CROMATOGRAFÍA EN FASE

GASEOSA

Profesor Pedro Villanueva G.

 Cromatografía: Definición

• La cromatografía gaseosa es una técnica

analítica para la separación y análisis de
una mezcla de sustancias en mezcla.
 Cromatografía. Definición
• es un método físico de separación en el cual los
componentes a separar, se distribuyen entre
dos fases, una sólida o líquida dispuesta sobre
un soporte, de gran área superficial conocida
como fase estacionaria y la otra es un fluido que
puede ser un gas, un líquido o un fluido
supercrítico, que se utiliza como portador de la
mezcla y que pasa a través o a lo largo de la
fase estacionaria, esta fase se conoce como
fase móvil
 Clasificación

Métodos Cromatográficos

Cromatografía de gases Cromatografía de líquidos

Fase móvil es gas Fase móvil es un líquido

Gas-Líquido Gas-Sólido Líquido-Líquido Líquido-Sólido

CGL CGS CLL CLS

Intercambio iónico Exclusión

CII CE

Fase Enlazada
CFE
Permeación en
Par-iónico Gel
CGL CPG
 CROMATOGRAFÍA, ES EL NOMBRE
ASIGNADO A MUCHAS TÉCNICAS DE
SEPARACIÓN

• Mikhail Tswett 1900

Pigmantos
Xantofilas
Clorofilas

Chroma – griego – Color

Graphein - escritura
 INTRODUCCIÓN
• Todas las formas de cromatografía se basan
en una soluto que se pone en contacto con
dos fases, una que se mueve en relación a la
otra
 Interacción
En cromatografía suceden dos fenómeno
importantes y que son los causantes de la
separación:
Adsorción

Absorción
 Fenómeno de adsorción

En la cromatografía de adsorción, las

moléculas del soluto se enlazan
directamente a los sitios activos de la
superficie de la fase estacionaria.
 Dependencia del fenómeno de
adsorción

• naturaleza de la sustancia adsorbida

• de la temperatura
• de la naturaleza y de las características
del adsorbente
• de su concentración del adsorbente
 Cromatografía absorción o
partición

Se utiliza una película delgada de fase

estacionaria líquida recubriendo o
enlazada a un sólido idealmente inactivo,
la retención del soluto se debe a la
solución del soluto en la fase estacionaria
líquida.
 Regla

“Lo parecido se disuelve a lo parecido”

Una fase estacionaria polar retendría los

solutos polares y dejaría pasar
fácilmente
a los no polares.
Equipo cromatográfico
Contenedor y medidor
 Características del gas acarreador

• Compatibilidad con el detector

• Baja viscosidad
• Inerte
• Seguro
• Alta pureza
• Económico
• Abundante
• Capaz de minimizar la difusión gaseosa
 Gases mas usados

• H2, máxima eficiencia con columnas

capilares
• He, en sistemas acoplados
• N2, máxima eficiencia con columnas
empacadas
 Propósitos del gas de arrastre

• Transportar los componentes de la

muestra

• Crear una matriz adecuada para el

detector
Material de columnas cromatográficas
Acoplo para guarda columnas
Conexión guarda columna a columna
analítica
Introducción de muestra
AFINIDAD
 TEORIA DE LA SEPARACIÓN
CROMATOGRÁFICA

• TODAS LAS SEPARACIONES CROMATOGRÁFICAS ESTAN

GOVERNADAS POR EL COEFICIENTE DE PARTICIÓN KD,
DEL SOLUTO ENTRE LAS FASES ESTACIONARIA Y MÓVIL

SM SE KD Coeficiente de partición
[S]E Concentración del soluto
S E
en fase estacionaria

KD [S]M Concentración del soluto

en fase móvil
S M
 PICOS DE ELUCIÓN GAUSSIANA

• Un pico de elución ideal, en un cromatograma, tiene el

mismo aspecto que la función representativa de la ley de
distribución normal de errores aleatorios o curva de
Gauss
CARACTERÍSTICAS DE UNA SEÑAL
GAUSIANA

