RPR

100 72515
500 72516
KITS PARA LA DETECCIÓN CUALITATIVA Y SEMI-
CUANTITATIVA DE ANTICUERPOS REAGÍNICOS NO
TREPONÉMICOS ASOCIADOS A LA SÍFILIS EN
PLASMA O SUERO HUMANO MEDIANTE LA
AGLUTINACIÓN MACROSCÓPICA EN PLACAS DE
PRUEBA DESECHABLES

883684 - 2014/12

[ES] 13
 ÍNDICE DE CONTENIDOS

1. USO PREVISTO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA . . . . . . 15

3. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO . . . . . . . . . . . . . 15

4. REACTIVOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

5. ADVERTENCIA Y PRECAUCIONES . . . . . . . . . . . . . . 17

6. MUESTRAS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18

7. PROCEDIMIENTO . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

8. LIMITACIONES DE LA PRUEBA . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

9. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO. . . . . . . . . . 21

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.. . . . . . . . . . . . . . . 23

14 [ES]
1. USO PREVISTO
Los kits de RPR están previstos para la detección cualitativa y semi-
cuantitativa de anticuerpos (reagina) no treponémicos asociados
con la sífilis en suero o plasma humano como ayuda en el
diagnóstico de la infección de sífilis.

2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA

La sífilis es una infección crónica que progresa a través de distintas
fases de infección: primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria.
Dichas fases producen diversos síntomas clínicos; suelen producir
chancros iniciales, y posteriormente, una erupción sifilítica seguida
por largos períodos de inactividad. Las infecciones no tratadas con el
tiempo pueden ocasionar problemas cardiovasculares y neurosífilis.

La infección es causada por la espiroqueta Treponema pallidum, y

generalmente se adquiere por contacto sexual, aunque la
enfermedad puede ser transmitida por la transfusión de sangre
infectada. También se producen infecciones intrauterinas. Se ha
demostrado que el organismo es prácticamente imposible de
cultivar en medios artificiales, y el diagnóstico de la infección
depende generalmente de la demostración de anticuerpos en la
sangre, que aparecen poco después de la infección inicial y pueden
persistir durante muchos años.

Las pruebas para la sífilis se dividen en cuatro categorías: examen

microscópico directo, pruebas de anticuerpos treponémicos, pruebas
de anticuerpos no treponémicos y pruebas directas del antígeno.
La RPR (reagina plasmática rápida) es una prueba “no treponémica”
en la que los anticuerpos detectados no son específicos para
T. pallidum, a pesar de que su presencia en el plasma o suero del
paciente está fuertemente asociada con la infección en el
organismo. Este tipo de prueba mide los anticuerpos (IgG, IgM)
producidos en respuesta al material lipoidal expulsado por las
células huésped dañadas, así como al material similar a las
lipoproteínas expulsado por las espiroquetas. Estos anticuerpos
tienden a desaparecer tras una cura exitosa de la infección.

3. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

Los kits RPR usan partículas de carbón cubiertas con una mezcla
de antígenos lipídicos, que se combinarán con el anticuerpo
reagínico presente en el suero o plasma del paciente. Las partículas
están suspendidas en un medio que contiene componentes para
eliminar las reacciones no específicas.
Las reacciones positivas se muestran mediante la aglutinación
macroscópica (grumos) de las partículas.
[ES] 15
Aunque el kit está previsto para su uso principalmente como una
prueba cualitativa, los niveles de anticuerpos pueden valorarse
duplicando la dilución.
Los patrones de aglutinación se interpretan a vista.

