Guión de la presentación
Planteo el orden: Portada, Índice, Introducción, Aspectos funcionales básicos,
Descripción breve de los componentes, Descripción esquematizada del
procedimiento, aplicaciones, artículos en los que son utilizados, ventajas,
perspectiva del mercado, si me dejais hacer lo que puse por wassa aquí, muchas
gracias.
Diapositiva: Portada Iván
Buenas tardes a todos. Somos Alberto, María, Marco e Iván y venimos en
representación de la empresa Ivent Biotechnologies.
Diapositiva: Índice Iván
- Introducción a la empresa
- Kits Minute TM
- Descripción breve de los componentes.
- Descripción esquematizada del procedimiento
- Aplicaciones
- Artículos en los que son utilizados
- Ventaja frente a la competencia
- Precios y mercado
Diapositiva: Introducción a la empresa Marco
La empresa Invent Biotechnologies se fundó en Minnesota ([Link].) en 2010.
Innovó con sus tecnologías de columnas de centrifugación y fraccionamiento.
Sus productos estrella son los kits que simplifican la preparación de muestras, asegurando
resultados fiables.
El objetivo de la empresa es buscar un fraccionamiento celular al alcance de todo el mundo,
incluso laboratorios sin equipos especiales o complejos.
Diapositiva: Kits™ Marco
- Para comenzar por lo básico, podemos dar una breve definición sobre qué es el fraccionamiento
subcelular: Técnica que nos permite separar las diferentes partes de una célula (núcleo, mitocondrias,
cloroplastos...) con fines analíticos o preparativos.
- Nuestra empresa Invent Biotechnologies apuesta por sus kits de fraccionamiento subcelular "Minute
TM". Los kits MinuteTM son herramientas preparadas para el fraccionamiento subcelular de forma
rápida, eficiente y de manera reproducible. Como su nombre indica, el nombre "Minute" hace
referencia a su característica principal, la rapidez con la que permiten realizar el fraccionamiento
celular, reduciendo al tiempo requerido a 1 hora generalmente para la obtención en sus propias manos
de tus fracciones. Hoy en día gracias al refinado de los kits estamos consiguiendo procedimientos de
entre 30-40 minutos.
- Como se mencionó anteriormente, el objetivo de la empresa es que gracias al empleo de sus kits, el
fraccionamiento celular esté al alcance de todos, incluso en laboratorios sin un equipamiento tan
especializado. Vamos a necesitar solamente una centrífuga de mesa convencional, por lo que nos
olvidamos de tener instrumentación como homogeneizadores caros, ultracentrífugas o
columnas/gradientes de densidad.
- Empleamos componentes como los cartuchos de filtro, las perlas de disociación, tubos de
recolección y una serie de tampones específicos que regulan las condiciones químicas ayudando en las
distintas fases del proceso que durante la presentación se comentarán.
- A modo de resumen de esta pequeña introducción, los kits Minute TM de Invent Biotechnologies
buscan un proceso rápido y reproducible en cualquier entorno de trabajo, donde se evitan pasos muy
agresivos para no producir estrés/daños en los distintos componentes celulares garantizando una alta
pureza de las preparaciones.
Diapositiva: Descripción breve de los componentes Alberto
Bien, nuestros kits están diseñados, como ya se explicó, para el fraccionamiento celular, como el
aislamiento de orgánulos o proteínas para futuros estudios bioquímicos y proteómicos, por lo que sus
componentes estarán ambientados a ese fin.
En primer lugar, nos encontramos con los cartuchos de filtro, con un papel fundamental en la
separación de las fracciones nucleares. Gracias a estos cartuchos, se podrá llevar a cabo una filtración
diferencial para la separación controlada de partículas de diferentes tamaños.
Por otro lado, también incluimos en nuestros kits perlas de disociación del tejido, que ayudan a
disgregar, por fricción, las células, rompiendo las conexiones entre ellas, sin dañar los orgánulos de su
interior.