δ = 2.35 σ

ω=4σ

 = 1.7 δ
La migración diferencial de cada componente
a través de la columna, depende de

• Composición de la fase móvil

• Composición de la fase estacionaria
• Temperatura de la columna
• Presión dentro de la columna
 Migración diferencial

Variación de la velocidad de movimiento

de las diferentes moléculas a través de la
columna, como resultado del equilibrio de
distribución de las diferentes moléculas
entre la fase estacionaria y la fase móvil
Migración diferencial
Migración diferencial
 Los fenómenos de difusión, se deben

• Difusión de Eddy
• Transferencia de masa de la fase móvil
• Transferencia de masa por estancado o
parasitado de la fase móvil
• Transferencia de masa por la fase estacionaria
• Difusión longitudinal, las moléculas del soluto de
mueven al azar, es decir en todas direcciones
Difusión de Eddy
Transferencia de masa por la fase
móvil
 Transferencia de masa por
estancamiento de la fase móvil
Transferencia de masa por la fase
estacionaria
SEÑAL CROMATOGRÁFICA IDEAL
PARÁMETROS DE RETENCIÓN
VOLUMEN DE FASE ESTACIONARIA

• Este volumen no aparece en el

cromatograma y la forma de calcularlo es:
restando al volumen total de la columna
vacía, el volumen de la fase móvil
 VOLUMEN DE LA FASE MÓVIL O
VOLUMEN MUERTO

• El volumen de la fase móvil en la columna o

volumen muerto, corresponde al volumen
interticial accesible y se calcula en un
cromatograma al introducir un soluto que no sea
retenido por la fase estacionaria.

Vm = Tm * F
F es el flujo
 VOLUMEN DE RETENCIÓN
• El volumen de retención o de elución Vr, de
cada soluto representa el volumen de la fase
móvil necesario para que este migre de un
extremo de la columna al otro.

Vr = Tr * F
F es el flujo
 VOLUMEN DE RETENCIÓN
• El volumen de retención de un soluto, se
puede expresar como

Vr = Vm (1 + K ) '

Vr = Vm + K * Vs
 TIEMPO MUERTO

• Si un soluto en la fase móvil, no interactúa en absoluto

con la fase estacionaria, se moverá con la misma
velocidad que la fase móvil, entonces su tiempo se
denominará, tiempo muerto.
 TIEMPO DE RETENCIÓN
• Tiempo de retención, es el tiempo que
tarda el soluto en eluirse de una columna
 VELOCIDAD LINEAL

• La velocidad lineal promedio de movimiento

de la fase móvil, se puede expresar como

L L = Longitud de la columna
μ= en cm
Tm Tm = tiempo muerto
 VELOCIDAD LINEAL

• La velocidad lineal promedio de

migración del soluto, está dada por

L L = Longitud de la columna

υ= en cm

Tr Tr = tiempo retención
 VELOCIDAD DE MIGRACIÓN

• La velocidad de migración del soluto para

determinado pico cromatográfico, se
expresa como:
 FACTOR DE CAPACIDAD

• Cuando se introduce un soluto en la

columna, la masa total mt se reparte entre
la fase móvil y la fase estacionaria de
manera que durante su migración en la
columna, estas cantidades permanecen
constantes
 FACTOR DE CAPACIDAD
• El factor de capacidad, es un parámetro para
comparar las velocidades relativas de migración
del soluto por la columna k´

Tr − Tm K´ es el factor de capacidad
k´ = Tm es el tiempo muerto
Tm
Si k´tiende a 1, la elusión será tan rápida que será difícil determinar con exactitud los
tiempos de retención.
Si k´es muy grande, los tiempos de retención serán excesivos.
FACTOR RETENCIÓN o DE
CAPACIDAD

