Artritest

C directo
Prueba en placa para el diagnóstico de artritis
reumatoidea

SIGNIFICACION CLINICA INS­TRUC­CIO­NES PA­RA SU USO

La artritis reumatoidea es un síndrome crónico de etiología Reactivo A: agitar bien antes de usar, vaciando previamente
desconocida, caracterizado por una inflamación inespecífica la pipeta del gotero.
y generalmente simétrica de las articulaciones, que a veces Controles (Positivo y Negativo): listos para usar.
evoluciona hacia la destrucción de las estructuras articulares
y periarticulares. PRE­CAU­CIO­NES
En la articulación enferma se observa un engrosamiento de la Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
membrana sinovial con formación de pliegues y proliferación Los controles han sido ensayados para HIV, HCV y HBV
de linfocitos. Estas células, que forman folículos linfoides, encontrándose inactivos. No obstante, deben ser empleados
son las responsables de la síntesis de factores reumatoideos como si se tratara de material infectivo.
(FR) y otras inmunoglobulinas. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
Los FR son generalmente de tipo IgM anti-IgG, es decir que de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos.
reaccionan con las fracciones Fc de las IgG. También se Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
han encontrado FR de tipo IgG, aunque en mucho menor acuerdo a la normativa local vigente.
proporción de casos.
Los FR de tipo IgM están presentes en el 85-90% de los ES­TA­BI­LI­DAD E INS­TRUC­CIO­NES DE
adultos con artritis reumatoidea aunque no es específico de AL­MA­CE­NA­MIEN­TO
la enfermedad puesto que también se han encontrado en Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) has-
individuos sanos (en un 3 a 5% de los casos). ta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar.
Por tal motivo, cuando se sospecha la existencia de una
enfermedad distinta de la artritis reumatoidea, frente a una IN­DI­CIOS DE INES­TA­BI­LI­DAD O DE­TE­RIO­RO DE LOS
reacción de aglutinación positiva es aconsejable realizar la RE­AC­TI­VOS
precipitación de las globulinas con sulfato de amonio. De La autoaglutinación del Reactivo A es indicio de deterioro
tal forma, se asegura la precipitación completa de los FR y del mismo, en tal caso desechar.
se mantiene en solución cualquier aglutinina responsable
de una falsa reacción positiva, como así también algún MUESTRA
posible inhibidor. Suero
a) Recolección: obtener suero de la manera usual. No deben
FUN­DA­MEN­TOS DEL ME­TO­DO usarse muestras inactivadas por calor.
El factor reumatoideo de tipo IgM se detecta en presencia de b) Aditivos: no se requieren.
gamma-inmunoglobulina o fracción II de Cohn (que en este c) Sustancias interferentes conocidas: hemólisis y ciertas
caso es el antígeno) adsorbida sobre un soporte inerte de proteínas (distintas del factor reumatoideo) pueden ser causa
látex-poliestireno. Este antígeno se une a los FR (anti-IgG) de resultados erróneos.
produciendo una aglutinación de las partículas de látex- Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
poliestireno, visible macroscópicamente. drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el suero
RE­AC­TI­VOS PRO­VIS­TOS debe ser preferentemente fresco. En caso de no procesarse
A. Reactivo A: suspensión de partículas de látex poliesti- en el momento puede conservarse en el refrigerador (2-10oC)
reno de 0,20 micrones de diámetro, que tienen adsorbidas durante no más de una semana contada desde su recolección.
moléculas termoagregadas de gamma-inmunoglobulina o
fracción II de Cohn. MATERIAL REQUERIDO
Control Positivo: dilución de suero humano positivo. Equivale a 2 (+). 1- Provisto
Control Negativo: dilución de suero humano negativo. - placas de plástico o vidrio fondo negro.
2- No provisto
RE­AC­TI­VO NO PRO­VIS­TO - Palillo o varilla de vidrio.
- Reactivo Precipitante (para el ensayo de la fracción - Cronómetro.
globulínica): sulfato de amonio 211,5 g/l en CINa 5,15 g/l. - Material volumétrico adecuado.
- Solución fisiológica. - Fuente de luz.

870120000 / 03 p. 1/6
 Técnica semicuantitativa (titulación)
PROCEDIMIENTO Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce
Llevar los reactivos y las muestras a temperatura am- aglutinación visible macroscópicamente.
biente antes de usar. La concentración aproximada de factor reumatoideo en la
muestra puede ser calculada por la fórmula siguiente:
I- TECNICA CUALITATIVA
En uno de los sectores delimitados de la placa adjunta FR (UI/ml) = Título x Sensibilidad de la reacción (1 UI/ml)
al equipo, colocar: Ejemplo: la muestra presenta un título de 1:40. Su concen-
Muestra 1 gota (50 ul) tración en FR es de 40 x 1 = 40 UI/ml.