Ustedes pueden llegar a preguntarse: ¿dónde vamos a recoger las fracciones que se obtienen tras la
filtración? Nuestra compañía ya pensó en esto: se incluyen una serie de tubos de recolección para
almacenar las fracciones celulares aisladas, protegiendolas para análisis posteriores. Además, para
evitar la contaminación de nuestras muestras, los kits incluyen varillas de plástico, útiles para mezclar
y manipular las muestras de una manera segura, preservando la integridad de los experimentos.
Para finalizar, nuestros kits incluyen una serie de tampones o buffers para mantener unas condiciones
óptimas durante el proceso de fraccionamiento. Los más utilizados son los tampones A, B, C, D y N,
cada uno con una función específica:
- El tampón A es el primero que se utiliza, facilitando la sensibilización de la célula para su
filtración. Este tampón tiene como función principal la degradación controlada de la
membrana plasmática, liberando el interior de la célula sin poner en riesgo su integridad.
- En fases posteriores, utilizamos el tampón B, cuyas funciones principales son tanto la
separación eficiente de fracciones celulares como asegurar la estabilidad de los componentes
celulares a lo largo del procedimiento.
- En algunos kits, como podría ser el especializado en el enriquecimiento del Aparato de Golgi,
se incluyen los tampones C y D, con el fin, siguiendo con el mismo kit, la separación de
algunas estructuras dentro del Golgi, permitiendo obtener fracciones más puras y llevar
estudios aún más específicos para este orgánulo
- Finalmente, contamos con el tampon N, presente en el kit para el fraccionamiento de
proteínas solubles e insolubles, cuya principal utilidad es, como habrá podido deducir el
público, la separación de estos dos tipos de proteínas, siendo este tampón fundamental para
diferenciar proteínas según su solubilidad.
Diapositiva: Descripción esquematizada del procedimiento María
Como estamos exponiendo una gama de kits de fraccionamiento celular, se han escogido
varios protocolos de diferentes kits y se ha realizado un protocolo común que sirva para todos
los kits. Los detalles específicos como buffers, fuerzas de centrifugación y tiempos varían
según el orgánulo y el kit que se vaya a utilizar.
1. Preparación de la Muestra:
Obtención del material de partida (tejido o células) y su preparación inicial. Consiste en pesar
una cantidad específica (según el kit) de la muestra e insertarlo en el cartucho de filtro. Se
dan especificaciones si la muestra es cultivada o es un tejido fresco o congelado. Algunos
ejemplos en algunos kits son:
● Ejemplo (Cloroplastos - CP-011): Se pesan 100-200 mg de tejido vegetal fresco
(hojas, semillas o tallos tiernos). Para hojas, se recomienda doblarlas o enrollarlas e
insertarlas en el filtro.
● Ejemplo (Núcleos de Neuronas - BN-020): Se añaden 20-30 mg de tejido fresco o
congelado a un tubo Eppendorf. Para células cultivadas, se recolectan 0.1-10 millones
de células.
2. Lisis y Homogeneización:
Este paso busca romper las células para liberar los orgánulos (sin destruirlos/ con el menor
daño posible), utilizando métodos mecánicos y/o químicos (buffers).
● Ejemplo (Cloroplastos - CP-011): Se añaden 100 µl de buffer A frío al filtro que
contiene el tejido y se tritura repetidamente con una punta de pipeta de 200 µl . Luego
se añade más buffer A y se mezcla.
● Ejemplo (Núcleos de Neuronas - BN-020): Se añaden 200 µl de buffer A frío al
tejido y se homogeneiza suavemente con el pistilo proporcionado durante 50-60
veces.
3. Filtración (Opcional pero Común):
Muchos protocolos utilizan cartuchos de filtro para eliminar restos celulares grandes y no
lisados.
● Ejemplo (Cloroplastos - CP-011): Después de la homogeneización, la mezcla se
centrifuga con el filtro, , luego el filtro se desecha.
● Ejemplo (Núcleos de Neuronas - BN-020): El homogenizado se transfiere
cuidadosamente a un filtro en un tubo de recolección.
