UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NÚCLEO BOLÍVAR
ESCUELA DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
PRÁCTICA 2: SALADO (SALTING OUT) DE
PROTEÍNAS, SU APLICACIÓN EN LA
SEPARACIÓN Y DETERMINACIÓN DE
ALBÚMINA Y GLOBULINAS EN SUERO O
PLASMA SANGUÍNEO.
Docente: Bachilleres:
Dr. Miguel Basanta Cordero Bermúdez, Victoria – 30.501.865
Franco, Oriangela – 30.993.137
Identificación 0,5 pt
Introducción 1 pt
Picho, Roelys – 31.230.498
Resultados 2,5 pt Rivas, Angelica – 31.805.145
Discusión de
resultados 3,5 pt
Conclusión 0,5 pt
Bibliografía 0,5
Anexos 1,5 pt
Ciudad Bolívar, 12 de Mayo del 2025.
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son biomoléculas fundamentales en los seres vivos, desempeñando funciones
esenciales para el mantenimiento y desarrollo de los organismos. Estas macromoléculas cumplen
roles diversos, como el transporte de sustancias, la defensa inmunológica, la estructura celular y la
catálisis de reacciones bioquímicas, siendo clave en múltiples procesos fisiológicos. Su estudio es
crucial en la bioquímica, ya que permite comprender el funcionamiento molecular de la vida y
contribuye al desarrollo de nuevas aplicaciones en áreas como la salud, la nutrición y la
biotecnología.
Para analizar y manipular las proteínas en laboratorio, es necesario contar con métodos
eficientes para su separación y purificación. Uno de los procedimientos más utilizados en el campo
de la bioquímica es el "salting out", o precipitación salina, una técnica basada en la reducción de la
solubilidad de las proteínas mediante la adición de altas concentraciones de sales. Este fenómeno se
explica porque las sales interaccionan con las moléculas de agua, reduciendo su disponibilidad para
estabilizar las proteínas y provocando su agregación en forma de precipitado.
Además de su relevancia práctica, comprender el fundamento químico del "salting out" es
esencial para optimizar sus condiciones experimentales y mejorar su eficiencia. Factores como la
naturaleza de la proteína, la concentración de la sal utilizada y la temperatura del medio pueden
influir en el rendimiento del método, por lo que su estudio detallado permite afinar los parámetros y
garantizar resultados reproducibles en la investigación bioquímica.
OBJETIVOS
Objetivo general
Determinar cuantitativamente las proteínas presentes en el suero combinando dos métodos
colorimétricos con los reactivos Verde de Bromocresol y Biuret.
Objetivos específicos
Diferenciar plasma y suero sanguíneo con relación a su contenido de proteínas plasmáticas.
Separar las proteínas totales del suero humano por el método de precipitación salina.
Separar selectivamente la albumina de las proteínas totales con el uso de solventes
orgánicos.
Construir una gráfica de tendencia para proteínas totales con el reactivo de Biuret.
Construir una gráfica de tendencia para albumina con el reactivo Verde de Bromocresol
(BCG).
Determinar por el método gráfico las cantidades de proteínas totales, de albumina y de las
globulinas presentes en una muestra de suero de un paciente.
Relacionar la cantidad de proteína total, de albúmina y de globulinas con respecto al rango
normal o al valor patológico y deducir el estado de salud del paciente.
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
El plasma sanguíneo está constituido principalmente por suero sanguíneo y fibrinógeno. En
el suero sanguíneo podemos encontrar proteínas, como la albumina y las globulinas. Los valores
normales de proteínas en suero sanguíneo según la Biblioteca Nacional de Medicina de los [Link].
MEDLINE PLUS, son los siguientes:
Proteínas totales: 6.4 a 8.3 g/dL
Albúmina: 3.5 a 5.0 g/dL
Globulinas: 2,0 a 3,5 g/dL
Los resultados obtenidos en esta práctica muestran valores normales de proteínas totales,
albúmina y globulinas, lo que en términos generales indica una función hepática y nutricional
adecuada. Para validar estos hallazgos, se compararon con los valores de referencia establecidos en
el estudio realizado por la Universidad Nacional de Chimborazo, en el cual se analizaron los niveles
de proteínas totales y albúmina en estudiantes de unidades educativas rurales del Cantón Riobamba.
El estudio reportó valores de proteínas totales entre 6.4 - 8.2 g/dL y albúmina entre 3.4 – 5.0
g/dL. Esto refuerza la idea de que los valores encontrados en nuestro análisis están dentro de los
parámetros esperados para una población sana.
La desnutrición calórica y proteica puede presentarse en distintas fases, y en algunos casos,
los niveles de proteínas totales pueden permanecer dentro de los rangos normales en las etapas
tempranas. Esto se debe a mecanismos compensatorios del organismo que buscan mantener la
homeostasis en situaciones de déficit nutricional. Por ejemplo, en condiciones de desnutrición leve
o moderada, el cuerpo puede reajustar la síntesis y el catabolismo de proteínas para mantener
niveles séricos dentro de los parámetros esperados.
Asimismo, ciertos patógenos pueden estar presentes en individuos con valores normales de
proteínas en sangre. Enfermedades infecciosas crónicas como la tuberculosis o ciertas infecciones
virales pueden no generar cambios evidentes en estos parámetros en sus primeras fases. Además,
algunas infecciones parasitarias o bacterianas pueden afectar el metabolismo y el estado nutricional
sin provocar una alteración significativa en los niveles de albúmina y globulinas.