'
Tr1
K 1' =
Tm
Tr'1
K' =
Tm

'
T r2
K '2 =
Tm
 FACTOR DE SEPARACIÓN O
SELECTIVIDAD
• El factor de separación o factor de selectividad,
permiten precisar las posiciones relativas de
α
dos picos adyacentes, en un cromatograma y
se definen como

Tr 2 − T m
α=
Tr 1 − Tm
FACTOR DE SEPARACIÓN O
SELECTIVIDAD

'
T
α=
r2
'
T
r1
Tr' 2
=
Tr' 1

'
K
α= 2
'
K 1
 FACTOR DE RESOLUCIÓN

• El factor de resolución R, define

numéricamente el qué una separación
entre dos picos vecinos, sea apropiada
y se define

 Δ Tr 
R=2 
 w1 + w 2 
FACTOR DE RESOLUCIÓN

 Δ Tr 
R =2  
 1
w + w 2

1 α −1 K '2
R= N2 * *
4 α 1 + K '2

N K '2 − K1'
R= * '
2 K 2 + K1' + 2
FACTOR DE RESOLUCIÓN

Existe una sobreposición de

los picos del orden del 65 %,
el valor de la resolución es

R = 0.75
FACTOR DE RESOLUCIÓN

Existe una sobreposición

de los picos del orden del
27%, el valor de la
resolución es

R = 1.0
FACTOR DE RESOLUCIÓN

Existe una sobreposición

de los picos del orden del
2%, el valor de la
resolución es

R =1.5
 SIMETRÍA DEL PICO GAUSSIANO

• La simetría observada en un pico, se

traduce por dos parámetros denominados

»Factor de asimetría Fa
»Factor de cola Fc
SIMETRÍA DEL PICO GAUSSIANO

b
Fa =
a

a+b
Fc =
2a
EFICIENCIA DE LA COLUMNA
CROMATOGRÁFICA

En función de:

Número de platos teóricos N

Altura H o altura equivalente a un

plato teórico HEPT
DISPERSIÓN DE UN SOLUTO EN UNA
COLUMNA
 EFICACIA DE UNA COLUMNA

Número de platos teóricos

• Siendo la cromatografía un proceso

continuo, es posible imaginar que la
columna se divide en n segmentos o
platos teóricos, en cada uno de los
cuales se establece un equilibrio
NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS

 Vr  2  Tr  2
N =  =  
σ σ 

 Tr  2
N =16  
W

 
 Tr  2
N = 5.54
 W1 
 2 
ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO
TEÓRICO

L
H=
N

2
L*W
H= 2
16 * Tr

L es la longitud de la columna
ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO
TEÓRICO REDUCIDO

L
h =
N *d m

H
h =
dm

dm diámetro promedio de las partículas

 ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO
TEÓRICO REDUCIDO
• Ecuación de Van Deemeter

B
H = A + + C*u
u

u , es la velocidad lineal promedio

A , es el término de difusión turbulenta
B, es el término de difusión longitudinal
C, es el término de transferencia de masa
NÚMERO DE PLATOS TEÓRICOS

 Tr  2
41.7  
N=  W0.1 
A
* 1.25
B
ISOTERMA LINEAL

Fa = 1

Fc = 1
ISOTERMA CONVEXA

Fa  1

Fc  1
ISOTERMA CÓNCAVA

Fa  1

Fc  1
Medidores de flujo
Inyectores con y sin división

Split splitless
Microscopía electrónica, columna de acero
empacada col silica gel
Microscopía electrónica, placa de vidrio con
silica gel
Columnas cromatográficas
 Columna capilar
• Diámetro interno mucho menor
• Longitud, significativamente mayor
• Carecen de material de empaque
• Tienen menor capacidad de carga

Estas características, permiten que los componentes residan mayor tiempo en

la columna, lográndose picos de buena forma y bien definidos.
 Columnas capilares