4. Centrifugación Diferencial:
Este es un paso clave para separar los orgánulos en función de su tamaño y densidad
mediante múltiples centrifugaciones a diferentes velocidades y tiempos.
● Ejemplo (Cloroplastos - CP-011): El filtrado se centrifuga a 2000 X g durante 4
min para obtener un pellet que se resuspende y se vuelve a centrifuga.
● Ejemplo (Núcleos de Neuronas - BN-020): El filtrado se centrifuga a 13,000 X g
durante 30 segundos, luego el pellet se resuspende y se centrifuga a 600 X g
durante 5 minutos . Se realiza una centrifugación adicional en una capa de buffer B a
1000 X g durante 10 minutos.
5. Lavado y Resuspensión del Pellet:
Después de cada centrifugación, el pellet que contiene el orgánulo de interés a menudo se
lava con buffer para eliminar contaminantes y luego se resuspende en un buffer adecuado
para el siguiente paso o para su uso posterior.
● Ejemplo (Cloroplastos - CP-011): El pellet se resuspende en 500 µl de buffer B frío
y se vuelve a centrifugar. El pellet final de cloroplastos se resuspende en 100-200 µl
de PBS o TES.
● Ejemplo (Núcleos de Neuronas - BN-020): El pellet después de la primera
centrifugación se resuspende suavemente y luego se sobrepone a buffer B para una
centrifugación adicional. El pellet final de núcleos se resuspende en 50-200 µl de
PBS con 5% BSA
6. Colección Final y Solubilización (si es necesario):
El pellet final contiene el orgánulo enriquecido. Este pellet puede resuspenderse en un buffer
apropiado para su posterior análisis. Para análisis de proteínas, a menudo se requiere la
solubilización del pellet con un buffer que contenga detergente.
● Ejemplo (Cloroplastos - CP-011): El pellet final de cloroplastos se resuspende en
100-200 µl de PBS o TES o en un buffer de elección para aplicaciones posteriores. Se
recomiendan reactivos específicos para la solubilización de proteínas.
● Ejemplo (Núcleos de Neuronas - BN-020): El pellet final de núcleos se resuspende en
50-200 µl de PBS que contenga 5% de BSA o en otro buffer de elección.
Es muy importante consultar el manual específico del kit para obtener detalles precisos sobre
aspectos como los buffer, las fuerzas de centrifugación, los tiempos de incubación, etc para el
aislamiento de cada orgánulo. Además, los manuales proporcionan algunas notas técnicas y
recomendaciones para optimizar el protocolo de cada kit.
Diapositiva: Aplicaciones Alberto
Nuestros kits ofrecen soluciones eficaces para diversas aplicaciones en el ámbito del
fraccionamiento celular.
Por destacar algunas, decir que nuestros kits facilitan la separación eficiente de membranas
plasmáticas del resto de componentes celulares, siendo esto muy importante si se desea
realizar un estudio que requieran fracciones puras de membranas, eliminando la
contaminación por otros componentes, véanse núcleos. Además, nuestros productos son
ideales en la obtención de proteínas sin poner en riesgo el perfil proteico, siendo esto
sumamente útil si se necesitan realizar estudios proteómicos, ya que la integridad de las
proteínas es clave. También podemos, por medio de la eliminación de la albúmina, aumentar
la sensibilidad de los ensayos, permitiendo identificar de una manera mucho más efectiva la
presencia de biomarcadores y otros componentes importantes en investigaciones posteriores.
Finalmente, estos kits posibilitan la separación de los distintos orgánulos celulares, siendo
esto crucial para investigar la organización intracelular, ya que nos proporciona fracciones
puras de mitocondrias, núcleos o lisosomas, entre otros.
Diapositiva: Artículos en los que son utilizados María
Qué es el bioz rating: s una puntuación basada en inteligencia artificial (IA) que evalúa
productos científicos —como reactivos, enzimas, kits, instrumentos, etc.— en función de su
rendimiento práctico reportado en artículos científicos revisados por pares.