Reactivo A 1 gota (50 ul) METODO DE CONTROL DE CALIDAD

Mezclar con palillo o varilla de vidrio hasta obtener una Procesar simultáneamente el Control Negativo y el Control
suspensión uniforme en toda la superficie delimitada Positivo provistos, empleando una gota del Control corres-
de la placa. Inmediatamente, disparar un cronómetro, pondiente en lugar de la Muestra.
balancear suavemente la placa y observar macroscó-
picamente el resultado dentro de los dos minutos bajo VALORES DE REFERENCIA
un haz luminoso. No están claramente establecidos. Se consideran patológi-
cos valores superiores a 20-30 UI/ml.
II- TECNICA SEMICUANTITATIVA
Los sueros positivos pueden titularse efectuando LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
diluciones seriadas, en 6 tubos de Kahn. Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
1) Colocar 0,4 ml de solución fisiológica al primer tubo
y 0,2 ml de solución fisiológica a los 5 restantes. PERFORMANCE
2) Agregar 0,1 ml (100 ul) de suero al tubo No 1 y a) Sensibilidad analítica: calibrado frente al Standard del
mezclar. Transferir 0,2 ml de esta dilución al tubo No 2 CDC, se encuentra una sensibilidad de 1 UI/ml.
y mezclar, continuando de esta forma las diluciones En un estudio realizado sobre 176 muestras provenientes
hasta el último tubo. de una población hospitalaria se compararon los resultados
Las diluciones así obtenidas equivalen a 1:5; 1:10; con un método turbidimétrico cuantitativo, obteniéndose una
1:20; 1:40; 1:80; 1:160. sensibilidad del 100%.
3) Ensayar cada dilución según la Técnica Cualitativa. En otro estudio realizado sobre una población de 33 mues-
III- ENSAYO DE LA FRACCION GLOBULINICA tras de pacientes con historia clínica de artritis reumatoidea,
En un tubo de centrífuga colocar: se obtuvieron 29 muestras reactivas. Se concluye que el 88%
de los pacientes con artritis reumatoidea son FR positivos.
Muestra (suero sin diluir) 1 ml b) Especificidad: en un estudio realizado sobre 75 mues-
Gota a gota y agitando suavemente, agregar: tras provenientes de 50 hombres y 26 mujeres con edades
entre 18 y 47 años, sin síntomas aparentes de enfermedad
Reactivo Precipitante 3,3 ml reumática, se encontraron 72 muestras no reactivas. Por lo
Mezclar por inversión, dejar al menos 30 minutos tanto, se concluye que el 4% de esta población sana es FR
(preferiblemente en heladera) y centrifugar. Volcar el positiva, siendo la especificidad del 96%.
sobrenadante, dejando el tubo invertido sobre papel
de filtro hasta escurrimiento completo y luego agregar: PRE­SEN­TA­CION
Equipo para 50 determinaciones (Cód. 1103152).
Solución fisiológica 1 ml
Disolver el precipitado. Esta solución de globulina tiene BI­BLIO­GRA­FIA
el volumen original del suero y para su ensayo debe - Singer, J.M. and Plotz, C.M. - Am. J. Clin. Path. 28/611
procesarse al igual que la Muestra según la Técnica (1957).
Cualitativa. - Singer, J. M. et al. - Am. J. Clin. Path. 72/4:597 (1979).
- Brooks, G. W. and Cobb, S. - Arthritis and Rheumatism
6/3:198 (1963).
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS - Plotz, C M. and Singer, J.M. - Annual Meeting of the Ame-
Técnica cualitativa rican Rheumatism Association, Chicago (1956).
Negativo: suspensión homogénea. - Oreskes, I.; Singer, J.M. and Plotz, C.M. - J. Immunology
Positivo: aglutinación que aparece dentro de los dos minu- 90:107 (1963).
tos. Se califica de 1 a 4 (+), siendo: - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
4+: aglutinación franca AACC Press, 4th ed., 2001.
3+: moderada aglutinación
2+: ligera aglutinación
1+: aglutinación débil

870120000 / 03 p. 2/6
Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Cáustico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Wiener lab.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
[Link]
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. Nº: 1177/95 2000 Rosario - Argentina
870120000 / 03 p. 3/6 UR180912
 LINEA MAXI

ASO-látex
C directo
Prueba en placa para la determinación de antiestreptolisina O

SIGNIFICACION CLINICA INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS

El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente REACTIVOS
en casi todas las personas en títulos bajos, debido a que La autoaglutinación del Reactivo A es indicio de deterioro
las infecciones estreptocócicas son comunes. Sin embargo del mismo. En tal caso desechar.
un título alto o creciente de antiestreptolisina O, indica una
infección reciente producida por un estreptococo beta he- MUESTRA
molítico de grupo A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis Suero
puerperal, erisipela. a) Recolección: obtener suero de la manera usual.
b) Aditivos: no se requieren.
FUNDAMENTOS DEL METODO c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros marca-
Los anticuerpos antiestreptolisina O se detectan en suero por damente lipémicos o contaminados pueden dar resultados
su reacción con la estreptolisina O adsorbida sobre soporte falsamente positivos.
inerte de látex. Los anticuerpos antiestreptolisina reaccionan d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
con la estreptolisina produciendo una aglutinación visible antiestreptolisina en suero es estable 24 horas refrigerada
macroscópicamente. (2-10oC) o congelada por períodos prolongados.