• Tienen mayor sensibilidad

Al ser los picos mas estrechos, la sensibilidad
mejora
Ambos picos tienen un área de 5000
unidades arbitrarias, pero como el pico en
la capilar tiene mayor altura, lo que se
obtiene es una mayor relación señal/ruido

Empacada Capilar
 Columnas
Disponibles en dos presentaciones

• Recubierta Sílice fundida con un

recubrimiento en fase
• Enlazadas Fase química enlazada
mediante uniones
silano

Ambos tipos se hallan recubiertas por fuera con una capa de poliimida,
para conferirles mayor flexibilidad y otras ventajas
Factores que afectan la separación

• Longitud de la columna
• Diámetro interno de la columna
• Espesor de la película de la fase estacionaria
• Tipo de gas acarreador
• Velocidad del gas acarreador
• Temperatura de la columna
Columnas capilares-Empacadas

Longitud (m) 0.5 – 5 5 – 100

D.I. (mm) 2–4 0.1 – 0.53
Flujo (mL/mim) 10 – 60 0.5 – 15
Presión cabeza de
columna psi 10 – 40 3 – 40
Número de platos 4000 250,000
Capacidad 10μg/pico 100 ng/pico
Espesor de la película μm 1 – 10 0.1 - 8
 Gas acarreador
• Nitrógeno Logra la menor altura equivalente a
un plato teórico, a costa de la
velocidad.
• Helio Mayor velocidad que el nitrógeno
con pequeños incrementos en la
altura equivalente a un plato teórico
• Hidrógeno el mejor, tiene mayor velocidad
menor altura equivalente a un plato
teórico, a costa de la velocidad.
Influencia del flujo sobre el gas
acarreador

Todos determinados con la

misma columna y muestra
Influencia del flujo sobre el gas
acarreador
Resolución por efecto del gas
acarreador
 Temperatura de la columna
Un incremento de la temperatura de la columna,
reduce los tiempos de retención, más no todos los
analitos son afectados con la misma intensidad

L 1
Tr = (K + 1) Kα
ν T
Efecto de la temperatura

Al aumentar la T, se reduce el
factor de retención k para cada
analito
La intensidad de este efecto no
es el mismo para todos los
analitos.
La resolución puede mejorar o
empeorar para un par crítico, e
incluso el orden de elución se
puede invertir
 Dimensiones de la columna
• Espesor de la fase estacionaria
• Diámetro interno de la columna
• Longitud de la columna

El espesor de la película y el diámetro interno, son

los parámetros que mayor impacto causan
 Espesor de película de fase
estacionaria y diámetro interno

Masa del soluto en la fase líquida

K=
Masa del soluto en el gas acarreador

volumen del gas acarreador en la columna

β=
Volumen de fase estacionaria en la columna
 Espesor de película de fase
estacionaria y diámetro interno

K es el factor de retención
Β es la relación de fases
KD es la constante de distribución

A  en fase líquida
KD =
A  en fase gaseosa
KD = K β
DETECTOR DE IONIZACIÓN DE
LLAMA
DETECTOR FOTOMÉTRICO DE
LLAMA
DETECTOR DE EMISIÓN ATÓMICA
DETECTOR DE CAPTURA DE
ELECTRONES
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TÉRMICA
Hidrocarburos cíclicos
Hidrocarburos halogenados
Hidrocarburos halogenados
Halogenados aromáticos
Alcoholes
Esteroides anabólicos
Opiatos
Sedativos
Codeína y metabolito
Meperidina y metabolito
Narcóticos Analgésicos
Acetonitrilos halogenados
Alcoholes aromáticos
Hipnóticos
Estimulantes
Antihistamínicos
Depresivos
Nicotina y metabolito
Estimulantes
Azúcares
Hidrocarburos aromáticos
Hidrocarburos
Parabenos
Alcoholes C1-C4
Alcoholes en Sangre
Derivados sulfurados
Mezcla diversa
Disolventes
Mezcla
Anfetaminas
Barbitales
Mezcla
Derivados sulfurados