4. REACTIVOS
4.1. Descripción

Presentación
Identificación
Descripción 72515 72516
en la etiqueta
100 pruebas 500 pruebas
Antígeno RPR
Partículas de carbón
cubiertas con antígeno de 1 vial 1 vial
R1 RPR Antigen
colesterol, lecitina y 2 ml 10 ml
cardiolipina en tampón de
fosfato
Control positivo
Suero humano con
anticuerpos asociados a
R2 Positive [Link], negativo para 1 vial 1 vial
control antígeno de HB, 1 ml 2 ml
anticuerpos anti-VIH1/2 y
anti-VHC diluido en
tampón de fosfato
Control negativo
R3 Negative 1 vial 1 vial
Suero de conejo en
control 1 ml 2 ml
tampón de fosfato
Botella dispensadora
1 1
(reutilizable)
Aguja dispensadora
1 1
(reutilizable)
Placas de prueba
10 50
(10 círculos)

4.2. Requisitos para el almacenamiento y la manipulación

Este kit debe almacenarse a +2-8 °C. Las botellas tienen que
almacenarse de pie. No lo congele.
Si se conserva a la temperatura de +2-8 °C, cada elemento incluido
en el kit puede utilizarse hasta la fecha de caducidad indicada en el
envase. Una vez abierta la bolsa, y en ausencia de contaminación,
los reactivos R1, R2 y R3 conservados a +2-8 °C pueden ser
utilizados hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

16 [ES]
5. ADVERTENCIA Y PRECAUCIONES
Para uso diagnóstico in vitro. Solo para uso de profesionales de la
sanidad.

5.1. Precauciones de higiene y seguridad:

• Este kit de prueba deberá ser manejado únicamente por personal
cualificado que haya recibido formación en procedimientos de
laboratorio y esté familiarizado con sus posibles riesgos. Lleve
prendas de protección adecuadas, guantes que aíslen del
frío/gafas/máscara y manipule el kit conforme a las buenas
prácticas de laboratorio exigidas.

• Los materiales de control suministrados proceden de suero

humano. Han sido probados a un nivel de donante, con resultado
negativo en antígeno HB, anticuerpos anti-VIH 1/2 y anti-VHC. No
existe ningún método conocido que pueda ofrecer una garantía
absoluta de ausencia de agentes infecciosos. Por lo tanto, todos
los hemoderivados de sangre humana, reactivos y muestras
humanas deben manipularse como potenciales transmisores de
enfermedades infecciosas, siguiendo para ello las precauciones
universales recomendadas sobre agentes patógenos por contacto
sanguíneo que se definen en las normativas nacionales, regionales
y locales.

• Salpicaduras biológicas: Las salpicaduras de materiales de origen

humano deben tratarse como potencialmente infecciosas.
Las salpicaduras que no contengan ácido deben descontaminarse
inmediatamente, incluyendo el área de salpicadura, los materiales
y cualquier otra superficie o equipo contaminados, usando para
ello un producto químico desinfectante adecuado y efectivo para
los potenciales peligros biológicos relacionados con las muestras
en cuestión (por norma general, una dilución de 1:10 de lejía de
uso doméstico, etanol o isopropanol al 70-80%, un yodóforo
como 0,5% Wescodyne™ Plus, etc.), tras lo cual deberán secarse
con un paño.

Los derrames que contengan ácidos deben ser adecuadamente

absorbidos (limpiados) o neutralizados; el área en cuestión deberá
enjuagarse con agua y secarse. Puede ser necesario desechar los
materiales utilizados para absorber el derrame como residuos
peligrosos. A continuación, el área debe ser descontaminada con
un desinfectante químico.

NOTA: No coloque soluciones que contengan lejía en el autoclave.

[ES] 17
• Deseche todas las muestras y todo el material utilizado para
realizar la prueba como si contuvieran un agente infeccioso. Los
residuos del laboratorio, sustancias químicas o residuos
biológicos potencialmente peligrosos deben manipularse y
desecharse conforme a la reglamentación local, regional y
nacional.

• La Hoja de datos de seguridad de materiales está disponible en

[Link].

