2,4-D;
callos que regeneraron vástagos fue bajo, cada 1 mg·L-1 de AIA. M3 = 0,5 mg·L-1 de 2,4-D y 0,05 mg·L-1
callo diferenció múltiples vástagos, aumentando de BAP. BAP = 6-bencil amino purina; ANA = ácido naftalén
acético; AIA = ácido indol acético; 2,4-D = ácido dicloro
la eficiencia de regeneración.
fenoxi acético.
Figure 3. Effect of different media on the percentage
La regeneración de raíces se indujo favorable- of callus production of Spatina argentinensis. M1 = 0.5
mente con 0,50 mg·L-1 de ANA. Las plantas mg·L -1 2,4-D, 0.05 mg·L -1 BA, and 1 mg·L -1 NAA. M2 =
0.5 mg·L -1 and 2,4-D, 1 mg·L -1 IAA. M3 = 0.5 mg·L -1 2,4-
regeneradas se separaron y se transfirieron a
D, 0.05 mg·L -1 BA. BA = 6-benzyl-adenine; NAA = α-
una mezcla de suelo (30% vermiculita-70% naphtaleneacetic acid; IAA = indole-3-acetic acid; 2,4-D
tierra) en invernadero. = 2,4-dichlorophenoxyacetic acid.
 VOL 34 N˚3 SEPTIEMBRE - DICIEMBRE 2007 235

presentan baja toxicidad, a diferencia de otros

25
Regeneración, % que utilizan cloruro de mercurio (Wang et al.,
20
2003).

15 Este trabajo es la primera mención de

regeneración de plantas de S. argentinensis
10
utilizando cultivo in vitro de cariopses maduros
5 V1
y constituye la etapa inicial para la obtención de
V2 variantes somaclonales. De esta forma se espera
0 poder obtener líneas mejoradas en busca de
0 7 14 21 28
cultivares con una mejor aptitud ganadera. Del
Tiempo, días
mismo modo, estos protocolos de regeneración
pueden aplicarse a otras especies de gramíneas,
Figura 4. Variación del percentage de regeneración de comunes en pastizales naturales.
vástagos de Spartina argentinensis. V1, 0,25 mg· L-1 BAP
(6-bencil amino purina) y V2, 0,5 mg· L-1 BAP. Resumen
Figure 4. Percentage of Spartina argentinensis shoot
regeneration using medium V, 0.25 mg· L -1 BP (6-benzyl-
adenine) and V2, 0.5 mg· L -1 BP. Se desarrolló un protocolo de desinfección y
regeneración in vitro de Spartina argentinensis.
El menor porcentaje de contaminación se
obtuvo tratando los cariopses por 60 s en etanol
La metodología de desinfección de cariopses 90° y 20 min de inmersión en hipoclorito de
estudiada se podría extender a otras especies que sodio al 2,5% con Tween 20. La inducción de
presenten altos porcentajes de contaminación callos se realizó en medio Murashige y Skoog
fúngica, debido a que permite utilizar el (MS) suplementado con 0,5 mg·L-1 de ácido
tratamiento combinado de NaOCl y etanol, que diclorofenoxi acético (2,4-D) y 1 mg·L-1 de

b
c

Figura 5. Corte de callo de Spartina argentinensis de 31 días obtenido de cariopses maduros en medio V1, 0,25
mg·L-1 BAP. Las flechas señalan la formación de vástagos, rudimento de hoja (a), cordón precambial (b) y callo (c).
Barra = 10 μ.
Figure 5. Cross section of a 31 day old callus of Spartina argentinensis, using caryopses as explant, on V1 0.25 mg·L -
1
BP ( 6-benzyl-adenine) as regeneration media. Arrows show shoot regeneration. a, leaf rudiment; b, precambial
tissue, and c, callus. Bar = 10 μ.
236 CIENCIA E INVESTIGACION AGRARIA

ácido indol acético (AIA). La mayor (20%) Naturales, Universidad Nacional de Córdoba,
regeneración de vástagos se logró con igual Córdoba, Argentina. 182 pp.
base salina y 0,25 mg·L-1 de bencilamino Feldman, S. R.; N. S. Pioli y J. P. Lewis. 2004.
purina (BAP). Se utilizó 0,025 mg·L-1 de ácido Caracterización de los propágulos de origen
sexual de Spartina argentinensis Parodi.
naftalen acético para la regeneración de raíces.
Revista de Investigación, Facultad de Ciencias
Las plantas se regeneraron vía organogénesis. Agrarias, Universidad Nacional de Rosario
Este protocolo es la primera mención de (Argentina) 4:69-73.
regeneración de plantas de S. argentinensis Johansen, D.A. 1940. Plant Microtechnique, Mac
utilizando cultivo in vitro y constituye la etapa Graw Hill. NY, USA. 523 pp.
inicial para obtener variantes somaclonales. La KotharI, S.L., K. Satish, R.K. Vishnoi, A. Kothari,
metodología de desinfección se puede hacer and N.W. Kazuo. 2005. Appications of
extensiva a otras especies. biotecnology for improvement of millet crops:
Review of progress and future prospects. Plant
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Palabras clave: Organogenesis, regeneracion
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Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y