REACTIVOS PROVISTOS MATERIAL REQUERIDO

A. Reactivo A: suspensión de partículas de látex poliestireno 1- Provisto
recubiertas con estreptolisina O. - placas de plástico o vidrio fondo negro*
Control Positivo*: suero conteniendo antiestreptolisina O - 1 tapa gotero de 25 ul
en concentración superior a 250 UI/ml.
2- No provisto
Control Negativo*: dilución de proteínas séricas no reactivas.
- pipetas y micropipetas capaces de dispensar los volúme-
REACTIVOS NO PROVISTOS nes indicados
Solución fisiológica (para la técnica semicuantitativa). - palillos mezcladores descartables
- cronómetro
INSTRUCCIONES PARA SU USO - lámpara o fuente de luz
Reactivo A: homogeneizar por agitación intensa y luego cambiar - tubos de Kahn
la tapa ciega por la tapa gotero suministrada adicionalmente.
Controles Positivo y Negativo: listos para usar.
PROCEDIMIENTO
PRECAUCIONES Llevar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente.
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". Agitar el Reactivo A antes de usar, vaciando previamente
Los Controles Positivo y Negativo han sido examinados para la pipeta del gotero.
antígeno de superficie del virus de hepatitis B, virus de la I- TECNICA CUALITATIVA
hepatitis C y anticuerpos contra HIV 1/2, encontrándose no En uno de los sectores delimitados de la placa adjunta
reactivos. No obstante, deben ser empleados como si se al equipo colocar:
tratara de material infectivo.
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales Reactivo A 1 gota (25 ul)
de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. Muestra o Controles 25 ul
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente. Mezclar con palillo descartable (uno para cada
muestra) hasta obtener una suspensión uniforme en
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE la superficie delimitada de la placa. Inmediatamente
ALMACENAMIENTO disparar un cronómetro, balancear suavemente la
Los Reactivos Provistos son estables en refrigerador placa y observar macroscópicamente el resultado
(2-10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. dentro de los 2 minutos.
No congelar.

* No provisto con todas las presentaciones 870160000 / 01 p. 1/6

 PRESENTACION
II- TECNICA SEMICUANTITATIVA (Titulación) Equipos para 150 determinaciones (Cód. 1073152).
Los sueros positivos pueden titularse efectuando
diluciones seriadas en tubos de Kahn. BIBLIOGRAFIA
a) Colocar 0,5 ml de solución fisiológica en cada uno - Sonnenwirth A.C.; Jarret L. - Gradwohl Métodos y Diagnós-
de los tubos. ticos del Laboratorio Clínico - Editorial Panamericana - 8o
b) Agregar 0,5 ml de suero al tubo No 1 y mezclar. Edición (1983).
Transferir 0,5 ml de esta dilución al tubo No 2 y mezclar,
continuando así las diluciones hasta el último tubo.
Las diluciones así obtenidas equivalen a 1:2, 1:4, 1:8,
1:16, etc.
c) Ensayar cada dilución según técnica I.

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Negativo: suspensión homogénea.
Positivo: aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos.
Se califica de 1 a 4 +.
Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce
aglutinación visible macroscópicamente.
El nivel aproximado de antiestreptolisina O en la muestra,
puede ser calculada por la fórmula siguiente:
ASO (UI/ml) = Título x Sensibilidad de la reacción (200 UI/ml)
Ejemplo: la muestra presenta un título de 1:2. El nivel de
ASO es de 2 x 200 = 400 UI/ml

METODO DE CONTROL DE CALIDAD

Es conveniente procesar simultáneamente los controles
provistos o sueros probadamente reactivos, empleando 25 ul
del Control correspondiente y 25 ul de Reactivo A según la
técnica cualitativa.

VALORES DE REFERENCIA
Hasta 200 UI/ml
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
valores de referencia.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
- Tiempos de reacción mayores de 2 minutos pueden producir
reacciones falsamente positivas por efecto del secado de
los reactivos.
- Se pueden producir falsos negativos en niños mayores
de 6 meses y menores de 6 años o en infección reciente.
- Debe tenerse en cuenta que en este tipo de infecciones,
un resultado aislado sólo constituye un dato auxiliar, por
lo que se recomienda efectuar determinaciones seriadas
cada 15 - 20 días durante 4 ó 6 semanas.
- Cualquier alteración en la proporción Muestra/Reactivo,
puede conducir a resultados erróneos.

PERFORMANCE
a) Sensibilidad: 200 UI/ml.
b) Especificidad: en una población adulta sana se obtienen
títulos de antiestreptolisina O menores o iguales a 200 Ul/ml
en el 95% de los casos. En una población infantil ( mayores
de 2 años) se pueden tener títulos de hasta 300 UI/ml.