5.2. Precauciones relativas al procedimiento

5.2.1. Preparación
La calidad de los resultados depende del respeto de las siguientes
Buenas Prácticas de Laboratorio:
• No mezclar los reactivos de lotes diferentes dentro de una misma
prueba.
• No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad.
• Antes del uso, esperar 30 minutos para que los reactivos se
estabilicen a temperatura ambiente (18-30°C).

5.2.2. Procedimiento de la prueba

• No cambiar el procedimiento del ensayo.
• Utilizar una punta de dispensación nueva para cada muestra.
• No tocar la superficie de reacción de las placas de aglutinación.

6. MUESTRAS
Las muestras de suero o plasma (EDTA, citrato sódico, heparina de
sodio y ACD) no deben contener células de sangre. Deberán
almacenarse a +2-8 °C hasta 7 días antes de la prueba. Las
muestras que requieran un almacenamiento superior deberán
congelarse a -20 °C o menos. Las muestras congeladas deben
descongelarse y mezclarse bien antes de la prueba.
No repita más de 5 ciclos de congelado/descongelado.

Las muestras calentadas a 56 °C durante 1 hora no tienen ningún

impacto en los resultados.
Las muestras que contienen hasta 120 g/l de albúmina, 200 mg/l de
bilirrubina, 33 g/l de trioleína y las muestras que contienen 2 g/l de
hemoglobina no afectan a los resultados. Sea como sea, no se
recomienda usar muestras hiperlipémicas ni hiperhemolizadas.
Si se deben transportar las muestras, es necesario embalarlas
conforme a las regulaciones en vigor en lo relativo al transporte de
agentes etiológicos y, en cualquier caso, es preferible transportarlas
congeladas.

18 [ES]
7. PROCEDIMIENTO
7.1. Materiales necesarios
7.1.1. Material suministrado
Aguja de goteo y botella de goteo desechables adecuadamente
calibradas para dispensar las partículas de carbón.

7.1.2. Materiales necesarios pero no incluidos

Rotador para rotar las placas de prueba a 100 rpm, en un círculo de
1 cm de diámetro aprox.
Pipeta y puntas adecuadamente calibradas y mantenidas para
dispensar un volumen de 50 μl.
Solución salina al 0,9% (para el procedimiento semi-cuantitativo).

7.2. Procedimiento del ensayo

Los controles positivos (R2) y negativos (R3) del kit tienen que
cargarse para cada una de las pruebas.

7.2.1. Prueba cualitativa

1. Coloque 50 μl de muestra o control en un círculo en la placa de
prueba.
2. Distribuya la muestra y los controles uniformemente por el área
del círculo de la prueba.
3. Agite el vial de antígeno RPR para asegurar que se mezcla bien,
justo antes del uso para evitar la sedimentación.
4. Acople la aguja de goteo en la botella de goteo y tome el
antígeno RPR mediante succión.
5. Invierta el cuentagotas y apriételo suavemente para expulsar el
aire de la aguja.
6. Con la botella de goteo en vertical sobre la muestra de prueba,
dispense una sola gota de antígeno RPR.
7. Coloque la placa de prueba en el rotador de placas y gire a 100
rpm durante 8 minutos.
8. Lea inmediatamente e interprete los resultados visualmente con
buena luz. (Consulte 7.4).
Nota: Si no es posible la lectura inmediata, la placa tiene que
mantenerse en el rotador de placas hasta 15 minutos.
9. Devuelva el antígeno no utilizado de la botella de goteo al vial de
cristal.
10. Limpie la botella de goteo y la aguja con agua destilada y deje
que se sequen antes de volverlas a utilizar.

7.2.2. Prueba semi-cuantitativa

[Link] diluciones dobles de no diluido a 1:16 en solución salina al
0,9%.
2. Coloque 50 μl de cada dilución y controles en un círculo separado
en la placa de prueba.

[ES] 19
3. Distribuya cada dilución uniformemente por el círculo de la
prueba.
4. Continúe como se indica a partir de la sección 3 de la prueba
cualitativa.
El valor de la muestra se expresa como el recíproco de la dilución
más alta que muestra aglutinación de las partículas de carbón.