Por ello, aunque los valores obtenidos sean normales y coincidan con los reportados en el
estudio de la Universidad Nacional de Chimborazo, es fundamental complementar la evaluación
con otros marcadores bioquímicos, exploración clínica y seguimiento nutricional del paciente. La
evaluación integral permite detectar posibles riesgos asociados a la desnutrición o la presencia de
patógenos, incluso en ausencia de cambios en los valores de proteínas totales.
CONCLUSIÓN
En esta práctica se logró determinar la concentración de proteínas totales en una muestra
mediante el método colorimétrico de Biuret. Las proteínas totales se refieren al conjunto de todas
las proteínas presentes en una muestra biológica, incluyendo albúminas, globulinas y otras proteínas
plasmáticas o tisulares, que desempeñan funciones esenciales como transporte, defensa, estructura y
catálisis en los organismos vivos.
El método de Biuret se basa en la reacción química entre los enlaces peptídicos de las
proteínas y los iones cúpricos (Cu²⁺) en un medio alcalino, formando un complejo de color violeta.
Esta reacción ocurre porque los enlaces peptídicos pueden coordinarse con los iones de cobre,
generando un color cuya intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteínas en
la muestra. Esta coloración se mide espectrofotométricamente, normalmente a una longitud de onda
cercana a los 540-560 nm.
En resumen, la práctica permitió cuantificar las proteínas totales presentes, comprendiendo
el fundamento químico del método de Biuret y su relevancia en análisis bioquímicos y clínicos para
evaluar el estado nutricional o fisiológico de un individuo
ANEXOS
1. Concepto de Globulinas: Son un grupo diverso de proteínas plasmáticas que, junto con la
albúmina y el fibrinógeno, constituyen las principales fracciones proteicas del plasma
sanguíneo. Se clasifican en α1, α2, β y γ globulinas, según su movilidad en electroforesis.
Cada una de estas fracciones contiene proteínas con funciones específicas en el organismo.
α1-globulinas: Incluyen proteínas como la α1-antitripsina, que actúa como inhibidor
de proteasas y protege los tejidos de la acción de enzimas como la elastasa.
α2-globulinas: Contienen proteínas como la haptoglobina, que se une a la
hemoglobina libre en el plasma, y la ceruloplasmina, que transporta cobre y posee
actividad oxidasa.
β-globulinas: Incluyen proteínas como la transferrina, que transporta hierro en la
sangre, y el complemento C3, que participa en la respuesta inmunitaria.
γ-globulinas: Corresponden principalmente a las inmunoglobulinas o anticuerpos,
esenciales en la defensa inmunológica del organismo.
2. Concepto de Albúmina: Es la principal proteína del plasma humano, representando
aproximadamente el 60% del total de proteínas plasmáticas. Su concentración en el plasma
oscila entre 3 y 4 g/dl. La albúmina madura humana consiste en una única cadena
polipeptídica de 585 aminoácidos, organizada en tres dominios funcionales. Su
conformación elipsoidal está estabilizada por 17 enlaces disulfuro intracatenarios.
3. Importancia fisiológica y aplicación médica de la Albúmina:
Importancia fisiológica:
Es la proteína más abundante en el plasma humano, representando aproximadamente el 60%
de las proteínas plasmáticas totales.
Mantiene la presión oncótica del plasma, evitando la filtración excesiva de líquido hacia los
tejidos.
Actúa como transportador de diversas sustancias, incluyendo ácidos grasos, hormonas,
bilirrubina, calcio y fármacos.
Sirve como reserva de aminoácidos, especialmente durante estados catabólicos.
Aplicaciones médicas:
Indicador clínico: Niveles bajos de albúmina pueden indicar desnutrición, enfermedad
hepática crónica o síndrome nefrótico.
Uso terapéutico: Se administra albúmina humana en casos de hipovolemia, shock,
quemaduras extensas, síndrome hepatorrenal y cirrosis con ascitis.
Farmacología: La albúmina se une a diversos fármacos, afectando su distribución y eficacia
terapéutica.
4. Importancia fisiológica y aplicación médica de las Globulinas:
Importancia fisiológica: Se clasifican en α1, α2, β y γ globulinas, cada una con funciones
específicas:
α1-globulinas: Incluyen la α1-antitripsina, que inhibe proteasas y protege tejidos.
α2-globulinas: Contienen la haptoglobina, que se une a la hemoglobina libre, y la
ceruloplasmina, que transporta cobre.
β-globulinas: Incluyen la transferrina, que transporta hierro, y componentes del
complemento como el C3.
γ-globulinas: Corresponden principalmente a las inmunoglobulinas (anticuerpos), esenciales
en la defensa inmunológica.
Aplicaciones médicas:
Inmunoterapia: Administración de inmunoglobulinas en pacientes con inmunodeficiencias o
exposición a ciertos virus.
Diagnóstico clínico: Alteraciones en la relación albúmina/globulina o en los niveles de
globulinas ayudan a diagnosticar enfermedades como mieloma múltiple, enfermedades
autoinmunes e infecciones crónicas.
Evaluación del sistema inmune: La electroforesis de proteínas séricas permite identificar
patrones anormales en la distribución de globulinas.