870160000 / 01 p. 2/6
Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P
Xn

Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Caústico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Xi

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Wiener lab.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
[Link]
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Cert. Nº: 4713/02 2000 Rosario - Argentina
870160000 / 01 p. 3/6 UR130708
 Chagatest
C HAI
Prueba de hemaglutinación indirecta para la detección
de anticuerpos contra el Trypanosoma cruzi

SIGNIFICACION CLINICA GR no sensibilizados: homogeneizar mediante agitación

La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria produ- antes de usar, evitando la formación de espuma.
cida por el Trypanosoma cruzi. El diagnóstico de laboratorio Diluyente de Sueros HAI: agregar 0,2 ml de Solución Pro-
depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad. teica cada 10 ml de Buffer HAI. Mezclar, rotular y fechar.
Durante la fase aguda, el diagnóstico se efectúa directamen- 2-Mercaptoetanol: una vez abierta la ampolla, trasvasar el
te mediante la comprobación de los parásitos en sangre o por contenido al frasco vacío provisto, el que se deberá tapar in-
métodos inmunológicos que detecten anticuerpos específi- mediatamente después de usar.
cos. 2-Mercaptoetanol al 1%: con el 2-ME provisto, preparar una
Durante la fase crónica, se pueden usar métodos inmunológi- dilución 1/100 con solución fisiológica en cantidad suficiente
cos como la reacción de aglutinación de látex, hemaglutina- de acuerdo al número de pocillos que se utilicen. Ejemplo:
ción, aglutinación directa, inmunofluorescencia y últimamen- para 96 pocillos: 25 ul de 2-ME en 2,5 ml de solución fisioló-
te ELISA. gica.
Controles Positivo y Negativo: listos para usar.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hema- PRECAUCIONES
glutinación reversa pasiva, se basa en la propiedad que tie- - Los Reactivos Provistos son para uso diagnóstico "in vitro".
nen los anticuerpos (que en este caso son anti-T. cruzi) de - Las muestras deben manipularse como si fueran capaces
producir aglutinación específica en presencia de glóbulos ro- de transmitir la infección.
jos sensibilizados con los correspondientes antígenos. - Los sueros controles han sido examinados para antígeno de
En el suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que superficie de hepatitis B (HBsAg) y virus de inmunodeficien-
son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas espe- cia humana (HIV) encontrándose no reactivos. Sin embargo
cies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con GR deben emplearse como si se tratara de material infectivo.
no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan - Todos los materiales empleados en el ensayo deben ser
mediante tratamiento con 2-mercaptoetanol. destruidos a fin de asegurar la inactivación de agentes pató-
genos. El método recomendado por este procedimiento es
REACTIVOS PROVISTOS autoclavar durante 1 hora a 121oC. Los líquidos de desecho
Reconstituyente HAI: solución fisiológica tamponada a pH 7. pueden ser desinfectados con hipoclorito de sodio (concen-
Antígeno HAI: liofilizado de glóbulos rojos de carnero sensi- tración final 5%) durante por lo menos 60 minutos.
bilizados con antígenos citoplasmáticos de T. cruzi. - No intercambiar reactivos de distintos equipos y lotes.
GR no sensibilizados: suspensión al 1% de eritrocitos de
carnero no sensibilizados, para control de heterofilia. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
Buffer HAI: solución fisiológica tamponada con fosfatos a pH ALMACENAMIENTO
7,5, con colorante inerte. Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
Solución Proteica: solución de albúmina bovina al 10%. hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar.
2-Mercaptoetanol: ampolla con 2-mercaptoetanol (2-ME). Diluyente de Sueros HAI: es estable en refrigerador (2-10oC)
Control Positivo: suero inactivado conteniendo anticuerpos 5 días a partir de la fecha de su preparación.
contra Tripanosoma cruzi. 2-Mercaptoetanol al 1%: usar inmediatamente después de
Control Negativo: suero no reactivo, inactivado. preparado.
Antígeno HAI: una vez reconstituido es estable durante 2
REACTIVOS NO PROVISTOS meses conservado en refrigerador (2-10oC). No congelar.
Solución fisiológica.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
INSTRUCCIONES PARA SU USO REACTIVOS
Antígeno HAI: preparar con 6,1 ml de Reconstituyente HAI. - Cuando todas las diluciones de sueros son reactivas, pue-
Esperar una hora antes de usar mezclando cada 20 minutos de ser indicio de autoaglutinación del Antígeno HAI. Verifi-
para permitir una correcta rehidratación del reactivo. Cada vez car destinando un pocillo de la policubeta para mezclar
que se emplee, homogeneizar mediante agitación evitando la Antígeno HAI y Diluyente de Sueros HAI, sin la Muestra.
formación de espuma. Si aún en este caso se observa aglutinación, el reactivo