Esta plataforma está diseñada por Bioz AI fue desarrollado por expertos en inteligencia
artificial de Microsoft y Google, y con la participación de ganadores del Premio Nobel de
química.
- Kit de enriquecimiento del aparato de Golgi Minute ™
Sobre qué trata: Este artículo estudia cómo la acumulación de UDP-GlcNAc en el citoplasma
y su modificación O-GlcNAcylation afectan la inflamación y el envejecimiento celular en la
osteoartritis.
Cómo se usa el kit:se ha utilizado para aislar el Golgi y analizar su papel en la regulación de
estas modificaciones
Para qué se usa el orgánulo después: Después de extraer el aparato de Golgi, los
investigadores examinan cómo la alteración de su función influye en la estabilidad de
proteínas clave como GATA4, lo que podría abrir nuevas estrategias terapéuticas para la
osteoartritis
- Kit Minute™ para aislamiento de membrana plasmática/proteínas y
fraccionamiento celular (50 preparaciones)
Sobre qué trata: Este artículo analiza cómo el metabolito de metionina espermidina inhibe la
piroptosis tumoral al potenciar la endocitosis mediada por MYO6.
Cómo se usa el kit: se ha utilizado el Kit Minute™ para aislamiento de membrana
plasmática/proteínas y fraccionamiento celular para extraer membranas plasmáticas y
estudiar su papel en la degradación de GSDME-NT, un fragmento clave en la piroptosis.
Para qué se usa el orgánulo después: Después de aislar estas membranas y proteínas, los
investigadores examinan cómo la regulación de MYO6 y la degradación de GSDME-NT
afectan la resistencia a la piroptosis, lo que podría abrir nuevas estrategias terapéuticas contra
el cáncer.
- Kit de aislamiento de lisosomas Minute™ para células y tejidos de mamíferos (20
preparaciones)
Sobre qué trata: Este artículo analiza cómo la acumulación de colesterol en el cerebro,
especialmente en personas con el gen APOE4 y Alzheimer, contribuye a la senescencia
celular mediante la disfunción del transportador ABCA1.
Cómo se usa el kit:para extraer lisosomas de células y tejidos de mamíferos y estudiar su
papel en el tráfico de ABCA1 y la acumulación de oxisteroles
Para qué se usa el orgánulo después: Después de aislar los lisosomas, los investigadores
examinan cómo su disfunción afecta la activación de mTORC1 y la inflamación,
proponiendo estrategias terapéuticas para reducir estos efectos.
Diapositiva: Ventajas frente la competencia Iván
¿Por qué es más rápido?
1. Tecnología basada en columna de centrifugación
● Utiliza columnas de filtración rápida que contienen matrices filtrantes que permiten
separar componentes celulares mediante centrifugación simple
● Esto reemplaza el uso de gradientes de sacarosa o Percoll que normalmente sí
requieren ultracentrífugas
3. Protocolos optimizados “todo en uno”
● Los buffers están preformulados para evitar ajustes de pH o mezclas múltiples.
¿Por qué Minute™ requiere menos muestra?
1. Alta eficiencia de lisis
● Sus buffers están formulados para liberar casi la totalidad del contenido celular
desde una pequeña cantidad de tejido.
● Esto significa que se obtiene más proteína por miligramo de muestra.
2. Tecnología de columnas con baja retención
● Las columnas minimizan la adsorción no específica de proteínas o núcleos, lo que
reduce pérdidas en el proceso de separación.
●
¿Por qué Minute™ permite obtener múltiples fracciones en un solo protocolo?
1. Buffers específicos y secuenciales
● El protocolo incluye una serie de buffers diseñados para romper selectivamente
diferentes estructuras celulares, liberando primero el citosol, luego cloroplastos y
organelos, y por último los núcleos.
● Cada fracción se libera sin destruir las demás, permitiendo una separación ordenada.
