SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DE LOS LABORATORIOS DE DOCENCIA.
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA E
INMUNOLOGÍA DE PRIMER AÑO
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Reacciones febriles.
OBJETIVOS
- Conocer el método de laboratorio de Reacciones febriles para el diagnóstico y
seguimiento de Fiebre tifoidea y paratifoidea, Brucelosis y Rickettsiosis.
- Interpretación de las Reacciones febriles.
- Conocer otros métodos de diagnóstico presuntivo de laboratorio que se utilizan para
Fiebre tifoidea y paratifoidea, Brucelosis y Rickettsiosis.
FUNDAMENTO TEÓRICO
Las reacciones febriles representan un conjunto de pruebas de laboratorio serológicas
(reacciones de aglutinación) útiles en países en vías desarrollo como México donde se
siguen usando por ser pruebas baratas, rápidas y ampliamente conocidas pero con
limitaciones por sus reacciones cruzadas con otras bacterias y falsos positivos incluso en
proceso autoinmunes o falsos negativos por uso temprano de antibióticos,
corticoesteroides, medición temprana de anticuerpos (en la 1ª. Semana de enfermedad),
inmunodeficiencias adquiridas o congénitas, portadores crónicos de Salmonella typhi y
problemas con la estandarización de la prueba. A pesar de lo anterior siguen siendo útiles
para el diagnóstico presuntivo y seguimiento de ciertas infecciones con síndrome febril,
causadas por Salmonellas typhi y paratyphi, Brucellas y Ricketsias (usa antígenos de
Proteus OX19 por su reacción cruzada). Estas reacciones se basan en el hecho de que
cuando el organismo humano es invadido por agentes bacterianos estos generan antígenos
presentes en el suero del paciente y el huésped responde produciendo anticuerpos
aglutinantes contra ellos, los cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el
anticuerpo con el antígeno específico de las bacterias. Para la detección de los anticuerpos
se usa el suero del enfermo y antígenos purificados. El título de anticuerpos depende del
tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan valor diagnóstico el título de
ellos debe aumentar consecutivamente y se requieren 2 muestra tomadas en periodo de 2-
4 semanas de intervalo. Estas pruebas pueden efectuarse de dos maneras diferentes:
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1. Aglutinación en placa (como prueba tamiz cuando se tienen que examinar
numerosas muestras). Esta prueba es muy fácil de efectuarse y si se hace cuidadosamente,
sirve como prueba de aglutinación completa: sin embargo se sugiere que se tome como
complemento de la aglutinación macroscópica en tubo. Las reacciones francamente
negativas deben ser reportadas como tales. Las dudosas deben repetirse con la
aglutinación en tubo.
2. Aglutinación en tubo. Está técnica de aglutinación es más segura que la de
aglutinación en placa, además las reacciones cruzadas son menos frecuentes y pueden ser
detectadas las reacciones zonales. Estos son los microorganismos representantes típicos
de los padecimientos con acceso febril, por lo tanto, el grupo de antígenos febriles se
presenta con las siguientes suspensiones:
Salmonella typhi Antígeno somático O
Salmonella typhi Antígeno flagelar H
Salmonella paratyphi Antígeno flagelar A
Salmonella paratyphi Antígeno flagelar B
Brucella abortus Antígeno somático
Proteus OX19 Antígeno somático
Cuatro serotipos de salmonella que causan fiebre entérica se identifican en el laboratorio
clínico mediante análisis bioquímico y serológico: Salmonella paratyphi A (serogrupo A) ,
Salmonella paratyphi B (serogrupo B), Salmolla choleraesuis (serogrupo C1) y Salmonella
typhi (serogrupo D). Salmonella typhi causa Fiebre Tifoidea, vía oral llegan a células M de
intestino delgado, entran a linfáticos donde proliferan en macrófagos, folículos linfáticos de
intestino y circulación sanguínea para diseminarse, se excretan por heces y bilis; posterior
a 10-14 días de incubación se presenta fiebre elevada, malestar general, cefalea,
estreñimiento, mialgias, bradicardia, hepato y esplenomegalia. Salmonella typhi puede
causar enterocolitis y septicemia. En Fiebre Tifoidea las aglutininas aumentan de manera
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brusca en 2da. Y 3ª. Semana de infección y el ensayo de aglutinación de Widal o Reacción
de Widal se basa en la detección de anticuerpos en el suero de los pacientes a los antígenos
O (LPS)y H(flagelar). Se requieren 2 muestras de suero con intervalo 7-10 días para mostrar
elevación del título de anticuerpos. Los criterios de interpretación debido a su falta de
especificidad (pobladores sanos de áreas endémicas presentan títulos ó concentraciones
altas de anticuerpos) debe ser interpretado en el contexto clínico del paciente se debe
conocer la prevalencia de la enfermedad en el área geográfica, se considera positivo un
título contra antígeno O de 1: 320 en zona no endémica y en zona endémica como México
antígeno O y H de 1: 160 indica una gran probabilidad de enfermedad activa, mientras tanto
los estudios complementarios deberán confirmar el diagnóstico y reorientar el tratamiento.
Otros métodos diagnósticos en Fiebre Tifoidea Biometría hemática 1ª semana leucopenia
con eosinopenia y linfocitosis relativa, hemocultivo finales 1ª y en 2ª semana positivo da un
diagnóstico definitivo; 2da. Semana cultivo de médula ósea, orina y heces positivos,
Pruebas de función hepática con transaminasas elevadas.