870300000 / 00 Pág. 1 de 4
 estará deteriorado. Desechar.
cada microdilutor en el primer pocillo y rotarlo por lo
- La ausencia de reactividad en todas las diluciones de sue-
menos 10 veces para asegurar una correcta dilución de
ros, puede ser indicio de deterioro de los reactivos. Proce-
la muestra.
sar Muestra con positividad conocida.
3- Realizar diluciones seriadas a partir del primer poci-
llo (dilución 1/2), pasando los microdilutores al pocillo
MUESTRA
siguiente (dilución 1/4) y así sucesivamente hasta la
Suero
dilución que se desea investigar (por ejemplo: 1/8, 1/16,
a) Recolección: el paciente debe estar preferentemente en
1/32), rotando en cada paso el microdilutor por lo me-
ayunas. Obtener suero de la manera usual. No usar plasma.
nos 10 veces para asegurar una correcta dilución de la
b) Aditivos: no se requieren. No agregar conservadores.
muestra. Si se emplea una micropipeta automática de
c) Sustancias interferentes conocidas: hemólisis o hiperli- 25 ul para la toma y/o dilución de la muestra, homoge-
pemia (con quilomicronemia) producen resultados erróneos. neizar por carga y descarga. Transferir 25 ul de pocillo a
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el sue- pocillo hasta la dilución que se desee investigar. Des-
ro debe ser preferentemente fresco. En caso de no procesar- cartar los últimos 25 ul.
se en el momento, puede conservarse en el refrigerador (2- 4- Colocar en los pocillos conteniendo las diluciones 1/2
10oC) durante no más de 72 hs contadas a partir del momento y 1/4, una gota (25 ul) de GR no sensibilizados para con-
de la extracción. Para períodos más prolongados de conserva- trol de heterofilia.
ción, congelar (a -20oC), evitando reiterar tal procedimiento. 5- En el resto de los pocillos, agregar una gota (25 ul)
Los sueros envejecidos tienden a gelificarse al contacto con de Antígeno HAI.
el 2-ME, provocando resultados falsos positivos. 6- Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de
la policubeta.
MATERIAL REQUERIDO 7- Dejar en reposo, a resguardo de vibraciones, durante
1- Provisto 90 minutos.
- 1 frasco vacío (para trasvasar el 2-ME de la ampolla) 8- Leer a partir de los 90 minutos.
- 5 policubetas con 96 pocillos de fondo en U Se puede aumentar la nitidez de la apreciación, leyen-
- Accesorios do sobre un espejo, iluminando la placa desde arriba e
2- No provisto interponiendo un papel blanco y traslúcido entre la poli-
- microdilutores (25 ul) o micropipetas automáticas (25 ul) cubeta y la fuente de luz.
- microgoteros (25 ul) II- TITULACION CON 2-ME
- tubos de ensayo y material volumétrico adecuado 1- Colocar una gota de suero en el primer pocillo em-
- cinta adhesiva pleando goteros plásticos descartables, manteniéndo-
- papel de filtro los en posición vertical (uno por cada suero).
2- Diluir al 1/2 agregando una gota de 2-Mercaptoetanol
RECOMENDACIONES PREVIAS al 1% a los mismos pocillos (utilizar un único gotero
Microdilutores descartable).
- Acondicionamiento previo: antes de usar los microdilutores, 3- Sellar estos pocillos con cinta adhesiva y mezclar apli-
sumergirlos en un recipiente con agua destilada y apoyar- cando suaves golpes en los laterales de la policubeta.
los sobre papel de filtro para asegurar una correcta toma de 4- Incubar 30-60 minutos a 37oC o 90 minutos a tempe-
la muestra. ratura ambiente.
- Lavado: antes de tomar una nueva muestra con los microdi- 5- Retirar la cinta adhesiva, pasar un trapo húmedo por
lutores, descargar el volumen residual sobre papel de filtro. la base de la policubeta y, con microgotero de 25 ul,
Luego pasarlos sucesivamente por dos recipientes con agua colocar una gota de Diluyente de Sueros HAI en los
destilada y apoyarlos sobre papel de filtro. restantes pocillos a utilizar hasta la dilución deseada.
Policubeta 6- Realizar los pasos 3 a 8 descriptos en la Titulación I.
Para eliminar la carga electrostática es necesario pasar un
III- ABSORCION CON GLOBULOS ROJOS
trapo húmedo por la base de la misma.
NO SENSIBILIZADOS
En sueros que presenten heterofilia los anticuerpos he-
terófilos pueden adsorberse sobre GR no sensibiliza-
PROCEDIMIENTO
dos de la siguiente forma: en un tubo de hemólisis colo-
Seleccionar una policubeta con pocillos sin usar de fondo
car 50 ul de GR no sensibilizados provistos + 50 ul de
en U.
suero en ensayo. Tapar para evitar la evaporación. Dejar
I- TITULACION SIN 2-ME la suspensión durante 30 minutos a 37oC agitando ex-
1- Con microgotero de 25 ul, colocar una gota de Dilu- temporáneamente. Luego centrifugar a 2000 rpm duran-
yente de Sueros HAI en todos los pocillos a usar de la te 5 minutos. Del sobrenadante se toman 50 ul y se
policubeta. emplea como dilución 1/2, colocándola en el primer po-
2- Tomar una alícuota de cada suero a ensayar con mi- cillo. Si se emplea en titulación con 2-ME este pocillo
crodilutores de 25 ul (uno para cada muestra). Colocar corresponde a dilución 1/4.