Si la dilución más alta probada (1:16) es reactiva, proceda con otra

serie de diluciones, preparando diluciones dobles de la muestra de
1:32 a 1:512 usando una solución salina al 0,9%.
Mezcle bien y continúe como se indica desde el paso 2 de la prueba
semi-cuantitativa.

7.3. Control de calidad

Utilice el control positivo (R2) y el control negativo (R3) en cada
realización de la prueba para validar el ensayo.

7.4. Interpretación de los resultados de las muestras y criterios de

validación de la prueba+

Fuertemente reactiva (FR):

Grumos grandes de partículas de carbón con un
fondo transparente.
1

Reactiva (R):
Grumos grandes de partículas de carbón algo más
dispersas que en el caso “fuertemente reactivo”.
2

Débilmente reactiva (DR):

Grumos pequeños de partículas de carbón con un
fondo gris claro.
3
Reactiva con trazos (RT):
Ligeros grumos de partículas de carbón, típicamente
vistos como un botón de agregados en el centro del
círculo de la prueba o dispersos alrededor del borde
4 del círculo de la prueba.

1 2 3 4
20 [ES]
No reactiva (NR):
No reactiva (NR): Normalmente es un ligero patrón gris o un botón de
partículas de carbón no agregadas en el centro del círculo de la prueba
o un círculo grande de partículas de carbón sin grumos en su interior.

Las muestras reactivas deberían registrarse como positivas a

anticuerpos y tienen que (en vista de la naturaleza inespecífica de
los anticuerpos detectados) someterse a pruebas posteriores para
determinar la presencia o ausencia de anticuerpos no treponémicos
específicos.

Para que el ensayo sea válido, el control positivo tiene que mostrar
un patrón fuertemente reactivo y el control negativo, un resultado
claramente no reactivo.

8. LIMITACIONES DE LA PRUEBA
No hay disponible ninguna prueba única ni ningún estándar de
referencia definitivo para cada etapa de la enfermedad. Por lo tanto,
el diagnóstico de sífilis se basa predominantemente en la prueba
serológica, que requiere resultados de métodos tanto treponémicos
como no treponémicos.
Se pueden observar resultados de falso positivo cuando la lectura
no se realiza inmediatamente después de la rotación.
La prueba de carbono RPR no es específica para la sífilis. Todas las
muestras reactivas deberían volverse a comprobar con métodos
treponémicos, tales como TPHA para confirmar los resultados.

9. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO

9.1. Estudio de precisión
Un panel de muestras constituido por una muestra negativa, 1
muestra positiva débil (valor 1:4) y 1 muestra positiva (valor 1:16) se
han comprobado para la repetibilidad en 8 réplicas durante la
misma realización de la prueba. Para una precisión intermedia y
estudios de reproducibilidad inter-lote, las muestras se han probado
en 2 réplicas por día durante 5 días (lectura realizada por dos
operadores distintos) y en dos lotes distintos.

9.1.1. Repetibilidad
Todas las réplicas de muestras negativas dieron resultados
negativos y todas las réplicas de muestras positivas, resultados
positivos.

9.1.2. Precisión intermedia / reproducibilidad inter-lote

Todas las réplicas de muestras negativas dieron resultados
negativos y todas las réplicas de muestras positivas, resultados
positivos, independientemente de las condiciones.
[ES] 21
9.2. Resultado clínico
9.2.1. Especificidad
El estudio de especificidad fue un estudio retrospectivo realizado en
102 muestras de suero congeladas de la rutina del laboratorio de un
centro de Enfermedades de Transmisión Sexual en Francia.
Los resultados del ensayo de RPR de sífilis se compararon con un
ensayo RPR/VDRL con distintivo CE.

Número total Inicialmente Repetidamente Especificidad

IC 95%
de muestras reactiva (IR) reactiva (RR) RR (%)

2 100% [96,4% -
102 0
(dudoso) 102/102 100,0%]

De las 102 muestras, 2 fueron dudosas. Después de repetir la

prueba, todas las muestras fueron negativas.