Brucelosis (Fiebre de malta, fiebre ondulante, Fiebre de Bang o Fiebre del mediterráneo)
es una zoonosis causada por género Brucella en el ser humano los más frecuentes Brucela
mellintensis en 98% y Brucela abortus en 2 % se transmite por ingesta de leche y derivados
no pasteurizados presenta cuadro clínico agudo con síndrome febril e invasión hígado, bazo
y ganglios linfáticos y forma crónica. Métodos serológicos para el diagnóstico probable
aglutinación positiva con antígeno Rosa de Bengala, confirmación con prueba de
aglutinación estándar y en presencia de 2- mercaptoetanol y posibilidad o no a hemocultivo.
La reacción de Huddleson dentro de las reacciones febriles aportan sólo un diagnóstico
presuntivo con la aglutinación rápida en placa para Brucella, se utiliza una suspensión de
Ag de Brucela abortus para buscar anticuerpos. La interpretación en zona endémica títulos
de seropositividad de 1: 160 o superiores en fases iniciales de la enfermedad.
Las Rickettsiosis son enfermedades como el Grupo de Fiebres manchadas agente
Rickettsia rickettsi y Grupo de Fiebres Tíficas agente Rickettsia prowazekki, son
consideradas zoonosis transmitida por picadura o contaminación de picadura con heces de
vectores como pulgas, garrapatas y piojos estos últimos causan Tifus epidémico. Cuadro
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clínico sx febril, hepato- esplenomegalia. La reacción de Weil Felix se basa en la capacidad
del suero del paciente infectado por Rickettsias para aglutinar cepa de Proteuas OX-19 por
reacción cruzada, es decir es un antígeno común entre Proteus OX 19 y Rickettsias por lo
que es poco sensible y especifica y deben realizarse pruebas para un diagnóstico
confirmatorio como fijación de complemento, hemaglutinación indirecta,
inmunofluorescencia directa e indirecta.
MATERIAL Y REACTIVOS
- Gradilla.
- Pipeta Pasteur.
- Bulbo para Pipeta Pasteur.
- Aplicadores de madera.
- Centrífuga.
- Tubos de ensaye 13 x 100.
- Material para venopunción (campo estéril, Jeringa de 5 mL estéril, ligadura, torundas
con alcohol).
- Kit de reacciones febriles.
SERVICIOS
- Agua, Luz y Gas.
PROCEDIMIENTO
1. Respetando la técnica aséptica, obtener por punción venosa 5 mL de sangre de un
voluntario (previo consentimiento por escrito), dejar que coagule y retirar el coagulo
con un aplicador de madera.
2. Centrifugar (2500-3000 rpm por 5 minutos), asegurarse de tener equilibrada la
centrífuga.
3. Finalmente separar mediante una pipeta Pasteur el suero en un tubo nuevo.
4. Realizar la técnica de aglutinación rápida en placa.
5. Utilizando de preferencia una placa de vidrio marcada con 2 hileras de 3 cuadros.
6. Agregar una gota de suero y una gota de antígeno, procurando anotar el antígeno
que le corresponde a cada serie.
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7. Mezclar con un aplicador limpio, comenzando con la última dilución de la derecha y
siguiendo con las restantes de la izquierda (utilizar un aplicador por cada serie).
8. Agitar suavemente la placa por rotación (120 rpm) durante 2 a 3 minutos.
9. Leer con luz indirecta.
RESULTADO
Para el método de aglutinación rápida en placa se realiza la lectura con fuente de luz directa
y se observa si hay aglutinación macroscópica (se recomienda incluir controles positivo y
negativo). Se valoran los resultados de forma cualitativa como positivo si hay presencia de
aglutinación y negativo si hay ausencia o grado aglutinación de la siguiente forma:
% Aglutinación Cruces
100 % ++++
75 % +++
50 % ++
25 % +
1 -
La interpretación de resultados cualitativos de acuerdo el porcentaje de aglutinación en
correlación con los antígenos colocados en cada ovalo de la placa de vidrio discuta sus
resultados en caso de positividad o negatividad, su correlación con presentar o no cuadro
clínico, posibilidad de falsos positivos o negativos y resultados por memoria inmunológica,
confiabilidad de resultados y alternativas de otras pruebas diagnósticas y secuencia en
tiempo para repetir la prueba diagnóstica.
Si se hiciera un prueba cuantitativa (si se hicieran diluciones) la interpretación de resultados:
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Suero (mL) 0.08 0.04 0.02 0.01 0.005
Aglutinación ++++ ++++ +++ ++ +
Titulo 1/20 1/40 1/80 1/60 1/320
correspondiente
Se sugiere al alumno reportar los resultados en un cuadro, como el siguiente:
Antígenos / Resultados de aglutinación Positivo Negativo Interpretación
Salmonella typhi Antígeno somático O
Salmonella typhi Antígeno somático H
Salmonella paratyphi Antígeno flagelar A
Salmonella paratyphi Antígeno flagelar A
Salmonella paratyphi Antígeno flagelar B
Brucella abortus Antígeno somático
Proetus OX19 Antígeno somático
CUESTIONARIO
1. ¿Cuándo está indicado solicitar realizar Reacciones Febriles?
2. ¿Cuántas técnicas existen para determinación de las reacciones febriles,
descríbalas?
3. ¿Cuáles son los antígenos detectables en las Reacciones Febriles?
4. ¿Porqué se utiliza el antígeno Proteus 0X19 para el diagnóstico de Ricketsiosis?
5. ¿Qué muestras biológicas son de utilidad para el diagnóstico de Fiebre tifoidea,
Brucelosis y Ricketsiosis?