870300000 / 00 Pág. 2 de 4
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
No reactivo: presencia de un sedimento en forma de botón
o pequeño anillo de bordes regulares.
Reactivo: formación de una película o manto que cubre el
50% o más del fondo de los pocillos. Si no se usan microdi- IMAGEN POSITIVA IMAGEN NEGATIVA
lutores, la imagen del manto puede ser más pequeña.

IMAGEN NEGATIVA

IMAGEN DUDOSA

VALORES DE REFERENCIA
Dentro de las técnicas inmunológicas, la HAI es considerada
IMAGEN POSITIVA
un método confiable para la determinación de anticuerpos es-
pecíficos. No obstante sus resultados, al igual que los de cual-
quier método serológico, sólo constituyen un dato auxiliar para
el diagnóstico. Es por esta razón que los informes deben ser
considerados en términos de probabilidad. En este caso, ma-
yor o menor probabilidad de parasitosis por T. cruzi.
(1) (2) Cualquier resultado Reactivo debe ser verificado por otra téc-
nica. Recordar el criterio recomendado por el Instituto Fatala
(1) Manto. Chaben, según el cual el inmunodiagnóstico de la infección
(2) Punto final (50%). deberá hacerse con un mínimo de dos de los siguientes mé-
todos: inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinación indirec-
ta, ELISA, aglutinación de partículas (látex), debidamente va-
TECNICA SCREENING O DESCARTE POR 1 TITULO lidados por el Centro Nacional de Referencia.
Procedimiento de titulación
PROCEDIMIENTO Sueros con títulos mayores o iguales a 1/16, se consideran
1- Con microgotero de 25 ul, colocar una gota de Diluyen- reactivos para anticuerpos anti-T. cruzi.
te de Sueros HAI en todos los pocillos a utilizar de la Cuando se observan resultados positivos (sueros reactivos) y
policubeta (un pocillo por cada muestra). además se presenta manto en los pocillos destinados a con-
2- Sumergir un ansa limpia (provista) en la muestra. trol de heterofilia (diluciones 1/2 y 1/4), debe realizarse otra
3- Colocar el ansa cargada en el pocillo que contiene el titulación con los sueros correspondientes pero previamente
Diluyente de Sueros HAI, rotando la misma para obtener tratados con 2-ME o adsorbidos con GR no sensibilizados. El
un buen mezclado y distribuir la gota sobre todo el fondo propósito de estos tratamientos es eliminar la reacción ines-
del pocillo. Retirar el ansa y secarla con papel de filtro, pecífica. En el primer caso el agente reductor (2-ME) elimina
lavar en dos recipientes con agua destilada. Secar nueva- la capacidad aglutinante de los anticuerpos heterófilos, mien-
mente con papel de filtro. Proceder de la misma manera tras que los GR no sensibilizados los elimina por adsorción.
para cada nueva muestra. Técnica de screening o descarte por 1 título
4- Agregar con microgotero de 25 ul, una gota de Antíge- En las condiciones del ensayo, sueros con títulos mayores o
no HAI reconstituido y homogeneizado a cada pocillo. iguales a 1/12, se consideran reactivos para anticuerpos anti-
5- Agitar la policubeta golpeando con los dedos en las [Link]. La imagen que presenta un suero reactivo es de pelí-
paredes laterales, durante 30 segundos por lo menos, para cula o manto en el fondo del pocillo.
asegurar un buen mezclado.
6- Dejar reposar, al resguardo de vibraciones durante 2 CONTROL DE CALIDAD
horas. Como punto de referencia de la reacción, pueden procesarse
7- Efectuar la lectura. En caso de que la lectura de los simultáneamente un Control Positivo y un Control Negativo
resultados se efectúe en un plazo mayor de 2 horas, la utilizándolos de la misma manera que la muestra.
policubeta deberá taparse con una cinta adhesiva trans-
parente para evitar evaporaciones. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Otras causas de resultados erróneos son:
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS - Falta de acondicionamiento de la policubeta y los microdilu-
No reactivo: presencia de un sedimento en forma de botón. tores (Ver RECOMENDACIONES PREVIAS).
Reactivo: formación de una película o manto en el fondo de - Policubetas rayadas por uso reiterado. No se aconseja reuti-
los pocillos. En caso de observar la presencia de un pequeño lizar pocillos.
anillo de bordes regulares, la muestra se considerará dudosa - Falta de homogeneización de los reactivos antes de su uso.
y deberá ser ensayada por otro método. - Deficiencias de mezclado.