La especificidad del diagnóstico de las muestras retrospectivas

fue igual a 102/102 = 100% con un rango de fiabilidad del 95% de
[96,4% – 100,0%].

9.2.2. Sensibilidad
El estudio de sensibilidad fue un estudio retrospectivo realizado en
101 muestras de suero congeladas de la rutina del laboratorio de un
centro de Enfermedades de Transmisión Sexual en Francia.
Los resultados del ensayo de RPR de sífilis se compararon con un
ensayo RPR/VDRL con distintivo CE.

Número total Inicialmente Repetidamente Especificidad

IC 95%
de muestras reactiva (IR) reactiva (RR) RR (%)

100 100% [96,4% -

101 101
(1 dudoso) 101/101 100,0%]

De las 101 muestras, 1 fue dudosa. Después de repetir la prueba,

todas las muestras fueron positivas.

La sensibilidad del diagnóstico de las muestras retrospectivas fue

del 100% (101/101) con un rango de fiabilidad del 95% de [96,4%
– 100,0%].

22 [ES]
9.3. Especificidad analítica - Estudio de reactividad cruzada
La especificidad analítica del ensayo RPR de sífilis se evaluó en un
total de 65 muestras de reactividad cruzada seleccionadas de otras
enfermedades infecciosas y/u otras condiciones que pudieran dar
un resultado de falso positivo debido a la inespecificidad (factor
reumatoide, enfermedad de Lyme, EBV, rubéola, leptospirosis, LES
(lupus), hepatitis B, hepatitis C, VIH ½, mujeres multíparas, mujeres
embarazadas).

La especificidad del ensayo obtenida es del 100,0% (65/65) con

un rango de fiabilidad del 95% de [94,5% - 100,0 %].

9.4. Efecto prozona

Tres (3) muestras positivas de sífilis Ab muy altas (>1:128) se
probaron sin diluir y diluidas para verificar la ausencia del efecto
prozona.
Todas las muestras positivas no diluidas fueron positivas.
El efecto prozona se observa en valores hasta 1:256.

10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Larsen SA.,Pettit , et coll., EDTA –treated plasma in the Rapid
Plasma Reagin card test and the toluidine red unheated serum
test for serodiagnosis of syphilis. J Clin Microbiology
1983;17;431-5
2. Larsen S.A., Pope V., et coll., A manual of Tests for Syphilis. 9th
Edition ;1998; 193 – 207
3. Portnoy J. Modifications of the rapid plasma reagin (RPR) card
test for syphilis, for use in large-scale [Link] J Clin
Pathol;1963;40;473-9
4. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on
clinical, epidemiological, and some biologic features. Clin
Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187–209.
5. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the
Janus Serum Bank. Clin Chem Lab Med. 2009. 47:596-606.

[ES] 23
(BG) • Този продукт съдържа човешки или животински ком-
поненти. Бъдете внимателни при работа с него.
(CZ) • Tento výrobek obsahuje lidské nebo zvířecí komponenty.
Zacházejte s ním opatrně.
(DE) • Dieses Produkt enthält Bestandteile menschlichen oder tie-
rischen Ursprungs. Vorsichtig handhaben.
(DK) • Dette produkt indeholder humane og animalske komponen-
ter. Skal behandles med forsigtighed.
(EE) • Käesolev toode sisaldab inim-või loomseid komponente.
Käsitseda ettevaatlikult.
(EN) • This product contains human or animal components. Handle
with care.
(ES) • Este producto contiene componentes humanos o animales.
Manejar con cuidado.
(FI) • Tässä tuotteessa on ihmisestä tai eläimistä peräisin olevia
osia. Käsittele varovasti.
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(HR) • Ovaj proizvod sadrži ljudske ili životinjske sastojke. Pažljivo
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