DIAPOSITIVA: Perspectivas para el mercado (MARCO)
Aunque cuando pensamos en equipamiento para laboratorio e investigación nos
vienen a la cabeza secuenciadores de último modelo, detectores,
termocicladores, espectrofotómetros, microscopios de 20 especialidades… pero
no debemos olvidarnos del primer paso en todo protocolo que es la elaboración
de nuestras muestras con fines analíticos o preparativos.
Según MarketWatch (web americana que proporciona información financiera),
el mercado global de lisis celular/fraccionamiento celular se valoró en 2280
millones de dólares estadounidenses en 2016.
Ante la creciente necesidad de procesos de refinación y la alta generación de
biofármacos se espera que el mercado del fraccionamiento celular crezca hasta
alcanzar los 5490 millones de dólares estadounidenses para 2025. Estos datos
son solo de Estados Unidos, imaginaros cuánto dinero se emplea contando con
todos los demás países.
Esta diapositiva solamente la mostramos para resaltar la importancia del
material y los métodos de la lisis y fraccionamiento celular en la investigación.
Diapositiva: Comentamos nuestros precios Marco
- En la diapositiva anterior, podemos ver como los precios del los kits
MinuteTM son algo más baratos de otros kits de otras compañías, pero si
hablamos del valor del kit únicamente no hay una gran variación significativa
(en nuestro caso donde más nos ahorramos es que no necesitamos toda la
maquinaria adicional).
- Podíamos observar como el precio de Thermo Fisher es de unos 588 dólares,
de Qiagen unos 468 dólares, de Sigma-Aldrich unos 651 dólares…
- El precio medio de nuestros kits Minute TM para fraccionamiento subcelular
está en torno a los 595 dólares.
- Al ser nuestra primera presentación en esta entidad, les hemos traído una
pequeña actividad interactiva:
Diapositiva: Instrucciones de la actividad
Ponemos las reglas del jueguecillo este de sentarse y eso
Vamos diciendo las afirmaciones en voz alta.
Felicidades ganadores:
Nuestra empresa garantizará un 15% de descuento a todos los
ganadores de esta pequeña actividad, así que por favor, una vez
finalizada la presentación, reúnanse con nosotros para tomaros
vuestros datos.
Diapositiva: Lamentamos mucho esto
Ponemos a alguien a leer esto en voz alta.
Preguntas que pueden hacer los profesores
1. ¿Qué son las columnas de centrifugación (aparece en la introducción)?
Es una purificación rápida de ácidos nucleicos (ADN o ARN) basado en un
método de adsorción en sílica. Trabajamos con una columna dentro de un tubo
de extracción/colección. La columna posee una matriz de sílice para atrapar el
material genético. Con altas concentraciones de sales caotrópicas (tiocianato de
guanidinio) y empleando etanol/isopropanol (cuidado con usar etanol en ácidos
nucleicos de plantas ya que poseen compuestos polifenólicos que se intercalan
entre las bases y pueden arrastrar a los ácidos nucleicos. Se puede usar PVP
para eliminar dichos compuestos polifenólicos) buscamos bajar la constante
dieléctrica del medio y también buscamos eliminar la capa de
solvatación/hidratación de los ácidos nucleicos para que expongan sus grupos
fosfatos. Nuestro tampón contiene sodio que actúa como puente salino
permitiendo la unión entre los ácidos nucleicos y la matriz de sílice (el sodio
une los grupos fosfatos). Ahora realizamos centrifugaciones y lavados para
eliminar todo lo que no se une al sílice. Después empleamos lavados con
tampón de menor fuerza iónica buscando regenerar la capa de
hidratación/solvatación de los ácidos nucleicos para separarlos de la matriz de
sílice y poder recolectarlos.
2. ¿Cuántas muestras se pueden preparar con un solo kit?
En general, los kits presentan la capacidad de realizar 50 preparaciones.
3. ¿De qué están hechos los distintos cartuchos de filtro?
Por más información que hemos podido buscar, no hemos sido capaces de
encontrarlo, pero está claro que contribuye al clarificado de la muestra