870300000 / 00 Pág. 3 de 4
- Vibraciones accidentales durante el reposo necesario para EXPLICACION DE LOS SIMBOLOS
el desarrollo de la reacción.
Antígeno HAI Buffer HAI
- Sueros envejecidos o congelados y descongelados repeti-
damente. Antígeno HAI Buffer HAI
- Contaminaciones accidentales de los reactivos o del mate- Reconstituy. HAI GR no sensib.
rial empleado en el ensayo.
Reconstituyente HAI GR no sensibilizados
- Exceso o defecto de Diluyente de Sueros HAI en los poci-
llos de la policubeta. Sol. Proteica 2-ME
- Diluyente de Sueros HAI que tenga más de 5 días de prepa- Solución Proteica 2-Mercaptoetanol
ración.
- No respetar los tiempos y temperaturas de incubación en el Control + Control -
tratamiento con 2-ME al 1%. Control Positivo Control Negativo
- 2-Mercaptoetanol al 1% no preparado en el momento.
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de
PERFORMANCE reactivos para diagnóstico de Wiener lab.
Trabajos experimentales realizados sobre muestras poblacio-
Este producto cumple con los requerimientos previstos

C
nales endémicas y no endémicas, mostraron que:
por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanita-
1) En poblaciones endémicas, empleando el método de HAI, rios para el diagnóstico "in vitro"
el 98% de los títulos menores a 1/8 y el 95% de los títulos
mayores o iguales a 1/8 fueron confirmados por los métodos P Representante autorizado en la Comunidad Europea
tomados como referencia.
2) En poblaciones no endémicas, el 100% de los individuos V Uso diagnóstico "in vitro"
sanos presentó títulos menores a 1/8 determinados por HAI.
X Contenido suficiente para <n> ensayos
3) En el 100% de los individuos con serología positiva confir-
mada por los métodos tomados como referencia y con para- H Fecha de caducidad
sitosis demostrada por xenodiagnóstico y/o hemocultivo, se
observaron títulos mayores o iguales a 1/32 determinados con l Límite de temperatura (conservar a)
Chagatest HAI. ? No congelar

PRESENTACION F Riesgo biológico

- 96 determinaciones de 5 títulos o 480 de un título
Volumen después de la reconstitución
(Cód. 1293205)
Cont. Contenido
BIBLIOGRAFIA
- Mazza, S. - VI Congreso Nacional de Medicina (Córdoba), g Número de lote
pág. 155 (1938).
- Cerisola, J.A. - La Prensa Médica Argentina 49/34:1761 M Elaborado por:

(1962). Xn
Nocivo
- Fontenla S., Moretti, E. y González, G. - 50° Triduo de la
ABA, Huerta Grande (Córdoba), 1985. Corrosivo / Caústico
- Basso, A. y col. - 50° Triduo de la ABA. Huerta Grande
Xi
(Córdoba), 1985. Irritante
- Lorenzo , L.; Capriotti, G.; Rojkín, F. - Rev. Arg. Transf. XVII/
1: 51, 1991. i Consultar instrucciones de uso
- Ministerio de Salud y Acción Social, Instituto Nacional de
Calibr. Calibrador
Parasitología "Doctor Mario Fatala Chabén" - Normas para
el diagnóstico de la infección chagásica - Resolución minis- b Control
terial 523/97, 1998.
b Control Positivo

c Control Negativo
h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944

Wiener lab.
2000 - Rosario - Argentina
[Link]
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. Nº: 1280/88 3403/95-6862/01 2000 Rosario - Argentina
870300000 / 00 Pág. 4 de 4 UR110516
 V.D.R.L. test
C Suspensión antigénica estabilizada para realizar la
prueba VDRL modificada (USR) de detección de sífilis

SIGNIFICACION CLINICA PRECAUCIONES

La sífilis es una enfermedad venérea causada por el Tre- El Reactivo A es para uso diagnóstico "in vitro".
ponema pallidum, que invade las mucosas intactas o la piel Todas las muestras de pacientes deben manipularse como
en áreas de abrasiones. El contacto sexual es la forma más si fueran capaces de transmitir infección.
común de transmisión. Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
La detección y tratamiento de la enfermedad en sus estadios de trabajo en el laboratorio de química clínica.
tempranos es fundamental a fin de evitar complicaciones gra- Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
ves como sífilis cardiovascular, neurosífilis y sífilis congénita. acuerdo a la normativa local vigente.
El diagnóstico de esta enfermedad sufre la carencia de
un método para cultivar el microorganismo en medios de MATERIAL REQUERIDO
laboratorio y la dificultad para detectarlo en estadios de la 1- Provisto
enfermedad en los que no se observan lesiones epidérmicas. - 1 gotero
Sin embargo, desde el comienzo de la infección aparecen
en el suero del individuo infectado ciertas sustancias de- 2- No Provisto
nominadas "reaginas", que reaccionan con antígenos de - Agitador rotativo ajustable a 180 rpm.
cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas junto a - Placa de vidrio transparente con sectores de 14 mm de
los signos clínicos son por lo tanto los procedimientos más diámetro.
rápidos y útiles disponibles para diagnóstico de sífilis. - Micropipetas para medir los volúmenes indicados.
- Microscopio
FUNDAMENTOS DEL METODO
Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pa- MUESTRA
llidum se detectan en suero por la reacción con un antígeno Suero o líquido cefalorraquídeo (LCR)
cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la muestra contiene a) Recolección: obtener de la manera usual. No inactivar.
reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una flocu- b) Aditivos: no se requieren.
lación visible en microscopio. Las reacciones inespecíficas c) Sustancias interferentes conocidas: hemólisis o hiper-
se evitan con el empleo de antígeno altamente purificado y lipemia pueden ocasionar resultados erróneos.
el agregado de cloruro de colina característica de la técnica d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en
USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario caso de no procesarse de inmediato los sueros pueden
inactivar la muestra. conservarse hasta una semana en refrigerador (2-10oC).

REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: suspensión acuosa de antígeno de cardioli- PROCEDIMIENTO
pina y lecitina purificados, en buffer fosfatos con cloruro de Tanto los reactivos como la muestra deben estar a tem-
colina y EDTA de acuerdo a las indicaciones de la O.M.S. peratura ambiente antes de realizar la prueba.
I- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO
REACTIVOS NO PROVISTOS En cada uno de los sectores delimitados de la placa colocar:
- Solución fisiológica (para la prueba semicuantitativa).
- Solución de cloruro de sodio 10 g/dl (para la técnica en Muestra 50 ul
líquido cefalorraquídeo).
Con gotero provisto colocar:
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE Reactivo A 1 gota
ALMACENAMIENTO Agitar horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4
Reactivo A: estable en refrigerador (2-10oC) hasta la fecha minutos. Observar inmediatamente en microscopio con
de vencimiento indicada en la caja. No congelar. poco aumento (60 a 100 X).
INSTRUCCIONES PARA SU USO II- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO
Reactivo A: listo para usar. Agitar previo a la ejecución de Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32
la prueba.

871020000 / 03 p. 1/6
 BIBLIOGRAFIA
con solución fisiológica y realizar para cada dilución la
- Zinsser Microbiología, Joklik W., Willett H. y Amos D., 17o
prueba como se describe en I.
edición Editorial Médica Panamericana, 1983.
III- PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR - Manual of Tests for Syphilis, cap. 8 - American Public Health
Diluir el Reactivo A 1:2 con solución de cloruro de sodio Association, Washington, D.C 20005, 1990.
10 g/dl. Emplear dentro de las 2 horas de preparación. - Podestá, D.; Svetaz. M.J.; Ricomi, R.; Capriotti, G.; Rojkín,
En cada sector delimitado de la placa colocar: L.; Lorenzo, L.; "Evaluación de tres reactivos para detección
de sífilis" - VIII Congreso Argentino de Bioquímica, 54º
Muestra 50 ul Triduo Bioquímico Científico Anual 1990 - Revista A.B.A.
Con aguja calibre 6 agregar: 54/3, 1990.
Reactivo A diluido 1 gota (10 ul)
Mezclar bien y agitar horizontalmente la placa durante
8 minutos a 180 rpm. Leer los resultados en micros-
copio con poco aumento (60 a 100 X).

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Reactivo: presencia de floculación.
No reactivo: ausencia completa de floculación.
Prueba semicuantitativa: el título estará dado por la in-
versa de la última dilución que se observe reactiva. Leer
atentamente las LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO.

METODO DE CONTROL DE CALIDAD

Para controlar la calidad del sistema procesar un Control
Positivo (suero seguramente reactivo) y un Control Negativo
(suero seguramente no reactivo) utilizándolos de la misma
forma que las muestras.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Resultados falsamente positivos pueden ser observados en
individuos con cuadros patológicos diversos como hepatitis,
influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma, tuberculosis,
cáncer, diabetes y enfermedades autoinmunes. Estos casos
no son muy comunes y generalmente presentan reacciones
con títulos bajos y una historia clínica que no coincide con
las características de sífilis.
Es imprescindible por estos motivos ante toda prueba cuali-
tativa reactiva realizar la prueba semicuantitativa.
Resultados falsamente negativos pueden observarse cuan-
do se presenta el fenómeno de prozona. Por este motivo
se recomienda repetir la prueba en suero diluido 1:5 con
solución fisiológica para verificar el resultado. Si en estas
condiciones se observa floculación la muestra es reactiva.
A pesar de las ventajas de este método, sus resultados al
igual que los de cualquier prueba serológica, sólo constituyen
un dato auxiliar de diagnóstico que debe corroborarse con
la historia clínica del paciente.

PERFORMANCE
Sobre 2140 muestras de un servicio hospitalario, ensayadas
usando V.D.R.L. test e inmunofluorescencia como método
de referencia, se observó una concordancia superior al 96%.

PRESENTACION
Equipo para 250 determinaciones (Cód 1853151).

871020000 / 03 p. 2/6
Símbolos
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnóstico "in vitro"
M Elaborado por:

P Representante autorizado en la Comunidad

Europea Nocivo

V Uso diagnóstico "in vitro"

Corrosivo / Cáustico

X Contenido suficiente para <n> ensayos

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Límite de temperatura (conservar a)

 No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biológico

Volumen después de la reconstitución

b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Número de lote h Número de catálogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944

Wiener lab.
2000 - Rosario - Argentina
[Link]
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. Nº: 1068/91 - 7585/97 -
6895/00 - 1195/13 - 4793/14 2000 Rosario - Argentina
871020000 / 03 p. 3/6 UR170822